View
69
Download
11
Category
Preview:
DESCRIPTION
HPLC
Citation preview
Istoric
1906 Tswett (botanist rus, 1872-1919) introduce pigmeni extrai din plante ntr-o coloan umplut cu CaCO3 i observ separarea unor benzi colorate
denumete metoda cromatografie dup cuvintele greceti chroma (culoare) i graphein (a scrie)
metoda rmne practic necunoscut i neutilizat pn n anii 40
1931 separri ale carotenoidelor (Kuhn i Lederer, Heidelberg)
Metode cromatografice
Istoric
1941 descoperirea cromatografiei de partiie lichid-lichid (Martin i Synge, premiul Nobel n 1952)
1952 introducerea cromatografiei n faz gazoas (Martin i James, Londra)
12 premii Nobel pentru lucrri care au avut n plan central metodele cromatografice
Cromatografia grupeaz o variat i important grup de metode care permit cercettorului s separe compui foarte asemntori din amestecuri complexe. n toate separrile cromatografice proba este dizolvat ntr-o faz mobil: gaz, lichid sau fluid supercritic. Aceast faz este frecvent numit eluent, iar dup ce trece de captul coloanei se numete eluat. Metode cromatografice
Principiul cromatografieiTrecerea continu a unei faze mobile peste o faz care rmne fix (faza staionar)
Proba (care conine componenii de separat) este introdus n faza mobil
Are loc o distribuie continu a componenilor ntre faza mobil i cea staionar
Fiecare component are un coeficient propriu de distribuie ntre faze
Coeficieni diferii de distribuie contribuie la separarea componenilor datorit vitezelor diferite de migrare
Principiul cromatografiei
Clasificarea metodelor cromatografice n funcie de natura fazelor
n funcie de mecanismul de separare
dup modul de contact ntre faza mobil i cea staionar- cromatografia pe coloan- cromatografia planar: pe hrtie, pe strat subire
Clasificarea metodelor cromatografice n funcie de natura fazelor faza mobil un fluid- lichid- gaz (n stare normal, n stare supercritic) faza staionar- solid- film lichid depus pe un suport solidDenumirea unei metode- cromatografie faza mobila - fazastaionar
Clasificarea metodelor cromatografice n funcie de natura fazelor
Clasificarea metodelor cromatografice n funcie de mecanismul de separare
Cromatografia de adsorbie rezult din interaciunea gruprilor funcionale polare ale solutului cu zone discrete ale suprafeei adsorbante solutul este adsorbit n funcie de: - configuraia spaial a funciunilor - abilitatea solutului de a forma legturi de hidrogen
este caracteristic cromatografiei pe strat subire (CSS sau TLC)
nu poate fi utilizat pentru substane cu polaritate mare (aminoacizi)
Cromatografia de repartiie repartiia solutului ntre 2 lichide nemiscibile
faza staionar un film de lichid depus pe un suport solid inert
caracteristic cromatografiei pe hrtie i celei clasice pe coloan
dezavantaj - instabilitatea lichidului legat pe suport
Cromatografia de adsorbie - repartiie (faz legat) mecanism complex: ntre adsorbie i repartiie
faza staionar poate s fie:- legat chimic de un suport fizic- ataat suportului
avantaje:- stabilitate crescut a fazei staionare fa derepartiie- echilibrare mai rapid dect la adsorbie
Cromatografia de schimb ionic separarea se bazeaz pe afinitatea diferit a unei faze staionare ionice fa de ionii solutului- rini cationiceMatriceA-Y+ + M+ MatriceA-M+ + Y+- rini anioniceMatriceA+Y- + X- MatriceA+X- + Y-
condiie pentru schimb ionic- ionul Y este mai puin atras de rin fa deionul solutului
Cromatografia de excludere separarea este bazat pe diferenele bazate pe dimensiunile i forma moleculei
porii fazei staionare nu permit accesul moleculelor mari
moleculele mici sunt reinute n interiorul porilor
dezavantaje: - molecule cu form identic i funciuni chimice diferite se comport asemntor
Clasificarea metodelor cromatografice dup modul de contact ntre faze
Clasificarea metodelor cromatografice dup modul de contact ntre faze
Clasificarea general a metodelor cromatografice
TEORIA GENERAL A SEPARRILORCROMATOGRAFICE PE COLOANProcesul cromatografic introducerea probei ca o band ngust
componenii migreaz sub aciunea fazei mobile
n funcie de interaciunea cu faza staionar, componenii se separ
benzile devin mai late i au un profil Gaussian
avi
Volumul mort (Vm)Volumul fazei lichide din interiorul coloanei:Volumul mort este de cca. 65% din volumul coloanei:
Factorul de capacitate (k)- raportul masei de analit n faza staionar i mobilK - coeficientul de distribuie raportul dintre concentratiileanalitului in faza stationara si mobila
Cromatograma
Retenia cromatografic- viteza de migrare relativa la cea a fazei mobiletm timpul mort (corespunztor Vm)tr timpul de retenietr timpul de retenie ajustat
Timpul de retenie
Picul cromatografic
Forma picului cromatografic
Eficiena separrii cromatograficeModelul termodinamic (talere) introdus de Martin i Synge
descrie separarea cromatografic asemntor cu distilarea i extracia n contracurent
un taler (platou) este lungimea coloanei pe care are loc stabilirea echilibrului ntre cele 2 faze- trecerea solutului n faza staionar irevenirea n faza mobil
Numrul de talere teoretice (n)Eficiena separrii cromatografice- ptratul raportului dintre retenia unui analit i deviaia standard a picului corespunztor acestuia- pentru un pic gaussian
Eficiena separrii cromatograficeNumrul de talere teoretice pentru picuri asimetrice
Eficiena separrii cromatograficeNumrul efectiv de talere teoretice (N sau nef)- similar cu n dar nlocuiete tr cu tr- corecteaz deficienele picurilor eluate foarte devreme, pentru care timpul mort le influeneaz semnificativ- ntre n i N exist relaia:
Eficiena separrii cromatograficenlimea talerelor nlimea talerelor determinat de lungimea coloanei: nlimea talerelor efective :
Modelul cinetic introdus de van Deemter i colab. este orientat pe influena factorilor cinetici asupra nlimii echivalente a unui taler teoretic H H este suma individual a factorilor cinetici:- difuzia turbionar- difuzia longitudinal- rezistena la transferul de mas
Rezoluia ia n calcul diferenele de retenie (timpii de retenie) i de eficacitate (limea picurilor)
pentru 2 picuri cu- timpii de retenie (tr)1 i respectiv (tr)2- limea la baz a picurilor (wb)1 i (wb)2
Rezoluia
Recommended