View
224
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
TINGKAT KONSENTRASI PROTEIN
PADA PLATELET RICH PLASMA-1
YANG DIINDUKSI KALSIUM KLORIDA
Laporan penelitian ini ditulis sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar
SARJANA KEDOKTERAN
Oleh:
SARAH ATTAUHIDAH
NIM: 1112103000065
PROGRAM STUDI PENDIDIKAN DOKTER
FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU KESEHATAN
UNIVERSITAS ISLAM NEGERI
SYARIF HIDAYATULLAH JAKARTA
1436 H/2015 M
ii
iii
iv
v
KATA PENGANTAR
Segala puji bagi Allah SWT atas nikmat yang telah diberikan, baik nikmat
iman, Islam, dan nikmat sehat, penulis mampu menyelesaikan laporan penelitian
ini dengan baik. Shalawat serta salam penulis ucapkan kepada Baginda Rasulullah
SAW yang selalu menjadi tauladan bagi umat-Nya. Penulis menyadari bahwa
tanpa bimbingan dan bantuan dari berbagai pihak, maka penelitian ini tidak akan
pernah selesai. Oleh sebab itu, penulis mengucapkan terima kasih kepada:
1. Dr. H. Arif Sumantri, S.KM, M. Kes selaku Dekan FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta.
2. dr. Witri Ardini, M. Gizi, Sp. GK selaku Ketua Program Studi Pendidikan
Dokter FKIK UIN Jakarta.
3. dr. Achmad Zaki, M. Epid, Sp. OT selaku pembimbing 1. Terima kasih atas
waktu, tenaga, pikiran, dan semangatnya untuk membimbing penulis dari
nol hingga akhirnya penelitian ini dapat diselesaikan.
4. dr. Ahmad Azwar Habibi, M. Biomed selaku pembimbing 2. Terima kasih
sudah bersedia meluangkan waktu dan membimbing penulis sehingga dapat
menyelesaikan penelitian ini.
5. dr. Nouval Shahab, Sp.U, Ph.D, FICS, FACS selaku penanggung jawab
modul riset PSPD angkatan 2012, terima kasih atas bimbingannya pada
kami semua dalam menjalani penelitian ini.
6. Bu Nurlaely, M. Biomed dan Mbak Ai yang telah membimbing penulis
selama penelitian di laboratorium. Terima kasih telah sabar dan penuh
semangat membimbing penulis dari awal hingga selesai.
7. Rasa hormat dan terima kasih yang tak terhingga kepada kedua orangtua
penulis dan keluarga, Dr. Abdurrahman, SE, MM dan Faridah, S. Pd yang
selalu memberikan semangat, nasihat, dan doa restu selama penulis
menjalankan pendidikan.
8. Teman-teman sejawat seperjuangan kelompok riset, Alfa, Mohammed,
Khoiron, dan terutama Muthiah yang selalu memberi semangat untuk terus
berkomitmen pada penelitian ini.
vi
9. Keenam responden yang bersedia memberikan darahnya untuk sampel
penelitian. Semoga kebaikan kalian dibalas oleh Allah SWT dengan balasan
yang berlipat ganda.
10. Teman-teman Ikatan Senat Mahasiswa Kedokteran Indonesia (ISMKI)
Wilayah 2 yang sangat mengerti agenda penulis dalam penyusunan laporan
penelitian, serta tak hentinya semangat yang terus diberikan untuk penulis.
11. Teman-teman sejawat PSPD 2012, khususnya para wanita di Puri Laras II,
terima kasih kebersamaan, semangat, dan motivasinya selama ini.
Penulis menyadari laporan penelitian ini masih jauh dari bentuk yang
sempurna. Segala kritik dan saran yang membangun dari berbagai pihak sangat
penulis harapkan. Demikian laporan ini penulis susun, semoga bermanfaat untuk
ilmu pengetahuan, agama, dunia, dan setelahnya nanti. Aamiin.
Jakarta, 28 Mei 2015
vii
ABSTRACT
Sarah Attauhidah. Medical Education Study Program. Level of Protein
Concentration in Platelet Rich Plasma-1 Induced Calcium Chloride. 2015
Platelet rich plasma (PRP) is nowadays increasingly developed to produce
optimal healing therapy in various medical fields. The purpose of this study was
to determine the protocol manufacture of PRP-1 induced calcium chloride
(CaCl2), determine the effect of calcium chloride (CaCl2) in PRP-1, and to know
the changes of protein concentration in PRP-1 and it’s control. The sample in this
study amounted to 6 healthy people who are not currently taking medications
within a certain period, and did not have a history of infections in the last 1
month. The average value of the protein concentration in PRP-1 induced calcium
chloride (CaCl2) increased (1.17915) compared with the average of it’s control
(0.46549).
Keywords: platelet rich plasma-1, activation of calcium chloride (CaCl2).
ABSTRAK
Sarah Attauhidah. Program Studi Pendidikan Dokter. Tingkat Konsentrasi
Protein Pada Platelet Rich Plasma-1 yang Diinduksi Kalsium Klorida. 2015
Dewasa ini, platelet rich plasma semakin dikembangkan untuk menghasilkan
terapi penyembuhan yang optimal dalam berbagai bidang medis. Tujuan
penelitian ini adalah mengetahui protokol pembuatan PRP-1 yang diinduksi
kalsium klorida (CaCl2), mengetahui pengaruh kalsium klorida (CaCl2) tersebut
pada PRP-1, serta mengetahui perubahan konsentrasi protein pada PRP-1
terhadap kontrol negatifnya. Sampel dalam penelitian ini berjumlah 6 orang sehat
yang tidak sedang mengkonsumsi obat-obatan dalam jangka waktu tertentu, dan
tidak memiliki riwayat infeksi dalam 1 bulan terakhir. Nilai rerata konsentrasi
protein pada PRP-1 yang diinduksi kalsium klorida (CaCl2) mengalami
peningkatan (1,17915) bila dibandingkan dengan rerata konsentrasi protein
kontrolnya (0,46549).
Kata kunci: platelet rich plasma-1, aktivasi kalsium klorida (CaCl2).
viii
DAFTAR ISI
LEMBAR JUDUL ................................................................................................. i
LEMBAR PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................ ii
LEMBAR PERSETUJUAN .............................................................................. iii
LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................... iv
KATA PENGANTAR ........................................................................................... v
ABSTRAK ......................................................................................................... vii
DAFTAR ISI ..................................................................................................... viii
DAFTAR TABEL ................................................................................................ x
DAFTAR GRAFIK ............................................................................................ xi
DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xiii
DAFTAR SINGKATAN .................................................................................. xiv
BAB 1 PENDAHULUAN .................................................................................... 1
1.1 Latar Belakang ..................................................................................... 1
1.2 Rumusan Masalah ................................................................................ 2
1.3 Hipotesis ............................................................................................... 2
1.4 Tujuan .................................................................................................. 3
1.4.1 Tujuan Umum .................................................................... 3
1.4.2 Tujuan Khusus ................................................................... 3
1.5 Manfaat ................................................................................................ 3
1.5.1 Bagi Peneliti ....................................................................... 3
1.5.2 Bagi Institusi ...................................................................... 3
1.5.3 Bagi Masyarakat ................................................................. 4
ix
BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ............................................................................ 5
2.1 Landasan Teori ..................................................................................... 5
2.1.1 Platelet ................................................................................ 5
2.1.2 Platelet Rich Plasma ........................................................... 8
2.1.3 Kalsium Klorida (CaCl2) .................................................. 11
2.1.4 Absorbansi dan Konsentrasi Protein ................................. 11
2.2 Kerangka Teori .................................................................................. 15
2.3 Kerangka Konsep .............................................................................. 16
2.4 Definisi Operasional .......................................................................... 17
BAB 3 METODE PENELITIAN ....................................................................... 19
3.1 Definisi Penelitian ............................................................................. 19
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian ........................................................... 19
3.3 Alat dan Bahan Penelitian ................................................................. 19
3.4 Kriteria Inklusi dan Eksklusi ............................................................. 20
3.5 Besar dan Cara Pengambilan Responden .......................................... 20
3.6 Alur Penelitian ................................................................................... 22
3.7 Cara Kerja Penelitian ........................................................................ 23
BAB 4 HASIL DAN PEMBAHASAN ............................................................... 25
4.1 Karakteristik Responden ................................................................... 25
4.2 Penentuan Kadar Protein ................................................................... 26
4.3 Penentuan Absorbansi Larutan Standar Protein ................................ 26
4.4 Penentuan Persamaan Garis Regresi Linear Standar ........................ 26
4.5 Penentuan Absorbansi Larutan Sampel ............................................. 28
4.6 Penentuan Konsentrasi Sampel ......................................................... 28
BAB 5 KESIMPULAN DAN SARAN ............................................................... 33
5.1 Kesimpulan ......................................................................................... 33
5.2 Saran .................................................................................................... 33
x
DAFTAR TABEL
Tabel 2.1 Variasi hasil relative centrifugal force pada whole blood cells ........... 9
Tabel 2.2 Variasi hasil pengaruh suhu pada sentrifugasi pertama PRP-1 ............ 9
Tabel 4.1 Data responden sampel....................................................................... 25
Tabel 4.2 Absorbansi larutan standar ................................................................. 26
Tabel 4.3 Absorbansi larutan sampel ................................................................. 28
Tabel 4.4 Konsentrasi protein larutan sampel .................................................... 29
xi
DAFTAR GRAFIK
Grafik 4.1 Perbandingan PRP-2 yang teraktivasi dengan konsentrasi growth
factor di dalamnya .............................................................................. 30
Grafik 4.2 Perbandingan konsentrasi protein pada kedua kontrol ....................... 31
xii
DAFTAR GAMBAR
Gambar 2.1 Ultrastruktur trombosit .................................................................... 6
Gambar 2.2 Proses hemostasis vessel injury ....................................................... 7
Gambar 2.3 Lapisan whole blood yang telah disentrifugasi ............................. 10
Gambar 2.4 Prinsip dasar spektrofotometri ....................................................... 12
Gambar 2.5 Transmitans spektrofotometer ....................................................... 13
Gambar 4.2 Kurva standar protein .................................................................... 27
xiii
DAFTAR LAMPIRAN
Lampiran 1 Lembar informed consent .............................................................. 37
Lampiran 2 Protokol pembuatan Platelet Rich Plasma-1 yang Diinduksi
Kalsium Klorida ............................................................................. 38
Lampiran 3 Surat permohonan ethical appearance penelitian ......................... 39
Lampiran 4 Dokumentasi penelitian ................................................................. 40
Lampiran 4 Daftar riwayat hidup peneliti ......................................................... 43
xiv
DAFTAR SINGKATAN
PRP Platelet rich plasma
PPP Platelet poor plasma
GP Glikoprotein
ACD Anticoagulant Citrate Dextrose
BSA Bovine Serum Albumine
WBC Whole blood cell
RCF Relative Centrifugal Force
1
BAB I
PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang
Dewasa ini, platelet rich plasma (PRP) telah digunakan secara luas untuk
tata laksana klinis di berbagai cabang kedokteran, seperti ortopedi, oftalmologi,
dan terapi penyembuhan lainnya karena ditemukan adanya peningkatan fungsi
regenerasi jaringan. Namun, ada beberapa hal mengenai studi ini yang masih
meragukan dikarenakan perbedaan dari persiapan PRP yang digunakan. Hal ini
menimbulkan perbedaan respon yang tidak bisa disamakan1.
Platelet atau yang biasa disebut trombosit ialah fragmen sel darah terkecil
maupun teringan yang memiliki fungsi penting dalam recovery cells. Aktivasi
platelet terjadi dimulai dari cedera atau rusaknya pembuluh darah yang akan
mengaktivasi enzim proteolitik protrombin menjadi trombin dan fibrinogen
(sebagai platelet glue) menjadi fibrin. Hasilnya akan terjadi penguatan kembali
ikatan-ikatan fibrin untuk memperbaiki kerusakan2.
Platelet rich plasma (PRP) pertama kali ditemukan oleh Ferrari M pada
tahun 1987. Sejak saat itu, PRP berkembang sebagai sesuatu yang aman dan
merupakan alternatif alami dalam pengobatan. Platelet rich plasma dipromosikan
sebagai sebuah prosedur terapi yang organik dan memungkinkan dalam proses
penyembuhan karena natural growth factor yang ada di PRP itu sendiri. Beberapa
tahun setelahnya, PRP mulai diteliti lebih dalam. Sebuah studi mengatakan jika
platelet mengandung faktor pertumbuhan yang berlimpah dan sitokin yang dapat
mempengaruhi proses cedera, inflamasi, infeksi, osteogenesis, dan penyembuhan
jaringan lunak. Penelitian terakhir juga memperlihatkan bahwa platelet
mengeluarkan beberapa protein bioaktif yang bertanggungjawab untuk menarik
makrofag, mesenkimal stem sel, dan osteoblast. Fungsinya tidak hanya
menghentikan proses degenerasi dan nekrotik suatu jaringan, akan tetapi juga
mempertinggi kemungkinan jaringan beregenerasi melalui proses penyembuhan3.
2
Platelet rich plasma mengandung bermacam-macam sitokin, seperti
interleukin, tumor necrosis factor (TNF)α, interferon (IFN)g, anti-inflammatory
cytokines, chemokines (eotaxin, protein 10, monocyte chemoattractant protein 1,
dan growth factors), serta komponen lainnya yang keberadaannya dapat
dipresentasikan dalam konsentrasi protein4.
Di samping fungsi-fungsi yang sudah dibahas di atas, platelet-derived
products dapat digunakan dengan atau tanpa aktivasi platelet sebelumnya.
Beberapa penelitian menggunakan berbagai metode dalam mempersiapkan PRP,
dari cara konvensional sentrifugasi sampai dengan commercial system, yaitu
dengan menggunakan kolagen, kalsium, dan/atau trombin5. Menurut hasil
penelitian Amable et al (2013), aktivasi PRP-2 menggunakan CaCl2 akan
mengalami peningkatan jika dibandingkan dengan aktivasi PRP-2 dengan
trombin. Hal tersebut dapat dilihat berdasarkan kadar growth factor yang
meningkat1. Namun sampai saat ini belum ada yang menggali lebih dalam apakah
efektivitas kalsium klorida pada PRP-1 lebih baik dibandingkan PRP-1 tanpa
aktivasi, dengan melihat konsentrasi protein di dalamnya.
1.2 Rumusan Masalah
Berdasarkan latar belakang di atas, bagaimana pengaruh induksi kalsium
klorida (CaCl2) terhadap tingkat konsentrasi protein pada Platelet Rich Plasma-1
(PRP-1)?
1.3 Hipotesis
Berdasarkan pertanyaan dari rumusan masalah mengenai pengaruh induksi
kalsium klorida (CaCl2) terhadap tingkat konsentrasi Platelet Rich Plasma-1
(PRP-1), maka terdapat peningkatan konsentrasi protein pada PRP-1 yang
diinduksi oleh kalsium klorida.
3
1.4 Tujuan
1.4.1 Tujuan Umum
Mengetahui pengaruh kalsium klorida (CaCl2) yang diinduksikan pada
Platelet Rich Plasma-1 (PRP-1).
1.4.2 Tujuan Khusus
- Mengetahui adanya perbedaan konsentrasi protein pada Platelet Rich
Plasma-1 (PRP-1) setelah diinduksi oleh kalsium klorida (CaCl2) dan kontrol
negatifnya.
- Mengetahui protokol pembuatan Platelet Rich Plasma (PRP-1) yang
diinduksi kalsium klorida (CaCl2).
1.5 Manfaat Penelitian
1.5.1 Bagi Peneliti
1. Mendapatkan ilmu dan pengalaman dalam hal meneliti di bidang
biomedik.
2. Sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Kedokteran
di Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan Universitas Islam Negeri
Syarif Hidayatullah Jakarta.
1.5.2 Bagi Institusi
1. Mendapatkan referensi hasil penelitian dari pengaruh induksi kalsium
klorida pada konsentrasi protein yang ada di PRP-1.
2. Referensi penelitian di Fakultas Kedokteran dan Ilmu Kesehatan
Universitas Islam Negeri Syarif Hidayatullah Jakarta bertambah.
4
3. Hasil dari penelitian tersebut dapat digunakan peneliti lain untuk
melanjutkan penelitian.
1.5.3 Bagi Masyarakat
1. Memberikan kontribusi dalam pengembangan ilmu kedokteran yang
dapat diterapkan untuk terapi penyembuhan yang lebih optimal pada
pasien di masa yang akan datang.
5
BAB II
TINJAUAN PUSTAKA
2.1 Landasan Teori
2.1.1 Platelet
Platelet atau trombosit merupakan fragmen sel darah yang beredar di tubuh.
Platelet diproduksi di sumsum tulang (bone narrow) dengan hormon
trombopoietin sebagai regulator utama yang dihasilkan oleh organ hepar dan
ginjal. Di bawah pengaruh hormon tersebut, myeloid stem cells berkembang
menjadi megakaryocyte-colony-forming cells sebagai sel prekursor, atau yang
biasa disebut megakarioblas. Selanjutnya, megakarioblas akan bertransformasi
menjadi megakariosit. Megakariosit mengalami replikasi DNA tanpa pembelahan
nukleus atau sitoplasma yang apabila jumlah lobus nukleus bertambah, maka
volume sitoplasma menjadi dua kali lipatnya. Setelah nukleus berjumlah delapan,
sitoplasma berubah menjadi granular. Dari fragmentasi ujung-ujung perluasan
sitoplasma bergranul itulah terbentuknya 1.000-5.000 trombosit dalam satu
megakariosit. Proses diferensiasi ini membutuhkan waktu sekitar 10 hari6.
Platelet memiliki ukuran kecil berdiameter 2-4µm dengan banyak vesicles,
namun tidak memiliki nukleus. Volume rerata platelet ialah 7-11fL. Jumlah
platelet normal berkisar antara 150-400x109/L dengan usia normalnya 5-9 hari.
Platelet yang sudah apoptosis akan dibawa oleh makrofag dari limpa dan hepar.
Gambaran ultrastruktur platelet dapat dilihat pada gambar 2.1.
Struktur platelet yang mengandung protein di permukaannya berguna untuk
perlekatan platelet pada dinding pembuluh darah. Protein tersebut memiliki
kesamaan dengan protein yang ada di otot, yaitu dapat berubah bentuk jika
mengalami situasi tertentu yang cukup ‘sulit’. Platelet juga mengandung granula
yang dapat menyekresi protein-protein lain yang diperlukan untuk penguatan
pembuluh darah yang rusak.
6
Gambar 2.1 Ultrastruktur platelet
Sumber: Hoffbrand AV, Moss PAH, 2013
Fungsi utama platelet ialah membentuk sumbatan platelet dan mengeluarkan
faktor kimiawi pada respon hemostatik normal terhadap cedera vaskular (spasme
vaskular dan proses koagulasi). Respon hemostatik normal pada saat cedera ini
bergantung pada interaksi erat antara dinding pembuluh darah dan faktor
koagulasi. Mekanisme respon homeostatis normal saat cedera dapat dilihat pada
gambar 2.2.
Saat pembuluh darah rusak/cedera, paparan kolagen membuat sinyal
perlekatan antar platelet di lokasi kerusakan. Aktivasi dari platelet ditandai
dengan perubahan bentuk, sekresi granula, serta pengaktifan glikoprotein IIb/IIIa.
Glikoprotein selubung permukaan ini sangat penting dalam reaksi perlekatan dan
agregasi platelet. Serotonin dikeluarkan sebagai sinyal supaya pembuluh darah
melakukan vasokontriksi untuk menurunkan aliran darah. Sedangkan fosfolipid
platelet (yang dahulu disebut faktor trombosit 3) berperan dalam perubahan faktor
koagulasi X menjadi Xa dan protrombin (faktor II) menjadi thrombin (faktor IIa).
7
Keseluruhan proses hemostasis tersebut menyebabkan penyumbatan hemostatik
yang stabil6.
Gambar 2.2 Proses hemostasis antara pembuluh darah, platelet, dan proses
koagulasi ketika ada kerusakan pembuluh darah
Sumber: Hoffbrand AV, Moss PAH, 2013
Seperti yang telah dijelaskan di atas, reaksi pertama platelet setelah cedera
pembuluh darah ialah proses adhesi atau perlekatan. Berikut proses adhesi antar
platelet yang akan menutup perdarahan di lokasi cidera:
Platelet sebagai fragmen sel terkecil dan teringan
↓
Terdorong dari aliran darah menuju dinding pembuluh darah
↓
Platelet saling tergulung di sepanjang permukaan endothelium
↓
INJURY → Endothelium rusak
↓
Tough fibers terekspos ke aliran darah
8
↓
Reaksi pertama platelet ---- Tough fibers menyelubungi dinding pembuluh darah
↓
Menarik platelet (seperti magnet)
↓
Terstimulasi berubah bentuk secara situasional
↓
Menutup perdarahan2
2.1.2 Platelet Rich Plasma
Platelet yang merupakan fragmen sel darah dengan bentuk terkecil dan
teringan ini, normal beredar dalam darah dengan jumlah 150.000-450.000
platelet/ml darah.
Seperti definisinya, platelet rich plasma (PRP) harus mengandung platelet
dengan konsentrasi tinggi daripada baseline. Ada beberapa parameter yang
dibutuhkan untuk menentukan jumlah PRP, seperti konsentrasi platelet di atas
baseline, ada atau tidaknya leukosit, apakah PRP tidak menggumpal atau tidak,
dan apakah PRP membutuhkan aktivasi eksogen atau tidak. Beberapa parameter
itulah yang membedakan platelet poor plasma (PPP) dan PRP. Graziani et al
(2006) mengatakan bahwa konsentrasi optimal PRP adalah 2,5 x lebih tinggi dari
baseline7.
Sesuai metodenya, prosedur dasar pembuatan PRP ialah sentrifugasi.
Variasi relative centrifugal force (RCF), suhu, dan waktu merupakan indikator
yang cukup penting di dalam proses sentrifugasi tersebut. Variasi RCF dapat
dilihat pada tabel di bawah ini:
9
Tabel 2.1 Variasi hasil relative centrifugation force pada whole blood cells*
*satuan kecepatan RCF (g) akan dikalibrasikan ke satuan rpm
Sumber: Amable PR et al, 2013
Menurut Amable et al (2013), pada penelitiannya mengenai variasi hasil
RCF (tabel 2.1), hasil terbaik dalam sentrifugasi pertama whole blood cells ialah
dalam kondisi ke-11 (300 x g, 5 menit, 120C) yang merupakan satu-satunya
kondisi dengan waktu sentrifugasi terendah.
Tabel 2.2 Variasi hasil pengaruh suhu pada sentrifugasi pertama
Sumber: Amable PR et al, 2013
10
Sedangkan menurut variasi hasil suhu (tabel 2.2), variasi suhu dianggap
tidak terlalu berpengaruh karena tidak ada perbedaan yang signifikan pada hasil
akhir PRP-1, baik pada suhu 120C dan 18
0C (suhu ruangan)
1, 2, 4.
Setelah menggunakan metode yang disepakati dalam pembuatan PRP-1,
whole blood (WB) akan menghasilkan 3 fraksi, yaitu lapisan bawah yang
mengandung eritrosit/sel darah merah dengan jumlah setengah dari volume,
lapisan tengah yang mengandung leukosit/sel darah putih (buffy coat), dan lapisan
paling atas yang mengandung plasma, platelet, dan sedikit sel darah putih.
Lapisan paling atas itulah yang disebut platelet rich plasma-1 (PRP-1). Tiap
lapisan dapat dilihat pada gambar 2.3 di bawah ini.
Gambar 2.3 Lapisan whole blood yang telah disentrifugasi.
Sumber: Sherwood, Lauralee, 2012.
Oleh karena perbedaan kandungan di tiap lapisan, cara pengambilan PRP-1
harus menggunakan pipet/mikropet untuk mencegah tercampurnya sel darah
merah dan buffy coat. Dengan masih adanya leukosit pada PRP-1, beberapa studi
mengatakan bahwa tingginya kadar konsentrasi leukosit pada PRP secara
langsung berhubungan dengan catabolic gene expression yang mengakibatkan
terganggunya proses penyembuhan jaringan13
.
Di sisi lain, jika PRP-1 dilakukan sentrifugasi lanjutan yang kedua, maka
dinamakan PRP-210
.
11
2.1.3 Kalsium Klorida (CaCl2)
Untuk mencapai efek yang diinginkan, platelet rich plasma (PRP) dapat
diaktivasi secara eksogen oleh trombin, kalsium klorida (CaCl2), atau mekanikal
trauma. Sekali PRP teraktivasi, fibrin mulai terbentuk menjadi bivalent, yaitu
jaringan yang unstable. Jika PRP diaktivasi dengan cara yang lebih fisiologis,
jaringan tetramolekular ini akan meningkatkan growth factors nya dalam tahap
recovery cells10
.
Selain itu, pengaktivasian oleh kalsium dibutuhkan untuk mengaktifkan
protrombin menjadi enzim trombin yang selanjutnya diubah menjadi fibrinogen
sebagai salah satu protein darah untuk proses penyembuhan jaringan. Proses
penyembuhan ini dimulai dengan pembentukan fibrin-fibrin untuk mengumpulkan
platelet dan menutup perdarahan14, 15
. Hal ini membuat PRP yang diaktivasi oleh
kalsium klorida akan memiliki efektivitas lebih tinggi dalam proses penyembuhan
dikarenakan akan meningkatkan kinerja faktor-faktor pembekuan darah, yang
dapat direpresentasikan sebagai protein.
2.1.4 Absorbansi dan Konsentrasi Protein
Protein berasal dari kata proteos pada bahasa Yunani yang artinya pertama
atau utama. Sebagai komponen terpenting penyusun tubuh manusia, protein
merupakan polimer dari berbagai monomer asam amino yang dihubungkan
dengan ikatan peptida. Protein juga bersifat amfoter atau dapat bereaksi dalam
larutan asam maupun basa. Untuk mengetahui adanya ikatan protein secara
kualitatif pada suatu larutan, umumnya menggunakan uji biuret yang tergolong
mudah. Campuran antara larutan CuSO4 dan NaOH pada uji biuret ini akan
menghasilkan warna lembayung ungu jika positif terdapat ikatan proteinnya20
.
Sedangkan untuk mengetahui tingkat absorbansi protein (secara kuantitatif)
pada suatu larutan, peneliti menggunakan alat spektrofotometer. Spektofotometer
adalah alat untuk mendispersikan dan menghasilkan cahaya dengan menghasilkan
range panjang gelombang cahaya. Spektofotometer secara umum mengandung 2
komponen, yaitu spektrometer dan fotometer. Spektrometer berfungsi untuk
mendispersikan dan menghasilkan cahaya dengan menghasilkan panjang
gelombang cahaya. Sedangkan fotometer berfungsi sebagai fotoelektrik detektor
12
yang mengukur intensitas cahaya16
. Penjelasan mengenai cara kerja
spektofotometer itu sendiri akan dijelaskan pada gambar di bawah ini:
Gambar 2.4 Prinsip dasar dari spektrofotometer
Sumber: Gore, Michael, 2000.
Pertama, kollimator (lens) mentransmisikan sorotan cahaya lurus (photons)
yang akan melewati monokromator (prism) untuk memisahkannya menjadi
beberapa komponen panjang gelombang (spectrum). Kemudian selektor panjang
gelombang (split) yang akan melanjutkan transmisi cahaya tersebut dengan
panjang gelombang tertentu. Setelah panjang gelombang cahaya tersebut dapat
melewati sampel di dalam cuvette, fotometer akan mendeteksi jumlah cahaya
yang diabsorbsi dan akan mengirimkan sinyal ke galvanometer atau digital
display.
Jumlah photons yang melewati cuvette dan menuju detektor bergantung
pada panjang cuvette itu sendiri dan konsentrasi dari sampel. Intensitas cahaya
setelah cahaya tersebut melewati cuvette dapat berhubungan dengan transmitans
(T). Transmitans adalah fraksi cahaya yang melewati sampel. Transmitans dapat
dikalkulasikan dengan persamaan:
13
It merupakan intensitas cahaya setelah photons melewati cuvette, sedangkan
Io merupakan intensitas cahaya sebelum photons melewati cuvette17
.
Selain itu, transmitans juga berhubungan dengan absorpsi dan memiliki
persamaan:
Absorbansi merupakan ukuran kuantitatif rasio logaritmik jumlah photons
yang dapat diabsorpsi. Dengan nilai absorbansi dari persamaan tersebut,
konsentrasi sampel yang tidak diketahui itu dapat ditentukan dengan
menggunakan prinsip Beer-Lambert Law seperti di bawah ini:
Gambar 2.5 Transmitans spektofotometer
Sumber: Gore, Michael, 2000
14
Gambar di atas merupakan ilustrasi transmitans cahaya yang melewati
sampel. Panjang dari l dapat digunakan pada Beer-Lambert Law atau yang bisa
disebut Beer’s Law. Menurut Beer’s Law, terdapat hubungan linear antara tingkat
absorbansi dan konsentrasi dari suatu sampel. Namun teori ini hanya dapat
diaplikasikan jika memang terdapat hubungan yang linier. Persamaan Beer’s Law:
A merupakan tingkat absorbansi, ϵ merupakan koefisien molar atau
koefisien absorpsi, sedangkan c merupakan konsentrasi. Koefisien molar
merupakan nilai konstan yang nilainya bervariasi, bergantung pada molekul yang
terkandung. Berikut persamaan linear tersebut16
:
Oleh karena persamaan tersebut, penentuan konsentrasi suatu sampel
memerlukan penentuan absorbansi dan konsentrasi standar yang akan
merumuskan suatu persamaan garis regresi linear standar.
A = ϵ lc
Y = ax + b
15
2.2 Kerangka Teori
Whole blood
Platelet
Trombosit Leukosit Eritrosit
Endogen
Dapat teraktivasi
Perubahan konsentrasi protein
Trombin Kolagen CaCl2
Injury
Eksogen
PRP-1
16
2.3 Kerangka Konsep
Whole blood
Menghasilkan 3 fraksi
Sentrifugasi
Lapisan bawah Lapisan tengah Lapisan atas
Leukosit Eritrosit Plasma&Platelet
Platelet Rich Plasma-1 (PRP-1)
Perbedaan tingkat konsentrasi
Baca di spektrofotometer
Uji biuret
Aktivasi CaCl2 (+) Aktivasi CaCl2 (-)
17
2.4 Definisi Operasional
No
.
Variabel Definisi Pengukur Alat
Ukur Cara Ukur
Skala
Ukur Hasil
1. Tingkat
absorban
si protein
Ukuran untuk
mengetahui
absorbsi
substansi
protein yang
terkandung
dengan cara
mengukur
intensitas
cahaya yang
dapat
melewati
sampel
Peneliti Spekt
ofoto
meter
Sampel
dimasukka
n ke dalam
cuvette,
lalu hasil
absorbansi
bisa
langsung
dibaca di
monitor
spektofoto
meter
setelah
ditentukan
panjang
gelombang
nya
A
(Absor
bansi)
Numerik
2. Inkubasi Upaya untuk
menstabilkan
suhu yang
diinginkan
pada waktu
yang telah
ditentukan
setelah
induksi
Peneliti Inkub
ator
Sampel
dimasukka
n ke dalam
inkubator
selama 1
jam pada
suhu 370C
yang stabil
- Sampel
yang
telah
stabil
18
3. Induksi
CaCl2
Cara untuk
mengetahui
efektivitas
dari CaCl2
pada sampel
Peneliti Mikro
pipet
dan
mikrot
ube
Ambil
270μl
sampel
PRP-1
dengan
menggunak
an
mikropipet
ke dalam
mikrotube
dan
tambahkan
30μl
larutan
CaCl2
μl 300 μl
larutan
sampel
yang
telah
diinduks
i CaCl2
19
BAB III
METODE PENELITIAN
3.1 Desain Penelitian
Penelitian ini dilakukan secara eksperimental untuk mengetahui tingkat
konsentrasi Platelet Rich Plasma-1 (PRP-1) yang diinduksi oleh kalsium klorida
(CaCl2).
3.2 Waktu dan Tempat Penelitian
Tempat penelitian di Laboratorium Biokimia FKIK UIN Syarif
Hidayatullah Jakarta pada bulan Agustus 2014-Mei 2015.
3.3 Alat dan Bahan Penelitan
Alat
1. Centrifuge 5417R dengan merek Eppendorf
2. Spektofotometer dengan merek Genesys 20 beserta cuvette
3. Vertex dengan merek Heidolph Rotamax 120
4. Microtube
5. Tabung darah sitrat
6. Mikropipet
7. Tip kuning dan biru
8. Spuit
9. Neraca analitik
10. Tabung reaksi
11. Gelas ukur
12. Rak tabung
20
Bahan
1. Handscoon
2. Kapas alkohol
3. Tissue
4. Ammonium oksalat
5. Alkohol 70%
6. Larutan CaCl2 180μl
7. Bubuk CuSo4 17 gram
8. Bubuk NaOH 5 gram
9. Bubuk Bovine Serum Albumine (BSA) 0,2 gram
3.4 Kriteria Inklusi dan Eksklusi
3.4.1 Kriteria Inklusi
1. Responden dalam keadaan sehat dengan usia minimal 16 tahun.
2. Responden tidak menggunakan obat kortikosteroid dalam 2-3 minggu
sebelumnya.
3. Responden tidak menggunakan obat NSAIDS minimal 1 minggu
sebelumnya.
4. Responden tidak menggunakan obat antikoagulan minimal 5 hari
sebelumnya19
.
3.4.2 Kriteria Eksklusi
1. Memiliki gangguan/penyakit darah kronik (leukemia, gangguan
koagulasi, dan lainnya).
2. Memiliki riwayat infeksi dalam 1 bulan terakhir.
3.5 Besar dan Cara Pengambilan Sampel
Cara penghitungan sampel menggunakan rumus Mead’s Resource Equation
Formula24
, sebagai berikut:
21
E : Error Component (10-20)
N : Jumlah individu percobaan (sampel) dalam semua kelompok (dikurang 1)
B : Blocking Component (dikurang 1) B = 0
T : Jumlah kelompok terapi (dikurang 1)
Jika N = 12 – 22 dan masing-masing dibagi menjadi 2 kelompok, maka
tiap kelompok berjumlah 6 – 11 sampel. Setelah itu ditetapkan sampel terkecil,
yaitu 6 sampel.
Sampel diambil secara simple random sampling dengan jumlah 6 orang
dan dipastikan sesuai kriteria dengan anamnesis (identitas diri dan riwayat
penyakit). Responden yang memenuhi kriteria diminta untuk mengisi lembar
persetujuan informed consent.
E = N- B - T
E = N – 0 – T
≥ 10 = (N-1) – (2-1)
≥ 10 = (N-1) – 1
≥ 11 = N – 1
≥ 12 = N
E = N - 0 – T
≤ 20 = (N-1) – (2-1)
≤ 20 = (N-1) – 1
≤ 21 = N – 1
≤ 22 = N
3.6 Alur Penelitian
3.7 Cara Kerja Penelitian
A. Pembuatan Sediaan NaOH 10% dan CuSO4 0,1%
1. Siapkan NaOH dan CuSO4 bubuk, aquades, neraca analitik, dan botol
kosong
2. Ukur 5 gram NaOH dengan neraca analitik
3. Tambahkan 50 ml aquades
4. Tunggu hingga larut kemudian pindahkan ke botol kosong dan labeli NaOH
10%
5. Ukur 17 gram CuSO4 dengan neraca analitik
6. Tambahkan 100 ml aquades
7. Pindahkan ke botol kosong dan labeli CuSO4 0,1%
B. Pembuatan Standart
1. Siapkan BSA, aquades, tabung reaksi, gelas ukur, sendok, tip biru,
mikropipet, rak tabung, dan neraca analitik
2. Ukur BSA dengan neraca analitik sejumlah 0,2 gram
3. Larutkan dengan 10 ml aquades. Beri label sebagai stock BSA
4. Masukkan 2 ml stock ke dalam tabung reaksi. Beri label Std 1
5. Lakukan dilusi standart sebanyak empat kali sehingga konsentrasi standart
menjadi 0,125% dengan cara mengambil 1 ml stock dan 1 ml aquades, dan
seterusnya
6. Setiap hasil dilusi diberikan label Std 2 hingga Std 5
7. Letakkan di rak tabung
C. Pembuatan Platelet Rich Plasma-1 (PRP-1)
1. Siapkan alat dan bahan
2. Ambil darah vena sampel sebanyak 3ml ke dalam tabung darah
3. Bagi menjadi 2 tube dengan masing-masing 1,5ml sampel darah. Tandai
tube dengan simbol ‘A’ dan ‘B‘
24
4. Sentrifugasi keduanya dengan kecepatan 1.800rpm, 5 menit, dan 180C
5. Ambil 0,5-1ml lapisan paling atas dari keduanya dengan menggunakan
mikropipet, lalu masukkan ke tube dengan nama ‘(+)’ untuk kontrol positif,
dan ‘(-)’ untuk kontrol negatif
6. Ambil 270μl dari tube (+) ke tube lainnya, dan tambahkan 30μl CaCl2.
Namakan tube ‘CaCl2 (+)’
7. Homogenkan dengan alat vortex
8. Ambil 300μl dari tube (-) ke tube lainnya. Beri nama tube ‘CaCl2 (-)’
9. Inkubasi kontrol (+) dan kontrol (-) selama 1 jam dalam suhu ruangan 370C
ke dalam inkubator
D. Uji Biuret
1. Ambil 100μl masing-masing kontrol, masukkan ke tabung reaksi
2. Tambahkan 7 tetes NaOH 10% pada tabung reaksi CaCl2 (+) maupun (-),
lalu homogenkan dengan alat vortex
3. Tambahkan 7 tetes CuSO4 0,1% pada kedua kontrol sampai terlihat warna
ungu lembayung, lalu homogenkan dengan alat vortex
4. Letakkan di rak tabung
5. Lakukan hal yang sama pada larutan Standar 1-5
E. Pembacaan Absorbansi protein
1. Siapkan alat spektrofotometer, cuvette, aquades, dan tissue
2. Masukkan nilai panjang gelombangnya menjadi 540λ
3. Baca nilai blanko (aquades), lalu dikalibrasikan menjadi 0
4. Baca nilai absorbansi protein kelima Standar dengan mencuci cuvette
dengan aquades secara bergantian
5. Catat nilai Standard dan olah data Standar
6. Baca nilai absorbansi protein keenam sampel dengan mencuci cuvette
dengan aquades secara bergantian, catat hasil
7. Olah data Standar maupun sampel
25
BAB IV
HASIL DAN PEMBAHASAN
4.1 Karakteristik Responden
Responden berjumlah 6 orang, terdiri dari 2 orang laki-laki dan 4 orang
perempuan dengan rerata usia 21 tahun. Data responden dalam penelitian ini
tersaji dalam tabel 4.1.
Tabel 4.1 Data responden sampel penelitian
Sampel Jenis Kelamin (L/P) Usia
1 L 23 tahun
2 P 20 tahun
3 P 21 tahun
4 P 20 tahun
5 P 21 tahun
6 L 19 tahun
Keenam responden telah memenuhi kriteria inklusi dan menyetujui menjadi
responden dalam form informed consent yang ada di lampiran 1.
4.2 Penentuan Kadar Protein
Penentuan kadar protein pada penelitian kali ini menggunakan analisis
kuantitatif untuk menentukan konsentrasi protein pada sampel. Analisis kuantitatif
ini menggunakan alat spektrofotometer yang mampu mendispersikan dan
menghasilkan cahaya dengan menghasilkan range panjang gelombang cahaya.
26
Seperti yang telah dijelaskan di tinjauan pustaka, nilai absorbansi merupakan
jumlah photons (cahaya) yang dapat diabsorpsi. Sedangkan untuk mencari nilai
konsentrasinya memerlukan rumus dari standar yang telah ditentukan.
4.3 Penentuan Absorbansi Larutan Standar Protein
Setelah panjang gelombang maksimum ditentukan (540λ), maka selanjutnya
menentukan absorbansi larutan standar yang telah dibuat untuk menentukan
persamaan garis regresi linear standar. Data yang diperoleh ialah sebagai berikut:
Tabel 4.2 Absorbansi larutan standar
4.4 Penentuan Persamaan Garis Regresi Linear Standar
Analisis regresi (regression analysis) merupakan cara untuk membentuk
persamaan dan menggunakan persamaan tersebut sebagai perkiraan atau prediksi.
Analisis regresi diperlukan untuk mendapatkan hubungan fungsional antara dua
variabel atau lebih. Hubungan fungsional antara satu variabel prediktor dengan
satu variabel kriteriumnya, seperti pada penelitian ini, disebut analisis regresi
sederhana (tunggal). Penentukan persamaan garis regresi linear standar dapat
menggunakan rumus:
NO. DILUSI STANDAR ABSORBANSI
1 0.125 0.112
2 0.25 0.111
3 0.5 0.119
4 1 0.13
5 2 0.153
Y = ax + b
27
Y = variabel tak bebas (dependent variable)
a = kemiringan kurva linier (slope)
x = variabel bebas (independent variable)
b = titik potong kurva terhadap sumbu Y (intercept)
Setelah memasukkan data absorbansi larutan standar ke dalam kurva dan
diolah dengan rumus tersebut, maka penentuan kurva standar yang diperoleh,
yaitu:
Gambar 4.2 Kurva standar protein
Dari pengolahan kurva standar protein tersebut dapat disimpulkan bahwa
persamaan garis regresi linear standar :
Penentuan signifikansi korelasi X terhadap Y dapat dilihat melalui hasil
yang mendekati angka +1, yang artinya terdapat korelasi positif. Adapun hasil
signifikansi standar tersebut ialah:
y = 0.0227x + 0.1074 R² = 0.9938
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0.14
0.16
0.18
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Ab
sorb
an
si
Dilusi Standar
Y = 0,0227x + 0,1074
28
Hasilnya mendekati angka 1 atau dapat di interpretasikan sebagai korelasi
positif. Korelasi positif bermakna apabila terdapat perubahan pada variabel yang
satu, maka akan diikuti dengan perubahan variabel lain dengan arah yang sama
atau berbanding lurus.
4.5 Penentuan Absorbansi Larutan Sampel
Penentuan absorbansi larutan sampel diperoleh dengan menggunakan
larutan sampel PRP-1, baik kontrol positif maupun negatif. Larutan tersebut
dibaca absorbansinya melalui alat spektrofotometer dengan panjang gelombang
540λ (sama seperti penilaian absorbansi pada larutan standar). Data absobansi
larutan sampel disajikan pada tabel 4.3 berikut.
Tabel 4.3 Absorbansi larutan sampel
Responden PRP 1 ABSORBANSI
Ca (-)
Sampel 1 0.144 0.139
Sampel 2 0.134 0.118
Sampel 3 0.139 0.103
Sampel 4 0.137 0.119
Sampel 5 0.119 0.107
Sampel 6 0.132 0.082
Rata-Rata 0.134 0.111
4.6 Penentuan Konsentrasi Sampel
Berdasarkan data absorbansi larutan sampel yang telah dituliskan pada tabel
4.3, maka konsentrasi sampel dapat ditentukan dengan memasukkan data
absorbansi tersebut ke dalam persamaan garis regresi linear larutan standarnya.
R2 = 0,99378
29
Jika persamaan garis regresi linearnya adalah :
y = 0,0227x + 0,1074
dan y = absorbansi sampel
maka, x = y-b
a
Contoh perhitungan pada sampel 1 Ca:
x = 0,144 – 0,1074
0,0227
x = 1,61233
Setelah semua data dihitung menggunakan persamaan garis regresi linear di
atas, maka hasil dari konsentrasi sampel disajikan pada tabel 4.4 berikut.
Tabel 4.4 Konsentrasi protein larutan sampel
Responden PRP 1 KONSENTRASI
Ca (-)
Sampel 1 1.61233 1.39207
Sampel 2 1.17181 0.46696
Sampel 3 1.39207 0.19383
Sampel 4 1.30396 0.51101
Sampel 5 0.51101 0.02643
Sampel 6 1.0837 0.20264
Rata-Rata 1.17915 0.46549
Hasil penelitian ini telah berhasil membuktikan hipotesis di awal mengenai
konsentrasi protein pada PRP-1 yang diinduksi kalsium klorida (CaCl2). Hasilnya
menunjukkan bahwa nilai rerata konsentrasi protein pada PRP-1 yang diinduksi
kalsium klorida (CaCl2) mengalami peningkatan (1,17915) bila dibandingkan
dengan rerata konsentrasi protein kontrol negatifnya (0,46549). Peningkatan
konsentrasi protein ini merupakan salah satu indikasi bahwa di dalamnya terdapat
peningkatan kadar growth factors dalam proses recovery cells21
.
30
Grafik 4.1 Perbandingan PRP-2 yang teraktivasi
dengan konsentrasi growth factor di dalamnya
Sumber : Amable PR et al, 2013
Pada penelitian Amable et al (2013) dikatakan bahwa tingkat konsentrasi
growth factors pada PRP-2 yang diaktivasi oleh kalsium klorida (CaCl2) lebih
tinggi jika dibandingkan dengan PRP-2 yang diaktivasi oleh trombin, atau
kombinasi keduanya1. Hasil penelitian Amable et al tersebut semakin menguatkan
hipotesis penelitian di awal mengenai efektivitas kalsium klorida (CaCl2) terhadap
Platelet Rich Plasma (PRP). Hasil penelitian ini dapat menyatakan bahwa tidak
hanya PRP-2 saja yang dapat mengalami peningkatan kadar growth factors nya,
tetapi kini terbukti bahwa PRP-1 pun jika diaktivasikan dengan kalsium klorida
(CaCl2) maka akan terjadi peningkatan konsentrasi protein di dalamnya.
31
Grafik tingkat konsentrasi protein pada PRP-1 yang diinduksi kalsium
klorida (CaCl2) dan kontrolnya dapat dilihat di bawah ini:
Grafik 4.2 Perbandingan konsentrasi protein pada kedua kontrol
Berdasarkan grafik tersebut, rerata perbedaan tingkat konsentrasi protein
antara PRP-1 yang diinduksi kalsium klorida (CaCl2) dan kontrolnya ialah
0,02283. Perbedaan tingkat konsentrasi protein keduanya yang tidak terlalu jauh
ini (bila dibandingkan dengan jurnal rujukan) kemungkinan dikarenakan
kesalahan dalam pengambilan sampel PRP-1, perbedaan tipe alat sentrifugasi
yang digunakan, alat spektrofotometer yang belum pernah dikalibrasikan, dan
perbedaan letak geografis darah sampel jika dibandingkan dengan sampel jurnal
rujukan. Namun setelah di uji statistik dengan SPSS, hasil p value dari perbedaan
konsentrasi antara kontrol positif dan kontrol negatif tersebut ialah 0,001, yang
menandakan nilai tersebut cukup bermakna (p < 0,005).
Dalam mekanisme kerja PRP, platelet mengeluarkan banyak alpha granules
setelah proses koagulasi pada lokasi cedera. Alpha granules tersebut mengandung
berbagai macam growth factors yang dimana akan meningkatkan proliferasi dan
kemotaksisnya pada sel-sel yang berbeda25
. Hal ini makin menegaskan jika
dengan menginduksikan CaCl2 pada PRP dapat meningkatkan kerja alpha
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
1 2 3 4 5 6
Ko
nse
ntr
asi
Pro
tein
Sampel
(+) CaCl2
(-)
32
granules dalam menghasilkan growth factors, seperti platelet-derived growth
factor (PDGF), transforming growth-factor beta (TGF-b), vascular endothelial
growth factors (VEGF), insulin-like growth factor (IGF), epidermal growth factor
(EGF), dan epithelial cell growth factor (ECGF). Pengaruh utama PRP ialah
diperoleh dari PDGF yang telah diidentifikasi sebagai protein penting dalam hard
and soft-tissue healing26
.
Terlepas dari efektivitas PRP sebagai terapi penyembuhan, menurut
Sundman et al (2011) disebutkan bahwa adanya sedikit leukosit pada PRP-1
sebaiknya dipikirkan kembali karena akan berpengaruh pada pro-inflammatory
cytokines. Hasil penelitiannya menyimpulkan bahwa secara in vitro leukosit akan
meningkatkan katabolik PRP, dimana proses katabolik tersebut dan konsentrasi
sitokin di dalamnya sudah terbukti berhubungan dengan konsentrasi leukosit.
Akan tetapi, belum ada bukti secara in vivo mengenai hubungan antara jumlah
leukosit dengan efek klinisnya13, 22
. Untuk mengurangi resiko leukosit, variasi
kecepatan dan waktu sentrifugasi, serta pemakaian Arthrex ACP kit dapat
membantu mengurangi keberadaan leukosit pada PRP1, 13
.
33
BAB V
KESIMPULAN DAN SARAN
5.1 Kesimpulan
1. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa terdapat peningkatan konsentrasi
protein pada Platelet Rich Plasma-1 (PRP-1) yang diinduksi kalsium
klorida (CaCl2).
2. Tingkat konsentrasi protein Platelet Rich Plasma-1 (PRP-1) yang diinduksi
kalsium klorida (CaCl2) memiliki nilai lebih tinggi (1,17915) dibandingkan
dengan kontrol negatifnya (0,46549).
3. Protokol pembuatan Platelet Rich Plasma-1 (PRP-1) yang diinduksi
kalsium klorida (CaCl2) telah tersusun untuk mendapatkan hasil yang
optimal (lampiran 2).
5.2 Saran
1. Dibutuhkan penelitian lebih lanjut mengenai perbandingan efektifitas
kalsium klorida pada PRP-1 dan PRP-2 sebagai tata laksana medis yang
optimal.
2. Dibutuhkan penelitian lebih lanjut mengenai jenis protein yang terkandung
dalam PRP-1.
3. Dibutuhkan penelitian lebih lanjut mengenai pengaruh adanya leukosit dan
sitokin pada PRP-1.
34
DAFTAR PUSTAKA
1. Amable PR et al. Platelet-rich plasma preparation for regenerative
medicine: optimization and quantification of cytokines and growth factors.
Stem Cell Res. 2013: p. 1-13.
2. Cassie D. Platelets. Departement of Biostatistic & Epidemiology College
of Public Health OUHSC. 2011.
3. Ferrari M, et al. A new technique for hemodilution, preparation of
autologous platelet-rich plasma, and intraoperative blood salvage in
cardiac surgery. Int J Artif Organs. 1987 Jan: p. 47-50.
4. Mueller TD, et al. Biochim biophys acts. 2002: p. 237-50.
5. Mazzucco L, Balbo V, Cattana E, Guaschino R, Borzini P. Not every
PRP-gel is born equal. Evaluation of growth factor availability for tissues
through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-kit, Plateltex, and
one manual procedure. Vox Sang; 2009. p. 110-18.
6. Hoffbrand AV, Moss PAH. Kapita Selekta Hematologi, edisi 6. EGC;
2013. p. 294-304.
7. Graziani, et al. The in vitro effect of different PRP concentration on
osteoblasts and fibroblasts. Clin Oral Implants Res. 2006 Apr 17: p. 212.
8. Smith C, et al. The inflammatory response to skeletal muscle injury:
illuminating complexities. Am J Sports Med. 2008: p. 947.
9. Tidball JG, Wehling HM. Machropages promote muscle membrane repair
and muscle fibre growth and regeneration during modified muscle loading
in mice in vivo. J Physiol. 2007 Jan 1: p. 327.
10. Dohan et al. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich
plasma (P-PRP) to leucoyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends in
Biotechnology. 2009: p. 158-167.
11. Scott A, Khan KM, Roberts CR, et al. What Do We Mean by the Term
Inflammation?. Br J Sports Med, vol. 38 no. 3. 2004: p. 372-380.
12. Toumi H & Best TM. The Inflammatory Response: Friend or Enemy for
Muscle Injury. Br J Sports Med, vol. 37 no. 4. 2003: p. 284-286.
35
13. Sundman EA, Cole BJ, & Fartier LA. Growth Factor and Catabolic
Cytokine Concentrations are Influenced by the Cellular Composition of
Platelet Rich Plasma. Am J Sports Med, vol. 39 no. 10. 2011: p. 2135-
2140.
14. Han B, Woodell-May J, Ponticiello M, Yang Z, Nimm M. The Effect of
Thrombin Activation of Platelet Rich Plasma on Demineralized Bone
Matrix Osteoinductivity. J Bone Joint Surg Am 2009: p. 1459-1470.
15. Atkins, et al. Physical Chemistry for the Life Sciences. New York: Oxford
University Press, 2006.
16. Gore, Michael. Spectrophotometry & Spectrofluorimetry. New York:
Oxford University Press; 2000.
17. Bradford, MM. A Rapid and Sensitive for the Quantitation of Microgram
Quantitites of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye
Binding. Analytical Biochemistry 2006: p. 248-254.
18. Foster TE, Puskas BL, Mandelbaum BR, Gerhardt MB, & Rodeo SA.
Platelet Rich Plasma: From Basic Science to Clinical Applications. Am J
Sports Med 2009: p. 2259-2272.
19. Santos F, Martinez MD. Practical Guidelines for Using PRP in the
Orthopaedic Office, American Academy of Orthopaedic Surgeons. US:
2010.
20. Poedjadi A. Biokimia. Jakarta: UI-Press; 2005.
21. El-Sharkawy H, Kantarci A, et al. Platelet-Rich Plasma: Growth Factors
and Pro- and Anti-Inflammatory Properties. J Periodontal 2007: p. 661-
669.
22. McCarrel TM, Minas T, Fortier LA. Optimization of Leukocyte
Concentration in Platelet-Rich Plasma for the Treatment of Tendinopathy.
J Bone Joint Surg Am 2012: p. 1–8.
23. Sherwood, Lauralee. Fisiologi Manusia: Dari Sel ke Sistem. Jakarta: EGC;
2012.
24. Mead R. The Design of Experiments. New York: Cambridge University
Press 1988: p. 620.
36
25. Nikolidakis D, Jansen JA. The Biology of Platelet-Rich Plasma and It’s
Application in Oral Surgery: Literature Review. Tissue Engineering Part
B 2008: p. 249-258.
26. Yang D, Cheng J, Jing Z, Jin D. Platelet-Derived Growth Factor (PDGF)-
AA: A Self-Imposed Cytokine in the Proliferation of Human Fetal
Osteoblasts. Cytokine 2000. P.1271-1274.
27. Murray RK et al. Harper’s Illustrated Biochemistry 26 edition. USA:
McGraw-Hill Companies Inc; 2003.
37
Lampiran 1
Lembar Informed Consent
Formulir Informed Consent
TINGKAT KONSENTRASI PROTEIN PADA PLATELET RICH PLASMA-1
(PRP-1) YANG DIINDUKSI KALSIUM KLORIDA
Setelah memperoleh kejelasan mengenai tujuan, manfaat, prosedur dan
kemungkinan resiko, serta jawaban atas pertanyaan yang diberikan oleh peneliti
dalam penelitian TINGKAT KONSENTRASI PROTEIN PADA PLATELET
RICH PLASMA-1 (PRP-1) YANG DIINDUKSI KALSIUM KLORIDA, maka
saya yang bertanda tangan di bawah ini:
Nama :
Alamat :
Jurusan :
Semester :
Dengan ini menyatakan dengan penuh kesadaran bersedia berpartisipasi dalam
penelitian tersebut dan bersedia diambil darah vena sebanyak 3 ml sesuai dengan
prosedur yang telah ditetapkan dalam penelitian TINGKAT KONSENTRASI
PROTEIN PADA PLATELET RICH PLASMA-1 (PRP-1) YANG DIINDUKSI
KALSIUM KLORIDA. Selanjutnya, bila suatu ketika, dalam masa penelitian,
saya merasa dirugikan karena penelitian ini, saya berhak mengundurkan diri dari
keterlibatan saya, serta membatalkan persetujuan ini, tanpa sanksi apapun dan dari
pihak manapun.
Jakarta, …………….. 2015
Responden Peneliti
(Yang membuat pernyataan) (Sarah Attauhidah)
38
Lampiran 2
Protokol Pembuatan Platelet Rich Plasma-1 yang Diinduksi Kalsium Klorida
Mengambil darah vena sampel
sebanyak 3 ml
Memasukkannya ke
tabung darah sitrat
Membagi darah sampel
menjadi 2 (masing-
masing 1,5ml ke tube)
Sentrifugasi tube dengan
kecepatan 1.800rpm, 5
menit, dan 180C
Ambil 0,5-1ml lapisan paling
atas (PRP-1) dari keduanya
dengan menggunakan
mikropipet
Ambil 270μl PRP-1 dari tube 1
ke tube lainnya, tambahkan
30μl larutan CaCl2.
Inkubasi tube ke inkubator dengan
suhu 370C selama 1 jam
39
Lampiran 3
Surat Permohonan Ethical Approval Penelitian
40
Lampiran 4
Dokumentasi Penelitian
1. Persiapan
pengambilan darah
sampel dengan spuit 3cc,
tourniquet, handscoon,
dan kapas alkohol.
2. Sampel darah vena 3cc sampel
dimasukkan ke tabung darah
sitrat supaya darah tidak
menggumpal.
3. Sampel darah mulai dimasukkan ke
microtube dengan menggunakan mikropipet
sebelum disentrifugasi.
41
4. Sampel disentrifugasi dengan
alat Centrifuge 5417R merek
Eppendorf.
6. Pembuatan Standar dengan
menggunakan Bovine Serum
Albumin (BSA)
5. PRP-1 yang telah diinduksi CaCl2 diinkubasi
selama 1 jam dalam suhu 370C.
42
8. Kelima standar yang sudah di uji biuret segera di
homogenkan dengan menggunakan alat vortex sehingga
menghasilkan warna ungu lembayung.
9. Standar dan sampel PRP-1 yang diinduksi kalsium klorida
dan kontrol negatifnya dibaca absorbansi proteinnya dengan
menggunakan alat spektrofotometer.
7. Pembuatan larutan
NaOH 10% dan CuSO4
0,1% sebagai bahan
utama uji biuret
43
Lampiran 5
Riwayat Peneliti
DAFTAR RIWAYAT HIDUP
Nama : Sarah Attauhidah
Usia : 21 tahun
Tempat, Tanggal Lahir : Jakarta, 3 Desember 1993
Alamat : Jalan Baung IV No.43 RT/RW 05/02, Kebagusan,
Pasar Minggu, Jakarta Selatan 12520
No. Hp : 081282920461
Email : Sarasattau@gmail.com
Riwayat Pendidikan :
1. SDIT Al-Ihsan Jakarta 2000-2006
2. SMPN 41 Jakarta 2006-2009
3. SMAN 49 Jakarta 2009-2012
4. PSPD FKIK UIN Jakarta 2012-sekarang
Recommended