第 22 章 呼吸道病毒 急性呼吸道感染中 90%-95%

是由病毒引起的。常见的呼吸道病毒有正黏病毒科中的流感病毒、副黏病毒科中的副流感病毒、呼吸道合胞病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒以及腺病毒、风疹病毒、鼻病毒、冠状病毒和呼肠孤病毒等。

呼吸道病毒引起的主要疾病 科 种 引起的主要疾病正粘病毒 甲、乙、丙型流感病毒 流感

副粘病毒 副流感病毒 1 ～ 4 型 呼吸道合胞病毒

感冒、支气管炎婴儿支气管炎、肺炎

麻疹病毒 麻疹

小 RNA 病毒冠状病毒腺病毒

腮腺炎病毒 鼻病毒 冠状病毒 腺病毒

流行性腮腺炎急性上感、感冒同上小儿肺炎

第一节 流感病毒 Influenza virus

一、生物学性状1. 由核衣壳、包膜和刺突组成病毒体（ 1 ）核衣壳 : 由核酸、核蛋白和 PB1 、 P

B2 、 PA 等三种蛋白质组成。 ① 核蛋白（ NP ）呈螺旋对称排列。 ② PB1 、 PB2 、 PA 等三种蛋白 质有型抗原特异性。

③ 核酸为分节段的单股负链 RNA ，甲型、乙型有 8 节段，丙型有 7 个节段，复制中易发生高频重组变异，出现新的亚型。

节段 编码多肽 功 能1 PB2 RNA 聚合酶与 RNA 转录和复制有关2 PB1 同上3 PA 同上4 HA1 、

2血凝素识别与吸附宿主细胞，为中和抗原，有亚型特异性

5 NP 核蛋白，具有型特异性6 NA 神经氨酸酶，促进病毒释放为中和抗原，

有亚型特异性7 M1

M2基质蛋白，与病毒组装有关膜蛋白，形成膜通道，促进病毒释放

8 NS1 、2

非结构蛋白，抑制 mRNA 转运

（ 2 ）包膜：基质蛋白（ M 蛋白）有保护核心，

维持形态的作用，具有型抗原特异性， 与病毒出芽释放有关。（ 3 ）刺突：存在于包膜上，有两种刺突。 血凝素（ hemagglutinin,HA ） 神经氨酸酶（ neuraminidase,NA)

抗原漂移（ antigenic 　 drift ）： 变异幅度小，是连续变异，属于亚型内变异，变异的机理是基因点突变使 HA 或 NA 抗原结构发生小变异及

人群免疫力选择所造成。抗原转变（ antigenic 　 shift ）： 变异幅度大，属于质变， HA 和 NA抗原结构发生变异形成新亚型，变异机理是基因重组的结果。

神经氨酸酶（ NA)

1. 具有酶活性 , 有利于成熟病毒芽生释放。

2. 为亚型特异性抗原 , 其抗体能抑制病毒释放。

血凝素1. 凝集鸡的红细胞 , 血凝现象是病毒增 殖指标 , 其亚单位 HA1,HA2 均有膜融 合作用。2. 血凝现象可被相应抗体抑制 ,此抗体 称血凝抑制抗体 , 能中和病毒 , 有保 护作用。可利用其鉴定病毒。3. 是甲型流感病毒区分亚型的依据。

（二）分型与变异 1.根据核蛋白（ NP ）和基质蛋白

（ M 蛋白）抗原性分为甲、乙、丙三型。 2.根据 HA 和 NA 抗原性将甲型分为 H1-3 、 N1-2 亚型。

甲型流感病毒抗原变异情况 亚型名称 抗原结构 流行年代 最初流行地 原甲型 H1N1 1918-1957 西班牙亚洲甲型 H2N2 1957-1968 亚洲香港甲型 H3N2 1968-1977 香港香港甲型 H3N2 、 H1N1 1977- 俄罗斯与新甲型

（三）培养 鸡胚羊膜腔培养。细胞培养用狗肾传代细胞。感染多种动物，如雪貂、小鼠、地鼠、豚鼠等。

血凝试验是病毒增长指标。（四）抵抗力 弱 , 对热、消毒剂均敏感。

二、致病性与免疫性（一）致病性1.传染源是患者；2.传播途径为呼吸道；3. 呼吸道粘膜细胞为病毒靶细胞；4. 病毒在细胞间蔓延 ,不形成病毒血症；5. 病后对同型有 1-2年短暂免疫力，

以体液免疫为主。

1. 标本采集与处理标本应于疾病早期采集鼻咽拭子为标本，浸入无菌的 pH 7． 2 的肉汤中，分离时培上述充分振荡标本液，置 4℃自然沉淀 5 ～ 10min ，取上清液 3ml ，按每毫升加青霉素 250U、链霉素 250μg 用于分离病毒和病毒抗原或 RNA 的检测。血清学实验需取双份血清。

2. 标本电镜观察球形或丝状病毒颗粒， 球形直径 80 ～ 120nm ，用特异抗体

进 行免疫电镜观察，提高检出率，敏 感性达 50％。用荧光标记抗体，在 荧光显微镜下观察，敏感性为 50％— 90％。3.直接检测临床标本或细胞培养物中 的流感病毒抗原，试验敏感且特异 性高，能在 30 分钟内完成。

4. 标本直接核酸检测 32P 标记的流感病毒特异性 cDNA探针能 检出标本中的约 lpg 的流感病毒 RNA 。 用 RT-PCR技术 去扩增流感病毒 RNA ，能鉴定甲、乙、 丙三型 流感病毒及其亚型。

5. 分离培养可选用传代狗肾细胞 (MDCK)培养 7-10天，用红细胞吸附或血凝试验核查，阳性者再用血凝抑制 (HI)试验鉴定。用鸡胚培养时，用 10—11日龄的鸡胚，初次接种羊膜腔，传代选尿囊腔，孵育 2 ～ 3天，收获羊水做血凝试验。动物接种以雪貂最为易感。

6.鉴定血凝试验能证实病毒的存在，甲、乙型流感病毒能凝集人 O型、鸡和豚鼠的红细胞用特异性抗体做血凝抑制 (H1)试验进行鉴定和分型。也可用中和试验进行分型和亚型。

7. 抗体检测较常用的方法是血凝抑制 HI和 ELIS

A法。敏感、特异，并与随后的亚型的特异性检测有关。

第二节 副粘病毒科副粘病毒科与正粘病毒科的生物学性状相似，为单负链 RNA 病毒，为 15

0 ～300nm ，核衣壳是螺旋对称，有包膜，但包膜刺突与正粘病毒不同。包括副粘病毒属、腮腺炎病毒属和麻疹病毒属等三个属。

一、呼吸道合胞病毒 (RSV) 是引起婴幼儿下呼吸道病最常见的病 毒。由于致培养细胞产生融合而得名。 儿童对 RSV普遍易感，再感染率很高， 2岁儿童都感染过 RSV。成人急性感染 也很常见，老年人可引起严重肺炎， 并发展为成人呼吸窘迫综合征 (ARDS) 。

微生物特性RSV为球形颗粒，直径 80 ～ 350nm 。为

单负链 RNA ，不分节段，螺旋对称，外被包膜，刺突 G能吸附宿主细胞，具血凝作用。刺突 P 是融合蛋白， G与 P又是保护性抗原，可产生中和抗体。

面鼠和非洲绿猴是较好的动物模型。RSV能在多种传代细胞中增殖，引起CPE及融合细胞。抵抗力不强，在 pH 3． 0 被灭活， 5． 5最稳定。加温 5

5℃5ｍ in 被灭活。

微生物检验1) 免疫荧光法：采用单克隆或多克隆高效 价抗体，免疫荧光检查抗原，敏感性高， 特异性可达 85％ -95％。2)ELISA法：用于快速检测呼吸道分泌物中 的 RSV抗原，敏感性和特异性均≥ 90% ，

可 检测存在于细胞表面的抗原，操作简便， 结果客观，能快速或自动化检测。

3 ）病毒分离能在 Hela 和 HEP-2 细胞内增胞有 50％—

75％已长成单层时便可接种标本，维持液中适度增加谷氨酰胺，于 36℃5％C02孵箱中培养。 3—7天出现 CPE，细

胞融合形成多核巨细胞，胞质内可见嗜酸性包涵体。作 IF 试验进行鉴定。

4) 核酸检测 RT-PCR技术。用病人鼻咽抽吸物或从受染细 胞提取 RNA ，以 F蛋白基因为 PCR扩增的模板， 设计引物进行 PCR扩增以纯化后测序。 5 ）抗体检测 检测患者血清中抗 RSV抗体 (IgG、 IgM) 。需 双份血清有 4倍增高可诊断。血清中 IgM 抗 体，可协助早期诊断。

二、副流感病毒

1. 属副粘病毒亚科，具有神经氨酸酶，引起上呼吸道感染，支气管炎、肺炎及哮喘等。

2. 形态结构类似流感病毒，呈球形略大，直径 150 ～ 180nm ，单负链 RNA ，不分节段，螺旋对称，有 HN 和 P 刺突，HN 刺突具有血凝和神经氨酸酶活性， P 刺突具有细胞融合和病毒穿人细胞并传播扩散的作用。可凝集鸡、豚鼠等红细胞，对鸡胚和多传代细胞都敏感。对豚鼠、雪貂等动物也敏感。

3.抵抗力弱，对热敏感，不耐酸， pH 3．0 可灭活。标本 -70℃保存。

微生物检验 1) 标本显微镜检查：观察到脱落细胞 胞质内嗜酸性包含体。2) 直接检测脱落细胞中的副流感病毒 抗原，最常用间接免疫荧光法， ELISA法，阳性者再用分型 McAb进 行鉴定。

3 ）病毒的分离 标本是鼻咽拭子，人 与猴原代肾细胞敏感，可用豚鼠红 细胞进行血吸附试验证实病毒存在。 用 McAb进行型别鉴定。4 ）抗体检测 取双份血清，用中和试 验、血凝抑制和 EIJSA法，抗体效价 有 4倍增高可认为 PIV感染。

三、腮腺炎病毒1. 属副粘病毒亚科、腮腺炎的病原体，还可 引起脑膜炎、睾丸炎、卵巢炎和胰腺炎等。2. 呈球形，直径 100-200nm ，单负链 RNA ，螺 旋对称，包膜表面有两种糖蛋白突起，一 种是含血凝素的神经氨酸酶 (HN) ，另一种 是融合蛋白 (F) 。3. 对猴肾和 Hela 细胞等敏感。抵抗力不强， 56℃30min 、甲醛及有机溶剂均可灭活病毒。

微生物检验1 ．以免疫荧光法在标本或细胞培养中早 期发现病毒抗原，或用 RT-PCR法检测 病毒 RNA 。2．病毒分离与鉴定 早期收集唾液与脑 脊液用于病毒分离，用原代恒河猴或 人胚肾细胞。能产生典型 CPE，细胞融 合及多核巨细胞。不出现 CPE的可用豚 鼠红细胞进行吸附试验，再做吸附抑 制试验鉴定。

3．抗体检测 用 ELISA法和 HI 试验， 双份血清抗体效价有 4倍升高，可 认为是感染。 ELlSA法可检测 IgM 抗体，与副流感病毒抗体无交叉反 应。

四、麻疹病毒属于副粘病毒科，缺乏神经氨酸酶。只有一个血清型，是引起麻疹的病原体。是儿童常见的急性呼吸道传染病。人是自然宿主，普遍易感，易感者接触后 100％发病。在我国 6 个月至 5岁

儿发病率最高，近年来由于疫苗应用，流行强度减弱，发病年龄后移。

重症和免疫功能低下患儿可出现并发症肺炎，占死因的 90％以上，远期并发症是亚急性硬化性全脑炎 (SSPE) 。

微生物特征麻疹病毒呈球形，直径 100—150nm ，单负链 RNA ，螺旋对称，三种衣壳蛋白 (L、 P 、N) 组成核衣壳，外被脂质双层包膜，包膜内面为 M 蛋白，包膜表面有血凝素 (H 蛋白 )和融合蛋白 (F) 。 H 蛋白与细胞表面病毒受体 (CD46) 结合，有血凝功能，而F蛋白有融合功能。

对原代人胚肾、传代狗肾细胞等敏感，出现 CPE。抵抗力不强， 56℃30min 可灭活，对消毒剂敏感．紫外线、 pH4． 5 可灭活病毒。对乙醚和丙酮均敏感：病毒耐寒，耐干燥， -70℃可长期保存。

微生物检验1)标本直接镜检：取鼻咽分泌物、尿 沉渣脱落细胞涂片，检查受染细胞 产生细胞融合和多核巨细胞，观察 胞质和胞核内嗜酸性包涵体。

2) 抗原检测：用免疫荧光法和 ELISA 法早期快速检查病毒抗原。3) 核酸检测：用标记的麻疹病毒 cDNA 探针与病人细胞内麻疹病毒 RNA 进 行核酸杂交，或 PCR法，扩增 RNA ， 然后进行核酸电泳和核酸杂交。

4 ）病毒分离与鉴定 用鼻咽拭子或洗液，经处理后接种原代人胚肾细胞分离麻疹病毒，出现 CPE或血球吸附试验阳性时，采用免疫荧光试验、 ELISA法、核酸杂交法等进行鉴定。麻疹病毒仅一个血清型。

5 ）抗体检测 取双份血清用 ELISA法或 CF 法

等 检测，抗体效价有 4倍增高。 ELlSA法可检测 IgM 抗体，可协 助早期诊断。

第三节 其他呼吸道病毒一、腺病毒（Adenovirus）（一）生物学性状

1.人类腺病毒分为6个组，42个血清型。2.能在人胚肾原代细胞等增殖，引起细胞病变且出现嗜碱性包含体。

3.抵抗力较强。耐酸、乙醚。4.感染后可获得中和抗体,对同型病毒再感染有保护作用 。

（二）致病性与免疫性

1. 通过呼吸道、眼结膜和胃肠道传播 ,局部感染后引起病毒血症。1～7型引起婴幼儿上呼吸道感染；3、7型引起急性咽炎；8、19、37型 引起流行性角膜炎（红眼病）；40、41、42型胃肠炎。

2. 感染后可获得中和抗体,对同型病毒再感染有保护作用 。

5.为双股DNA，无包膜的病毒，20面体立体对称型。

微生物检验 1. 抗原检测：常用直接或间接 IF试验，用 抗六邻体抗体作用，然后用荧光标记抗 抗体染色，再于荧光显微镜下发现致密 的核上与胞质中有荧光闪烁，则为腺病 毒。也用 ELlSA法检测出病毒的抗原 (或 lgM 抗体 ) 。2. 核酸检测：用 PCR检出特异性 DNA 。根据

六邻体基因保守序列设计引物进行 PCR扩 增，扩增产物用核酸探针作杂交鉴定。

3. 病毒分离用 Hela 、 HEP-2 等传代细胞，可引起典

型CPE，细胞变圆，聚集成葡萄串状，将感染细胞冻融三次，经 2000r／min离心10min ，收集上清夜作为抗原，用血清学鉴定。

4. 病毒鉴定1. 用特异性六邻体单克隆抗体对其抗 原表位进行检测 , 进行属特异性鉴定。2. 用 HI 试验鉴定血清型。型特异性免 疫血清能抑制血凝，即用血凝抑制 效价来鉴定血清型，方法简易，特 异性强，优于传统的中和试验。

5．抗体检测 常用 ELISA法，将腺病毒抗原加 96孔

板，平行滴加双份血清， 37℃孵育

和洗涤后，再加酶标记抗人 lgG抗体，

孵育后加入酶底物显色，检测OD值，

抗体效价有 4倍升高，具有意义。

二、风疹病毒 Rubella virus

1. 为单股正链ＲＮＡ，螺旋对称型。刺突可凝集禽类和人“O”型红细胞。只有一个血清型，可在人胚肾细胞内增殖。

2. 呼吸道传播，局部增殖后引起病毒血症，儿童出现风疹，妊娠４个月内感染风疹病毒，可引起先天性风疹综合征。感染后可获得终生免疫;

3. 检测母亲或胎儿血中特异性IgM抗体，有助于诊断。确定风疹病毒感染后，应终止妊娠。

4. 接种减毒活疫苗预防,注射丙种球蛋白紧急预防。

微生物检验1．标本采集 患者的咽拭子、皮疹液、尿液 , 测抗体需采集双份血清。2．标本直接检测 利用风疹病毒特异引物进行 RT-PCR ，扩增出病毒特异性片段进行电泳分 析或测序；核酸杂交技术是直接从标本中提 取出基因组核酸，用特异性探针进行核酸杂 交。3．分离培养与鉴定 标本接种原代人胚肾、非 洲绿猴肾等细胞，出现 CPE后收集病毒液，用 酶标或荧光素标记单克隆抗体进行病毒鉴定。

4 ．抗体检测1.采取HI 试验，取病人双份血清，根据HI抗 体效价有 4倍升高，来判定结果。用 ELISA 法捕获 IgM 抗体，出现皮疹时就能测出。2.先天性风疹综合征患儿血清中测出抗风疹 病毒 lgM 抗体和从母体获得的 IgG抗体 , 均 可判定为先天性风疹综合征。

三、鼻病毒Rhiovirus

1.为单股正链 RNA 病毒,无包膜;2.有 115 个血清型;3.引起普通感冒、急性咽炎;4.抵抗力较强,耐乙醚,不耐酸。5.病后免疫力不牢固。

微生物检验病毒量在分泌液中 , 于感染后 2—3天后达高峰，采集鼻咽拭子标本，用人二倍体细胞系分离病毒，根据病毒性状，特别是对酸稳定性试验以及中和试验鉴定血清型。抗体检测用双份血清，抗体效价呈 4倍增长，则认为是鼻病毒感染。

四、冠状病毒Coronavirus

1.为单股正链 RNA 病毒;2.有包膜并向四周伸出刺突;

3.引起普通感冒、气管炎;

4.抵抗力弱,对热、乙醚、氯仿、酸敏感；5.病后产生的特异性抗体不能预防再感染。

非典型性肺炎自2002年11月16日我国广东佛山市首

报病例后，我国乃至世界迅速形成流行态势。截至2003年8月7日止，全世界有32个国家和地区有疫情，发病人数达8465人，死亡919人，平均死亡率达11%。我国内地发病人数为5327人，死亡349人，死亡率为6．7%。

微生物检验1.取鼻咽拭子标本 , 制成超薄切片 , 在电镜下直接观察呈日冕状的病毒颗粒，或用 ELISA 法直接检测病毒抗原，进行快速诊断。

2. 病毒分离可用人胚肾细胞接种，有病毒生长时出现 CPE, 可用免疫电镜观察并鉴定病毒。抗体检测可用中和试验、HI 和 ELISA法检测，如双份血清抗体效价有 4倍增高，则可诊断。

五、呼肠孤病毒Reovirus

1. 有双层衣壳,

无包膜;

2. 有三个血清型;

3. 引起上呼吸道感染和腹泻。

可在鸡胚尿囊膜、尿囊以及猴、狗、豚鼠等动物内增殖，对 Hela 细胞敏感。但与疾病关系未能最终肯定。轻型上呼吸道感染和胃肠道疾病患者中均可分离到病毒。呼肠病毒具有补体结合抗原，其血凝素可凝集人O型红细胞， HI抗体和中和抗体具有型特异性。