View
143
Download
6
Category
Preview:
Citation preview
Autoras: Mª Paz Merino jimenez, Mireia Llinares Marcelo
Maquetación: Patricia Penavella Soto
Edita: Educàlia Editorial, S.L.
Imprime: Publidisa SA
ISBN: En curso
Depòsit Legal: En curso
Printed in Spain/Impreso en España.
Todos los derechos reservados. No está permitida la reimpresión de ninguna parte de este libro, ni de imágenes ni de texto, ni tampoco su
reproducción, ni utilización, en cualquier forma o por cualquier medio, bien sea electrónico, mecánico o de otro modo, tanto conocida como los que
puedan inventarse, incluyendo el fotocopiado o grabación, ni está permitido almacenarlo en un sistema de información y recuperación, sin el
permiso anticipado y por escrito del editor.
Alguna de las imágenes que incluye este libro son reproducciones que se han realizado acogiéndose al derecho de cita que aparece en el artículo 32
de la Ley 22/18987, del 11 de noviembre, de la Propiedad intelectual. Educàlia Editorial agradece a todas las instituciones, tanto públicas como
privadas, citadas en estas páginas, su colaboración y pide disculpas por la posible omisión involuntaria de algunas de ellas.
Educàlia Editorial, S.L.
Mondùver, 9, bajo, 46025 Valencia
Tel: 963273517
E-Mail: educaliaeditorial@e-ducalia.com
http://www.e-ducalia.com/material-escolar-colegios-ies.php
PREFACIO
El Cuaderno de Prácticas de Microbiología es un
trabajo fundamental en el desarrollo de la asignatura de
FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS
MICROBIOLOGICOS. Dicha asignatura lleva una carga
teórica que paralelamente tiene que ir desarrollada con
prácticas que se realizan en el laboratorio. Por ello debe
existir una consecución en la ejecución de las prácticas al
mismo tiempo que se vaya impartiendo la teoría.
Con este cuaderno el desarrollo de las prácticas
seguiría un orden, fundamental para cumplir los protocolos
de actuación en el laboratorio de Microbiología. El alumno
siguiendo los pasos de dicho cuaderno irá desarrollando la
práctica con corrección hasta la obtención de los resultados
finales que es lo que se pretende.
INDICE CUADERNO DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA
1. MANEJO DEL MICROSCOPIO
2. RECONOCIMIENTO DE MATERIAL
3. DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA.
4. ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO.
5. ESTERILIZACIÓN POR CALOR HÚMEDO.
6. ACTIVIDADES DE ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN.
7. PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
8. ÉCNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO
9. URINOCULTIVO
10. PLEGADO DE UN FILTRO
11. INDICA LA MORFOLOGIA, DISPOSICION Y MOVILIDAD DE LAS
BACTERIAS VIVAS QUE CONTIENE LA MUESTRA.
12. PREPARACIÓN DE COLORANTES Y REACTIVOS PARA LA
TINCION SIMPLE Y TINCION NEGATIVA.
13. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA
TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR
14. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA
TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR
15. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA
TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE ESPORAS
16. PREPARACIÓN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA
TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE CAPSULAS
17. REALIZACION DE UNA TINCION SIMPLE.
18. REALIZACION DE UNA TINCION NEGATIVA.
19. REALIZACION DE UNA TINCION DE GRAM
20. REALIZACION DE UNA TINCION DE ZIEHLNEELSEN O ACIDO
ALCOHOL RESISTENTE.
21. REALIZACION DE UNA TINCION DE ESPORAS
22. REALIZACION DE TINCION DE CAPSULAS. METODO DE BURRI
O DE LA TINTA CHINA.
23. PRUEBAS BIOQUÍMICAS.
24. ANTIBIOGRAMA.
25. HACER UNA SIEMBRA EN CONDICIONES ANAEROBIAS
26. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DEL
PORTAOBJETOS
27. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DEL
CUADRADITO DE AGAR
28. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DEL HOYO EN
PLACA
29. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DEL CUBRE
ESCAVADO EN PLACA
30. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TÉCNICA DE LA GOTA
PENDIENTE
31. TECNICA DE VISUALIZACION DE HONGOS: VISUALIZACIÓN
DIRECTA CON LA TÉCNICA DE LA CINTA ADHESIVA.
PRÁCTICA 26. TÉCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TÉCNICA DEL
PORTAOBJETOS.
VISIÓN MACROSCÓPICA
MATERIAL
- Alcohol
- Mechero Bunsen
- Portaobjetos
- Placa Petri
- Papel filtro
- Agua destilada
- Medio de cultivo Sabouraud
- Pipeta Pasteur estéril
- Asa de siembra
- Muestra de hongos
- Estufa Pasteur
TÉCNICA
1º. Preparar 100 ml de medio de cultivo Sabouraud (Práctica 7.6).
2º. Limpiar el portaobjetos con alcohol, secar y flamear.
3º. Cubrir el portaobjetos con una fina capa de medio de cultivo (todavía en estado líquido)
con la ayuda de una pipeta Pasteur estéril.
4º. Dejar secar el medio.
5º. Recortar un círculo de papel de filtro de la misma medida que la placa de Petri.
6º. Colocarlo en el fondo de la placa y humedecerlo con un poco de agua destilada para
mantener el ambiente húmedo para el crecimiento del hongo.
7º. Con el asa de siembra esterilizada y humedecida con agua estéril tomar un poco de
muestra.
8º. Colocar la muestra en el centro del portaobjetos realizando un pequeño movimiento
circular con el asa.
9º. Colocar el portaobjetos en la placa de Petri.
10º. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
PROCEDIMIENTO EN IMÁGENES
Preparar 100 ml de Sabouraud
1 2
Limpiar portaobjetos
3
Cubrir con medio Sabouraud
4
Dejar secar
5
Cortar círculo de papel de filtro Humedecer
6
7
Tomar muestra Sembrar en el centro del porta
8
VISIÓN MICROSCÓPICA
MATERIAL
- Cubreobjetos
- Pipeta Pasteur
- Colorante azul de lactofenol
- Muestra ya incubada (técnica del portaobjetos)
- Pinzas
- Mechero Bunsen
- Microscopio
TÉCNICA
1º. En el portaobjetos donde habíamos realizado la técnica, echamos una gota de azul de
lactofenol.
2º. Poner un cubreobjetos encima.
3º. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMÁGENES
Gota azul en porta
1 2
Cubre sobre la muestra
Observar al microscopio
3
PRÁCTICA 27. TÉCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TÉCNICA DEL
CUADRADITO DE AGAR.
VISIÓN MACROSCÓPICA
MATERIAL
- Alcohol
- Mechero Bunsen
- Placa Petri con medio agar Sabouraud
- Bisturí
- Pinzas
- Asa de siembra
- Muestra con hongos
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Placa Petri vacía
- Papel filtro
- Agua destilada
- 2 capilares de microhematocrito
- Estufa
- Regla
- Tijeras
TÉCNICA
1º. Dibujar en un papel un cuadradito de 1’5x1’5 cm. Colocar sobre el papel la placa con agar
Sabouraud y cortar un cuadrado siguiendo las líneas dibujadas anteriormente con la ayuda de
un bisturí.
2º. Con unas pinzas estériles coger el cuadradito de agar y ponerlo en el centro de un
portaobjetos. El portaobjetos deberá haberse limpiado anteriormente con alcohol y flameado.
3º. Coger con el asa de siembra, esterilizada y humedecida, un poco de muestra.
4º. Sembrar tocando con el asa en los cuatro laterales del cuadrado.
5º. Colocar un cubreobjetos limpio sobre el agar.
6º. Colocar el portaobjetos en una placa con papel de filtro humedecido y dos capilares.
7º. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
PROCEDIMIENTO EN IMÁGENES
Cortar cuadrado de agar
1 2
Colocar en portaobjetos
3
Coger muestra
4
Sembrar en los laterales
5
Colocar cubreobjetos Colocar en la cámara húmeda
6
VISIÓN MICROSCÓPICA
MATERIAL
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Pipeta Pasteur
- Colorante azul de lactofenol
- Muestra ya incubada (técnica del cuadradito de agar)
- Pinzas
- Mechero Bunsen
- Microscopio
TÉCNICA A
1º. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2º. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habíamos puesto sobre el
cuadradito de agar.
3º. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4º. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5º. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMÁGENES
Limpiar portaobjetos
1 2
Coger el cubre
Poner gota de azul
3 4
Poner cubre sobre la gota de azul
4
TÉCNICA B
1º. Coger un cubreobjetos, limpiar con alcohol y flamear.
2º. Con las pinzas esterilizadas retiramos el cuadradito de agar que quedará sobre el
portaobjetos.
3º. En el portaobjetos ponemos una gota de azul de lactofenol.
4º. Poner el cubreobjetos limpio sobre la gota de azul.
5º. Observar al microscopio a 40x.
INDICAR EL RESULTADO MICROSCÓPICO OBTENIDO
PRÁCTICA 28. TÉCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TÉCNICA DEL
HOYO EN PLACA.
VISIÓN MACROSCÓPICA
MATERIAL
- Alcohol
- Mechero Bunsen
- Placa de Petri (la que hemos usado en la práctica 27)
- Cubreobjetos
- Asa de siembra
- Muestra con hongos
- Pinzas
TÉCNICA
1º. Con un asa de platino esterilizada cogemos un poco de muestra.
2º. Cogemos la placa que hemos usado en la práctica anterior, y sembramos en las paredes del
hoyo que ha quedado tras sacar el cuadradito de agar.
3º. Con una pinza estéril colocar sobre el hoyo sembrado un cubreobjetos (previamente lavado
con alcohol y flameado).
4º. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
PROCEDIMIENTO EN IMÁGENES
INDICAR EL RESULTADO MACROSCÓPICO OBTENIDO
Coger un poco de muestra
1 2
Sembrar paredes del hoyo
3
Colocar cubreobjetos
VISIÓN MICROSCÓPICA
MATERIAL
- Portaobjetos
- Pipeta Pasteur
- Colorante azul de lactofenol
- Muestra ya incubada (técnica del hoyo en placa)
- Pinzas
- Mechero Bunsen
- Microscopio
TÉCNICA
1º. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2º. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habíamos puesto sobre el hoyo.
3º. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4º. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5º. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMÁGENES
INDICA RESULTADO MICROSCÓPICO OBTENIDO
Limpiar portaobjetos
1 2
Coger el cubre
Poner gota de azul
3 4
Poner cubre sobre la gota de azul
4
PRÁCTICA 29. TÉCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TÉCNICA DEL
CUBRE ESCAVADO EN PLACA.
VISIÓN MACROSCÓPICA
MATERIAL
- Alcohol
- Mechero Bunsen
- Placa de Petri con medio de cultivo Sabouraud.
- Cubreobjetos
- Asa de siembra
- Muestra con hongos
- Pinzas
TÉCNICA
1º. Con unas pinzas estériles, colocar 3 ó 4 cubreobjetos limpios en un ángulo de 45o en la
placa con medio Sabouraud.
2º. Coger un poco de muestra con un asa de siembra estéril.
3º. Sembrar donde se juntan el cubreobjetos con la superficie del medio.
4º. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo
PROCEDIMIENTO EN IMÁGENES
INDICAR EL RESULTADO MACROSCÓPICO OBTENIDO
Cubreobjetos en ángulo de 45 o
1 2
Coger muestra
3
Sembrar Cerrar e incubar
4
VISIÓN MICROSCÓPICA
MATERIAL
- Portaobjetos
- Pipeta Pasteur
- Colorante azul de lactofenol
- Muestra ya incubada (técnica del cubre inclinado en placa)
- Pinzas
- Mechero Bunsen
- Microscopio
TÉCNICA
1º. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.
2º. Con unas pinzas esterilizadas cogemos uno de los cubreobjetos que habíamos puesto en la
placa.
3º. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.
4º. Poner el cubre sobre la gota de azul.
5º. Observar al microscopio a 40x.
PROCEDIMIENTO EN IMÁGENES
INDICAR EL RESULTADO MICROSCÓPICO OBTENIDO
Limpiar portaobjetos
1 2
Coger el cubre
Poner gota de azul
3 4
Poner cubre sobre la gota de azul
4
PRÁCTICA 31. TÉCNICA DE VISUALIZACIÓN DE HONGOS.
VISUALIZACIÓN DIRECTA CON LA TÉCNICA DE LA CINTA
ADHESIVA.
MATERIAL
- Alcohol
- Mechero Bunsen
- Pipeta Pasteur estéril
- Cinta adhesiva transparente
- Portaobjetos
- Azul de lactofenol
- Muestra con hongos
- Microscopio
TÉCNICA
1º. Limpiar un portaobjetos con alcohol, secar y flamear.
2º. Cortar un trozo de cinta adhesiva y pegarlo a la parte de la muestra donde se encuentran
los hongos.
3º. Poner una gota de azul de lactofenol en el portaobjetos.
4º. Colocar la cinta adhesiva sobre la gota de azul de lactofenol.
5º. Observar al microscopio a 40x.
Recommended