1

ה " סימס טר אביב שנת הלימודים תשס

מחלקה להנדסה ביו רפואית

מעבדת תרבית תאים

אלה ויינר' אחראית מעבדה דר לובה פרייבגר, אמאל איוב: מדריכות

: ש יעורים11-תוכנית ל

רצאה ה–שיעור ראשון הרצאה –שיעור שני

ציוד מעבדתי ובטיחות -מעבדה ראשונה עי קור, הכנת תמיסו ת, שקילת חומרים– מעבדה שניה

פיצ ול תאים – עבודה עם תאים -מעבדה שלישית פיצ ול וספירת תאים – עבודה עם תאים -מעבדת רביעית

היווצרות מושבות–מעבדה חמי שית וספירת מושבו ת צביעה -מעבדה שישית

הפקת חלבונים מתאי ם וקביעת כמות חלבון – מעבדה שביעית בד יקת חיות ת אים , הפשר ת תאים, הקפאת ת אים–מעבדה שמי נית השלמה –מעבדה תשי עית

: כללי מעבדה

המעבדה מתבצעת פעם בשבוע בזמן קבוע -

העבודה במעבדה הנה בזוגות, המעבדה נמשכת שעתיים -

דוחות מסכמים 60%+ בוחן כניסה 30%+ נוכחות 10%: כב הציון סופי מור -

ח מעבדה תוך שבוע לאחר תום המעבדה"יש להגיש דו -

ח למדריך" שבוע אחרי מסירת הדוןח יינת"דו ציון כל -

דוחות מגישים בזוגות -

2

ציוד המעבדה

HOOD –מינדף ביולוגי

, למינדף ביולוגי יש תפקיד חשוב במעבדות ביולוגיות . ואיות ובתעשייה פרמוקולוגיתרפ

:הוא מספק -הגנה על המוצר בעזרת חלל עבודה סטרילי -

,הכרחית לגידול תאים -הגנה על המשתמש בעזרת בידוד של חלל עבודה -

הכרחית במקרה של עבודה עם חומר ביולוגי , מידבק כמו חיידקים ונגיפים פטוגניים

הנפלט הגנה על הסביבה על ידי סינון האוויר - .באמצאות מסנן אוויר

.במעבדת תרבית תאים התפקיד העיקרי שלו ליצור סביבה סטרילית בזמן עבודה עם התאיםעיקרון הפעולה של המינדף מבוסס על הזרמת אווי ר . המינדף מהווה שולחן עבודה אישי

. עב ודה במקום בו נמצא משטח ה, מסונן מ גג המינדף וספיגתו בחלק התחתון של שולחן העבודההמש מש , המשטח מח ורר בדפנות ודרך חורים אלו נשא ב האוויר בצורה הומוג נית אל קיר כפול

ל אחר . מ פ וח שואב א ת כל האווי ר מדפנות כפולות אל ה גג ודוחף א ת האוויר דרך מסנן. כתעלהמפוזר באו פן ) שעבר סינון( האוויר הסטרילי . הוא נכנס לאזור העבו דה, שהאוויר עבר דרך מסנן

. וה בחלל המינדףשות ת , המינדף מת וכנן כך שחלקו הקדמי נמצא בלחץ נמוך מהלחץ השורר בחדר המעבדה

. ומונע דליפ ה חיצונית, לחץ זה יוצר קיר הגנה של אוויר הנשאב פנימה כלפי החוריםהאוויר שנמצא בחלל המינדף הוא סטרילי והאוויר הנפלט מה מי נדף לחלל המעבדה גם הו א

עובר 70%, מהאו ויר יוצא מח לל העבודה של המינדף החוצה לחל ל חדר המעבדה30%רק . סטרילי .מחזור וסינון נוסף וחוזר לחלל העבודה של המינדף HEPA (High Efficiency Particulate Air). מסנן המספק עיקור אוויר במינדף שלנו מסוג שנקרא

.סיליקט עם אלומיניום בניהן-ורוןהוא בנוי משכבות דקות עשויות מסיבים מיקרוסקופיים של ב של 0.3המבנה המיוחד מאפשרת מעבר גזים וחסימה מפני חיידקים וחלקיקים אחרים בגודל עד

. מילי מיקרוןהתנגשות , בלימה, משיכה אלקטרוסטטית,שקיעה: סינון מתרחש בעזרת חמישה מנגנונים הבאים

. ןבתנועה ודיפוזיה של כל חלקיקים העוברים דרך המסנ . ידי טכנאי ם מוסמכים כל שנה-המסנן במינ דף נבדק על

. ידי פיקוד אלק טרוני-היחידה מבוקרת על . לוח הפיקוד של המינדף מאפ שר של יטה נוחה במינדף .במקרה של סתי מת מ סנ ן תופעל הת ראה

. לפני שמת חי לים לעבוד במינדף יש לחט א את מ שטח העבודה על ידי פיזור כוהל אתנול

3

Incubator האינ קובטור מס פק תנ אים . הוא מכשיר חשוב בו שומרים ומגדלים ת איםאינקובטור

, האינקובט ור שומר באופן קבוע על טמ פרטו רה. סביבתיים קבועים המ תאי מים לג ידול תאים לוח הפיקוד שנמצא על פני השטח החיצוני של . לחות ולחץ פחמן דו חמצני ברמות הנדרשות

במקרה שי ש ירידה או עליה של אחד , האינקובטו ר מראה לנ ו ערכים של הפרמטרים החשוביםמי ד נדלקת מ נורה , למשל, מו פי עים על הלו ח הפיקוד החיצוני סי מני מצו קה, מפרמ טרים אלו

כך מתאפש רת השגחה על . אדומה מה בהבת ומאו תת ת שאחד הערכים אינו מצוי בערכו הרצוי .רהתנאים בת וך האינקובטו

מעלות צלזיוס בדומה לטמפרטורה של גוף היונקים 37הטמפרטורה באינקובטור עומדת על . שנמצאת סביב האינקובטורJacket Water מעטפת מים ונשמרת באמצעות

. את רמת הלחות הגבוהה הנדרשת משיגים על ידי הוספת מים במגש המצוי ברצפת האינקובטורלחץ הפחמן הדו . שמחובר עם מונה לאינקובטור2COעזרת בלון לחץ הפחמן הדו חמצני מסופק ב

- יותר גבוהה מהריכוז באטמוספרה שמכילה לא יותר מ10פי , 5%חמצני באינקובטור עומד על 0.3%.

באופן רציף לתא האינקובטור הכרחית לגידול ושמירה על תאי חיות CO2שמירה על הספקת גז . בתרבית לאורך זמן

מנגנון הפעולה שלו מבוסס על יכולת . באינקובטורCO2 משמש לבקרת רמת אדום-נפראחיישן איCO2 ככל שרמת . לבלוע אור בתחום אנפרא אדוםCO2 באינקובטור גבוהה יותר הבליעה של אור

מתחילה לפעול 1% באינקובטור יורדת או עולה ב CO2כאשר רמת . אנפרא אדום גבוהה יותר . הזעקה

חיישן טמפרטורה מבוסס על העובדה שהתנגדות של נגד תלויה ב טמפרטורה שלו. התנגדות של במערכת המדידה ישנו . לכן הוא רגיש מאוד. טרמיסטור תלויה בטמפרטורה באופן אקספונציונלי

משתנה הזרם , כאשר משתנה ההתנגדות בעקבות שינוי טמפרטורה. חיישן שזורם בו זרם חשמלימערכת בקרת טמפרטורה מפעילה את ההזעקה במצב ירידה או . פעיל הזעקההשינוי מ, במעגל

.עליה של טמפרטורה במעלה אחת האינקובטורים המודרניים הם בעלי לוחות פיקוד אלקטרונים המכילים תוכניות המספקות מעקב

.אחר יציבות התנאים בתוכםכנאי מהחברה שמספקת שירות ידי ט-בדיקה וכיול של האינקובטורים מתבצעת פעם בחצי שנה על

. למעבדות ביולוגיות

4

Microscope מ כשיר הסתכלות או פטי בעזרתו מק בלים דמויות מוגדלו ת של פרטים ו הנמיקרוסקופ

. קטנים שאי נם ניתנים להבחנה בעין ערומה :מיקרוסקופ נועד לשלוש מטרות

, הגדלת תדמית - ,מצב המאפשר ראייה בעין של אדםלהביא התדמית ל - . בידוד מרכיבי תדמית -

המיקרוס קופ יכול . ההגדלות ש אפשר לקבל בעזרת מיקרוסקופ תלו יות בסוג המיקרוס קופ אפשר היה אפיל ו -לפני עידן המיקרוס קופים אי . להוות דוגמ ה טובה לת לות הביולוג יה בפיסיק ה

ד מהמכ שירים החשובים המשמשי ם הוא אח, מיקרוס קופ. לאשר א ת עצם קיומם של התאי םסופר ים מס פר ת אים , תנועו ת של תאים חיים, בעזרתו לומ דים מבנה של תאי ם ורק מות. בביולוגיה

קו טר בינוני של תא אופיינ י של , מיקרון20קוטר של תא אופיינ י לבעלי חיים בערך . לצורך ניסויים .חיידקים רק מיקרון א חד

שמורכב ממערכת microscope lightקרוסקופים הנקראים במעבדות ביולוגיות עובדים עם מיעל שולחן מניחים דוגמה . שולחן וצינור, מערכת מכנית מכילה הגוף. אופטית ומערכת מכנית .שהסתכלת דרך צינור

מערכת אופטית כוללת שילוב של שתי עדשות שמייצרות באופן אפקטיבי מכשיר הגדלה ומעבה condenser .

העדשה קרובה לדוגמה , ocular or eyepieceלעיניים נקראת עדשה עינית העדשה קרובה ועדשה עינית , עדשת עצם מגדילה הגדלה ראשונה. objectiveהסתכלות נקראת עדשת עצם

.הגדלה נוספת, מגדילה את התמונה המוגדלת מעדשת עצם

5

. האור ממוקד על הדוגמה שמונחה על שולחן .מתחת מערכת עדשות, הדוגמה מלמטהבמיקרוסקופ רגיל מאירים את

.עיקרון פעולה של מיקרוסקופ מתואר בתמונה הבאה

Light Microscope

הגדלה של מיקרוסקופ נתונה על ידי הנוסחה g x dv / (f0 x fe)

.מ" ס25וה מרחק ראייה של עין אנושית שו - dvכאשר

g -מרחק בין שתי עדשות . f0 -מרחק המוקד של עדשת עצם . fe -מרחק המוקד של עדשה עינית .

ישנו מיקרוסקופ המיועד רק למעבדות תרבית תאים כלומר לראיה של תאים הוא נקרא

6

. inverted microscopeמיקרוסקופ הפוך מאירים את , )צלחת(מכוון שדוגמה הם תאים דבוקים על שטח מוצק , פוךבמיקרוסקופ ה

.מכוון העדשה עינית, הדוגמה מלמעלהועל " X10"כלומר אם על עדשה עינית רשום , ההגדלה שניתן לקבל בעזרת עדשה נחקקת עליה

. מגודל אמיתי של הדוגמה200נקבל הגדלה פי " X20"עדשת עצם

Inverted Microscope מיקרוסקופ הפוך

תפקידה לאפשר עברת קרני אור ולמקד . העדשה שנמצאת בעין האדם, כדאי להזכיר עוד עדשה וקולטנים (cone cells)מקום בו נמצאים קולטנים המבדילים בין צבעים שונים , אותם על רטינה

גבלת ביכולת לשנות צורה לכן כאשר העדשה מו. (rod cells)מבדילים בין עוצמות שונות מרחק . היא לא מסוגלת למקד התמונה על רטינה, מתקרבים יותר מידי לעיןםהאובייקטי

. ם" ס25אופטימלי הוא

7

ריה של התפתחות מיקרוסקופיםהיסטו

ליוונה ו ק -המיקרוס קו פ ראשון של אנטון ון. המיקרוס קו פים הראשונים היו פשוטים ביותר. ל א היה אל ה חרוז זכוכית מלו ט ש היטב המורכב על גבי לוח מ תכת, למשל, 16במאה

או , אל פים-פשר ים הגדלה פ י כמה עשרות מא , בעלי מ ערכת מסוב כת, המיקרוס קו פים המודרניים . מאו ת אל פי ם

.19דוגמא של מיקרוסקופ אופייני של מאה

. 20דוגמא של מיקרוסקופ אופייני מתחילת מאה

8

- BALANCE - משקל בעזרת המש קל האנלי טי הנמצא במ עבדתנו אפ שר לשקול -

. ג רם100עד ) מיליגר ם1 ( גרם 0.001 משקלים בטווח מ באו פן אוטו מטי על ידי כיול משקלי ם מודרניים מתבצע

. מכשיר המשקל עצ מו או בעזרת הפעל ת תוכנית מחשב

Aspiration Pump-משאבה משמשות לשאיבת נוזלים שונים בהם משתמש , הצמודות לשולחן העבודה במינדף, המשאבות

בעזרת המשאבות ניתן לשאוב נפחים גדולים בזמן קצר. החוקר בעת עבודתו עם תרביות תאים .ולהקל על תנאי העבודה במעבדה

eterM PHמד חומציות . בהן משתמשים במעבדה, של תמיסות שונות PH לבדיקת רמת ה מד החומציות משמש

ובמיוחד לגידול התאים דרושות תמיסות עם רמת RNA,DNAלהפקת , לניסויים ביוכימייםPHאחד מתנאי הגידול הראשונים , התאיםאם יש בעיה בגידול , בדרך כלל. מסוימת ומדויקת

. של המדיום בו גדלים התאיםPHשבודקים הוא רמת ה

Centrifuge צנטריפוגה . תו ך שימוש בכוח צנטריפוג לי, צנטריפוגה היא מ תקן להפרדת מר כיבים בעלי צפיפות שונ ה בנוזלרפואיות משת מש ים במעבדות . מבחנות עם נוזל מסתובבות במהירות גבוהה סביב ציר מרכזי

במעבדות מ חקר משת משים בצנטריפוגה ל משל . בצנטריפוגה בעיקר להפרדת מרכיבי הדם RCF -ו לפעו לה זאת נדרש כוח צנטריפוגלי יחסי ,להפרדת הת אים מהנוזל בתרחיף התאים

relative centrifugal force) .( כלומר ) rotations per minute - rpm(מקובל לב ט א מהירות צנטריפוגצי ה בסיבובים לדקה

.מספר סיבו בים ביחידת זמן

9

ניתן לבטא כוח צנטריפוגלי יחסי כפונקציה של מהירות סיבובים ומרחק בין הדוגמא והציר המרכזי .של צנטריפוגה

RCF = (1.12 x 10-5) r (rpm)2

relative centrifugal force in g – RCF radius of centrifuge in cm – r rotations per minute - rpm

g - gravity תאו צת כובד -

על מנת להפריד מרכיבים בתמיסות שונות בעזרת צנטריפוגה יש לקבוע את

כמו כן . על פנל החיצוני שלה, מהירות הסיבוב ומשך זמן העבודה הנדרשיםת עם יחידת ישנן צנטריפוגו. יש לדאוג לאיזון משקלי המבחנות במכשירטמפרטורה זו נדרשת , קירור המאפשרת עבודה בטמפרטורה נמוכה

בצנטריפוגות האלו קובעים טמפרטורה . להפרדת מרכיבים מיוחדים. מתאימה בנוסף למהירות הסיבוב ומשך זמן העבודה

סיבובים לדקה 100,000 פועלות במהירות של עד תאולטרא צנטריפוגו מכילות משאבת וואקום תאולטרא צנטריפוגו. 600,000ן מגיע לוהכוח הצנטריפוגלי היחסי שלה

.שפולטת אוויר חם שנוצר בזמן עבודת הרוטור

Spectrophotometer ספקטרופוטומטר

. המושג ספקטרופוטומטר משמש כשם כללי למכשירים כולל פוטומטרים וקולורימטרים בולעים או פולטים אנרגיה ספקטרופוטומטריה מבוססת על העובדה שחומרים שונים

.אלקטרומגנטית באורכי גל שונים בין תחום של גלי אולטראסגול , במעבדות מחקר ומעבדות רפואיות עובדים בטווח אורכי גל רחב

700-800 ננומטרים ואינפרא אדום 700 -400לתחום גלים ויזואליים , ננומטרים200-400. גלים אור נראהרוב המכשירים פועלים בתחום של. ננומטרים

10

בספקטרומ טר קיים מקור . התמונה מ ת ארת את ע יקרון הבניה והפעולה של הספק ט רופוטומ טר. סלק טור א ורכי גל מא פשר עברת אנרגיה של אורך גל מס וים. של אנרגית קרינה לבדיקת הדוג מה

המכילה את ) מ אות בס פקטרו פוטו מטרמב חנה מיוחדת לבדיקת דוג(האנרגיה עוברת דרך הקיווטה . חלק מה קרן יבלע בדוגמה וחלק יעבור הלאה, במה לך מעבר הקרן דרכה. דוגמה

:היחס בין העוצמה ההתחלתית לעוצמה העוברת ייתן לנו את הצפיפות האופטית על פי הנוסחה

OD = log10 I/Io OD – optical density ( צפיפות אופטית(

ותוצאות הבדיקה המתקבלות , הגלאי יוצר מטען חשמלי יחסי לכמות האנרגיה שנבלעה בו

.טומטרכצפיפות אופטית על צג הספקטרופו מדידות ריכוז וכמות של חומר כימי או ביולוגי הם בדרך כלל צעדים ראשונים והכרחיים כמעט

.בכל הניסוייםמדידת ריכוז על ידי בליעת אור בעזרת מכשיר ספקטרופוטומטר היא אחת השיטות השכיכות

, יםבאורך גל מסו, הטכניקה מבוססת על מדידת בליעה על ידי הדוגמה הנבדקת. והנוחות הבליעה נמדדת ככושר בליעה. והשוואתה עם בליעה בדוגמאות סטנדרטיות בריכוזם ידועים

absorbance) A-( הנקראת בדרך כלל צפיפות אופטית).(OD-optical density

11

ציוד מעבדתי ובטיחות–מעבדה ראשונה הדרכת בטיחות במעבדת תאים .1

. ולא לעשן ב מעבדה, לא לשתו ת, לא לאכול • .לבוש חלוק ים בזמן עבודה במעבדהל •צלחות ו מבחנות משו מ שים רק בפחים מיוחדים המת אימ ים לה ם , טי פים, לזרוק פיפ ט ות •

).'פח מיוחד לטיפים ופיפ טות וכו, יש פח מיוחד רק לצלחות ומבחנות( .לנקות את מקום העבו דה לפני ואחרי העבודה • . עבודה בחומרים כימיים תעשה בכפפות •יש ל השתמש , )כפפות מיוח דות, מסיכה(דרשת עבודה עם אמצ עי הגנ ה במעבדות בהן נ •

. באמצעי הה גנה .לדווח מיד למדריך המעבדה על כל תקרית תאו נה או מקרה חריג • .בקצה המעב דה נמצאת דלת יציא ת חירום • .במעבדה קיימת תיב ת ע זרה ראשונה •

סכנות במעבדת תאים

פריט סיכון עזרה

זכוכיות שבורות זיהום, פציעה עזרה ראשונה במעבדה )זכוכיות(פיפטות פסטר זיהום, פציעה עזרה ראשונה במעבדה כלי עבודה חדים זיהום, פציעה עזרה ראשונה במעבדה

אין סכנהRadiological לא עובדים עם חומר רדיואקטיבי במעבדתנו

Biological לא עובדים עם וירוסים ותאים הומניים במעבדתנו

:בודה עם ציודהדרכת ע.2

: אופן ביצוע העבודה במינדף . 70%לפני ואחרי עבודה במינדף יש לחטא את משט ח העבודה על ידי פיזור כוהל אתנול בריכוז של

.נא להחזיר כל החפצים למקו מם א חרי סיום עבודה במינדף : וודא שאתה יודע

? כיצד פותחים וסוגרים את מ סך המגן - ?ות הצ מודות למינ דף כיצד מפעי לים את המ שאב-

:נוהל עבודה עם המש קל , הדלק א ת המשק ל- , ) אפ ס את ה מש קל כשהכלי עליו-אם ברצונך לשקול בת וך כלי (, אפ ס אותו - ) !מצד דים ומלמע לה( הקפד לס ג ור את דלתו ת הזכוכית של המשק ל היטב -

:ודא שאתה יודע ? כיצד להפעיל את המש ק ל - ?כיצד לאפס את המש קל -

12

?ניתן ל אפס משק ל כשעליו כלי מדידה האם - . יש לקרוא א ת ההוראות על יד המשקל? כיצד שוקלים תרחיף תאים הנמצ א במבחנה -

: מיקרוסקו פ : וודא שאת ה יודע

? כיצד להדליק א ת המי קרוסקו פ - ? איך מזיזים את שולח ן העבדה -

? איך ממ קדים את הת מו נה - ? כיצד להדליק את ה מסך של המיקרו סקופ - ? כיצד להעביר התמונה א ל המסך - ?אילו הגדלו ת אפשר לק בל בעזרת המיקרוס קופ -

, מקד את המי קרו סקופ עד ש תוכל להבחין בתאים, בקש מהמד ריך צלחת תאים ?תאר מה א ת ה רואה

, כוון את המ יקרוסקו פ ע ד שתקבל ת מונה ממו ק דת של מכס ה צלחת הת אים ?תאר מה א ת ה ראה

: ורנוהל עבודה עם אינקובט

, פתח את דלת האינקובטור החיצונית הוצא את צלחת , התבונן דרך דלת הזכוכית הפנימית ואתר את הצלחת אותה אתה רוצה להוציא

. התאים וסגור את הדלת הפנימית והחיצונית של האינקובטור במהירות האפשרית . י פתיחת האינקובטור לזמן ארוך גורמת לירידת טמפרטורה ורמת פחמן דו חמצנ

: ודא שאתה יודע

.היכן לוח הפיקוד - ? מה הטמ פ רטורה שמראה הלוח - ? 2CO מה רמת -

של מדיום pHהקשר בין אינקובטור ושמירה על רמת . CO2אינקובטור מסו ג שנמצ א במעבדתנ ו יכול לשמור על טמפר טורה ועל רמת

ביחד עם המהווה מערכת בופר שNaHCO3 (bicarbonate –buffered)מדיום הגידול המכיל

לרוב . במדיום הנדרשת לגידול תאיםpH מאפשרת שמירה על רמת CO2הספקה חיצונית של .7.4 אידיאלי לגידולם הוא pH, התאים

לכן , של מדיום pHחלה עליה ברמת ה, כאשר תרביות התאים נשמרות באוויר האטמוספרה– bicarbonateוכן במדיום המהווה CO2ם השומרים על רמת בתנאי מעבדה יש צורך באינקובטורי

buffered . בעת עבודה עם תרביות תאים בחלל המעבדה נחשפות תרביות התאים לאוויר האטמוספרה

דקות מחוץ 15לאחר ששהו תרביות התאים למשך זמן של , CO2) 0.3%המכיל לא יותר מ ( על CO2) 5%המכיל ( דקות בסביבת האינקובטור 30 ודרושים pHלאינקובטור חלה עליה ברמת

.pH7.4 חזרה ל pHמנת להוריד את רמת כתוצאה מזה נוצרת חומצה פחמנית. מתמוסס במדיום כפונקציה של טמפרטורה CO2גז

H 2CO3 ).(carbonic acidהחומצה הפחמנית תתפרק ליונים חיובים ושלילים .

13

H2O + CO2 ⇔ H2CO3 ⇔ H+ + HCO3-

HCO3יוני CO2כך נוצרים בנוכחות - .

HCO3בנוכחות של יוני :מתקיימות התגובות הבאות -

HCO3

- ⇔ H+ + HCO3- ⇔ H2CO3 ⇔ H+ + CO3

2-

Meter PH עם עבודה.3

, PH Meterכיול . א . איםמדיום לגידול ת של PHבדיקת . ב

מטר PHכיול

בעת הכיול אנו מווד אים שהמכ שיר מודד בצורה נכונה ומכוונים אותו ל מד ידה : מהו כיול . מדויקת

PH מטר מ כיילים בעזרת תמי סות בעלות רמת PH 4 ידועה של PH7 ו PH . מטר יש לבצע אחרי כל הדלקה של המכשיר ולפני המדידה הראשונה מבין תמיסו ת PHכיול

. שלהם איננו ידועPHשרמת ה . מטר ול כל אחד מהם הוראות הפעלה מש ל וPHבמעבדה ישנם מספר מ כשירי

. של המדיום לגידול ת איםPH ולמדוד את רמ ת PHלה תנסו ת בכיול ומדידת : מטרה . מטרPH :כלים

, PH=7 ,4 =PH ידוע של PHת מיסו ת בעלו ת : חומרים ר מטPHנא לעבוד בכפפות עם תמיסות לכיול

, מטר PH מים מזוק קים לשטי פ ת חישן ה- . מדיום לגי דול תאים -

מטר יש לשטוף אותו במים מזוק קי ם PHה ) חישן( בין שימוש לשימוש באלק טרודת שים לב .זאת על מנת ל א להע ביר שאריות של תמיסה אחת לשניה ). ברק לנג! לא לש פשף( בעדינות וולייבש

. מטר-PHכיילו את אחד ממכשי רי ה.1 של מדיום לגידול אשר הוחזק באינקובטור לפחות חצי שעה עם פקק חצ י PHמדדו את רמת ה . 2

. פתוח .יש לסגור א ת הפק ק של מבחנה עם מדיום לפני שמוצאים את מבחנה מהאינ קובט ור - .PH א ת הפק ק של המבחנה רק בזמן מדידת יש לפתוח -

דק ות א ו 10 של מדי ום לגידול א שר הוחזק פתוח באווי ר בשולחן יותר מPHמדדו את רמת ה . 3 ?מה קיבלת ם . מדיום שהוחזק במקרר

: תוצאו ת

PHרמת ה תמיסה מדיום לגידול אשר הוחזק לפחות חצי שעה באינקובטור

באוויר או במקררמדיום לגידול אשר הוחזק פתוח

14

הדרכת עבודה עם פיפטורים חשמליים וידניים. 4

ipettePפיפטור . פיפטורים הם המכשירים השכיחים ביותר לעבודה עם נוזלים במעבדות ביולוגיות וכימיות

. בעזרת הפיפטורים מעבירים נפחי נוזל מדויקים ממקום למקום בפיפטור חשמלי משתמשים . פיפטור חשמלי ופיפטור ידני: יםישנם שני סוגים של פיפטור

לפיפטור . ובפיפטור ידני משתמשים לעבודה עם נפחים קטנים, כשעובדים עם נפחים גדוליםחשמלי מחברים צינורית דקה וארוכה הנקראת פיפטה ולפיפטור ידני מחברים צינורית קטנה

יש פיפטות . זכוכית והם בעלי גדלים שוניםהפיפטות וטיפים עשויים פלסטיק או . הנקראת טיפכל פיפטה ופיפטה נמצאת בשקיות . שעליהן מסומנות שנתות המראות את הנפח הנלקח בעזרתן

. הטיפים נמצאים בקופסאות סטריליות. הסגורה באפן הרמטי לשמירת סטריליות, משלהןניילוור העבודה הסטרילי של על מנת לשמור על סטריליות פותחים טיפים ופיפטות רק בתוך אז

.המינדף

: פיפטורים ? התבונן בפיפטורים מה תחום הנפחים שניתן למדוד בעזרתם וודא שאת ה יודע כיצד מכוונים א ת , כוון את הפ יפטור למיד ה מסוי מת על פי דרישת המדריך

. הפיפטור : בעת העבודה עם הפיפטור חשוב לזכורשים לב

השניה לצורך , הראשונה לצורך לקיח ת מידה מדו יקת: י נקודות התנגדו ת לפיפ טור יש שת - . הוצאת הנפ ח

.יש לשחרר את ראש הפ יפטור בעדינות - ) בקש מהמדריך להדגים על פיפטו ר מקולק ל מה קורה א ם משחררים לא בעדינות (

. יש לשחרר את הטיפ מפיפ טור בעדינות בעזרת כפתור מיוחד הנמצא בצדו- . לב שאין בועות אוויר בעת לקיח ת הנוזלשים -

. וודא שאתה מרגיש א ת רמת ההתנ גד ות הראשונ ה של הפיפט ור. לחץ על רא ש הפיפטור בעדינותוודא שלאחר שהרגשת א ת רמת ה ה תנגדות הר אשונה ניתן להמשיך ול לחו ץ , לחץ על הפי פטור שוב

. על הפיפ טור ! שחרר את ראש הפיפ טו ר בעדינות

פיפטור ידני

חשמלי פיפטור

15

ל מי ם על ידי לחיצה עדינה עד לנקודת ההתנגדות הראשונה ושקול האם " מ0.5קח מידה של ? ג רם 0.5קבלת

? ל על ידי לחיצה מלאה ע ל הפיפטור כמה גרם קיבלת כעת " מ0.5קח מידה של ?ל של מים וודא שיש בועות אוויר כמה גרם מים קבלתם כע ת " מ0.5 קח

". פיפיטציה "רא ת בעבודה עם תאים נוהגי ם לבצע פעו לה הנקפעו ל ת הפיפי טצי ה מערבבת את . ה יא פעול ה ש ל שאיבת נו זל והוצא תו בעזרת הפי פטורפיפיטציה

.תרחיף התא ים

. שים לב כיצד שואבים וכיצד מוציאים נוזל בעזרת הפי פטור החשמלי: עבודה עם פיפטור חשמ לימ מקצה הפי פ טה " בשני סבעת השימו ש בפיפטות יש להקפי ד שלא לשאוב יותר מגובה הנמוך

שאיב ת , אינן סגורות בצדן העליון בחומר סופג) פיפטות זכוכיות(מכיוון שפיפטות פסטר . הנראה . יתר עלולה לגרום לס תי מת הפיל טר ולגרימת נז ק לפיפ טור

תוצאות שקילת נפחים שונים עם פיפטורים 0.5ל עד " מ5-פיפטור מ

ל"מ מל עד 1-פיפטור מ

100 טרמיקרו לי

מיקרו 20-פיפטור מ מיקרו 200ליטר עד

ליטר

פיפטור חשמלי

4.5 ל"מ

3.2 ל"מ

520 מיקרו ליטר

852 מיקרו ליטר

45 מיקרו ליטר

153מיקרו ליטר

3.7 ל"מ

ממוצע ממוצע ממוצע ממוצע ממוצע ממוצע ממוצעסטיית

התקןסטיית התקן

סטיית ןהתק

סטיית התקן

סטיית התקן

סטיית התקן

סטיית התקן

standard.- והערכת סטיית הת קן Average -נא לחשב את הנפח הממוצ ע של כל החזרות deviationהנתונים הא לו ניתן לחש ב בעזרת התוכנה ב .Microsoft Excel

:דיון

?מה חשיבותם של המכשירים אותם הכרתם .1 ?ודה עם הפיפטוריםמה הן מסקנותיכם לגבי העב .2 ? איזה פיפטור מדויק יותר .3 ?למה התקבלו אי דיוקים .4 ?מה הן מסקנותיכם מהתוצאות שקיבלתם? כיצד תשפרו את עבודתך עם הפיפטורים. 5

? מתר חשים תהלי כים ביוכימייםpHבאיזה ? pH מה חשיבות ה .6

16