Ototoxicita indukovaná cisplatinou

OTOTOXICITA INDUKOVANÁ CISPLATINOU

Michal Jurajda6. 9. 2013

NZ-10101-4

Genetické aspekty ototoxicity indukované cisplatinou - prospektivní asociační studie

ÚVOD

Cisplatina

• cis-diamin-dichlorplatnatý komplex (cis-DDP)

• Cytostatikum - chemoterapeutikum• Vedlejší nežádoucí efekty léčby cisplatinou• Ototoxicita, nefrotoxicita

Indikace cisplatiny

• metastazující testikulární nádory • metastazující karcinom vaječníku• karcinom děložního čípku• pokročilý karcinom močového měchýře• spinocelulární karcinomy hlavy a krku • karcinom plic

Ototoxicita cisplatiny

• Za podklad ototoxicity CDDP na biochemické úrovni je považován oxidativní stres způsobený dysbalancí mezi produkcí a odstraňováním reaktivních metabolitů kyslíku (ROS).

Ototoxicita cisplatiny• Při určité koncentraci ROS, kdy antioxidativní systém již nestačí

neutralizovat jejich škodlivý vliv, dochází v buňkách hlemýždě k indukci buněčné apoptózy.

• Od 4. až 6. dne po podání CDDP jsou takto selektivně postiženy vnější vláskové buňky (OHC) a podle některých autorů současně i myelinové pochvy neuronů ganglion spirale a podpůrné buňky Cortiho orgánu.

• Toto morfologické poškození je vždy zpočátku patrné v bazálním závitu hlemýždě a se stoupající kumulativní dávkou CDDP pak v jeho střední a nejpozději v apikální části.

• Bazální závit – vysoké frekvence

Cisplatina

peroxynitrit

Nitrotyrosin Aktivace caspas, calpainu a p53

metabolity

Aktivace apoptozy

vláskové buňky vnitřní i zevníNeurony spirálního ganglia

Percepční (sensorineurální) nedoslýchavost

zvýšení spontánní aktivity

ncl. kochlearis dorsalis

tinnitus

Obrana proti ROS

• Za fyziologických podmínek jsou nežádoucí účinky ROS blokovány systémem antioxidativních enzymů.

• Mezi antioxidativní enzymy patří zejména glutationperoxidáza (GPx), glutationreduktáza (GR), superoxiddismutáza (SOD), glutation-S-transferáza (GST), γ-glutamylcystein-syntetáza (γ-GCS) a kataláza (CAT).

Klinické projevy ototoxicity

• Většinou symetrická percepční vada• Reverzibilní v závislosti na individuální

citlivosti a celkové dávce CDDP• Někdy doprovázená tinitem

Klinické projevy

• Pokles prahu sluchu (HL), jak reverzibilní, tak i trvalý, se objevuje nejdříve od 3. dne po zahájení aplikace CDDP.

• Je zpočátku vždy vysokofrekvenční (nad 12 kHz) a s narůstající celkovou kumulativní dávkou postupně zasahuje nižší frekvence a zvyšuje svou intenzitu

• Vysoká interindividuální variabilita citlivosti vůči ototoxicitě indukované cisplatinou

METODIKA

Vstupní kritéria• Věk 18 – 55 let

• Negativní otologická anamnéza ve smyslu ušních operací, otitid, tinnitu.

• Negativní profesionální hluková anamnéza a vyloučení působení hluku během sledování.

• Normální otoskopické vyšetření.

• Normacuse nebo jen lehká percepční nedoslýchavost před podáním CDDP.

ORL vyšetření• Před prvním podáním CDDP• 4. až 6. den po ukončení podávání každé série• 1 měsíc a 3 měsíce po terapii– Při každém ORL vyšetření:

• Otoskopické vyšetření• Otoakustické emise (DPOAE) • Vysokofrekvenční tónová audiometrie• Sledování tinnitu a pocitu zhoršení sluchu

Genetické vyšetření

• Odběr periferní krve pro izolaci DNA před zahájením terapie

Kandidátní geny• CNV

– GSTM– GSTT

• SNP– TPMT rs12201199, ARVCF– COMT-rs9332377– NOS2-rs2297518– BCL2-rs2279115– BCL2;KDSR-rs1944423– IL6;LOC541472-rs1800796– IL1A-rs1800587– SOD2-rs4880– GSTP1-rs1695– LTB;LTA;TNF-rs361525– LTB;TNF;LTA-rs1800629

Genotypizace

• ABI 7000• TaqMan Genotyping Assays• TaqMan Copy Number Variations Assays

Copy Caller

VÝSLEDKY

Struktura souboru pacientů (N=55)

95%

5%

Muži (N=52)

Ženy (N=3)

71%

29%

0%20%40%60%80%

100%

<40 >40Věk pacientů (v letech)

≥40

C21 (N=1)

C300 (N=1)

C320 (N=1)

C435 (N=4)

C621 (N=48)

87%

7%2% 2% 2%

0%

10%

20%

30%

40%

50%

60%

70%

80%

90%

100%

po prvním cyklu

před druhým cyklem

po druhém cyklu

před třetím cyklem

po třetím cyklu

před čtvrtým cyklem

po čtvrtém cyklu

před pátým cyklem

po pátém cyklu

před šestým cyklem

po šestém cyklu

125Hz 250Hz 500Hz 1kHz 2kHz 3kHz4kHz 6kHz 8kHz 10kHz 12kHz

0%

5%

10%

15%

20%

25%

30%

35%

40%

45%

50%

Po prvním cyklu

Před druhým cyklem

Po druhém cyklu

Před třetím

cyklem

Po třetím cyklu

Před čtvrtým cyklem

Po čtvrtém cyklu

Před pátým

cyklem

Po pátém cyklu

Před šestým cyklem

Po šestém cyklu

Tónový audiogram Subjektivní hodnocení

94.5%

67.3%

5.5%

32.7%

0% 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100%

Tónový audiogram

DPOAE

Bez zlepšení mezi cykly Zlepšení mezi cykly

Pacienti se zhoršenímPacienti bez zhoršení0%

20%

40%

60%

80%

100%

0 1 2

71.4%

28.6%

0.0%

57.5%

37.5%

5.0%

Fisherův exaktní test*: p = 0.745

GSTM: genotypové četnosti

Pacienti se zhoršenímPacienti bez zhoršení0%

20%

40%

60%

80%

100%

0 1 2 3

7.1%21.4%

71.4%

0.0%

22.5%

47.5%

27.5%

2.5%

Fisherův exaktní test*: p = 0.028

GSTT: genotypové četnosti

Pacienti se zhoršením

Pacienti bez zhoršení0%

20%

40%

60%

80%

100%

AG

71.4%

28.6%

71.3%

28.8%

Fisherův exaktní test: p = 1.000

GSTP1-rs1695: alelové četnosti

Pacienti se zhoršenímPacienti bez zhoršení0%

20%

40%

60%

80%

100%

AA AG GG

50.0%42.9%

7.1%

57.5%

27.5%15.0%

Fisherův exaktní test*: p = 0.611

GSTP1-rs1695: genotypové četnosti

* exaktní významnost založena na odhadech metody Monte Carlo (100 000 vzorků)

Pacienti se zhoršením

Pacienti bez zhoršení0%

20%

40%

60%

80%

100%

CT

53.6%

46.4%

86.3%

13.8%

Fisherův exaktní test: p = 0.001

ARVCF,COMT-rs9332377: genotypové četnosti

Pacienti se zhoršenímPacienti bez zhoršení0%

20%

40%

60%

80%

100%

CC CT TT

21.4%

64.3%

14.3%

72.5%

27.5%

0.0%

Fisherův exaktní test*: p = 0.001

ARVCF,COMT-rs9332377: alelové četnosti

ZÁVĚR

Audiologická část

• Potvrzení stávajících poznatků– Poškození sluchu cisplatinou se projevuje na tónovém

audiogramu ve vyšších frekvencích (nad pásmem řeči)– Tónový audiogram nekoreluje s otoakustickými emisemi -

přináší jinou informaci o poškození vnitřního ucha cisplatinou.

Genetická část

• Detekovali jsme asociaci brzkého nástupu poškození sluchu s homozygotností funkční alely pro GSTT1

• Detekovali jsme asociaci brzkého nástupu poškození sluchu s T alelou COMT (rs9332377) – méně aktivní alela

• Brzkým nástupem míníme období od měření před 2. cyklem až po měření po 3. cyklu