- 1 -

특 허 심 판 원특 허 심 판 원특 허 심 판 원특 허 심 판 원

제 부제 부제 부제 부7777

심 결심 결심 결심 결

심 판 번 호심 판 번 호심 판 번 호심 판 번 호 당2008 3671

사 건 의 표 시사 건 의 표 시사 건 의 표 시사 건 의 표 시 특허등록 제 호 발명 복제된 개과 동물 및 이의 생산733012 『

방법 의 권리범위확인 소극적( )』

청 구 인청 구 인청 구 인청 구 인 재단법인 수암생명공학연구원

경기 용인시 처인구 원삼면 사암리 1024-39

대리인 변리사 박진철

서울 강남구 역삼 동 풍림빌딩 호 법무법인 한별1 823-1 703 ( )

피 청 구 인피 청 구 인피 청 구 인피 청 구 인 재단법인서울대학교산학협력재단

서울 관악구 봉천 동 산 의 번지7 4 2

대리인 변리사 권영모 박금낭,

서울 중구 남대문로 가 한진빌딩 본관 층2 118 18 C.P.O.BOX

법무법인광장8735( )

대리인 변리사 유민오

서울 서초구 양재동 트러스트타워 층 제일광장특275-7 19 (

허법률사무소)

(P)122.100-Y(C12N 5/16)(P)122.100-Y(C12N 5/16)(P)122.100-Y(C12N 5/16)(P)122.100-Y(C12N 5/16)

- 2 -

주 문주 문주 문주 문

확인대상발명의 설명서 및 도면에 기재된 개과 동물의 복제 생산방법은 특허 제1. ' '

호 발명의 권리범위에 속하지 아니한다733012 .

심판비용은 피청구인의 부담으로 한다2. .

청구의 취지청구의 취지청구의 취지청구의 취지

주문과 같다.

이 유이 유이 유이 유

기초사실기초사실기초사실기초사실1.1.1.1.

가 이 건 특허발명의 등록경위 및 특허청구범위가 이 건 특허발명의 등록경위 및 특허청구범위가 이 건 특허발명의 등록경위 및 특허청구범위가 이 건 특허발명의 등록경위 및 특허청구범위....

특허등록 제 호 발명 이하 이 건 특허발명 이라 한다 은 출원되733012 ( ‘ ’ ) 2005. 7. 26.

어 등록된 것으로 심판이 청구된 특허청구범위는 아래와 같다2007. 6. 21. .

청구항 개과 동물의 성숙난자로부터 핵을 제거하는 단계 개과 동물의1. (a) ; (b)『

조직으로부터 체세포를 분리하여 공여 핵 세포를 제조하는 단계 상기 단계의; (c) (a)

탈핵 난자에 단계의 공여 핵 세포를 미세주입하고 전압이 인 조건으(b) 3.0 3.5kv/cm∼

로 전기 융합시키는 단계 및 상기 단계에서 융합된 난자를 활성화시키는 단계; (d) (c)

를 포함하는 개과 동물의 핵 이식란 제조방법 이하 이 건 제 항 발명이라 하고 나머( ‘ 1 ’ ,

지 항도 같은 방식으로 부른다).

청구항 제 항에 있어서 상기 단계의 개과동물의 성숙난자는 생체 내로부터 회2. 1 , (a)

수된 것을 특징으로 하는 개과 동물의 핵 이식란 제조방법.

- 3 -

청구항 제 항에 있어서 상기 생체 내로부터 회수는 개과 동물의 배란일로부터3. 2 , 48

시간에 수행하는 것임을 특징으로 하는 개과 동물의 핵 이식란 제조방법72 .∼

청구항 제 항에 있어서 상기 단계에서 상기 체세포는 개과 동물의 난구세포4. 1 , (b) ,

상피세포 섬유아세포 신경세포 각질세포 조혈세포 멜라닌 세포 연골세포 적혈구, , , , , , , ,

마크로파지 단구세포 근육세포 림프구 림프구 배아 줄기세포 배아 생식세포, , , B , T , , ,

태아세포 태좌세포 및 배아세포로 이루어진 그룹 중에서 선택된 어느 하나인 것을 특,

징으로 하는 개과 동물의 핵 이식란 제조방법.

청구항 제 항에 있어서 상기 단계에서 체세포는 섬유아세포 또는 난구세포인5. 1 , (b)

것을 특징으로 하는 개과 동물의 핵 이식란 제조방법.

청구항 제 항에 있어서 상기 단계에서 전기융합은 직류 전압6. 1 , (c) 3.0 3.5kV/cm∼

조건으로 동안 회 수행하는 것을 특징으로 하는 개과 동물의 핵 이식란10~30 1~3㎲

제조방법.

청구항 제 항에 있어서 상기 단계에서 활성화시키는 단계는 칼슘 이오노포어7. 1 , (d)

및 를 융합된 난자에 동시에 처리하거나 단계적으로 처DMAP(6-dimethylaminopurine)

리하는 것을 특징으로 개과 동물의 핵 이식란 제조방법.

청구항 제 항에 있어서 상기 칼슘 이오노포어 을 에서 분8. 7 , 5 10 M 37~39 3 5∼ μ ℃ ∼

동안 처리한 다음 을 에서DMAP(6-dimethylaminopurine) 1.5mM~2.5mM 37 39 4∼ ℃

시간 동안 처리하는 것을 특징으로 하는 개과 동물의 핵 이식란 제조방법5 .∼

청구항 제 항에 있어서 상기 개과 동물이 개 늑대 여우 재칼 코요테 승냥이9. 1 , , , , , ,

및 너구리로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 개과 동물의 핵 이

식란 제조방법.

청구항 제 항에 있어서 상기 개과 동물이 개 늑대 및 여우로 이루어진 그룹 중10. 1 , ,

- 4 -

에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 개과 동물의 핵 이식란 제조방법.

청구항 제 항 내지 제 항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 핵 이식란11. 1 10 .

청구항 제 항에 있어서 기탁번호 인 핵 이식란12. 11 , KCTC 10831BP .

청구항 제 항 또는 제 항의 핵 이식란을 대리모의 난관에 이식하여 산자를 출13. 11 12

생하는 단계를 포함하는 복제된 개과 동물의 생산 방법.

청구항 제 항에 있어서 상기 개과 동물이 개 늑대 여우 재칼 코요테 승냥14. 13 , , , , , ,

이 및 너구리로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 복제된 개과 동

물의 생산 방법.

청구항 제 항에 있어서 상기 개과 동물이 개 늑대 및 여우로 이루어진 그룹15. 13 , ,

중에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 복제된 개과 동물의 생산 방법.』

나 확인대상발명의 요지나 확인대상발명의 요지나 확인대상발명의 요지나 확인대상발명의 요지....

청구인은 심판청구시 제출한 확인대상발명의 설명서 및 도면을 자로 보2009. 4. 6.

정하였다 상기 보정된 확인대상발명은 개과 동물의 복제 생산방법에 관한 것으로 별지.

에 기재된 바와 같다1 .

이해관계이해관계이해관계이해관계2.2.2.2.

이 건 심판의 청구인은 피청구인의 전용실시권자인 건외 주식회사 알앤엘바이오로‘ ’

부터 특허침해금지청구 등에 관한 소송 서울중앙지방법원 사건번호 가합 호( : 2008 84750 )

을 받은 사실이 있음을 갑 제 호증 소장 사본 으로부터 확인할 수 있으므로 이 건 심4 ( ) ,

판청구는 이해관계인에 의한 적법한 청구로 인정된다.

당사자의 주장당사자의 주장당사자의 주장당사자의 주장3.3.3.3.

- 5 -

가 청구인의 주장가 청구인의 주장가 청구인의 주장가 청구인의 주장....

확인대상발명은 이 건 특허발명과 비교하여 과제해결을 위한 기술적 구성을 전혀(1)

달리하는 발명이므로 확인대상발명은 이 건 특허발명의 권리범위에 속하지 아니한다, .

개의 핵 이식란 제조방법에서 핵 이식란의 융합율은 전압조건만이 유일한 변수가(2)

아니고 다양한 변수가 영향을 미치는 것이므로 이 건 특허발명과 전압조건만을 달리하

여 높은 융합율을 나타내는 것은 실시 불가능하다고 주장하는 것은 이치에 맞지 않다.

나 피청구인의 주장나 피청구인의 주장나 피청구인의 주장나 피청구인의 주장....

확인대상발명의 전압조건으로는 청구인이 주장하는 바와 같은 높은 융합효율을(1)

달성할 수 없으므로 확인대상발명은 구성 및 효과가 서로 모순된 것이어서 실시 불가,

능한 발명이다.

확인대상발명의 전압조건은 이 건 제 항 발명의 전압조건의 권리범위에 포함되(2) 1

는 것이므로 확인대상발명은 이 건 특허발명의 권리범위에 속한다.

판단판단판단판단4.4.4.4.

가 보정된 확인대상발명의 적법 여부가 보정된 확인대상발명의 적법 여부가 보정된 확인대상발명의 적법 여부가 보정된 확인대상발명의 적법 여부....

자로 보정된 확인대상발명은 청구인이 심판청구시 제출한 확인대상발명2009. 4. 6.

의 설명서 및 도면에 기재된 내용이 논문 형식으로 되어 있어 이를 이 건 특허발명과

대비하기 쉽도록 명확하게 한 것에 불과하여 그 요지가 변경된 것이 아니므로 적법한

보정이라 하겠다.

따라서 이하에서는 자 보정된 확인대상발명을 대상으로 판단한다, 2009. 4. 6. .

나 확인대상발명이 실시불가능한지 여부나 확인대상발명이 실시불가능한지 여부나 확인대상발명이 실시불가능한지 여부나 확인대상발명이 실시불가능한지 여부....

판단기준(1)

- 6 -

확인대상발명이 심판청구인의 심판 청구 당시 제조판매해 온 물품이 아니라 하더라

도 심판청구인으로서는 장래 실시하고자 하는 확인대상발명이 이 사건 특허발명의 권

리범위에 속하는지 여부의 확인심판을 청구할 이익이 있는바 대법원 선( 2000. 4. 11.

고 후 판결 등 참조 확인대상발명의 실시가 불가능하거나 전혀 실시할 가능성97 3241 ),

이 없지 않는 이상 원고는 이해관계인으로서 장래 실시하고자 하는 확인대상발명이 이

사건 특허발명의 권리범위에 속하는지 여부의 소극적 권리범위확인심판을 청구할 이익

이 있다 특허법원 선고 허 판결 참조( 2008. 10. 23. 2008 1548 ).

위와 같은 법리에 따르면 소극적 권리범위확인심판에서는 심판청구인이 실시하고 있,

거나 장래 실시할 예정인 발명도 확인대상발명이 될 수 있고 확인대상발명이 실시가,

불가능하다는 등의 특단의 사정이 없는 한 심판대상은 심판청구인이 특정한 확인대상,

발명이므로 아래에서는 이 건 심판의 확인대상발명이 실시가 불가능한 지에 관하여 살,

핀다.

판단(2)

확인대상발명의 의 전압조건에서 핵 이식란의 세포 융합을 수행하여1.75 kV/cm

및 의 융합율을 달성하였다 갑 제 호증의 표 참조77.4%, 80.4%, 79.2% 80.9% ( 3 1, 3 )

라고 그 효과를 주장하고 있는 것에 대하여 피청구인은 이 건 특허발명의 명세서 갑, (

제 호증 표 의 기재에서는 의 전압조건에서 핵 이식란의 융합2 ) [ 7] 1.75 ~ 1.9 kV/cm

율은 였고 을 제 호증의 실험성적증명서에는 에서 동안33.3% , 6 1.75 kV/cm 15 usec 2

회 파장을 주어 융합한 결과 의 융합률을 달성된 정도에 불과하여 확인대상발37.9% ,

명에 의한 이러한 융합율은 의 전압조건에서는 결코 달성할 수 없는 것이1.75 kV/cm

므로 확인대상발명은 구성 및 효과가 서로 모순된 것이어서 실시 불가능한 것이라고

주장한다.

- 7 -

이러한 주장에 대하여 살피면 확인대상발명이 논문, (2008, Mol. Reprod. Dev.,

갑 제 호증 참조 으로 받아들여져 발행된 점 청구인은 이 건 제 항Wiley-liss, inc; 3 ) , 1

발명의 개과 동물의 핵 이식란의 제조방법은 전기융합단계에서의 전압조건만을 한정하

고 있으나 개의 핵 이식란을 제조하는 일련의 과정에서 전압조건만이 융합율을 좌우하,

는 유일한 조건이라 할 수 없는 점 확인대상발명에서는 전압조건에 아울러 후활성화,

단계의 조건을 더 추가하고 있으나 을 제 호증의 실험증명서에서 에서, 6 1.75 kV/cm 15

동안 회 파장을 주어 융합하여 전압조건에만 맞추어 실험한 점 등을 고려하면usec 2 ,

확인대상발명이 실시 불가능한 것이라는 피청구인의 주장을 뒷받침할 수 있는 증거가

불충분하여 확인대상발명이 실시 불가능하다고 단정할 수 없다.

가사 피청구인의 주장처럼 확인대상발명이 또는 의 융합율 정도만 나, 33.3% 37.9%

타낸다 하더라도 그 효과가 열악한 것에 불과할 뿐 확인대상발명이 실시 불가능한 발

명이라고는 할 수 없다.

따라서 확인대상발명이 실시 불가능한 발명이라고 하는 피청구인의 주장은 이유없,

다.

나아가 피청구인은 확인대상발명의 전압조건에서는 핵 이식란의 융합효율이 열악하,

므로 실제로는 이 건 특허발명의 전압범위에서 실시할 것이라고 주장하나 청구인이 심,

판청구서 자 기술설명회 등에서 지속적으로 확인대상발명을 실시하고 있, 2009. 4. 17.

다고 주장하고 있고 확인대상발명에 대하여 심결이 확정된다고 하더라도 그 기판력은,

확인대상발명에만 미치는 것이지 확인대상발명의 전압범위가 달라지는 경우에까지 그

기판력이 미치지는 않으므로 이에 대한 피청구인의 주장은 이유없다.

다 확인대상발명이 이 건 특허발명의 권리범위에 속하는지 여부다 확인대상발명이 이 건 특허발명의 권리범위에 속하는지 여부다 확인대상발명이 이 건 특허발명의 권리범위에 속하는지 여부다 확인대상발명이 이 건 특허발명의 권리범위에 속하는지 여부....

판단기준(1)

- 8 -

특허발명의 특허청구범위의 청구항이 복수의 구성요소로 되어 있는 경우에는 그

각 구성요소가 유기적으로 결합된 전체로서의 기술사상이 보호되는 것이지 각 구성요

소가 독립하여 보호되는 것이 아니므로 특허발명과 대비되는 확인대상발명이 특허발명,

의 청구항에 기재된 필수적 구성요소들 중의 일부만을 갖추고 있고 나머지 구성요소가

결여된 경우에는 원칙적으로 그 확인대상발명은 특허발명의 권리범위에 속하지 아니한

다 할 것이고 대법원 선고 후 판결 선고 후( 2001. 6. 15. 2000 617 , 2000. 11. 14. 98

판결 참조 특허발명의 청구항이 일정한 범위의 수치로 한정한 것을 구성요소의2351 ),

하나로 하고 있는 경우에는 그 범위 밖의 수치가 균등한 구성요소에 해당한다는 등의

특별한 사정이 없는 한 특허발명의 청구항에서 한정한 범위 밖의 수치를 구성요소로

하는 확인대상발명은 원칙적으로 특허발명의 권리범위에 속하지 아니한다 할 것이다 대(

법원 선고 후 판결 참조2001. 8. 21. 88 2372, 2389 ).

이 건 제 항 발명과 확인대상발명의 대비(2) 1

가 목적대비( )

이 건 제 항 발명은 체세포 핵이식 기술을 이용한 개과 동물의 핵 이식란 생산1

방법을 제공하는 데 그 목적이 있고 확인대상발명도 체세포 핵이식 기술을 이용하여,

개의 핵 이식란을 제조하는 방법에 관한 것이므로 양 발명은 그 목적에 차이가 없음을,

알 수 있다.

나 구성 및 효과 대비( )

이 건 제 항 발명의 기술구성을 확인대상발명과 대비하기 위하여 구성요소별로1

나누어 보면 개과 동물의 성숙난자로부터 핵을 제거하는 단계 개과 동물, (a) ; (b)①

의 조직으로부터 체세포를 분리하여 공여 핵 세포를 제조하는 단계 이하 구성요소( ‘ ’①

이라 한다 상기 단계의 탈핵 난자에 단계의 공여 핵 세포를 미세주입); (c) (a) (b)②

- 9 -

하고 전압이 인 조건으로 전기 융합시키는 단계 및 상기 단계3.0 3.5kv/cm ; (d) (c)∼

에서 융합된 난자를 활성화시키는 단계를 포함하는 이하 구성요소 이라 한다 개과( ‘ ’ )②

동물의 핵 이식란 제조방법으로 구분할 수 있다.

구성요소 은 확인대상발명의 난자공여견으로부터 난자를 회수하여 탈핵난자의 제‘①

조 및 공여핵세포의 제조단계에 대응되며 대응되는 양 구성은 모두 개과 동물의 성숙’ ,

난자로부터 핵을 제거하여 탈핵난자를 제조하는 한편 별도로 공여핵세포를 제조하는,

단계를 포함하고 있는 점에서 차이가 없다.

구성요소 는 확인대상발명의 상기 탈핵난자에 상기 공여핵세포를 주입하고‘ , 1.75②

에서 동안 번의 파장을 주어 융합하고 활성화하는 단계 및 상기kV/cm 15 usec 2 DC , ;

융합 후 시간 후에 융합된 난자를 후활성화시키는 단계라는 구성에 대응되며 대응되2 ’ ,

는 양 구성은 모두 탈핵난자에 공여핵세포를 주입하고 전기적 자극을 주어 융합시키는

전기융합단계와 융합된 난자를 활성화시키는 단계를 포함하고 있는 점에서는 차이가

없고 다만 전기융합단계의 전압이 구성요소 는 이고 확인대상발, , 3.0 ~ 3.5 kV/cm②

명은 이므로 구성요소 의 전압조건이 확인대상발명의 전압조건보다1.75 kV/cm 1. 7②

내지 배 정도 높은 점에서 차이가 있다2 .

한편 이 건 특허발명의 명세서 이하 명세서라 한다 의 종래기술란에 체세포 핵 이, ( ‘ ’ ) “

식 기술은 생식과정에서 일반적으로 이루어지는 감수분열 및 반수 염색체 보유 생식세

포를 경유하지 않고도 자손을 탄생시킬 수 있는 기술로서 성체가 가진 배수체 보유 체

세포를 핵이 제거된 난자에 이식하여 수정란을 생산하고 상기 수정란을 생체 내로 이

식하여 새로운 개체를 발생시키는 방법이다 일반적으로 체세포 핵이식 기술에서 체세.

포 공여 핵을 이식할 수핵 난자 는 인위적으로 시험관 내(recipient oocyte) (in vitro 에서)

배양하여 차 감수분열 중기까지 도달하도록 성숙시켜 사용한다 그 다음 체세포 핵이2 .

- 10 -

식에 따른 염색체 이상 발생을 방지하기 위하여 체세포를 이식하기 전에 상기 성숙 난

자의 핵을 제거하고 상기 탈핵 난자의 주란강 또는 세포질 내에 체세포를 주입한다 그.

후 상기 탈핵 난자와 주란강 또는 세포질에 주입된 체세포를 전기적 자극을 통하여 물

리적으로 융합시키고 전기자극 또는 화학물질에 의하여 활성화시킨 후 대리모에 이식

하여 산자를 탄생시킨다 명세서 제 면 라는 기재와 체세포 핵이식을 통한 동물복제.”( , 2 ) , “

기술은 영국 로슬린 연구소의 윌멋 박사에 의해 세 된 암컷 양에서 채취한(Wilmut) 6

유선세포를 핵이 제거된 난자에 이식하여 핵 이식란을 생산한 후 생체 내 이식을 통하

여 체세포 복제동물인 돌리를 탄생시킴으로써 최초로 성공하였다 이후 소 마우스 염. , ,

소 돼지 및 토끼 등에서 체세포 핵이식 방법에 의한 복제된 산자 생산이 보고 되었다,

및(WO9937143A2, EP930009A1, WO9934669A1, WO9901164A1 US5,945,577).”

명세서 제 면 라는 기재 및 이에 본 발명자들은 체세포 핵이식 방법에 의한 복제된( , 2 ) “

개과 동물의 생산방법을 연구하던 중 전기융합 조건, 핵 이식란 활성화 조건 및 대리모

이식 조건을 최적화하여 최초로 체세포 핵이식 방법에 의해 복제된 개과 동물을 생산

함으로써 본 발명을 완성하였다 명세서 제 면 라는 기재에서 볼 수 있듯이 탈핵난.”( , 3 ) ,

자 및 공여핵세포의 제조 단계 상기 공여핵세포을 탈핵난자에 미세주입하는 단계 및,

융합 단계 융합된 난자의 활성화 단계를 포함하는 핵이식란 제조방법에서 탈핵난자와,

공여핵세포의 융합에 전기적 자극을 사용하는 것을 종래기술란에 기재하면서 이러한

체세포 핵이식 기술을 사용한 선행 예들을 제시하고 이러한 사항은 을 제 호증{ 5 (1997.

국제공개되고 국내에서 자로 등록된 등록특허공보 제 호 에서3. 6. 2008. 1. 3. 793220 )

도 확인된다}, 이 건 특허발명은 그러한 체세포 핵이식 기술에서 전기융합 조건을 최적

화하는 것이 이 건 특허발명의 하나의 과제임을 밝히고 있다.

그리고 이 건 제 항 발명에서 전기융합단계의 조건을 일정한 전압범위로 한정하고1

- 11 -

있고 명세서에서 그러한 전압범위에 대하여 상기에서 공여 핵 세포의 미세주입이 완, “

료된 탈핵 난자는 세포 조작기를 이용하여 전기적으로 공여 핵 세포와 융합시킨다 전.

기적 융합에서 전류는 교류 또는 직류일 수 있으며 바람직하게는 전압, 3.0∼

조건으로 수행할 수 있으며 보다 바람직하게는 직류 전압3.5kV/cm 3.0 3.5kV/cm∼

조건으로 동안 회 수행할 수 있다 가장 바람직하게는 직류 전압10 30 1 3 . , 3.0∼ ㎲ ∼ ∼

조건으로 동안 회 수행할 수 있다 명세서 제 면 라고 기재하고 있3.5kV/cm 20 2 .”( , 5 )㎲

음을 볼 때 이 건 제 항 발명은 전기융합단계의 전압의 범위를 으로, 1 3.0 ~ 3.5 kV/cm

한정한 것에 그 기술적 의의가 있다고 볼 수 있다.

또한 이 건 제 항 발명의 전압조건에 대하여 이 건 특허발명의 명세서에서 상기에, 1 , “

서 전압이 미만이거나 또는 을 초과하는 경우에는 매우 낮은 융합3.0kV/cm 3.5kV/cm

율을 보인다. 상기 전기적 융합시의 전압 범위는 지금까지 알려진 일반적인 전기적 융

합시의 전압 범위 보다 높은 특징이 있다(1.7 2.0kV/cm) .∼ 명세서 제 면 라고 기재되”( , 5 )

어 있듯이 피청구인 스스로 확인대상발명의 전기융합단계의 전압 를 포함, 1.75 kv/cm

하고 있는 전압 는 지금까지 알려진 일반적인 전기융합시의 전압범1.7 2.0 kV/cm∼

위이고 이 건 특허발명은 그 전압범위가 이보다 높은 것에 특징이 있다고 밝히면서 일

반적인 전압범위를 제외하고 그 보다 전압범위가 높은 전압 를 이 건3.0 3.5 kV/cm∼

제 항 발명에서 한정하여 권리화하고 있음을 볼 수 있다1 .

따라서 위 항의 판단기준에 비추어 종합하여 살피면 구성요소 의 전압범위와, (1) , ②

확인대상발명의 전압에 차이가 있고 이 건 제 항 발명은 그 전압범위를 한정한 것에, 1

기술적 의의가 있는 점 이 건 특허발명의 명세서에서 확인대상발명의 전압을 포함하고,

있는 일정한 전압범위를 지금까지 알려진 일반적인 전기융합시의 전압범위라고 밝히면

서 이 건 제 항 발명에서는 그러한 일정한 전압범위를 제외하고 그 보다 높은 전압범1

- 12 -

위를 기재하여 권리화하고 있은 점 등에 비추어 볼 때 확인대상발명의 전압조건과 구,

성요소 의 전압조건이 균등관계에 있다고도 할 수 없다.②

다 정리( )

그렇다면 확인대상발명은 이 건 제 항 발명과 대비하여 전기융합단계의 전압, 1

조건이 상이하고 그러한 전압조건이 균등관계에 있다고도 할 수 없으므로 이 건 제 항1

발명의 권리범위에 속하지 아니한다.

이 건 제 항 내지 제 항 발명과 확인대상발명의 대비(3) 2 15

확인대상발명이 독립항인 이 건 제 항 발명에 속하지 아니하는 이상 그 종속항1 ,

발명인 이 건 제 항 내지 제 항 발명과 이 건 제 항 발명의 구성요소를 그대로 포함2 10 , 1

하고 있는 이 건 제 항 내지 제 항 발명은 구체적으로 대비할 필요도 없이 그 권리11 15

범위에 속하지 아니하는 것이다.

소결(4)

따라서 확인대상발명은 이 건 특허발명의 권리범위에 속하지 아니한다, .

결론결론결론결론5.5.5.5.

이상 살핀 바와 같이 확인대상발명은 이 건 특허발명의 권리범위에 속하지 아니하고,

심판비용은 피청구인의 부담으로 하기로 하여 주문과 같이 심결한다.

2009. 5. 29.

- 13 -

19983330199833301998333019983330 심판장심판장심판장심판장 심판관심판관심판관심판관 신진균신진균신진균신진균

19985703199857031998570319985703 주 심주 심주 심주 심 심판관심판관심판관심판관 이호조이호조이호조이호조

19985092199850921998509219985092 심판관심판관심판관심판관 이유형이유형이유형이유형

- 14 -

별지 확인대상발명의 설명서 및 도면별지 확인대상발명의 설명서 및 도면별지 확인대상발명의 설명서 및 도면별지 확인대상발명의 설명서 및 도면1.1.1.1.

특허발명과 대비될 수 있는 설명서 및 필요한 도면특허발명과 대비될 수 있는 설명서 및 필요한 도면특허발명과 대비될 수 있는 설명서 및 필요한 도면특허발명과 대비될 수 있는 설명서 및 필요한 도면【 】【 】【 】【 】

확인대상발명의 명칭확인대상발명의 명칭확인대상발명의 명칭확인대상발명의 명칭1.1.1.1.

융합과 활성화 처리 간격 축소에 의한 복제 개 생산방법

확인대상발명의 상세한 설명확인대상발명의 상세한 설명확인대상발명의 상세한 설명확인대상발명의 상세한 설명2.2.2.2.

확인대상발명의 과제 해결 수단확인대상발명의 과제 해결 수단확인대상발명의 과제 해결 수단확인대상발명의 과제 해결 수단(1)(1)(1)(1)

확인대상발명은 체세포핵이식 시 융합과 활성화 처리 간격 축소에 의한 복제 개 생

산방법에 관한 것이다.

보다 구체적으로 확인대상발명은 난자공여견으로부터 난자를 회수하여 탈핵난자의,

제조 및 공여핵세포의 제조단계 상기 탈핵난자에 상기 공여핵세포를 주입하고: , 1.75

에서 동안 번의 파장을 주어 융합하고 활성화하는 단계 및 상기kV/cm 15 usec 2 DC , ;

융합 후 시간 후에 융합된 난자를 후활성화시키는 단계 로 이루어지는 개의 핵 이식2 ;

란 제조방법 및 이에 의해 제조된 개의 핵이식란에 관한 것이다.

또한 확인대상발명은 상기 핵이식란을 대리모의 난관에 이식하여 산자를 출생하는 단,

계를 포함하는 복제 개의 생산방법에 관한 것이다.

이에 확인대상발명에서는 후술하는 실시예를 참고하면 다음과 같은 방법으로 융합과

활성화 사이 간격이 복제효율에 미치는 영향을 실험을 통하여 입증하였다.

먼저 잡종견의 난자를 회수하고 수컷 혹은 암컷 성견 골든리트리버의 공여핵세포, ,

를 준비한 뒤 체세포핵이식기술을 이용하여 융합된 난자를 얻었다 상기 융합은 챔버, .

에서 의 전기적 자극을 동안 번 주어 융합하였고 화학적으로 활성1.5 kV/cm 15usec 2 ,

화시킨 후 다시 후활성화시키는 단계를 거쳐 복제 개의 핵이식란 복제 배아 을 얻었, ( )

다.

후활성화에 있어 시간 간격 처리군의 개 난자와 시간 간격 처리군의 개의 난2 12 4 14

자의 염색체상을 조사하였다 시간 처리군에 비하여 시간 처리군에서 응축된 중기상. 4 2

염색체상이 유의적으로 더 많이 관찰되었다 (P 0.05).＜

또한 수컷과 암컷의 공여핵 세포로 체세포 핵이식 기술에 의하여 제조한 각각, 151

개 개의 재구성된 난자를 마리와 마리의 동기화된 대리모에 이식하였다 시간, 225 9 14 . 2

그리고 시간 처리군 각각의 개와 개 재구성된 난자를 각각 마리와 마리의4 376 288 23 16

대리모에 이식하였다 수컷 마리의 대리모가 마리를 분만 그리고 암컷 마리의. (2 3 ) (1

대리모가 마리를 분만 의 공여세포 모두 건강한 강아지를 분만하였다 임1 ) (P 0.05).＞

신율과 건강한 산자생산율은 시간 처리군에 비하여 시간 처리군 각각 및4 2 ( 13.0％

에서 유의적으로 높게 관찰되었다 총 마리의 대리모가 분만 단계까1.1 ) (P 0.05). 3％ ＜

- 15 -

지 임신이 진행되었고 마리의 강아지가 태어났다, 4 .

따라서 확인대상발명은, ,

난자공여견으로부터 난자를 회수하여 탈핵난자의 제조 및 공여핵세포의 제조단계: 상

기 탈핵난자에 상기 공여핵세포를 주입하고, 에서 동안 번의1.75 kV/cm 15 usec 2 DC

파장을 주어 융합하고 활성화, 하는 단계 및 상기 융합 후; 시간 후에 융합된 난자를2

후활성화시키는 단계로 이루어지는 개의 핵 이식란 제조방법에 관한 것이다.

또한 확인대상발명은 상기 방법으로 제조된 개의 핵 이식란에 관한 것이다, .

또한 확인대상발명은 상기 핵이식란을 대리모의 난관에 이식하여 산자를 출생하는 단,

계를 포함하는 복제 개의 생산방법에 관한 것이다.

확인대상발명의 실시를 위한 구체적인 내용확인대상발명의 실시를 위한 구체적인 내용확인대상발명의 실시를 위한 구체적인 내용확인대상발명의 실시를 위한 구체적인 내용(2)(2)(2)(2)

이하 실시예를 통하여 확인대상발명을 보다 구체적으로 설명한다, .

가 실험방법가 실험방법가 실험방법가 실험방법....

실험 은 암컷과 수컷의 핵공여 섬유아세포가 체세포핵이식 후 임신율에 미치는 영1

향을 알아보았다 총 체세포핵이식 기술에 의하여 제조된 개와 개의 재구성된. , 151 255

난자를 각각 마리의 자연적 동기화된 대리모에 이식되었다9, 14 .

실험 는 융합과 활성화 사이의 간격이 체세포핵이식 후 난자에 미치는 영향에 대하여2

알아보았다 무작위로 선발된 재구성된 배아를 융합후 시간 시간째에 고정하였다. 2 4 .

의 에 염색체를 염색하고 과 로 된 용액을10 ug/ml bisbenzimide glycerol PBS (1:1)

이용하여 슬라이드 위에 올렸다 이 샘플들은 인버티드 현미경과 콘포칼 현미경.

을 이용하여 관찰하였다(Eclipse C1si: Nikon Corp) .

실험 은 체세포핵이식 후 이식한 배아에서 융합과 활성화 사이의 간격이 임신에 미치3

는 영향을 알아보았다 총 개와 개의 재조합된 난자가 각각 시간 시간째 활. 376 288 2 4

성화 되었고 융합 후 마리와 마리의 자연적 동기화된 대리모에 이식하였다23 16 .

나 실험과정나 실험과정나 실험과정나 실험과정....

동물의 준비동물의 준비동물의 준비동물의 준비(i)(i)(i)(i)

총 마리의 잡종 암견 세 몸무게 중 난자 공여공여견151 (1-7 : 20-25kg) (N=112)

및 대리모 가 사용되었다 모든 시설과 과정은 수암생명공학연구원의 실험동물(N=39) .

윤리위원회 기준을 의거하였다 모든 실험과 수술과정은 수암생명공학연구원에서 출간.

된 실험동물 관리 및 사용에 관한 지침에 따라서 수행되었다.

질도말 및 혈청 프로게스테론 농도질도말 및 혈청 프로게스테론 농도질도말 및 혈청 프로게스테론 농도질도말 및 혈청 프로게스테론 농도(ii)(ii)(ii)(ii)

매일 암견의 질 팽창과 분비물을 관찰하였다 질도말 샘플은 염색. Diff-Quik

후 현미경하에서 관찰되었으며(International Reagents Crop., Kobe, Japan) ,

방법에 의한 방법에 의해 분류되었다 혈액샘플Concannon and DiGregorio (1986) .

- 16 -

은 경정맥을 통해 매일 회수되었고 혈청은 에서 분 동안 원심분리하여(2ml) , 3000rpm 20

회수하였다 혈청 내 프로게스테론 농도는. DSL-3900 Active Progesterone Coated-Tube

에 의하Radioimmunoassy kit (Diagnostic System Laboratories, Inc., Webster, TX)

여 분석되었다 이 는 토끼 항 프로게스테론 면역글로블린을 항체로 가지고 있다. kit .

배란기 예측배란기 예측배란기 예측배란기 예측(iii)(iii)(iii)(iii)

배란시점은 등 에 등에 의한 방법을 통해 측정되었다 초기 프로게Hase (2000) .

스테론 농도가 또는 그 이상이 되면 배란일로 판단하였다 질도말을 해보면 배4ng/ml .

란기에 표면세포는 일반적으로 상피세포와 동일하거나 수준이다90 .％

개복 및 난자회수개복 및 난자회수개복 및 난자회수개복 및 난자회수(iv)(iv)(iv)(iv)

전처리 된(0.05 mg/kg atropine sulfate and 0.025 mg/kg acepromazine maleate)

동물은 케타민을 사용하여 마취하였고 이소플로란으로 마취를 유지하였다5mg/kg , .

난관은 배란 시간 후 중앙개복을 통해 노출되었다72 .

난관 나팔관말단의 입구를 찾아서 을 도관으로 사용하였고 이6 gauge bulbed-needle ,

도관은 수술적 연결을 통해 위치되었다 자궁난관접합부 바로 위의 난관의 기저부는.

지압을 통해 식별하였다 난관의 내강은 피하바늘을 통해 도관. 24 gauge 되었다

(Angiocath TMPlus; Becton Dickinson Korea, Ltd., Seoul, Korea).

약 의 회수액10ml 가 첨가된(HEPES TCM199; Invitrogen Corp., Carlsbad, CA)이 주사

기와 피하바늘을 통해 관류되었다. 회수액은 난관 내강과 을 통하여 멸bulbed-needle

균 플라스틱 페트리디쉬에 수거되었다 두개의 난관을 관류 후 각 난관 외막을 절개하.

여 난소를 꺼내 황체개수를 육안으로 세어보았다.

마지막으로 개복부위를 두겹으로 봉합하였다 절개선을 따라 수술접착제를 처리하였.

다 수술 후 암견은 수의사에 의하여 표준관리방침에 의하여 관리되었다. .

공여핵세포의 준비공여핵세포의 준비공여핵세포의 준비공여핵세포의 준비(v)(v)(v)(v)

공여핵세포는 개 피부 생검을 통해 섬유아세포로부터 얻었다.

생검은 연령 수컷과 년 령 암컷 골든리트리버로부터 채취하였다 조직 샘플의 표2 6 .

면은 면도하였고 수 차례 세정되었다 로 두. PBS (Life Technologies, Rockville, MD)

차례 세정 후 조직은 배양접시에서 수술용 칼을 이용하여 갈려진 후100mm 0.1％

과 트립신과 가 첨가된 을 사용하여 시간(w/v) 1mM EDTA DMEM (Life Technologies) 1 2∼

동안 처리하였다 트립신처리된 세포는 에서 분 동안 원심분리하여 한차례 세. 300 g 10

정하였고 프라스틱 배양접시에 뿌려졌다 뿌려진 세포는 에100mm . DMEM 10 (v/v) FBS％

(Life Technologies), 1mM sodium pyruvate, 1mM (v/v) non-Essential amino acid

그리고 이 첨가된 배지에(Life Technologies), 10ug/ml penicillin-streptomycin 5％

CO2, 에서 일 동안 배양하였다 바닥에 붙지 않은 세포를 제거하고 배양접시38 6 8 . ,℃ ∼

에 붙어 자라는 세포들은 배양접시에 찰때까지 배양하였다 세포들은 일 간격으로. 5 7∼

- 17 -

분간 트립신 을 처리하여 계대배양하였다 계대 배양5 (0.1 trypsin, 0.02 EDTA) . 2％ ％

후 세포는 동결 배양액에 동결하여 의 액체질소에 보관하였다 동결배지는-196 . 8℃

그리고 로 구성된다 체세포핵이식0 (v/v) DMEM, 10 (v/v) DMSO 10 (v/v) FBS .％ ％ ％

전 세포를 녹여서 정도 자랄때 까지 일간 배양하고 배양액에 의 를80 3 4 0.5 FBS％ ∼ ％

첨가하여 세포기아 상태로 배양한다 각 세포는 초 간 트립신처리하여 회수한다. 30 .

체세포핵이식체세포핵이식체세포핵이식체세포핵이식(vi) (SCNT)(vi) (SCNT)(vi) (SCNT)(vi) (SCNT)

에 가 첨가된 배지에 를 처TCM-199 10 (v/v) FBS 0.1 (w/v) hyaluronidase① ％ ％

리하여 피펫팅하여 난자로부터 난구세포를 제거하였다 현미경. (TE2000-E; Nikon

을 이용하여 난자를 탈핵하였다Corp., Tokyo, Japan) .

탈핵 후 난자는 분간 의 로 염색하여 유뮤 여부를 확인하였, 5 5ug/ml bisbenzimide DNA

다 가 남아 있는 난자는 폐기하였다 날카로운 피펫을 이용하여 트립신처리된 표. DNA .

면이 둥근 형태를 지닌 섬유아세포를 골라 탈핵된 난자의 위란강으로 옮겼다.

상기 탈핵된 난자 를 그리고 로 구(couplets) 0.26M mannitol, 0.5mM HEPES 0.1MgSO4②

성된 융합배지에 분간 침지시킨 후 융합배지와 함께 두개의 전기노드로 구성된 챔버4

에 옮겨놓는다 다음으로. , TX Electro-Cell manuipulator 2001 (BTX Inc., San Diego,

을 이용하여 에서 동안 번의 파장을 주어 융합한다 전기CA) 1.75 kV/cm 15 usec 2 DC .

적 자극 후 재구성된 난자는 가 첨가된 배지에서 실험군에 따라 리프로10 FBS TCM-199％

그래밍된다 모든 융합된 난자는 가 포함된 배양액에. 10uM calcium ionophore (Sigma)

서 분간 배양하여 화학적 활성화시킨다4 .

배아들은 세정배지로 분간 세정한 후 에TCM-199 5 mSOF 1.9 mM③

이 포함된 배양액에 시간 배양하여 후활성화6-dimethylaminopurine 4 (post-activation)

를 시킨다.

배아 핵 이식란 이식배아 핵 이식란 이식배아 핵 이식란 이식배아 핵 이식란 이식(vii) ( )(vii) ( )(vii) ( )(vii) ( )

복제된 배아 핵 이식란 는 활성화 후 시간 이내에 수술적 방법으로 자연적으로( ) 4

동기화된 내리모의 난관에 이식하였다 수술은 위에서 기술한 같은 방법으로 수행하였.

다 배아들은 카테터 에 최소한. Sovereign Ton Cat (Sherwood Medical, St. Louis, MO)

의 배양액과 함께 로딩하고 난관의 부분이 지점에 조심스레 옮겨준다 대리모당2/3 .

이식 배아수는 개 사이이고 평균 개 였다9 21 , 16.75 .∼

임신진단임신진단임신진단임신진단(viii)(viii)(viii)(viii)

이식 후 약 일 이후 대리모는30 3.5MHz curved transducer (SSD-900; ALOKA Co.,

휴대용 실시간 초음파기계를 이용하여 태아의 크기와 형태를 검Ltd., Tokyo, Japan)

사하였다 배아 또는 태아의 심박수 또한 조사하였다 임신이 확인 된 후에는 분만시. .

까지 매 일간격으로 초음파를 사용하여 관찰하였다7 .

을 위한 추출과 극소위성 분석을 위한 추출과 극소위성 분석을 위한 추출과 극소위성 분석을 위한 추출과 극소위성 분석(ix) Genotyping DNA(ix) Genotyping DNA(ix) Genotyping DNA(ix) Genotyping DNA

- 18 -

유전적 동일함을 확인하기 위하여 공여핵 섬유아세포 공여견 복제견 그리고 대, ,

리모에서 등 과 등이 게재한 방법을 이용하여 분석이 이루어졌Lee (2005) Park (2006)

다 다음의 개의 마커가 선택되어 사용했다. 10 : PEZ1, PEZ3, PEZ5, PEZ6, PEZ8, PEZ12,

그리고PEZ20, FHC2010, FHC2054 FHC2079.

다 실험결과다 실험결과다 실험결과다 실험결과....

공여세포 영향

표 에서는 체세포복제 성공율에 있어서 수컷 암컷 공여세포의 영향을 보여준다 공1 , .

여핵 세포의 성별은 개의 체세포복제에 큰 영향이 없었다 수컷과 암컷 공여세포 모두.

임신이 이루어졌다 수컷과 암컷 각각의 공여세포를 사용하여 재조합된 난자를 이식한.

대리모 중 일째 임신율은 각각 와 이였고 분만단계까지 임신이 진행30 22.2 14.3 ,％ ％

된 것은 각각 와 였다 수컷과 암컷 공여세포 간의 유의차는 없었다22.2 7.1 . .％ ％

표[ 1]

암컷과 수컷 공여세포가 임신율과 강아지 분만에 미치는 영향

재조합 난자 핵의 리모델링

응축된 염색체 도 혹은 중기상을 띄는 염색체상 도 을 지닌 난자 비율( 1 A, B) ( 1 C)

은 융합 후 시간 째 와 에 비하여 시간 째 와 에서 유의4 (14.3 7.1 ) 2 (50 50 )％ ％ ％ ％

적으로 높았다 융합 후 시간 째는 대부분의 배아가 분산된 염색체상을 나. 4 (64.3 )％

타냈다 도 길어진 혹은 분산된 염색체를 지닌 배아의 비율은 융합과 활성화( 1 D-F).

사이의 간격이 길었을 때 증가하였다 표( 2 , P 0.05).＜

표[ 2]

개난자의 체세포핵이식의 리모델링에서 융합과 활성화 간격의 시간이 미치는 영향

활성화 시간이 임신율에 미치는 영향

- 19 -

융합 후 활성화 사이의 간격에 따른 비임신 대리모 대비 임신 대리모 비율에 큰 차이

가 있음을 확인하였다 표 이식 후 일째 초음파를 이용한 임신진단 결( 3, P 0.05). 30＜

과 시간 처리군에서는 임신이 확인되지 않았으나 시간 처리군에서 마리가의 대리4 , 2 4

모가 임신되었음을 확인하였다 마리의 임신된 대리모 중 마리는 유산을 하였고 나. 4 1 ,

머지 마리의 대리모에서 마리의 강아지를 분만하였다 평균 임신기간은 일 이였3 4 . 59

다 마리의 복제 강아지 중 마리는 심장 판막 기형으로 생후 일째 폐사하였다 도. 4 1 1 .

는 그리고 주의 세마리의 복제견 모습이다 극소위성 분석 결과 강아지들은2 25, 22 19 .

각각의 체세포와 유전학적으로 동일하였다 표( 4a, b).

표[ 3]

융합과 활성화 사이의 간격이 임신율에 미치는 효과

표[ 4a]

수컷 공여 세포로 부터 생산된 마리 복제 강아지의 극소위성 분석3

표[ 4b]

암컷 공여 세포로 부터 생산된 복제 강아지의 극소위성 분석

- 20 -

확인대상발명의 도면의 간단한 설명확인대상발명의 도면의 간단한 설명확인대상발명의 도면의 간단한 설명확인대상발명의 도면의 간단한 설명3.3.3.3.

도 은 융합 후 개 복제핵이식란의 핵모양을 나타낸 것이다 단 융합 후 시1 . ( , A-C: 2

간째 모양 응축 염색체 중기같은 연장된 염색체 융합 후 시간째에 관찰. A, B: . D-F: 4

된 분산된 염색체 모양 기준선. , 10 um)

도 는 체세포복제에 의해 생산된 마리의 복제견을 나타낸 것이다 생후 주2 3 . ((A) 25 ,

생후 주 생후 주(B) 22 , (C) 19 )

도면도면도면도면4.4.4.4.

도[ 1]

도[ 2]