Микробиологическая диагностика заболеваний,

передающихся половым путем (ИППП)

Сифилис, гонорея, урогенитальный хламидиоз

ГОНОРЕЯ

• Гонорея – венерическое заболевание, характеризующееся воспалением слизистых оболочек преимущественно урогенитальной системы и

склонностью к хроническому течению

Таксономическое положение возбудителя гонореи

• Семейство Neisseriaceae

• Род Neisseria

• Вид Neisseria gonorrhoeae (N.gonorrhoeae)

Морфология N.gonorrhoeae

• Грамотрицательные диплококки бобовидной формы, их размеры 1,0-1,3 х 0,6-0,8 мкм, неподвижные, спор не образуют, имеют пили, в организме образуют нежную капсулу

Гонококки в электронном микроскопе и в гное

Гонококк в гное, окраска по Леффлеру (метиленовым синим) и по Граму

Видны внутриклеточно расположенные диплококки в форме кофейныхзерен

Культуральные свойства гонококков

• Аэробы• Растут на

питательных средах с добавлением крови, сыворотки, асцитической жидкости в присутствие 5-10% СО2

Факторы патогенности• 1. Пили - основной фактор адгезии и колонизации. Пили 1. Пили - основной фактор адгезии и колонизации. Пили

повышают устойчивость возбудителей к фагоцитозу.повышают устойчивость возбудителей к фагоцитозу.• 2. Р1(порин) - главный белковый компонент наружной 2. Р1(порин) - главный белковый компонент наружной

мембраны способен встраиваться в мембрану эпителиальных мембраны способен встраиваться в мембрану эпителиальных клеток человека, формируя в ней каналы. Этот процесс, по-клеток человека, формируя в ней каналы. Этот процесс, по-видимому, служит первым этапом эндоцитоза - проникновения видимому, служит первым этапом эндоцитоза - проникновения возбудителя в эпителиальные клетки.возбудителя в эпителиальные клетки.

• 3. Ора-белки - обладают адгезивностью, участвуя во 3. Ора-белки - обладают адгезивностью, участвуя во взаимодействии с фагоцитами.взаимодействии с фагоцитами.

• 4. Капсула - является антифагоцитарным фактором, защищает 4. Капсула - является антифагоцитарным фактором, защищает клеточную стенку возбудителя от непосредственного контакта с клеточную стенку возбудителя от непосредственного контакта с бактерицидными веществами крови, маскирует антигенные бактерицидными веществами крови, маскирует антигенные детерминанты гонококка.детерминанты гонококка.

• 5. 5. IgAIgA-протеазы - разрушают -протеазы - разрушают IgAIgA-антитела, защищающие -антитела, защищающие слизистые оболочки, тем самым облегчая адгезию гонококков слизистые оболочки, тем самым облегчая адгезию гонококков на клет ках эпителия. Одновременно понижается активность на клет ках эпителия. Одновременно понижается активность фагоцитоза, опосредованного антителами.фагоцитоза, опосредованного антителами.

• 6. Эндотоксин (ЛПС)6. Эндотоксин (ЛПС)

Антигенные свойства

• Антигенными свойствами обладают все поверхностные белки• Фимбрии состоят из множества одинаковых белковых

субъединиц. Эта субъединица называется пилином и имеет молекулярную массу около 20000. В составе пилина есть консервативные и вариабельные участки. Перестройки хромосом, ведущие к экспрессии любого из множества неактивных генов пилина, сопровождаются изменениями антигенного состава фимбрий

• Другие перестройки хромосом приводят к тому, что обладающий фимбриями гонококк (Pil+) утрачивает их (то есть становится Pil-). Это явление известно как смена фаз роста . Исследования на добровольцах показали, что при введении в мочеиспускательный канал уретрит вызывают только гонококки, обладающие фимбриями .

• Изменения антигенного состава фимбрий позволяют гонококкам прикрепляться к разным эпителиальным клеткам и уклоняться от иммунного ответа, смена фаз роста - отрываться от эпителиальных клеток и разноситься с кровью по всему организму.

Антигенные свойства• В настоящее время выделенные штаммы

Neisseria gonorrhoeae характеризуют по антигенным свойствам белка РI (серотипирование)

• В отличие от антигенных свойств фимбрий и Ора-белков , антигенные свойства белка PI постоянны у одного штамма и различаются у разных штаммов. Существуют две формы этого белка - белок РIA и белок PIB , каждый штамм содержит только одну из них. Гены, кодирующие белки PIA и PIB, - аллельные варианты одного гена.

• Моноклональные антитела к различным антигенным детерминантам этих белков позволяют разделить гонококков на серотипы: от IA1 до IA24 и от IВ1 до IВ32.

Гонококки на поверхности лимфоцита

Гонококк может подавлять размножение и активность лимфоцитов, прикрепляясь к определенным белкам на их поверхности

Электронная микрофотография гранулоцита человека, распознавшего Neisseria gonorrhoeae (зеленые) в отсутствии специфических ат . Стимуляция клеточных рецепторов вызывает изменения в мембране клетки, способствующие захвату патогена.

Электронная микроскопия: микроколонии N. gonorrhoeae (голубые) атакуют эпителиальные

клетки человека.

Патогенез гонореи

Патогенез гонореи

• Входные ворота инфекции - цилиндрический эпителий уретры, Входные ворота инфекции - цилиндрический эпителий уретры, цервикального канала, реже - прямой кишки, глотки и конъюнктивы цервикального канала, реже - прямой кишки, глотки и конъюнктивы глаза.глаза.

• Гонококки прикрепляются к специализированным рецепторам Гонококки прикрепляются к специализированным рецепторам эпителиального слоя и проникают в эпителиоциты путем активного эпителиального слоя и проникают в эпителиоциты путем активного эндоцитоза. эндоцитоза.

• В эндосомах возбудители размножаются; часто несколько эндосом, В эндосомах возбудители размножаются; часто несколько эндосом, находящихся в клетке, объединяются в одну большую вакуоль, где находящихся в клетке, объединяются в одну большую вакуоль, где бактерии продолжают размножаться. Вакуоли сливаются с базальной бактерии продолжают размножаться. Вакуоли сливаются с базальной мембраной и гонококки попадают в субэпителиальную соединительную мембраной и гонококки попадают в субэпителиальную соединительную ткань. ткань.

• Развивается воспалительный процесс, который имеет гнойный Развивается воспалительный процесс, который имеет гнойный характер, в зону инфекции мигрирует огромное количество характер, в зону инфекции мигрирует огромное количество нейтрофилов, фагоцитирующих возбудителей.нейтрофилов, фагоцитирующих возбудителей.

• В результате цитотоксического действия возбудителей происходит В результате цитотоксического действия возбудителей происходит гибель и слущивание эпителиальных клеток, гонококки гибель и слущивание эпителиальных клеток, гонококки распространяются, продвигаясь по слизистой оболочке мочеполовых распространяются, продвигаясь по слизистой оболочке мочеполовых путей и по лимфатическим сосудам.путей и по лимфатическим сосудам.

• Первоначально инфекция поражает нижние отделы мочеполового Первоначально инфекция поражает нижние отделы мочеполового тракта - область входных ворот и нередко прилежащие органы. тракта - область входных ворот и нередко прилежащие органы.

• Далее развивается как восходящая инфекцияДалее развивается как восходящая инфекция

Патогенез гонореи

• При внегенитальных входных воротах При внегенитальных входных воротах наблюдается проктит, фарингит, наблюдается проктит, фарингит, конъюнктивит. Возможно проникновение конъюнктивит. Возможно проникновение возбудителей в кровоток и занос их в возбудителей в кровоток и занос их в различные органы и ткани. У 1-2% больных различные органы и ткани. У 1-2% больных развивается диссеминированная гонорейная развивается диссеминированная гонорейная инфекция, для которой характерны артриты и инфекция, для которой характерны артриты и другие поражения костно-мышечной системы, другие поражения костно-мышечной системы, эндокардит, менингит, сепсис и др.эндокардит, менингит, сепсис и др.

Внегенитальные пораженияВнегенитальные поражения

ФарингитФарингитФарингитФарингит

Бленнорея новорожденныхБленнорея новорожденных

КонъюктивитКонъюктивит

Внегенитальные пораженияВнегенитальные поражения

Иммунитет

• При гонорее развиваются реакции гуморального и клеточного иммунитета.

• Противогонококковые антитела появляются в сыворотке крови на 5-7-й день болезни, пик титра антител наблюдается на 14-й день, затем титр постепенно уменьшается.

• Наибольшая роль в защите при инфицировании принадлежит факторам местного иммунитета, секреторным иммуноглобулинам sIgA,

• Стойкий постинфекционный иммунитет не развивается, возможны повторные заражения (реинфекция).

Эпидемиология

• Источник – больной человек, как правило, с бессимптомной формой инфекции

• Пути передачи: Основной – половой Поражение глаз у взрослых возникает вследствие

заноса возбудителей руками с мочеполовых органов Инфицирование новорожденных при прохождении

плода по родовым путям (бленнорея) Возможно также бытовое заражение девочек при

нарушении гигиенических правил ("горшечная" инфекция, пользование общими предметами личной гигиены, например губками, и пр.).

Микробиологическая диагностика гонореи

• Исследуемые материалы: гной из уретры, слизь из шейки матки, отделяемое других пораженных слизистых оболочек, осадок мочи, пунктат из суставах (при артрите), кровь.

• Методы диагностики:• 1. Микроскопический• 2. Бактериологический.• 3. Серологические тесты для выявления Аг

гонококка в клиническом материале – МИФ, ИФА• 4. Полимеразная цепная реакция - ПЦР

Микроскопическая диагностика острой гонореи• Исследуемый материал (гной из уретры) красят

по Граму и Леффлеру. • При положительном результате в поле

зрения препарата видны многочисленные лейкоциты и диплококки бобовидной формы, расположенные преимущественно внутри лейкоцитов.

• При свежей острой гонореи этот метод является окончательным.

Микроскопический метод диагностики

Диплококки внутри лейкоцитов!

Бактериологический метод диагностики гонореи

• Исследуемый материал засевают на элективные питательными средами в чашки Петри, инкубируют при 37 С в атмосфере 10% СО2 2-5 суток. Выросшие колонии напоминают капли росы (вирулентные штаммы). Далее получают чистую культуру, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам, определяют чувствительность к антибиотикам.

Тест на оксидазу

Экспресс метод – прямой ИФ

Лечение

• Свежая острая гонорея хорошо поддается лечению Свежая острая гонорея хорошо поддается лечению антибиотиками. Применяют антибиотики группы антибиотиками. Применяют антибиотики группы пенициллина, тетрациклины , хинолоны. Проблема - в пенициллина, тетрациклины , хинолоны. Проблема - в развитии резистентности гонококковразвитии резистентности гонококков

• Трихопол – назначается в связи со способностью Трихопол – назначается в связи со способностью гонококков размножаться в организмах простейшихгонококков размножаться в организмах простейших

• При непереносимости антибиотиков назначают При непереносимости антибиотиков назначают комбинированные сульфаниламидные препараты.комбинированные сульфаниламидные препараты.

• Следует учитывать, что в 30% случаев одновременно Следует учитывать, что в 30% случаев одновременно могут обнаруживаться хламидиимогут обнаруживаться хламидии

• Одновременно с антибиотикотерапией для повышения Одновременно с антибиотикотерапией для повышения резистентности организма применяют иммунотерапию. резистентности организма применяют иммунотерапию. Проводят курс лечения гоновакциной (взвесь убитых Проводят курс лечения гоновакциной (взвесь убитых гонококков), вводят различные иммуномодулирующие гонококков), вводят различные иммуномодулирующие препараты. препараты.