Международный вестник ветеринарии, № 3, 2016 г.

- 1 -

Международный вестник ветеринарии, № 3, 2016 г.

- 6 -

• Тромбоцитарная агрегационная активность у телят айршир-ской породы молочного питания. Медведев И.Н., Ошуркова Ю.Л.

93

• Методические основы повышения квалификации для работы с лабораторными животными. Сообщение 1. Уша Б. В., Луцай В.И., Концевая С.Ю., Фатеева Е.И.

99

Хирургия • Информативность показателей системы гемостаза у собак при хирургических операциях. Баруздина Е.С. 107

• Препараты Т-HEXX для профилактики и лечения язвы рустер-гольца у коров. Стекольников А. А., Ладанова М. А. 111

• Диагностика и лечение ассоциированной эрозивно-язвенной бактериальной инфекции хвостовой лопасти у белухи. Капус-тина Е.Ю, Смирнова Л.И.

116

• Температурный мониторинг при использовании тромбоцитар-ной аутоплазмы в лечении ран и язв у животных. Семенов Б.С., Кузнецова Т.Ш., Гусева В.А.

119

Акушерство гинекология

• Коррекция нарушений минерального обмена и восстановление воспроизводительной функции у коров при применении препа-рата «Маримикс». Дорохова Я.Д., Племяшов К.В.

124

• Комбинированный противоэндометритный препарат метрин. Андреева Н.Л., Соколов В.Д., Евелева В.В. 128

Незаразные болезни

• Распространение и клинико-гематологическая характеристика гепатоза у высокопродуктивных коров. Курдеко А.П. 133

• Эффективность медикаментозного лечения мочекаменной бо-лезни у норок. Яшин А.В., Щербаков Г.Г., Куляков Г.В, Кисе-ленко П.С.

138

• Физиологизация состояния гемостаза у новорожденных телят с дефицитом железа в результате применения ферроглюкина, полизона и крезацина. Завалишина С.Ю.

142

• Роль различных звеньев врожденного иммунитета в патогенезе бронхопневмонии у свиней. Крячко О. В. 149

Экспериментальная фармакология

• Особенности проведения глюкозотолерантного теста у мелких лабораторных грызунов (мыши и крысы). Горячева М.А., Ма-карова М.Н.

155

• Обзор экспериментальных моделей для изучения препаратов, применяемых при кожных заболеваниях. Ковалева М.А., Кры-шень К.Л., Макарова М.Н., Алякринская А.А.

160

• Карликовые свиньи как объект доклинических исследований. Рыбакова А.В., Ковалева М.А., Калатанова А.В., Ванатиев Г.В., Ма-карова М.Н.

168

• Математическая статистика в ветеринарии. малые независимые выборки. Иголинская М.К., Смирнова Е.М., Лебединская Н.А. 177

• Математическая статистика в ветеринарии. малые зависимые выборки. Иголинская М.К., Смирнова Е.М., Лебединская Н.А. 181

Международный вестник ветеринарии, № 3, 2016 г.

- 155 -

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

ВВЕДЕНИЕ Глюкозотолерантный тест является

наиболее распространенным исследова-нием в эндокринологии для диагностики нарушения толерантности к глюкозе и

сахарного диабета. В ходе проведения теста уровень глюкозы измеряют натощак и затем через каждые 30 минут в течение 2 часов после углеводной нагрузки. У человека, как правило, под тощаковой

РЕФЕРАТ Глюкозотолерантный тест (ГТТ) является лабораторным методом оцен-ки метаболизма глюкозы в организме, в ходе которого уровень глюко-зы измеряется натощак и затем через каждые 30 минут в течение 2 ча-сов после углеводной нагрузки (введения глюкозы). В «классическом тесте» концентрация глюкозы измеряется в 5 точках: до углеводной нагрузки (натощак - фон), затем через 30, 60, 90 и 120 минут после. В клинической практике, в зависимости от целей, анализ может быть вы-полнен в трех или двух точках. Стандартная углеводная нагрузка для

человека составляет 75 г глюкозы в не зависимости от массы тела. На основании резуль-татов теста строят график, который позволяет охарактеризовать этапы метаболизма глю-козы. Нарастание ее уровня после углеводной нагрузки называется гипергликемической фазой и отражает особенности всасывания глюкозы. Снижение уровня глюкозы называ-ется гипогликемической фазой и косвенно отражает скорость выработки инсулина и чувствительность тканей к данному гормону. Последняя фаза нарушена у пациентов с преддиабетом (нарушением толерантности к глюкозе) и сахарным диабетом 2-го типа (СД). Оценка гипогликемической фазы имеет ведущее значение в диагностике СД у па-циентов, в случае если заболевание протекает бессимптомно. Кроме того, с помощью ГТТ можно рассчитать два дополнительных критерия, гипергликемический и постглике-мический коэффициенты, которые также используются для оценки метаболизма глюко-зы.

В связи с высокой информативностью и простотой выполнения ГТТ широко исполь-зуется при выполнении доклинических исследований. Приведенные в статье методики выполнения ГТТ позволяют получать стабильные результаты и адекватно оценивать состояние углеводного обмена у лабораторных животных.

УДК: 616:61

ОСОБЕННОСТИ ПРОВЕДЕНИЯ ГЛЮКОЗОТОЛЕРАНТНОГО ТЕСТА У МЕЛКИХ

ЛАБОРАТОРНЫХ ГРЫЗУНОВ (МЫШИ И КРЫСЫ)

Горячева М.А. – фармаколог, Макарова М.Н. – д.м.н., директор (ЗАО «НПО «ДОМ ФАРМАЦИИ»)

Ключевые слова: глюкозотолерантный тест, концентрация глюкозы, время голодания животных. Key words: glucose tolerance test, concentration of glucose, animals fasting time.

Международный вестник ветеринарии, № 3, 2016 г.

- 156 -

гликемией понимают концентрацию глю-козы в крови после ночного голодания (около 12-16 часов). В клинической прак-тике используют стандартную нагрузку глюкозой в количестве 75 г. без поправки на массу тела пациента. Референтные значения концентрации глюкозы в крови приведены в таблице 1.

При проведении ГТТ у мелких лабора-торных животных (мышей и крыс) в ходе доклинического исследования существует стандартный подход к выбору дозы угле-водной нагрузки, которая составляет 2 г/кг [2,6]. В литературных источниках при-ведены данные о влиянии различных фак-торов на результат. При проведении ГТТ рекомендовано включать в исследование животных схожего возраста, пола, вида, линии [4,5]. Предложены рекомендации по отбору проб крови, который зависит от используемой тест-системы, желаемого объема образца, навыков исследователя и других факторов. В случае проведения только ГТТ оптимально проводить забор микроколичеств крови с последующей экспрес-оценкой концентрации глюкозы с использованием глюкометров. Данный метод оправдан, поскольку позволяет визуализировать данные в реальном вре-мени и уменьшать влияние стресса. Так, для мышей представлены убедительные данные, свидетельствующие о том, что длительная фиксация животного при взя-тии крови приводит к искажению реаль-ной концентрации глюкозы в крови. Ав-торы связывают данный факт с развитием у животного стресса, что в свою очередь приводит к увеличению концентрации катехоламинов следовательно, к быстро-му увеличению концентрации глюкозы в крови [3]. Не однозначно описано время голодания лабораторных животных перед определением фоновых значений концен-траций глюкозы. В литературных источ-никах предложено использовать время голодание 4-5 часов (в утреннее время) или 14-16 часов (в ночное время). Ряд

авторов полагает, что длительное голода-ние (свыше 14 часов) активирует катабо-лические процессы [7], что в дальнейшем может приводить к искажению данных, полученных в ходе ГТТ. При данном ре-жиме голодания у мышей регистрируют уменьшение массы тела в среднем на 15% [3]. В литературных источниках описыва-ются 2 основных пути введения глюкозы: внутрибрюшинный и внутрижелудочный [6]. Последний является более физиоло-гичным.

На основании вышеизложенного це-лью нашего исследования стало опреде-ление оптимального срока голодания ла-бораторных мышей и крыс, сравнитель-ное изучение данных ГТТ при разных путях введения углеводной нагрузки. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследование выполнено на мышах аутбредных самцах и аутбредных крысах самцах, возраст животных 10-12 недель. Исследование проводили в два этапа. Жи-вотные содержались в стандартных усло-виях вивария. На первом этапе определя-ли концентрацию глюкозы в крови в зави-симости от времени голодания животных. Для первого этапа исследования живот-ные были рандомизированы и разделены на 2 группы по 12 животных: 1-ая – аут-бредные мыши самцы; 2-ая аутбредные крысы самцы [1]. Животных лишали кор-ма (при этом доступ к воде был не огра-ничен). Измерение концентрации глюко-зы проводили спустя 4, 6, 8 и 16 часов, с целью определения оптимального време-ни голодания лабораторных животных. На втором этапе исследования каждая экспериментальная группа была разделе-на на две подгруппы (А и Б по 6 живот-ных в каждой) для проведения ГТТ. Лабо-раторные животные получали углевод-ную нагрузку однократно в дозе 2 г/кг. Подгруппам А раствор глюкозы вводили внутрижелудочно с использованием атравматичного зонда, подгруппам Б – внутрибрюшинно. Концентрацию глюко-

Международный вестник ветеринарии, № 3, 2016 г.

- 157 -

зы измеряли до углеводной нагрузки (фон) и спустя 30, 60, 90 и 120 минут после.

Концентрацию глюкозы определяли в цельной крови с использованием глюко-метра OneTouch Ultra®. Для этого по ходу хвостовой вены животного (как у крыс, так и у мышей) медицинской иглой дела-ли прокол, подносили прибор с вставлен-ной тест-полоской, глюкометр автомати-чески отбирал 1,5 мкл крови. Метод опре-деления глюкозы электрохимический, в основе которого лежит биосенсорный глюкозо-оксидазный принцип. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

В ходе первого этапа исследования у лабораторных мышей и крыс определяли концентрацию глюкозы в перифериче-ской крови спустя 4, 6, 8 и 16 часов голо-дания. Полученные данные представлены в таблице 2.

Из данных таблицы видно, что наи-меньшее значение концентрации глюкозы

в крови у мышей и крыс установлено спустя 16 часов голодания. Однако спустя 8 часов голодания концентрация глюкозы (как у крыс, так и у мышей) была стати-стически значимо ниже по сравнению со значением данного показателя до лише-ния животных корма. Перед измерением концентрации глюкозы спустя 16 часов голодания у животных дополнительно была определена масса тела. У мышей уменьшение данного показателя по отно-шению к массе тела животных до лише-ния корма составило в среднем 5%, у крыс 3%. На основании полученных дан-ных был сделан вывод о том, что опти-мальное время голодания для лаборатор-ных грызунов составляет 8-16 часов.

На втором этапе исследования у мы-шей и крыс проводили ГТТ, глюкозу вво-дили в дозе 2 г/кг внутрибрюшинно и внутрижелудочно. В ходе исследования было установлено, что гипергликемиче-

Таблица 1 Референтные значения концентрации глюкозы в крови здорового человека при проведе-

нии ГТТ

Время измерения Концентрация глюкозы, ммоль/л

Глюкоза натощак 4,1 - 5,9

Глюкоза через 30 мин. после глюкозной нагрузки 6,1 - 9,4

Глюкоза через 60 мин. после глюкозной нагрузки 6,7 - 9,4

Глюкоза через 90 мин. после глюкозной нагрузки 5,6 - 7,8

Глюкоза через 120 мин. после глюкозной нагрузки 4,1 - 6,7

Таблица 2 Концентрация глюкозы в периферической крови (ммоль/л) животных в зависимости от

времени голодания

Вид жи-вотных

Концентрация глюкозы до ли-шения корма

Время голодания, часы

4 6 8 16

Мыши 6,4±0,6 6,0±0,5 5,9±0,3 4,8±0,2* 4,2±0,4*

Крысы 6,8±0,7 6,2±0,3 5,7±0,2 5,2±0,1* 4,3±0,1*

* - р˂0,05 t – критерий Стьюдента

Международный вестник ветеринарии, № 3, 2016 г.

- 158 -

ская кривая у мышей имела схожий ха-рактер вне зависимости от пути введения глюкозы в организм животного (рис. 1, 2).

У крыс при внутрибрюшинном введе-нии углеводной нагрузки наблюдали бо-лее выраженное повышение концентра-ции глюкозы на 30 минуте (рис. 3). Одна-ко к 120 минуте концентрация глюкозы имела сходные значения (рис. 4) и в сред-нем составляла 6 ммоль/л. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На основании полученных данных оптимальное время голодания животных (мыши, крысы) в исследовании составля-ет 8-16 часов. Для проведения ГТТ у мы-шей могут быть использованы два пути введения углеводной нагрузки (внутрибрюшинный и внутрижелудоч-ный). У крыс характер гликемической кривой в зависимости от пути введения

был различным. Для данного вида живот-ных рекомендовано использовать внутри-желудочный путь введения глюкозы. В ходе планирования доклинического ис-следования при выборе пути введения углеводной нагрузки следует учитывать, что внутрижелудочное введение глюкозы является более физиологичным, что по-зволяет адекватно воспроизводить методи-ку ГТТ для оценки метаболизма глюкозы.

Special aspects of glucose tolerance test in small laboratory rodents (mice and rats). M. Goryacheva, M. Makarova ABSTRACT

Glucose tolerance test (GTT) is a labora-tory procedure for estimation of glucose metabolism in the body, when first fasting glucose level is measured, and then – it is checked every 30 minutes within 2 hours after glucose load has been given. In a

Рисунок 1 – Результаты ГТТ у мышей сам-цов после внутрибрюшинного введения глюкозы

Рисунок 2 – Результаты ГТТ у мышей самцов после внутрижелудочного введе-ния глюкозы

Рисунок 3 – Результаты ГТТ у крыс сам-цов после внутрибрюшинного введения глюкозы

Рисунок 4 – Результаты ГТТ у крыс сам-цов после внутрижелудочного введения глюкозы

Международный вестник ветеринарии, № 3, 2016 г.

- 159 -

"classical test" glucose concentration is measured five times: before glucose load (fasting - baseline), in 30, 60, 90 and 120 minutes afterwards. In clinical practice, de-pending on the purposes, the analysis can be performed two or three times. A standard glucose load for a man is 75 g of glucose irrespectively of body weight. The chart characterizing different stages of glucose metabolism is built on the results of the test. Increase of glucose level after a glucose load is called hyperglycemic phase and it reflects characteristics of glucose absorption. De-crease of glucose level is called hypoglyce-mic phase and it indirectly reflects the rate of insulin secretion and sensitivity of tissues to this hormone. The last phase is disturbed in patients with pre-diabetes (impaired glucose tolerance) or diabetes mellitus type 2. Evaluation of hypoglycemic phase has a leading role in the diagnostics of diabetes in patients, if the disease has asymptomatic character. Furthermore, using GTT one can calculate two additional criteria, hyperglyce-mic and post-glycemic indexes, which are also used for estimation of glucose metabolism.

Due to the fact that GTT is highly infor-mative and easy to perform it is widely used in pre-clinical trials. Procedure for perform-ing GTT described in this article makes it possible to obtain reliable results and ade-quately estimate condition of carbohydrate metabolism in laboratory animals. ЛИТЕРАТУРА 1. Селезнева, А. И. Методы рандомизации

животных в эксперименте / А. И. Селез-нева, М. Н. Макарова, А. В. Рыбакова // Междунар. вестн. ветеринарии. - 2014. - № 2. –С. 84-89. 2. Argmann, C. A. Evaluation of glucose homeostasis / C. A. Argmann, M. F. Champy, J. Auwerx // Curr. Protoc. Mol. Biol. - 2007. – Chap. 29, Unit 29B–23. – P.27-73. 3. Considerations in the design of hyperinsu-linemic-euglycemic clamps in the conscious mouse / J. E. Ayala, D. P. Bracy, O. P. McGuinness, D.H. Wasserman // Diabetes. - 2006. - Vol. 55. - P. 390–397. 4. Effect of aging on insulin receptor, insulin receptor substrate-1, and phosphatidylinosi-tol 3-kinase in liver and muscle of rats / C. R. Carvalho, S. L. Brenelli, A. C. Silva, A. L. Nunes, L. A. Velloso, M.J. Saad // Endo-crinology. - 1996. - Vol. 137. - P.151–159. 5. Gender and depot differences in adipocyte insulin sensitivity and glucose metabolism / Y. Macotela, J. Boucher, T. Tran, C.R. Kahn // Diabetes. - 2009. - Vol. 58. - P. 803–812. 6. Current approaches for assessing insulin sensitivity and resistance in vivo: advan-tages, limitations, and appropriate usage/ R. Muniyappa, S. Lee, H. Chen, M.J. Quon // Am. J. Physiol. Endocrino. Metab. 2008. Vol. 294. P. E15–E26. 7. The full expression of fastinginduced tor-por requires beta 3-adrenergic receptor sig-naling / S. J. Swoap, M.J. Gutilla, L.C. Liles, R.O. Smith, D. Weinshenker // J. Neurosci. 2006. Vol. 26. P. 241–245.

По заявкам ветспециалистов, граждан, юридических лиц проводим консультации, семинары по организационно-правовым вопросам, касающихся содержательного и текстуального анализа нормативных правовых актов по ветеринарии, практики их использования в отношении планирования, организации, проведения, ветери-нарных мероприятиях при заразных и незаразных болезнях животных и птиц. Консультации и семинары могут быть проведены на базе Санкт-Петербургской академии ветеринарной медицины или с выездом специалистов в любой субъект России.

Тел/факс (812) 365-69-35, Моб. тел.: 8(911) 176-81-53, 8(911) 913-85-49, e-mail: 3656935@gmail.com