View
3.068
Download
0
Category
Preview:
DESCRIPTION
Descripción de pruebas de laboratorio ELISA PCR Western Blot
Citation preview
Pruebas de Laboratorio
ELISA
Western Blot
Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR)
Dr. Luis Aragón D.
ELISA
Enzyme
Linked
Immuno
Sorvent
Assay
Qué es?
Prueba de inmunoanálisis empleada para el estudio
cuantitativo de antigenos y anticuerpos específicos.
Se basa en el uso de antígenos o anticuerpos
marcados con una enzima, e insolubilizado sobre un
soporte (inmunoadsorbente) en donde la reacción
antígeno-anticuerpo queda inmovilizada, se le
agrega un substrato especifico que al actuar con la
enzima produce un color cuantificable mediante el
uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.
Tipos
• ELISA Directo (Ac marcados con enzima)
• ELISA Indirecto (suero – Antígenos
fijados)
• ELISA Competitivo (Ac específicos del agente patógeno a detectar )
• ELISA sándwich
– Doble (DAS)
– Heterólogo (HADAS)
En qué consiste? Pasos generales de un ELISA.
1.Se agrega el antígeno o anticuerpo.
2.Se mezcla la muestra con los antígenos o
anticuerpos. Se unen
3.Se lava el exceso no unido
4.Se agrega el anticuerpo (2) marcado con la
enzima y se une al antígeno
5.Lavado eliminar el exceso de enzima no unida
6.Por ultimo se agrega el substrato este su une a la
enzima desarrollando el color, listo para cuantificar
Aplicaciones
Hormonas
Gonadotropina coriónica
Progesterona
Testosterona
Hormonas tiroideas (T3, T4)
Cuantificación de inmunoglobulinas
IgG (rubeola)
IgE
IgA
IgM (toxoplasma)
Inmunopatología
Anticuerpos contra HIV-1
Anticuerpos contra antígeno de superficie (anti Hbs)
Antígeno superficie (AgH- Bs)
Factor reumatoide
Inmunocomplejos circulantes
Aplicaciones
Enfermedades producidas por parásitos
Babesias y tripanosomas
Toxocara canis
Toxoplasmosis
Enfermedades producidas por Micoplasmas
Enfermedades producidas por bacterias
Mycobacterium tuberculosis
Enterotoxinas Vibrio cholerae
Estreptococos
Salmonela
Enfermedades producidas por virus
Fiebre aftosa
Rotavirus
Artritis vírica
Western Blot
El término “blotting” hace
referencia a la
transferencia de
macromoléculas biológicas
desde un gel hasta una
membrana y su posterior
detección en la superficie
de la misma.
Qué es?
• La técnica del Western Blot también llamado
“inmunoblotting” utiliza anticuerpos para detectar el
antígeno o los antígenos específicos de interés.
• La especificidad de la unión antígeno –anticuerpo permite
la detección de una única proteína dentro de una mezcla
compleja de otras proteínas. En la actualidad se utiliza
como criterio de identificación positivo de una proteína
especifica en una mezcla compleja y para obtener datos
cualitativos y semicuantitativos sobre la misma.
Método Directo
El anticuerpo
primario
marcado se une al
antígeno de la
membrana y
reacciona
con el sustrato
originando una señal
detectable.
Método Indirecto
El anticuerpo primario sin marcar reacciona con el antígeno. Luego, un anticuerpo(2) marcado se une al primario y reacciona con el sustrato.
1.Separación de las macromoléculas mediante geles de electroforesis.
2.Las macromoléculas ya separadas en función de su diferente
peso molecular se transfieren a una segunda matriz(membrana de nitrocelulosa). Posteriormente, se bloquea la membrana para evitar la unión inespecífica a su superficie de los anticuerpos que se van a utilizar para la detección de la proteína de interés.
3.Se une a dicha proteína transferida un anticuerpo especifico marcado con una enzima
4.Finalmente se añade un sustrato para dicha enzima con lo que se produce un producto detectable
Se utilizan sustratos quimioluminiscentes que cuando se combinan con la enzima correspondiente, producen luz como producto final, que se detecta con una película o una cámara especializada.
La intensidad de la señal se correlaciona con la cantidad del antígeno en la superficie de la membrana.
PCR
Reacción en
Cadena de
Polimerasa
Qué es?
• Prueba de amplificación genética, que permite
detectar en sangre o en ganglios linfáticos células
malignas.
• Hace posible la multiplicación de segmentos de
ADN por un factor de hasta 10 a la sexta potencia
• A partir de cantidades pequeñas como una sola
célula es posible identificar elementos específicos
que faciliten el diagnóstico de procesos neoplásicos.
En qué consiste?
• Transcripción inversa: se amplifican las secuencias
mensajeras ARNm para convertirlas a ADN
complementaria (enzima reversa transcriptasa-
polimerasa)
• Mediante la técnica RT-PCR la ADNc es amplificada
y esto permite identificar una población celular que
porte la molécula ARNm especifica.
Aplicaciones
• Diagnóstico enfermedades infecciosas
• Diagnóstico infección por VIH (neonatal)
• Anemia células falciformes
• Leucemias
• Melanomas
• Neoplasias
Bibliografía
• Angel G, Angel M, Interpretation Clínica de Laboratorio, 7a
Edición 2006
• Morrison K, Laboratorio Clínico y Pruebas de Diagnóstico,
1era Edición en Español
• Harrison T, Harrison Principios de Medicina Interna, 16a
Edición, 2006
• Masson, Diccionario Médico, 4a Edición, 2005
Playa Hermosa, Costa Rica
Recommended