ИНФЕКЦИИМОЧЕВОЙСИСТЕМЫСОБАК

Материалы XIX Международного

ветеринарного конгресса,

Москва, 16ю04.2011 г. БАКТЕРИАЛЬНЫЕ

к.в.н. Шуляк Б.Ф.

У здоровых животных мочевая система (МС), за исключением дистального отдела уретры, свободна от бактериальных агентов. Бактерии попадают в МС через наружные половые органы, реже гематогенным путем (лептоспиры, сальмонеллы и др.).

Инцидентность инфекций у собак составляет 10-15 % ?

МОЧЕВАЯ СИСТЕМА И БАКТЕРИИ

Клинические последствия бактериальных инфекций МС зависят от ряда факторов: патогенности возбудителя, локализации инфекции, состояния иммунной системы животного, наличия у него болезней другой этиологии, своевременности и рациональности лечения, рациона и т.д. Комплексное влияние этих факторов определяет многообразие форм течения инфекций МС (от бессимптомной бактериурии до острого пиелонефрита и септицемии).

КЛИНИЧЕСКИЕ ПРОЯВЛЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ МС

ТИПЫ ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ

Абортивная = элиминация

бактерий

Острая = заболевание

летальный исход

Хроническая = рецидивы заболевания

Латентная

Данные анамнеза, результаты клинического обследования и общего анализа мочи позволяют лишь предполагать наличие у животного инфекции МС. Окончательный диагноз можно поставить только после:1. изоляции возбудителя2. определения уропатогенности изолята3. оценки степени бактериурии

ДИАГНОСТИКА ИНФЕКЦИЙ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ

Для получения достоверных результатов необходимо стандартизировать все этапы бактериологического анализа мочи:

*Преаналитический **Аналитический ***Учет и анализ результатов

ПРЕАНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП

Сбор проб мочи

± Хранениепроб мочи

Доставка влабораторию

СБОР ПРОБ МОЧИ

При естественном мочеиспускании (высок риск контаминации

проб)

Через катетер (высок риск травмирования уретры и мочевого

пузыря, а механической диссеминации патогенных бактерий)

Пункцией мочевого пузыря (не позволяет судить о наличие

инфекций в уретре)

Взятие проб мочи с помощью катетера

Катетеризация кобеля Катетеризация суки

Правильно Неправильно

Цистоцентез

мочеточник

уретра

«Слепая» пункция МП у кобеля

Пробы мочи следует собирать в чистые стерильные, надежно закрывающиеся контейнеры.Использование контейнеров специального назначения облегчает отбор из них проб для анализов без риска случайной контаминации посторонней микрофлорой и попадания мочи (потенциально инфекционный материал!) на объекты внешней среды, одежду и руки специалистов.

Контейнеры для проб мочи

Моча — прекрасная питательная среда для бактерий, титр которых в ней прогрессирующе возрастает с течением времени.

Оптимально, когда пробу мочи высевают на питательную среду сразу же после взятия.

Максимальная продолжительность этого срока при нахождении мочи в условиях комнатной температуры — 2 ч.

В холодильнике ее можно хранить не более 12 ч.

Если использовать в качестве консерванта борную кислоту, то срок хранения проб мочи в холодильнике можно увеличить до 24 ч.

Борная кислота снижает жизнеспособность некоторых бактерий, в т.ч. псевдомонад.

Хранение и доставка проб мочи в лабораторию

ПОСЕВ НА ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

ИДЕНТИФИКАЦИЯИЗОЛЯТОВ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЯЖЕСТИ

БАКТЕРИУРИИ

ИНТЕРПРЕТАЦИЯРЕЗУЛЬТАТОВБАК.АНАЛИЗА

ХИМИЧЕСКИЕЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ (±)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВ-ТИ К

АНТИБИОТИКАМ

НЕПОСРЕДСТВЕННАЯДЕТЕКЦИЯ БАКТЕРИЙ, ЛЕЙКОЦИТОВ И МВР

(визуальные и автоматические

методы)

13

АНАЛИТИЧЕСКИЙ ЭТАП

БАКТЕРИОСКОПИЯ1. Нативных проб2. Седимента3. Концентрата (получ.фильтрацией)

ХИМ. МЕТОДЫ1. Нитритный2. Аденозин триптофазный3. Каталазный 4. Глюкозо-оксидазный и др.5. Выявление метаболитов бактерий.6. Обнаружение маркеров воспалительной реакции

АВТОМАТИЗИРОВАННЫЕ МЕТОДЫ

Проточная цитометрияи др. методы детекции частиц (в т.ч. бактерий)

14

ОБНАРУЖЕНИЕ БАКТЕРИЙ В МОЧЕ

15

Успех бактериологического анализа мочи в значительной степени зависит от качества и спектра используемых в лаборатории питательных сред.

УНИВЕРСАЛЬНЫЕ

СЕЛЕКТИВНЫЕ

ХРОМОГЕННЫЕ

ПОЛИФАЗНЫЕ

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

16

МПА Кровяной агар CLED

  Универсальные среды(кровяной агар, (кровяной агар, CLEDCLED и др.) и др.)

17

Колумбийский CNA агар с кровью без крови

Агар МакКонкиМ

Селективные среды (МакКонки, Колумбийский CNA

18

Хромогенные среды (Uriselect ¾ и др.)

Бактерии Колонии Характеристики

Диаметр, мм Цвет β-глюкуронидаза β-глюкозидаза Индол Триптофан-дезаминаза

E.coli 2-3 Фиолетовый + — + —

P.mirabilis 2 Оранжево-коричневый

— — — +

E.faecalis 0,5-1 Светло-голубой — + —

P.stuartii 2 Оранж-коричн. — + ± —

S.aureus 1-2 Белый — — — —

Алгоритм идентификации бактерий на среде Uriselect 3

20

Полифазные среды

Среда Энтеро ПЛЮС (Новамед)(для дифференциации энтеробактерий)

Культуральные свойства

Морфология бактерий

Тинкториальные свойства

Биохимические свойства

ИДЕНТИФИКАЦИЯ ИЗОЛЯТОВ

25

Дифференциация энтеробактерий

БИОХИМИЧЕСКИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ УСКОРЕННОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ УРОПАТОГЕНОВ

Результаты учитывают визуально (цвету Результаты учитывают визуально (цвету содержимого лунок) или с помощью компьютерных содержимого лунок) или с помощью компьютерных программпрограмм

( LaChema)

Первичные (самостоятельно вызывают

поражения органов мочевой системы): E.

coli, Staph. intermedius, лептоспиры.

Вторичные (проявляют патогенные

свойства реже - преимущественно на

фоне других инфекций, при ослаблении

иммунитета, после инвазивных

диагностических и лечебных процедур):

стафилококки, стрептококки, протеи,

энтеробактеры, энтерококки.

Сомнительные: псевдомонады,

клебсиеллы, коринебактерии

КЛАССИФИКАЦИЯ УРОПАТОГЕНОВ СОБАК

Большинство остальных бактерий, обнаруживаемых в моче следует считать компонентами нормальной микрофлоры или контаминантами, а не уропатогенами.

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ БАК. АНАЛИЗ МОЧИ

Критерии Е.Х. Касса

103 = отсутствии воспалительного процесса,

контаминация мочи

104 = сомнительный результат (исследование следует

повторить)

105 = на наличие воспалительного процесса

28

Если в посевах обнаруживают 3 или большее количества микроорганизмов, то считают, что исследованная проба контаминирована банальной микрофлорой, и проводят исследование мочи повторно.

Изоляция из мочи даже первичных уропатогенов не может служить основанием для постановки окончательного диагноза без подтверждений того, что это не случайная контаминация. Основным критерием этого остается установление диагностического титра уропатогенов в моче (степени бактериурии).

РЕКОМЕНДАЦИИ ЕВРОПЕЙСКОЙ КОНФЕДЕРАЦИИ ЛАБОРАТОРНОЙ МЕДИЦИНЫ (ECLM)

Способ взятия мочи Наличие симптомов БМП

Обнаруженные уропатогенов Диагностически значимый титр (КОЕ/мл)тип число

При мочеиспускании (средняя порция)

+ Первичные— “ —Вторичные— “ —Сомнительные

11-212

102

103

104 (♀) - 103 (♂)105

105

— Любые уропатогены

1 105

Надлобковая пункция ± — “ — 1-2 101

При цистоскопии или 1-кр. катетеризации

± — “ — 1-2 102

Из введенного на длительное время катетера

+ — “ — 1-3 104

— — “ — 1 104

29

Ветеринарным специалистам еще предстоит определить диагностические уровни бактериурии при инфекционных процессах в мочевой системе собак

ПОЛУКОЛИЧЕСТВЕННЫЕ

Капельный

Погружной

Дипстрика/Дипслайда

ТОЧНЫЕ КОЛИЧЕСТВЕННЫЕ

Серийных разведений

Штриховой несекторный

Четырехсекторный

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИТРА БАКТЕРИЙ В МОЧЕ

Штриховой несекторный в ЧП

V инокулума, мкл

N колоний / чашку Петри

Титр (КОЕ/мл)

1

1

10

100

103

104

105

10

1

10

100

102

103

104

100

1

10

100

101

102

103

4-секторный в ЧП

Количество колоний в секторах Титр (КОЕ/мл)I II III IV

1-6 — — — < 103

8-20 — — — 3 х 103

20-30 — — — 5 х 103

30-60 — — — 104

70-80 — — — 5 х 104

100-150 5-10 — — 105

Нельзя сосчитать

20-30 — — 5 х 105

40-60 — — 106

100-140 10-20 — 5 х 106

Нельзя сосчитать

30-40 — 107.

60-80 Един. колонии

108

Капельный

Lorrier J.C., Valkenburg H.A. Quantitative Urine Culture by Surface Drop Method. Applied Microbiol, 1969, 57—63

Погружной (технология дипслайда)

Технология дипслайда начинает «буксовать» при высоком титре бактерий в моче (107 и выше) = газонный рост не позволяет подсчитать число колоний

Штриховая технология дипстрика

N колоний

<10 10-24 25-50 

>50 

КОЕ/мл 103 104 105 106 107 108

Дипстрик и Диаслайд – альтернатива традиционному методу посева проб мочи на чашки Петри, признаваемому «золотым стандартом» бактериологического анализа мочи. Позволяют совместить преаналитический и аналитический этапы, высевать мочу на месте ее сбора сразу на несколько сред, транспортировать и инкубировать посевы в закрытом контейнере, одновременно идентифицировать уропатогены и достоверно оценивать тяжесть бактериурии.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ БАК. АНАЛИЗА МОЧИ

√ Повторная изоляция того же вида, типа, варианта бактерий = наличие

инфекционного процесса.

√ Необходимо определять степень бактериурии при различных

патологиях мочевой системы, чтобы дифференцировать

инфекционный процесс в мочевых путях от контаминации мочи

нормальной микрофлорой и сапрофитами.

√ Ассоциации микроорганизмов чаще встречаются при хронических

процессах и коррелируют с низкой степенью бактериурии. Изоляция

3 и большего числа бактерий свидетельствует о контаминации

пробы.

√ Изменение степени бактериурии в процессе заболевания или лечения

= прогностический признак.

√ Для окончательной трактовки результатов микробиологического

исследования следует учитывать данные анамнеза, результаты

клинического обследования пациента и другие лабораторные

анализы.

39

ЭТАП III. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИЗОЛЯТОВ К АНТИБИОТИКАМ

Кульминацией бактериологического анализа должно быть определение чувствительности изолятов бактерий к антибиотикам. Для этого пользуются несколькими методами:

Cерийных разведений

Стандартных дисков

Диффузионный (Е-

тест)

40

Метод серийных разведений

Метод стандартных дисков

Диско-диффузионный метод

Окто=диск

Диспенсор дисков

Градиентно-диффузионный метод

Интерпретация антибиотикограмм

Категория чувствительности микроорганизма

Характеристика чувствительности изолята к антибиотику

Прогноз применения антибиотика в терапевтических целях

ЧувствительностьНе обладает механизмами резистентности

Лечение будет эффективным при использовании обычных доз антибиотика

Умеренная чувствительность

Субпопуляция, находящаяся между чувствительной и резистентной

Лечение будет эффективным при использовании максимальных доз антибиотика или при локализации инфекции в местах аккумуляции антибиотика

РезистентностьОбладает механизмами резистентности

Лечение антибиотиком будет неэффективным

СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ИНФЕКЦИИ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ

Прихотливые» уропатогены

Не все уропатогены удается выделить на рутинно применяемых с этой целью питательных средах. К их числу относятся лептоспиры и уреаплазмы.

Для лабораторной диагностики таких инфекций применяют специальные питательные среды, иммунологические и другие специфические методы диагностики.

Лептоспироз

Безжелтушный лептоспироз (штутгардская болезнь )

Серовары :Canis

GrippotyphosaKirschneri

PomonaAustralis

Sejroe

Желтушный лептоспироз (болезнь Вейля)

Cеровар Ichterohaemorrhagiae

Почки поражаются на острой стадии лептоспироза. По мере роста гуморального иммунного ответа этот орган остается одним из немногих мест, где «укрываются» лептоспиры, что ведет к переходу инфекции в латентную форму и регулярному выделению возбудителя с мочой

Схема диагностики лептоспироза

Комплексная диагностика лептоспироза

Эпизоотологические и анамнестические данные

Результаты клинического исследования

Обнаружение возбудителя

Бактериоскопия Изоляция на Иммунол. тесты Молек. диагн.

(кровь, моча, п/м) питат. средах (РИФ, ИФА, РЛА, РСК) (ПЦР, ДНК-зонд)

Результатов серологических исследований

Результатов биопробы на лаб. ж-х

Изоляты лептоспир серотипируют в реакции агглютинации-лизиса

Питательные среды для лептоспир

Для изоляции лептоспир применяют среды с 5-10% сыворотки крови кролика или барана (либо сывороточного альбумина) :

жидкие (Ногуши-Веньона, Уленгута, Ферворта-Вольфа в модификации Тарасова и др.) = 5-10 дн., культуры бесцветные, опалесцирующие

полужидкие (Флетчера и др.) = кольцо помутнения на глубине 1,5-2,0 см; с 1% агара заглубленные колонии с расплывчатыми контурамиС 2% агара поверхностные колонии вариабельной прозрачности

В качестве селективных факторов в среды добавляют:Фосфомицин + 5-флуорацил МочевинуСоли кобальтаАнтибиотики (неомицин, рифампицин, фурацилин, фурагин, налидиксовую кту, комбинации рифампицина , полимиксина В, бацитрацина и актидиона)

На фоне заболеваний, сопровождающихся снижением

иммунитета и повреждениями мочевой системы другими

факторами (химическими, уролитами, небактериальными

паразитами), инфекции первичных и вторичных

уропатогенов могут протекать тяжелее, и даже

сомнительные уропатогены могут вызвать значимые

поражения мочевыводящих путей.

К числу наиболее опасных небактериальных паразитов,

локализующихся в мочевой системе относятся нематоды

D.renale и C.plica.

Секундарные инфекции МС

Свайник-великан (D.renale)

Свайник-великан в почке

Яйца D.renale (овальные с крышечкой на полюсах

PEARSONEMA (CAPILARIA) PLICA

Широкий спектр уропатогенов, многообразие и неспецифический характер симптоматики, вызываемых ими болезней МС, а также возможность длительного бессимптомного течения этих бактериозов, диктует необходимость подходить творчески к их диагностике.

Опыт и знания ветеринарного врача Ключ успеха на этом пути = + Эффективная лаб. диагностика

БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ !

Ключ к успеху