View
223
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
i
EFEK ANTI INFLAMASI ASETIL EUGENOL SECARA ORAL PADA
EDEMA KAKI MENCIT GALUR SWISS YANG DIINDUKSI FORMALIN
SKRIPSI
Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat
Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)
Program Studi Farmasi
Oleh:
Yosephine Dian Hendrawati
NIM : 078114110
FAKULTAS FARMASI
UNIVERSITAS SANATA DHARMA
YOGYAKARTA
2011
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ii
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iii
HALAMAN PENGESAHAN
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
iv
Karya ini kupersembahkan kepada: Tuhan Yesus Kristus dan Bunda Maria, sebagai
ungkapan rasa syukur dan pujianku,
Untuk mama dan papa tersayang,
sebagai ungkapan kasih dan sayangku,
Untuk seseorang yang aku kasihi, teman-temanku,
Dan untuk Almamater kebanggaanku..
Learning is the beginning of wealth..
Learning is the beginning of health..
Learning is the beginning of spirituality..
Searching and learning is where the miracle
process all begins...
-Jim Rohn-
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
v
LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI KARYA ILMIAH
UNTUK KEPENTINGAN AKADEMIS
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vi
PRAKATA
Puji syukur dan terima kasih kepada Allah Bapa di surga atas berkat,
penyertaan, dan kasih-Nya yang begitu besar sehingga penulis dapat
menyelesaikan skripsi yang berjudul “Efek Anti Inflamasi Asetil Eugenol Secara
Oral pada Edema Kaki Mencit Galur Swiss yang Diinduksi Formalin” sebagai
salah satu syarat untuk mendapatkan gelar Sarjana Farmasi (S.Farm).
Dalam proses penelitian dan penyusunan skripsi ini, penulis telah
mendapatkan banyak bantuan serta dukungan baik moril maupun materiil dari
berbagai pihak, berupa bimbingan, dorongan, pengarahan, saran, serta sarana.
Maka dari itu penulis bermaksud untuk mengucapkan banyak terima kasih
kepada:
1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta, atas segala
dukungan dalam penyelesaian skripsi ini.
2. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku dosen pembimbing atas bimbingan,
saran, pengarahan, serta dukungannya dalam penelitian dan penyusunan
skripsi ini.
3. Drs. Mulyono, Apt. selaku dosen penguji yang telah memberikan
pendampingan, dukungan, saran, serta kritik yang membangun.
4. Jeffry Julianus, M.Si. selaku dosen penguji yang telah memberikan
pendampingan, dukungan, saran, serta kritik yang membangun.
5. Christine Patramurti, M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing akademik serta
segenap dosen dan staf Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
vii
telah mendampingi, mendukung, serta memberi semangat kepada penulis
selama melakukan studi di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma
Yogyakarta.
6. Papa Yohanes Cahyadi, Mama Cesilia Widhi Prih Yunianti, dan Albertus
Gatot Hendrasto, untuk doa, kasih sayang, serta dukungan yang tiada henti
untuk penulis.
7. Teman-teman seperjuangan dalam penelitian ini, Paulina Maya Octasari dan
Devi Nathania, atas kebersamaan, kerja keras, dan keceriaan selama
melakukan penelitian.
8. Florentinus Dika Octa Riswanto dan Albertus Eka Yudistira Sarwono, atas
kerjasama yang baik dan menyenangkan dalam sintesis senyawa yang
digunakan dalam penelitian ini.
9. Emmanuel Vialliresa Susilo, untuk dukungan, kasih, semangat, dan motivasi
yang selalu diberikan kepada penulis.
10. Yuma Pinandita Lingga Dewi, Maria Elleonora Winengku Asih, Martha
Hesty Susilowati, Paulus Febrianto Silor, Ridho Prayogie, serta seluruh
teman-teman untuk dukungan dan perhatian yang diberikan kepada penulis.
11. Mas Kayatno dan Yohanes Ratijo, beserta segenap staf laboran atas
kerjasama, masukan, dan bantuan yang diberikan selama penelitian.
12. Semua orang atas dukungan yang tidak dapat disebutkan satu persatu.
Penulis menyadari bahwa dalam penelitian dan penyusunan skripsi ini
masih terdapat banyak ketidaksempurnaan. Maka dari itu penulis mengharapkan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
viii
masukan serta kritik yang membangun. Harapan penulis, semoga karya ini dapat
bermanfaat bagi masyarakat dan bagi perkembangan ilmu pengetahuan.
Yogyakarta, Januari 2011
Penulis
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
ix
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
x
DAFTAR ISI
HALAMAN JUDUL ................................................................................................ i
HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ..................................................... ii
HALAMAN PENGESAHAN ................................................................................ iii
HALAMAN PERSEMBAHAN ............................................................................ iv
HALAMAN PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI .............................. v
PRAKATA ............................................................................................................. vi
PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................................................ ix
DAFTAR ISI ........................................................................................................... x
DAFTAR TABEL ................................................................................................ xiii
DAFTAR GAMBAR ........................................................................................... xiv
DAFTAR LAMPIRAN ......................................................................................... xv
INTISARI ............................................................................................................ xvii
ABSTRACT ......................................................................................................... xviii
BAB I PENGANTAR ............................................................................................. 1
A. Latar Belakang ................................................................................................. 1
1. Permasalahan ............................................................................................ 3
2. Keaslian penelitian .................................................................................... 3
3. Manfaat penelitian .................................................................................... 4
B. Tujuan Penelitian ............................................................................................. 4
1. Tujuan umum ............................................................................................ 4
2. Tujuan khusus ........................................................................................... 4
BAB II PENELAAHAN PUSTAKA...................................................................... 6
A. Inflamasi ........................................................................................................... 6
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xi
B. Anti Inflamasi................................................................................................... 8
C. Asetil Eugenol .................................................................................................. 8
D. Cataflam® D-50 (Kalium Diklofenak) ........................................................... 10
E. Virgin Coconut Oil ......................................................................................... 11
F. Metode Uji Efek Anti Inflamasi ..................................................................... 12
G. Uji Statistik One Way ANOVA dan General Linear Model.......................... 13
H. Landasan Teori ............................................................................................... 14
I. Hipotesis ......................................................................................................... 15
BAB III METODE PENELITIAN........................................................................ 16
A. Jenis dan Rancangan Penelitian ..................................................................... 16
B. Variabel Penelitian ......................................................................................... 16
1. Variabel utama ........................................................................................ 16
2. Variabel pengacau ................................................................................... 16
C. Definisi Operasional....................................................................................... 17
D. Bahan atau Materi Penelitian ......................................................................... 17
E. Alat atau Instrumen Penelitian ....................................................................... 18
F. Tata Cara Penelitian ....................................................................................... 19
1. Pembuatan larutan formalin 0,5%........................................................... 19
2. Penentuan volume injeksi subplantar dengan formalin 0,5% ................. 19
3. Penentuan dosis kalium diklofenak ........................................................ 19
4. Penentuan waktu pemberian asetil eugenol ............................................ 20
5. Pemilihan kontrol negatif ........................................................................ 20
6. Pembuatan larutan stok asetil eugenol .................................................... 20
7. Penentuan dosis asetil eugenol................................................................ 20
8. Penentuan lama pengamatan ................................................................... 21
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xii
9. Perlakuan pada hewan uji ....................................................................... 21
10. Skema perlakuan pada hewan uji ............................................................ 22
11. Penentuan % penghambatan inflamasi ................................................... 23
G. Analisis Hasil ................................................................................................. 24
BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .............................................................. 25
A. Hasil Uji Efek Penghambatan Inflamasi dan Besar Penghambatan
Inflamasi Asetil Eugenol secara Oral ............................................................. 25
B. Hasil Uji Hubungan Linearitas Antara Dosis Asetil Eugenol
terhadap Penghambatan Inflamasi ................................................................. 36
BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................ 40
A. Kesimpulan .................................................................................................... 40
B. Saran ............................................................................................................... 40
DAFTAR PUSTAKA ........................................................................................... 41
LAMPIRAN .......................................................................................................... 45
BIOGRAFI PENULIS .......................................................................................... 77
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiii
DAFTAR TABEL
Tabel I. Komposisi asam lemak dalam Virgin Coconut Oil menurut
standar APCC ..................................................................................... 12
Tabel II. Hasil uji presisi terhadap jangka sorong merk Mitutoyo ................... 26
Tabel III. Hasil rata-rata AUC, % penghambatan inflamasi dan hasil uji
Scheffe pada perlakuan asetil eugenol secara oral beserta
kontrolnya........................................................................................... 31
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xiv
DAFTAR GAMBAR
Gambar 1. Jalur metabolisme asam arakidonat ................................................. 7
Gambar 2. Struktur asetil eugenol ..................................................................... 9
Gambar 3. Mekanisme reaksi sintesis asetil eugenol (Riswanto, 2011) ......... 10
Gambar 4. Struktur kalium diklofenak ............................................................ 11
Gambar 5. Skema kerja penelitian uji daya anti inflamasi asetil eugenol ....... 23
Gambar 6. Grafik tebal edema kaki mencit selama enam jam akibat
pemberian asetil eugenol dengan tiga peringkat dosis beserta
kontrol............................................................................................ 30
Gambar 7. Diagram batang AUC untuk masing-masing kelompok
perlakuan beserta kontrol .............................................................. 31
Gambar 8. Reaksi asetilasi serin oleh asetil eugenol....................................... 34
Gambar 9. Interaksi hidrofobik antara asam amino valin dengan asetil
eugenol .......................................................................................... 34
Gambar 10. Kerangka struktur diaril atau aril/heteroaril-eter dan turunan
tioeter ............................................................................................. 35
Gambar 11. Struktur asetil eugenol ................................................................... 35
Gambar 12. Pembentukan radikal alil dari asetil eugenol ................................. 36
Gambar 13. Grafik hubungan linearitas dosis 0,260; 0,521; dan 1,042
ml/kg BB mencit dengan peningkatan % penghambatan
inflamasi ........................................................................................ 37
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xv
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1. Sertifikat kalibrasi vernier caliper merk Mitutoyo ....................... 45
Lampiran 2. Data beserta hasil uji presisi vernier caliper merk Mitutoyo ........ 47
Lampiran 3. Hasil elusidasi struktur asetil eugenol (Riswanto, 2011) .............. 48
Lampiran 4. Foto asetil eugenol hasil sintesis di Laboratorium Kimia
Organik Universitas Sanata Dharma Yogyakarta .......................... 53
Lampiran 5. Foto dokumentasi injeksi subplantar pada hewan uji .................... 54
Lampiran 6. Perhitungan dosis formalin 0,5% untuk injeksi subplantar ........... 55
Lampiran 7. Perhitungan dosis Cataflam® D-50 sebagai kontrol positif ........... 56
Lampiran 8. Perhitungan dosis Virgin Coconut Oil (VCO) sebagai kontrol
negatif ............................................................................................ 57
Lampiran 9. Perhitungan dosis asetil eugenol ................................................... 58
Lampiran 10. Tabel perhitungan AUC masing-masing kelompok perlakuan
asetil eugenol beserta kontrol ........................................................ 60
Lampiran 11. Tabel perhitungan % penghambatan inflamasi kelompok
perlakuan asetil eugenol secara oral beserta kontrol positif
kalium diklofenak (Cataflam®
D-50) ............................................ 62
Lampiran 12. Hasil ANOVA pola satu arah dengan taraf kepercayaan
95% % penghambatan inflamasi dengan pemberian asetil
eugenol dosis 0,260 ml/kg BB; 0,521 ml/kg BB ; dan 1,042
ml/kg BB beserta kontrol............................................................... 63
Lampiran 13. Hasil General Linear Model (GLM) repeated measures
dengan taraf kepercayaan 95% AUC edema kaki mencit
dengan pemberian asetil eugenol dosis 0,260 ml/kg BB;
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvi
0,521 ml/kg BB ; dan 1,042 ml/kg BB beserta kontrol ................. 67
Lampiran 14. Tabel r ............................................................................................ 75
Lampiran 15. Tabel konversi perhitungan dosis Laurence and Bacharach,
1964 ............................................................................................... 76
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xvii
INTISARI
Asetil eugenol telah terbukti secara in vitro dapat menghambat agregasi
platelet diduga akibat terhambatnya metabolisme asam arakidonat (Srivastava dan
Malholtra, 1991). Penelitian ini bertujuan untuk menguji efek anti inflamasi
senyawa asetil eugenol yang diberikan secara oral terhadap edema kaki mencit
galur Swiss yang diinduksi formalin.
Hewan uji dikelompokkan menjadi 5 kelompok, kelompok kontrol negatif
menerima Virgin Coconut Oil (VCO), kelompok kontrol positif menerima kalium
diklofenak, dan kelompok lainnya menerima asetil eugenol dengan dosis masing-
masing 0,260; 0,521; dan 1,042 ml/kg BB. Asetil eugenol diadministrasikan
dalam dosis tunggal 1 jam sebelum injeksi subplantar dengan larutan formalin
0,5% dan diukur tebal edema yang terjadi menggunakan jangka sorong setiap satu
jam sampai enam jam. Analisis hasil dilakukan dengan menghitung AUC total
setiap mencit selama rentang waktu pengukuran untuk menghitung persen
penghambatan inflamasi. Hasilnya dianalisis secara statistik dengan uji
Kolmogorov-Smirnov dilanjutkan dengan uji ANOVA satu arah serta GLM
repeated measures dengan taraf kepercayaan 95%.
Hasil daya anti inflamasi berturut-turut untuk asetil eugenol dosis 0,260;
0,521; dan 1,042 ml/kg BB adalah 39,38%; 52,98%; dan 69,82%. Nilai ED50 dari
asetil eugenol untuk pemberian oral terhadap mencit adalah 0,400 ml/kg BB.
Kata kunci : anti inflamasi, asetil eugenol, formalin.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
xviii
ABSTRACT
Acetyl eugenol had been proven inhibit human platelet agregation in
vitro, as a result of arachidonic acid metabolism inhibition (Srivastava and
Malholtra, 1991). The study aims to evaluate the anti-inflammatory effect of
acetyl eugenol given orally on male mice.
Formalin test was used to evaluate the anti-inflammatory effect, by
injecting 0,5% formalin to induce paw edema. In this study, mice were divided
into 5 groups, the first was negative control received Virgin Coconut Oil (VCO),
the second group was positive control received diclofenac potassium, and the 3
other groups received different doses of acetyl eugenol at 0,260; 0,521; and 1,042
ml/kg BW. All drugs were administered orally in a single dose, 1 hour before the
subplantar injection of formalin. The paw thickness was measured using a vernier
caliper before injection of formalin and every hour for a period of 6 hour.
Analysis of the result was carried out by calculating the AUC for every mouse in
the period of measurement to calculate the percentage of inflammatory inhibiton.
The result then analyzed statistically using the one way ANOVA and GLM
repeated measures (p<0,05).
The result of this research indicated that acetyl eugenol at doses of 0,260;
0,521; and 1,042 ml/kg BW significantly inhibited inflammation with each value
of inflammatory inhibition percentage were 39,38%; 52,98%; and 69,82%. The
value of ED50 of acetyl eugenol for oral administration in mice was 0,400 ml/kg
BW.
Keywords : anti-inflammatory, acetyl eugenol, formalin
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
1
BAB I
PENGANTAR
A. Latar Belakang
Inflamasi merupakan respon terlokalisasi yang dihasilkan oleh adanya
kerusakan pada jaringan tervaskularisasi, yang berperan untuk menghancurkan,
memperkecil, atau menyingkirkan baik agen penyebab kerusakan tersebut serta
jaringan yang rusak itu sendiri. Inflamasi dicirikan dengan respon akut berupa
tanda-tanda yang meliputi rasa nyeri (dolor), panas (calor), kemerahan (rubor),
pembengkakan (tumor), dan hilangnya fungsi jaringan (functiolessa). Inflamasi
dapat disebabkan oleh berbagai sebab, antara lain agen biologis (bakteri), agen
fisik (panas dan trauma mekanik), serta agen kimiawi (molekul toksik yang kecil
dan makromolekul imunogenik). Peran inflamasi adalah untuk menahan
meluasnya kerusakan serta memfasilitasi proses penyembuhan (Anonim, 2009).
Karena banyaknya hal yang dapat menyebabkan inflamasi, maka
inflamasi menjadi suatu gangguan yang seringkali dihadapi. Sekalipun berperan
dalam proses penyembuhan jaringan yang rusak, inflamasi seringkali
menimbulkan rasa tidak nyaman seperti rasa nyeri serta panas pada penderitanya.
Oleh karena itu, dibutuhkan obat-obatan yang mampu menangani inflamasi.
Obat Anti Inflamasi Non Steroid (OAINS) merupakan golongan obat
yang seringkali digunakan untuk menangani inflamasi. Lelo, Hidayat, dan Juli
(2004) mengatakan bahwa OAINS efektif mengontrol rasa sakit akibat inflamasi.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
2
Eugenol, suatu senyawa yang merupakan komponen utama dari atsiri
cengkeh (Syzygium aromaticum L.) adalah salah satu senyawa alam yang
tergolong OAINS (Rubin, Pan, dan Volpe, 2001). Sebagai suatu agen anti
inflamasi, eugenol bekerja dengan melakukan penghambatan biosintesis
prostaglandin dengan menghambat kerja enzim siklooksigenase 2 (Okada, dkk.,
2005). Dalam suatu uji anti inflamasi, eugenol dapat diadministrasikan secara per
oral dan terbukti efektif sebagai agen anti inflamasi (Daniel, dkk., 2009).
Dalam perkembangannya, pada senyawa eugenol dapat ditambahkan
gugus tertentu sehingga terbentuk beberapa senyawa turunan eugenol. Contoh dari
senyawa turunan eugenol antara lain metil eugenol, asetil eugenol, serta benzoil
eugenol. Telah dilakukan beberapa penelitian yang menunjukkan bahwa beberapa
senyawa turunan eugenol hasil sintesis berpotensi dikembangkan sebagai obat anti
inflamasi (Sadeghian, Seyedi, Saberi, Arghiani, dan Riazi, 2007).
Asetil eugenol merupakan salah satu senyawa turunan eugenol selain
juga terkandung dalam jumlah kecil di dalam atsiri cengkeh yang diduga memiliki
aktivitas anti inflamasi. Srivastava dan Maholtra (1991) melakukan penelitian in
vitro terhadap asetil eugenol dan menemukan bahwa asetil eugenol dapat
menghambat agregasi platelet. Hal ini berarti asetil eugenol sendiri memiliki
aktivitas dalam penghambatan metabolisme asam arakidonat.
Uji formalin dapat digunakan untuk mengamati aktivitas anti inflamasi
suatu zat. Mekanisme formalin dalam menginduksi inflamasi akut adalah dengan
memacu eksudasi cairan dan protein plasma serta emigrasi leukosit yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
3
didominasi neutrofil. Beberapa studi membuktikan bahwa setelah injeksi
formalin, edema pada kaki hewan uji terjadi dengan cepat (Lee dan Jeong, 2001).
Dalam penelitian ini, peneliti bermaksud membuktikan adanya efek anti
inflamasi dari asetil eugenol bila diberikan secara oral dengan subjek uji yang
digunakan adalah mencit jantan galur Swiss dan sebagai model inflamasi
digunakan edema kaki terinduksi formalin.
1. Permasalahan
Berdasarkan uraian yang dikemukakan di atas, maka permasalahan yang
diteliti adalah:
a. apakah pemberian asetil eugenol secara oral pada mencit dapat mengurangi
tebal edema kaki mencit jantan galur Swiss yang diinduksi formalin 0,5%?
b. berapa persen penghambatan inflamasi asetil eugenol yang diberikan secara
oral pada edema kaki mencit jantan galur Swiss yang diinduksi formalin 0,5%?
c. berapa dosis efektif asetil eugenol secara oral sebagai agen anti inflamasi
terhadap edema kaki mencit jantan galur Swiss yang diinduksi formalin 0,5%?
2. Keaslian penelitian
Sepanjang penelusuran yang dilakukan penulis, sudah cukup banyak
penelitian mengenai khasiat eugenol serta derivat senyawanya sebagai agen anti
inflamasi. Namun, penelitian tentang pemberian senyawa asetil eugenol secara per
oral untuk menurunkan edema kaki mencit yang diinduksi formalin belum pernah
dilakukan. Penelitian tentang senyawa turunan eugenol yang sudah pernah
dilakukan antara lain:
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
4
a. Acetyl Eugenol, a Component of Oil of Cloves (Syzygium aromaticum L.)
Inhibits Aggregation and Alters Arachidonic Acid Metabolism in Human Blood
Platelets (Srivastava dan Malhotra, 1991).
b. Antinociceptive Effect of Methyl Eugenol on Formalin-Induced Hyperalgesia
in Mice (Yano, dkk., 2006).
3. Manfaat penelitian
a. Manfaat teoritis. Penelitian ini diharapkan dapat memperkaya pengetahuan
dalam penggunaan senyawa hasil sintesis sebagai anti inflamasi
b. Manfaat praktis. Penelitian ini diharapkan mampu memberikan informasi
kepada masyarakat dalam penggunaan asetil eugenol dalam menangani
penyakit.
B. Tujuan Penelitian
1. Tujuan umum
Secara umum penelitian ini bertujuan untuk menambah informasi
mengenai senyawa turunan bahan alam yang memiliki efek anti inflamasi.
2. Tujuan khusus
Berdasarkan permasalahan yang dikemukakan di atas, maka tujuan dari
penelitian ini adalah:
a. mengetahui ada tidaknya penurunan edema kaki mencit jantan galur Swiss
yang diinduksi formalin 0,5% dengan pemberian asetil eugenol secara oral
b. mengetahui persen penghambatan inflamasi asetil eugenol secara oral pada
edema kaki mencit jantan galur Swiss yang diinduksi formalin 0,5%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
5
c. mengetahui dosis efektif asetil eugenol secara per oral sebagai agen anti
inflamasi terhadap edema kaki mencit jantan galur Swiss yang diinduksi
formalin 0,5%.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
6
BAB II
PENELAAHAN PUSTAKA
A. Inflamasi
Inflamasi merupakan suatu reaksi general, non-spesifik, terhadap partikel
asing atau stimulus noksius lainnya seperti toksin dan patogen. Inflamasi adalah
bentuk usaha dari tubuh untuk menginaktivasi atau menghancurkan organisme
penginvasi, menyingkirkan iritan, serta memulai tahap perbaikan jaringan
(Madigan, Martinko, dan Parter, 2000). Karakteristik respon inflamasi mencakup
kemerahan, pembengkakan, rasa nyeri, serta panas yang sifatnya terlokalisasi
pada tempat rusaknya jaringan (Furr, 1992).
Umaru, dkk. (2009) menjelaskan bahwa inflamasi dipacu oleh pelepasan
beberapa jenis mediator kimiawi dari jaringan yang rusak dan sel yang bermigrasi.
Mediator kimiawi yang dilepaskan bergantung pada tipe inflamasi yang terjadi
dan mencakup senyawa amin seperti histamin dan 5-hidroksitriptamin seperti
prostaglandin, peptida kecil seperti bradikinin, dan peptida yang lebih besar
seperti interleukin-1 yang merupakan sitokin.
Prostaglandin dan derivat asam lemak terkait dari asam arakidonat
merupakan autacoid yang paling poten. Mereka adalah substansi regulatori sel
yang penting (Rang, Dale, dan Ritter, 1999).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
7
Proses terjadinya inflamasi melalui pembentukan prostaglandin dari asam
arakidonat terjadi sebagai berikut:
Gambar 1. Jalur metabolisme asam arakidonat (Sakakibara, 2010)
Dalam gambar di atas dijelaskan bagaimana mediator inflamasi disintesis
dari asam arakidonat. Asam arakidonat berasal dari fosfolipid, bagian dari
membran sel. Enzim fosfolipase akan mengubah fosfolipid menjadi asam
arakidonat. Asam arakidonat kemudian menjalani dua jalur metabolisme, yaitu
jalur siklooksigenase serta jalur lipooksigenase. Pada jalur lipooksigenase akan
dihasilkan leukotrien, suatu mediator inflamasi. Sementara pada jalur
siklooksigenase, akan dihasilkan beberapa senyawa eicosanoid, antara lain
protaglandin (melalui jalur COX-2) serta prostasiklin dan tromboksan (melalui
jalur COX-1) (Sakakibara, 2010). Senyawa eicosanoid yang dihasilkan melalui
jalur siklooksigenase ini memiliki karakteristik yang berbeda, prostasiklin (PGI2)
dan tromboksan (TXA2) merupakan senyawa konstitutif yang berfungsi
melakukan perlindungan lambung dan koagulasi darah. Sementara prostaglandin
(PGE2) merupakan senyawa indusibel yang memperantarai inflamasi. Hal ini yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
8
melandasi terjadinya beberapa efek samping dari OAINS yang tidak selektif
terhadap COX-2 (Kawai, 1998).
B. Anti Inflamasi
Obat anti radang bukan steroid atau yang lazim dinamakan non steroidal
antiinflammatory drugs (NSAIDs) adalah golongan obat yang terutama bekerja
perifer, memiliki aktivitas penghambat radang dengan mekanisme kerja
menghambat biosintesis prostaglandin melalui penghambatan aktivitas enzim
siklooksigenase (Kartasasmita, 2002).
Menurut Dannhardt dan Laufer (2000), pendekatan untuk menentukan
apakah suatu senyawa dapat memiliki aksi sebagai inhibitor COX-2 yang selektif
dapat dilakukan secara struktural. Terdapat 5 macam golongan struktural yang
berpotensi selektif dalam menghambat enzim COX-2, yaitu (1) karboksil dan
heterosiklik yang memiliki moietas aril yang berikatan visinal, (2) diaril atau
aril/heteroaril-eter dan turunan tioeter, (3) turunan cis-stillben, (4) diaril dan
aril/heteroaril keton, dan (5) komponen dengan moietas antioksidatif.
C. Asetil Eugenol
Asetil eugenol merupakan senyawa yang memiliki nama kimia 4-allyl-2-
methoxyphenyl acetate dengan bobot molekul 206.24 dan rumus molekul
C12H14O3. Senyawa ini merupakan senyawa yang tidak larut dalam air, akan tetapi
larut dalam etanol, eter, serta beberapa jenis minyak (FAO, 2010).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
9
Gambar 2. Struktur asetil eugenol (Anonim, 2000)
Asetil eugenol merupakan komponen dari minyak atsiri cengkeh
(Syzygium aromaticum L.) (Srivastava dan Maholtra, 1991). Asetil eugenol dapat
juga disintesis dengan mereaksikan eugenol dan anhidrida asam asetat sebagai
agen pengasilasi (Bulan, 2004).
Srivastava dan Maholtra (1991) melakukan penelitian in vitro asetil
eugenol terhadap platetet manusia. Hasilnya terjadi penghambatan agregasi
platelet yang diduga akibat aktivitas asetil eugenol mengganggu metabolisme
asam arakidonat di jalur siklooksigenase.
Asetil eugenol dapat disintesis melalui reaksi esterifikasi antara eugenol
dengan anhidrida asam asetat dengan berbagai katalis. Bulan (2004) mensintesis
asetil eugenol dengan menggunakan asam sulfat sebagai katalis, sementara
Riswanto (2011) menggunakan natrium hidroksida sebagai katalis. Penggunaan
NaOH sebagai katalis bertujuan untuk meningkatkan nukleofilisitas OH fenolik
pada eugenol sehingga lebih optimal menyerang C karbonil pada anhidrida asam
asetat. Hal ini terbukti dengan dihasilkannya kemurnia asetil eugenol sebesar
95,88% dengan katalis NaOH sementara sintesis asetil eugenol dengan katalis
H2SO4 menghasilkan asetil eugenol dengan kemurnian 69%. Asetil eugenol hasil
sintesis Riswanto (2011) memiliki karakteristik antara lain berwarna merah dan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
10
berbau cengkeh. Mekanisme reaksi sintesis asetil eugenol dengan katalis natrium
hidroksida dapat digambarkan sebagai berikut:
OH
O
Eugenol
NaOH Na + OH
NaOH
70 - 80 C+
H
O
H
H3C O CH3
O O
Anhidrida asam asetat
H2C
O
OH2C
O
OH2C
+
CH3
CH3
CH3
O
OH2C
CH3
O CH3
O O
CH3
O
OH2C
CH3
CH3
O+
O CH3
O
O CH3
O
Asetil eugenol
Natrium asetat
Na
Na
Gambar 3. Mekanisme reaksi sintesis asetil eugenol (Riswanto, 2011)
D. Cataflam® D-50 (Kalium Diklofenak)
Cataflam® D-50 yang berisi kalium diklofenak immediate-release dengan
kekuatan 50 mg setiap tabletnya. Kalium diklofenak merupakan turunan asam
benzenasetat yang termasuk dalam golongan obat anti inflamasi non steroid
(OAINS). Kalium diklofenak sendiri memiliki nama kimia 2-[(2,6-
dichlorophenyl)amino]benzeneacetic acid, monopotassium salt dengan bobot
molekul sebesar 334,25 dan rumus molekul C14H10Cl2NKO2 (Novartis, 2009).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
11
Gambar 4. Struktur kalium diklofenak (Novartis, 2009)
Tablet Cataflam®
D-50 merupakan sediaan tablet tanpa salut sehingga
bersifat dispersible atau dapat digerus dan memungkinkan digunakan dalam
peracikan obat untuk resep. Selain kalium diklofenak, bahan inaktif yang
terkandung dalam tablet Cataflam® D-50 antara lain kalsium fosfat, silikon
dioksida koloidal, besi oksida, magnesium stearat, mikrokristalin selulosa,
polietilen glikol, povidone, natrium glikolat, pati jagung, talk, serta titanium
dioksida (Novartis, 2009).
E. Virgin Coconut Oil
Virgin Coconut Oil (VCO) atau minyak kelapa murni merupakan minyak
yang diperoleh dari pengolahan kopra atau daging kelapa segar dari tanaman
kelapa (Cocos nucifera L.) secara mekanik atau natural yang berarti tanpa
penggunaan panas, yang hasilnya tidak terjadi perubahan terhadap minyak itu
sendiri. VCO sesuai untuk konsumsi manusia dalam bentuk alaminya (APCC,
2004).
VCO mengandung beberapa jenis lemak jenuh serta lemak tak jenuh.
Kandungan asam lemak jenuhnya didominasi oleh Medium Chain Fatty Acid
(MCFA) seperti asam laurat, asam kaprilat, asam kaprat, dan asam kaproat. Asian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
12
Pasific Coconut Community (APCC) sendiri juga telah menetapkan standar
kandungan dalam VCO yang dapat dilihat dalam tabel 1.
Tabel I. Komposisi asam lemak dalam Virgin Coconut Oil menurut standar APCC
(APPC, 2004)
Asam Lemak Rumus Kimia Jumlah (%)
Asam lemak jenuh
Asam kaproat
Asam kaprilat
Asam kaprat
Asam laurat
Asam miristat
Asam palmitat
Asam stearat
C5H11COOH
C7H17COOH
C9H19COOH
C11H23COOH
C13H27COOH
C15H31COOH
C17H35COOH
0,4 – 0,6
5,0 – 10,0
4,5 – 8,0
43,0 – 53,0
16,0 – 21,0
7,5 – 10,0
2,0 – 4,0
Asam lemak tak jenuh
Asam oleat
Asam linoleat
C17H33COOH
C17H31COOH
5,0 – 10,0
1,0 – 2,5
F. Metode Uji Efek Anti Inflamasi
Evans dan Williamson (1996) mengemukakan beberapa metode yang
dapat digunakan untuk mengukur efek anti inflamasi, antara lain:
1. Inflamasi (eritema dan udem pada telinga) hewan pengerat
2. Uji udema pada telapak kaki tikus
3. Uji induksi artritis pada tikus atau mencit.
Injeksi subkutan pada hewan uji dengan formalin telah digunakan secara
luas sebagai model inflamasi. Penggunaan formalin terkait dengan aktivitasnya
menstimulasi saraf aferen dan kemoreseptor sehingga memacu terjadinya
inflamasi. Uji dengan formalin dicirikan oleh respon bifasik, respon fase pertama
terjadi 10 menit setelah injeksi formalin kemudian diikuti oleh fase kedua yang
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
13
merupakan fase inflamasi yang dimulai 25 menit setelah injeksi (Bruera dan
Purtenoy, 2003).
Suatu metode penentuan persen penghambatan inflamasi dengan
menggunakan data luas area di bawah kurva memiliki rumus sebagai berikut:
Keterangan :
(AUC0-x)0 = AUC0-x rata-rata kelompok kontrol negatif
(AUC0-x)n = AUC0-x masing-masing hewan uji yang diberi senyawa uji
dengan dosis sebesar n (Ikawati, Suparjan, dan Asmara,
2007).
G. Uji Statistik One Way ANOVA dan General Linear Model
Uji statistik One Way Analysis of Variance (ANOVA) digunakan dalam
analisis data numerik dari lebih dari dua kelompok tidak berpasangan. Disebut
tidak berpasangan karena subjek uji pada setiap kelompok uji adalah subjek yang
berbeda (Dahlan, 2009).
ANOVA merupakan teknik general yang dapat digunakan untuk menguji
kebenaran suatu hipotesis di antara lebih dari dua kelompok, dengan asumsi
bahwa populasi yang disampel memiliki distribusi normal (Anonim, 2008).
Apabila data berdistribusi tidak normal, maka digunakan uji Kruskal-
Wallis untuk menentukan perbedaan di antara beberapa kelompok. Uji Kruskal-
Wallis atau uji H mengasumsikan bahwa varian antara k populasi adalah sama,
tetapi k populasi berdistribusi kontinu dan mempunyai bentuk yang sama
(Anonim, 2006).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
14
Analisis General Linear Model Repeated Measures merupakan teknik
yang digunakan untuk menganalisis respon variabel pada subjek yang sama
dengan pengukuran di waktu yang berbeda (Shelden dan Brown, 2008).
Analisis Post Hoc dilakukan jika hasil analisis ANOVA menunjukkan
hasil adanya perbedaan yang signifikan pada kelompok uji, yaitu untuk
menemukan letak perbedaan yang bermakna tersebut (Dahlan, 2009).
H. Landasan Teori
Inflamasi merupakan respon jaringan hidup terhadap suatu gangguan
dengan cara memobilisasi semua bentuk pertahanan tubuh berupa reaksi vaskuler,
neurologik, humoral, dan seluler. Inflamasi seringkali menimbulkan rasa tidak
nyaman pada penderitanya sehingga membutuhkan penanganan dengan obat-
obatan anti inflamasi.
Eugenol dan asetil eugenol adalah senyawa yang terkandung dalam
minyak atsiri cengkeh. Asetil eugenol juga dapat disintesis dari eugenol dengan
mereaksikannya dengan asam asetat anhidrida. Eugenol telah terbukti memiliki
aktivitas anti inflamasi yang mirip dengan obat-obatan golongan AINS, yaitu
menghambat pembentukan prostaglandin yang merupakan mediator inflamasi,
dan dapat diadministrasikan melalui jalur administrasi per oral (Daniel, dkk.,
2009).
Asetil eugenol belum pernah diteliti secara in vivo, akan tetapi
penelitiannya secara in vitro menunjukkan bahwa asetil eugenol dapat
menghambat agregasi platelet yang diduga merupakan akibat dari penghambatan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
15
biosintesis prostaglandin. Dengan demikian diharapkan asetil eugenol seperti
halnya eugenol mampu menghambat pembentukan prostaglandin pada model
inflamasi berupa edema kaki mencit yang diinduksi larutan formalin secara
subplantar sehingga terjadi penurunan tebal edema kaki tersebut.
I. Hipotesis
Pemberian asetil eugenol secara oral pada mencit jantan galur Swiss
dapat menurunkan tebal edema pada kaki mencit yang diinduksi formalin.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
16
BAB III
METODE PENELITIAN
A. Jenis dan Rancangan Penelitian
Penelitian ini termasuk jenis penelitian eksperimental murni rancangan
acak lengkap pola satu arah.
B. Variabel Penelitian
1. Variabel utama
a. Variabel bebas
Variabel bebas dalam penelitian ini adalah dosis asetil eugenol. Dosis
asetil eugenol adalah sejumlah volume asetil eugenol tiap satuan kg berat
badan (dengan satuan ml/ kg BB).
b. Variabel tergantung
Variabel tergantung dalam penelitian ini adalah tebal edema kaki
mencit yang diinduksi larutan formalin 0,5%. Cara mengukur variabel
tergantung adalah dengan mengukur tebal telapak kaki mencit dengan
menggunakan jangka sorong (vernier caliper) dengan satuan sentimeter.
2. Variabel pengacau
a. Variabel pengacau terkendali
a) galur spesies berasal dari galur Swiss
b) berat badan antara 20-30 gram
c) umur antara 2-3 bulan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
17
b. Variabel pengacau tak terkendali
a) kondisi patologi hewan uji
C. Definisi Operasional
1. Tebal edema adalah tebal telapak kaki yang diinduksi oleh larutan formalin
0,5% yang diinjeksikan secara subplantar dan diukur dengan jangka sorong
(vernier caliper) dalam satuan sentimeter
2. Asetil eugenol adalah senyawa hasil sintesis dari eugenol dengan asam asetat
anhidrida yang disintesis oleh Riswanto (2011) di laboratorium Kimia Organik
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta
3. Formalin adalah larutan 37% formaldehid dalam aquades. Untuk menginduksi
edema digunakan larutan formalin 0,5%
4. Inflamasi merupakan respon lokal tubuh terhadap suatu gangguan yang
dicirikan dengan rubor, dolor, kalor, tumor, dan functiolessa. Dalam penelitian
ini yang digunakan sebagai indikator inflamasi yang akan diukur adalah tumor
(bengkak).
D. Bahan atau Materi Penelitian
1. Bahan utama
a. Asetil eugenol: merupakan senyawa utama yang digunakan dalam
penelitian dengan kemurnian 95,88% yang diperoleh dari sintesis yang
dilakukan oleh Riswanto (2011) di Laboratorium Kimia Organik
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. Asetil eugenol yang dihasilkan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
18
memiliki karakteristik organoleptis antara lain berwarna merah dan
berbau cengkeh (lampiran 4a). Asetil eugenol yang digunakan telah
melalui serangkaian uji elusidasi struktur dan dipastikan bahwa senyawa
tersebut adalah benar asetil eugenol. Hasil elusidasi struktur dapat dilihat
pada lampiran 3.
b. Mencit putih jantan: hewan uji yang digunakan adalah mencit putih
jantan galur Swiss dengan berat badan 20-30 gram dengan umur 2-3
bulan. Hewan uji diperoleh dari Laboratorium Hayati Imono Fakultas
Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
2. Bahan kimia
a. Formalin 0,5% merk Bratachem®: digunakan sebagai bahan penginduksi
edema pada kaki mencit dengan injeksi subpantar sebagai model
inflamasi. Formalin berasal dari Laboratorium Farmakologi dan
Toksikologi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta
b. Kalium diklofenak: digunakan sebagai kontrol positif. Kalium diklofenak
yang digunakan berasal dari tablet Cataflam® (Novartis) D (dispersible)
50 mg yang diperoleh dari Apotek Kimia Farma Yogyakarta
c. Virgin Coconut Oil (VCO): digunakan sebagai pelarut asetil eugenol
serta sebagai kontrol negatif. VCO yang digunakan adalah VCO merk
HealthyCo® dan diperoleh dari Apotek Sanata Dharma Yogyakarta.
E. Alat atau Instrumen Penelitian
1. Neraca analitik merk Ohaus
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
19
2. Jangka sorong (vernier caliper) merk Mitutoyo
2. Kotak kaca tempat pengamatan
3. Stopwatch merk Baby-G
4. Syringe dan spuit injeksi dan oral
5. Mortir dan stamper
5. Peralatan gelas : beaker glass, pipet ukur, gelas ukur, labu ukur, pipet tetes,
glass finn
F. Tata Cara Penelitian
1. Pembuatan larutan formalin 0,5%
Pembuatan larutan asam formalin 0,5% dari larutan formalin 100%
(formaldehid 37%) menggunakan rumus volume1 x konsentrasi1 = volume2 x
konsentrasi2. Dengan menggunakan rumus ini, larutan formalin 0,5% dibuat
dengan mengambil formalin 100% sebanyak 0,5 ml kemudian diencerkan
menggunakan aquadest di dalam labu ukur sampai diperoleh volume 100 ml.
2. Penentuan volume injeksi subplantar dengan formalin 0,5%
Injeksi subplantar dengan larutan formalin 0,5% diberikan sejumlah
0,025 ml tiap 20 gram berat badan mencit (Vogel, 2002).
3. Penentuan dosis kalium diklofenak
Dosis kalium diklofenak sebagai kontrol positif yaitu 9,1 mg/kg BB
(Dewi, 2010). Larutan kalium diklofenak dibuat dengan menggerus tablet
Cataflam®
(Novartis) D (dispersible) 50 mg di dalam mortir kemudian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
20
didispersikan dalam 100 ml aquadest sehingga diperoleh larutan dengan
konsentrasi 0,05% (b/v).
4. Penentuan waktu pemberian asetil eugenol
Asetil eugenol sebagai senyawa uji diberikan 1 jam sebelum induksi
edema dengan injeksi formalin 0,5% secara subplantar (Ayoola, dkk., 2009).
5. Pemilihan kontrol negatif
Kontrol negatif adalah zat yang tidak memiliki efek anti inflamasi
sehingga dapat digunakan sebagai pembanding terhadap zat yang diuji serta
dapat menjadi pelarut yang aman untuk asetil eugenol untuk diberikan secara
per oral. Kontrol negatif yang diuji adalah Virgin Coconut Oil (VCO) merk
HealthyCo®. Dosis kontrol negatif diperoleh dari konversi dosis VCO pada
manusia, yaitu 15 ml tiap 50 kg BB. Dengan faktor konversi 0,0026 dari
manusia 70 kg ke mencit 20 g diperoleh dosis VCO 0,055 ml tiap 20 g BB
mencit.
6. Pembuatan larutan stok asetil eugenol
Larutan stok asetil eugenol dalam VCO dibuat dengan konsentrasi 6,25%
v/v. Cara pembuatannya dengan mengambil 0,5 ml asetil eugenol, dimasukkan
ke dalam gelas ukur, kemudian ditambahkan VCO sampai 8 ml.
7. Penentuan dosis asetil eugenol
Dosis asetil eugenol ditetapkan dari rumus dosis x berat badan =
konsentrasi x volume. Digunakan berat badan 30 gram dengan konsentrasi
6,25% (v/v) dan volume pemberian setengah volume maksimal pemberian
secara per oral untuk mencari dosis asetil eugenol dalam satuan ml/kg BB.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
21
Dosis I = 0,260 ml/kg BB. Dosis II = 0,521 ml/kg BB. Dosis III = (0,0625
ml/ml x 0,5 ml) / 30 g = 1,042 x 10-3
ml/g BB = 1,042 ml/kg BB.
8. Penentuan lama pengamatan
Lama pengamatan pada hewan uji adalah 6 jam dimulai dari penyuntikan
formalin subplantar (Ayoola, dkk., 2009).
9. Perlakuan pada hewan uji
Hewan uji dalam penelitian ini dibagi secara acak menjadi 5 kelompok,
di mana tiap-tiap kelompok terdiri dari 5 ekor mencit. Sebelum hewan uji
digunakan untuk penelitian, terlebih dahulu hewan uji diadaptasikan dengan
lingkungan laboratorium selama ± 2 minggu. Hewan uji diperlakukan sama
baik dari segi pakan, kandang, maupun minumnya. Sebelum mencit diberi
perlakuan, terlebih dahulu mencit dipuasakan selama 24 jam untuk
meminimalkan variabel-variabel pengacau. Mencit yang sedang dipuasakan
diletakkan pada kandang terpisah dan tetap diberikan minum.
Kemudian mencit dikelompokkan dan diperlakukan sebagai berikut:
Kelompok I
Merupakan kontrol positif. Tebal kaki kanan mencit diukur dengan
jangka sorong, kemudian mencit diberi kalium diklofenak secara oral, 1 jam
kemudian diinjeksi larutan formalin 0,5% secara subplantar. Mencit diamati
dan diukur tebal edemanya setiap satu jam sampai 6 jam.
Kelompok II
Merupakan kontrol negatif. Tebal kaki kanan mencit diukur dengan
jangka sorong, kemudian mencit diberi VCO secara oral, 1 jam kemudian
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
22
diinjeksi larutan formalin 0,5% secara subplantar. Mencit diamati dan diukur
tebal edemanya setiap satu jam sampai 6 jam.
Kelompok III
Merupakan kelompok perlakuan pertama. Tebal kaki kanan mencit
diukur dengan jangka sorong, kemudian mencit diberi asetil eugenol dosis
0,260 ml/kg BB secara oral, 1 jam kemudian diinjeksi larutan formalin 0,5%
secara subplantar. Mencit diamati dan diukur tebal edemanya setiap satu jam
sampai 6 jam.
Kelompok IV
Merupakan kelompok perlakuan kedua. Tebal kaki kanan mencit diukur
dengan jangka sorong, kemudian mencit diberi asetil eugenol dosis 0,521
ml/kg BB secara oral, 1 jam kemudian diinjeksi larutan formalin 0,5% secara
subplantar. Mencit diamati dan diukur tebal edemanya setiap satu jam sampai 6
jam.
Kelompok V
Merupakan kelompok perlakuan ketiga. Tebal kaki kanan mencit diukur
dengan jangka sorong, kemudian mencit diberi asetil eugenol dosis 1,042
ml/kg BB secara oral, 1 jam kemudian diinjeksi larutan formalin 0,5% secara
subplantar. Mencit diamati dan diukur tebal edemanya setiap satu jam sampai 6
jam.
10. Skema perlakuan pada hewan uji
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
23
Keterangan:
Kel I : kelompok kontrol positif (Cataflam®)
Kel II : kelompok kontrol negatif (VCO)
Kel III : kelompok perlakuan dosis asetil eugenol 0,260 ml/kg BB
Kel IV : kelompok perlakuan dosis asetil eugenol 0,521 ml/kg BB
Kel V : kelompok perlakuan dosis asetil eugenol 1,042 ml/kg BB
Gambar 5. Skema kerja penelitian uji daya anti inflamasi asetil eugenol
11. Penentuan % penghambatan inflamasi
Metode penentuan persen penghambatan inflamasi yang digunakan
dalam penelitian ini adalah dengan menghitung luas area di bawah kurva
(AUC) untuk setiap mencit pada setiap rentang waktu pengukuran sehingga
dapat dihitung % penghambatan inflamasinya dengan rumus:
Hewan uji sejumlah 25 ekor
Kel I Kel II Kel IV Kel V Kel III
Tebal kaki kanan mencit diukur
Mencit diberikan senyawa uji beserta
kontrol secara oral
1 jam kemudian mencit diinjeksi
subplantar dengan formalin 0,5%
Tebal kaki kanan diukur setiap 1 jam
sampai 6 jam
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
24
Keterangan :
(AUC0-x)0 = AUC0-x rata-rata kelompok kontrol negatif
(AUC0-x)n = AUC0-x masing-masing hewan uji yang diberi senyawa uji dengan
dosis sebesar n (Ikawati, dkk., 2007).
Hasil yang diperoleh kemudian dianalisis secara statistik untuk
menemukan dosis asetil eugenol yang dapat menurunkan tebal edema kaki
mencit secara signifikan.
G. Analisis Hasil
Luas daerah di bawah kurva digunakan untuk menghitung %
penghambatan inflamasi, kemudian hasilnya dianalisis menggunakan uji
Kolmogorov-Smirnov dilanjutkan dengan uji Anova 1 arah dengan taraf
kepercayaan 95%. Jika hasil yang diperoleh berbeda bermakna, dilanjutkan
dengan uji Scheffe dengan taraf kepercayaan 95%. Uji GLM repeated measures
dilakukan untuk melihat perbedaan grafik tebal edema antara masing-masing
kelompok dalam rentang pengukuran yang ditentukan. Data kuantitatif penurunan
tebal edema disajikan dengan rata-rata (mean) ± standard error dengan 5 subyek
uji untuk tiap kelompok perlakuan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
25
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil Uji Efek Penghambatan Inflamasi dan Besar Penghambatan
Inflamasi Asetil Eugenol secara Oral
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan sekaligus
besarnya kemampuan senyawa asetil eugenol dalam menangani inflamasi. Asetil
eugenol yang akan diuji sebelumnya telah melalui serangkaian pengujian elusidasi
struktur dan terbukti bahwa senyawa yang digunakan adalah benar asetil eugenol
(Riswanto, 2011). Hasil elusidasi struktur senyawa asetil eugenol yang digunakan
dapat dilihat dalam lampiran 3. Penghambatan inflamasi ditandai dengan
penurunan tebal edema kaki hewan uji yang diinjeksi secara subplantar dengan
larutan formalin 0,5% akibat pemberian senyawa asetil eugenol terhadap hewan
uji secara oral. Metode yang digunakan dalam uji anti inflamasi ini adalah metode
induksi inflamasi dengan formalin 0,5% dan pengukuran tebal edema kaki hewan
uji menggunakan jangka sorong (vernier caliper) yang diadopsi dari penelitian
Joseph, dkk. (2005) di mana variabel yang diukur adalah ketebalan edema telapak
kaki mencit dengan posisi jangka sorong vertikal. Hewan uji yang digunakan
dalam penelitian ini adalah mencit jantan galur Swiss.
Metode pengukuran dengan jangka sorong merupakan salah satu metode
yang seringkali digunakan dalam uji anti inflamasi di samping metode potong
kaki atau metode pengukuruan volume edema dengan pletismometer. Alasan
digunakannya metode ini dalam uji anti inflamasi yang dilakukan adalah karena
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
26
metode ini relatif sederhana dari segi instrumen, serta memungkinkan
dihasilkannya data yang lebih akurat karena pengukuran dapat dilakukan secara
berulang untuk memastikan data yang terambil sudah tepat. Sebelum memulai
rangkaian penelitian, alat jangka sorong yang akan digunakan dikalibrasi terlebih
dahulu untuk memastikan kelayakan dan akurasi serta presisi alat tersebut dalam
mengukur. Kalibrasi dilakukan dengan membandingkan jangka sorong yang akan
digunakan dengan alat lain yang bersertifikat. Berdasarkan hasil kalibrasi, jangka
sorong yang digunakan memiliki penyimpangan ± sebesar 10 µm, sedangkan
penyimpangan terbesar yang direkomendasikan adalah 20 µm, hal ini berarti
jangka sorong tersebut layak untuk digunakan dalam proses pengukuran. Untuk
lebih jelas mengenai data kalibrasi alat dapat dilihat pada lampiran 1.
Selain itu, uji keterulangan (presisi) terhadap jangka sorong yang akan
digunakan juga dilakukan secara langsung melalui suatu rangkaian pengukuran
untuk dapat menentukan Coefficient of Variation (CV) dari hasil pengukuran
tersebut. Menurut Mulja dan Hanwar (cit., Wulandari, Friamita, dan Patramurti,
2006) suatu data dikatakan memiliki presisi yang baik bila nilai CV kurang dari
2%. Dari tiga rangkaian uji yang dilakukan, CV yang dihasilkan adalah 0,70%,
0,40%, dan 0,00%. Data uji presisi dapat dilihat pada lampiran 2. Dengan
demikian, jangka sorong yang digunakan terbukti memiliki presisi yang baik.
Tabel II. Hasil uji presisi terhadap jangka sorong merk Mitutoyo
No
Rata-rata tebal
kaki dalam 3 kali
pengukuran
SD CV
I 0,282 0,002 0,70%
II 0,290667 0,001155 0,40%
III 0,286 0 0,00%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
27
Pada pengujian ini dipilih larutan formalin dengan konsentrasi 0,5%
sebagai zat penginduksi inflamasi. Larutan formalin disuntikkan secara subplantar
pada kaki kanan mencit untuk menimbulkan edema. Larutan formalin dipilih
karena inflamasi yang ditimbulkan terjadi dengan cepat dan tampak jelas disertai
gejala inflamasi lain seperti merah pada daerah edema. Joseph, dkk. (2005)
menyatakan bahwa formalin merupakan zat yang paling cocok untuk menguji
kemampuan suatu zat sebagai agen anti inflamasi karena karakter inflamasinya
yang mirip dengan artritis pada manusia. Terjadinya edema yang diinduksi
formalin merupakan suatu proses bifasik. Fase pertama terjadi karena pelepasan
kinin, serotonin, dan histamin. Fase kedua dimulai 25 menit setelah injeksi dan
berkaitan dengan pembentukan prostaglandin.
Virgin Coconut Oil (VCO) digunakan sebagai kontrol negatif untuk
mengetahui apakah VCO berpengaruh terhadap aktivitas anti inflamasi asetil
eugenol. Asetil eugenol merupakan senyawa yang tidak larut dalam air. Secara
teoritis asetil eugenol larut dalam etanol dan eter, sementara kedua pelarut
tersebut tidak dapat digunakan untuk penghantaran obat secara per oral
dikarenakan toksisitasnya. Melalui percobaan yang dilakukan peneliti pada saat
orientasi, ternyata VCO mampu melarutkan asetil eugenol dengan baik, selain itu
juga relatif aman untuk diberikan secara oral kepada hewan uji.
Sebagai kontrol positif digunakan Cataflam® D-50. Cataflam
® berisi
kalium diklofenak 50 mg. Cataflam®
dipilih karena termasuk dalam golongan obat
anti inflamasi non steroid (OAINS) yang bekerja dengan menghambat sintesis
prostaglandin. Digunakan merk Cataflam®
D-50 karena hampir semua sediaan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
28
yang mengandung diklofenak yang beredar merupakan tablet salut enterik yang
ditujukan untuk mengurangi resiko iritasi pada lambung (Padmadisastra,
Abdassah, dan Wijanarko, 2007). Desain salut enterik bertujuan agar obat baru
akan dilepaskan saat sudah mencapai usus halus. Oleh karena itu, pada sediaan
tersebut selain kalium diklofenak juga terdapat bahan lain yang menyusun
penyalut dari tablet tersebut yang tidak memungkinkan tablet untuk digerus,
sedangkan dalam penelitian ini tablet harus digerus agar dapat dilarutkan dalam
aquades. Cataflam® D merupakan tablet dispersible tanpa salut sehingga
memungkinkan tablet ini untuk digerus dan didispersikan dalam aquades untuk
diberikan pada mencit secara per oral. Dosis Cataflam®
yang digunakan adalah 9,1
mg/kg BB mencit (Dewi, 2010).
Pada uji efek anti inflamasi ini, asetil eugenol dalam VCO dengan
konsentrasi 6,25% v/v diberikan dalam 3 peringkat dosis, untuk mengetahui ada
tidaknya linearitas antara dosis asetil eugenol dengan aktivitas anti inflamasinya,
serta signifikansi masing-masing dosis jika dibandingkan dengan kontrol. Ketiga
peringkat dosis asetil eugenol tersebut adalah 0,260; 0,521; dan 1,042 ml/kg BB
mencit. Asetil eugenol diberikan 1 jam sebelum induksi edema dengan injeksi
formalin 0,5% pada kaki kanan mencit. Demikian pula dengan VCO dan
Cataflam®. Setelah injeksi formalin, mencit diamati selama 6 jam dan tebal edema
kaki diukur dengan menggunakan jangka sorong setiap 1 jam. Dari rentang
pengukuran selama 6 jam ini diharapkan akan tampak perbedaan grafik tebal
edema pada kelompok mencit yang diberi asetil eugenol dengan kelompok
kontrol. Untuk melihat perbedaan grafik tersebut digunakan analisis statistik
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
29
General Linear Model (GLM) repeated measures dengan taraf kepercayaan 95%.
Hasilnya dapat dilihat pada lampiran 13.
Grafik pada gambar 6 menunjukkan perbedaan antara masing-masing
kelompok perlakuan. Analisis GLM repeated measure menunjukkan bahwa
Cataflam® serta ketiga peringkat dosis asetil eugenol berbeda bermakna dengan
VCO sebagai kontrol negatif (p<0,05). Asetil eugenol dosis 0,260; 0,521; serta
1,042 ml/kg BB mencit, ketiganya tidak berbeda bermakna dengan Cataflam®
sebagai kontrol positif. Hal ini menunjukkan bahwa tebal edema kaki mencit
akibat pemberian asetil eugenol pada ketiga dosis tersebut dapat dikatakan
sebanding dengan edema kaki mencit akibat pemberian kalium diklofenak yang
terkandung dalam Cataflam®. Dari tiga peringkat dosis, dosis 0,260 ml/kg BB
mencit berbeda bermakna dengan dosis 1,042 ml/kg BB mencit, sementara dosis
0,521 ml/kg BB mencit tidak berbeda bermakna dengan kedua dosis lainnya. Hal
ini berarti pola penurunan edema kaki mencit pada kelompok dosis 0,521 ml/kg
BB berada di antara dosis 0,260 dan 1,042 ml/kg BB.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
30
kelompok II
kelompok III
kelompok IV
kelompok I
kelompok V
Gambar 6. Grafik tebal edema kaki mencit selama enam jam akibat pemberian
asetil eugenol dengan tiga peringkat dosis beserta kontrol Keterangan:
Kelompok I : kelompok kontrol Cataflam®
D dosis 9,1 mg/kg BB
Kelompok II : kelompok kontrol VCO
Kelompok III : kelompok asetil eugenol 6,25% v/v dosis 0,260 ml/kg BB
Kelompok IV : kelompok asetil eugenol 6,25% v/v dosis 0,521 ml/kg BB
Kelompok V : kelompok asetil eugenol 6,25% v/v dosis 1,042 ml/kg BB
Data selisih tebal edema kaki mencit digunakan untuk menghitung %
penghambatan inflamasi. Terlebih dahulu dihitung luas daerah di bawah kurva
atau AUC dari masing-masing dosis yang digunakan. Rumus yang digunakan
mengacu pada penelitian anti inflamasi Ikawati, dkk. (2007). Untuk menentukan
% penghambatan inflamasi akibat pemberian asetil eugenol, dihitung hubungan
antara selisih tebal telapak kaki mencit yang diinjeksi formalin pada setiap jam
dari jam ke-0 dengan waktu pengamatan untuk masing-masing mencit pada tiap
perlakuan yang ditentukan dengan nilai AUC setiap satuan waktu dan AUC total.
Data perhitungan AUC dapat dilihat pada lampiran 10. Diagram batang yang
menunjukkan perbedaan AUC antar kelompok perlakuan disajikan dalam gambar
7. Data AUC total kemudian digunakan untuk menentukan % penghambatan
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
31
inflamasi untuk setiap kelompok perlakuan. Hasil perhitungan % penghambatan
inflamasi dianalisis normalitasnya dengan uji Kolmogorov-Smirnov dilanjutkan
dengan analisis ANOVA 1 arah dengan taraf kepercayaan 95%.
Gambar 7. Diagram batang AUC untuk masing-masing kelompok perlakuan
beserta kontrol
Tabel III. Hasil rata-rata AUC, % penghambatan inflamasi dan hasil uji Scheffe
pada perlakuan asetil eugenol secara oral beserta kontrolnya
Kel Rata-rata AUC
X ± SE % PI ± SE
Hasil uji Scheffe terhadap
kelompok
I II III IV V
I 0,3130 ± 0,02189 59,4560 ± 2,83498 - b tb tb tb
II 0,7720 ± 0,04716 0,0000 ± 6,10872 b - b b b
III 0,4680 ± 0,03360 39,3782 ± 4,35241 tb b - tb b
IV 0,3630 ± 0,02884 52,9793 ± 3,73520 tb b tb - tb
V 0,2330 ± 0,05881 69,8187 ± 7,61830 tb b b tb -
Keterangan:
Kelompok I : kelompok kontrol positif Cataflam® dosis 9,1 mg/kg BB
Kelompok II : kelompok kontrol negatif VCO
Kelompok III : kelompok asetil eugenol 6,25% v/v dosis 0,260 ml/kg BB
Kelompok IV : kelompok asetil eugenol 6,25% v/v dosis 0,521 ml/kg BB
Kelompok V : kelompok asetil eugenol 6,25% v/v dosis 1,042 ml/kg BB
b : berbeda bermakna (p < 0,05)
tb : berbeda tidak bermakna (p > 0,05)
X : mean (rata-rata)
SE : standard error
% PI : % penghambatan inflamasi
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
32
Dari tabel di atas terlihat bahwa masing-masing dosis asetil eugenol
memiliki efek anti inflamasi yang dinilai dari % penghambatan inflamasi yang
diperoleh dengan membandingkan AUC total tiap kelompok perlakuan dengan
AUC rata-rata kelompok kontrol negatif. Analisis ANOVA serta uji Scheffe yang
dilakukan menunjukkan bahwa efek anti inflamasi asetil eugenol dosis 0,260;
0,521; dan 1,042 ml/kg BB tidak berbeda bermakna (p>0,05) dengan efek anti
inflamasi kontrol positif, yaitu Cataflam® yang berisi kalium diklofenak. Hal ini
berarti pada dosis terendah, yaitu 0,260 ml/kg BB mencit, senyawa asetil eugenol
telah dapat bekerja sebagai anti inflamasi dengan % penghambatan inflamasi yang
sebanding dengan kerja kalium diklofenak dalam Cataflam®
sebagai senyawa
yang diketahui secara pasti sebagai agen anti inflamasi. Pada kelompok perlakuan
dengan asetil eugenol, perbedaan yang bermakna terletak pada kelompok yang
menerima dosis 0,260 ml/kg BB dengan kelompok yang menerima dosis 1,042
ml/kg BB. Persen penghambatan inflamasi pada kelompok yang menerima dosis
0,521 ml/kg BB tidak berbeda bermakna dengan kedua dosis lainnya.
Penelitian terdahulu mengenai mekanisme aksi asetil eugenol sebagai agen
anti inflamasi sangat terbatas. Srivastava dan Malholtra (1991) berhasil
membuktikan bahwa asetil eugenol mampu menghambat agregasi platelet pada
platelet manusia secara in vitro yang diduga akibat penghambatan aktivitas enzim
siklooksigenase. Maka, untuk mampu memahami bagaimana asetil eugenol secara
in vivo mampu menurunkan tebal edema kaki mencit yang diinduksi larutan
formalin, digunakan pendekatan dengan terlebih dahulu memahami mekanisme
kerja obat golongan anti inflamasi non steroid (AINS).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
33
Mekanisme kerja OAINS meliputi reduksi sintesis prostaglandin dengan
menghambatan enzim siklooksigenase melalui antagonisme dengan asam
arakidonat untuk berikatan dengan enzim siklooksigenase (COX). Agar suatu obat
dapat menjadi inhibitor kompetitif terhadap asam arakidonat untuk dapat
berikatan dengan enzim COX, obat tersebut harus memiliki lipofilisitas yang
tinggi serta properti asam untuk menyerupai substrat alami dari COX itu sendiri
(Mehanna, 2003). Diklofenak sendiri yang dalam penelitian ini digunakan sebagai
kontrol positif merupakan golongan OAINS turunan asam asetat yang memiliki
fungsionalitas asam sehingga dapat berikatan dengan enzim COX untuk
menghambat biosintesis prostaglandin. Asetil eugenol seperti halnya eugenol,
merupakan senyawa derivat fenol, yang artinya juga memiliki properti asam.
Selain itu, asetil eugenol juga merupakan senyawa penyusun minyak atsiri
tanaman cengkeh yang bersifat lipofil (Pauli, 2006). Sifat dasar ini mendukung
aksi dari asetil eugenol untuk berkompetisi dengan asam arakidonat dalam
berikatan dengan enzim siklooksigenase.
Enzim siklooksigenase terdiri dari serangkaian asam amino. Pada posisi
516 dan 529 terdapat asam amino serin yang dapat diasetilasi oleh gugus asetil
seperti yang dilakukan oleh senyawa asam asetilsalisilat (Gierse, dkk., 1996). Hal
ini dapat menjadi suatu pendekatan untuk memahami pengaruh dari penambahan
gugus asetil kepada senyawa eugenol terhadap pengaruhnya sebagai agen anti
inflamasi yang mampu menjadi inhibitor enzim siklooksigenase. Reaksi asetilasi
asam amino serin oleh senyawa asetil eugenol dapat dilihat dalam gambar 8.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
34
+
Gambar 8. Reaksi asetilasi serin oleh asetil eugenol
Perbedaan antara siklooksigenase 1 dan siklooksigenase 2 terletak pada
asam amino yang berada di posisi 523 (Gierse, dkk., 1996). Pada COX-1 posisi
523 adalah isoleusin, sementara pada COX-2 adalah valin. Untuk mampu menjadi
suatu inhibitor selektif COX-2, asetil eugenol harus mampu berinteraksi dengan
valin. Secara struktural, interaksi yang mungkin terjadi antara asetil eugenol
adalah interaksi hidrofobik antara asetil eugenol dengan residu asam amino valin
pada COX-2.
Gambar 9. Interaksi hidrofobik antara asam amino valin dengan asetil eugenol
Dengan pendekatan struktural yang dikemukakan oleh Dannhardt dan
Laufer (2000), asetil eugenol termasuk ke dalam golongan diaril atau
aril/heteroaril-eter dan turunan tioeter. Hal tersebut dapat dilihat dalam gambar 10
dan 11.
serin asetil eugenol
valin
asetil eugenol
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
35
Gambar 10. Kerangka struktur diaril atau aril/heteroaril-eter dan turunan tioeter
(Dannhardt dan Laufer, 2000)
Dalam gambar tersebut, bagian X dapat berupa molekul O maupun S, yang
terikat dengan sebuah cincin aromatis yang mengikat 2 rantai aril, serta sebuah
gugus karboksil. Hal ini sesuai dengan struktur asetil eugenol seperti tampak pada
gambar 9.
Gambar 11. Struktur asetil eugenol (Anonim, 2000)
Sebuah substituen penarik elektron pada cincin aromatis diduga
memegang peranan penting dalam aktivitas fisiologis pada golongan senyawa
dengan struktur semacam ini, dengan aktivitas maksimal untuk gugus asetil dan
siano (Dannhardt dan Laufer, 2000).
Mekanisme lain yang diduga berperan dalam aktivitas asetil eugenol
sebagai agen anti inflamasi adalah aktivitas antioksidan dari senyawa tersebut.
Hidalgo, dkk. (2009) melakukan penelitian mengenai aktivitas antioksidan
beberapa senyawa turunan eugenol. Metode yang digunakan adalah metode
peredaman radikal bebas 1,1-difenil-2-pikrilhidrazil (DPPH). Salah satu senyawa
turunan eugenol yang diuji adalah asetil eugenol. Hasilnya, walaupun tidak terlalu
besar, namun asetil eugenol menunjukkan aktivitas peredaman senyawa radikal
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
36
tersebut. Radikal terbentuk pada bagian alil karena atom H pada bagian tersebut
tidak terikat kuat dibandingkan H pada cincin benzen maupun H pada ikatan
rangkap sehingga mudah lepas.
Gambar 12. Pembentukan radikal alil dari asetil eugenol (Hidalgo, dkk., 2009)
Salah satu peristiwa yang terjadi dalam proses inflamasi adalah oksidasi
asam arakidonat oleh spesies oksigen reaktif (McIntyre dan Hazen, 2010). Dengan
adanya aktivitas penangkapan senyawa radikal oleh asetil eugenol, maka oksidasi
asam arakidonat menjadi senyawa HETE (hydroxyeicosatraenoic acid atau asam
hidroksieikosatetraenoat) juga akan dihambat dan dengan demikian akan
menurunkan reaksi inflamasi yang terjadi.
B. Hasil Uji Hubungan Linearitas antara Dosis Asetil Eugenol terhadap
Penghambatan Inflamasi
Pengujian penghambatan inflamasi asetil eugenol secara oral pada edema
kaki mencit jantan yang diinduksi formalin 0,5% dilanjutkan dengan uji regresi
linier. Uji regresi linier dilakukan untuk mengetahui hubungan linearitas antara
dosis asetil eugenol yang diberikan secara oral terhadap % penghambatan
inflamasinya. Tujuan dilakukannya uji ini adalah agar dapat dicari nilai ED50 dari
asetil eugenol secara per oral. Effective Dose 50 (ED50) merupakan dosis yang
dibutuhkan oleh suatu senyawa obat untuk menimbulkan efek sebesar 50% dari
efek maksimum anti inflamasi.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
37
Analisis regresi dilakukan terhadap log dosis asetil eugenol serta %
penghambatan inflamasi yang dihasilkan oleh masing-masing dosis tersebut.
Hasilnya, pengujian daya anti inflamasi asetil eugenol secara oral terhadap mencit
jantan galur Swiss yang diinduksi formalin 0,5% memiliki persamaan Y = 50,73x
+ 69,93 dengan nilai r = 0,9918. Melalui persamaan tersebut dapat diketahui nilai
ED50 untuk asetil eugenol secara oral adalah 0,400 ml/kg BB mencit. Dosis ini
nantinya apabila dikonversikan untuk manusia dengan menggunakan tabel
konversi dosis Laurence dan Bacharach (1964), di mana faktor konversi dosis dari
mencit 20 g ke manusia 70 kg adalah 387,9, akan menghasilkan nilai dosis 0,044
ml/kg BB manusia. Tabel konversi Laurence dan Bacharach dapat dilihat pada
lampiran 14. Gambar 13 merupakan grafik kurva kekerabatan antara log dosis
asetil eugenol dengan % penghambatan inflamasi.
Gambar 13. Grafik hubungan linearitas dosis 0,260; 0,521; dan 1,042 ml/kg BB
mencit dengan peningkatan % penghambatan inflamasi
Berdasarkan tabel r, suatu data dikatakan memiliki hubungan
kekerabatan yang nyata bila r hitungnya lebih besar atau sama dengan r tabel.
y = 50,73x + 69,93 R
2 = 0,9837
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
38
Untuk hubungan % penghambatan inflamasi asetil eugenol dengan dosisnya
digunakan 3 peringkat dosis (N=3) dengan taraf kepercayaan 95%. R tabel untuk
N=3 dengan taraf kepercayaan 95% adalah 0,997; sementara pada hasil yang
diperoleh dari penelitian ini r hitung adalah 0,9918. Hasil statistik untuk %
penghambatan inflamasi ini menunjukkan bahwa adanya peningkatan dosis akan
menghasilkan peningkatan nilai % penghambatan inflamasinya, terutama pada
dosis I dan III. Oleh karena itu, untuk memperoleh nilai r hitung yang lebih besar
atau sama dengan r tabel dapat dilakukan dengan menambah peringkat dosis asetil
eugenol. Tabel r dapat dilihat pada lampiran 14.
Berdasarkan hasil penelitian, asetil eugenol tidak dapat diberikan dengan
dosis yang tinggi untuk mencapai efek anti inflamasi yang semakin tinggi.
Melalui pengujian yang dilakukan oleh peneliti pada saat orientasi, ternyata asetil
eugenol bersifat toksik pada dosis tinggi. Konsentrasi tertinggi yang mungkin
diberikan secara oral terhadap mencit adalah 6,25% v/v. Pada konsentrasi yang
lebih tinggi daripada 6,25% v/v dengan volume pemberian 0,5 ml akan
mematikan hewan uji dalam waktu yang relatif singkat. Pada konsentrasi yang
lebih rendah atau sama dengan 6,25%, asetil eugenol menunjukkan aktivitas anti
inflamasi berupa penurunan tebal edema kaki mencit, akan tetapi pada seluruh
hewan uji yang menerima asetil eugenol secara oral terjadi defekasi dengan
konsistensi yang cair beberapa saat setelah pemberian asetil eugenol secara oral.
Akan tetapi hal ini tidak berlangsung lama dan setelah 6 jam mencit tampak sehat
seperti mencit yang tidak diberikan asetil eugenol. Namun, permasalahan yang
terkait dengan kemungkinan toksisitas asetil eugenol ini perlu diteliti lebih lanjut.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
39
Konsentrasi asetil eugenol berkaitan langsung dengan dosis asetil eugenol itu
sendiri. Oleh karena itu, hubungan linearitas antara dosis asetil eugenol dengan
daya anti inflamasinya terbatas hanya sampai di dosis tertinggi yaitu 1,042 ml/kg
BB mencit.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
40
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
A. Kesimpulan
Berdasarkan hasil dari penelitian ini, dapat disimpulkan bahwa:
1. asetil eugenol yang diberikan secara oral dapat menurunkan tebal edema kaki
mencit jantan galur Swiss yang diinduksi formalin 0,5%
2. persentase penghambatan inflamasi yang ditimbulkan oleh asetil eugenol yang
diberikan secara oral pada edema kaki mencit jantan galur Swiss yang
diinduksi formalin 0,5% dengan dosis 0,260; 0,521; 1,042 ml/kg BB mencit
berturut-turut sebesar 39,38%; 52,98%, dan 69,82%
3. dosis efektif asetil eugenol secara oral terhadap edema kaki mencit galur Swiss
yang diinduksi formalin 0,5% adalah 0,400 ml/kg BB mencit.
B. Saran
Berdasarkan penelitian yag telah dilakukan, disarankan untuk melakukan
penelitian mengenai:
1. identifikasi mekanisme asetil eugenol dalam menghambat proses metabolisme
asam arakidonat secara in vitro
2. uji toksisitas asetil eugenol secara oral terhadap hewan uji beserta uji
histopatologinya.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
41
DAFTAR PUSTAKA
Anonim, 2000, Acetyl Eugenol, http://www.chemikalienlexikon.
de/aroinfo/aceteuge.htm, diakses tanggal 3 November 2010.
Anonim, 2006, The Kruskal-Wallis Test, www.statistics.its.ac.id/
downloads/tugas/Kruskal%20Wallis.pdf, diakses tanggal 23 November
2010.
Anonim, 2008, The Analysis of Variance (ANOVA), http://www.itl.
nist.gov/div898/handbook/prc/section4/prc43.htm, diakses tanggal 3
November 2010.
Anonim, 2009, Biomaterials-Tissue Interactions, MIT OpenCourseWare
http://ocw.mit.edu/terms, diakses tanggal 29 Oktober 2010.
Anonim, 2010, Introduction to the Eicosanoids, http://themedical
biochemistrypage.org/eicosanoids.html, diakses tanggal 2 November
2010.
APPC, 2004, Asian Pasific Coconut Community Standard for Virgin Coconut Oil,
www.apccsec.org/document/VCNO.PDF, diakses tanggal 2 September
2010.
Ayoola, G. A., Akpanika, G. A., Awobajo, F. O., Sofidiya, M. O., Osunkalu, V.
O., Coker, H. A. B., et al., 2009, Anti-Inflammatory Properties of the
Fruits of Allanblanckia Floribunda Oliv. (Guttiferae), Botany Research
International, 2(1): 21-26.
Bulan, R., 2004, Reaksi Asetilasi Eugenol dan Oksidasi Metil Iso Eugenol,
Skripsi, 2-3, Universitas Sumatera Utara, Medan.
Bruera, E. R., and Portenoy, R. K., 2003, Cancer Pain: Assessment and
Management, 15, Cambridge University Press, UK.
Daniel, A. N., Sartoretto, S. M., Schmidt, G., Caparroz-Assef, S. M., Bersani-
Amado, C. A., and Cuman, R. K. N., 2009, Anti-inflammatory and
Antinociceptive Activities of Eugenol Essential Oil in Experimental
Animal Models, Revista Brasileira de Farmacognosia, 19: 1-5.
Dannhardt, G., and Laufer, S., 2000, Structural Approaches to Explain the
Selectivity of COX-2 Inhibitors: Is There a Common Pharmacophore?,
Current Medicinal Chemistry, 7:1101-1112.
Dewi, S. P., Daya Antiinflamasi Ekstrak Etanolik Jahe Merah (Zingiber officinale
Roxb.) dan Kencur (Kaempferia galanga L.) pada Mencit Putih Jantan,
Skripsi, 25, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
42
Evans, F. J., and Williamson, E. M., 1996, Selection, Preparation, and
Pharmacologicaly Evaluation of Plant Material, John Willey, New York,
pp.131-137.
FAO, 2010, Eugenyl Acetate, http://www.fao.org/ag/agn/jecfa-
flav/details.html?flavId=4820, diakses tanggal 2 Desember 2010.
Furr, J. R., 1992, Fundamentals of Immunology, in: Hugo, W.B., Russell, A.D.
(Ed.), Pharmaceutical Microbiology, 5th ed., Blackwell Scientific
Publications, London, pp. 305-331.
Gierse, J.K., McDonald, J. J., Hauser, S. D., Rangwala, S. H., Koboldt, C. M., and
Seibert, K., 1996, A Single Amino Acid Difference between
Cyclooxygenase-1 (COX-1) and -2 (COX-2) Reverses the Selectivity of
COX-2 Specific Inhibitors, The Journal of Biological Chemistry,
271(26):15810-15814.
Hidalgo, M. E., Rosa, C. D. L., Carrasco, H., Cardona, W., Gallardo, C.,
Espinoza, L., 2009, Antioxidant Capacity of Eugenol Derivatives,
Química Nova, 32(6).
Ikawati, Z., Suparjan, A. M., dan Asmara, L. S., 2007, Pengaruh Senyawa
Heksagamavunon-1 (HGV-1) Terhadap Inflamasi Akut Akibat Reaksi
Anafilaksis Kutaneus Aktif Pada Tikus Wistar Jantan Terinduksi
Ovalbumin, Kemajuan Terkini Riset Universitas Gadjah Mada, 36-46.
Joseph, S. M., George, M. C., Nair, J. R., Senan, V. P., Pillai, D., and Sherief, P.
M., 2005, Effect of Feeding Cuttlefish Liver Oil On Immune Function,
Inflammatory Response And Platelet Aggregation in Rats, Current
Science, 88:507-510.
Kartasasmita, R.E., Perkembangan Obat Antiradang Bukan Steroid, Kajian
Pustaka, 27(4):75-91.
Kawai, S., 1998, Cyclooxygenase Selectivity and The Risk of Gastro-Intestinal
Complications of Various Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs: A
Clinical Consideration, Inflammation Research, 47(2): 1023-3830.
Lee, I. O., and Jeong, Y. S., 2001, Effects of Different Concentrations of Formalin
on Paw Edema and Pain Behaviors in Rats, Journal of Korean Medical
Sciences, 17: 81-85.
Lelo, A., Hidayat, D. S., dan Juli, S., 2004, Penggunaan Anti-Inflamasi Non-
Steroid Yang Rasional Pada Penanggulangan Nyeri Rematik, Skripsi, 1-
9, Universitas Sumatera Utara, Medan.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
43
Madigan, M. T., Martinko, J. M., and Parter, J., 2000, Microbial Growth Control,
in: Brock, T.D. (Ed.), Brock Biology of Microorganisms, 9th ed.,
Prentice Hill Inc., USA, 347-388.
McIntyre, T. M., Hazen, S. L., 2010, Lipid Oxidation and Cardiovascular Disease:
Introduction to a Review Series, Circulation Research, 107:1167-1169.
Mehanna, A. S., 2003, NSAIDs: Chemistry and Pharmacological Actions,
American Journal of Pharmaceutical Education, 67(2):1-5.
Mulja, M., dan Hanwar, D., 2003, Prinsip-Prinsip Cara Berlaboratorium yang
Baik (Good Laboratory Practice), Majalah Farmasi Airlangga, Vol. III,
No.2, 71-76.
Novartis, 2009, Cataflam®
(Diclofenac Potassium Immediate-Release Tablet),
www.pharma.us.novartis.com/product/pi/pdf/Cataflam.pdf, diakses
tanggal 2 September 2010.
Okada, N., Hirata, A., Murakami, Y., Shoji, M., Sakagami, H., and Fujisawa, S.,
2005, Induction of Cytotoxicity and Apoptosis and Inhibition of
Cyclooxygenase-2 Gene Expression by Eugenol-Related Compounds,
Pubmed Anticancer Research, 25(5):3263-9.
Padmadisastra, Y., Abdassah, M., and Wijanarko, P., 2007, Formulation of
Enteric Coated Tablets of Sodium Diclofenac, International Seminar on
Pharmaceutics, 1-6.
Pauli, A., 2006, Essential Oils, Review Science, 13:1-7.
Rang, H. P., Dale, M. M., and Ritter, J. M., 1999, Anti-inflammatory and
Immunosuppresant Drugs, in Pharmacology, 4th ed., Churchill
Livingstone, London, pp. 229-247.
Riswanto, F. D. O., 2011, Sintesis Asetil Eugenol dari Eugenol dan Anhidrida
Asam Asetat dengan Katalis Natrium Hidroksida, Skripsi, 9-11,
Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.
Rubin, M., Pan, P., and Volpe, F., 2001, Oral Composition Containing NSAIDs
and Essential Oils, United States Patent Application, New Jersey, pp.
478-599.
Sadeghian, H., Seyedi, S. M., Saberi, M. R., Arghiani, Z., and Riazi, M., 2007,
Design and Synthesis of Eugenol Derivatives as a Potent 15-
Lipoxygenase Inhibitors, Bioorganic and Medicinal Chemistry, 16:890-
901.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
44
Sakakibara, H., 2010, Anti-inflammatory and Bronchoprotective Roles of
Endogenous Prostaglandin E2, http://ai.jsaweb.jp/fulltext/048020103
/fig01.html, diakses tanggal 3 November 2010.
Shelden, B., and Brown, A., 2008, General Linear Model,
http://www.cst.cmich.edu/users/lee1c/spss/StaProcGLM.htm, diakses
tanggal 3 November 2010.
Srivastava, K. C., and Malhotra N., 1991, Acetyl Eugenol, a Component of Oil of
Cloves (Syzygium aromaticum L.) Inhibits Aggregation and Alters
Arachidonic Acid Metabolism in Human Blood Platelets, Pubmed
Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids, 42(1):73-81.
Umaru, Titilayo, Nwamba, Charles, Kolo, Ibrahim, et al., 2009, Antimicrobial
Activity of Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs with Respect to
Immunological Response: Diclofenac Sodium as a Case Study , African
Journal of Biotechnology, 8(25):7332-7339.
Vogel, H. G., 2002, Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays,
2nd ed., Springer-Verlag Berlin Heidelberg, Germany, pp. 702-703.
Wulandari, M. G. D., Friamita, R. D., dan Patramurti, C., 2006, Penetapan Kadar
Kafein Dalam Campuran Parasetamol, Salisilamida, dan Kafein secara
Spektrofotometri Derivatif, www.usd.ac.id/06/publ_dosen/far/devi.pdf,
diakses tanggal 25 November 2010.
Yano, S., Suzuki, Y., Yuzurihara, M., Kase, Y., Takeda, S., Watanabe, S., et al.,
2006, Antinociceptive Effect of Methyleugenol on Formalin-Induced
Hyperalgesia in Mice, European Journal of Pharmacology, 553(1-3):99-
103.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
45
Lampiran
Lampiran 1. Sertifikat kalibrasi vernier caliper merk Mitutoyo
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
46
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
47
Lampiran 2. Data beserta hasil uji presisi vernier caliper merk Mitutoyo
Kel tebal kaki
rata-rata SD CV rep. 1 rep. 2 rep. 3
I 0,282 0,284 0,28 0,282 0,002 0,007092
II 0,292 0,29 0,29 0,290667 0,001155 0,003973
III 0,286 0,286 0,286 0,286 0 0
, di mana X = rata-rata tebal kaki mencit yang diukur dengan jangka
sorong
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
48
Lampiran 3. Hasil Elusidasi Struktur Asetil Eugenol (Riswanto, 2011)
(a)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
49
(b)
(c)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
50
(c)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
51
(c)
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
52
(c)
(a) Spektra infra merah senyawa asetil eugenol
(b) Spektra resonansi magnetik inti senyawa asetil eugenol
(c) Spektra kromatografi gas dan spektrometri massa senyawa asetil eugenol
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
53
Lampiran 4. Foto asetil eugenol hasil sintesis di Laboratorium Kimia
Organik Universitas Sanata Dharma Yogyakarta
(a) (b)
(c) (d)
(d) Asetil eugenol sebelum diencerkan
(e) Asetil eugenol setelah diencerkan
(f) Virgin Coconut Oil merk HealthyCo®
(g) Larutan Cataflam® D-50 dalam aquades
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
54
Lampiran 5. Foto dokumentasi injeksi subplantar pada hewan uji
(a) (b)
(c) (c)
(a) Hewan uji sebelum diinjeksi subplantar dengan formalin 0,5%
(b) Hewan uji saat diinjeksi subplantar dengan formalin 0,5%
(c) Hewan uji setelah diinjeksi subplantar dengan formalin 0,5%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
55
Lampiran 6. Perhitungan dosis formalin 0,5% untuk injeksi subplantar
a. Pembuatan formalin 0,5%
Formalin 100% = formaldehide 37% (v/v) dalam aquades merk
Bratachem®, diperoleh dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi
Universitas Sanata Dharma Yogyakarta.
Pengenceran formalin
volume1 x konsentrasi1 = volume2 x konsentrasi2
volume1 x 100% = 100 ml x 0,5%
volume1 = = 0,5 ml
Jadi, diambil 0,5 ml formalin 100% kemudian diencerkan dengan aquades
di dalam labu ukur sampai volume 100 ml.
b. Perhitungan dosis formalin 0,5%
Formalin 0,5% untuk menginduksi inflamasi diberikan 0,025 ml tiap 20 g
BB mencit (Vogel, 2002).
Contoh perhitungan volume injeksi subplantar dengan formalin 0,5% pada
hewan uji:
BB mencit = 25 g
Volume injeksi subplantar dengan formalin =
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
56
Lampiran 7. Perhitungan dosis Cataflam® D-50 sebagai kontrol positif
a. Pembuatan larutan Cataflam® D-50
1 tablet Cataflam® D-50 digerus dan dilarutan dengan 100 ml aquades
sehingga diperoleh larutan Cataflam 0,05% atau 0,5 mg/ml.
b. Perhitungan dosis Cataflam® D-50
Dosis untuk manusia 50 kg = 50 mg
Dosis untuk manusia 70 kg =
Konversi dari manusia 70 kg ke mencit 20 g = 0,0026 (menurut tabel
konversi Laurence dan Bacharach, 1964).
Dosis untuk mencit 20 g = 0,0026 x 70 mg
= 0,182 mg
Dosis pada mencit = 9,1 x 10-3
mg/g BB mencit
= 9,1 mg/kg BB mencit
c. Contoh perhitungan pemberian larutan Cataflam® D-50 pada hewan
uji
BB mencit = 25 g = 0,025 kg
Dosis Cataflam® D-50 = 9,1 mg/kg BB x 0,025 kg = 0,23 mg
Volume pemberian larutan Cataflam® D-50 pada mencit
=
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
57
Lampiran 8. Perhitungan dosis Virgin Coconut Oil (VCO) sebagai kontrol
negatif
a. Perhitungan dosis VCO
Dosis VCO untuk manusia 50 kg = 15 ml
Dosis untuk manusia 70 kg =
Konversi dari manusia 70 kg ke mencit 20 g = 0,0026 (menurut tabel
konversi Laurence dan Bacharach, 1964).
Dosis untuk mencit 20 g = 0,0026 x 21 ml
= 0,0546 ml
Dosis pada mencit = 2,7 x 10-3
ml/g BB mencit
= 2,7 ml/kg BB mencit
b. Contoh perhitungan pemberian VCO pada hewan uji
BB mencit = 25 g = 0,025 kg
Volume pemberian VCO = 2,7 ml/kg BB x 0,025 kg
= 0,068 ml
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
58
Lampiran 9. Perhitungan dosis asetil eugenol
a. Pembuatan larutan asetil eugenol 6,25%
Konsentrasi tertinggi asetil eugenol dalam VCO yang dapat diberikan
kepada mencit secara oral adalah 6,25% (v/v).
Pengenceran asetil eugenol:
volume1 x konsentrasi1 = volume2 x konsentrasi2
volume1 x 100% = 8 ml x 6,25%
volume1 = = 0,5 ml
Jadi, diambil 0,5 ml asetil eugenol 100% kemudian diencerkan dengan
aquades di dalam tabung ukur sampai volume 8 ml.
b. Perhitungan dosis asetil eugenol secara oral
Range bobot mencit yang digunakan dalam penelitian = 20-30 gram.
Digunakan bobot 30 gram dan volume pemberian setengah dari volume
maksimal pemberian obat secara oral pada mencit untuk mencari dosis
asetil eugenol secara oral pada mencit.
Perhitungan dosis asetil eugenol:
dosis x berat badan = konsentrasi x volume pemberian
dosis x 30 g = 0,0625 ml/ml x 0,5 ml
dosis asetil eugenol = = 1,042 x 10-3
ml/g BB mencit
= 1,042 ml/kg BB mencit, ditetapkan sebagai dosis
III
dosis II = 0,521 ml/kg BB mencit
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
59
dosis I = 0,260 ml/kg BB mencit
Rumus umum volume pemberian =
Contoh perhitungan volume pemberian pada hewan uji dengan bobot 25 g:
dosis I (0,260 ml/kg BB mencit)
= 0,10 ml
dosis II (0,521 ml/kg BB mencit)
= 0,21 ml
dosis III (1,042 ml/kg BB mencit)
= 0,42 ml
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
60
Lampiran 10. Tabel perhitungan AUC masing-masing kelompok perlakuan asetil eugenol beserta kontrol
Kel t0-1 t1-2 t2-3 t3-4 t4-5 t5-6 AUC0-1 AUC1-2 AUC2-3 AUC3-4 AUC4-5 AUC5-6 TOTAL
AUC
Cata-
flam®
D-50
0,05 0,05 0,05 0,06 0,05 0,06 0,025 0,05 0,05 0,055 0,055 0,055 0,29
0,06 0,07 0,06 0,04 0,05 0,04 0,03 0,065 0,065 0,05 0,045 0,045 0,3
0,07 0,08 0,08 0,09 0,05 0,06 0,035 0,075 0,08 0,085 0,07 0,055 0,4
0,06 0,05 0,04 0,05 0,06 0,05 0,03 0,055 0,045 0,045 0,055 0,055 0,285
0,04 0,06 0,06 0,05 0,05 0,06 0,02 0,05 0,06 0,055 0,05 0,055 0,29
VCO 0,1 0,11 0,14 0,16 0,12 0,08 0,05 0,105 0,125 0,15 0,14 0,1 0,67
0,11 0,11 0,13 0,14 0,12 0,12 0,055 0,11 0,12 0,135 0,13 0,12 0,67
0,16 0,16 0,13 0,19 0,19 0,18 0,08 0,16 0,145 0,16 0,19 0,185 0,92
0,09 0,17 0,15 0,15 0,15 0,16 0,045 0,13 0,16 0,15 0,15 0,155 0,79
0,15 0,19 0,14 0,11 0,15 0,14 0,075 0,17 0,165 0,125 0,13 0,145 0,81
Asetil
eugenol
dosis
0,260
ml/kg
BB
0,05 0,05 0,09 0,11 0,08 0,09 0,025 0,05 0,07 0,1 0,095 0,085 0,425
0,03 0,06 0,09 0,11 0,05 0,05 0,015 0,045 0,075 0,1 0,08 0,05 0,365
0,07 0,08 0,11 0,11 0,09 0,05 0,035 0,075 0,095 0,11 0,1 0,07 0,485
0,05 0,07 0,12 0,1 0,12 0,09 0,025 0,06 0,095 0,11 0,11 0,105 0,505
0,08 0,08 0,1 0,13 0,12 0,1 0,04 0,08 0,09 0,115 0,125 0,11 0,56
Asetil
eugenol
dosis
0,521
ml/kg
BB
0,05 0,07 0,04 0,04 0,04 0,06 0,025 0,06 0,055 0,04 0,04 0,05 0,27
0,05 0,06 0,09 0,09 0,08 0,08 0,025 0,055 0,075 0,09 0,085 0,08 0,41
0,08 0,08 0,09 0,06 0,08 0,07 0,04 0,08 0,085 0,075 0,07 0,075 0,425
0,08 0,08 0,08 0,06 0,06 0,05 0,04 0,08 0,08 0,07 0,06 0,055 0,385
0,06 0,07 0,06 0,04 0,06 0,07 0,03 0,065 0,065 0,05 0,05 0,065 0,325
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
61
Asetil
eugenol
dosis
1,042
ml/kg
BB
0,05 0,04 0,04 0,03 0,03 0,02 0,025 0,045 0,04 0,035 0,03 0,025 0,2
0,06 0,07 0,06 0,03 0,06 0,06 0,03 0,065 0,065 0,045 0,045 0,06 0,31
0,01 0,01 0,02 0,01 0 0 0,005 0,01 0,015 0,015 0,005 0 0,05
0,03 0,05 0,03 0,04 0,04 0,03 0,015 0,04 0,04 0,035 0,04 0,035 0,205
0,07 0,08 0,09 0,08 0,05 0,06 0,035 0,075 0,085 0,085 0,065 0,055 0,4
AUC x-y = x selisih waktu
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
62
Lampiran 11. Tabel perhitungan % penghambatan inflamasi kelompok perlakuan asetil eugenol secara oral beserta kontrol
positif kalium diklofenak (Cataflam® D-50)
Mencit Kelompok
VCO Cataflam® D-50 Asetil eugenol dosis
0,260 ml/kg BB
Asetil eugenol dosis
0,521 ml/kg BB
Asetil eugenol dosis
1,042 ml/kg BB
AUC
VCO
AUC %
Penghambatan
Inflamasi
AUC %
Penghambatan
Inflamasi
AUC %
Penghambatan
Inflamasi
AUC %
Penghambatan
Inflamasi
1
X =
0,772
0,29 62,43523 0,425 44,94819 0,27 65,02591 0,2 74,09326
2 0,3 61,1399 0,365 52,72021 0,41 46,89119 0,31 59,84456
3 0,4 48,18653 0,485 37,17617 0,425 44,94819 0,05 93,52332
4 0,285 63,0829 0,505 34,58549 0,385 50,12953 0,205 73,4456
5 0,29 62,43523 0,56 27,46114 0,325 57,90155 0,4 48,18653
Keterangan:
X = rata-rata AUC kontrol negatif
Contoh cara perhitungan % penghambatan inflamasi:
Kelompok asetil eugenol dosis 0,260 ml/kg BB no.1
= 44,95%
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
63
Lampiran 12. Hasil ANOVA pola satu arah dengan taraf kepercayaan 95%
% penghambatan inflamasi dengan pemberian asetil eugenol
dosis 0,260 ml/kg BB; 0,521 ml/kg BB ; dan 1,042 ml/kg BB
beserta kontrol
NPar Tests
Descriptive Statistics
N Mean Std. Deviation Minimum Maximum
PersenPenghambat
anInflamasi
25 44,3264 26,95712 -19,17 93,52
One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test
PersenPenghamb
atanInflamasi
N 25
Normal Parametersa,b
Mean 44,3264
Std. Deviation 26,95712
Most Extreme Differences Absolute ,189
Positive ,101
Negative -,189
Kolmogorov-Smirnov Z ,946
Asymp. Sig. (2-tailed) ,332
a. Test distribution is Normal.
b. Calculated from data.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
64
Oneway
Descriptives
PersenPenghambatanInflamasi
N Mean Std. Deviation Std. Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound
Cataflam 5 59,4560 6,33921 2,83498 51,5848 67,3271 48,19 63,08
VCO 5 ,0000 13,65951 6,10872 -16,9605 16,9605 -19,17 13,21
Asetil260,5 5 39,3782 9,73228 4,35241 27,2940 51,4625 27,46 52,72
Asetil521 5 52,9793 8,35216 3,73520 42,6087 63,3499 44,95 65,03
Asetil1042 5 69,8187 17,03503 7,61830 48,6669 90,9704 48,19 93,52
Total 25 44,3264 26,95712 5,39142 33,1991 55,4538 -19,17 93,52
ANOVA
PersenPenghambatanInflamasi
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups 14714,724 4 3678,681 26,992 ,000
Within Groups 2725,744 20 136,287
Total 17440,468 24
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
65
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
PersenPenghambatanInflamasi
Scheffe
(I) VAR00001 (J) VAR00001 Mean Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
dime
nsion
2
Cataflam
dimension3
VCO 59,45596* 7,38342 ,000 34,4564 84,4555
Asetil260,5 20,07772 7,38342 ,159 -4,9218 45,0772
Asetil521 6,47668 7,38342 ,940 -18,5228 31,4762
Asetil1042 -10,36269 7,38342 ,741 -35,3622 14,6368
VCO
dimension3
Cataflam -59,45596* 7,38342 ,000 -84,4555 -34,4564
Asetil260,5 -39,37824* 7,38342 ,001 -64,3778 -14,3787
Asetil521 -52,97927* 7,38342 ,000 -77,9788 -27,9797
Asetil1042 -69,81865* 7,38342 ,000 -94,8182 -44,8191
Asetil260,5
dimension3
Cataflam -20,07772 7,38342 ,159 -45,0772 4,9218
VCO 39,37824* 7,38342 ,001 14,3787 64,3778
Asetil521 -13,60104 7,38342 ,511 -38,6006 11,3985
Asetil1042 -30,44041* 7,38342 ,012 -55,4399 -5,4409
Asetil521
dimension3
Cataflam -6,47668 7,38342 ,940 -31,4762 18,5228
VCO 52,97927* 7,38342 ,000 27,9797 77,9788
Asetil260,5 13,60104 7,38342 ,511 -11,3985 38,6006
Asetil1042 -16,83938 7,38342 ,304 -41,8389 8,1601
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
66
Asetil1042
dimension3
Cataflam 10,36269 7,38342 ,741 -14,6368 35,3622
VCO 69,81865* 7,38342 ,000 44,8191 94,8182
Asetil260,5 30,44041* 7,38342 ,012 5,4409 55,4399
Asetil521 16,83938 7,38342 ,304 -8,1601 41,8389
*. The mean difference is significant at the 0.05 level.
Homogeneous Subsets
PersenPenghambatanInflamasi
Scheffea
VAR00001
N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3
VCO 5 ,0000
Asetil260,5 5 39,3782
Asetil521 5 52,9793 52,9793
Cataflam 5 59,4560 59,4560
Asetil1042 5 69,8187
Sig. 1,000 ,159 ,304
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
67
Lampiran 13. Hasil General Linear Model (GLM) repeated measures dengan taraf kepercayaan 95% AUC edema kaki mencit
dengan pemberian asetil eugenol dosis 0,260 ml/kg BB; 0,521 ml/kg BB ; dan 1,042 ml/kg BB beserta kontrol
General Linear Model
Mauchly's Test of Sphericityb
Measure:MEASURE_1
Within Subjects Effect
Mauchly's W
Approx. Chi-
Square df Sig.
Epsilona
Greenhouse-
Geisser Huynh-Feldt Lower-bound
dimension1
factor1 ,300 21,799 14 ,085 ,729 1,000 ,200
Tests the null hypothesis that the error covariance matrix of the orthonormalized transformed dependent variables is proportional to an
identity matrix.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
68
Descriptive Statistics
VAR00001 Mean Std. Deviation N
t1 Cataflam ,0560 ,01140 5
VCO ,1220 ,03114 5
Asetil260,5 ,0560 ,01949 5
Asetil521 ,0640 ,01517 5
Asetil1042 ,0440 ,02408 5
Total ,0684 ,03424 25
t2 Cataflam ,0620 ,01304 5
VCO ,1480 ,03633 5
Asetil260,5 ,0680 ,01304 5
Asetil521 ,0720 ,00837 5
Asetil1042 ,0500 ,02739 5
Total ,0800 ,04093 25
t3 Cataflam ,0580 ,01483 5
VCO ,1380 ,00837 5
Asetil260,5 ,1020 ,01304 5
Asetil521 ,0720 ,02168 5
Asetil1042 ,0480 ,02775 5
Total ,0836 ,03740 25
t4 Cataflam ,0580 ,01924 5
VCO ,1500 ,02915 5
Asetil260,5 ,1120 ,01095 5
Asetil521 ,0580 ,02049 5
Asetil1042 ,0380 ,02588 5
Total ,0832 ,04688 25
t5 Cataflam ,0520 ,00447 5
VCO ,1460 ,02881 5
Asetil260,5 ,0920 ,02950 5
Asetil521 ,0640 ,01673 5
Asetil1042 ,0360 ,02302 5
Total ,0780 ,04444 25
t6 Cataflam ,0540 ,00894 5
VCO ,1360 ,03847 5
Asetil260,5 ,0760 ,02408 5
Asetil521 ,0660 ,01140 5
Asetil1042 ,0340 ,02608 5
Total ,0732 ,04151 25
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
69
Multivariate Testsc
Effect Value F Hypothesis df Error df Sig.
factor1 Pillai's Trace ,580 4,410a 5,000 16,000 ,010
Wilks' Lambda ,420 4,410a 5,000 16,000 ,010
Hotelling's Trace 1,378 4,410a 5,000 16,000 ,010
Roy's Largest Root 1,378 4,410a 5,000 16,000 ,010
factor1 * VAR00001 Pillai's Trace 1,154 1,540 20,000 76,000 ,092
Wilks' Lambda ,180 1,831 20,000 54,016 ,040
Hotelling's Trace 2,845 2,062 20,000 58,000 ,017
Roy's Largest Root 2,124 8,072b 5,000 19,000 ,000
a. Exact statistic
b. The statistic is an upper bound on F that yields a lower bound on the significance level.
c. Design: Intercept + VAR00001
Within Subjects Design: factor1
Tests of Between-Subjects Effects
Measure:MEASURE_1
Transformed Variable:Average
Source Type III Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
Intercept ,906 1 ,906 546,995 ,000
VAR00001 ,174 4 ,044 26,266 ,000
Error ,033 20 ,002
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
70
Tests of Within-Subjects Effects
Measure:MEASURE_1
Source Type III Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
factor1 Sphericity Assumed ,004 5 ,001 3,634 ,005
Greenhouse-Geisser ,004 3,645 ,001 3,634 ,011
Huynh-Feldt ,004 5,000 ,001 3,634 ,005
Lower-bound ,004 1,000 ,004 3,634 ,071
factor1 * VAR00001 Sphericity Assumed ,012 20 ,001 2,418 ,002
Greenhouse-Geisser ,012 14,579 ,001 2,418 ,007
Huynh-Feldt ,012 20,000 ,001 2,418 ,002
Lower-bound ,012 4,000 ,003 2,418 ,082
Error(factor1) Sphericity Assumed ,024 100 ,000
Greenhouse-Geisser ,024 72,895 ,000
Huynh-Feldt ,024 100,000 ,000
Lower-bound ,024 20,000 ,001
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
71
Tests of Within-Subjects Contrasts
Measure:MEASURE_1
Source factor1 Type III Sum of
Squares df Mean Square F Sig.
factor1 Linear ,000 1 ,000 ,343 ,565
Quadratic ,004 1 ,004 14,038 ,001
Cubic ,000 1 ,000 ,988 ,332
Order 4 1,286E-6 1 1,286E-6 ,005 ,942
Order 5 1,157E-5 1 1,157E-5 ,080 ,780
factor1 * VAR00001 Linear ,004 4 ,001 2,776 ,055
Quadratic ,005 4 ,001 4,334 ,011
Cubic ,001 4 ,000 ,988 ,437
Order 4 ,002 4 ,000 1,684 ,193
Order 5 ,001 4 ,000 1,159 ,358
Error(factor1) Linear ,006 20 ,000
Quadratic ,006 20 ,000
Cubic ,004 20 ,000
Order 4 ,005 20 ,000
Order 5 ,003 20 ,000
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
72
Post Hoc Tests
Multiple Comparisons
MEASURE_1
Scheffe
(I) VAR00001 (J) VAR00001 Mean Difference
(I-J) Std. Error Sig.
95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
dime
nsion
2
Cataflam
dimension3
VCO -,0833* ,01051 ,000 -,1189 -,0477
Asetil260,5 -,0277 ,01051 ,182 -,0633 ,0079
Asetil521 -,0093 ,01051 ,937 -,0449 ,0263
Asetil1042 ,0150 ,01051 ,730 -,0206 ,0506
VCO
dimension3
Cataflam ,0833* ,01051 ,000 ,0477 ,1189
Asetil260,5 ,0557* ,01051 ,001 ,0201 ,0913
Asetil521 ,0740* ,01051 ,000 ,0384 ,1096
Asetil1042 ,0983* ,01051 ,000 ,0627 ,1339
Asetil260,5
dimension3
Cataflam ,0277 ,01051 ,182 -,0079 ,0633
VCO -,0557* ,01051 ,001 -,0913 -,0201
Asetil521 ,0183 ,01051 ,563 -,0173 ,0539
Asetil1042 ,0427* ,01051 ,014 ,0071 ,0783
Asetil521
dimension3
Cataflam ,0093 ,01051 ,937 -,0263 ,0449
VCO -,0740* ,01051 ,000 -,1096 -,0384
Asetil260,5 -,0183 ,01051 ,563 -,0539 ,0173
Asetil1042 ,0243 ,01051 ,290 -,0113 ,0599
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
73
Asetil1042
dimension3
Cataflam -,0150 ,01051 ,730 -,0506 ,0206
VCO -,0983* ,01051 ,000 -,1339 -,0627
Asetil260,5 -,0427* ,01051 ,014 -,0783 -,0071
Asetil521 -,0243 ,01051 ,290 -,0599 ,0113
Based on observed means.
The error term is Mean Square(Error) = ,000.
*. The mean difference is significant at the ,05 level.
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
74
Homogeneous Subsets
MEASURE_1
Scheffea,b,c
VAR00001
N
Subset
1 2 3
Asetil1042 5 ,0417
Cataflam 5 ,0567 ,0567
Asetil521 5 ,0660 ,0660
Asetil260,5 5 ,0843
VCO 5 ,1400
Sig. ,290 ,182 1,000
Means for groups in homogeneous subsets are displayed.
Based on observed means.
The error term is Mean Square(Error) = ,000.
a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 5,000.
b. The group sizes are unequal. The harmonic mean of the group sizes
is used. Type I error levels are not guaranteed.
c. Alpha = ,05.
Profile Plots
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
75
Lampiran 14. Tabel r
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
76
Lampiran 15. Tabel konversi perhitungan dosis Laurence and Bacharach,
1964
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
77
BIOGRAFI PENULIS
Yosephine Dian Hendrawati, penulis skripsi yang
berjudul “EFEK ANTI INFLAMASI ASETIL
EUGENOL SECARA ORAL PADA EDEMA KAKI
MENCIT GALUR SWISS YANG DIINDUKSI
FORMALIN”, lahir di Bandung pada tanggal 28 Maret
1989 dari pasangan Bapak Yohanes Cahyadi dan Ibu
Cesilia Widhi Prih Yunianti, dan memiliki saudara laki-
laki bernama Albertus Gatot Hendrasto. Riwayat pendidikan penulis dimulai dari
TK-SD Pandu Bandung, SLTP Waringin Bandung, SMA Negeri 8 Yogyakarta,
dan pada tahun 2007 melanjutkan kuliah di Fakultas Farmasi Universitas Sanata
Dharma Yogyakarta hingga selesai pada tahun 2011. Selama kuliah penulis
pernah menjadi asisten praktikum Farmasetika Dasar (2010) dan bekerja sebagai
guru les privat bahasa Inggris untuk anak Sekolah Dasar (2008-sekarang). Prestasi
penulis dalam bidang akademik antara lain menjadi peserta Olimpiade Farmasi
Indonesia (2010), menjadi peserta Kompetisi Konseling Pasien di Universitas
Gadjah Mada Yogyakarta (2010), menjadi juara 2 dalam Patient Counseling
Event di Institut Teknologi Bandung (2010), serta mengikuti beberapa seminar
nasional mengenai kerasionalan pengobatan dan konseling pasien (2010). Dalam
bidang non-akademik, penulis pernah turut serta dalam kepanitiaan Inisiasi Sanata
Dharma (Insadha) (2009), serta mengikuti Pesta Paduan Suara Gerejawi
(Pesparawi) tingkat nasional (2008).
PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJIPLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI
Recommended