Федеральное государственное образовательное учреждение высшего

профессионального образования «Московская государственная академия

ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина»

На правах рукописи

КУДИНОВА Татьяна Анатольевна

Антимикробная активность препарата Миковелт

и его применение при дерматомикозах

и раневых инфекциях животных

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,

микология с микотоксикологией и иммунология

Диссертация на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор

Грязнева Т.Н.

Москва - 2010

2

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………..………………………..

1.1. Распространенность дерматомикозов на территории России….

1.2. Восприимчивость разных видов животных к возбудителям

трихофитии и микроспории...………………………………………………

1.3. Биопрепараты для специфической профилактики

дерматомикозов и их эффективность………………………………………

1.4. Терапевтические средства, применяемые при лечении больных

дерматомикозами животных.………………………………………………

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ…………………….……….

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ………………..

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ……………………………….

2.2.1. Определение бактерицидной и противогрибковой

активности Миковелта in vitro …………………..….….……........................

2.2.1.1. Определение бактерицидной активности Миковелта

в отношении тест-штаммов бактерий …………………………………

2.2.1.2. Определение противогрибковой активности Миковелта

в отношении дрожжеподобных грибов рода Candida……………………..

2.2.1.3. Определение противогрибковой активности Миковелта

методом двукратных серийных разведений в жидкой среде………………

2.2.1.4. Определение противогрибковой активности Миковелта

методом диффузии в агар Сабуро……………………………………………

2.2.2. Определение острой и хронической токсичности

препарата Миковелт на организм лабораторных животных……….………

2.2.3. Токсикологическое действие Миковелта на организм

сельскохозяйственных и мелких домашних животных……………………

2.2.4. Изучение антимикробного действия Миковелта при раневых

инфекциях у белых мышей и кроликов……………………………………..

4

11

11

17

27

36

45

45

51

51

51

56

60

64

68

88

90

3

2.2.5. Изучение противогрибковой эффективности Миковелта

на моделях кандидозной инфекции у белых мышей и кроликов ……….

2.2.6. Изучение эффективности Миковелта на моделях

дерматомикозов у морских свинок и кроликов……………………………

2.2.6.1. Применение Миковелта при дерматомикозах у морских

свинок и кроликов, вызываемых дерматофитами родов Trichophyton и

Microsporum.…………………………………………………………………

2.2.6.2. Эффективность Миковелта при дерматомикозе

морских свинок, вызванном эпидермофитоном……………………………

2.2.7. Изучение бактерицидного, противовоспалительного

и ранозаживляющего действия Миковелта при раневых инфекциях

животных……………………….……………………………..……………...

2.2.8. Оценка эффективности обеззараживающего

и пролонгированного действия Миковелта при обработке кожи

инъекционного и операционного полей у животных…………………….

2.2.9. Терапевтическая эффективность Миковелта при

дерматомикозах сельскохозяйственных животных….……………………

2.2.10. Терапевтическая эффективность Миковелта при

трихофитии и микроспории мелких домашних животных ………………

2.2.11. Изучение фармакокинетики и сроков выведения

остаточных количеств Миковелта из организма крупного рогатого скота

и овец после его курсового применения……………………………………

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ……..............

4. ВЫВОДЫ ………………………………………………….………..

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ

НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ………………………………………………..

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ

ВЫВОДОВ……………………………………………………………………

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ…………………

ПРИЛОЖЕНИЯ………………………………………………………….

95

97

97

106

108

120

124

131

137

141

148

150

151

152

165

4

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Дерматомикозы животных представляют серьез-

ную медико-социальную проблему во многих странах мира, так как больные

животные часто служат источником заражения людей (2, 11, 67).

В последние годы дерматомикозы разных видов животных приобретают

все более широкое распространение на территории РФ. Это связано с ростом

у населения числа мелких домашних животных; увеличением численности

бродячих животных, служащих основным источником возбудителей; с вы-

сокой восприимчивостью собак и кошек к заражению; недостаточной эффек-

тивностью специфических средств профилактики дерматомикозов; высокой

заболеваемостью животных дерматитами, которые осложняются грибковыми

инфекциями. Все эти факторы способствуют поддержанию неблагополучия

по дерматомикозам животных в городах и других населенных пунктах Рос-

сии (7, 15, 28, 34, 59, 92).

Наиболее часто у сельскохозяйственных и домашних животных возбуди-

телями трихофитии являются виды грибов рода Trichophyton: T.verrucosum,

T.equinum, T. mentagrophytes и T. gallinae; микроспории – рода Microsporum:

M.canis (M.lanosum), M.gypseum, M.equinum (19, 23, 26, 30, 41, 85, 103, 112).

По данным ряда отечественных учёных (35, 37, 38, 54, 71), в настоящее

время зафиксировано 18 видов дерматофитов, вызывающих дерматомикозы у

мелких домашних животных.

Маноян М.Г. с соавт. (51) считают, что на дерматомикозы приходится

55% от всех болезней, проявляющихся поражениями кожи.

Гордиенко Л.Н. (28), проведя статистические исследования по заболева-

емости животных дерматитами, считает что заболеваемость животных дер-

матомикозами составляет - 73%.

По наблюдениям Gaskel R. и Bennet М. (20) ведущая роль при дермато-

микозах принадлежит Microsporum canis (более 90% кожных болезней кошек

5

и 50-70% собак) и Trichophyton mentagrophytes (70 и 60% соответственно).

Дерматомикозы, ранее считавшиеся спорадическими заболеваниями, в

настоящее время протекают в виде эпизоотий. Индекс заболеваемости среди

собак и кошек составляет 1592-6003 (13, 22, 35, 49, 53, 56, 97).

Основными источниками возбудителей микроспории и трихофитии яв-

ляются больные животные, которые заражают здоровых контактным путем.

Заражение происходит в основном через поврежденные участки кожи - тре-

щины, царапины, ссадины и др. Важную роль в передаче возбудителей игра-

ют зараженные помещения, мебель, предметы ухода, снаряжение (ошейники,

шлейки, намордники и др.). Особую опасность для животных и человека

представляют инфицированные бездомные собаки и кошки (11, 24, 61, 87).

Большую роль в возникновении кожных заболеваний играет низкая ре-

зистентность организма, хроническое течение ряда вирусных и паразитар-

ных инфекций, неблагоприятные экологические факторы, наличие эктопара-

зитов, неудовлетворительные санитарно-гигиенические условия в местах со-

держания и выгула животных (35, 51, 66, 72, 95, 116, 123, 127, 128).

Кроме того, многие авторы отмечают, что при ввозе в страну племенно-

го скота из-за рубежа, он, как правило, заболевает трихофитией, а примене-

ние вакцины ЛТФ-130 не приносит ощутимых результатов. В дальнейшем на

фоне пониженной резистентности организма такие животные заболевают

другими инфекционными болезнями, например, некробактериозом, и их вы-

браковывают (49, 63, 77, 79, 81, 82, 91).

Несмотря на существование многочисленных современных наружных и

системных фармакологических средств, их терапевтическая эффективность

остается достаточно низкой, поэтому проблема лечения дерматомикозов по-

прежнему актуальна не только для ветеринарии, но и для медицины (35, 139).

Следует учесть, что вакцины против дерматофитозов (Вакдерм, Поли-

вак-ТМ, Микродерм и др.) рекомендуется применять мелким домашним жи-

вотным с 1-1,5-месячного возраста. Однако новорожденные животные очень

6

чувствительны к возбудителям и болеют дерматомикозами, иногда в тяже-

лой форме, а иммунная система у них еще не сформировалась (35, 68, 70, 99).

По данным Саркисова А.Х. с соавт. (77), имеются случаи неэффективно-

сти вакцинотерапии у некоторых пород кошек, в частности, персидских.

Головина Н.П. с соавт. (25) указывают, что лечебная эффективность

вакцины Поливак-ТМ у слабых, истощенных животных, имеющих наруше-

ние обмена веществ и пораженных эктопаразитами, снижается. Применение

вакцины Вакдерм у самок не рекомендуется во второй половине беременно-

сти.

В настоящее время появилось значительное количество новых специфи-

ческих лечебно-профилактических средств как отечественного, так и зару-

бежного производства для борьбы с дерматомикозами. Часто противогриб-

ковые препараты имеют высокую стоимость, рассчитаны на длительный пе-

риод применения и имеют ряд противопоказаний, что делает их малодоступ-

ными для использования ветеринарными специалистами и владельцами жи-

вотных.

В связи с вышеизложенным, важным является создание новых, экологи-

чески безопасных противогрибковых препаратов для наружного применения,

обладающих как фунгицидной, так и антибактериальной активностью, име-

ющих низкую себестоимость, высокую терапевтическую эффективность, от-

сутствие противопоказаний.

Поэтому, разработка и оценка эффективности новых противогрибковых

средств для наружного применения является актуальной задачей для ветери-

нарной науки и практики.

Цель и задачи исследований. Цель исследований – определение анти-

микробной активности, безопасности и терапевтической эффективности пре-

парата Миковелт при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов

животных.

Для решения были поставлены следующие задачи:

7

1. Определить противогрибковую и бактерицидную активность Мико-

велта in vitro.

2. Определить острую и хроническую токсичность препарата.

3. Изучить противогрибковое и бактерицидное действие Миковелта при

дерматомикозах и раневых инфекциях экспериментальных животных.

4. Определить противовоспалительное и ранозаживляющее действие

Миковелта.

5. Определить эффективность обеззараживающего и пролонгированного

действия Миковелта при обработке кожи инъекционного и операционного

полей у мелких домашних животных.

6. Определить терапевтическую эффективность Миковелта при дерма-

томикозах сельскохозяйственных и мелких домашних животных.

7. Составить проект нормативной документации на препарат Миковелт

с целью регистрации его для применения на территории РФ.

Научная новизна работы.

1. Впервые, для ветеринарной практики предложено новое лекарствен-

ное средство Миковелт на основе отечественной антимикробной субстанции

Велтон (0,1%), изопропилового спирта (70%) и метиленовой сини (0,045%),

обладающее противогрибковой и бактерицидной активностью и предназна-

ченное для лечения разных видов животных при дерматомикозах и раневых

инфекциях.

2. Доказано, что субстанция Велтон может быть использована в качестве

основного компонента лекарственных средств для наружного применения

при трихофитии, микроспории, эпидермофитозе и кандидозе в концентрации

не менее 62,5 мкг/мл.

3. Установлено, что препарат Миковелт безвреден для животных и не

обладает сенсибилизирующими и кумулятивными свойствами.

4. Установлено, что дерматомикозы у собак в 46,9% случаев вызывает

T.verrucosum, в 40,6% случаев – T.mentagrophytes, в 12,5% случаев – M.canis.

8

Причиной дерматомикозов кошек в 59,3% случаев является M.canis, в 29,6%

случаев – M.gypseum, в 11,1% случаев T.mentagrophytes. В 100% случаев те-

лята, больные дерматомикозами, были заражены T.verrucosum, лошади -

T.equinum, овцы - T.mentagrophytes.

5. Доказано, что терапевтическая эффективность Миковелта при дерма-

томикозах и раневых инфекциях крупного рогатого скота, лошадей, овец, со-

бак, кошек, кроликов, морских свинок, белых крыс и белых мышей состав-

ляет 100% при наружном применении препарата 1 раз в день 3 дня подряд.

Практическая значимость полученных результатов.

1. Для применения в ветеринарии в качестве лекарственного противо-

грибкового и антибактериального средства для лечения животных при дер-

матомикозах и раневых инфекциях, обработки инъекционного и операцион-

ного полей предложен высокоэффективный и безвредный препарат Мико-

велт, который прошел широкие производственные испытания в животновод-

ческих хозяйствах и ветеринарных клиниках.

2. На базе НПО «Велт» (г. Оренбург) создана автоматизированная тех-

нологическая линия промышленного производства препарата Миковелт. По-

лучены опытные серии Миковелта, которые прошли производственные ис-

пытания.

3. Результаты исследований включены в проект СТО 71954720-0005-

2010 на лекарственное средство Миковелт.

4. Разработан проект инструкции по применению лекарственного сред-

ства Миковелт в ветеринарии.

5. В опытах на кроликах, морских свинках, белых крысах и белых мы-

шах показана безвредность и антимикробная активность препарата Мико-

велт, что подтверждено актами, утвержденными в установленном порядке.

6. В опытах на крупном рогатом скоте, лошадях, овцах, собаках и кош-

ках изучен механизм действия лекарственного средства Миковелт, дана

оценка его влияния на организм животных при дерматомикозах и раневых

9

инфекциях, показана высокая терапевтическая эффективность препарата, что

подтверждено актами, утвержденными руководителями хозяйств и ветери-

нарных клиник Москвы, Московской и Брянской областей.

7. Результаты исследований по применению лекарственного средства

Миковелт при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов живот-

ных используются в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисци-

плине «Микробиология».

Личный вклад соискателя. Автору принадлежат непосредственное

осуществление исследований по изучению противогрибковой и бактерицид-

ной активности Миковелта in vitro и in vivo, острой и хронической токсично-

сти препарата, определение терапевтической эффективности Миковелта при

дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов животных, разработка

нормативной документации на Миковелт, анализ и обобщение полученных

результатов.

Апробация результатов диссертации. Основные результаты исследо-

ваний изложены в 2 научных отчетах («Экспериментальные испытания без-

опасности и антимикробной активности препарата Миковелт», «Изучение

лечебно-профилакти-ческой эффективности препарата «Миковелт» при

дерматомикозах и раневых инфекциях животных») и представлены на XV

Ветеринарном конгрессе, секции «Болезни крупного рогатого скота»

(Москва, 2007), на рабочем совещании Национального союза «Медико-

биологическая защита» (Москва, 2007), на V Международном Симпозиуме

«ЕС-Россия: сотрудничество в области биотехнологии, сельского, лесного,

рыбного хозяйства и пищи в 7 Рамочной Программе» (г. Пущино, Москов-

ской обл., 2008), на V Международной конференции «Наука и образование

для целей биобезопасности» (г. Пущино, Московской обл., 2008), на выстав-

ке, посвященной 90-летию ФГОУ ВПО МГАВМиБ (Москва, 2009), на вы-

ставке «Звезда Подмосковья» (Раменское, Московской обл., 2010), на Рос-

сийской агропромышленной выставке «Золотая Осень-2010» (Москва, 2010),

10

на совещании сотрудников НИИ биоцидов и нанобиотехнологий (Москва,

2010).

Публикации. По результатам диссертации опубликовано 4 статьи, в т.ч.

2 статьи в научных журналах (Достижения науки и техники АПК, Жизнь без

опасностей) и 2 - в сборниках научных трудов.

Структура диссертационной работы. Материалы диссертации изло-

жены на 180 страницах машинописного текста и включают введение, обзор

литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результа-

тов, выводы, практическое использование полученных научных результатов,

рекомендации по использованию научных выводов, список использованной

литературы (143 источника, из которых 101 отечественных и 42 иностранных

авторов). Работа содержит 42 таблицы, 39 рисунков и 15 страниц приложе-

ний.

Основные положения и результаты, выносимые на защиту:

1. Миковелт обладает высокой противогрибковой и антибактериальной

активностью в отношении широкого спектра патогенных грибов и бактерий

in vitro и in vivo.

2. Препарат Миковелт безвреден для животных и согласно ГОСТ

12.1.007-76 «Классификация опасности веществ по степени воздействия на

организм», относится к 4 классу малоопасных веществ.

3. Миковелт – эффективное лекарственное средство при дерматомикозах

и раневых инфекциях разных видов животных.

11

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространенность дерматомикозов на территории России

Дерматомикозы (дерматофитозы, фитодерматозы) – инфекционные за-

болевания кожи и ее производных, диагностируемые у сельскохозяйствен-

ных и домашних животных, пушных зверей, грызунов и человека, возбуди-

телями которых являются грибы, относящиеся к несовершенным грибам

Fungi imperfecti из группы Dermatophytes родов Trichophyton и Microsporum.

В зависимости от родовой принадлежности возбудителя, заболевания под-

разделяются на трихофитию и микроспорию (8, 57, 66, 71, 89, 104).

Дерматомикозы известны с давних времен. Еще арабские ученые ХII

столетия описывали заболевания людей, клиническая картина которых соот-

ветствует клинической картине, наблюдаемой при дерматомикозах. Микро-

спория и трихофития животных и человека стала известна в середине 19 ве-

ка, когда появилась реальная возможность дифференциации возбудителей

дерматофитов (66, 73, 104).

За период изучения дерматофитов в литературе было описано до 100 ви-

дов грибов только рода Trichophyton. Установлен широкий полиморфизм

дерматофитов, возникающий под влиянием различных внешних факторов

(76, 83, 113, 114, 133).

В конце ХIХ и начале ХХ веков французский исследователь Раймонд

Сабуро предложил среду для культивирования грибов и впервые ввел клас-

сификацию возбудителей грибковых заболеваний кожи (83, 89).

Многочисленными исследованиями установлено, что возбудители забо-

левания животных и человека, относящиеся к различным родам с многочис-

ленными видами, паразитируют на определённых видах животных и челове-

ке и вызывают соответствующий роду грибов симптомокомплекс, что позво-

ляет выделить из этой группы болезней самостоятельные нозологические

12

единицы под названием трихофития и микроспория (8, 41, 78).

По статистическим данным, в Российской Федерации на протяжении по-

следних лет опасность распространения дерматофитозов среди животных и

возникновения случаев заболевания людей снижается незначительно. Почти

во всех регионах страны периодически отмечается рост числа случаев забо-

левания среди бродячих животных, вовлекаются в эпизоотический процесс

домашние животные (собаки, кошки) и сельскохозяйственные животные (8,

83, 85, 97, 99).

Динамика изменения числа случаев дерматофитозов в России за послед-

ние 5 лет представлена на рис. 1.

Рис. 1. Эпизоотическая ситуация по дерматомикозам животных в РФ

в 2005-2010 гг.

Из рисунка 1 видно, что с 2005 года число случаев дерматофитозов в

России практически неуклонно росло. Так, если в 2006 году в Российской

Федерации было зарегистрировано 8772 случая дерматофитозов, то в 2007

году – 9745, или на 11,0% больше, чем в 2006 году. В 2008 году существен-

ного улучшения эпизоотической ситуации не произошло, было зарегистри-

ровано 9451 случай дерматофитозов или 97% по отношению к 2007 году.

13

Однако в 2009 году произошло существенное улучшение ситуации, было за-

регистрировано 8132 случая дерматофитозов животных, что на 14,0% мень-

ше, чем в 2008 г.

В 2010 году произошло снижение числа случаев дерматомикозов жи-

вотных на территории России до 3565, что связывают с более эффективной

работой служб по отлову и стерилизации бродячих животных.

Видовая структура при заболевании дерматомикозами животных в Рос-

сии за последние 5 лет представлена на рис. 2.

Рис. 2. Видовая структура животных при заболевании дерматомикозами

в РФ в 2005-2010 гг.

Из представленных данных следует, что наибольшее число случаев

дерматофитозов в России регистрируют среди домашних животных. Среди

сельскохозяйственных животных число случаев дерматофитозами за послед-

ние 5 лет значительно сократилось. У пушных зверей, по сравнению с до-

машними и сельскохозяйственными животными, дерматофитозы регистри-

руются редко.

14

УФО; 3,9%

ПФО; 11,8%

СФО; 9,9%

ДВФО; 1,6%

ЦФО; 44,2%

СЗФО; 5,9%

ЮФО; 22,8%

Дерматомикозы животных в 2009 году были зарегистрированы в 21

субъекте Российской Федерации.

По статистическим данным, за 2009 год по сравнению с аналогичным

периодом 2008 года количество случаев дерматофитозов животных умень-

шилось в 1,2 раза. Сократилось количество заболевших дерматофитозами

животных в ряде субъектов Центрального, Северо-Западного и Дальнево-

сточного федеральных округов. Несколько возросло число случаев дермато-

фитозов животных в субъектах Южного, Приволжского, Уральского и Си-

бирского федеральных округов (рис. 3).

Рис. 3. Заболеваемость животных дерматофитозами в Федеральных

округах РФ за 2009 год

Наибольшее число заболевших дерматофитозами животных зарегистри-

ровано в Центральном федеральном округе – 3591 случай или 44,2% от всех

случаев, зарегистрированных в России (Брянская область – 30 случаев, Ива-

новская область – 25 случаев, Калужская область – 94 случая, Московская

область – 549 случаев, Москва – 2893 случая).

15

Таблица 1. Заболеваемость животных дерматомикозами

в Москве и Московской области за 2004-2008 гг.

Наименование

территории

Количество заболевших животных, %

2004 г. 2005 г. 2006 г. 2007 г. 2008 г. 2009 г.

Москва 18,61 28,67 24,81 29,64 30,64 34,95

Московская область 14,32 26,53 22,02 16,93 5,82 6,87

Россия всего 100 100 100 100 100 100

Как следует из данных табл. 1, в 2008 году заболеваемость животных в

Московской области резко снизилась (на 11%), по сравнению с 2007 годом. В

Москве же, напротив, наблюдается неуклонный рост заболеваемости мелких

домашних животных дерматомикозами. Так, в сравнении с 2004 годом забо-

леваемость выросла на 16,34%. Это свидетельствует о том, что в условиях

Мегаполиса обитает большое количество бродячих животных, домашних и

диких грызунов, являющихся источником или резервуаром инфекции.

Южный Ф.О. – 1852 случая (22,8%) – наибольшее число случаев заре-

гистрировано в Краснодарском крае – 1209, затем следуют Волгоградская

область – 616, Республика Дагестан – 26 случаев и Ростовская область – 1

случай.

Приволжский Ф.О. – 960 случаев (11,8%) - наибольшее число случаев

зарегистрировано в Оренбургской области – 796 случаев, Республике Баш-

кортостан – 164.

Сибирский Ф.О. - 807 случаев (9,9%) - наибольшее число случаев заре-

гистрировано в Иркутской области – 799 случаев, Томской области – всего 8

случаев.

Северо-Западный Ф.О. - 477 случаев (5,9%) - наибольшее число случаев

зарегистрировано в Псковской области – 289 и Новгородской области – 105

случаев, наименьшее – в г.Санкт-Петербург – 71 случай и Республике Каре-

16

лия – 12 случаев;

Уральский Ф.О. – 316 случаев (3,9%) - наибольшее число случаев заре-

гистрировано в Свердловской области – 213. В Ямало-Ненецком автоном-

ном округе зарегистрировано 103 случая;

Дальневосточный Ф.О. – 129 случаев (1,6%) – в Республике Саха заре-

гистрирован 121 случай дерматофитозами животных, в г. Байконур – 8 слу-

чаев.

Подавляющее большинство дерматофитов распространены повсеместно,

другие приспособились к обитанию в определенных географических регио-

нах (73, 89, 92).

По сообщениям отечественных исследователей, зоофильные трихофито-

ны по отношению к другим дерматофитам составляют от 23,4 до 40 % (13).

Дерматомикозы сельскохозяйственных животных широко распростране-

ны во всех странах мира. Например, в Восточной Англии из 2000 обследо-

ванных животных 15 % были больны стригущим лишаём, а в Йоркшире

(1952-1953 г.) из 43 ферм заболевание регистрировали на 28 (26, 55, 72).

Из американской печати известно, что стригущий лишай и в Америке

поражает большое количество животных.

По данным Аравийского Р.А. и Горшковой Г.И. с соавт. (40), трихофития

у человека в настоящее время по частоте встречаемости в России уступает

микроспории. Так, в 2002 году на территории Российской Федерации было

зарегистрировано 2,8 случаев трихофитии на 100 000 населения. Наиболее

часто трихофития встречается в Южном федеральном округе (заболевае-

мость составила 6,8 и 6,5 на 100 000 населения в 2002 и 2003 г.г. соответ-

ственно). К регионам с высокой частотой встречаемости данного заболевания

относятся республики Дагестан, Кабардино-Балкария, Ингушетия, Саха

(Якутия), Башкортостан. Отмечается устойчивая тенденция к постепенному

увеличению заболеваемости трихофитией в регионах с традиционно низким

уровнем встречаемости данного микоза. Этому способствует активная ми-

17

грация населения из Южных регионов России, государств Средней Азии (т.е.

территорий с высоким уровнем заболеваемости трихофитией), ослабление

ветеринарного контроля и взаимодействия между ветеринарной и кожно-

венерологической службами, слабый уровень знаний о клинической картине

данного микоза. Проблема распространения трихофитии у людей на терри-

тории Российской Федерации тесно связана с заболеваемостью данным ми-

козом среди животных.

Таким образом, дерматомикозы сельскохозяйственных и мелких домаш-

них животных широко распространены в РФ и за рубежом. Наибольшее чис-

ло заболевших животных зарегистрировано в Центральном федеральном

округе. Эти данные свидетельствуют о том, что противоэпизоотические ме-

роприятия при дерматомикозах не всегда соблюдаются, диагноз на болезни

ставится несвоевременно, а имеющиеся профилактические и лекарственные

средства недостаточно эффективны.

1.2. Восприимчивость разных видов животных к возбудителям

трихофитии и микроспории

Грибы родов Trichophyton и Microsporum наиболее патогенны для чело-

века, крупного рогатого скота, собак, кошек и пушных зверей.

К трихофитии восприимчивы также мелкий рогатый скот, олени, лоша-

ди, верблюды, кролики, нутрии, ондатры, шиншиллы, лисы, песцы, морские

свинки, крысы и мыши, многие дикие животные, реже свиньи, куры, индейки

(7, 17, 29, 45, 53).

К микроспории особенно восприимчивы животные семейства кошачьих

и псовых, кролики, лошади и свиньи.

Восприимчивы животные всех возрастов, но особенно чувствителен мо-

лодняк первых дней жизни.

У пушных зверей болезнь обычно поражает весь помет вместе с самкой.

18

Грызуны, больные трихофитией, представляют большую опасность как

резервуар и источник возбудителя болезни.

Особую опасность в распространении возбудителя и поддержании эпи-

зоотологического очага представляют бездомные кошки и собаки, животные

с атипичной и скрытой формой болезни. Они не редко являются источником

возбудителя для человека, особенно для детей (56, 64, 65, 72).

Люди заболевают микроспорией в 75 – 80% случаев контакта с больны-

ми и переболевшими животными.

По данным Никифорова Л.И. (57), у собак трихофитию чаще всего вы-

зывают T.mentagrophytes и T.verrucosum. Источником возбудителя инфекции

служат больные животные. Возбудитель выделяется от больных с отторгаю-

щимися корочками, чешуйками эпидермиса, волосами, которые инфицируют

окружающие предметы, помещения, могут разноситься ветром. Споры гри-

бов длительно сохраняются на волосах переболевших животных.

Возбудителями микроспории чаще всего являются виды грибов M.canis

(M.lanosum), M.gypseum, M.equinum.

О роли почвы, как резервуара дерматофитов, имеются несколько проти-

воречивые сведения (96).

Warin R.P. и Champion R.H. (139) удавалось выделить трихофитон пре-

имущественно из образцов почвы, взятых около животноводческих помеще-

ний, что послужило основанием для ряда исследователей рассматривать поч-

ву, как возможный естественный резервуар дерматофитов, где последние мо-

гут вести сапрофитный образ жизни.

Однако ряд ученых (1, 13, 17, 41, 136) считают, что трихофитон при

определенных температурно-влажностных условиях может прорастать на

естественных субстратах во внешней среде, но плохо выдерживает конку-

ренцию активной сапрофитной микрофлоры.

Инфицированные предметы становятся опасными факторами передачи

возбудителя. Заражение происходит в результате контакта больных и здоро-

вых животных. Значительную роль в заражении играют загрязненные гри-

19

бом предметы ухода (щетки, расчески, подстилка, ошейники и т.д.). Пере-

носчиками возбудителя могут быть и кровососущие насекомые. Предраспо-

лагают к заболеванию плохие условия содержания и кормления, а также

наличие на коже ссадин, царапин и расчесов (41, 45, 51, 57).

Важенина Е.Г. (17), проводя клинические и микологические исследова-

ния 72 диких мышевидных грызунов, отловленных в различных местах, от 17

обыкновенных полевок изолировали T.mentagrophytes, который оказался па-

тогенным для кроликов.

Никифоров Л.И. (57) считает, что источниками инфекции в пушном зве-

роводстве, кроме больных трихофитией зверей, могут быть инфицированные

клетки, маточные домики, предметы ухода. Переболевшие самки песцов, по

его мнению, также могут служить источник заражения для родившихся щен-

ков, хотя сами при этом клинических признаков болезни не проявляют и со-

держатся в продезинфицированных клетках.

Серые мыши, болеющие трихофитией, вызванной T. mentagrophytes,

очень часто являются источником заражения людей (17).

В одном из районов Вологодской области, где было зарегистрировано

массовое заболевание трихофитией людей, Новикова Т.В. (59), производя от-

лов мышей на ржаном поле вблизи скирд, обнаружили у них на коже пореде-

ние волоса и наличие корочек. Микологическими исследованиями был обна-

ружен и идентифицирован T.mentagrophytes. Автором был сделан вывод, что

носителями возбудителя могут быть не только домовые, но и полевые мыши.

Болезнь регистрируют в любое время года, но у лошадей, собак и кошек

чаще осенью, зимой и весной, у пушных зверей – весной и летом.

По данным Никифорова Л.И. (57, 58), трихофитией болеют чаще осенью

и зимой, чему способствует сырая влажная погода, плохие условия содержа-

ния и кормления, недостаток солнечных лучей, витаминов (отмечено резкое

снижение числа случаев заболеваемости в летний период с большим числом

солнечных лучей).

20

Развитию микроспории у животных способствует недостаточное содер-

жание витаминов в организме, травматизация кожных покровов и иммуно-

депрессия организма.

Несовершенные грибы группы Dermatophytes поражают различные

участки кожи и ее производных. У животных наиболее частые участки лока-

лизации голова, уши, спинка носа, конечности, иногда спина и область

крестца.

На пораженных участках у кошек отмечают, как правило, локализован-

ные, ограниченные поражения с чешуйками, обломанными волосами или

безволосыми участками кожи. Иногда встречаются диффузные поражения,

не имеющие ограничения, волосы обломанные, редкие. Микроспоры и три-

хофиты поражают ороговевшие клетки кожи (царапины, покусы, расчесы и

др.).

Таблица 2. Морфологические свойства трех важнейших возбудителей

дерматомикозов

Возбудитель Данные микроскопических ис-

следований

Культура

Microsporum

canis

Споры в виде скоплений вокруг

стержня волоса

Мицелий похож на вату,

беловатый

Микроконидии из более чем 6

толстостенных клеток (из куль-

туры)

Образует желто-оранже-

вый пигмент

Microsporum

gypseum

Споры в небольшом количестве в

виде цепочек вдоль стержня во-

лоса

Мицелий плоский, слегка

зернистый

Макроконидии не менее чем из 6

тонкостенных клеток (из культу-

ры)

Образует пигмент цвета

корицы

Trichophyton

men-

tagrophytes

Споры в виде длинных цепей

вдоль стержня волоса

Мицелий плоский, похож

на сахарную пудру, бело

ватый

Макроконидии имеют форму си-

гар, с тонкостенными клетками

(из культуры)

Образует пигмент от ко-

ричневого до темно-

красного цвета

21

В культурах дерматофиты различаются по типу образуемых ими макро-

и микроконидий: Trichophyton и Microsporum образуют как макро-, так и

микроконидии. У трихофитонов макроконидии неровные, у микроспорумов –

гладкие. Культуры дерматофита развиваются быстро, рост заметен на 3-5

день. Колонии на питательных средах выглядят следующим образом: белые,

бежевые, пушистые, бархатистые, распростертые, растущий край паутини-

стый, зарастает весь косяк в пробирке (1, 10, 12, 55, 60).

По данным Беспалова В.Л. (10), микроспорумы сохраняются в пора-

женном волосе до 2-4 лет, в почве до 2-х месяцев, а при определенных усло-

виях могут размножаться. Вегетативные формы возбудителей погибают при

действии 1-3 %-ного раствора формальдегида за 15 минут, 5-8%-ного раство-

ра щелочей за 20-30 минут. Ультрафиолетовые лучи действуют губительно

при экспозиции не менее 30 минут. В кипящей воде возбудители погибают

через 2 минуты, сухой жар 620С вызывает их гибель через 2 часа, 100-1100С –

за 15-20 минут.

Восприимчивость крупного рогатого скота. К трихофитии наиболее

чувствительны телята с пониженной резистентностью организма, в возрасте

от 2 месяцев до одного года. Телята заражаются чаще и болеют тяжелее, чем

взрослые животные. Перемещения и перегруппировки нередко приводят к

перезаражению животных и массовой вспышке трихофитии. У телят подъем

заболеваемости чаще приходится на сентябрь — ноябрь, чему предшествует

комплектование групп животных. Заболевание широко распространяется зи-

мой и ранней весной, так как в эти времена года несколько ухудшаются

условия содержания и кормления. Теснота, сырость, грязь, плохое кормле-

ние, особенно недостаток в кормах белка и витаминов, способствуют быст-

рому распространению и тяжелому течению стригущего лишая. С выгоном

на пастбище и наступлением теплых солнечных дней болезнь затухает. Пе-

реболевание создает устойчивость к повторному заражению. Иммунитет

22

продолжается около года (66, 72, 82, 95).

Как указывает Петрович С.В. (66), распространению возбудителя спо-

собствуют нарушения санитарно-гигиенических условий содержания и экс-

плуатации животных, появление на коже ссадин, царапин, ран, потертостей,

мацерированных участков, скученность животных, неполноценное кормле-

ние.

Восприимчивость лошадей. Кожные заболевания лошадей, вызываемые

болезнетворными грибами, продолжают оставаться серьезной проблемой для

ветеринарной медицины. Помимо очевидного вреда, который эти заболева-

ния наносят здоровью животных, они причиняют значительный экономиче-

ский ущерб, а также представляют угрозу для заражения людей (наездников,

обслуживающего персонала), так как ряд возбудителей дерматомикозов яв-

ляются зооантропофильными видами. Это обстоятельство стало особенно ак-

туальным в последние несколько лет в связи с возросшей популярностью

любительского конного спорта (26, 95, 108, 111).

Основной, наиболее распространенный вид возбудителя трихофитии

лошадей - Trichophyton equinum, микроспории - Microsporum canis (26, 66).

По данным Головиной Н.П. с соав. (26), второстепенное значение имеют

Trichophyton mentagrophytes, Microsporum gypseum, Microsporum equinum.

Дерматофитозы лошадей наблюдаются в любое время года. Так, частые

поступления новых лошадей на ипподромы и конно-спортивные базы из раз-

личных, иногда неблагополучных по этим инфекциям хозяйств, вызывают

заболевания в различные сезоны года. На конных заводах новые вспышки

трихофитии и микроспории обычно наблюдают при постановке полученного

приплода в ранее неблагополучные помещения. Лошади болеют преимуще-

ственно в возрасте 2-7 лет. Инкубационный период в зависимости от биоло-

гических особенностей микро- и макроорганизмов варьирует от 10 до 45

дней (26, 41, 51).

Развитию заболевания способствуют нарушения обмена веществ и гор-

23

монального статуса, нарушение витаминного баланса, в том числе недоста-

точность в рационе витаминов А и С (41, 51).

Восприимчивость собак и кошек. По данным Никитушкиной Н.А. (56) в

1995 и 1997 годах были проведены сравнительные исследования особенно-

стей заражения микроспорией собак и кошек в Московской, Владимирской и

Ярославской областях. С этой целью было исследовано 1975 животных:

1453 собаки и 522 кошки. Диагноз на микроспорию ставили на основании

клинических признаков, результатов просвечивания животных лампой Вуда

и лабораторного исследования патологического материала. Анализировали

частоту обнаружения заболевания у различных пород животных, в зависимо-

сти от пола и возраста. Из 153 собак, зараженных микроспорией, на долю

самцов пришлось - 45%, самок – 55%. У 89 больных котов и кошек этот про-

цент, наоборот, составил соответственно 61 и 39 % (см. таблицу 3) .

Таблица 3. Число случаев выявленной микроспории у мелких домашних

животных разного пола

Вид животных Собаки Кошки

Самцы, % 45 61

Самки, % 55 39

Предполагается, что разница в показателях объясняется не предраспо-

ложенностью к заболеванию микроспорией того или иного пола определен-

ного вида животного, а числом и продолжительностью контактов особи лю-

бого пола с инфицированными животными и окружающей средой (74, 83).

У собак обоего пола выгуливают примерно в одинаковых пропорциях, в

то время как коты чаще, чем кошки, и больше времени проводят на улице.

Для сравнения, статистический анализ заболеваемости мужчин и женщин

«стригущим лишаем» был проведен на основании данных, полученных в

частной клинике Саппоро (Япония), при лечении 4695 пациентов в период с

1982 по 1991 год. Число женщин, проходивших в клинике лечение от дер-

24

матофитов, было в 1,5 раза меньше, чем мужчин (67).

Тугунова Т.Б. (клиника ДокторВет) и Глотова Т.И. (ГНУ ИЭВСиДВ)

установили, что восприимчивость к заболеванию дерматофитозами, в част-

ности к микроспории, у собак и кошек неодинакова и зависит от индивиду-

альных и породных особенностей, а также от эксплуатации и содержания

(87).

Результаты изучения распространения дерматофитозов среди собак раз-

личной породной принадлежности по данным микологических исследований

показывают, что наиболее часто дерматофитозами поражаются беспородные

собаки - 33,8%. Это связано, прежде всего, с тем, что беспородные собаки в

большинстве случаев подбираются своими будущими хозяевами на улице,

где вместе с другими безнадзорными животными они могут вполне контак-

тировать с больными микроспорией животными (69, 83).

Второе место по заболеваемости дерматофитозами среди собак различ-

ных пород занимают немецкие овчарки (16,2%). За ними следуют собаки де-

коративных пород. Чаще всего заболевание отмечается у кокер-спаниелей

(8,8%), французских бульдогов (5,6%), пуделей (3,2%), реже – у цверг-

шнауцеров, болонок и тойтерьеров.

Среди кошек наиболее часто микроспорией поражаются персидские

(23,9%) и беспородные кошки (22,7%).

Это связано, прежде всего, с тем, что у кошек персидской породы наибо-

лее длинный и густой шерстный покров, у них очень часто наблюдается ми-

коносительство. Клинически заболевание проявляется чаще у котят, у взрос-

лых животных протекает в стертой форме (87).

Беспородные кошки, как и собаки, чаще всего бывают беспризорными,

ведут бродячий образ жизни, часто вывозятся своими хозяевами на летний

период на дачи, в деревни.

Среди кошек, больных дерматофитозами, встречались и другие редкие

породы: британская голубая, американский экзот, донской сфинкс, невская

25

(87).

Анализ возрастного состава показал, что у собак микроспория встречает-

ся у животных старше года (63% особей), чем у молодняка (37%). У кошек

эта разница была несущественной: микроспорию обнаружили у 51% пациен-

тов моложе и у 49% - старше года.

Таблица 4. Анализ возрастного состава животных, зараженных

микроспорией

Вид животного Собаки Кошки

Моложе 1 года, %. 37 51

Старше 1 года, %. 63 49

Заметно большее число случаев «стригущего лишая» у взрослых собак,

как и в случае замеченной опосредственной связи заболеваемости с полом

животных, объясняется тем, что щенков реже выпускают на улицу и стара-

ются держать их подальше от других собак (8, 19).

Анализ возрастных особенностей выявил, что как собаки, так и кошки

переболевают дерматофитозами в основном в возрасте до 6 месяцев. Более

высокая заболеваемость микроспорией котят и щенят, чем взрослых живот-

ных, связана, очевидно, с передачей инфекции от матерей (12, 22).

Гордиенко Л.Н., Пильщик Е.В. и Овчеренко Н.А (29) отмечали все кли-

нические формы проявления дерматофитозов у собак и кошек: классическую,

рассеянно-диффузную, эрозионную и атипичную, или бессимптомную.

Классическая и скрытая формы наблюдалась у собак равномерно в тече-

ние всего года. Рассеянно-диффузная - чаще всего в весенне-осенний период,

преимущественно у собак пород: немецкая овчарка, эрдельтерьер, цверг-

шнауцер. Эрозионная - в весенне-летний период у ротвейлеров и колли. Ати-

пичная форма наиболее характерна для чау-чау, шарпеев, пуделей (29).

У кошек преобладали бессимптомная и классическая форма заболева-

ния, в редких случаях - рассеянно-диффузная и эрозионная (29).

При рассеянно-диффузной у одного животного насчитывалось от 2-3 до

26

15 и более очагов поражений (у кота породы донской сфинкс при рассеянно-

диффузной форме - до 35).

В результате микологических исследований 3573 проб биоматериала от

собак и кошек было выделено 700 изолятов, которые после изучения их

культурально-морфологических свойств были отнесены к видам: M.canis и

T.mentagrophytes (87).

В 384 случаях из проб биоматериала от собак были изолированы плесне-

вые грибы родов Aspergillus, Penicillium, Mucor и дрожжеподобные –

Malassezia и Candida, в 370 - стрептококки, а в 384 - стафилококки. В 365

случаях было установлено одновременное присутствие в биоматериале гри-

бов и бактерий (87).

При изучении бактериальной и грибной флоры очагов поражений кожи у

кошек было установлено, что она представлена стрептококками (14,4%) и

стафилококками (7,2%), плесневыми и дрожжеподобными грибами родов

Aspergillus, Penicillium и Candida (34,4%).

По наблюдениям Горячкиной Е.И. (30), микроспория наблюдалась чаще

у длинношерстных кошек (56 %), чем у короткошерстных (44 %).

Таблица 5. Встречаемость микроспории у кошек в зависимости

от длины шерсти

Животные Количество, гол.

Короткошерстные, шерсть короче 2-х см 44

Длинношерстные, шерсть длиннее 2-х см 56

У собак 46 обследованных пород наибольшее количество случаев выяв-

ленного дерматофитоза было отмечено среди немецких овчарок (23), ротвей-

леров (14), пуделей (11) и боксеров (10). У беспородных (метисов) микроспо-

рия была обнаружена у 16 особей.

Степень заболеваемости дерматофитозами среди собак и кошек в раз-

личные сезоны год неодинакова. С этим мнением ряда авторов (23, 24, 34, 45)

27

согласуются и наши данные, полученные при анализе материалов по заболе-

ваемости дерматофитозами мелких домашних животных. Как видно из дан-

ных рисунка наибольшая заболеваемость собак и кошек микроспорией отме-

чается в осенние месяцы (сентябрь-ноябрь) при максимуме ее в ноябре.

На уровень заболеваемости собак и кошек оказывают влияние климато-

географические факторы, определяющие время появления приплода, его ко-

личество.

Первый приплод у кошек появляется обычно в марте-апреле. С этого

времени начинается рост заболеваемости микроспорией. Процент заболевае-

мости за год у кошек увеличивается с мая по ноябрь с 1,58% до 17,5%, а у

собак с 2,2% до 18,8%. Второй приплод котят происходит в октябре-ноябре.

В это время и отмечается максимальный подъем заболеваемости среди кошек

– 17,5%. Появление щенков у собак происходит также 2 раза в год, ранней

весной и ранней осенью, поэтому помесячная динамика заболеваемости мик-

роспорией у них в целом повторяет таковую у кошек.

Спад заболеваемости среди кошек и собак в весенние месяцы объясняет-

ся гибелью к этому времени части бездомных животных, а также проведени-

ем противоэпизоотических мероприятий.

Таким образом, дерматофитозы часто встречаются как у сельскохозяй-

ственных, так и у мелких домашних животных. Основными возбудителями

дерматомикозов являются T. mentagrophytes и M.canis.

1.3. Биопрепараты для специфической профилактики

дерматомикозов и их эффективность

Существенным прорывом в лечении и профилактике дерматомикозов у

животных явилось создание специфических средств иммунотерапии и имму-

нопрофилактики. В разработке этих препаратов большую роль сыграли оте-

чественные ученые. Так, использование вакцины ЛТФ-130 (против трихофи-

28

тии крупного рогатого скота) позволило существенно снизить заболевае-

мость трихофитией у этих животных на территории СССР с 42% в 1969 г. до

0,6% в 1979 г. (46, 47, 52, 77).

Саркисов А.Х. (77) считает, что применение специфических методов ле-

чения и профилактики дерматомикозов животных позволяет в короткие сро-

ки купировать распространение кожных поражений, в случае латентного те-

чения болезни выявить очаги поражений и профилактировать возникновение

болезни. Вакцины вызывают быструю элиминацию возбудителя с поверхно-

сти кожи, специфическую иммунобиологическую перестройку организма,

что способствует предотвращению контаминации внешней среды и инфици-

рования животных и людей грибковыми спорами.

На сегодняшний день в РФ применяются вакцины против трихофитии и

микроспории практически для всех домашних животных – сельскохозяй-

ственных, пушных, декоративных.

Применение вакцины следует осуществлять строго в соответствии с

Наставлением по применению, индивидуальным для каждого препарата. Как

правило, вакцинацию проводят двукратно, с интервалом 10-14 дней. Не ре-

комендуется иммунизировать животных с повышенной температурой тела,

во второй половине беременности, а также больных инфекционными и неза-

разными болезнями. Перед вакцинацией рекомендуется провести курс лече-

ния против глистов (дегельминтизацию). Стоит учесть, что если животное

находится в инкубационной стадии дерматофитоза, то вакцинация может

спровоцировать скорейшее развитие заболевания и проявление клинических

признаков (77, 79, 107).

Ниже приведены сведения о вакцинах против дерматофитозов живот-

ных, официально допущенных к применению в ветеринарии.

Вакцина Поливак-ТМ (НПО «Нарвак») обладает следующими поло-

жительными свойствами:

- для приготовления использованы селекционированные иммуногенные

29

и технологичные штаммы;

- штаммы, используемые для приготовления вакцины, обладают ста-

бильными антигенными и патогенными свойствами;

- стандартная технология приготовления вакцины;

- вакцина является поливалентной, обладает оптимальным набором

штаммов возбудителей дерматомикозов;

- вакцина является инактивированной и не опасна для людей и живот-

ных, контактирующих с вакцинированными животными;

- вакцина безвредна и высокоэффективна.

Вакцина Поливак-ТМ обладает помимо профилактических свойств и

выраженным лечебным эффектом.

Иммуногенная эффективность вакцины Поливак-ТМ с эксперименталь-

ным заражением была испытана на 90 кошках и 77 собаках в питомниках и

вивариях. Животные были заражены в различные сроки после вакцинации -

через 30- 35 дней; 87-95 дней; 172-185 дней; 350 — 370 дней. В результате

накожного заражения большинство животных было невосприимчиво к зара-

жению вирулентными культурами дерматофитов (68).

Параллельно в экспериментальных условиях проверялась безвредность

вакцины на тех же животных. Введение животным стандартных доз вакцины

Поливак-ТМ против дерматомикозов не приводило к изменению клиниче-

ского состояния. У животных был сохранен аппетит, не было изменений в

поведении, местная реакция отсутствовала, что являлось подтверждением

безвредности и ареактогенности вакцины (30).

По данным Полякова И.Д. (68), испытание вакцины Поливак-ТМ в поле-

вых условиях проводилось на большом поголовье собак и кошек в Москве,

Санкт-Петербурге и Ташкенте. Вакцина была испытана более чем на 2500

собаках и кошках. В одной из клиник было проиммунизированно 180 живот-

ных. Из них с лечебной целью было обработано 67 кошек и 42 собаки и с

профилактической целью 48 кошек и 23 собаки. В результате проведенных

30

испытаний была подтверждена безвредность вакцины. Только у 3 собак из

всех обработанных животных была местная реакция. При клиническом

осмотре животных через 25-30 дней после второй вакцинации у всех живот-

ных наблюдали полное отторжение корочек на месте дерматомикозных оча-

гов и рост волоса на поврежденных участках кожи.

Тем не менее, усиление поражений было отмечено у 12 кошек и 8 собак,

больных дерматомикозами, после первого введения вакцины и у 6 кошек и 7

собак, больных дерматомикозами, после второго введения вакцины. Возник-

новение дерматомикозных очажков после введения вакцины было выявлено

у 10 кошек и 5 собак. Третье введение вакцины не вызывало стимуляции

клинического проявления болезни.

В результате научных исследований и положительных результатов кли-

нических испытаний вакцины Поливак-ТМ удалось внедрить её в других

странах. Около 50% больных собак и кошек, и около 70% больных дермато-

микозами лошадей на территории Германии ежегодно подвергаются лечению

этой вакциной. Всем животным вакцину вводят внутримышечно двукратно с

интервалом между введениями 10-14 суток.

Недостатки вакцины Поливак-ТМ. Широкое применение вакцины По-

ливак-ТМ выявило снижение эффективности до 70 - 75% в некоторых круп-

ных питомниках по разведению кошек. Анализ эпизоотологической ситуации

в этих питомниках, тип содержания и уровень кормление показал, что у ис-

тощенных постоянным недоеданием животных эффективность вакцинации

снижается. Скученное содержание животных, например, 20-30 кошек в 2-З-х

комнатной квартире, также снижает эффективность вакцинации до 75% и

способствует очень быстрому распространению болезни в таком питомнике.

Вирусные хронические заболевания, в особенности, связанные с иммуноде-

фицитным состоянием, могут снизить эффективность вакцинации про-

тивдерматомикозов. Эффективность вакцинации у животных, пораженных

эктопаразитами, также обычно снижается (68).

31

Вакцина Микродерм (Аптека Сервис) - вaкцинa для лечeния и

пpoфилaктики микpocпopии и тpиxoфитии у кoшeк, coбaк, пушныx звepeй,

кpoликoв и нутpий.

Baкцину peкoмeндoвaнo ввoдить внутpимышeчнo, двукpaтнo, c интep-

вaлoм 10-14 днeй cнaчaлa в oдну, a зaтeм в дpугую кoнeчнocть. Mecтo инъeк-

ции пepeд иммунизaциeй дeзинфициpуют 70% cпиpтoм, a пocлe йoдoм. Для

кaждoгo живoтнoгo иcпoльзуeтcя cтepильный шпpиц co cтepильнoй иглoй.

Пpи иcчeзнoвeнии у живoтнoгo клиничecкиx пpизнaкoв зaбoлeвaния в

тeчeниe 8-13 cутoк пocлe 1 иммунизaции, пpoвoдить втopую нe oбязaтeльнo.

Лeчeбный эффeкт пpoявляeтcя cпуcтя 15-20 cутoк пocлe пepвoй имму-

низaции и xapaктepизуeтcя paзpыxлeниeм, oттopжeниeм кopoк c

микoтичecкиx oчaгoв и pocтoм нoвoгo вoлoca. Иммунитeт у живoтныx,

пpивитыx вaкцинoй c пpoфилaктичecкoй цeлью, нacтупaeт cпуcтя 25-30 cутoк

пocлe втopoгo ввeдeния вaкцины. Пpoдoлжитeльнocть иммунитeтa нe мeнee

12 мecяцeв.

Недостатки вакцины Микродерм. He peкoмeндуeтcя пpививaть

живoтныx c пoвышeннoй тeмпepaтуpoй тeлa, вo втopoй пoлoвинe

бepeмeннocти, a тaкжe пpи нaличии cpeди ниx бoльныx ocтpыми инфeкциoн-

ными зaбoлeвaниями (чумa, инфeкциoнный энтepит, гeпaтит, пaнлeйкoпeния

кoшeк и дp.). Пpи coдepжaнии нутpий пpи тeмпepaтуpe oкpужaющeй cpeды

плюс 10оС и нижe нa мecтe ввeдeния вaкцины вoзмoжнo пoявлeниe oтeчнocти

и oбpaзoвaниe уплoтнeнии. B cлучae иммунизaции живoтныx, нaxoдящиxcя в

инкубaциoннoм пepиoдe, вaкцинaция cпocoбcтвуeт нapacтaнию клиничecкиx

пpизнaкoв микoзa в мecтax лoкaлизaции вoзбудитeля (нa кoжe живoтнoгo

пoявляютcя мнoжecтвeнныe и eдиничныe oчaги). У coбaк (ocoбeннo у

глaдкoшepcтныx), пocлe вaкцинaции нa мecтe ввeдeния мoжeт вoзникнуть

мecтнaя peaкция в видe oгpaничeннoгo бoлeзнeннoгo уплoтнeния. У кoшeк

пocлe вaкцинaции инoгдa нaблюдaeтcя вялocть и пoтepя aппeтитa.

Вакцина Вакдерм (ЗАО Фирма НПВиЗЦ «Ветзвероцентр») - для про-

32

филактики и лечения микроспории и трихофитии кошек, собак, пушных зве-

рей и кроликов.

Вакцину «Вакдерм» изготавливают из грибных культур дерматофитов,

инактивированных формалином.

Вакцина вызывает образование специфического иммунитета, безвредна

и при правильном применении не обладает реактогенностью. Концентрация

грибных элементов вакцины «Вакдерм» составляет 30-50 млн/см3.

Иммунитет у животных формируется через 25-30 суток после второго

введения вакцины и длится не менее 12 месяцев.

За 10 суток до вакцинации необходимо провести дегельминтизацию жи-

вотного.

Кошек, собак, пушных зверей и кроликов вакцинируют внутримышечно

двукратно с интервалом 10-14 суток в разных дозах.

Недостатки вакцины Вакдерм. Иммунизация животных, находящихся в

инкубационном периоде заболевания дерматофитозами, может провоциро-

вать ускоренное проявление клинических признаков микоза в местах локали-

зации возбудителя (на коже животного появляются единичные или множе-

ственные микотические очаги). У некоторых животных (преимущественно у

собак) после иммунизации может возникать местная реакция в виде образо-

вания на месте инъекции болезненного уплотнения. У кошек после иммуни-

зации может наблюдаться индивидуальная чувствительность к вакцине в ви-

де легкой сонливости, которая самопроизвольно проходит через двое-трое

суток. Животных, проявивших поствакцинальную реакцию, освобождают от

нагрузок на 3-5 суток.

Вакцина Вакдерм-F (ЗАО Фирма НПВиЗЦ «Ветзвероцентр») – пpeдc-

тaвляeт coбoй инaктивиpoвaнныe cпopы дepмaтoфитoв и пpeднaзнaчeнa для

пpoфилaктики и лeчeния микрocпopии и тpиxoфитии кoшeк.

Koшeк peкoмeндуeтcя иммунизиpoвaть c пpoфилaктичecкoй и лeчeбнoй

цeлями в вoзpacтe.

33

Baкцину пpимeняют c пpoфилaктичecкoй и лeчeбнoй цeлями внутри-

мышeчнo, двуx- тpexкpaтнo в oблacть бeдpa, cнaчaлa в oдну кoнeчнocть, a

чepeз 10-14 cутoк в дpугую.

Лeчeбный эффeкт нacтупaeт cпуcтя 15-25 cутoк пocлe втopoй имму-

низaции и xapaктepизуeтcя paзpыxлeниeм, oттopжeниeм кopoк c

микoтичecкиx oчaгoв и pocтoм нoвoгo вoлoca.

Иммунитeт у пpивитыx живoтныx пpoтив дepмaтoфитoзoв нacтупaeт

cпуcтя 25-30 cутoк пocлe втopoгo ввeдeния вaкцины и длитcя нe мeнee 12

мecяцeв.

Иммунизaцию живoтныx пpoвoдят нeзaвиcимo oт вpeмeни гoдa.

Недостатки вакцины Вакдерм-F. Hе peкoмeндуeтcя пpививaть живoтныx

c пoвышeннoй тeмпepaтуpoй тeлa, вo втopoй пoлoвинe бepeмeннocти, a тaкжe

бoльныx инфeкциoнными и нeзapaзными бoлeзнями. Ocлaблeнныx и бoльныx

живoтныx пpeдвapитeльнo лeчaт, a пocлe выздopoвлeния иммунизиpуют

пpoтив дepмaтoфитoзoв. Иммунизaция кoшeк, нaxoдящиxcя в ин-

кубaциoннoм пepиoдe зaбoлeвaния дepмaтoфитoзaми, пpoвoциpуeт

уcкopeннoe пoявлeниe клиничecкиx пpизнaкoв микoзa в мecтax лoкaлизaции

вoзбудитeля (нa кoжe живoтнoгo пoявляютcя микoтичecкиe oчaги). Taкиx

живoтныx cлeдуeт eщe двaжды пpивить вaкцинoй в лeчeбныx дoзax. У

нeкoтopыx кoшeк пocлe иммунизaции мoжeт нaблюдaтьcя пoвышeннaя coн-

ливocть в тeчeниe 2-3 cутoк.

Вакцина Мультикан-7 (НПО «Нарвак») - является средством специфи-

ческой профилактики чумы, аденовирусных инфекций, парвовирусного и ко-

ронавирусного энтеритов, а также трихофитии и микроспории собак.

Вакцина состоит из двух компонентов:

• лиофилизированного (сухая пористая масса желто-розового цвета), из-

готовленного из аттенуированных штаммов вируса чумы собак;

• жидкого (однородная жидкость розового цвета с тонким осадком), из-

готовленного из аттенуированных штаммов парвовируса собак, аденовируса

34

собак типа 2, коронавируса собак и инактивированные производственные

штаммы грибов родов Трихофитон и Микроспорум.

Одна доза вакцины содержит: вирус чумы собак - не менее 103,5 ТЦД50;

парвовирус собак - не менее 512 ГАЕ; аденовирус собак - не менее 104,0

ТЦД50; коронавирус собак - не менее 105,0 ТЦД50; грибы рода Трихофитон

и Микроспорум – не менее 20 млн/см3 микроконидий.

Перед применением лиофилизированный компонент растворяют в жид-

ком компоненте. Вакцину вводят внутримышечно с внутренней поверхности

бедра в дозе 2 см3. Собак мелких и декоративных пород прививают в дозе 1,0

см3. Первичная вакцинация включает в себя две инъекции: 1-я - в возрасте 8-

10 недель, 2-я - через 21 день после первой вакцинации. Ревакцинируют

щенков в возрасте 10-12 месяцев, а взрослых животных вакцинируют один

раз в год.

У вакцинированных животных иммунитет наступает через 14 суток по-

сле второй иммунизации и сохраняется у молодняка 6-8 месяцев, у взрослых

– в течение 12 месяцев.

Недостатки вакцины Мультикан. Вакцину применяют с профилактиче-

ской целью для иммунизации только клинически здоровых щенков и взрос-

лых собак. Если у животного хроническое инфекционное заболевание, вак-

цина вызывает его обострение, что может привести к гибели животного.

Кроме того, вакцина содержит 7 видов антигенов, что может привести к не-

равномерной выработке защитных антител против определенных антигенов.

Вакцина ЛТФ -130 (ФГУП «Ставропольская биофабрика») - предназна-

чена для профилактики и лечения трихофитии (стригущего лишая) крупного

рогатого скота.

Вакцина представляет собой лиофильно-высушенный препарат живого

аттенуированного штамма № 130. Лечебный эффект появляется через 20

дней: отторгаются трихофитозные корки и начинается рост нового волосяно-

го покрова.

35

С профилактической целью животных иммунизируют с месячного воз-

раста. Вакцину вводят двукратно, с интервалом 10-14 дней внутримышечно в

область крупа, а с лечебной целью вакцину вводят в удвоенных дозах.

Лечебный эффект проявляется через 20-30 дней после второго введения.

Недостатки вакцины ЛТФ -130. Длительный период до начала проявле-

ния лечебного эффекта (20-30 дней).

Вакцина Трихостав (ФГУП «Ставропольская биофабрика») - предна-

значена для профилактики и терапии трихофитии крупного рогатого скота.

Вакцину изготавливают из живого аттенуированного штамма культуры

T.verrucosum ТВ-201 ВГНКИ.

Вакцину вводят внутримышечно в область ягодичных мышц. Профилак-

тические дозы: телятам от 1 до 4 месяцев - 1 см3; телятам от 5 до 8 месяцев -

1,5 см3; телятам старше 8 месяцев - 2 см3. Вакцину вводят двукратно с интер-

валом 10-14 суток. Терапевтический эффект появляется через 20-30 суток по-

сле второго введения вакцины.

Недостатки вакцины Трихостав. Длительный период до начала проявле-

ния лечебного эффекта (20-30 дней).

Вакцина Вермет (Армавирская биофабрика) - предназначена для спе-

цифической профилактики и лечения трихофитии животных вызываемой

T.verrucosum, T.verrucosum аutotroficum, T.mentagropfites, T.equinum,

T.sarkisovi.

Вакцина представляет собой лиофилизированные живые аттенуирован-

ные культуры T.verrucosum и T.mentagropfites, выращенные на сусло агаре,

смешанные с защитной средой в соотношении 1:1.

Вакцину вводят внутримышечно в область крупа животного двукратно с

интервалом 7-14 дней. Повторно вакцину вводят в той же дозе и в тот же

участок. Иммунитет у животных наступает спустя 25-30 дней после второго

введения вакцины и длится не менее 12 месяцев.

Недостатки вакцины Вермет. Длительный период до начала развития

36

иммунитета (через 25-30 дней после второго введения вакцины). За этот

промежуток времени у животных может возникнуть суперинфекция и отяго-

щение инфекционного процесса.

Таким образом, вакцинация является эффективным способом профилак-

тики и лечения дерматомикозов животных, однако имеет ряд недостатков:

хронические заболевания, в особенности, связанные с иммунодефицитным

состоянием, могут снизить эффективность вакцинации против дерматомико-

зов; нельзя пpививaть живoтныx c пoвышeннoй тeмпepaтуpoй тeлa, вo втopoй

пoлoвинe бepeмeннocти, a тaкжe пpи нaличии cpeди ниx бoльныx ocтpыми

инфeкциoнными вирусными зaбoлeвaниями; в cлучae иммунизaции

живoтныx, нaxoдящиxcя в инкубaциoннoм пepиoдe, вaкцинaция cпocoбcтвуeт

нapacтaнию клиничecкиx пpизнaкoв микoзa в мecтax лoкaлизaции вoзбу-

дитeля, нa кoжe живoтнoгo пoявляютcя мнoжecтвeнныe и eдиничныe oчaги;

пocлe вaкцинaции нa мecтe ввeдeния мoжeт вoзникнуть мecтнaя peaкция в

видe oгpaничeннoгo бoлeзнeннoгo уплoтнeния; пocлe вaкцинaции у живот-

ных инoгдa нaблюдaeтcя вялocть и пoтepя aппeтитa; длительный период до

начала развития иммунитета, в течение которого у животных может возник-

нуть суперинфекция и отягощение инфекционного процесса.

1.4. Терапевтические средства, применяемые при лечении больных

дерматомикозами животных

До последнего времени основным методом лечения дерматомикозов

различных видов животных, в том числе собак и кошек, была накожная ап-

ликация различных мазей, содержащих фунгистатические и фунгицидные

вещества (имидозольные соединения, салициловая кислота, сера и другие)

или оральное применение антибиотика гризеофульвина или кетоканазола.

Однако рядом авторов было установлено, что в химический состав кле-

точных стенок дерматофитов входит такой компонент, как хитин, который

37

делает их малопроницаемыми для лекарственных препаратов, что снижает

эффективность местного лечения дерматофитозов (3,4, 9, 16).

По данным Важениной Е.Г. (16), помимо недостаточной эффективности

антифунгальных препаратов для местного и сиcтемного лечения, они обла-

дают следующими недостатками:

1. При местном лечении:

- каждодневное применение препарата, продолжительностью не менее 1

месяца;

- невозможность выявления всех участков поражения;

- возможность отравления животного токсичными препаратами при сли-

зывании их с места аппликации.

- невозможность эффективной профилактики распространения дермато-

микозов (в случае совместного содержания нескольких животных).

2. При оральном системном лечении:

- необходимость длительного применения антифунгальных средств (1

месяц и более);

- токсический эффект;

- не рекомендуются для животных младше 12-недельного возраста;

- нобходимость контроля общего клинического состояния животного в

связи с возможным побочным эффектом антифунгального препарата.

Однако, наличие широкого перечня противопоказаний при использова-

нии для лечения животных специфических средств, делает различные

наружные противогрибковые препараты востребованными (16, 19).

Широкое распространение дерматофитий, упорное хроническое течение,

разнообразие их клинических проявлений с вовлечением в патологических

процесс помимо кожи, ее придатков, необходимость длительности лечения

обусловливает большой интерес практических ветеринарных врачей к вопро-

сам выбора конкретных лекарственных средств и методов их применения

при этих заболеваниях. Современным принципом лечения дерматомикозов

38

животных является применение препаратов, направленных на уничтожение

или торможение размножения этиологического агента – патогенного гриба в

пораженной коже и её производных. С полным основанием можно утвер-

ждать, что только этиотропная терапия является эффективным подходом к

лечению грибковых заболеваний кожи. В настоящее время арсенал антими-

котических препаратов для системной и местной терапии довольно широк и

происходит постоянное пополнение этого списка (16, 19, 43).

Местная терапия дерматомикозов животных. Для животных локаль-

ное лечение имеет меньшее значение, чем для людей. Животные покрыты

шерстью, которая снижает эффективность процедур. Область нанесения пре-

парата должна быть гораздо шире, чем место видимого поражения, и затра-

гивать здоровые ткани, т.к. грибы могут быть культивированы с участков

шерсти и кожи, находящихся на расстоянии 6 см от очага поражения.

Местная терапия должна рассматриваться, как вспомогательный метод

лечения. Препаратами, используемыми для обработки животных, являются:

2% раствор серной извести (lime sulfur), йодистый повидин, раствор энилко-

назола 0,2%, миконазол 2% в форме крема и спрея, клотримазол и тербина-

фин кремы, шампунь с кетоконазолом, и т.п. Хорошим терапевтическим дей-

ствием обладает юглон в форме 1 %-ной мази. Мазь наносят на пораженные

места, не удаляя корок и волос. Лечат до выздоровления (19, 43, 44, 48, 110,

118, 122).

Применяют однохлористый йод: первые 3 дня корочки пропитывают 3-

5%-ным раствором препарата, затем обмывают пораженные места теплой во-

дой с мылом, удаляют корки и смазывают пораженные места 10 %-ным рас-

твором однохлористого йода. Через 5 дней лечение повторяют (19, 43, 44).

Локальные очаги можно обрабатывать любыми фунгицидами в соответ-

ствии с инструкцией по применению (фунгин, зоомиколь, эпацид F, ламизил,

зонитон и пр.) лучше в форме раствора, а не мази.

Фунгин – спрей, обладающий широким спектром противогрибкового

39

действия, активен в отношении возбудителей трихофитии и микроспории

животных. Препарат обеспечивает надежный лечебный эффект даже при

осложненной форме заболевания, сопровождающейся воспалительными яв-

лениями. Вспомогательные биологически активные компоненты препарата

останавливают воспалительные процессы в коже, способствуют росту волос,

улучшают общее состояние животного. Фунгин малотоксичен для тепло-

кровных животных, в рекомендуемых дозах не оказывает местно-

раздражающего, кожно-резорбтивного и кумулятивного действия.

Зоомиколь - аэрозоль для ветеринарного применения. Предназначен для

лечения трихофитии, микроспории, поверхностного кандидоза и других кож-

ных микозов домашних животных, фавуса птиц. Зоомиколь оказывает силь-

ное антидерматозное, противоплесневое и антикандидозное действие. Препа-

ратом можно обрабатывать не более 30% поверхности кожи.

Эпацид-F - фунгицидный препарат, содержащий в качестве действую-

щего вещества дифенил-(2-хлорфенил)-1-имидазолметан (2%), поверхност-

но-активное вещество и вспомогательные компоненты. Эпацид-F является

эффективным фунгицидным средством контактного действия, активен в от-

ношении возбудителей дерматофитозов собак, пушных зверей и кошек, а

также других домашних животных, обладает продолжительным остаточным

действием на кожно-волосяном покрове. Умеренно токсичен для теплокров-

ных животных, в рекомендуемых дозах не оказывает местно-раздражающего

и аллергенного действия. Разрешается обрабатывать котят и щенков не мо-

ложе недельного возраста. Запрещается обрабатывать кормящих, а также бе-

ременных самок позднее, чем за две недели до появления потомства.

Одну из ведущих позиций в наружной терапии трихофитии в последнее

десятилетие занимают средства аллиламинового ряда – в первую очередь

Ламизил. Ламизил выпускается в различных формах: Спрей, Дермгель и

Крем. Многообразие форм Ламизил позволяет подобрать адекватное лечение

в зависимости от локализации и клинического течения микоза. Ламизил об-

40

ладает высокой фунгицидной активностью в отношении грибов рода

Trichophyton, а также обладает антибактериальным и противовоспалитель-

ным эффектами. Это особенно важно в лечении инфильтративной и инфиль-

тративно-нагноительной форм трихофитии.

Зонитон - эмульгирующий концентрат, содержащий 10% активно дей-

ствующего вещества энилконазола. Препарат предназначен для лечения дер-

матомикозов крупного рогатого скота, лошадей, собак. Ингибируя биосинтез

эргостерина, триглицеридов, фосфолидов, энилконазол вызывает гибель

грибков. Препарат умеренно токсичен для теплокровных животных. В тера-

певтической дозе препарат нетоксичен, не обладает местным раздражающим

и кожно-резорбтивным действием, а также эмбриотоксическим, тератоген-

ным, мутагенным, кумулятивным свойствами.

Согласно данным Лештаевой А.В. (43), чрезвычайно высокую эффек-

тивность (100%) при лечении дерматомикозов собак и кошек показал препа-

рат Микосал, содержащий производное салициловой кислоты и некоторые

другие компоненты.

Спиртовыми растворами (5% настойка йода, фукорцин) следует обраба-

тывать не более 2-3 раз с интервалом 3 дня во избежание химического ожога

кожи.

Столь широко используемая ранее и столь любимая государственными

ветслужбами мазь Ям может оказаться токсичной для животных, особенно

для кошек. Перед обработкой пораженные участки желательно выстричь.

Обработку проводят с захватом здоровой ткани от периферии к центру.

По мнению некоторых практикующих дерматологов хлоргексидин не-

эффективен для очищения кожи от дерматофитов и обработки внешней сре-

ды. Другие рекомендуют использовать шампуни и растворы для ополаскива-

ния содержащие хлоргексидин в концентрации 2-4% (44, 74).

С успехом применяют антибиотик трихоцетин в виде 0,25 %-ной сус-

пензии, приготовленной на рыбьем жире или вазелиновом масле. Повторно

41

этот препарат наносят через 6-8 дней.

При обширных поражениях более эффективным считается мытье жи-

вотных противогрибковыми шампунями («Низорал», «Доктор») два раза в

неделю после предварительного состригания и уничтожения шерсти (обяза-

тельно проведение этой процедуры у длинношерстных кошек и во всех слу-

чаях генерализованного дерматофитоза). Эта процедура может существенно

уменьшить контаминацию внешней среды спорами дерматофитов. Животные

с минимальным поражением не нуждаются в стрижке.

В качестве местной терапии можно использовать дозированное ультра-

фиолетовое облучение кварцевыми лампами (бактерицидными или для зага-

ра). Экспозиция на начальных этапах составляет 20-30 секунд на зону облу-

чения. Курс лечения состоит из 10-15 сеансов с постепенным увеличением

экспозиции до 1-2 минут на животное под контролем ожогов (44).

К сожалению, вышеперечисленные препараты помимо лечебного обла-

дают и побочным действием, проявляющимся кожным зудом, эритемой, по-

калыванием и раздражением. К тому же поставляемые преимущественно из-

за рубежа, многие имеют высокую стоимость.

Системные противогрибковые препараты.

Гризеофульвин (Грицин, Биогризин, Фульцин) был впервые выделен в

1939 г. и использовался при грибковых заболеваниях растений. В медицин-

скую практику был внедрен в 1958 г. и явился исторически первым специфи-

ческим антимикотиком для лечения дерматомикозов у человека. Гризеофу-

львин является фунгистатическим антибиотиком. При его воздействии ак-

тивно метаболизирующие молодые грибковые клетки могут быть убиты без

нарушения целостности клеточной стенки, а у более зрелых клеточных эле-

ментов препарат вызывает только торможение репродукции. Препарат очень

плохо растворим в воде и его всасывание в ЖКТ вариабельно и неполноцен-

но. Абсорбцию можно улучшить назначением препарата вместе с жирной

пищей. Лекарство накапливается в роговом слое кожи, его самая высокая

42

концентрация обнаруживается в поверхностных слоях (43, 80, 86, 104, 105).

У собак побочными явлениями при применении препарата являются

рвота, диарея, обратимое повышение печеночных ферментов. У кошек может

возникать анемия, лейкопения, рвота, диарея, депрессия, кожный зуд, иногда

атаксия. Были описаны случаи нарушения функции костного мозга. У кошек

с вирусом иммунодефицита гризеофульвин может привести к достаточно

значимой вторичной нейтропении. Изменения функции костного мозга воз-

никают при индивидуальной непереносимости препарата и не связаны с ре-

жимом дозирования. Гризеофульвин является потенциальным тератогеном и

не должен использоваться для лечения беременных животных. У собак и ко-

шек рекомендуемая доза может варьировать в достаточно широких пределах,

разделенных на 2 приема (43, 44, 108, 110).

Азолы для системного применения (кетоконазол, итраконазол, флукона-

зол) хорошо всасываются при приеме внутрь. Биодоступность кетоконазола и

итраконазола может значительно варьировать в зависимости от уровня кис-

лотности в желудке и приема пищи. Противогрибковое действие азолов обу-

словлено нарушением целостности мембраны клетки гриба и нарушение син-

теза эргостерола — основного структурного компонента клеточной мембра-

ны грибов (44, 88, 108, 110).

Кетоконазол – синтетический широкого спектра действия противогриб-

ковый препарат, принадлежащий к группе имидазола. Это сильнодействую-

щий ингибитор синтеза эргостерола. Кетоконазол считается фунгистатиком,

однако при анаэробных условиях и достаточно высокой концентрации может

обладать фунгицидными свойствами. При применении препарата у собак

наиболее частыми побочными явлениями являются: отсутствие аппетита,

кожный зуд, алопеции и обратимое осветление шерсти. Кошки более чув-

ствительны к препарату и могут демонстрировать анорексию, лихорадку, де-

прессию и диарею. Может возникать бессимптомно протекающий гепатит с

обратимым повышением уровня печеночных ферментов.

43

Более серьезные нарушения функции печени обусловлены реакцией ин-

дивидуальной гиперчувствительности и возникают у 1 из 10000 кошек. У со-

бак подобные побочные эффекты встречаются еще реже. Кетоконазол обла-

дает тератогенным и эмбриотоксическим эффектом (43, 44, 110).

Итраконазол (Ирунин, Орунгал) - еще один представитель класса азолов

был синтезирован за рубежом в 1980 году и с начала 90–х годов стал активно

использоваться в микологической практике. Препарат обладает фунгистати-

ческим действием. С успехом применяется для лечения дерматофитозов у

кошек и собак. После 7 дней ежедневного применения можно перейти к так

называемой пульс-терапии (прием через день или неделя через неделю) при

сохранении высокой эффективности лечения. Итраконазол переносится го-

раздо лучше кетоконазола и нежелательные побочные эффекты при его при-

менении возникают гораздо реже.

Флуконазол (Дифлюкан, Флюкостат) был синтезирован в 1982 году.

Представляет собой водорастворимое бистриазольное соединение. Механизм

его действия аналогичен другим антимикотикам из группы азолов и состоит

в угнетении образования эргостерола. Флуконазол отличается от других пре-

паратов гидрофильностью, он почти полностью адсорбируется и всасывается

независимо от приема пищи. Все системные азолы, кроме флуконазола, ме-

таболизируются в печени и выводятся преимущественно через ЖКТ. Флуко-

назол, в отличие от других противогрибковых средств, выводится через поч-

ки (преимущественно в неизмененном виде — 80–90%) и может использо-

ваться у животных с заболеваниями печени.

Аллиламины обладают преимущественно фунгицидным действием, свя-

занным с нарушением синтеза эргостерола. В отличие от азолов аллиламины

блокируют более ранние стадии биосинтеза, ингибируя фермент сквале-

нэпоксидазу. Аллиламины обладают широким спектром противогрибковой

активности. К ним чувствительны дерматомицеты (Epidermophyton spp.,

Trichophy-ton spp., Microsporum spp.), кандиды, аспергиллы, гистоплазмы,

44

бластомицеты, криптококк, возбудители хромомикоза.

Несмотря на широкий спектр активности аллиламинов, клиническое

значение имеет только их действие на возбудителей дерматомикозов.

Тербинафин (Экзифин, Ламизил) - медицинский противогрибковый пре-

парат, который можно использовать при лечении мелких домашних живот-

ных. В России в качестве системного антимикотика используется с 1992 года.

Препарат относится к группе аллиламинов. Оказывает преимущественно

фунгицидное действие. В отличие от азолов, блокирует более ранние стадии

синтеза эргостерола. Обладает широким спектром активности, однако кли-

ническое значение имеет только действие на возбудителей дерматомикозов.

Терапевтический эффект наступает быстрее, чем при применении гризеофу-

львина и низорала (обычно в течение первых нескольких дней). Ламизил хо-

рошо всасывается в желудочно–кишечном тракте. В эксперименте не было

выявлено фетотоксичности и влияния препарата на функцию размножения у

животных. Высокая терапевтическая эффективность антимикотика сочетает-

ся с высокой безопасностью, так как он имеет наименьшую минимальную

ингибирующую концентрацию в отношении дерматофитов по сравнению с

системными антимикотиками азольной группы (44, 109, 111).

Таким образом, на рынке ветеринарных препаратов предлагаются разно-

образные лекарственные средства для лечения животных при дерматомико-

зах, однако все они имеют противопоказания и должны применяться с осто-

рожностью. Актуальной является задача по созданию такого противогрибко-

вого препарата для животных, которое давало бы быстрый терапевтический

эффект, обладало антибактериальным, противовоспалительным, ранозажив-

ляющим действием, было безвредным для животных и человека и экологиче-

ски безопасным.

45

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в период с июля 2006 по октябрь 2010 г на кафедре

микробиологии ФГОУ ВПО МГАВМиБ; НИИ биоцидов и нанобиотехноло-

гий (г. Москва) и ООО «НПО «ВЕЛТ» (г. Оренбург). Эксперименты на жи-

вотных проводили в ООО «Вет Био Сервис» (г. Москва), ООО «Вет Зоо Сер-

вис» (г. Москва), КФХ «Корнево» (Истринский р-н, Московской обл.), в пле-

менном овцеводческом хозяйстве института биотехнологии Национальной

академии Кыргызской Республики, в ветеринарном Центре пос. Красково

(Люберецкий р-н, Московской обл.), в СХПК «Верещаки», Новозыбковского

района, Брянской обл., а также в виварии кафедры микробиологии ФГОУ

ВПО МГАВМиБ, лицензированной по работе с микроорганизмами III-IV

групп патогенности.

Характеристика препарата Миковелт.

Миковелт – лекарственное противомикробное средство в форме раство-

ра, предназначенное для лечения сельскохозяйственных, мелких домашних,

зоопарковых, лабораторных и экзотических животных, в т.ч. птиц при дерма-

томикозах и раневых инфекциях, а также для профилактики послеопераци-

онных осложнений и гнойной патологии.

Миковелт содержит в своем составе в качестве действующего вещества

клатрат дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом (0,1±0,01%), а в ка-

честве вспомогательных компонентов изопропиловый спирт (70±3,0%), мети-

46

леновый синий (0,045±0,001%) и дистиллированную воду.

По внешнему виду Миковелт представляет собой не прозрачную жид-

кость синего цвета с запахом спирта.

Действующее вещество Миковелта - клатрат дидецилдиметиламмония

бромида с карбамидом обладает широким спектром антимикробного дей-

ствия в отношении грамположительных и грамотрицательных микроорга-

низмов, в т.ч. анаэробных и спорообразующих бактерий (стрептококков, ста-

филококков, эшерихий, протея, синегнойной палочки, бацилл, клостридий,

фузобактерий и др.), а также микроскопических грибов - возбудителей кан-

дидозов и дерматомикозов, в т.ч. трихофитии, микроспории, эпидермофито-

зе.

Миковелт выпускается в полиэтиленовых флаконах вместимостью 0,1,

0,25 и 0,3 дм3, в т.ч. в беспропеллентной аэрозольной упаковке.

Срок годности препарата составляет 3 года. Средство хранится при тем-

пературе от 0° до плюс 50°С.

Животные. Изучение острой и хронической токсичности препарата про-

водили на белых беспородных мышах массой 202,0 г, на белых беспород-

ных крысах массой 1905,0 г, морских свинках массой 40050 г, кроликах

массой 2,50,3 кг, телятах черно-пестрой породы в возрасте 6 месяцев и со-

баках разных пород.

Лабораторные животные содержались в виварии кафедры микробиоло-

гии ФГОУ ВПО МГАВМиБ, лицензированной по работе с микроорганизма-

ми III-IV групп патогенности (лицензия № 77.01.13.001.Л.000172.07.09 от

10.07.2009 г.), на стандартном пищевом рационе в соответствии с «Инструк-

цией по применению нормативов затрат кормов для лабораторных животных

в учреждениях и предприятиях системы здравоохранения» (приказ № 1179 от

10.10.83). Температура воздуха в виварии составляла 20-22С, влажность

воздуха 70%. До начала эксперимента животных выдерживали в условиях

карантина в течение 14 сут.

47

В экспериментах по изучению лечебно-профилактической эффективно-

сти Миковелта при дерматомикозах и раневых инфекциях животных были

использованы 150 белых мышей, 30 белых половозрелых крыс, 30 морских

свинок, 10 кроликов, 27 телят черно-пестрой породы в возрасте 6-8 месяцев,

18 рабочих лошадей, 322 овцы тонко-рунной породы шерстно-мясного

направления, 52 собаки и 28 кошек разных пород и возрастов.

Тест-штаммы микроорганизмов. Антимикробную активность препарата

Миковелт изучали с использованием следующих культур тест-штаммов мик-

роорганизмов:

- Escherichia coli 11229;

- Staphylococcus aureus 6538;

- Pseudomonas aeruginosa 15412;

- Bacillus cereus 10702;

- Clostridium sporogenes 272;

- Candida albicans 10231;

- Trichophyton verrucosum 480;

- Trichophyton violaceum 11;

- Trichophyton mentagrophytes 210;

- Microsporum gypseum 37;

- Microsporum canis 474;

- Microsporon lanosum 22;

- Epidermophyton rubrum 64;

- Aspergillus niger 9642;

- плесневые грибы Cladosporium spp., Mucor spp.

Штаммы микроорганизмов были получены нами из Всероссийской госу-

дарственной коллекции штаммов микроорганизмов, используемых в ветери-

нарии и животноводстве (ФГУ ВГНКИ), из музея штаммов ГНУ ВИЭВ, кол-

лекции штаммов Центра военно-технических проблем биологической защи-

ты НИИ микробиологии МО РФ и музея штаммов кафедры микробиологии.

48

Все штаммы микроорганизмов имели типичные морфологические, био-

химические и культуральные свойства.

Питательные среды. Для поддержания, освежения и культивирования

тест-штаммов микроорганизмов, а также культур бактерий и грибов, выде-

ленных с поверхности кожи экспериментальных животных и из содержимого

ран использовали мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон

(МПБ), агар и бульон Сабуро, сусло-агар, среду Китта-Тароцци, желточно-

солевой агар, среды Эндо и Плоскирева, кровяной агар и др.

Материалы, растворы, реактивы. В работе применяли дистиллированную

воду и физиологический раствор.

Концентрацию культур тест-штаммов микроорганизмов определяли с

помощью стандарта мутности.

Исследования биохимических показателей крови животных проводили с

помощью спектрофотометра марки “HUMAN”.

Методы исследований. Исследования проводили в соответствии с Руко-

водством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фарма-

кологических веществ (издание второе, переработанное и дополненное,

2005), Методическими указаниями по изучению противогрибковой активно-

сти фармакологических веществ (2000), методическими указаниями «Оценка

воздействия вредных химических соединении на кожные покровы и обосно-

вание предельно допустимых уровней загрязнения кожи» (1980); методиче-

скими рекомендациями по оценке иммунотоксических свойств фармакологи-

ческих веществ (1992); методическими указаниями «Порядок экспертизы,

клинических испытаний, регистрации отечественных средств и субстанций»

(1996); «Санитарно-эпидемиологические правила» СП 1.3.2322-08; «Биоло-

гический контроль безопасности лекарственных средств» (1985); «Инстру-

ментальные методы химического анализа» (1989); Госфармакопея XI издания

"Методы микробиологического контроля лекарственных средств"; ГОСТ

12.1.007-76. Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества.

49

Классификация и общие требования безопасности; ОСТ 64-504-96. Кон-

троль качества лекарственных средств на промышленных предприятиях и

организациях. Основные положения; ОСТ 42-510-98. Правила организации

производства и контроля качества лекарственных средств (GMP); ОСТ

91500.05.001-00. Стандарты качества лекарственных средств; Федеральный

закон N 85-ФЗ «О лекарственных средствах».

Антимикробную активность Миковелта изучали in vitro и in vivo.

Антибактериальную активность Миковелта изучали методом серийных

разведений в соответствующих для культур тест-штаммов питательных сре-

дах и условиях культивирования, а также методом диффузии в агар.

При определении противогрибковой активности Миковелта in vitro пре-

парат изучали методом двукратных серийных разведений в жидкой среде Са-

буро, а также методом диффузии в агар.

При определении противогрибковой активности Миковелта in vivo эф-

фективность препарата изучали на моделях дерматомикозов белых мышей,

морских свинок и кроликов, вызываемых дерматофитами родов Trichophyton,

Microsporon и Epidermophyton, а также на моделях кандидоза белых мышей и

кроликов.

Результаты исследований учитывали по проявлению клинических при-

знаков болезни, исследованиям соскобов кожи на наличие грибов, а также с

применением люминесцентной лампы со светофильтром Вуда (лампа Вуда).

Все опыты проводили в трехкратной повторности для определения сред-

нестатистических данных.

Для определения острой и хронической токсичности препарат в различ-

ных концентрациях вводили животным в желудок, внутрибрюшинно, нано-

сили на кожу, на слизистые оболочки и коньюнктиву глаз, воздействовали

ингаляционно. Изучали токсическое, местно-раздражающее, кожно-резор-

бтивное, сенсибилизирующее действие и кумулятивные свойства препарата.

Учитывали клинические признаки проявления воздействия препарата на ор-

50

ганизм животных, оценивали изменение гематологических и биохимических

показателей крови до и после постановки опытов.

Лабораторно-экспериментальные испытания антимикробной активности

Миковелта in vivo проводили в отношении естественной микрофлоры кожи

кроликов, а также тест-штамма E.coli 11229 при искусственной конта-

минации кожных покровов животных.

Изучение фармакокинетики и сроков выведения остаточных количеств

Миковелта из организма крупного рогатого скота и овец после его курсового

применения изучали, исследуя молоко коров, а также мясо коров и овец, ле-

ченных Миковелтом, на наличие компонентов препарата и определение сро-

ков ожидания для молочной и мясной продукции.

Противовоспалительное действие Миковелта определяли методом он-

кометрии с использованием белых крыс, а также путем искусственного зара-

жения кроликов суспензией культур тест-штаммов E.coli 11229, S.aureus

6538, P.aeruginosa 15412 и C.albicans 10231, с последующей обработкой Ми-

ковелтом пораженных участков кожи.

Изучение ранозаживляющего действия Миковелта проводили с исполь-

зованием белых мышей, кроликов и телят. У кроликов искусственно вызыва-

ли абсцессы подкожной клетчатки путем введения суспензией культур тест-

штаммов E.coli 11229, S.aureus 6538, P.aeruginosa 15412 и C.albicans 10231, с

последующей обработкой Миковелтом пораженных участков кожи. Белым

мышам в области спины наносили глубокие царапины инъекционной иглой и

втирали в раны суспензию тест-штаммов бактерий. После появления у мы-

шей признаков гнойного поражения ран животных лечили Миковелтом.

Морфологию раневого процесса изучали по методу Покровской М.П. и

Макарову Ж.С. (6).

Мазки-отпечатки с поверхности ран фиксировали в течение 3-5 мин в

спирт-эфире и окрашивали в течение 25-30 мин. по Романовскому.

Процесс эпителизации ран определяли с помощью теста Поповой Л.Н.

51

(75).

Эффективность обеззараживающего действия Миковелта при обработке

мест инъекций и операционных полей оценивали в отношении естественной

микрофлоры кожи собак и кошек.

Результаты клинических испытаний Миковелта при раневых инфекциях

подтверждали данными бактериологических исследований отделяемого со-

держимого инфицированных ран и абсцессов, общего состояния животных,

степени заживления ран и исчезновения признаков воспаления.

Оценку пролонгированного действия Миковелта при обработке кожи

проводили в экспериментах на собаках и кошках в отношении естественной

микрофлоры кожи.

Для сравнения, в каждой серии опытов формировали контрольные груп-

пы животных, которых обрабатывали физиологическим раствором или сте-

рильной водопроводной водой, аналогично с опытными группами животных.

Лечебно-профилактическую эффективность Миковелта при дерматоми-

козах у животных оценивали в контролируемых опытах на телятах, лошадях,

овцах, собаках и кошках. Результаты клинических испытаний Миковелта

подтверждали данными микологических исследований соскобов кожи, обще-

го состояния животных и исчезновения клинических признаков дерматоми-

козов.

Экспериментальные данные обрабатывали методом корреляционного,

вариационного и факторного статистического анализа с использованием па-

кета компьютерных программ «Statgraphics Plus for Windous», «Statistica 6,0»

и анализом результатов по Ашмарину И.П. и Воробьеву А.А. (6).

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Определение бактерицидной и противогрибковой

активности Миковелта in vitro

52

2.2.1.1. Определение бактерицидной активности Миковелта

в отношении тест-штаммов бактерий

Антибактериальную активность Миковелта in vitro оценивали в отноше-

нии 48 - часовых культур тест-штаммов - Escherichia coli 11229, Staphylo-

coccus aureus 6538, Pseudomonas aeruginosa 15412, Bacillus cereus 10702, Clos-

tridium sporogenes 272.

Исследования проводили качественными методами: суспензионный, ка-

пельный и чашечный (диско-диффузный).

При использовании суспензионного метода при изучении бактерицидной

активности Миковелта готовили бактериальные взвеси культур тест-

штаммов бактерий с концентрацией не менее 2 млрд. микробных клеток в 1

мл суспензии по стандарту мутности. По 1 мл бактериальной суспензии вно-

сили в пробирки с 5 мл Миковелта и выдерживали в течение 1, 2, 3, 5, 10, 15

и 30 мин. Для контроля взвесь тест-культуры смешивали со стерильной во-

допроводной водой. Через каждое время экспозиции в пробирку вносили

универсальный нейтрализатор и через 10 мин. из бактериальной суспензии с

Миковелтом делали посевы в МПБ, на МПА и в среду Китта-Тароцци (для

клостридий). Посевы помещали в термостат при 37°С на 48 ч. Затем прово-

дили учет результатов исследований на наличие или отсутствие роста изуча-

емых культур тест-штаммов бактерий.

При капельном методе определения бактерицидной активности Мико-

велта на МПА в чашках Петри делали газон из культуры каждого тест-

штамма бактерий (для клостридий использовали глюкозно-кровяной агар и

культивировали их в анаэростате). На поверхность газона в центре чашки

Петри наносили 0,05 мл Миковелта, выдерживали в течение 1, 2, 3, 5, 10, 15 и

30 мин. Затем из места контакта газона бактерий с Миковелтом через опре-

деленное время экспозиции делали высев в МПБ с последующим пересевом

на МПА (для клостридий – посев в среду Китта-Тароцци с последующим пе-

53

ресевом на глюкозно-кровяной агар). Посевы помещали в термостат при

37°С и проводили учет результатов исследований через 48 часов на наличие

или отсутствие роста изучаемых культур тест-штаммов бактерий.

При чашечном (диско-диффузном) методе определения бактерицидной

активности Миковелта изготавливали бумажные диски, которые смачивали

Миковелтом и высушивали. На МПА в чашках Петри делали газон из куль-

туры каждого тест-штамма бактерий (для клостридий использовали глюкоз-

но-кровяной агар и культивировали их в анаэростате). На поверхность газона

в центре чашки Петри наносили бумажный диск с Миковелтом. Посевы по-

мещали на 48 часов в термостат при 37°С, затем определяли зону отсутствия

роста тест-штамма вокруг бумажного диска, пропитанного Миковелтом.

Все исследования проводили в трехкратной повторности.

С помощью качественного суспензионного метода было установлено,

что Миковелт вызывает полную гибель культур тест-штаммов бактерий при

всех испытуемых экспозициях (табл. 6).

Таблица 6. Бактерицидная активность Миковелта по отношению

к тест-штаммам бактерий (качественный суспензионный метод)

Культура

тест-штамма

Экспери-

мент

Экспозиция, мин

1 2 3 5 10 15 30

E.coli 11229 опыт - - - - - - -

контроль + + + + + + +

S.aureus 6538 опыт - - - - - - -

контроль + + + + + + +

P.aeruginosa 15412 опыт - - - - - - -

контроль + + + + + + +

B.cereus 10702 опыт - - - - - - -

контроль + + + + + + +

C.sporogenes 272 опыт - - - - - - -

контроль + + + + + + + Примечание: «–» - отсутствие роста бактерий; «+» - наличие роста бактерий.

Как следует из данных таблицы, эшерихии, стафилококки, синегнойная

палочка, бациллы, кандиды и клостридии погибали в присутствии Миковелта

54

уже через 1 мин. экспозиции. Во всех контрольных пробах наблюдался рост

изучаемых культур тест-штаммов бактерий.

При использовании капельного метода определения антимикробной ак-

тивности, Миковелт оказывал бактерицидное действие на тест-штаммы бак-

терий в месте контакта при экспозиции 2 мин. в отношении E.coli, S. aureus,

P.аeruginosa. Гибель B.cereus и C.sporogenes наступала при 3-минутной экс-

позиции (табл. 7).

Таблица 7. Бактерицидная активность Миковелта по отношению

к тест-штаммам бактерий (капельный метод)

Культура

тест-штамма

Экспери-

мент

Экспозиция, мин

1 2 3 5 10 15 30

E.coli 11229 опыт + - - - - - -

контроль + + + + + + +

S.aureus 6538 опыт + - - - - - -

контроль + + + + + + +

P.aeruginosa 15412 опыт + - - - - - -

контроль + + + + + + +

B.cereus 10702 опыт + + - - - - -

контроль + + + + + + +

C.sporogenes 272 опыт + + - - - - -

контроль + + + + + + + Примечание: «–» - отсутствие роста бактерий; «+» - наличие роста бактерий.

Использование чашечного (диско-диффузного) метода определения бак-

терицидной активности Миковелта позволило определить зоны отсутствия

роста культур тест-штаммов бактерий под действием препарата (табл. 8).

Таблица 8. Зоны ингибирования роста культур тест-штаммов бактерий

препаратом Миковелт (диско-диффузный метод)

Культура тест-штамма Зона отсутствия роста, мм

Escherichia coli 11229 14,50,1

Staphylococcus aureus 6538 20,60,6

Pseudomonas aeruginosa 15412 21,90,2

55

Bacillus cereus 10702 11,60,5

Clostridium sporogenes 272 12,50,2

Из данных таблицы следует, что Миковелт проявил наиболее высокую

антибактериальную активность в отношении стафилококка и синегнойной

палочки, часто осложняющих течение раневого процесса у животных. Также

высокой активностью Миковелт обладал в отношении эшерихий, бацилл и

клостридий (рис. 4-6).

Рис. 4. Антимикробная активность Миковелта в отношении

Pseudomonas aeruginosa

а) б)

Рис. 5. Антимикробная активность Миковелта в отношении

Staphylococcus aureus (а) и Escherichia coli (б)

56

а) б)

Рис. 6. Антимикробная активность Миковелта в отношении

Bacillus cereus (а) и Clostridium sporogenes (б)

При высевах из зон ингибирования роста бактерий были получены от-

рицательные результаты.

Таким образом, Миковелт обладает бактерицидной активностью в отно-

шении культур тест-штаммов Escherichia coli 11229, Staphylococcus aureus

6538, Pseudomonas aeruginosa 15412, Bacillus cereus 10702 и Clostridium spo-

rogenes 272 при экспозиции 1-3 мин. Коэффициент эффективности бактери-

цидного действия Миковелта составил 100%.

2.2.1.2. Определение противогрибковой активности Миковелта

в отношении дрожжеподобных грибов рода Candida

Противогрибковую активность Миковелта in vitro оценивали в отноше-

нии 24 - часовой культуры тест-штамма Candida albicans 10231.

Исследования проводили качественными методами: суспензионный, ка-

пельный и чашечный (диско-диффузный).

При использовании суспензионного метода готовили взвесь культуры

тест-штамма кандиды с концентрацией не менее 2 млрд. микробных клеток в

1 мл суспензии по стандарту мутности. По 1 мл микробной суспензии вноси-

ли в пробирки с 5 мл Миковелта и выдерживали в течение 1, 2, 3, 5, 10, 15 и

30 мин. Для контроля взвесь тест-культуры смешивали со стерильной водо-

57

проводной водой. Через каждое время экспозиции в пробирку вносили уни-

версальный нейтрализатор и через 10 мин. из микробной суспензии с Мико-

велтом делали посевы в МПБ и на МПА. Посевы помещали в термостат при

30°С на 24 ч. Затем проводили учет результатов исследований на наличие

или отсутствие роста кандид.

При капельном методе определения противогрибковой активности Ми-

ковелта на МПА в чашках Петри делали газон из культуры кандид. На по-

верхность газона в центре чашки Петри наносили 0,05 мл Миковелта, вы-

держивали в течение 1, 2, 3, 5, 10, 15 и 30 мин. Затем из места контакта газо-

на кандид с Миковелтом через определенное время экспозиции делали высев

в МПБ с последующим пересевом на МПА. Посевы помещали в термостат

при 30°С и проводили учет результатов исследований через 24 часа на нали-

чие или отсутствие роста кандид.

При чашечном (диско-диффузном) методе определения противогрибко-

вой активности Миковелта изготавливали бумажные диски, которые смачи-

вали Миковелтом и высушивали. На МПА в чашках Петри делали газон из

кандид и на поверхность газона в центре чашки Петри наносили бумажный

диск с Миковелтом. Посевы помещали на 24 часа в термостат при 30°С, за-

тем определяли зону отсутствия роста тест-штамма вокруг бумажного диска,

пропитанного Миковелтом.

Все исследования проводили в трехкратной повторности.

С помощью качественного суспензионного метода было установлено,

что Миковелт вызывает полную гибель культуры тест-штамма кандид при

всех испытуемых экспозициях (табл. 9).

Таблица 9. Определение противогрибковой активности Миковелта

по отношению к тест-штамму Candida albicans 10231

суспензионным методом

Экспозиция, мин Опыт Контроль

58

1 - +

2 - +

3 - +

5 - +

10 - +

15 - +

30 - + Примечание: «–» - отсутствие роста бактерий; «+» - наличие роста бактерий.

Как следует из данных таблицы, кандиды погибали в присутствии Мико-

велта уже через 1 мин. экспозиции. Во всех контрольных пробах наблюдался

рост изучаемой культуры тест-штамма.

При использовании капельного метода определения противогрибковой

активности, Миковелт оказывал фунгицидное действие на кандиды в месте

контакта при экспозиции 3 мин. (табл. 10).

Таблица 10. Определение противогрибковой активности Миковелта

по отношению к тест-штамму Candida albicans 10231

капельным методом

Экспозиция, мин Опыт Контроль

1 + +

2 + +

3 - +

5 - +

10 - +

15 - +

30 - + Примечание: «–» - отсутствие роста бактерий; «+» - наличие роста бактерий.

Использование чашечного (диско-диффузного) метода определения про-

тивогрибковой активности Миковелта позволило определить зоны отсут-

ствия роста культуры тест-штамма Candida albicans 10231 под действием

Миковелта (табл. 11).

Таблица 11. Зоны ингибирования роста культуры тест-штамма

59

Candida albicans 10231 препаратом Миковелт в сравнительном аспекте

Культура тест-штамма Зона отсутствия роста, мм

Candida albicans 10231 24,80,2

Escherichia coli 11229 14,50,1

Staphylococcus aureus 6538 20,60,6

Pseudomonas aeruginosa 15412 21,90,2

Bacillus cereus 10702 11,60,5

Clostridium sporogenes 272 12,50,2

Из данных таблицы следует, что Миковелт проявил наиболее высокую

антимикробную активность в отношении кандид (рис. 7).

Рис. 7. Зоны отсутствия роста C.albicans 10231 в присутствии Миковелта

При высевах из зон ингибирования роста кандид были получены отри-

цательные результаты.

В контрольных чашках рост кандид был обильным (рис. 8).

60

Рис. 8. Рост C.albicans 10231 в контрольной пробе

Таким образом, Миковелт обладает противогрибковой активностью в

отношении культуры тест-штамма Candida albicans 10231, при экспозиции 1-3

мин. Коэффициент эффективности фунгицидного действия Миковелта соста-

вил 100%.

2.2.1.3. Определение противогрибковой активности Миковелта

методом двукратных серийных разведений в жидкой среде

Противогрибковую активность Миковелта in vitro изучали также мето-

дом двукратных серийных разведений в жидкой среде Сабуро.

Готовили два параллельных ряда разведений Миковелта в пробирках с

жидкой средой Сабуро, в которые засевали культуры тест-штаммов грибов

(T.verrucosum 480, T.violaceum 11, T.mentagrophytes 210, M.gypseum 37,

M.canis 474, M.lanosum 22, E.rubrum 64, A.niger 9642, плесневые грибы

Cladosporium spp., Mucor spp.).

Засеянные пробирки помещали в термостат при 27°С на 14 дней. Чув-

ствительность грибов к препарату определяли его минимальной дозой, при

которой роста грибов не наблюдалось.

61

Разведение препарата производили методом последовательных разведе-

ний. Для этого, жидкую среду Сабуро разливали стерильно, по 3 мл в каж-

дую пробирку; в первую пробирку ряда наливали 4,5 мл Миковелта. Всего в

ряду было 10 пробирок, из них последняя была контрольная.

В качестве стандартной навески брали 100 мг субстанции Велтон – дей-

ствующего вещества препарата, растворяли его в 10 мл изопропилового

спирта, а затем добавляли 90 мл дистиллированной воды.

Таким образом, исходное разведение содержало испытуемый препарат в

концентрации 10000 мкг/мл.

Затем 0,5 мл этого разведения вносили в первую пробирку ряда (с 4,5 мл

среды), разводя тем самым концентрацию препарата еще в 10 раз.

Следовательно, первая пробирка ряда содержала 1000 мкг/мл испытуе-

мого препарата.

В дальнейшем из первой пробирки пипеткой отбирали 3 мл раствора

препарата и переносили его во вторую пробирку, тщательно перемешивали,

снова брали 3 мл раствора и переносили его в третью пробирку и т.д. Из

предпоследней пробирки 3 мл выливали в сливную чашку.

В последнюю пробирку, как и в контрольные, препарат не вносили.

Таким образом, в каждом ряду первые пробирки содержали по 2 мл рас-

твора, а все последующие — по 3 мл.

В каждой последующей пробирке концентрация препарата уменьшалась

вдвое. При этом получался ряд следующих разведений, мкг/мл — 1000; 500;

250; 125; 62,5; 31,2; 15,0; 7,5; 3,8; 1,9.

Параллельно пробиркам с разведениями препарата Миковелт брали ана-

логичное разведениям препарата количество контрольных пробирок с жид-

кой средой Сабуро, куда препарат не вносили.

Культуры тест-штаммов грибов засевали на агар Сабуро и культивирова-

ли в термостате при 27°С 28 дней, затем газон смывали жидкой средой Са-

буро.

62

Для точного учета вносимой культуры гриба в раствор препарата опре-

деляли концентрацию гриба по бактериальному стандарту мутности, учиты-

вая, что величина грибковых элементов примерно в 10 раз превышает вели-

чину бактерий (например, 1 млрд. микробных тел в 1 мл по стандарту соот-

ветствуют 100 млн. грибковых тел в 1 мл).

Общая концентрация грибковых элементов во взвеси составила 100

млн.г.т./мл.

Пипеткой, объемом 1 мл, вносили по 1 капле взвеси гриба в каждую про-

бирку с разведенным препаратом, включая контрольную, тщательно переме-

шивали и помещали в термостат при 27°С на 14 дней.

В контрольные пробирки также вносили культуру тест-штамма гриба.

Через 14 дней пробирки извлекали из термостата и учитывали наличие

или отсутствие роста грибов в пробирках с различными разведениями препа-

рата.

Полученные результаты исследований представлены в табл. 12.

Таблица 12. Результаты изучения противогрибковой активности

Миковелта методом двукратных серийных разведений

в жидкой среде Сабуро

Тест-штамм гриба

Концентра-ция, мкг/мл

Наличие или отсутствие роста опыт контроль

1 2 3 4 Trichophyton verrucosum 480

1000 – + 500 – + 250 – + 125 – + 62,5 – + 31,2 – + 15,0 – +

7,5 – + 3,8 + + 1,9 + +

Trichophyton violaceum 11

1000 – + 500 – +

63

250 – + 125 – + 62,5 – + 31,2 – + 15,0 – + 7,5 – + 3,8 + + 1,9 + +

Trichophyton mentagrophytes 210

1000 – + 500 – + 250 – + 125 – + 62,5 – + 31,2 – + 15,0 – + 7,5 – + 3,8 + + 1,9 + +

1 2 3 4 Microsporum gypseum 37

1000 – + 500 – + 250 – + 125 – +

62,5 – + 31,2 – + 15,0 – + 7,5 – + 3,8 + +

1,9 + + Microsporum canis 474

1000 – + 500 – + 250 – + 125 – + 62,5 – + 31,2 – + 15,0 – +

7,5 – + 3,8 + + 1,9 + +

Microsporon lanosum 22

1000 – + 500 – + 250 – + 125 – + 62,5 – + 31,2 – + 15,0 – + 7,5 + + 3,8 + + 1,9 + +

64

Epidermophyton rubrum 64

1000 – + 500 – + 250 – + 125 – +

62,5 – + 31,2 – + 15,0 – + 7,5 + + 3,8 + + 1,9 + +

Aspergillus niger 9642

1000 – + 500 – + 250 – + 125 – + 62,5 – + 31,2 – + 15,0 – + 7,5 + + 3,8 + + 1,9 + +

1 2 3 4 Cladosporium spp.

1000 – + 500 – + 250 – + 125 – + 62,5 – + 31,2 + + 15,0 + + 7,5 + + 3,8 + + 1,9 + +

Mucor spp.

1000 – + 500 – + 250 – + 125 – + 62,5 – + 31,2 + + 15,0 + + 7,5 + + 3,8 + + 1,9 + +

В результате проведенных исследований было установлено, что препарат

Миковелт в концентрациях 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,2, 15,0 и 7,5 обладает

фунгицидной активностью в отношении культур тест-штаммов T.verrucosum

480, T.violaceum 11, T.mentagrophytes 210, M.gypseum 37 и M.canis 474; в

65

концентрациях 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,2 и 15,0 – в отношении

M.lanosum 22, E.rubrum 64 и A.niger 9642; в концентрациях - 1000, 500, 250,

125 и 62,5 – в отношении Cladosporium spp. и Mucor spp.

Следовательно, рабочая концентрация препарата Миковелт, обладающая

фунгицидным действием в отношении возбудителей микозов и плесневых

грибов должна составлять не менее 62,5 мкг/мл (или 0,06 мг/мл.).

2.2.1.4. Определение противогрибковой активности Миковелта

методом диффузии в агар Сабуро

Для дополнительного подтверждения фунгицидной активности Мико-

велта в концентрации 0,06 мг/мл был использован метод диффузии а агар

Сабуро.

Опыты проводили в трехкратной повторности.

На застывшую поверхность агара Сабуро наносили взвесь культуры

определенного тест-штамма гриба и равномерно растирали ее шпателем по

поверхности агара. По 3 чашки Петри с агаром Сабуро и нанесенной на его

поверхность культурой тест-штамма гриба были опытными, по 3 чашки –

контрольными.

На поверхность агара Сабуро в опытных чашках накладывали алюмини-

евое кольцо, в которое затем капали препарат Миковелт в разведении 0,06

мг/мл. Опытные и контрольные чашки Петри помещали в термостат при

27°С на 14 дней. После культивирования учитывали величину зоны задержки

роста культур тест-штаммов грибов под воздействием Миковелта.

Было установлено, что в чашках Петри препарат Миковелт диффундиро-

вал в агар Сабуро и задерживал рост культур тест-штаммов грибов. Ни в од-

ной опытной чашке через 14 дней роста грибов не наблюдалось.

В контрольных чашках Петри на агаре Сабуро грибы интенсивно разви-

вались и образовывали воздушный мицелий (рис. 9-16).

66

Рис. 9. Культура гриба Trichophyton violaceum 11, на агаре Сабуро

в контрольной пробе (12 сутки культивирования)

Рис. 10. Колония гриба Trichophyton verrucosum 480 на агаре Сабуро

в контрольной пробе (14 сутки культивирования)

67

Рис. 11. Колонии гриба Trichophyton mentagrophytes 210 на агаре Сабуро

в контрольной пробе (8 сутки культивирования)

Рис. 12. Рост Microsporum canis 474 на агаре Сабуро

в контрольной пробе (14 сутки культивирования)

Рис. 13. Рост Microsporum gypseum 37 на агаре Сабуро

в контрольной пробе (10 сутки культивирования)

68

Рис. 14. Рост Epidermophyton rubrum 64 на агаре Сабуро

в контрольной пробе (14 сутки культивирования)

Рис. 15. Рост Mucor spp. на агаре Сабуро в контрольной пробе

(14 сутки культивирования)

Рис. 16. Рост Aspergillus niger 9642 на агаре Сабуро в контрольной

пробе (14 сутки культивирования)

69

Таким образом, Миковелт обладает высокой противогрибковой активно-

стью in vitro в отношении культур тест-штаммов T.verrucosum 480,

T.violaceum 11, T.mentagrophytes 210, M.gypseum 37, M.canis 474, M.lanosum

22, E.rubrum 64, A.niger 9642 и плесневых грибов Cladosporium spp. и Mucor

spp. Коэффициент эффективности фунгицидного действия Миковелта соста-

вил 100%.

2.2.2. Определение острой и хронической токсичности

препарата Миковелт на организм лабораторных животных

Экспериментальные исследования по определению острой и хрониче-

ской токсичности Миковелта проводили согласно «Методическим указаниям

по оценке токсичности и опасности дезинфицирующих средств» (2002) и в

соответствии с методическими указаниями «О порядке испытания новых

дезинфицирующих средств для ветеринарной практики» (1987).

Токсичность Миковелта изучали на белых мышах, белых крысах, мор-

ских свинках и кроликах.

Целью исследований являлось изучение острой и хронической токсично-

сти препарата при поступлении его в желудок и через органы дыхания, изу-

чение местно-раздражающего действия на кожу и слизистые оболочки глаз,

кожно-резорбтивного и аллергенного (сенсибилизирующего) действия.

В остром опыте устанавливали параметры токсичности и среднюю ле-

тальную дозу, в хроническом опыте определяли наличие явлений кумуляции

или привыкания, скармливая переносимую дозу препарата с кормом в тече-

ние длительного времени.

Для определения влияния препарата на гомеостаз и жизненные функции

организма у экспериментальных животных определяли биохимические пока-

затели крови до и после постановки опыта, проводили морфологические ис-

следования паренхиматозных органов.

70

В острый и хронический опыты подбирали клинически здоровых, поло-

возрелых животных обоего пола.

Перед началом опыта животных выдерживали в карантине не менее 14

суток, ведя за ними ежедневные клинические наблюдения. Слабых животных

из опытных и контрольных групп исключали.

Результаты изучения воздействия препарата на организм животных

при пероральном применении.

Исследования острой токсичности Миковелта при введении в желудок

проводили на белых половозрелых мышах. Было сформировано 4 группы

животных-аналогов, 3 опытные и 1 контрольная, по 10 голов в каждой.

Миковелт вводили животным опытных групп в желудок с помощью ме-

таллического зонда в дозах 4000, 5000 и 6000 мг/кг (по действующему веще-

ству). Дозы исчисляли в мг действующего вещества на 1 кг массы тела жи-

вотного. Для удобства составляли дозировочную таблицу (табл. 13).

Учитывали объем вводимой в желудок животных жидкости с тем расче-

том, чтобы он не превышал 1 мл.

Таблица 13. Расчет доз Миковелта для белых мышей

при пероральном введении для определения показателя ЛД50

Доза препарата,

мг/кг

Концентрация препара-

та в растворе, %

Объем раствора препарата,

вводимого в желудок, мл

4000

5000

6000

10,5

12,0

13,5

0,8

0,9

1,0

Животным контрольной группы аналогично вводили физиологический

раствор. Перед введением растворов препарата животных не кормили в тече-

ние 3-4 часов и такое же время выдерживали после введения препарата. Со-

71

стояние животных оценивали сразу после введения Миковелта в течение

первого дня и далее каждые сутки в течение 14 дней.

Результаты исследований представлены в табл. 14.

Таблица 14. Результаты острого опыта при введении препарата

Миковелт в желудок белым мышам

Доза,

мг/кг

Гибель животных через….. часов

24 48 72 96 120 144 168 336 Результат

(павшие/живые)

4000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 /10

5000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 /10

6000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 /10

Контроль 0 0 0 0 0 0 0 0 0 /10

Было установлено, что при введении различных концентраций Миковел-

та белым мышам в желудок клинической картины отравления и гибели жи-

вотных не наблюдалось, а ЛД50 Миковелта составляет более 6000 мг/кг.

Согласно «Классификации опасности веществ по степени воздействия на

организм», которая входит в ГОСТ 12.1.007-76, препарат Миковелт при вве-

дении в желудок относится к 4 классу малоопасных веществ.

Острая токсичность препарата при парентеральном введении.

Острую токсичность Миковелта при парентеральном введении исследо-

вали на белых мышах при введении им препарата в брюшную полость.

Было сформировано 4 группы животных-аналогов, 3 опытные и 1 кон-

трольная, по 10 голов в каждой.

Препарат вводили стерильной иглой в брюшную полость в дозах 4000,

5000 и 6000 мг/кг. Животным контрольной группы аналогично вводили фи-

зиологический раствор.

У животных контролировали возможные клинические признаки инток-

сикации и гибель в течение первых суток и далее до 14-го дня включительно.

72

Результаты исследований представлены в таблице 15.

Таблица 15. Результаты острого опыта при введении Миковелта

в брюшную полость белым мышам

Дозы, мг/кг

Гибель животных через….. дней..

1 2 3 4 5 6 7 10 14 Результат

(павшие/живые)

4000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 / 10

5000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 / 10

6000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 / 10

Контроль 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 / 10

В результате проведенных исследований было установлено, что при вве-

дении Миковелта в брюшную полость мышам в дозах от 4000 до 6000 мг/кг

клинической картины отравления и гибели животных не наблюдалось.

Величина ЛД50 Миковелта составила более 6000 мг/кг, что по классифи-

кации опасности веществ по степени воздействия на организм соответствует

4 классу малоопасных веществ.

Изучение токсичности препарата при ингаляционном воздействии.

Исследования острой ингаляционной опасности Миковелта проводили на 20

белых мышах, помещенных в герметичный эксикатор. За сутки до опыта, в

эксикатор был внесен готовый к применению раствор Миковелта в чашке

Петри. Затем в эксикаторы помещали животных на 2 часа. Контрольные жи-

вотные находились в эксикаторе, в который помещали чашку Петри с ди-

стиллированной водой.

Наблюдение за животными проводили в течение экспозиции Миковелта

и после окончания его ингаляционного воздействия в течение 3 сут. Живот-

ных обследовали сразу после окончания воздействия препарата по показате-

лям состояния нервной системы: суммационно-пороговому показателю

(СПП), спонтанно-двигательной активности (СДА), вертикальной двигатель-

ной активности (ВДА), норковому рефлексу (метод открытой площадки), а

73

также по частоте дыхания (ЧД).

Было установлено, что состояние подопытных животных за все время

воздействия Миковелта не отличалось от контрольных. Клинических призна-

ков отравления и гибели животных не наблюдалось (табл. 16).

Таблица 16. Показатели состояния белых мышей после

однократного ингаляционного воздействия Миковелта

Показатель Опытная группа Контрольная группа

Масса тела, г 20,0 0,5 20,0 0,5

СПП, усл.ед. 6,1 0,6 6,0 0,5

СДА за 15 мин. 320 26 312 40

ВДА за 1 мин. 9,0 0,7 9,5 0,5

ЧД в мин. 108 8,5 110 6,5

Норковый рефлекс за 3 минуты 7,00,3 7,00,5

Как следует из данных табл. 16, достоверных изменений показателей со-

стояния белых мышей в опытной группе не отмечено, они соответствуют

данным в контрольной группе животных.

Таким образом, по ингаляционной опасности в насыщающих концентра-

циях средство Миковелт относится к 4 классу малоопасных веществ. Учиты-

вая назначения и область применения Миковелта, ингаляционная опасность

его маловероятна.

Изучение местно-раздражающего действия.

Местно-раздражающее действие Миковелта изучали при воздействии

препарата на неповрежденную и поврежденную кожу, а также слизистую

оболочку, конъюнктиву и роговицу глаз животных. Исследования проводи-

ли на белых мышах, белых крысах, морских свинках и кроликах.

Определение острой токсичности препарата на неповрежденную кожу.

Испытание проводили на 3 кроликах, не использовавшихся ранее в других

опытах.

74

За сутки до начала опыта в области спины кроликов выстригали шерсть

на участке площадью 8х9 см. На подготовленный участок кожи с помощью

стеклянной пипетки наносили Миковелт в количестве, равномерно покрыва-

ющем весь выстриженный участок, и слегка втирали препарат в кожу живот-

ного этой же пипеткой.

Для контроля одному кролику на аналогично подготовленный участок

кожи спины наносили такое же количестве водопроводной воды.

Аппликацию Миковелта и воды проводили однократно и наблюдали за

животными в течение 14 дней. Животных содержали в индивидуальных

клетках.

Было установлено, что Миковелт не вызывает гибели эксперименталь-

ных животных при данном способе аппликации. Симптомов интоксикации у

животных в течение всего срока наблюдения не отмечалось.

Таким образом, Миковелт при нанесении на кожу животных не проявля-

ет острой токсичности, что соответствует 4 классу опасности по ГОСТ

12.1.007-76.

Определение местно-раздражающего действия препарата на неповре-

жденную кожу. Испытание проводили на 6 кроликах с непигментированной

кожей.

За сутки до начала опыта на крупе кроликов выстригали шерсть на

участке размером 5x5 см. На подготовленный участок кожи животного с по-

мощью пипетки наносили 1,0 мл Миковелта, равномерно распределяя его по

всей поверхности опытного участка, и слегка втирали в кожу той же пипет-

кой.

Для контроля этим же кроликам на аналогично подготовленный участок

кожи крупа, с противоположной стороны наносили такое же количестве во-

допроводной воды.

Аппликацию Миковелта и воды проводили однократно и многократно

(по 3 кролика на каждый опыт).

75

Реакцию кожи при однократном нанесении препарата регистрировали

через 2, 4 и 8 часов экспозиции.

При многократном использовании Миковелт наносили на кожу живот-

ным 1 раз в день ежедневно в течение 14 дней. Перед каждым нанесением

препарата опытный участок кожи обмывали теплой водой с помощью ватно-

го тампона и высушивали чистой марлевой салфеткой.

Животных содержали в индивидуальных клетках и крепили на шею во-

ротники из пластика, предотвращающие слизывание препарата.

Оценку функционального состояния кожи в процессе опыта выражали в

баллах по проявлению степени эритемы и отека (изменению толщины кож-

ной складки). Выраженность эритемы определяли визуально и с помощью

колориметрической линейки Суворова С.И., а величину отека определяли,

измеряя толщину кожной складки при помощи толщинометра TP-1-10.

Результаты исследований представлены в таблицах 17 и 18.

Таблица 17. Оценка функционального состояния кожи кроликов

при однократной аппликации Миковелта

Интенсивность эритемы

Оценка эритемы по ли-

нейке Суворова, балл

Оценка состоя-

ния кожи жи-

вотных

Отсутствие эритемы 0 -

Слабая (розовый тон) 1 -

Умеренно выраженная (розо-

вато-красный тон) 2 -

Выраженная (красный тон) 3 -

Резко выраженная 4 -

Интенсивность отека (тол-

щина кожной складки), мм

Оценка при помощи

толщинометра, балл

Оценка состоя-

ния кожи жи-

76

вотных

Отсутствие 0 -

Слабая, до 0,3 1 -

Умеренная, 0,4-0,6 2 -

Выраженная, 0,7-1,0 3 -

Резко выраженная, более 1,0 4 -

Было установлено, что у всех кроликов, которым Миковелт наносили

однократно, изменения на коже не отмечались, отеки и утолщения кожной

складки отсутствовали.

Таблица 18. Оценка функционального состояния кожи кроликов при

многократной аппликации Миковелта

Интенсивность эритемы

Оценка эритемы по

линейке Суворова,

балл

Оценка состояния

кожи животных

1 2 3

Отсутствие эритемы 0 -

Слабая (розовый тон) 1 +

Умеренно выражзнная (розо-

вато-красный тон) 2 -

Выраженная (красный тон) 3 -

Резко выраженная

4 -

1 2 3

Интенсивность отека (тол-

щина кожной складки), мм

Оценка при помощи

толщинометра, балл

Оценка состояния

кожи животных

Отсутствие 0 -

Слабая, до 0,3 1 +

Умеренная, 0,4-0,6 2 -

Выраженная, 0,7-1,0 3 -

Резко выраженная, более 1,0 4 -

При многократном воздействии Миковелтом на кожу кроликов в тече-

ние 14 дней наблюдалась слабая эритема (1 балл), интенсивность отека со-

ставила 0,3 мм по утолщению кожной складки после 5-7 аппликаций.

77

Таким образом, на неповрежденную кожу экспериментальных животных

Миковелт при однократном применении не оказывал токсического и местно-

раздражающего действия, а при многократном использовании вызывал сла-

бую эритему.

Определение токсического и местно-раздражающего действия Миковел-

та на скарифицированную кожу. Исследования проводили на белых крысах и

кроликах.

Перед экспериментом животным выстригали шерсть в области спины, с

двух сторон чуть ниже позвоночника для моделирования опытного и кон-

трольного участков кожи. Кожу на контрольном и опытном участках повре-

ждали инъекционной иглой, нанося неглубокие царапины в виде сетки.

Белым крысам в количестве 10 голов Миковелт наносили на поврежден-

ный и неповрежденный участки кожи дважды в день в течение 14 дней, рав-

номерно пропитывая препаратом всю обрабатываемую поверхность. Кон-

трольный участок кожи обрабатывали стерильной водой. За животными вели

ежедневные наблюдения. Результаты обследования животных представлены

в таблице 19.

Таблица 19. Результаты обследования крыс после повторного

накожного нанесения Миковелта на скарифицированную кожу

Показатели Контроль, Мм Опыт, Мм

Масса тела, г 1915,0 1923,0

СПП, усл.ед. 6,20,5 6,30,5

ВДА за 1 мин. 10,00,5 9,8 0,8

СДА за 15 мин. 42225 42730

Норковый рефлекс за 3 минуты 7,80,5 7,70,5 Примечание: во всех случаях Р > 0,05.

Было установлено, что повторные аппликации Миковелта на поврежден-

78

ную кожу белых крыс не осложняли заживление искусственно нанесенных

ран. Заживление на опытных участках кожи у животных отмечалось на 3-5

сутки, в то время, как на контрольных участках видимые признаки заживле-

ния наблюдались на 7-9 дни исследований.

У Миковелта был обнаружен неожиданный побочный эффект - препарат

в 8 раз ускорял рост волос, в сравнении с контролем, и способствовал восста-

новлению волосяных луковиц у животных.

В остром опыте на кроликах изучали местно-раздражающее действие

Миковелта с аппликацией под повязку на 24 часа по методу Драйзе.

На опытные и контрольные участки скарифицированной кожи кроликов

под компресс помещали марлевую салфетку, пропитанную Миковелтом. На

контрольный участок кожи под компресс также помещали марлевые салфет-

ки, пропитанные физиологическим раствором.

Оценку местно-раздражающего действия препарата проводили через 2,

4 и 8 часов экспозиции, с учетом цвета, тургора, эластичности кожи, возник-

новения отека, гиперемии, шелушения.

По окончании экспозиции на обоих участках кожи кроликов не отмеча-

лось признаков раздражающего действия Миковелта.

Таким образом, при однократном и многократном применении на по-

врежденную кожу экспериментальных животных Миковелт не оказывал ток-

сического и местно-раздражающего действия. Препарат ускорял процессы

заживления ран в 2 раза и способствовал росту волос.

Определение раздражающего действия препарата на глаза животных.

Исследования местно-раздражающего действия на глаза проводили на кро-

ликах породы шиншилла. В опыте было использовано 3 кролика, которым в

конъюнктиву правого глаза закапывали Миковелт в количестве 2 капель. Ле-

вый глаз у кроликов был контрольным.

Реакцию слизистой оболочки опытного глаза, века и роговицы регистри-

ровали сразу после воздействия и в течение 7 дней наблюдения и учитывали

79

в баллах. Баллы суммировались и оценка проводилась по выраженности раз-

дражающего действия препарата на глаза, по соответствующей классифика-

ции, которая включает 5 классов опасности (табл. 20).

Таблица 20. Оценка раздражающего действия Миковелта

на глаза кроликов

Выраженность раздра-

жающего действия

Средний сум-

марный балл

Класс

опасности

Оценка состоя-

ния глаз живот-

ных

Резко выраженное более 11 1 -

Выраженное 7 – 10 2 -

Умеренное 4 – 6 3 -

Слабое 1 – 3 4 +

Отсутствие 0 5 -

Было установлено, что Миковелт не оказывает раздражающего действия

на роговицу, при воздействии препарата на коньюнктиву наблюдалась сла-

бая ее гиперемия без выделений, которая исчезала у всех кроликов через 1-2

дня. Наблюдение в течение недели не выявило никаких изменений, выделе-

ния отсутствовали. Роговица у всех опытных животных не изменялась, оста-

ваясь прозрачной, конъюнктивит не развивался.

Суммарный балл составил от 1 до 3.

Таким образом, согласно «Классификации опасности веществ по степени

воздействия на организм» по ГОСТ 12.1.007-76, препарат Миковелт при воз-

действии на слизистые оболочки, роговицу и коньюнктиву глаз животных

относится к 4 классу малоопасных веществ.

Изучение кожно-резорбтивного действия.

Задачей данного этапа исследований являлось получение альтернативно-

го ответа о возможности развития интоксикации организма при контакте

Миковелта с кожей экспериментальных животных.

Исследования проводили в соответствии с методическими указаниями

80

«Оценка воздействия вредных химических соединении на кожные покровы и

обоснование предельно допустимых уровней загрязнения кожи» (1980).

В качестве подопытных животных использовали белых мышей, поверх-

ность кожи которых не имела каких-либо признаков повреждения. Было со-

здано 2 группы животных - опытная и контрольная, по 10 голов в каждой.

За день до опыта хвосты мышей тщательно отмывали теплой водой с

мылом и обтирали мягкой марлевой салфеткой.

Животных опытных и контрольных групп помещали в клетки с изолиро-

ванными секциями, позволяющими фиксировать каждое животное в строго

определенном положении.

Хвосты мышей опытной группы погружали на 2/3 их длины, что соот-

ветствует 5% общей поверхности тела, в пробирки с Миковелтом, а хвосты

животных контрольных групп помещали в пробирки с водопроводной водой.

Клетки устанавливали на край термостатированной бани (29±1°С) таким

образом, чтобы пробирки были погружены в воду.

По истечении 2-часовой экспозиции кожу хвоста каждого животного об-

мывали проточной, теплой водой и обтирали марлевой салфеткой.

Было установлено, что у мышей после однократной обработки кожи Ми-

ковелтом признаки токсического эффекта отсутствовали - изменений в пове-

дении животных не наблюдалось, все системы организма экспериментальных

животных функционировали нормально.

Исследования продолжили в течение 20 дней, ежедневно погружая хво-

сты животных опытных групп в Миковелт на 2 часа и оценивая клиническое

состояние животных.

В результате проведенных исследований было установлено, что при

многократной обработке Миковелтом 5% кожного покрова животных инток-

сикации организма не происходит.

Таким образом, наноструктурированный препарат Миковелт не обладает

кожно-резорбтивным действием.

81

Изучение сенсибилизирующих свойств.

Исследование сенсибилизирующего действия Миковелта проводили на

морских свинках при комплексном накожном и внутрикожном воздействии.

Было создано 2 группы животных – опытная и контрольная, по 5 голов в

каждой.

У животных выстригали шерсть на спине и опытным свинкам ежедневно

наносили на кожу по 1 мл Миковелта в течение 20 дней. Морским свинкам

контрольной группы аналогично на кожу наносили дистиллированную воду.

Через 20 дней эксперимента у этих же свинок на кожу выстриженного

участка инъекционной иглой наносили царапины в виде сетки и однократно

наносили на поврежденную поверхность кожи 1 мл Миковелта. Состояние

животных оценивали через 2 и 24 часа экспозиции.

На основании проведенных исследований было установлено, что через 2

часа экспозиции у животных опытных групп отсутствовала аллергическая

реакция на препарат быстрого типа. Через 24 часа не наблюдалось аллерги-

ческой реакции замедленного типа.

Кроме специфического кожного теста, о сенсибилизации препарата Ми-

ковелт судили также и по неспецифическим показателям, упределяя уровень

гистамина и эозинофилов в периферической крови морских свинок (табл. 21).

Таблица 21. Результаты оценки неспецифических показателей

сенсибилизации морских свинок Миковелтом

Показатель Опыт Контроль

Количество эозинофилов, кл./мм3 25,52,1 24,82,0

Уровень гистамина, мкг/мл 30,03,0 28,72,5

В результате проведенных исследований у животных не было выявлено

контактного сенсибилизирующего действия Миковелта – кожная реакция не

отмечалась, не было выявлено разницы в количестве эозинофилов и гиста-

мина в периферической крови опытных и контрольных животных.

82

Таким образом, лечебно-профилактическое антисептическое средство

Миковелт не обладает сенсибилизирующим действием.

Результаты изучения хронической токсичности препарата при пе-

роральном применении.

Для изучения хронической токсичности препарата Миковелт использо-

вали белых мышей и кроликов. Были созданы опытные и контрольные груп-

пы животных-аналогов. Все животные были клинически здоровы, никаких

паразитарных, хронических инфекционных болезней и микробоносительства

у животных не было выявлено.

Мышам опытной группы, в количестве 10 голов, пероралько с помощью

зонда ежедневно вводили по 0,1 мл препарата в течение 15 дней.

Кроликам опытной группы, в количестве 3 голов, препарат выпаивали

из шприца в дозе 5,0 мл 1 раз в день в течение 15 дней.

Животным контрольных групп аналогично перорально вводили дистил-

лированную воду.

Перед постановкой опыта и через 3 дня после окончания эксперимента у

кроликов отбирали кровь из ушной вены для изучения влияния препарата на

физиологические показатели периферической крови животных - проводили

гематологические исследования (скорость оседания эритроцитов, лейкоци-

тарная формула, количество эритроцитов, содержание гемоглобина) и опре-

деляли биохимические показатели сыворотки крови (общий белок, общий

билирубин, сахар, фосфор, кальций, азот общий, азот аминный, мочевина,

креатинин, альбумины, А/Г коэффициент, глюкоза, АЛТ, липиды общие,

фосфолипиды, холестерин).

Исследования биохимических показателей крови кроликов проводили с

помощью спектрофотометра марки “HUMAN”.

За животными ежедневно вели клинические наблюдения и учитывали

общее состояние, активность поедания корма, измеряли температуру, пульс и

дыхание.

83

Результаты исследований представлены в таблице 22.

Таблица 22. Результаты изучения хронической токсичности

Миковелта при пероральном его введении экспериментальным

животным

Вид и группа жи-

вотных

Кол-во живот-

ных

Заболело,

гол.

Пало,

гол.

Выжило,

гол

Белые мыши:

опытная группа

контрольная группа

10

10

0

0

0

0

10

10

Кролики:

опытная группа

контрольная группа

3

3

0

0

0

0

3

3

Было установлено, что мыши и кролики как опытных, так и контрольных

групп были клинически здоровы на протяжении всего периода опыта, при-

знаков интоксикации и гибели животных не наблюдалось.

По окончании эксперимента всех мышей как опытных, так и контроль-

ных групп умертвили методом декапитации и провели их вскрытие для мор-

фологического изучения внутренних органов животных.

При изучении внутренних органов мышей никаких видимых изменений

органов и тканей не было обнаружено.

Результаты гематологических и биохимических исследований крови

кроликов приведены в таблицах 23 и 24.

Таблица 23. Гематологические показатели крови кроликов

опытной и контрольной групп

Показатели

Физио-

логиче-

ская

норма

Группа животных

До постановки

опыта

После окончания

опыта

опытная контроль опытная контроль

Количество эритроци-

тов, млн

4,5-7,5

5,6+0,01

6,5+0,05

6,5+0,05

6,5+0,01

84

Скорость оседания

эритроцитов, 30 мин

0,3-0,5

0,3+0,01

0,3+0,02

0,3+0,01

0,3+0,02

Содержание гемогло-

бина, г%

10,5-12,5

10,5+0,2

11,5+0,02

11,5+0,2

10,5+0,5

Лейкоциты, тыс. 6,5-9,5 8,5+0,05 7,5+0,5 8,5+0,01 7,5+0,02

Базофилы, % 0,0-2,0 1,0+0,01 1,0+0,5 1,0+0,02 1,0+0,01

Эозинофилы, % 1,0-3,0 1,0+0,05 1,0+0,5 2,0+0,01 2,0+0,02

Миелоциты, % - - - - -

Юные нейтрофилы, % - - - - -

Палочкоядерные

нейтрофилы, % 5,0-9,0 6,0+0,5 6,0+0,02 7,0+0,05 7,0+0,5

Сегментоядерные

нейтрофилы, %

33,0-39,0

32,0+0,05

34,0+0,2

32,0+0,05

32,0+0,05

Лимфоциты, % 48,0-62,0 53,0+0,05 54,0+0,05 54,0+0,02 56,0+0,01

Моноциты, % 1,0-3,0 1,0+0,05 1,0+0,2 1,0+0,01 2,0+0,02

Было установлено, что у кроликов как контрольной, так и опытной групп

изучаемые показатели крови до и после постановки опыта существенно не

изменялись и были в пределах физиологической нормы.

У кроликов опытной группы, в отличие от контрольных животных, от-

мечалось небольшое увеличение количества эритроцитов и гемоглобина.

Во все дни исследований кролики как опытной, так и контрольной групп

были клинически здоровы, активно поедали корм, температура, пульс и ды-

хание оставались в пределах физиологической нормы.

Таким образом, препарат Миковелт при длительном применении не вли-

яет на морфологический состав крови кроликов, не вызывает изменений ан-

титоксической функции печени и аллергических реакций у эксперименталь-

ных животных.

Таблица 24. Основные биохимические показатели сыворотки крови

кроликов опытной и контрольной групп

Показатели Физиоло- Группы животных

85

гическая

норма

До постановки опыта После окончания

опыта

опыт контроль опыт контроль

Общий белок, г% 6,0-8,2 6,8±0,05 6,7±0,05 7,2±0,2 6,4±0,5

Общий биллирубин,

мг% 0,0-0,2 0,1±0,01 0,0±0,1 0,1±0,01 0,1±0,02

Сахар, мг% 80,0-120,0 115,6 117,6 118,0 119,4

Фосфор, мг%: 8,0-12,0 9,22 9,52 10,78 10,26

Кальций, мг%: 8,5-10,5 9,58 9,3 9,25 9,5

Азот общий, мг% 20,0-25,0 22,0±2,3 21,1±2,4 22,7±3,6 21,8±2,4

Азот аминный, мг% 5,0-6,4 5,53±0,25 5,93±0,33 5,03±0,22 5,28±0,30

Мочевина, мг% 20,0-28,0 25,50±1,4 23,53±1,2 25,13±1,9 23,38±4,9

Креатинин, мг% 0,5-0,8 0,5±0,1 0,5±0,1 0,6±0,02 0,5±0,02

Альбумины, г/л 55,7-65,0 60,40±2,0 60,60±3,2 60,92±0,5 60,33±2,8

А/Г коэффициент 0,5-1,0 1,01 0,95 1,22 0,95

Глюкоза, мг% 40,0-60,0 43,74±1,5 44,14±0,9 46,77±7,8 41,96±3,7

АЛТ, ИЕ/л 35,0-45,0 37,00±2,1 38,00±2,8 35,50±1,9 41,75±3,2

Липиды общие, мг% 22,0-25,0 23,3±1,08 22,6±2,13 24,0±1,15 22,4±2,50

Фосфолипиды, мг% 10,0-12,0 10,1±1,03 10,3±1,9 10,0±1,5 11,8±0,7

Холестерин, мг% 60,0-80,0 65,8±10,4 66,5±10,8 65,9±9,3 65,0±18,7

Как следует из данных таблицы, изученные показатели, характеризую-

щие азотистый, липидный и минеральный обмены, у экспериментальных жи-

вотных до начала опыта находились в пределах физиологической нормы.

После постановки опыта отмечалось повышение белкового индекса в

крови кроликов опытной группы.

Таким образом, Миковелт при длительном применении не оказывает су-

щественного влияния на гомеостаз организма экспериментальных животных

и не обладает хронической токсичностью.

Изучение кумулятивных свойств.

Целью данных исследований являлось определение у препарата Мико-

велт кумулятивных свойств и возможности развития у экспериментальных

животных привыкания к средству.

Выяснение степени кумулятивного действия препарата позволяет быстро

и с большой вероятностью предсказать возможность развития хронического

86

отравления.

Критерием кумулятивных свойств Миковелта являлось определение ко-

эффициента кумуляции.

Для выяснения кумулятивного действия Миковелта опыты проводили по

методу Лима (1980) в 2 этапа на белых мышах-аналогах, весом 20 г, из кото-

рых формировали по 2 группы – опытную и контрольную, по 10 голов в каж-

дой.

Сущность эксперимента заключалась в том, что животным перорально

вводили препарат во все возрастающих дозах.

Продолжительность опыта составила: I этап - 28 дней, II этап – 4 месяца.

Миковелт вводили животным опытных групп в желудок с помощью ме-

таллического зонда в дозах 500, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 и 6000 мг/кг (по

действующему веществу). Дозы исчисляли в мг действующего вещества на 1

кг массы тела животного.

Первоначальную ежедневную дозу препарата, равную 500 мг/кг в объеме

0,1 мл, вводили мышам перорально в течение 4 дней.

На пятые сутки дозу препарата повышали до 1000 мг/кг и вводили ее в

течение следующих 4 суток, затем дозу опять повышали до 2000 мг/кг, через

4 дня вводили 3000 мг/кг, еще через 4 дня - 4000 мг/кг, еще через 4 дня –

5000 мг/кг в течение 4 дней и последняя дача препарата - в концентрации

6000 мг/кг также в течение 4 дней.

Контрольным животным перорально вводили дистиллированную воду.

За мышами вели ежедневные клинические наблюдения, оценивали об-

щее состояние животных и учитывали падеж (табл. 25).

Таблица 25. Результаты опыта по определению кумулятивных

свойств Миковелта (I этап исследований)

Группа

животных

Количе-

ство го-

Доза пре-

парата,

Продолжитель-

ность введения,

Результат

(пав-

87

лов мг/кг дней шие/живые)

Опытная

10

500

1000

2000

3000

4000

5000

6000

4

4

4

4

4

4

4

0/10

0/10

0/10

0/10

0/10

0/10

0/10

Контрольная 10 - 28 0/10

Как следует из данных таблицы, ни одно животное не пало даже при дозе

Миковелта 6000 мг/кг. Установленная ранее ЛД50 Миковелта также была бо-

лее 6000 мг/кг.

Оценку результатов исследований проводили по отношению средних

эффективных доз подострого и острого действий и рассчитывали по форму-

ле:

остроеЛД

подостроеЛДК кум

50

50

где: Ккум – коэффициент кумуляции;

ЛД50 подострое – суммарная доза препарата при повторных введениях;

ЛД50 острое – установленная в остром опыте ЛД50.

Подставляли полученные данные в формулу и высчитывали коэффици-

ент кумуляции:

Ккум = 6000 : 6000 = 1

В результате исследований, проведенных на I этапе работы, было уста-

новлено, что коэффициент кумуляции Миковелта равен 1, что свидетель-

ствует об отсутствии кумулятивных свойств.

На II этапе исследований, в течение 4 месяцев ежедневно, белым мышам

вводили Миковелт перорально, натощак, в количестве 1/50, 1/20 и 1/10 ЛД50,

установленной в остром опыте. Каждую дозу препарата вводили в течение 40

дней.

Мышам контрольной группы аналогично вводили дистиллированную

88

воду.

За мышами вели ежедневные клинические наблюдения, оценивали об-

щее состояние животных и учитывали падеж. Особое внимание уделяли

внешнему виду животных (их опрятности, гладкости и блеску волосяного

покрова, их состоянию и поведению) и клиническим проявлениям интокси-

кации (возбуждение, угнетение, характер и степень активности и координа-

ции движений, наличие тремора, судорог, парезов и т.п.). Также отмечали

изменения массы тела, наличие аппетита, состояние дыхания и желудочно-

кишечного тракта (табл. 26).

Таблица 26. Результаты опыта по определению кумулятивных свойств

Миковелта (II этап исследований)

Группа

животных

Кол-во

голов

Доза препа-

рата, мг/кг

Продолжитель-

ность введения,

дней

Результат

(пашие/живые)

Опытная

10

120

300

600

40

40

40

0/10

0/10

0/10

Контрольная 10 - 120 0/10

В результате проведенных исследований было установлено, что все мы-

ши опытной группы, получавшие Миковелт в течение 4 месяцев в возраста-

ющих концентрациях, остались живы, клинических признаков интоксикации

отмечено не было и общее состояние мышей было аналогичным состоянию

животных в контрольной группе.

Таким образом, Миковелт не обладает кумулятивным действием при

длительном его применении.

2.2.3. Токсикологическое действие Миковелта на организм

сельскохозяйственных и мелких домашних животных

Токсикологическое действие препарата Миковелт на организм сельско-

89

хозяйственных и мелких домашних животных изучали на 6 телятах черно-

пестрой породы в возрасте 6 месяцев и на 8 собаках разных пород и возрас-

тов.

Изучение воздействия Миковелта на организм крупного рогатого скота.

В области крупа у телят выбривали участок размером 15х15 см. В течение 5

дней на него наносили по 30 мл препарата.

Определение гематологических показателей проводилось по стандарт-

ным методикам и включало определение количества гемоглобина (Нв), лей-

коцитов, эритроцитов.

Изучение биохимического статуса состояло из определения общего бел-

ка, глюкозы, активности ЛДГ и МДГ.

Кровь у телят брали до опыта и на 1, 5, 10 сутки эксперимента. Результа-

ты исследований представлены в таблицах 27 и 28.

Таблица 27. Влияние Миковелта на гематологические показатели телят

Срок наблюде-

ния

Нв, г/л Эритроциты,

1012/л

Лейкоциты, 109/л

До опыта 112,2±4,2 7,5±0,3 6,2±0,2

1 сутки 113,5±2,5 7,5±0,2 6,1±0,2

5 суток 112,3±3,5 7,3±0,4 6,2±0,3

10 суток 112,8±6,2 7,3±0,1 6,1±0,1

Как видно из данных таблицы, гематологические показатели телят до

опыта и во все дни исследований практически не различались.

Таблица 28. Влияние Миковелта на биохимические показатели крови

телят

Срок наблюде-

ния

Белок, г/л Глюкоза,

ммоль/л

ЛДГ, МЕ МДГ, МЕ

До опыта 73,2±5,0 4,53±0,05 209±10,2 28,1±5,2

1 сутки 72,5±3,5 4,52±0,02 209±8,6 28,6±4,9

5 суток 72,4±5,6 4,55±0,01 210±12,5 27,8±5,5

90

10 суток 72,8±6,0 4,52±0,03 212±12,5 27,1±5,0

Как видно из представленных данных, биохимические показатели крови

телят до опыта и во все дни исследований также практически не различались

и существенно не изменялись в ходе опыта.

На протяжении всего эксперимента дыхание и пульс у животных не ме-

нялись. Аппетит был нормальным, подвижность естественная.

Таким образом, обработка крупного рогатого скота препаратом Мико-

велт не оказывает токсического воздействия на организм животного.

Изучение воздействия Миковелта на организм собак. На собаках изучи-

ли влияние препарата на клиническое состояние и биохимический статус

крови. В области крупа у собак выбривали участок размером 15х15 см. В те-

чение 5 дней на него наносили по 30 мл препарата.

Определение гематологических и биохимического показателей крови

собак проводилось как описано выше.

Кровь у собак брали до опыта, на 1, 5 и 10 сутки эксперимента. Резуль-

таты исследований представлены в таблицах 30 и 31.

Таблица 30. Влияние Миковелта на гематологические показатели собак

Срок наблюде-

ния

Нв, г/л Эритроциты,

1012/л

Лейкоциты, 109/л

До опыта 96,2±3,5 8,2±0,1 6,5±0,2

1 сутки 97,5±5,0 8,3±0,2 6,6±0,3

5 суток 95,5±1,5 8,4±0,2 6,6±0,3

10 суток 95,2±2,5 8,2±0,2 6,5±0,3

Как видно из данных таблицы, гематологические показатели собак до

опыта и во все дни исследований практически не различались.

91

Таблица 31. Влияние препарата Миковелт на биохимические

показатели крови собак

Срок наблюде-

ния

Белок, г/л Глюкоза,

ммоль/л

ЛДГ, МЕ МДГ, МЕ

До опыта 62,5±2,0 4,30±0,03 195±5,2 20,1±2,2

1 сутки 61,0±1,6 4,20±0,02 196±5,5 21,2±2,2

5 суток 63,2±3,2 4,10±0,01 195±5,2 20,1±1,6

10 суток 62,2±2,2 4,2±0,02 194±4,5 22,1±2,2

Как видно из данных таблицы 31, биохимические показатели крови со-

бак до опыта и во все дни исследований также практически не различались и

существенно не изменялись в ходе опыта.

На протяжении всего эксперимента дыхание и пульс у животных не ме-

нялись. Аппетит был нормальным, подвижность естественная.

Таким образом, обработка крупного рогатого скота и собак Миковелтом

не оказывает токсического воздействия на организм животных.

2.2.4. Изучение антимикробного действия Миковелта при раневых

инфекциях у белых мышей и кроликов

Изучение бактерицидного действия Миковелта при раневых инфек-

циях у белых мышей. Оценку бактерицидного действия Миковелта in vivo

при раневых инфекциях проводили в экспериментах на беспородных белых

мышах в отношении искусственно нанесенной смешанной культуры тест-

штаммов бактерий, вызывающих гнойную патологию у животных - Esche-

richia coli 11229, Staphylococcus aureus 6538, Pseudomonas aeruginosa 15412.

С этой целью у белых мышей опытной и контрольной групп (по 10 голов

в каждой) скарифицировали кожу в области спины и втирали в раны сме-

шанную суспензию культур тест-штаммов бактерий, в концентрации культу-

ры каждого штамма 109 м.кл./мл.

Мышам опытной группы 1 раз в день в течение 3 дней ежедневно на по-

92

врежденную и обсемененную бактериями кожу наносили Миковелт.

Мышам контрольной группы аналогично наносили стерильную водопро-

водную воду.

Ежедневно, в течение 14 дней за животными вели клинические наблюде-

ния, учитывая общее состояние животных, развитие воспалительного про-

цесса, нагноение ран, гибель животных (рис. 17, 18).

Рис. 17. Клиническое проявление воспалительного процесса

у мышей опытной группы на 3 день с начала постановки опыта

Рис. 18. Клиническое проявление воспалительного процесса

у мышей контрольной группы на 3 день с начала постановки опыта

93

(павшее животное)

Ежедневно от зараженных мышей опытной и контрольной групп отбира-

ли смывы с поверхности скарифицированной кожи и определяли наличие

или отсутствие исходных культур тест-штаммов бактерий.

Было установлено, что у мышей опытной группы на 2 день с начала по-

становки опыта ранки подсыхали и затягивались. При этом, от мышей опыт-

ной группы, культуры тест-штаммов с обработанной Миковелтом поверхно-

сти скарифицированной кожи не были выделены.

В контрольной группе на 3 день с начала постановки опыта пало 50%

животных.

От погибших мышей контрольной группы выделяли исходные культуры

тест-штаммов бактерий во все дни исследований.

Таким образом, Миковелт оказывает бактерицидное действие in vivo при

заражении белых мышей культурами тест-штаммов бактерий, вызывающих

раневые инфекции у животных.

Изучение бактерицидного действия Миковелта при раневых инфек-

циях у кроликов. Оценку бактерицидного действия Миковелта при раневых

инфекциях проводили в экспериментах на 9 кроликах породы «шиншилла» в

отношении естественной микрофлоры кожи и искусственно нанесенной

смешанной культуры тест-штаммов бактерий, вызывающих гнойную пато-

логию у животных - Escherichia coli 11229, Staphylococcus aureus 6538,

Pseudomonas aeruginosa 15412.

У кроликов в области лопатки с двух сторон выстригали участки кожи

размером 5х5 см. Кожа левого участка лопатки была определена как опыт-

ная, а правого – контрольная.

С опытного и контрольного участков кожи отбирали смывы для опреде-

ления естественной контаминации кожи бактериальной микрофлорой. Затем

кожу левого участка обрабатывали Миковелтом с помощью ватного тампона,

94

с последующей экспозицией 1 мин. Кожу правого участка аналогично обра-

батывали стерильной дистиллированной водой. Затем с опытного и кон-

трольного участков кожи вновь отбирали смывы для определения концен-

трации естественной микрофлоры после обработки.

После этого кожу на обеих участках протирали влажной салфеткой, смо-

ченной универсальным нейтрализатором, промывали стерильной водой и

подсушивали.

Затем на кожу контрольного и опытного участков наносили и равномер-

но растирали по 1 мл суспензии смешанной культуры тест-штаммов бакте-

рий, в концентрации культуры каждого штамма 109 м.кл./мл.

После подсушивания с обработанных участков кожи брали смывы для

определения концентрации микроорганизмов на коже до обработки. Затем

кожу левого участка обрабатывали Миковелтом с помощью ватного тампона,

с последующей экспозицией 3 мин. Кожу правого участка аналогично обра-

батывали стерильной дистиллированной водой.

Затем с опытного и контрольного участков кожи вновь отбирали смывы.

Смывы с кожи брали стерильными марлевыми салфетками, смоченными в

растворе универсального нейтрализатора. Марлевые салфетки после взятия

смывов помещали в отдельные пробирки со стерильным раствором универ-

сального нейтрализатора и стеклянными бусами, и встряхивали в течение 10

мин. После чего по 0,1 мл смывной жидкости из опытных и контрольных

пробирок засевали на среды Эндо, Плоскирева, МПА, желточно-солевой

агар. Посевы инкубировали в термостате при 37С в течение 24 часов, после

чего производили подсчет выросших колоний (табл. 32).

Таблица 32. Бактерицидное действие Миковелта при обработке

кожи кроликов с экспозицией 3 мин.

Контамина-

ция кожи Микрофлора

Количество микроорганиз-

мов на коже, КОЕ

Кср

эффек-

95

микроорга-

низмами

до об-

работ-

ки

после обработки тивности,

% опыт контроль

Естественная

Общее число

микроорганизмов 32422 0 25634 100

Грамположи-

тельная микро-

флора 14415 0 9318 100

Грамотрицатель-

ная микрофлора 11812 0 10710 100

Искусствен-

ная

E.coli 11229 47542 0 42030 100

S.aureus 6538 39025 0 34024 100

P.aeruginosa

15412 38535 0 36220 100

Как следует из полученных данных, Миковелт обладает 100% эффектив-

ностью при обеззараживании кожи экспериментальных кроликов как в от-

ношении естественной, так и искусственно нанесенной бактериальной мик-

рофлоры. Бактерицидное действие Миковелта наступает не позднее 3 мин

экспозиции.

2.2.5. Изучение противогрибковой эффективности Миковелта

на моделях кандидозной инфекции у белых мышей и кроликов

Изучение противогрибкового действия Миковелта при раневой кан-

дидозной инфекции у белых мышей. Оценку противогрибкового действия

Миковелта in vivo при кандидозной раневой инфекции проводили в экспери-

ментах на беспородных белых мышах в отношении искусственно нанесенной

культуры тест-штамма С.albicans 1023.

С этой целью у белых мышей опытной и контрольной групп (по 10 голов

в каждой) скарифицировали кожу в области спины и втирали в раны суспен-

96

зию культуры тест-штамма С.albicans 1023 в концентрации 109 м.кл./мл.

Мышам опытной группы 1 раз в день в течение 3 дней ежедневно на по-

врежденную и обсемененную кандидами кожу наносили Миковелт. Мышам

контрольной группы аналогично наносили стерильную водопроводную воду.

Ежедневно, в течение 14 дней за животными вели клинические наблюде-

ния, учитывая общее состояние животных, развитие воспалительного про-

цесса, нагноение ран, гибель животных.

Ежедневно от зараженных мышей опытной и контрольной групп отбира-

ли смывы с поверхности скарифицированной кожи и определяли наличие

или отсутствие исходной культуры тест-штамма С.albicans 1023.

Было установлено, что у мышей опытной группы на 2 день с начала по-

становки опыта ранки подсыхали и затягивались.

При этом, от мышей опытной группы культура тест-штамма кандиды с

обработанной Миковелтом поверхности скарифицированной кожи не была

выделена.

В контрольной группе от всех мышей выделяли исходную культуры

тест-штамма С.albicans 1023 во все дни исследований.

Таким образом, Миковелт оказывает противогрибковое действие in vivo

при заражении белых мышей культурой тест-штамма С.albicans 1023.

Изучение противогрибкового действия Миковелта при раневой кан-

дидозной инфекции у кроликов. Оценку противогрибкового действия Ми-

ковелта при кандидозной раневой инфекции проводили в экспериментах на 9

кроликах породы «шиншилла» в отношении естественной микрофлоры кожи

и искусственно нанесенной культуры тест-штамма С.albicans 1023.

У кроликов в области лопатки с двух сторон выстригали участки кожи

размером 5х5 см. Кожа левого участка лопатки была определена как опыт-

ная, а правого – контрольная.

С опытного и контрольного участков кожи отбирали смывы для опреде-

ления естественной контаминации кожи бактериальной микрофлорой.

97

Затем кожу левого участка обрабатывали Миковелтом с помощью ватно-

го тампона, с последующей экспозицией 1 мин. Кожу правого участка анало-

гично обрабатывали стерильной дистиллированной водой. Затем с опытного

и контрольного участков кожи вновь отбирали смывы для определения кон-

центрации естественной микрофлоры после обработки.

После этого кожу на обеих участках протирали влажной салфеткой, смо-

ченной универсальным нейтрализатором, промывали стерильной водой и

подсушивали. Затем на кожу контрольного и опытного участков наносили и

равномерно растирали по 1 мл суспензии культуры тест-штамма С.albicans

1023, в концентрации 109 м.кл./мл.

После подсушивания с обработанных участков кожи брали смывы для

определения концентрации микроорганизмов на коже до обработки. Затем

кожу левого участка обрабатывали Миковелтом с помощью ватного тампона,

с последующей экспозицией 3 мин. Кожу правого участка аналогично обра-

батывали стерильной дистиллированной водой.

Затем с опытного и контрольного участков кожи вновь отбирали смывы

стерильными марлевыми салфетками, смоченными в растворе универсаль-

ного нейтрализатора. Марлевые салфетки после взятия смывов помещали в

отдельные пробирки со стерильным раствором универсального нейтрализа-

тора и стеклянными бусами, и встряхивали в течение 10 мин. После чего по

0,1 мл смывной жидкости из опытных и контрольных пробирок засевали на

МПА.

Посевы инкубировали в термостате при 37С в течение 24 часов, после

чего производили подсчет выросших колоний (табл. 33).

Таблица 33. Противогрибковое действие Миковелта при обработке

кожи кроликов с экспозицией 3 мин.

Контамина-

ция кожи

микроорга-

Микрофлора

Количество микроорганиз-

мов на коже, КОЕ Кср

эффек-

тивно-до об- после обработки

98

низмами работки опыт контроль сти, %

Естественная

Общее число мик-

роорганизмов 30512 0 29020 100

Грамположитель-

ная микрофлора 15030 0 12010 100

Грамотрицатель-

ная микрофлора 16515 0 13520 100

Искусствен-

ная С.albicans 1023 33415 0 34225 100

Таким образом, Миковелт обладает 100% эффективностью при обезза-

раживании кожи экспериментальных кроликов как в отношении естествен-

ной, микрофлоры кожи, так и искусственно нанесенной культуры тест-

штамма С.albicans 1023. Фунгицидное действие Миковелта наступает не

позднее 3 мин экспозиции.

2.2.6. Изучение эффективности Миковелта на моделях

дерматомикозов у морских свинок и кроликов

2.2.6.1. Применение Миковелта при дерматомикозах у морских

свинок и кроликов, вызываемых дерматофитами родов Trichophyton и

Microsporum

Для изучения противогрибкового действия Миковелта в отношении воз-

будителей дерматомикозов животных, культуры тест-штаммов Trichophyton

verrucosum 480, Trichophyton violaceum 11, Trichophyton mentagrophytes 210,

Microsporum gypseum 37, Microsporum canis 474 и Microsporon lanosum 22

высевали на агар Сабуро и культивировали 12 дней при температуре 27°С.

Затем культуру тест-штамма каждого гриба вместе с агаром растирали в

ступке до получения однородной кашицы.

Для опыта было отобрано 72 морские свинки-аналоги, которых разде-

лили на 12 групп – 6 опытных и 6 – контрольных, по 6 голов в каждой.

У морских свинок опытных и контрольных групп на спине выстригали

волосы на площади 5x5 см (рис. 19).

99

Рис. 19. Морская свинка перед постановкой опыта

Подготовленный к заражению участок кожи протирали спиртом, а затем

острым скальпелем скарифицировали кожу до появления сукровицы.

В подготовленный таким образом участок кожи морским свинкам втира-

ли в течение 1 мин. кашицу из культуры тест-штамма определенного гриба.

За всеми животными ежедневно вели клинические наблюдения, учиты-

вая время появления первых признаков развития инфекционного процесса.

Было установлено, что первые признаки заболевания трихофитией и

микроспорией у морских свинок как опытных, так и контрольных групп воз-

никало на 5-7-й день после заражения в виде гиперемии и шелушения кожи в

месте инфицирования (рис. 20).

Рис. 20. Местное воспаление кожи у морской свинки на 7 день

100

после инфицирования культурой тест-штамма T.verrucosum 480

На 7-10-й день после заражения у морских свинок развивалось местное

воспаление, появлялся инфильтрат с корками на поверхности кожи.

Наличие грибкового процесса у животных подтверждали микроскопиче-

ским исследованием соскобов с кожи, корок и обломавшихся волос.

Для дифференциальной диагностики трихофитии и микроспории была

использована лампа Вуда, в свете которой пораженные грибами рода Micro-

sporon волосы светились зеленым светом (рис. 21).

а) б)

Рис. 21. Зеленоватое свечение волос под лампой Вуда у морских

свинок, зараженных M.gypseum 37 (а); б – волосы морской свинки,

зараженной T. mentagrophytes 210 (зеленое свечение отсутствует)

У всех 72 морских свинок, используемых в исследованиях, на 14 сутки

после заражения была диагностирована трихофития или микроспория, в за-

висимости от культуры тест-штамма гриба, которым заражали животных

опытных и контрольных групп.

Морских свинок опытных групп разделили на 3 группы, по 2 головы в

каждой.

В каждой опытной группе 2 морским свинкам Миковелт применяли 1 раз

в день 7 дней подряд, 2 животным – 2 раза в день 3 дня подряд и 2 животным

101

– 1 раз в день 3 дня подряд.

Всем животным опытных групп на пораженные участки кожи с помо-

щью марлевого тампона наносили по 0,5 мл Миковелта, полностью смачивая

не только пораженный участок кожи, но и здоровую кожу на границе с пора-

женной на расстояние не менее 1 см. Морским свинкам контрольных групп

аналогично наносили стерильную дистиллированную воду.

За животными вели наблюдение в течение 2 месяцев.

Каждые 3 дня с момента обработки животных, у морских свинок опыт-

ных и контрольных групп отбирали соскобы и волосы с пораженного участка

кожи и проводили микроскопические исследования на наличие или от-

сутствие грибов. Кроме этого, всех животных исследовали дополнительно

люминесцентным методом (лампа Вуда).

Критерием терапевтической эффективности Миковелта служили разли-

чия в сроках освобождения от грибов и излечения морских свинок в опытных

и контрольных группах за период наблюдения - 1 месяц после постановки

опыта (табл. 34).

Было установлено, что Миковелт обладает 100% эффективностью, т.к. за

период наблюдения животные всех опытных групп полностью выздоравли-

вали.

Таблица 34. Терапевтическая эффективность Миковелта при

трихофитии и микроспории на моделях дерматомикозов морских свинок

Груп

па

жив.

Культура гриба,

используемая

для заражения

Способ приме-

нения Мико-

велта

Срок выздоровления,

день (после обработ-

ки Миковелтом)

Терапевтиче-

ская эффек-

тивность, % 1 2 3 4 5

Опытные группы

I

T.verrucosum 480

1 раз в день 7

дней подряд

18±2 100

2 раза в день

3 дня подряд

16±3 100

1 раз в день 3 14±2 100

102

дня подряд

II

T.violaceum 11

1 раз в день 7

дней подряд

22±2 100

2 раза в день

3 дня подряд

18±4 100

1 раз в день 3

дня подряд

16±2 100

III

T.mentagrophytes

210

1 раз в день 7

дней подряд

24±1 100

2 раза в день

3 дня подряд

20±2 100

1 раз в день 3

дня подряд

16±2 100

IV

M.gypseum 37

1 раз в день 7

дней подряд

16±2 100

2 раза в день

3 дня подряд

18±3 100

1 раз в день 3

дня подряд

10±2 100

V

M.canis 474

1 раз в день 7

дней подряд

18±3 100

2 раза в день

3 дня подряд

18±2 100

1 раз в день 3

дня подряд

12±2 100

VI

M.lanosum 22

1 раз в день 7

дней подряд

16±3 100

2 раза в день

3 дня подряд

15±3 100

1 раз в день 3

дня подряд

12±3 100

1 2 3 4 5

Контрольные группы

I T.verrucosum 480 - 48±3 -

II T.violaceum 11 - 36±2 -

III

T.mentagrophytes

210

- 49±2 -

IV M.gypseum 37 - 40±4 -

V M.canis 474 - 42±6 -

VI M.lanosum 22 - 53±3 -

Наиболее эффективным способом лечения морских свинок оказалась об-

103

работка животных 1 раз в день 3 дня подряд. При таком способе обработки

выздоровление животных наступало, в среднем, на 12-й день с начала поста-

новки опыта, что на 5 дней раньше, чем при обработке 1 раз в день 7 дней

подряд и на 4 для раньше, чем при обработке 2 раза в день 3 дня подряд. При

этом у животных корки отпадали на 5-6 день после первой обработки, через

5-7 дней после отпадения корок кожа полностью эпителизировалась и зарас-

тала новой шерстью (рис. 22).

У контрольных животных корки отпадали через 3 недели с начала поста-

новки опыта, обнажая эрозированные поверхности, которые в течение 4-5

недель эпителизировались и также зарастали новой шерстью. Следовательно,

длительность процесса самовыздоровления у животных контрольных групп с

момента появления первых клинических признаков грибковой инфекции со-

ставила, в среднем 6,4 недели (45 суток).

Таким образом, морские свинки, обработанные Миковелтом 1 раз в день

7 дней подряд выздоравливали на 19 сутки с момента постановки опыта; об-

работанные 2 раза в день 3 дня подряд выздоравливали на 18 сутки, обрабо-

танные 1 раз в день 3 дня подряд выздоравливали на 12 сутки с момента по-

становки опыта. Контрольные животные самовыздоравливали на 45 сутки с

начала постановки опыта. Наиболее высокую эффективность, с учетом сро-

ков выздоровления, Миковелт проявил при лечении животных, зараженных

M.gypseum 37.

Срок выздоровления, сут.

104

I

II

III

IV

V

VI I

II

III

IV V

VII

II III

IV

V VI

0123456789101112131415161718192021222324

I

II

III

IV

V

VI

1 раз в день 7

дней подряд 2 раза в день 3

дня подряд 1 раз в день 3

дня подряд

Способ обработки

Рис. 22. Сроки выздоровления морских свинок, обработанных

Миковелтом разными способами

(животные, зараженные: I - T.verrucosum 480; II - T.violaceum 11; III - T.mentagrophytes 210; IV - M.gypseum 37; V - M.canis 474;

VI - M.lanosum 22)

Для изучения противогрибкового действия Миковелта в отношении воз-

будителей дерматомикозов животных, использовали также кроликов, кото-

рых аналогично, как описано выше, заражали культурами тест-штаммов Tri-

chophyton verrucosum 480, Trichophyton violaceum 11, Trichophyton men-

tagrophytes 210, Microsporum gypseum 37, Microsporum canis 474 и Micro-

sporon lanosum 22.

Для опыта было отобрано 12 кроликов, которых разделили на 6 групп,

по 2 кролика в каждой – 1 опытный и 1 контрольный.

У кроликов опытных и контрольных групп на наружной поверхности

обоих ушей скарифицировали кожу и втирали в подготовленный таким об-

разом участок кожи в течение 1 мин. кашицу из культуры тест-штамма опре-

105

деленного гриба.

За всеми животными ежедневно вели клинические наблюдения, учиты-

вая время появления первых признаков развития инфекционного процесса.

Было установлено, что первые признаки заболевания трихофитией и

микроспорией у кроликов как опытных, так и контрольных групп возникали

на 6-8 сутки после заражения в виде гиперемии и шелушения кожи в месте

инфицирования (рис. 23).

Рис. 23. Кролики опытных и контрольных групп, зараженные

дерматофитами

У кроликов на месте инфицирования в области ушей, а также в области

носа и глаз развивалось местное воспаление, появлялся инфильтрат с корка-

ми на поверхности кожи.

Наличие грибкового процесса у животных подтверждали микроскопиче-

ским исследованием соскобов с кожи, корок и обломавшихся волос.

Для дифференциальной диагностики трихофитии и микроспории была

использована лампа Вуда, в свете которой пораженные грибами рода Micro-

sporon волосы светились зеленым светом.

У всех кроликов, используемых в исследованиях, на 14 сутки после зара-

жения была диагностирована трихофития или микроспория, в зависимости от

культуры тест-штамма гриба, которым заражали животных опытных и кон-

трольных групп.

106

Кроликов опытной группы лечили Миковелтом, втирая его в поражен-

ные участки кожи 1 раз в день 3 дня подряд. Контрольным животным анало-

гично втирали стерильную дистиллированную воду (рис. 24).

Рис. 24. Обработка кроликов опытной группы Миковелтом

За животными вели наблюдение в течение одного месяца.

Каждые 3 дня с момента обработки животных, у кроликов опытных и

контрольных групп отбирали соскобы и волосы с пораженного участка кожи

и проводили микроскопические исследования на наличие или отсутствие

грибов. Кроме этого, всех животных исследовали дополнительно люминес-

центным методом.

Критерием терапевтической эффективности Миковелта служили разли-

чия в сроках освобождения от грибов и излечения кроликов в опытных и

контрольных группах за период наблюдения.

Было установлено, что Миковелт обладает 100% эффективностью в от-

ношении возбудителей трихофитии и микроспории, т.к. за период наблюде-

ния кролики всех опытных групп полностью выздоравливали. На 3-5 день

после первой обработки кроликов Миковелтом признаки воспаления на по-

раженных участках исчезали, через 7-10 дней после третьей обработки Ми-

ковелтом пораженная кожа кроликов полностью эпителизировалась здоро-

вым эпидермисом.

107

У контрольных животных самовыздоровление протекало медленно. Кро-

лики, больные трихофитией, самовыздоравливали через 35-40 дней.

Кролики контрольных групп, зараженные возбудителями микроспории,

были умерщвлены, т.к. начала развиваться генерализованная форма инфек-

ции и самовыздоровления кроликов не наблюдалось.

Таким образом, Миковелт является эффективным средством при трихо-

фитии и микроспории кроликов при обработке их 1 раз в день 3 дня подряд.

2.2.6.2. Эффективность Миковелта при дерматомикозе

морских свинок, вызванном эпидермофитоном

Для определения эффективности Миковелта при дерматомикозе морских

свинок, вызванном эпидермофитоном, были созданы 2 опытные и 2 кон-

трольные группы животных - аналогов, по 5 голов в каждой.

Для инфицирования морских свинок использовали порошкообразную

культуру Epidermophyton rubrum 64. Инокулят втирали в боковую поверх-

ность тела морских свинок опытной и контрольной групп после проведенной

эпиляции и скарификации кожи. Определяли профилактическую и терапев-

тическую эффективность Миковелта.

В первой опытной группе животных (профилактическая) сразу же после

заражения морских свинок обрабатывали Миковелтом с профилактической

целью, втирая препарат в зараженное место 1 раз в день 3 дня подряд. Жи-

вотным контрольной группы аналогично втирали стерильную воду.

Во второй опытной группе животных (терапевтическая) Миковелт ис-

пользовали с терапевтической целью. Для этого после заражения морских

свинок наблюдали развитие клинической картины поражения животных эпи-

дермофитоном и в опытной и в контрольной группах. Было установлено, что

на 5-й день после заражения у животных на месте инокуляции гриба появля-

лась гиперемия и небольшое шелушение. Еще через 3-5 дней образовывались

пустулы и корочки с тусклыми обламывающимися волосками. В коже и во-

108

лосках с помощью световой микроскопии обнаруживали мицелий гриба.

Больных животных опытной группы обрабатывали Миковелтом, втирая

препарат в зараженное место 1 раз в день 3 дня подряд. Животным контроль-

ной группы аналогично втирали стерильную воду.

Критерием профилактической эффективности Миковелта являлось от-

сутствие клинических признаков дерматомикоза и отрицательный результат

при микроскопии у животных опытной группы в сравнении с контрольными

животными, терапевтической эффективности - различие в сроках освобожде-

ния от эпидермофитов и излечение морских свинок в опытных и контроль-

ных группах в течение срока наблюдения - 1 месяц после постановки опыта

(табл. 35).

Таблица 35. Профилактическая и терапевтическая эффективность

Миковелта при эпидермофитозе морских свинок

Показатель Группа животных

Профилактическая Терапевтическая

опытная контроль опытная контроль

Наличие клинических признаков эпи-

дермофитоза

- + + +

Обнаружение мицелия гриба при микро-

скопии соскобов кожи после обработки

- + - +

Сроки выздоровления, сут. - 34±2 12±2 36±3

Эффективность, % 100 - 100 -

Было установлено, что у животных, которым препарат применяли сразу

после заражения, клинические признаки болезни не развивались, мицелий

гриба в соскобах кожи после обработки Миковелтом не обнаруживался.

Морские свинки терапевтической группы, обработанные Миковелтом 1

раз в день 3 дня подряд, выздоравливали на 12 сутки после обработки, в то

время, как животные контрольных групп самовыздоравливали на 32 сутки

после начала постановки опыта.

Таким образом, Миковелт обладает 100% профилактической и терапев-

тической эффективностью при эпидермофитозе морских свинок.

109

2.2.7. Изучение бактерицидного, противовоспалительного

и ранозаживляющего действия Миковелта при раневых инфекциях

у лабораторных животных

Для изучения бактерицидного, противовоспалительного и ранозажив-

ляющего действия Миковелта при раневых инфекциях у лабораторных жи-

вотных исследования проводили на белых мышах, белых крысах, кроликах и.

Оценку бактерицидного действия Миковелта при раневых инфекциях

лабораторных животных проводили в экспериментах на кроликах в отноше-

нии естественной и искусственно нанесенной культуры тест-штамма E.coli

11229.

У кроликов в области лопатки с двух сторон выстригали участки кожи

размером 5х5 см. С опытного и контрольного участков кожи отбирали смывы

для определения естественной контаминации кожи бактериальной микро-

флорой.

Затем на кожу наносили и равномерно растирали по 1 мл суспензии су-

точной культуры E.coli 11229, содержащей 2,0х108 КОЕ/мл.

После подсушивания микробной взвеси с обработанных участков кожи

брали смывы для определения концентрации микроорганизмов на коже до

обработки. Затем кожу левого участка обрабатывали Миковелтом с помощью

ватного тампона, с последующей экспозицией 1 мин. Затем с опытного и

контрольного участков кожи вновь отбирали смывы.

Смывы с кожи брали стерильными марлевыми салфетками, смоченными

в растворе универсального нейтрализатора. Марлевые салфетки после взятия

смывов помещали в отдельные пробирки со стерильным раствором универ-

сального нейтрализатора и стеклянными бусами, и встряхивали в течение 10

мин. После чего по 0,1 мл смывной жидкости из опытных и контрольных

пробирок засевали на среды Эндо, Плоскирева, МПА и желточно-солевой

агар. Посевы инкубировали в термостате при 37С в течение 24 часов, после

чего производили подсчет выросших колоний (табл. 36).

110

Таблица 36. Бактерицидное действие Миковелта при обработке кожи

кроликов, искусственно контаминированной E.coli 11229

Контамина-

ция кожи

микро-

организмами

Вид микрофло-

ры/показатель

Количество микроорганиз-

мов на коже, КОЕ Кср

эффек-

тивности,

%

до об-

работ-

ки

после обработки

опыт контроль

Естественная

Общее число микро-

организмов 14410 0 1476 100

Грамположительная

микрофлора 955 0 1005 100

Грамотрицательная

микрофлора 52,010 0 455 100

Искусствен-

ная E. coli 11229 35020 0 34510 100

Как следует из полученных данных, Миковелт обладает 100% эффектив-

ностью при обеззараживании кожи экспериментальных животных как в от-

ношении естественной, так и искусственно нанесенной микрофлоры.

Противовоспалительное действие Миковелта определяли методом

онкометрии, с использованием белых беспородных крыс массой до 200 г.

Животных отбирали таким образом, чтобы исходный средний объем лапок

во всех экспериментальных группах был примерно одинаков. Эксперимен-

тальных животных разбивали на 2 группы по 6 особей в каждой.

Крысам под апоневроз лапки вводили 0,1 мл 10% суспензии каолина, ко-

торый вызывал развивающийся во времени отек лапки. Степень отека отра-

жала интенсивность воспаления. Величину отека измеряли по количеству

вытесненной из капсулы онкометра воды при погружении в нее лапки.

Первой группе животных вводили только каолин. Эта группа являлась

контрольной. Животным опытной группы 3 раза в день на лапку наносили из

аэрозольного баллончика Миковелт.

Онкометрическое измерение объема лапок в каждой группе животных

проводили через 1, 2, 3 и 24 часа после введения в лапку каолина. Получен-

111

ные экспериментальные данные представлены на рисунке 25.

1,53

2,031,63

0,931,19

0,78

0

0,5

1

1,5

2

2,5

1 3 24

Время, ч.

Об

ъе

м,

мл

.

контроль комплекс 2

Время, ч

- Контроль - Опыт

Рис. 25. Динамика местного противовоспалительного действия

Миковелта на организм белых крыс

Как следует из полученных данных, Миковелт оказывал местное проти-

вовоспалительное действие на организм крыс. При этом, показатель величи-

ны отека лапок крыс опытной группы через 24 часа после обработки Мико-

велтом был в 2,1 раза меньше, чем в контрольной группе животных.

Ранозаживляющее действие Миковелта изучали при скарификации

кожи у кроликов и белых мышей, при нанесении кроликам линейных кожных

разрезов и искусственном образовании абсцессов.

Перед экспериментом 3 кроликам выстригали шерсть в области спины, с

двух сторон чуть ниже позвоночника. Кожу на контрольном и опытном

участках повреждали инъекционной иглой, нанося неглубокие царапины в

виде сетки. На опытный участок 1 раз в день в течение 7 суток наносили

аэрозольным способом Миковелт, на контрольный участок аналогично нано-

сили стерильную водопроводную воду. За животными вели ежедневные

наблюдения, учитывая скорость заживления ран.

Было установлено, что нанесение Миковелта на скарифицированную

кожу животных ускоряет процесс заживления искусственно нанесенных ран.

112

На 5 сутки с начала постановки опыта царапины на участках кожи кро-

ликов, обработанных Миковелтом, заживали и на 7 сутки бесследно исчеза-

ли, в то время как в контроле заживление кожи проходило в 2 раза медленнее

и на 5 сутки 50% царапин представляли собой не закрывшиеся мокнущие

ранки.

В ходе изучения ранозаживляющего действия Миковелта кроликам так-

же была проведена операция по нанесению линейных кожных ран под эфир-

ным наркозом. Кожу спины у 6 кроликов разрезали до собственной фасции,

длина разреза составляла 25±1 мм. Затем на равном расстоянии накладывали

2 шва, сближающие края раны. Для удобства последующего измерения раз-

меров ран накладывались швы с таким расчетом, чтобы эпителий боковых

краев раны не соприкасался и эпителизация происходила от конечных краев

раны.

Трем кроликам на раны наносили Миковелт аэрозольным способом 1 раз

в день в течение 3 дней. Контрольным животным аналогично наносили сте-

рильную водопроводную воду.

Оценку ранозаживляющего действия Миковелта проводили по времени

и динамике полного срастания краев раны на 5, 10 и 15 дни наблюдения, а

также по времени полного отторжения струпа.

Динамика заживления ран в группах экспериментальных животных по

степени уменьшения их линейного размера представлена в таблице 37.

Таблица 37. Показатели ранозаживляющего действия Миковелта

Группа жи-

вотных

Средний исходный

линейный размер

раны, мм

Средний линейный размер раны в

день наблюдения, мм

5 день 10 день 15 день

Опытная 25±1,0

8,0±0,5

Р0,05

3,2±0,5

Р0,05

0

Р0,001

Контрольная 25±1,0 22,5±2,0 19,2 ±0,5 10,5 ±1,0

Как следует из данных таблицы, в опытной группе животных через 5

113

дней с начала постановки опыта длина раны уменьшилась на 68%, к 10 дню –

на 87,2%, к 15 дню с начала постановки опыта рана у кроликов полностью

эпителизировалась и на ее месте начинала нарастать шерсть (100%-ный эф-

фект).

В контрольной группе животных, не получавших лечение, через 5 дней с

начала постановки опыта длина раны уменьшилась на 10%, к 10 дню – на

23,2%, к 15 – на 58%. За период наблюдения самовыздоровления у кроликов

контрольной группы не происходило, заживление ран было не полным, ру-

бец не был сформирован (рис. 26).

Линейный размер раны, мм

Рис. 26. Время заживления искусственно нанесенных ран у кроликов

опытной и контрольной групп

Результаты опытов в тесте с заживлением линейных кожных ран у кро-

ликов показали, что Миковелт оказывает достоверно выраженный раноза-

живляющий эффект - процесс заживления ран ускоряется в 3 раза, по срав-

нению с контролем.

Бактерицидный, противовоспалительный и ранозаживляющий эффект

Миковелта изучали на белых мышах и кроликах.

До постановки

опыта

На 5 сут. На 10 сут. На 15 сут.

25 25

8

22,5

3,2

19,2

0

10,5

0

5

10

15

20

25

30

Опыт

Контроль

114

Мышам скарифицировали кожу в области спины и втирали в раны сус-

пензию культур тест-штаммов E.coli 11229, S.aureus 6538, P.aeruginosa

15412 и C.albicans 10231, в концентрации культуры каждого штамма 109

м.кл./мл.

Мышам опытной группы в количестве 10 гол ежедневно на поврежден-

ную и обсемененную патогенными бактериями кожу наносили Миковелт 1

раз в день в течение 3 дней. Мышам контрольной группы (10 гол.) аналогич-

но наносили стерильную водопроводную воду.

Ежедневно за животными вели наблюдения, учитывая развитие воспали-

тельного процесса, нагноение ран, гибель животных.

Было установлено, что у мышей опытной группы на 2 день с начала по-

становки опыта ранки подсыхали и затягивались. В контрольной группе на 3

день с начала постановки опыта пало 60% животных.

У 3 кроликов с двух сторон на боках выстригали шерсть и искусственно

вызывали образование абсцессов, путем введения подкожно и внутрикожно

суспензии культур тест-штаммов E.coli 11229, S.aureus 6538, P.aeruginosa

15412 и C.albicans 10231, в концентрации культуры каждого штамма 109

м.кл./мл.

На опытный участок кожи ежедневно однократно наносили Миковелт в

течение 3 дней, на контрольный участок аналогично наносили стерильную

воду.

Было установлено, что у кроликов на контрольном участке кожи на 5

день с начала постановки опыта развивались абсцессы.

У кроликов на опытном участке кожи в месте инъекции суспензии мик-

роорганизмов на 2 день наблюдалось покраснение кожи, абсцесс не образо-

вывался и к 15 дню исследований наблюдался рост волос на опытном участке

кожи.

На 16 сутки с начала постановки опыта, во избежание развития инфек-

ционного процесса, контрольные участки кожи кроликов обрабатывали 1 раз

115

в день в течение 3 дней Миковелтом. На 10 сутки после начала лечения жи-

вотных дальнейшего развития абсцессов не происходило и воспаление ис-

чезло.

Исследования по изучению ранозаживляющего действия Миковелта

в сравнительном аспекте проводили на кроликах и телятах.

Было сформировано 3 группы животных кроликов, по 3 головы в каж-

дой.

Кроликам в области ягодичной мышцы справа делали вырезы кожного

покрова округлой формы, поверхностной и глубокой подкожной фасции, по-

вреждая при этом поверхностную ягодичную мышцу. Глубина разреза дости-

гала 0,5-0,8 см. Диаметр раны составлял около 3 см. Через 24 ч после нанесе-

ния разреза обрабатывали рану препаратом Миковелт, вторую группу живот-

ных обрабатывали аналогично Зоомиколем, животных третьей группы обра-

батывали Ламизилом.

При лечении ран после их туалета 3%-ным раствором перекиси водоро-

да, ее полость накрывали салфетками, пропитанными указанными средства-

ми. Поверх салфеток накладывали стерильную повязку.

Результаты учитывали на 1, 7, 14, 21 и 28 дни исследований.

Вторую серию опытов проводили на 9 телятах в возрасте 6 месяцев с

массой тела 130-140 кг. Указанным животным в области крупа с левой сто-

роны делали вырезы кожи, подкожной фасции с повреждением ягодичных

мышц диаметром 5-7 см и глубиной до 1,5 см.

Для цитологического изучения, препараты удаляли 7,5%-ным спиртовым

раствором и визуально наблюдали за развитием процессов заживления раны,

обращая внимание на рост грануляционной ткани (зернистость), образование

корочек, отек и другие признаки заживления раны.

Методика изучения морфологии раневого процесса у телят, заключалась

в следующем:

116

- с раневой поверхности стерильным марлевым тампоном, увлажненным

физиологическим раствором, удаляли гной, свернувшуюся кровь и сукрови-

цу;

- обезжиренным предметным стеклом прикасались к раневой поверхно-

сти для обнаружения полибластов, трофобластов, макрофагов и микроорга-

низмов;

- подсушивали мазок-отпечаток;

- мазок-отпечаток фиксировали в течение 3-5 мин в спирт-эфире и окра-

шивали в течение 25-30 мин. по Романовскому.

Процесс эпителизации ран определяли следующим образом:

- на рану накладывали лист целлофана, на котором авторучкой обрисо-

вывали ее контуры;

- целлофан с полученным контуром клали на миллиметровую бумагу и

определяли площадь раны, подсчитывая количество квадратных миллимет-

ров внутри контура.

Аналогичным образом проводили исследования на 2, 5, 8 и 10-й дни.

Процент уменьшения площади раны за определенный срок определяли по

формуле:

100SR

tS

SS N, где

SR –процент уменьшения площади раны;

S - площадь раны при предыдущем измерении;

SN - площадь раны при данном измерении;

t - число суток между измерениями.

Результаты заживления ран у кроликов приведены в таблице 38.

117

Таблица 38. Заживление ран у кроликов при обработке их различными

препаратами (в % от первоначального)

День исследований Миковелт Зоомиколь Ламизил

1 100 100 100

7 75 80 85

14 40 60 60

21 5 25 30

28 0 5 10

Было установлено, что уменьшение площади нормально заживающей

раны за сутки составляло в среднем 4%, но может достигать 10 и даже 15%.

Наблюдения показали, что через сутки после нанесения препаратов у

всех животных имело место слабо угнетенное состояние, некоторое сниже-

ние аппетита, повышение местной температуры. Раны до уровня краев за-

полнены сгустками крови, в нижнем углу обнаруживались скопления не-

большого количества прозрачного экссудата.

У кроликов, обработанных Миковелтом заживление проходило по пер-

вичному натяжению и к 28 дню исследований рана зажила с полным оттор-

жением струпа.

Раны у кроликов, обработанных Зоомиколем, хотя и заживали по пер-

вичному натяжению, но эпителизация завершилась лишь к 36-му дню.

Эпителизация ран у кроликов, обработанных Ламизилом, завершалась к

40 дню исследований.

При цитологическом изучении мазков-отпечатков у подопытных живот-

ных при использовании препарата Миковелт и Зоомиколя на 2-е сутки были

обнаружены фибробласты, гистиоциты, эритроциты набухшие, обесцвечены.

В цитоплазме сегментоядерных лейкоцитов выявлены фагоцитированные

бактерии. Через 5 дней фибробласты имели продолговатую форму, у некото-

рых по периферии появлялись волоконца и дегенерация ядер. Все эти фиб-

робластообразные элементы вместе с плешками активной мезенхимы, воло-

118

концами и сосудами образовывали новую ткань, которая заменяяла рассасы-

вающийся фибринозный экссудат и соединяла края и стенки раны, связанной

с молодой соединительной тканью.

У кроликов, обработанных препаратом Миковелт с появлением в ране

островков грануляционной ткани обнаруживали молодые полибласты.

Уменьшалось количество бактерий и дегенеративных нейтрофилов. С обра-

зованием в ране грануляционного барьера в раневом отпечатке обнаружива-

ли много полибластов, располагающихся группами по 10-15 клеток. При

полном очищении раны полибласты приобретали вид вытянутых клеток. С

появлением ободка эпидермиса в раневом отпечатке обнаруживали эпители-

альные клетки. Через 6-8 дней в ране вокруг сосудов сформировалась соеди-

нительная ткань. Она заменяла собой рассасывающуюся фибринозную спай-

ку и прочно соединяла края и стенки раны с молодой соединительной тка-

нью. Фибрино-тканевая масса ускоренно превращалась в прочный фибрино-

тканевой струп, защищающий рану от вторичного инфицирования до полно-

го заполнения ее грануляционной тканью и завершением эпидермизации.

Процесс заживления завершался на 23 день.

В группе животных, обработанных мазью Зоомиколем цитологическая

картина была менее выражена, процесс развития грануляционной ткани затя-

гивался, эпителизация завершалась на 35 день.

В группе животных, обработанных ламизилом процесс заживления про-

текал медленнее, эпителизация завершалась на 40 день.

Изучение ранозаживляющего действия Миковелта на телятах.

Животные были разделены на 3 группы, по 3 головы в каждой: 1-ю - об-

рабатывали препаратом Миковелт, 2-ю - Ламизил, 3-я - контрольная необра-

ботанная.

Туалет раны заключался в обработке ее 3%-ным раствором перекиси во-

дорода, после чего, ее полость рыхло заполняли салфетками, пропитанными

испытуемыми препаратами. Количество нанесенного препарата составляло

119

до 15 г. Поверх салфеток накладывали стерильную повязку. Обработку пре-

паратами проводили раз в 3-4 дня в течение 20 дней.

Динамика заживления ран по группам приведена в таблице 39.

Таблица 39. Динамика заживления ран у телят

(в % от первоначального)

Препарат Дни после нанесения на рану

1 7 14 21 28 33

Миковелт 100 77 54 18 0 Полная эпителизация

Ламизил 100 83 63 26 11 Полная эпителизация

Контроль 100 87 69 38 15 0,9

После нанесения раны развивался отек и гиперемия тканей, в ранах

наблюдали наличие серозного инфильтрата. Поврежденные ткани были

плотно фиксированы ко дну и краям раны, количество их у телят с необра-

ботанными ранами возрастало за счет вторичных некрозов.

У телят всех групп развивалось гнойно-демаркационное воспаление, ко-

торое характеризовалось наличием некротических тканей и гнойного содер-

жимого в ранах, края которых были отечны и инфильтрированы.

К 7-му дню у телят, обработанных Миковелтом, на отдельных участках,

свободных от кровяных сгустков, наблюдалось развитие розово-красных

узелков - гранул величиной с просяное зерно, которые не кровоточили, име-

ли зернистый вид, довольно плотную консистенцию и наличие небольшого

количества серовато-белого экссудата. К этому сроку происходила воспали-

тельная демаркация нежизнеспособных тканей, которые затем отторгались

и лизировались в ране. Количество отделяемого из раны быстро уменьшалось

и становилось серозным.

К 14 дню процент уменьшения площади ран у телят, обработанных Ми-

ковелтом, составил 54%.

120

У животных, раны которых были обработаны Ламизилом, процесс за-

живления осуществлялся медленнее, процент уменьшения площади ран к 14-

му дню составил 63%.

В контрольной группе этот процент составлял 69%.

Переход фазы грануляции в фазу эпителизации был наиболее выражен в

первой опытной группе телят. Для этой фазы была характерна эпителизация

раневой поверхности и образование рубца. Этот процесс осуществлялся в ос-

новном за счет роста краевого эпителия; источником его новообразования

служили островки сохранившегося эпителия.

Уменьшение процента репаративных процессов в ранах к концу опыта

объясняется их замедлением за счет сокращения площади ран, что более вы-

ражено у телят с ранами, которые были обработаны Миковелтом.

У телят с необработанными ранами местный воспалительный процесс

продолжался до 33-го дня с сохранением болевой реакции.

При цитологическом анализе раневых отпечатков было установлено

наличие подострого воспаления у телят, обработанных Миковелтом, в част-

ности нейтрофилы средней степени сохранности составляли 75-85%, 8-12%

клеточного состава приходилось на долю макрофагов и полибластов. Мик-

рофлора, чаще в умеренном количестве, располагалась внутриклеточного и

находилась в состоянии завершенного фагоцитоза. Во 2-й фазе раневого

процесса преобладали молодые клетки грануляционной ткани: фибробласты,

макрофаги. Содержание нейтрофилов снижалось до 40-50%. Одновременно

развивался процесс эпителизации.

В мазках-отпечатках имела место маловыраженная лейкоцитарная реак-

ция, наличие полиморфно-ядерных лейкоцитов, моноцитарных клеток. Та-

кое состояние наблюдали до 14-го дня, впоследствии преобладали признаки

регенеративных процессов: уменьшение количества полиморфно-ядерных

лейкоцитов, увеличение числа одноядерных клеток с тенденцией к дальней-

шей дифференциации; встречались гигантские и тучные клетки.

121

Мазь Ламизил обладает дезинфицирующим, местно-раздражающим дей-

ствием, в результате чего улучшается кровоснабжение тканей и стимулиру-

ется регенерация эпидермиса.

Для контрольной группы был характерен дегенеративный (извращен-

ный) фагоцитоз, в нейтрофилах - большое количество бактерий и еще больше

их вне клеток. Отмечали также наличие дегенерированных сегментоядерных

лейкоцитов.

Таким образом, Миковелт обладает бактерицидным, противовоспали-

тельным и ранозаживляющим действием при раневых инфекциях у лабора-

торных и сельскохозяйственных животных. Эффективность обеззараживания

кожи Миковелтом составляет 100%. Противовоспалительное действие Мико-

велта в 2 раза превышает показатели в контрольной группе животных. Пре-

парат ускоряет процесс заживления искусственно нанесенных не инфициро-

ванных ран в 2 раза, а инфицированных ран – в 3 раза, по сравнению с кон-

тролем. При заражении животных суспензией культур тест-штаммов эшери-

хий, стафилококка, синегнойной палочки и кандиды, на участках кожи, обра-

ботанных Миковелтом, абсцессы не развивались.

2.2.8. Оценка эффективности обеззараживающего и пролонгированного

действия Миковелта при обработке кожи инъекционного

и операционного полей у мелких домашних животных

Эффективность обеззараживающего действия Миковелта при обработке

кожи инъекционного и операционного полей изучали в отношении есте-

ственной микрофлоры мелких домашних животных. В эксперименте было

использовано 20 собак разных пород и разного возраста.

У животных перед различными ветеринарными манипуляциями (внут-

римышечные и подкожные инъекции химиотерапевтических препаратов,

вакцин и сывороток, внутривенные введения растворов, подготовка операци-

онных полей в различных частях тела и т.д.) в местах инъекций и хирургиче-

122

ского вмешательства выстригали шерсть и отбирали смывы для бактериоло-

гических исследований.

Смывы отбирали стерильными марлевыми салфетками, смоченными в

растворе универсального нейтрализатора. Затем салфетки отмывали в тече-

ние 10 минут путем встряхивания в пробирке с бусами и универсальным

нейтрализатором. Далее по 0,1 мл смывной жидкости из опытных и кон-

трольных пробирок высевали на МПА (для подсчета общей микрофлоры), на

среду Эндо (для учета роста грамотрицательных микроорганизмов), на жел-

точно-солевой и кровяной агар (для учета роста грамположительных микро-

организмов). Посевы инкубировали в термостате при 37С в течение 48 час.,

затем подсчитывали выросшие колонии и проводили идентификацию микро-

организмов до рода.

Было установлено, что кожа у собак и кошек обсеменена такими микро-

организмами, как эшерихии, стафилококки, бациллы, протей, кандиды и

микроскопические грибы.

Затем препаратом Миковелт аэрозольным способом однократно обраба-

тывали кожу в выстриженных участках.

Через 1 и 5 мин. после обработки мест инъекций и операционного поля

препаратом Миковелт у животных вновь брали смывы с поверхностей обра-

ботанных участков кожи и проводили бактериологические исследования на

наличие микроорганизмов. Средство считалось эффективным при снижении

общей микробной контаминации кожи после обработки не менее чем на 95%.

Результаты исследований представлены в табл. 40 и 41.

123

Таблица 40. Эффективность обеззараживающего действия

Миковелта при обработке инъекционного и операционного полей

у собак при экспозиции 1 мин.

Вид микрофлоры /показатель

Количество микроорганиз-

мов на коже, КОЕ Эффек-

тив-

ность,% до обра-

ботки

после обра-

ботки

Общее число микроорганизмов 11515 21 98,2

Грамположительная микрофлора 43 10 11 97,7

Грамотрицательная микрофлора 655 0 100

Как следует из данных таблицы 40, режим обработки кожи при времени

экспозиции 1 минута позволяет снизить общую микробную контаминацию

кожи в среднем на 98,2%, уменьшить число грамположительных бактерий

на 97,7%, грамотрицательных бактерий – на 100%.

Полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности Ми-

ковелта при использовании в качестве кожного антисептика с экспозицией 1

мин.

Таблица 41. Эффективность обеззараживающего действия Миковелта

при обработке инъекционного и операционного полей у собак

при экспозиции 5 мин.

Вид микрофлоры /показатель

Количество микроорганиз-

мов на коже, КОЕ Эффек-

тив-

ность,% до обработ-

ки

после обра-

ботки

Общее число микроорганизмов 12010 0 100

Грамположительная микрофлора 305 0 100

Грамотрицательная микрофлора 955 0 100

Использование Миковелта с экспозицией 5 мин. способствовало декон-

таминации кожи животных в отношении естественной микрофлоры на 100%.

Из отобранных смывов не было выделено никаких микроорганизмов.

Миковелт не вызывал раздражения кожи у обследованных собак, аллер-

124

гических реакций также не было отмечено.

После проведения инъекций и хирургических операций у животных, об-

работанных Миковелтом, постинъекционных и постоперационных осложне-

ний не наблюдалось.

Оценку эффективности остаточного (пролонгированного) действия Ми-

ковелта при обеззараживании мест инъекции и операционного поля у собак

проводили в экспериментах по отношению к естественной микрофлоре ко-

жи.

У 6 собак в области лопатки выстригали участок, размером 3х3 см и от-

бирали смыв с кожи для бактериологических исследований, как описано вы-

ше. Затем на кожу аэрозольным способом наносили Миковелт в объеме не

менее 1 мл. Через 1, 2 и 3 часа вновь отбирали смывы с кожи и проводили

исследования на наличие грамположительных и грамотрицательных бакте-

рий, а также подсчитывали общее количество микроорганизмов.

Критерием пролонгированного действия Миковелта являлось наличие

минимального количества микроорганизмов (единичные колонии) в смывах с

кожи на протяжении не менее 2 часов после обработки препаратом (табл. 42).

Таблица 42. Эффективность пролонгированного действия Миковелта

Вид микрофлоры

/показатель

Количество микроорганизмов на коже,

КОЕ Эффектив-

ность,% до обработ-

ки

после обработки, час

1 2 3

Общее число

микроорганизмов 16510 0 0 21 98,8

Грамположительная

микрофлора 35 5 0 0 0 100

Грамотрицательная

микрофлора 12515 0 0 0 100

Как следует из данных, представленных в таблице, Миковелт после од-

нократной обработки места инъекций и операционного поля у мелких до-

125

машних животных обладает пролонгированным (остаточным) антимикроб-

ным действием на протяжении не менее 3 часов после обработки кожи.

Таким образом, препарат Миковелт обладает высокой антимикробной

активностью в отношении возбудителей раневых инфекций животных - эше-

рихий, стафилококков, кандид, протея, бацилл и микроскопических грибов,

выделенных с поверхности кожи мелких домашних животных. Препарат

обеззараживает кожу в местах инъекций и операционного поля у 100% ис-

следованных собак через 3-5 мин. после обработки и обладает пролонгиро-

ванным действием в течение не менее 3 часов. Препарат Миковелт не вызы-

вает аллергических реакций и раздражения кожи у обработанных животных.

2.2.9. Терапевтическая эффективность Миковелта

при дерматомикозах сельскохозяйственных животных

Терапевтическая эффективность препарата «Миковелт» при трихо-

фитии крупного рогатого скота. Для определения терапевтической эффек-

тивности Миковелта при дерматомикозах крупного рогатого скота были про-

ведены исследования на телятах черно-пестрой породы в возрасте 6-8 меся-

цев в количестве 27 голов, принадлежащих СХПК «Верещаки» Новозыбков-

ского района, Брянской области.

У телят были обнаружены клинические признаки дерматомикоза - огра-

ниченные поражения кожи в области головы, плеч и крупа в виде округлых

участков размером 2-6х4-8 см. В местах поражений выпадали волосы, кожа

шелушилась и была отечная.

Диагноз на трихофитию был подтвержден районной ветеринарной лабо-

раторией, где из соскобов кожи телят выделили Trichophyton verrucosum.

Ранее хозяйство было благополучно по дерматомикозам и крупный рога-

тый скот в хозяйстве никогда не вакцинировался против трихофитии.

Пораженные участки кожи у телят (в области головы и спины) обраба-

тывали препаратом Миковелт 1 раз в день 3 дня подряд. При обработке кожи

126

Миковелт наносили на поврежденные грибом участки, а также обрабатывали

здоровую кожу на границе с очагом инфекции.

За животными вели ежедневные клинические наблюдения в течение 15

дней (рис. 27, 28).

Рис. 27. Телята, больные трихофитией

Рис. 28. Обработка больных трихофитией телят Миковелтом

Было установлено, что применение препарата Миковелт способствовало

выздоровлению телят, больных трихофитией, через 10 сут. после начала ле-

чения.

Терапевтическая эффективность применения Миковелта при лечении те-

лят, больных трихофитией, составила 100%. Все телята выздоровели на 10

сутки после начала лечения. К 15 дню наблюдений за животными клиниче-

127

ские признаки трихофитии не были выявлены. При микроскопии соскобов

кожи с пораженных участков, элементы гриба Trichophyton не были обнару-

жены.

Миковелт не раздражал кожу животных, способствовал восстановлению

волосяного покрова и был безвреден для животных.

Кроме того, использование Миковелта позволяло визуально определить

площадь обработанных участков кожи, благодаря тому, что входящая в со-

став препарата метиленовая синь окрашивает в синий цвет кожу животных.

Таким образом, препарат Миковелт обладает высокой противогрибковой

активностью в отношении Trichophyton verrucosum – возбудителя трихофи-

тии крупного рогатого скота и удобен в применении.

Терапевтическая эффективность Миковелта при трихофитии ло-

шадей. Изучение терапевтической эффективности Миковелта при трихофи-

тии лошадей было проведено в крестьянском фермерском хозяйстве КФХ

«Корнево», Истринского р-на, Московской обл. и на базе СХПК «Верещаки»

Новозыбковского района, Брянской обл.

В КФХ «Корнево», Истринского р-на, Московской обл. у 4 рабочих ло-

шадей хозяйства были обнаружены клинические признаки грибкового пора-

жения кожи в области головы, плеча и на крупе. В месте поражений шерсть

выпадала, очаги поражений имели округлую форму размером 1,5-2,5 см х

1,0-2,0 см.

В СХПК «Верещаки» Новозыбковского района, Брянской обл. клиниче-

ские признаки дерматомикоза были обнаружены у рабочих лошадей разного

возраста в количестве 14 голов. У животных наблюдались ограниченные по-

ражения кожи в области плеча, спины, крупа и головы в виде округлых

участков размером 2х3-5 см. В местах поражений выпадали волосы, кожа

шелушилась и была отечная.

При лабораторных исследованиях соскобов кожи, взятых у больных ло-

шадей в обоих хозяйствах, был поставлен диагноз «Трихофития» и выделен

128

возбудитель Trichophyton equinum.

Кроме того, из соскобов кожи лошадей были выделены эшерихии, ста-

филококки, псевдомонады, вызывающие раневые инфекции.

Ранее хозяйства были благополучны по грибковым инфекциям и лошади

не подвергались вакцинации против трихофитии (рис. 29).

Рис. 29. Лошади, больные трихофитией

Для лечения больных трихофитией лошадей был использован препарат

Миковелт, который наносили на пораженные участки кожи лошадей с по-

мощью ватно-марлевого тампона 1 раз в день 3 дня подряд.

За животными вели ежедневные клинические наблюдения (рис. 30).

Рис. 30. Лошади, обработанные Миковелтом

129

На основании проведенных исследований было установлено, что приме-

нение препарата Миковелт уже после однократной обработки способствова-

ло освобождению организма лошадей от трихофитона.

В соскобах кожи с пораженных участков уже после первой обработки

споры гриба не обнаруживали.

На 5 день после применения Миковелта на обработанных препаратом

поверхностях кожи у лошадей образовывалась тонкая ороговевшая корочка,

состоящая из отторгнутых организмом пораженных дерматофитами клеток

эпителия и погибших спор Trichophyton. После удаления или самоотслаива-

ния корочек, под ними обнаруживали молодой, не пораженный возбудителем

эпителий.

При лабораторных исследованиях соскобов кожи лошадей, взятых с об-

работанных Миковелтом участков, споры грибов рода Trichophyton, а также

сопутствующая бактериальная микрофлора не были выделены.

Препарат Миковелт не раздражал кожу лошадей, обладал противозуд-

ным, обезболивающим, смягчающим действием и способствовал восстанов-

лению волосяного покрова у леченных животных.

При использовании препарата обработанная кожа у лошадей окрашива-

лась в синий цвет, что давало возможность контролировать степень обработ-

ки и площадь обрабатываемой поверхности кожи.

Таким образом, препарат Миковелт обладает высокой противогрибковой

активностью в отношении возбудителя трихофитии лошадей Trichophyton

equinum. Терапевтическая эффективность применения препарата Миковелт 1

раз в день 3 дня подряд при лечении лошадей, больных трихофитией, состав-

ляет 100%. Все животные выздоровели после третьей обработки препаратом

Миковелт.

Терапевтическая эффективность препарата «Миковелт» при трихо-

фитии овец. Изучение терапевтической эффективности противогрибкового

препарата Миковелт при трихофитии овец было проведено в племенном ов-

130

цеводческом хозяйстве института биотехнологии Национальной академии

Кыргызской Республики.

В овцеводческом хозяйстве института биотехнологии Национальной

академии Кыргызской Республики у 322 овец Киргизской тонко-рунной по-

роды шерстно-мясного направления были обнаружены клинические призна-

ки грибкового поражения кожи в области головы: у основания ушей, на лбу,

носу, губах, веках и затылке.

Овцы вели себя беспокойно, терлись головой о различные предметы, у

50% овец отмечались воспаления кожи, потертости, царапины, точечные

кровоизлияния в местах поражений.

При лабораторных исследованиях материала, взятого у овец, было уста-

новлено, что овцы поражены трихофитией, вызванной Trichophyton men-

tagrophytes.

Руководством хозяйства были предприняты попытки приобрести в Рос-

сии «Концентрированную живую сухую вакцину «Триховис» (ВИЭВ) для

профилактики и терапии трихофитии овец». Однако сроки поставки вакцины

не были определены, а овцам необходимо было оказать немедленную вете-

ринарную помощь.

Было принято решение проводить местное лечение овец с использовани-

ем противогрибковых средств для наружного применения.

Для этих целей ООО «НПО ВЕЛТ» был предоставлен препарат Мико-

велт в количестве 1500 мл, в пластиковой упаковке по 300 мл.

Пораженные участки кожи у овец обрабатывали препаратом Миковелт с

помощью ватно-марлевого тампона 1 раз в день 3 дня подряд. За животными

вели ежедневные клинические наблюдения.

Было установлено, что применение препарата Миковелт уже после одно-

кратной обработки способствовало исчезновению у овец зуда в области по-

раженных трихофитоном участков кожи, общее состояние овец улучшалось –

овцы перестали беспокоиться и тереться о различные предметы головой,

131

охотно выходили на пастбище.

На 5 день после начала обработки овец у 25 животных были взяты со-

скобы кожи с обработанных Миковелтом участков и проведены бактериоло-

гические и микологические исследования отобранного материала.

При лабораторных исследованиях соскобов кожи овец, взятых с обрабо-

танных Миковелтом участков, Trichophyton mentagrophytes, а также сопут-

ствующая бактериальная микрофлора не были выделены.

Таким образом, препарат Миковелт обладает высокой противогрибковой

активностью в отношении возбудителя трихофитии овец Trichophyton men-

tagrophytes.

Терапевтическая эффективность применения препарата Миковелт 1 раз в

день 3 дня подряд при лечении 322 овец, больных трихофитией, составила

100%.

Однократная обработка Миковелтом больных трихофитией овец способ-

ствовала улучшению общего состояния животных - в области пораженных

возбудителем участков кожи исчезал зуд, овцы переставали беспокоиться и

тереться о различные предметы головой, улучшался их аппетит.

При использовании препарата обработанная кожа у овец окрашивалась в

синий цвет, что давало возможность контролировать степень обработки и

площадь обрабатываемой поверхности кожи.

Таким образом, препарат Миковелт производства ООО «НПО ВЕЛТ»

обладает высокой фунгицидной активностью в отношении грибов из рода

Trichophyton – возбудителей трихофитии крупного рогатого скота, телят и

овец. Терапевтическая эффективность применения Миковелта при лечении

телят, лошадей и овец, больных трихофитией, составила 100%. Все телята

выздоровели на 10 сутки, лошади - на 7 сут после начала лечения, овцы – на

5 сутки. Миковелт обладает противозудным, обезболивающим, смягчающим

действием и способствует восстановлению волосяного покрова у леченных

животных.

132

2.2.10. Терапевтическая эффективность Миковелта

при трихофитии и микроспории мелких домашних животных

Изучение терапевтической эффективности препарата Миковелт при ле-

чении больных трихофитией и микроспорией собак и кошек было проведено

на базе Московских ветеринарных клиник ООО «Вет Био Сервис», ООО

«Вет Зоо Сервис» и ветеринарного Центра пос. Красково Люберецкого райо-

на Московской обл.

Объектом исследований являлись 32 собаки и 27 кошек разного возраста

и различных пород с клиническими признаками грибковых поражений кожи.

Владельцы животных обратились в ветеринарную клинику впервые. Жи-

вотные против грибковых инфекций не вакцинировались.

У животных были обнаружены типичные клинические признаки дерма-

томикозов - ограниченные поражения кожи в области головы, плеч и крупа в

виде округлых участков размером 0,5-2 х 1-2 см. В местах поражений выпа-

дали волосы, кожа шелушилась и была отечная (рис. 31, 32).

Рис. 31. Поражения головы у собак возбудителем трихофитии

133

Рис. 32. Кошки, больные микроспорией

От всех больных животных были отобраны соскобы с кожи вместе с

шерстью и волосяными луковицами и проведен микроскопический и миколо-

гический анализ материала.

Под микроскопом обнаруживали специфические для дерматофитов спо-

ры и колонии грибов внутри волос, в волосяных луковицах и на чешуйках

эпидермиса (рис. 33, 34).

Рис. 33. Волосы собак, пораженные Trichophyton

134

Рис. 34. Волосы собак, пораженные Microsporum

Для культивирования дерматофитов использовали агар Сабуро. Посевы

инкубировали в термостате при температуре 26-28˚С в течение 15-20 дней,

затем изучали морфологию колоний.

Все животные также были обследованы в темной комнате методом лю-

минесцентного анализа с использованием прибора ПРК-4 с фильтром Вуда

(рис. 35).

Рис. 35. Свечение пораженных микроспорией участков кожи у кошки

при использовании метода люминесцентного анализа

135

Из 32 обследованных собак 4 собаки (12,5%) были заражены Micro-

sporum canis (M.lanosum), 13 собак заражены Trichophyton mentagrophytes

(40,6%), 15 собак заражены Trichophyton verrucosum (46,9%).

%

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

M.canis T.mentagrophytes

Т.verrucosum

Рис. 36. Уровень зараженности обследованных собак дерматомикозами

Из 27 больных кошек 8 были заражены Microsporum gypseum (29,6%),

от 3 кошек выделили Trichophyton mentagrophytes (11,1%), 16 кошек были за-

ражены Microsporum canis (59,3%).

136

%

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

M.gypseum

M.canis

T.mentagrophytes

Рис. 37. Уровень зараженности обследованных кошек дерматомикозами

Шерсть собак и кошек, больных микроспорией, светилась характерным

зеленоватым цветом, что подтверждало диагноз.

Пораженные участки кожи у собак и кошек обрабатывали препаратом

Миковелт 1 раз в день 3 дня подряд. За животными вели ежедневные клини-

ческие наблюдения в течение 14 дней (рис. 38, 39).

Рис. 38. Обработка Миковелтом больной трихофитией собаки

137

Рис. 39. Обработка Миковелтом больной микроспорией кошки

Было установлено, что применение препарата Миковелт способствовало

выздоровлению животных на 5 сут после начала лечения. На обработанных

Миковелтом поверхностях кожи собак и кошек образовывалась тонкая оро-

говевшая корочка или пленка, состоящая из отторгнутых организмом пора-

женных дерматофитами клеток эпителия и погибших спор Trichophyton или

Microsporum. После удаления (отслаивания) корочки, под ней обнаруживали

молодой, не пораженный микроскопическими грибами, эпителий.

При использовании препарата обработанная кожа собак и кошек окра-

шивалась в синий цвет, что давало возможность контролировать степень об-

работки и площадь обрабатываемой поверхности кожи.

Таким образом, Миковелт – эффективное противогрибковое средство

при дерматомикозах мелких домашних животных, вызываемых грибами из

рода Trichophyton и Mycrosporum. Терапевтическая эффективность примене-

ния препарата Миковелт при лечении собак и кошек, больных трихофитией и

микроспорией, составила 100%. Все животные выздоровели на 5 сутки после

начала лечения.

138

2.2.11. Изучение фармакокинетики и сроков выведения

остаточных количеств Миковелта из организма крупного рогатого скота

и овец после его курсового применения

Для изучения фармакокинетики и сроков выведения остаточных коли-

честв Миковелта из организма крупного рогатого скота и овец после его кур-

сового применения провели исследование молока коров, леченных Миковел-

том, на наличие компонентов препарата и определение сроков ожидания для

молочной продукции после курсового применения средства, а также иссле-

довали мясо коров и овец, леченных Миковелтом, на наличие компонентов

препарата после курсового применения средства.

Исследование молока коров, леченных Миковелтом, на наличие компо-

нентов препарата и определение сроков ожидания для молочной продукции

после применения средства.

В соответствии с Законом о ветеринарии РФ, а также Директивами Ев-

ропейского Союза от 26 мая 1989 г. по общим требованиям гигиены для мо-

лочных производственных хозяйств (89/362/ЕЕС), от 16 июня 1992 г. опре-

деляющей правила здоровья при производстве и размещении на рынке сы-

рого молока и молока, прошедшего тепловую обработку и продуктов на ос-

нове молока (92/46/ЕЕС), к производству молочной продукции установлены

строгие гигиенические требования.

Было проведено органолептическое исследования молока (цвет, запах,

вкус, консистенция), а также определение содержания в молоке клатрата

ЧАС с карбамидом.

Были созданы 2 группы коров – опытная и контрольная.

Опытную группу коров с абсцессами подкожной клетчатки в количестве

10 голов лечили Миковелтом в течение 3 сут. Препарат вносили животным

во вскрытые полости абсцессов 1 раз в день.

На одну обработку одной коровы расходовалось 30 мл препарата.

139

Животным контрольной группы в количестве 10 голов Миковелт не

применяли.

Ежедневно, в утреннее и вечернее доение, от коров опытной и контроль-

ной групп отбирали по 200 мл проб молока и проводили его исследования.

Внешний вид и цвет молока определяли визуальным осмотром, запах -

органолептически.

При определении внешнего вида и цвета молока, его наливали в количе-

стве 25 мл в пробирку из прозрачного стекла с внутренним диаметром 30 мм

и вместимостью 50 мл и просматривали в проходящем свете.

Было установлено, что молоко от коров опытной и контрольной групп

представляет собой непрозрачную жидкость беловатого цвета.

Посторонний запах и вкус определяли у свежевыдоенного молока и во

время кипячения 100 мл молока в течение 10 мин.

Было установлено, что молоко, полученное от опытных и контрольных

животных, имеет специфический для молока приятный запах и вкус.

Для определения в молоке клатрата дидецилдиметиламмоний бромида

с карбамидом использовали метод двухфазного титрования в присутствии

смешанного индикатора.

Было установлено, что ни в одной пробе молока, полученного от опыт-

ных и контрольных коров, следов клатрата дидецилдиметиламмоний бро-

мида с карбамидом не было обнаружено, что свидетельствует о том, что

компоненты Миковелта при лечении коров, в молоко не попадают.

Исследование мяса коров и овец, леченных Миковелтом, на наличие

компонентов препарата и определение сроков ожидания для мясной продук-

ции после применения средства.

Было проведено исследование мяса, полученного от коров и овец, кото-

рых лечили Миковелтом, на содержание в мясе клатрата дидецилдиметилам-

моний бромида с карбамидом.

140

Было проведено органолептическое исследования мяса и мясного бульо-

на (цвет, запах, вкус, консистенция), полученного от коров и овец, которых

лечили Миковелтом, а также определение содержания в мясе убойных жи-

вотных действующего вещества препарата - клатрата дидецилдиметиламмо-

ний бромида с карбамидом.

От одной забитой на мясо коровы на 3 сут. лечения Миковелтом было

отобрано из разных участков туши 5 проб мяса, каждая проба весом 100 г.

Аналогично, по 5 проб мяса было отобрано от 1 забитой овцы, которую в

течение 3 сут. лечили Миковелтом.

Всего было исследовано 10 проб мяса от крупного рогатого скота и овец.

Внешний вид и цвет мяса определяли визуальным осмотром, запах и

вкус - органолептически.

Было установлено, что исследуемые пробы мяса, полученные от живот-

ных, леченных Миковелтом, имеют характерный для говядины и баранины

цвет и консистенцию.

Посторонний запах и вкус определяли у свежей говядины и баранины,

а также в период варки мяса в течение 30 мин.

Было установлено, что говядина и баранина, полученные от леченных

Миковелтом животных, имеет специфический для мяса приятный запах и

вкус, мясной бульон прозрачный и ароматный. Посторонние запахи не были

выявлены.

Для определения в мясе клатрата дидецилдиметиламмоний бромида с

карбамидом использовали качественный метод, основанный на двухфазном

титровании в присутствии смешанного индикатора.

При проведении исследований по 100 г свежего мяса пропускали через

мясорубку, заливали 100 мл дистиллированной воды, интенсивно переме-

шивали в течение 5 мин. и отжимали мясную вытяжку.

Исследования проводили так же, как описано выше.

141

Было установлено, что в исследуемых пробах говядины и баранины

следы клатрата дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом отсут-

ствуют.

Таким образом, молоко от коров, леченных Миковелтом, имеет специ-

фический для молока приятный запах и вкус, а действующее вещество пре-

парата - клатрат дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом, не выде-

ляются с молоком. Сроки ожидания для молочной продукции после приме-

нения Миковелта отсутствуют и молоко можно использовать без ограниче-

ний.

Говядина и баранина, полученные от леченных Миковелтом животных,

имеют специфический для мяса приятный запах и вкус, мясной бульон про-

зрачный и ароматный. Посторонние запахи не были выявлены. Сроки ожи-

дания для мясной продукции после применения Миковелта отсутствуют и

говядину и баранину можно использовать без ограничений.

142

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

Профилактика и лечение дерматомикозов животных до сих пор остается

серьезной проблемой ветеринарии.

Повысить качество лечебно-профилактических мероприятий при дерма-

томикозах животных возможно путем совершенствования методологии

местной терапии и применения эффективных антимикробных средств.

Для лечения животных при раневых инфекциях предлагаются различные

методы и множество антимикробных препаратов. Однако высокий процент

инфекционных осложнений, развитие резистентности у микроорганизмов к

используемым лекарственным средствам, снижение общей и местной имму-

нологической реактивности организма животных требуют дальнейшего изу-

чения, разработки и совершенствования способов и средств лечения.

По мнению отечественных и зарубежных ученых (43, 44, 101, 115, 121),

при изыскании новых противогрибковых препаратов ветеринарного назначе-

ния предпочтение необходимо отдавать многофункциональным биоцидам,

обладающим широким спектром антимикробного действия, противовоспали-

тельным, противозудным, обезболивающим эффектом и ранозаживляющими

свойствами, не имеющими противопоказаний, глубоко проникающих в по-

раженные ткани организма, являющихся безвредными для человека и живот-

ных и экологически безопасными.

На сегодняшний день получить подобные биоциды возможно только с

применением биоцидных субстанций нового поколения (44).

Учеными НПО «ВЕЛТ» (г. Оренбург) было сконструировано лекар-

ственное противомикробное средство Миковелт в форме раствора, предна-

значенное для лечения сельскохозяйственных, мелких домашних, зоо-

парковых, лабораторных и экзотических животных, в т.ч. птиц при дермато-

микозах и раневых инфекциях, а также для профилактики послеоперацион-

ных осложнений и гнойной патологии.

143

В качестве активно действующего вещества Миковелт содержит клатрат

дидецилдиметиламмония бромида с карбамидом, благодаря чему Миковелт

обладает широким спектром антимикробного действия в отношении грампо-

ложительных и грамотрицательных микроорганизмов, в т.ч. анаэробных и

спорообразующих бактерий (стрептококков, стафилококков, эшерихий, про-

тея, синегнойной палочки, бацилл, клостридий, фузобактерий и др.), а также

микроскопических грибов - возбудителей кандидозов и дерматомикозов, в

т.ч. трихофитии, микроспории, эпидермофитозе.

Миковелт прошел широкие клинические испытания в ветеринарной

практике и зарекомендовал себя как эффективное и безвредное противомик-

робное средство.

Однако, на рынке ветеринарных препаратов предлагаются разнообраз-

ные лекарственные средства для лечения животных при дерматомикозах, но

все они имеют противопоказания и должны применяться с осторожностью.

С учетом отмеченного, создание такого противогрибкового препарата

для животных, которое давало бы быстрый терапевтический эффект, облада-

ло антибактериальным, противовоспалительным, ранозаживляющим дей-

ствием, было безвредным для животных и человека и экологически безопас-

ным представляет собой актуальную задачу для ветеринарии.

Для профилактики инфекций хирургических ран зарегистрировано и

разрешено к применению большое количество антимикробных препаратов,

имеющих как достоинства, так и недостатки. Однако в работах отечествен-

ных и зарубежных специалистов просматривается тенденция, характеризую-

щая повышенный интерес ученых и специалистов к разработке и внедрению

антисептических средств, не содержащих антибиотиков и безвредных для

человека и животных.

Как указывает Meunier F. (124), до недавнего времени проблема нарас-

тающей антибиотикорезистентности раневой микрофлоры как в медицине,

так и в ветеринарии решалась путем использования антибиотиков нового по-

144

коления. Сейчас этот путь многими специалистами считается неэффектив-

ным. Способ повышения эффективности антибиотикотерапии — это повы-

шение дозировок препарата и изменение режима его введения.

При изучении антимикробной активности Миковелта in vitro, мы устано-

вили, что препарат обладает бактерицидной и фунгицидной активностью в

отношении культур тест-штаммов Escherichia coli 11229, Staphylococcus au-

reus 6538, Pseudomonas aeruginosa 15412, Bacillus cereus 10702, Clostridium

sporogenes 272, Candida albicans 10231 при экспозиции 1-3 мин. Коэффициент

эффективности бактерицидного и фунгицидного действия Миковелта соста-

вил 100%.

В результате проведенных исследований также было установлено, что

препарат Миковелт в концентрациях 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,2, 15,0 и 7,5

обладает фунгицидной активностью в отношении культур тест-штаммов

T.verrucosum 480, T.violaceum 11, T.mentagrophytes 210, M.gypseum 37 и

M.canis 474; в концентрациях 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,2 и 15,0 – в отно-

шении M.lanosum 22, E.rubrum 64 и A.niger 9642; в концентрациях - 1000,

500, 250, 125 и 62,5 – в отношении Cladosporium spp. и Mucor spp.

Следовательно, рабочая концентрация препарата Миковелт, обладающая

фунгицидным действием в отношении возбудителей микозов и плесневых

грибов должна составлять не менее 62,5 мкг/мл (или 0,06 мг/мл.).

Для дополнительного подтверждения фунгицидной активности Мико-

велта в концентрации 0,06 мг/мл был использован метод диффузии а агар

Сабуро, в результате которого было также доказано, что Миковелт обладает

высокой противогрибковой активностью in vitro в отношении культур тест-

штаммов T.verrucosum 480, T.violaceum 11, T.mentagrophytes 210, M.gypseum

37, M.canis 474, M.lanosum 22, E.rubrum 64, A.niger 9642 и плесневых грибов

Cladosporium spp. и Mucor spp. Коэффициент эффективности фунгицидного

действия Миковелта составил 100%.

По нашему мнению, Миковелт во многих случаях может заменить анти-

145

биотики.

Литературные данные показывают, что большинство из существующих

на сегодняшний день специфических профилактических и терапевтических

средств имеют противопоказания и побочные эффекты за счёт их токсично-

сти, что делает невозможным их применение в ряде случаев.

Поэтому, к определению острой и хронической токсичности мы подо-

шли со всей ответственностью и провели широкомасштабные испытания

Миковелта по определению его безвредности для разных видов животных.

Было установлено, что согласно «Классификации опасности веществ по

степени воздействия на организм», которая входит в ГОСТ 12.1.007-76, пре-

парат Миковелт при введении в желудок и брюшную полость относится к 4

классу малоопасных веществ. Величина ЛД50 Миковелта составила более

6000 мг/кг, что по классификации опасности веществ по степени воздействия

на организм соответствует 4 классу малоопасных веществ.

По ингаляционной опасности в насыщающих концентрациях средство

Миковелт относится к 4 классу малоопасных веществ. Учитывая назначения

и область применения Миковелта, ингаляционная опасность его маловероят-

на.

Миковелт при нанесении на кожу животных не проявлял острой токсич-

ности, что соответствует 4 классу опасности по ГОСТ 12.1.007-76.

На неповрежденную кожу экспериментальных животных Миковелт при

однократном применении не оказывал токсического и местно-раздражаю-

щего действия, а при многократном использовании вызывал слабую эритему.

Мы считаем, что покраснение кожи у животных после использования

Миковелта происходило в результате реакции макрофагов, которые реагиро-

вали на молекулы Миковелта, проникающие глубоко в кожу, и вызывали

клеточную реакцию.

При однократном и многократном применении на поврежденную кожу

экспериментальных животных Миковелт не оказывал токсического и местно-

146

раздражающего действия. Препарат ускорял процессы заживления ран в 2

раза.

При воздействии на слизистые оболочки, роговицу и коньюнктиву глаз

животных препарат Миковелт относится к 4 классу малоопасных веществ.

В результате проведенных исследований было установлено, что при

многократной обработке Миковелтом 5% кожного покрова животных инток-

сикации организма не происходило. Следовательно, препарат Миковелт не

обладает кожно-резорбтивным действием.

В результате проведенных исследований у животных также не было вы-

явлено контактного сенсибилизирующего действия Миковелта – кожная ре-

акция не отмечалась, не было выявлено разницы в количестве эозинофилов и

гистамина в периферической крови опытных и контрольных животных.

Миковелт при длительном применении не влиял на морфологический

состав крови, не вызывал изменений антитоксической функции печени и ал-

лергических реакций у экспериментальных животных.

При длительном применении препарат не оказывал существенного влия-

ния на гомеостаз организма экспериментальных животных, не проявлял ку-

мулятивного действия и не обладал хронической токсичностью.

Миковелт обладал 100% эффективностью при обеззараживании кожи

экспериментальных животных как в отношении естественной микрофлоры

кожи, так и искусственно нанесенной бактериальной микрофлоры и культу-

ры тест-штамма С.albicans 1023. Бактерицидное и фунгицидное действие

Миковелта наступало не позднее 3 мин экспозиции.

Миковелт обладал бактерицидным, противовоспалительным и раноза-

живляющим действием при раневых инфекциях у лабораторных и сельскохо-

зяйственных животных. Эффективность обеззараживания кожи Миковелтом

составляет 100%. Препарат ускорял процесс заживления искусственно нане-

сенных не инфицированных ран в 2 раза, а инфицированных ран – в 3 раза,

по сравнению с контролем. При заражении животных суспензией культур

147

тест-штаммов эшерихий, стафилококка, синегнойной палочки и кандиды, на

участках кожи, обработанных Миковелтом, абсцессы не развивались.

Кроме того, препарат Миковелт обладал высокой антимикробной актив-

ностью в отношении эшерихий, стафилококков, кандид, протея, бацилл и

микроскопических грибов, выделенных с поверхности кожи мелких домаш-

них животных. Препарат обеззараживал кожу в местах инъекций и операци-

онного поля у 100% исследованных собак и кошек через 3-5 мин. после обра-

ботки и обладал пролонгированным действием в течение не менее 3 часов.

Препарат Миковелт не вызывал аллергических реакций и раздражения кожи

у обработанных животных.

Терапевтическая эффективность применения Миковелта 1 раз в день в

течение 3 дней при лечении крупного рогатого скота, лошадей и овец, боль-

ных дерматомикозами составила 100%. Все телята выздоровели на 10 сутки,

лошади - на 7 сут после начала лечения, овцы – на 5 сутки. Миковелт обладал

противозудным, обезболивающим, смягчающим действием и способствовал

восстановлению волосяного покрова у леченных животных.

Миковелт проявил высокую противогрибковую эффективность при дер-

матомикозах мелких домашних животных, вызываемых грибами из рода Tri-

chophyton и Mycrosporum. Терапевтическая эффективность применения пре-

парата Миковелт 1 раз в день в течение 3 дней при лечении собак и кошек,

больных трихофитией и микроспорией, составила 100%. Все животные вы-

здоровели на 5 сутки после начала лечения.

При изучении фармакокинетики и сроков выведения остаточных коли-

честв Миковелта из организма крупного рогатого скота и овец после его кур-

сового применения было установлено, что ни в одной пробе молока и мяса,

полученных от опытных и контрольных животных, следов клатрата дидецил-

диметиламмоний бромида с карбамидом не было обнаружено, что свидетель-

ствует о том, что компоненты Миковелта при лечении коров и овец, в молоко

и мясо не попадают.

148

Таким образом, молоко от коров, леченных Миковелтом, имеет специ-

фический для молока приятный запах и вкус, а действующее вещество пре-

парата - клатрат дидецилдиметиламмоний бромида с карбамидом, не выде-

ляются с молоком. Сроки ожидания для молочной продукции после приме-

нения Миковелта отсутствуют и молоко можно использовать без ограниче-

ний.

Говядина и баранина, полученные от леченных Миковелтом животных,

имеют специфический для мяса приятный запах и вкус, мясной бульон про-

зрачный и ароматный. Посторонние запахи не были выявлены. Сроки ожида-

ния для мясной продукции после применения Миковелта отсутствуют и го-

вядину и баранину можно использовать без ограничений.

149

4. ВЫВОДЫ

1. Новое лекарственное средство Миковелт, включающее в качестве ос-

новного действующего вещества отечественную антимикробную субстанцию

Велтон, а в качестве вспомогательных компонентов - изопропиловый спирт и

метиленовый синий, является эффективным препаратом для наружного при-

менения при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов животных.

2. Концентрация субстанции Велтон в препарате Миковелт, обладающая

противогрибковым и антибактериальным действием в отношении возбуди-

телей дерматомикозов и раневых инфекций животных, должна составлять не

менее 62,5 мкг/мл.

3. По параметрам острой токсичности Миковелт относится к 4 классу ма-

лоопасных веществ и не обладает видовой чувствительностью. При длитель-

ном применении препарат не проявляет сенсибилизирующего, кожно-

резорбтивного и кумулятивного действия, не влияет на морфологический со-

став крови животных, не вызывает аллергических реакций и изменений анти-

токсической функции печени. ЛД50 Миковелта для белых мышей составляет

более 6000 мг/кг.

4. Лекарственное средство Миковелт обладает in vitro противогрибковой

активностью в отношении культур C.albicans, T.verrucosum, T.violaceum,

T.mentagrophytes, M.gypseum, M.canis, M.lanosum, E.rubrum, A.niger, плесне-

вых грибов Cladosporium spp., Mucor spp. и бактерицидной активностью в

отношении E.coli, S.aureus, P.aeruginosa, B.cereus, C.sporogenes. Коэффициент

эффективности противогрибкового и бактерицидного действия Миковелта

при экспозиции 3 мин. составляет 100%.

5. От телят, больных дерматомикозами, выделяли Trichophyton verru-

cosum, от лошадей - Trichophyton equinum, от овец - Trichophyton men-

tagrophytes. От собак с поражениями кожи в 46,9% случаев выделяли Tri-

chophyton verrucosum, в 40,6% случаев - Trichophyton mentagrophytes, в

150

12,5% случаев - Microsporum canis. От больных дерматомикозами кошек вы-

деляли в 59,3% случаев Microsporum canis, в 29,6% случаев - Microsporum

gypseum, в 11,1% случаев Trichophyton mentagrophytes.

6. Для лечения разных видов животных, больных трихофитией, микро-

спорией и эпидермофитозом, Миковелт необходимо применять наружно 1

раз в день 3 дня подряд. При этом больные морские свинки выздоравливают

на 12 сут. после обработки, кролики и телята – на 10 сут., лошади, овцы, со-

баки и кошки – на 3-5 сут. Контрольные животные самовыздоравливали на

35-45 сутки с начала постановки опыта.

7. Миковелт обладает противовоспалительным и ранозаживляющим

действием при раневых инфекциях у лабораторных и сельскохозяйственных

животных. Противовоспалительное действие Миковелта в 2 раза превышает

показатели в контрольной группе животных. Препарат ускоряет процесс за-

живления искусственно нанесенных не инфицированных ран в 2 раза, а ин-

фицированных ран – в 3 раза, по сравнению с контролем. Эффективность

применения препарата 1 раз в день 3 дня подряд для лечения животных при

раневых инфекциях составляет 100%.

8. Миковелт обеззараживает кожу в местах инъекций и операционного

поля у 100% исследованных собак через 3-5 мин. после обработки и обладает

пролонгированным действием в течение не менее 3 часов.

9. Компоненты Миковелта не накапливаются в молоке и в мясе крупного

рогатого скота и овец, сроки ожидания для молочной и мясной продукции

после применения препарата отсутствуют и молоко, говядину и баранину

можно использовать без ограничений.

151

5. ПРАКТИЧЕСКОЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ

РЕЗУЛЬТАТОВ

1. По результатам исследований составлены и утверждены в установ-

ленном порядке 2 научных отчетах: промежуточный отчет «Эксперимен-

тальные испытания безопасности и антимикробной активности препарата

Миковелт»; заключительный отчет «Изучение лечебно-профилактической

эффективности препарата «Миковелт» при дерматомикозах и раневых ин-

фекциях животных».

2. Результаты исследований включены в проект СТО 71954720-0005-

2010 на лекарственное средство Миковелт.

3. Разработан проект инструкции по применению лекарственного сред-

ства Миковелт при дерматомикозах и раневых инфекциях разных видов жи-

вотных.

4. В опытах на кроликах, морских свинках, белых крысах и белых мы-

шах, проводимых в условиях вивария кафедры микробиологии ФГОУ ВПО

МГАВМиБ, лицензированной по работе с микроорганизмами III-IV групп

патогенности, показана безвредность, противогрибковая и бактерицидная ак-

тивность препарата Миковелт.

5. В опытах на крупном рогатом скоте, лошадях, овцах, собаках и кош-

ках изучен механизм действия препарата Миковелт, дана оценка его влияния

на организм животных при использовании при дерматомикозах и раневых

инфекциях, показана высокая лечебно-профилактическая эффективность

препарата, что подтверждено актами, утвержденными руководителями хо-

зяйств (КФК «Корнево», Истринского р-на, Московской обл.; СХПК «Ве-

рещаки», Новозыбковского района, Брянской обл., племенное овцеводческое

хозяйство института биотехнологии Национальной академии Кыргызской

Республики) и ветеринарных клиник (ООО «Вет Био Сервис» (Москва); ООО

«Вет Зоо Сервис» (Москва); ветеринарный Центр пос. Красково, Люберецко-

го р-на, Московской обл.).

152

6. Результаты исследований по применению лекарственного средства

Миковелт при дерматомикозах и раневых инфекциях животных используют-

ся в учебном процессе в ФГОУ ВПО МГАВМиБ по дисциплине «Микробио-

логия» для студентов факультета ветеринарной медицины и ветеринарно-

биологического факультета.

6. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Рекомендовать лекарственное средство Миковелт зооветспециалистам

и владельцам животных в качестве лечебно-профилактического средства при

обработке инъекционных и операционных полей; профилактике инфициро-

вания ран кожи, подкожной клетчатки и слизистых оболочек животных; для

лечения сельскохозяйственных, мелких домашних и лабораторных животных

при трихофитии, микроспории, эпидермофитозе и раневых инфекциях.

2. Рекомендовать препарат Миковелт ветеринарным специалистам для

применения в качестве противогрибкового, антибактериального, противовос-

палительного и ранозаживляющего средства при дерматомикозах и раневых

инфекциях животных.

3. Миковелт рекомендуется для применения в качестве антисептическо-

го средства для профилактики послеоперационных осложнений и предупре-

ждения развития гнойной патологии.

4. Результаты исследований по изучению бактерицидной и фунгицидной

активности Миковелта, а также по определению острой и хронической ток-

сичности препарата и оценке его лечебно-профилактической эффективности

на разных видах животных рекомендуется использовать в учебном процессе

по дисциплинам «Микробиология», «Биотехнология» и «Ветеринарная хи-

рургия» в высших учебных заведениях по специальностям 111201 «Ветери-

нария» и 110401 «Зоотехния».

153

7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Антонов Б.И., Яковлева Т.Ф., Дербинова В.И. Лабораторные исследо-

вания в ветеринарии: биохимические и микологические.- М.: Агропромиз-

дат.- 1989.- 324 с.

2. Аравийский Р.А., Горшкова Г.И. Практикум по медицинской миколо-

гии // СПб.: СПбМАПО, 1995.-40 с.

3. Архипов А. А. Лечение собак с синдромом аллопеции // Ветеринария. -

1999. - № 7.- 53-55.

4. Афанасьева И. Применение антимикробных изделий для профилакти-

ки гнойных и грибковых заболеваний кожи // Медицина труда и промыш-

ленная экология. - 2002- № 11.- С. 31-34.

5. Афиногенова Г.Е. Чашечный метод оценки эффективности дезинфек-

тантов и антисептиков //Методическое пособие.- СПб: СПбМА.- 2000.- С. 5-

7.

6. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиоло-

гических исследованиях. М.: Агропромиздат.- 1962.

7. Барадиев Б.Н. Трихофития северных оленей и меры борьбы с ней

(стригущий лишай).- Якутск: Якутское книжное издательство, 1991.- 320 с.

8. Белов А.Д., Чижов В.А., Данилов Е.П. Болезни собак: под ред. Д.А.

Белова // Инфекционные болезни. Дерматомикозы. – М.: Колос, 2002. – Гл. 6.

– С. 240–243.

9. Белова В.И., Волков Ю.П. Основные направления исследований в раз-

работке дезинфицирующих и антисептических средств /Научные основы

дезинфекции и стерилизации Сб.науч.тр.- М.: ММА.-2001.- С. 13–18.

10. Беспалов В.Л. Идентификация дерматофитов с помощью тест- систе-

мы Derma-Kit // Ветеринария. - 2003. - № 3 - 20-23.

11. Беспалов В.Л., Вашутин А.А., Фоменко Е.С. Эпидемиологические ас-

пекты дерматомикозов животных в г. Омске и Омской области / Проблемы и

154

перспективы развития науки в институте ветеринарной медицины ОмГАУ:

Сб. науч.тр.- Омск: ОмГАУ.- 2002.- С. 32-34.

12. Бирюкова М.В. Микроспория кошек (этиология, диагностика и лече-

ние): Автореф. дис. - канд. вет. наук.- М., 1999.- 18 с.

13. Бурмистров С. Зооантропонозы - общая беда /Собаки и кошки в од-

ной обложке 2000-2001: Справочник для владельцев домашних животных.-

М.: Зооинформ, 2000.- С. 26-27.

14. Бучин П.И., Новокшенов В.С. Определение степени взаимного по-

вышения антимикробной активности антисептиков при их сочетании

//Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия.- М.: ООО

«Издательский дом «Вести».- 2005.- Т. 7.- № 2.- С. 22-23.

15. Важенина Е.Г. Распространение поверхностных микозов у собак на

территории юга Западной Сибири // Актуальные проблемы ветеринарной ме-

дицины: Материалы 4-ой межрегиональной научно-практической конферен-

ции.- Омск: ОмГАУ.- 2005.- С. 77-81.

16. Важенина Е.Г. Лечение собак при дерматомикозах и демодекозе,

осложненном дерматомикозом / Е.Г. Важенина // Актуальные проблемы ве-

теринарной медицины: Материалы 5-ой межрегиональной научно-практичес-

кой конференции. – Омск: ОмГАУ.- 2006.- С. 256-259.

17. Важенина Е.Г. Выживаемость возбудителя трихофитии в различных

условиях внешней среды /Актуальные проблемы ветеринарной медицины.

Материалы 5-ой межрегиональной научно-практической конференции.-

Омск: ОмГАУ.- 2006. – С. 259-262.

18. Важенина Е.Г., Гордиенко Л.Н., Никитушкина Н.А. Профилактика

дерматофитозов мелких домашних животных /Актуальные проблемы вете-

ринарной медицины: Материалы 5-ой межрегиональной научно-практичес-

кой конференции. – Омск: ОмГАУ.- 2006. – С. 252-256.

19. Васильев Р. М. Болезни кожи у собак (диагностика и лечение): Авто-

реферат дис. канд. ветеринар, наук. /Санкт-Петербург, 1999.- 20 с.

155

20. Гаскелл P.M., Беннет М. Справочник по инфекционным болезням со-

бак и кошек .- М.: Аквариум, 2000. - 224 с.

21. Егорова Т.А., Клунова С.М., Живухина Е.А. Основы биотехнологии

//Учеб. пособие для высш. пед. учеб. заведений. - М.: Издательский центр

«Академия», 2003.- 208 с.

22. Глотова Т.И. Вспышка микроспории у домашних кошек

//Ветеринария.- 1997.- № 11.- С. 47-48.

23. Глотова Т.И. Дерматомикозы мелких домашних животных: распро-

странение, клиническое проявление, диагностика /Научное обеспечение ве-

теринарных проблем в животноводстве: Сб. науч. тр.– Новосибирск: Ин-т

эксперим. ветеринарии Сибири и Дал. Востока.- 2000.- С.259-260.

24. Глотова Т.И. Дерматомикозы собак и кошек в условиях города // Ве-

теринария домашних животных.- 2005.- № 2.- С. 23-24.

25. Головина Н., Красота Л., Галушко Л. Живые грибные вакцины про-

тив дерматомикозов // Животноводство России.- 2003.- № 5.- С. 20-21.

26. Головина Н.П., Красота Л.А., Галушко Л.Х. Микотические болезни

лошадей /Материалы IX Московского международного ветеринарного кон-

гресса.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2001.- С. 312-

315.

27. Гордиенко Л.Н. Скрытые формы дерматомикозов у собак, содержа-

щихся муниципальном приюте /Диагностика, лечение, профилактика болез-

ней животных: Сб. науч. тр.- Омск: ИВМ Ом ГАУ. - 1999. – С. 29-30.

28. Гордиенко Л.Н. Этиологическая структура дерматитов у мелких до-

машних животных в условиях Сибири /Материалы восьмого международно-

го конгресса по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних жи-

вотных. – М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей, 2000.- С. 86-

87.

29. Гордиенко Л.Н., Пильщик Е.В., Овчеренко Н.А. Зооантропонозы

мелких домашних животных в мегаполисе г. Омска / /Материалы IX Москов-

156

ского международного ветеринарного конгресса.- М.: Ассоциация практику-

ющих ветеринарных врачей.- 2001.- С. 24.

30. Горячкина Е.И. Микроспория кошек - сравнительные аспекты.- М.:

Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2003.- С. 21-22.

31. Государственный стандарт Союза ССР. Система стандартов безопас-

ности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования без-

опасности. ГОСТ 12.1.007-76.- М., 1984.- 4 с.

32. Грязин В.Н. Этиологические аспекты дерматитов собак и кошек в

Новосибирске /Актуальные вопросы ветеринарии: Материалы научно - прак-

тической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ. - Новоси-

бирск: НГАУ.- 2001.- С. 109-110.

33. Дроздов А.И. Методы выделения антигенов из патогенных грибов.-

Л.: Медицина.- 1971.- 33 с.

34. Зубарева И.М. Анализ эпизоотической картины дерматомикозов со-

бак и кошек в Усть-Каменогорске /Актуальные вопросы ветеринарной меди-

цины: Сб.науч.тр. - Новосибирск: НГАУ.- 2003. – С. 73-74.

35. Иванов О.В., Монова Н.Г., Брезгинова Т.И., Пронин В.В. Эпизоото-

логические особенности дерматомикозов и разработка новых методов лече-

ния болезни /Материалы IV региональной конференции «Золотое кольцо

России», посвященной проблемам профилактики и лечения домашних жи-

вотных и птицы. – Владимир: ВНИИВМВ.- 2001.- С.78-79.

36. Ишкаева Д.Р., Юсупова Л.М. Биологическая активность производных

бензофуроксана /Новые фармакологические средства в ветеринарии: Мате-

риалы научн.-практ. конф. – СПб.: СПбГАВМ, 2002.- С. 57.

37. Кашкин П.Н. Дерматомикозы.- Л.: Медгиз.- 1950.- 227 с.

38. Кашкин П.Н. Медицинская микология.- Л.: Медгиз.- 1962.- 344 с.

39. Костин В.В. Словарь ветеринарных микологических и микотоксико-

логических терминов.- М.: Россельхозиздат.- 1987.- 79 с.

157

40. Кривошеин Ю.С. Изучение мутагенного и канцерогенного действия

антимикробных поверхностно-активных веществ //Антибиотики.- 1984.- № 7.

41. Кузнецов А.Ф. Ветеринарная микология.- СПб.: Издательство

«Лань».- 2001.- 416 с.

42. Лабусова Н.И. Стимуляция поствакцинального иммунитета при три-

хофитии крупного рогатого скота: Автореф. соиск. – канд. вет. наук // Минск,

2004, 21 с.

43. Лештаева А.В. Лечение мелких домашних животных, больных дер-

матомикозами / Материалы IX Московского международного ветеринарного

конгресса.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2001.- С.

15.

44. Липин А.В. Ветеринарный справочник: традиционные и нетрадици-

онные методы лечения собак. Дерматомикозы. – М.: Колос, 2002. – Ч. 5, гл.

11. – С. 272–278.

45. Литвинов А.М. Дерматофитозы кошек и собак (профилактика и лече-

ние) //Ветеринария. – 2000.- Вып. 11.- С. 51-53.

46. Литвинов А.М., Сокова В.В., Литенкова И.Ю. Лечебно-

профилактическая эффективность вакцины Микоканифел при дерматофито-

зах (микроспории и трихофитии) собак и кошек /Материалы IV региональной

конференции «Золотое кольцо России», посвященной проблемам профилак-

тики и лечения домашних животных и птицы. – Владимир: ВНИИВМВ,

2001.-С.82-83.

47. Литвинов А.М., Шевченко А.А., Костюченко В.Г. Эффективность

опытной вакцины «Раббивак» против дерматофитозов (трихофитии и микро-

спории) и вирусной геморрагической болезни кроликов /Материалы IV реги-

ональной конференции «Золотое кольцо России», посвященной проблемам

профилактики и лечения домашних животных и птицы. – Владимир:

ВНИИВМВ, 2001.- С. 84-86.

158

48. Ллойд Д.Х., Марш К.А. Оптимизация состояния кожи и шерсти у со-

бак / Waltham Focus: Спец. выпуск. Внимание коже и шерсти. - 2001. - Т.11. -

№ 1. – С. 18-26

49. Лященко Т.А., Маркина Н.А. Эпизоотологические особенности мико-

зов домашних животных /Актуальные вопросы ветеринарной медицины:

Новосибирск: НГАУ.- 2003. – С. 56-59.

50. Маноян М.Г., Овчинников Р.С., Гайнуллина А.Г. Отбор штаммов

грибов, перспективных для изготовления вакцины против дерматофитозов

лошадей /Сборник научных трудов ВГНКИ.- Т. 66.- 2005.- С. 287-295.

51. Маноян М.Г., Савицкая М.Е. Изучение проблемы дерматофитозов

спортивных лошадей в Москве и Подмосковье / Материалы IX Московского

международного ветеринарного конгресса.- М.: Ассоциация практикующих

ветеринарных врачей.- 2001.- С. 315-317.

52. Маноян М.Г., Савицкая М.Е., Панин А.Н. Специфические средства

борьбы с дерматофитозами лошадей /Материалы IV региональной конферен-

ции «Золотое кольцо России», посвященной проблемам профилактики и ле-

чения домашних животных и птицы. - Владимир: ВНИИВМВ, 2001.- С. 88-

89.

53. Масимов Н.А., Лукьяновский В.А., Беляков И.М.Дерматомикозы: в

кн. Здоровье вашей собаки .- М.: Нива России.- 1999.- С. 83-88.

54. Мюллер Э., Леффлер В. Микология: Пер. с нем.- М.: Мир.- 1995.-

341 с.

55. Нахмансон В.М., Бурба Л.Г. Дифференциальная диагностика инфек-

ционных болезней сельскохозяйственных животных.- М.: Агропромиздат.-

1990.- 216 с.

56. Никитушкина Н.А. Клинико-эпизоотологические особенности дерма-

томикозов у собак и кошек, совершенствование схем их лечения /Автореф.

дис. – канд. вет. наук. – Новосибирск, 2008.-18 с.

159

57. Никифоров Л.И. Диагностика дерматофитозов животных: Метод.

указ. – М.: МГАВМиБ.- 2002.- 21 с.

58. Никифоров Л.И. Лабораторная диагностика дерматофитозов: Метод.

указ. - М.: МГАВМиБ.- 2000.- 17 с.

59. Новикова Т.В. Зоонозные дерматомикозы на территории Вологод-

ской области /Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Материалы Си-

бирского Международного Ветеринарного конгресса. – Новосибирск:

НГАУ.- 2005.- С. 49-50.

60. Овчинников Р.С., Плеских С.А., Мохина Т.Н. Грибы, изолированные

из кожных поражений собак и кошек /Материалы X международного ветери-

нарного конгресса.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.-

2002. – С. 282-283.

61. Овчинников Р.С., Маноян М.Г., Савицкая М.Е. Этиологическая

структура дерматомикозов лошадей /Сборник научных трудов ВГНКИ.- Т.

66.- 2005.- С. 280-286.

62. Овчинникова Е.А. Роль мониторинга безопасности лекарственных

средств в решении проблемы их рационального использования //Качествен-

ная клиническая практика.- 2003.- № 4.- С. 88-95.

63. Осидзе Д.Ф. Ветеринарные биопрепараты.- М.: Колос.- 1981.- 560 с.

64. Патерсон С. Кожные болезни кошек /Пер. с англ.- М.: «Аквариум

ЛТД».- 2002.- 168 с.

65. Патерсон С. Кожные болезни собак /Пер. с англ. - М.: «Аквариум

ЛТД».- 2003.- 176 с.

66. Петрович С.В. Микозы животных.- М.: Росагропромиздат, 1989.-

174 с.

67. Позднякова О.Н., Махновец Е.Н., Решетникова Т.Б. Эпидемиология

зооантропофильных дерматомикозов в городе Новосибирске /Проблемы ме-

дицинской микологии: Сб.науч.тр.- 2003.- Т.5.- № 2.- С. 64.

68. Поляков И.Д. Особенности формирования иммунитета у собак и ко-

160

шек после вакцинации против дерматомикозов /VIII Международный кон-

гресс по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных.-

М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2000.- С. 223-224.

69. Поляков И.Д. Клиническое проявление дерматомикозов у собак и

кошек / Материалы XII международного московского конгресса по болезням

мелких домашних животных. - М.: Ассоциация практикующих ветеринарных

врачей.- 2004.- С. 100-101.

70. Равилов Р.Х. Проблемы борьбы с инфекциями мелких домашних жи-

вотных / Актуальные вопросы ветеринарной медицины: Материалы Сибир-

ской международной научно-практической конференции.- Новосибирск:

НГАУ.- 2004. – С. 69-71.

71. Радчук Н.А. Ветеринарная микробиология и иммунология

/Возбудители микозов. – М.: Агропромиздат.- 1991.- Ч. 3.- С. 342–348.

72. Разнатовский К.И., Родионов А.Н., Котрехова Л.П. Дерматомикозы:

Руководство для врачей /Учеб. пособие для системы послевуз. проф. образо-

вания врачей.- СПб.: ИД СПбМАПО.- 2006.-183 с.

73. Родионов И.Н. Грибковые заболевания кожи: руководство для вра-

чей.- Санкт Петербург: Наука и жизнь.- 2000.- С. 288.

74. Рукавишникова В.М. Современные особенности клиники и лечения

микроспории //Лечащий врач.- 2001.- № 4.- С. 12-13.

75. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению

новых фармакологических веществ /Под общей редакцией Хабриева Р.У.- 2-

изд., перераб. и доп.- М.: ОАО «Издательство «Медицина».- 2005.- 832 с.

76. Саркисов А.Х., Королева В.П., Квашнина Е.С. Диагностика грибных

болезней животных.- М.: Колос.- 1971.- 144 с.

77. Саркисов А.Х., Коромыслов Г.Ф., Овдиенко Н.П. Применение вакцин

против дерматомикозов животных // Ветеринария. - 1997. - № 6. – С. 13-15.

78. Саттон Д. Фотергилл А., Ринальди М. Определитель патогенных и

условно патогенных грибов. – М.: Мир.- 2001. – 486 с.

161

79. Соловьев Н.П. Применение и развитие новых подходов в профилак-

тике и вакцинотерапии дерматомикозов крупного рогатого скота и северных

оленей в Республике Саха // Ветеринарная патология.- 2003.-№ 1.- С.166-167.

80. Сосновский А.Т. Яговдик Н.З., Белугина И.Н. Дерматологический

справочник.- Минск: Высш. Школа.- 2001.- 734 с.

81. Спесивцева Н.А. Микозы и микотоксикозы животных.- М.:, Сельхоз-

гиз.- 1960.- 215 с.

82. Спесивцева Н.А. Микозы и микотоксикозы: 2-е изд., испр. и доп.-М.:

Колос.- 1964.- 519 с.

83. Старченков С.В. Болезни собак и кошек: Учебное пособие.- СПб.:

Издательство «Лань».- 2001.- 560 с.

84. Степанова Ж.В., Гребенюк В.Н., Воробьева И.А. Диагностические

ошибки при зооантропонозной трихофитии // Вестник дерматологии и вене-

рологии. - 2001. - № 6.- С. 36-38.

85. Тремасов М.Я. Дерматомикозы (дерматофитозы) // БИО: Журнал для

специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств.- 2003.- № 9.-С.

19-21.

86.Тропин В.В. Опыт применения препаратов Траумель и Энгистол при

терапии трихофитии и микроспории у кошек // Ветеринарная патология.-

2003.- № 4 (8).- С. 71-73.

87. Тугунова Т.Б. Клинико-эпизоотологические и этиологические осо-

бенности проявления дерматофитозов собак и кошек в условиях крупного

города, совершенствование схем лечения кошек при микроспории / Автореф.

дис. – канд. вет. наук. – Новосибирск, 2004.-22 с.

88. Тугунова Т.Б. Применение наружных противогрибковых препаратов

при микроспории кошек /Актуальные проблемы биологии и ветеринарной

медицины мелких домашних животных: Матер. междун. науч.-практ. конф.:

Сб. науч. тр. – Троицк: УГАВМ.- 2005.- С. 198-201.

162

89. Урбан В.П., Сафин М.А., Сидорчук А.А. Практикум по эпизоотоло-

гии и инфекционным болезням с ветеринарной санитарией.- М.: Колосс.-

2002. - 216 с.

90. Устинцева Ю.Ю. Дерматомикозы мелких животных в Якутии / Акту-

альные вопросы ветеринарной медицины: Материалы Сибирского Междуна-

родного Ветеринарного конгресса. – Новосибирск: НГАУ.- 2005.- С. 60-61.

91. Фахретдинова Х.С., Медведева Е.А., Бурханова Н.Р. Динамика дер-

матомикозов в республике Башкортостан в 1938-2003 гг. //Проблемы меди-

цинской микологии.- 2004.- Т. 6.- № 2.- С. 124-125.

92. Фирсова Г.Д., Дерезина Т.Н., Меняйлова С.В. Некоторые вопросы

эпизоотологии антропозоонозных инфекций кошек / IX Международный

конгресс по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних живот-

ных.- М.: Ассоциация практикующих ветеринарных врачей.- 2001.- С. 166-

167.

93. Ханис А.Ю. Микроспория собак и кошек: Дис. канд. вет. наук.- М.,

1991, 164 с.

94. Ханис, А.Ю. Метод определения вирулентности дерматофитов // Ве-

теринария.- 2003.- № 8.- С. 20–22.

95. Харченко С.Н., Литвин В.П., Тарабара И.М. Справочник по микозам

и микотоксикозам сельскохозяйственных животных.- Киев: Урожай.- 1982.-

168 с.

96. Хохряков М.К. Вредные и полезные грибы.- Л.: Колос.- 1969.- 110 с.

97. Цыганко А.В. Микроспория кошек и собак // Ветеринарная клиника. -

2003. - № 1(08). – С. 21-25.

98. Черкай З.Н. Эффективность лекарственных форм анандина при мико-

зах собак // Ветеринария.- 2006.- № 12.- С. 50–52.

99. Шагаев Д.В., Посашкова Е.С. Болезни кожи у собак // Ветеринария. –

2003. – № 4. – С. 51–52.

163

100. Юинг Г. Инструментальные методы химического анализа: Пер. с

англ.- М.: Мир.- 1989.- 128 с.

101. Юсупова Л.М., Гарипов Т.В., Ишкаева Д.Р. Ветфуроксан – новое

средство для лечения саркоптоидозов и дерматомикозов животных // Ветери-

нарный врач. – 2002. - № 2.- С. 77-79.

102. Abu-Samra M. T., Imbabi S. E., El Sheikh Mangoub – Brit. veter. J.,

2005, 132, 6, 627-631.

103.Atlas of clinical fungi, 2nd edtion. G.S. de Hoog, J. Guarro, J. Gene, M.J.

Figueras. Universitet Rovire i Virgili, Reus. Spain, 2000.

104.Coleman C. H. – Vet. Rec., 2004, 81, 11, 251-254.

105.Colombo S., Comegliani L. Efficacy of itraconazole as a combined con-

tinuous-pulse therapy in feline dermatophytosis: preliminary results in ninecases//

Vet. Dermatol.- 2001,- Dec.l2(6).-P.347-50.

106.Edgar G. E., Keast J. C. – Austr. vet. J., 2004, 16, 120-122.

107.Enshin A.V., Avdienco A.N. Comparative methos of treatment derma-

tomycosis of dogs. // Military veterinary institute Pokrov, Russia, 2003, p. 335-

338.

108.Fox M. W. – Vet. Rec., 2003, 73, 914.

109.Green H. F. – Vet. Rec., 2005, 72, 48, 1098.

110.Gupta A.K., Adam P., Dlova N. et al. Therapeutic options for the treat-

ment of tinea capitis caused by Trichophyton species: griseofulvin versus the new

oral antifungal agents, terbinafine, itraconasole and fluconazole. Pediatr. Dermatol.

2001 Sep.-Oct.; 18(5): 433-438.

111.Hornby H. E. – Vet. J., 2002, 76, 210-226.

112.Jubb K. V. F., Kennedy P. C. - Pathology of domestic animals, end, dit.

by Acad. Press, New York, 2003, 697 p.

113.Jubb K., Kennedy P., Palmer N. Pathology of Domestic Animals. San-

Diego, California, Academic Press, 1993.

164

114.Kammerlocher A. A., Mammo A. E. – Vet. Med. small Anim. Clin.,

2004, 60, 1, 65-68.

115.Kane G. J., Dowing W., Wilson A. J. – Vet. Rec., 2005, 67, 779.

116.Kelley D. C., Huston K., Imes G. D., Weide K. D. – Vet. Med. small

Anim. Clin., 2005, 59, 2, 175-178.

117.King N. W., Frasier C. E. O., Garsia F. C., Wolf L. A., Williamson M. E.

– Lab. Anim. Sci., 2006 21, 76-74.

118.Kozuh Erzen N, Kuzner J, Drobnic-Kossorok M.The development of the

method for the determination of terbinafine in cat's plasma and hair// Pflu-gers

Arch.- 2000.- 440.-P.168-170.

119.Le Riche P. D. – Austr. vet. J., 2006, 44, 2, 64-67.

120.Lloyd D. H. – Brit. vet. J., 2000, 131, 1, 115-119.

121.Lloyd D. H., Ojo M. O. – Brit. vet. J., 2001, 120, 1, 108-114.

122.Lyman С. A., Walsh Т. S.//Systemically administered antifungal agents.

A review of their clinical pharmacology and therapeutic applications.-Drugs 44.-

1992.- 9-35.

123.Maraki S, Tselentis Y. Survey on the epidemiology of Microsporum ca-

nis infections in Crete, Greece over a 5-year period// Int J Dermatol.- 2000.-39(l).-

P.21-22.

124.Meunier F. Zukumftpersrectiven der antimykotischen. // Therapie My-

coses, 1994, v. 37, Supp l.2, s. 77-82.

125.Migaki G., Seibold H. R. – Amer. J. vet. Res., 1999, 37, 10, 1225-1227.

126.Moule G. R., Southerland A. K. – Austr. vet. J., 2001, 23, 3, 95.

127.Myging N. Ringworm in dogs and cats. Copenhagen, Denmark, 1979.

128.Nakamura Y. Dermatomycosis in human and animals// S.Watanabe,

A.Hasegawa/Nippon Ishinkin Gakkai Zasshi.- 1999.- P.40-43.

129.Nisbet D. I., Bannatyne C. C. – Vet. Rec., 2005, 67, 713-715.

130.Oduye O. O. – World. anim. Rev., 1998, 16, 13-17.

165

131.Paterson S. Miconazole/chlorhexidine shampoo in controlling dermato-

phytosis in cats// J Small Anim Pract.- 2000.- 41(4).-P.160-163.

132.Pier A.C., Moriello K.A. Parasitic relationship between Microsporum ca-

nis and the cat// Med Mycol.- 1998.-№ 36.- P.271-275.

133.Pier A.C. Dermatophytoses due to domestic animals// Rev Med Brux,-

2000.-№21 (4).-P.34-37.

134.Raabe P., Mayser P. Demonstration of Malassezia furfur and M. sympo-

dialis together with M. pachydermatis in veterinary specimens// Mycoses.-1998.-

41(11-12).-P. 493-500.

135.Soltys M. A. – In «Bacteria and fungi pathogenic to man and animals»,

edit. by Battlere, Tindall and Cox, 2003, 469-472.

136.Taylor W. W. Jr., Ohman J. L. Jr., Lowell F. C. Zoophilic dermatophytes.

BBC Books, London, 1992.

137.Toman M., Svoboda M. Secondary immunodeficiency in dogs with enter-

ic, dermatologic, infectious or parasitic diseases// Zentralb 1 Veterinarmed.-1998.-

45 (6).-P. 321-334.

138.Tucker W. E. - Pract. Vet., 2006, 38, 143-145.

139.Warin R. P., Champion R. H. Dermatomycoses, London, Saunders, 1974.

140.Watson D. R., Walton A. M. – Vet. Med. small Anim. Clin., 2003, 68, 8,

844-846.

141.Weber A., Schliesser T. – Vet. med., 2001, B. 18, 1, 17, 546-556.

142.White S. Equine bacterial and fungal skin diseases / S. White // Clinical

programme proceedings of Fifth world congress of veterinary dermatology. – Vi-

enna, Austria.-2004.-P.290-295.

143.Wilson T. M., Dykes R. W., Tsai K. S. – J. Amer. vet. Med. Assoc., 2005,

161, 6, 611-617.

166

ПРИЛОЖЕНИЯ