9/27/2014

1

Sertifikat analizeSertifikat analize

doc. dr Biljana Stojanović

2

9/27/2014

2

“Dokument koji daje informaciju o kvalitetu ili čistoći nekog proizvoda”

“Sertifikat analize leka ili odgovarajućeg farmaceutskog proizvoda daje

tačne detalje o kvalitetu i o usaglašenosti proizvoda sa specifikacijom.

Dokument se odnosi na rezultate ispitivanja reprezentativnog uzorka

uzetog iz jedne serije proizvoda”

Sertifikat analize je dokumentovani dokaz o kontroli kvaliteta

urađenoj na nekom proizvodu.

Sertifikatanalize Papir koji nešto

sertifikuje...

4

9/27/2014

3

5

?Kvalitet lekova

�Proces proizvodnje

�Način pakovanja

�Način transporta

�Uslovi čuvanja

�Nedostatak terapijskog dejstva (produžetak bolesti, letalan ishod)�Toksične i neželjene reakcije�Finansijski gubici�Gubitak kredibiliteta

1. Testovi – ispitivanja koja je potrebno izvesti da bi se proverio kvalitet nekog preparata

2. Zahtevi za svaki od navedenih testova - granice u kojima rezultat treba da se nalazi

3. Rezultat ispitivanja – dobijeni rezultati (brojčane vrednosti) sa odgovarajućim zaključkom (odgovara/neodgovara)

6

9/27/2014

4

TESTOVI ZAHTEVI REZULTAT

Izgled No. 0 tvrde želatinske kapsule tamno zelene kapice i tela, sadrže žuto-bež sferne mikrogranule

odgovara

Prosečna masa punjenja kapsula 464 mg ± 7,5 % odgovara457,6 mg

Variranje mase Ph. Eur. 6 (2.9.5) odgovaraod - 2,1 % do + 1,9 %

Identifikacijaitrakonazola

HPLC odgovara

Semikvantitativno određivanje vode ≤ 2 % odgovara1,1 %

Raspadljivost moraju se raspasti za manje od 30 min. odgovara17 min.

Brzina rastvaranja Mora se osloboditi najmanje 75 % aktivne supstance za 60 minuta

odgovara98,6 %

Sadržajitrakonazola

od 95,0 mg/tbl. do 105,0 mg/tbl. (95 % – 105 %)

odgovara98,7 mg/tbl. (98,7 %)

Srodne supstancenečistoća Bnečistoća Fbilo koja druga nečistoćaukupne nečistoće

≤ 0,5 %≤ 0,5 %≤ 0,1 %≤ 1,5 %

odgovara0,07 %0,04 %0,03 %0,04 %

Mikrobiološka čistoća Ph. Eur 6 odgovara

Primer

7

Određeni su specifikacijom

8

9/27/2014

5

Sertifikat analize je odraz specifikacije...

Specifikaciju čini lista testova, zahteva i

metoda po kojima se vrši neko ispitivanje.

Sertifikat analize je rezultat primenjene

specifikacije na datu seriju.

9

10

Lista testova

Spisak kriterijuma

Spisak postupaka

9/27/2014

6

11

Šta se sve uzima u obzir pri određivanju ispitivanja koja će se naći u specifikaciji?

Farmakopeja

Regulatorni zahteviRazvoj proizvoda

9/27/2014

7

���� Pretkliničke studije

���� Testiranje prvih preparata razvijenih za kliničke studije

���� Faza II i faza III kliničkih studija

���� Priprema i podnošenje zahteva za registraciju i puštanje u promet

Faze

nas

taja

nja

leka

Faze značajne za nastajanje specifikacije13

���� Pretkliničke studije

U ovoj fazi vrše se ispitivanja za:

A) Aktivnu supstancu

B) Pretklinički dozirani oblik

C) Metabolite i nečistoće

14

9/27/2014

8

15

Aktivna supstanca

� da bi izveli pretklinički i toksikološki testovi potrebno je poznavanje kvaliteta aktivne supstance

� da bi se izvele korektne studije nije neophodno da lek imavisok stepen čistoće

�u ovoj fazi nije potrebno imati formalnu specifikaciju

16

Uobičajeni testovi u ovoj fazi su:

Parametar Uobičajene metode ispitivanja

Identifikacija Infra crvena spektroskopijaTemperatura topljenja

Karakterizacija strukture Masena spektroskopijaNuklearna magnetna rezonanca

Određivanje sadržaja aktivnesupstance

HPLCTitracija

Srodne supstance Hromatografije metode(HPLC, GC, TLC)

Neorganske nečistoće Ostatak nakon žarenjaTeški metali

Rezidualni rastvarači Gasna hromatografija

Sadržaj vode Karl-Fišer titracija

pH rastvora merenje pH vrednosti rastvora

9/27/2014

9

17

Pretklinički dozirani oblik

� u pretkliničkim studijama lek se obično dozira u obliku

rastvora, suspenzija i hrane za životinje

� u ovoj fazi potrebno je znati:

a) koliki je sadržaj aktivne supstance u obliku koji se primenjuje

b) kakva je stabilnost aktivne supstance u primenjenomvehikulumu, kao i da li je supstanca stabilna tokom pretkliničkiheksperimenata

18

Uobičajeni testovi koji se izvode za rastvore i suspenzije u

ovoj fazi su:

1) izgled

2) sadržaj aktivne supstance

3) nivo nečistoća

4) pH vrednost rastvora

Formalna specifikacija još uvek ne postoji aliprimenjeni oblik mora pratiti odgovarajući sertifikat

analize.

9/27/2014

10

19

Nečistoće i metaboliti

� Kada god je to moguće potrebno je znati strukture i sadržaj

nečistoća u leku!

� Iako formalna specifikacija još nije razvijena potrebni su podaci

o količini i prirodi nečistoća, uključujući nečistoće iz procesa

sinteze kao i one koje nastaju kao posledica razgradnje leka.

� Metaboliti su potrebni za izvođenje i pretkliničkih i

kliničkih studija. Treba da budu određene, poznate čistoće.

20

���� Testiranje prvih preparata razvijenih za kliničkestudije

�Za male sintetske molekule definiše se tipična specifikacija bez

specifičnih testova

�Za složenije molekule kao što su peptidi, proteini ili smeše kao

proizvodi procesa fermentacije, specifikacije su znatno složenije

U ovoj fazi specifikacija ima probni karakter i podložna je daljim promenama

Kao kliničke formulacije koriste se uglavnom kapsule punjenelekom ili oblici koji se mogu injektovati. Specifikacije oblika

zasnovane su na specifikaciji aktivne supstance.

9/27/2014

11

Test Metoda Kriterujum za prihvatanjerezultata

Identifikacija IR Tt

odgovara standarduodgovara određenom intervalu

Razjašnjavanje strukture NMRMS

odgovara standardu

Određivanje sadržaja HPLC/GCTitracija

97,0 % – 102,0 %98,0 % – 102,0 %

Srodne supstance HPLC/GC ukupne: manje od 2,0 %pojedinačne: manje od 1,5 %

poznata nečistoća X: 1,0 %

Neorganske nečistoće ostatak nakon žarenjasulfatni ostatak

manje od 500 ppm

Rezidualni rastvarači gasna hromatografija rastvarač X: manje od 0,50 %rastvarač Y. manje od 0,20 %rastvarač Z: manje od 0,05 %

Sadržaj vode Karl-Fisher-ova titracija

manje od 0,5 %

pH 1 % – tnog rastvora pH merenje 4,6 – 5,0

Uobičajena specifikacija za male sintetske molekule

21

���� Faza II i faza III kliničkih studija

� Kada se pokaže da lek ima određenu podnošljivost i prihvatljiv

farmakokinetički profil u I fazi studija, u II fazi kliničkih studija vrši

se testiranje leka na malom broju pacijenata

� Sa ciljem testiranja proizvode se manje serije leka

Profil nečistoća treba da bude poznat što podrazumeva

poznavanje njihove strukture i tačne koncentracije

�Nakon faze II, lek prelazi u fazu III kliničkih studija

22

9/27/2014

12

23

���� Priprema i podnošenje zahteva za registraciju ipuštanje leka u promet

� Kada se dođe do ove, poslednje faze, znači da se lek proizvodi poveć definisanom postupku

�Specifikacija je dostupna i uključuje fizičke osobine, nečistoće, stabilnost, itd

�Finalna specifikacija mora biti u skladu sa važećom regulativom

�Kako se ispitivanja vrše i dok je lek na tržištu, mogu se vršiti iodređene promene u specifikaciji

SMERNICA ICH Q6A

Kontrola novih farmaceutski

aktivnih supstanci

Kontrola novih farmaceutskih

oblika

Zajednička

ispitivanja

Specifična

ispitivanja

Zajednička

ispitivanja

Specifična

ispitivanja

24

9/27/2014

13

Kontrola novih farmaceutski aktivnih supstanciKontrola novih farmaceutski aktivnih supstanciBROJ ISPITIVANJE ZAHTEVI1 Izgled Beo do skoro beo prašak2 Rastvorljivost Umereno rastvoran u metanolu3 Identifikacija

A. IRB. HPLCC. hemijska

Odgovara spektru referentnog standarda.Retenciono vreme D i L izomera u uzorku mora odgovaratiradnom standardu tokom ispitivanja hiralne čistoće HPLC metodom.Odgovara testu za hloride.

4 Temperatura topljenja Između 223,0 °C i 230,0 °C5 Ostatak nakon sušenja Ne više 0,5 % w/w6 Specifična optička rotacija (računato na suvu bazu) Između -1,0 °C i +1,0 °C

7 Sulfatni ostatak Ne više od 0,1 %8 Teški metali Ne više od 10 ppm9 Sadržaj hlorida (% w/w računato na suvu bazu) Između 7,5 % i 8,5 %

10 Srodne supstance HPLC metodomA. Izomer AS na oko 0,88 RRTB. . Izomer AS izomer na oko 1,13 RRTC. Najveća pojedinačna nepoznata nečistoća D. Ukupne nečistoće

A. ne više od 0,15 %B. ne više od 0,10 %C. ne više od 0,10 %D. ne više od 0,60 %

11 Hiralna čistoća (HPLC)D-izomerL-izomerUkupno DL izomera

Između 48,5 % i 51,5 %Između 48,5 % i 51,5 %Ne manje od 99,0 %

12 Određivanje (potenciometrijski) 98,5 % – 101,5 % na osušenu bazu13 Rezidualni rastvarači (GC metoda)

(a) metanol(b) izopripil alkohol

(a) ne više od 1000 ppm(b) ne više od 1000 ppm

Dodatni testovi14 Veličina čestica (Malvern analizator) 50 % čestica treba da ima veličinu manju od 8 µm

15 Sadržaj paladijuma Ne više od 5 ppm 25

Specifična ispitivanja

� Opis

� Identifikacija aktivne

farmaceutske supstance

� Određivanje sadržaja

aktivne farmaceutske

supstance

� Određivanje nečistoća

���� fizičko−−−−hemijske karakteristike

���� distribucija veličina čestica

���� polimorfizam

���� testovi koji se izvode na novim

aktivnim supstancama sa

hiralnim karakteristikama

���� određivanje sadržaja vode

neorganske nečistoće

ispitivanje mikrobiološke čistoće

Zajednička ispitivanja

26

9/27/2014

14

Zajednička ispitivanja

1. OPIS – izgled, boja, miris

Ako se tokom proizvodnje ili čuvanja menjaju ove karakteristike, to

mora biti navedeno u specifikaciji.

Metoda: vizuelno, organoleptički

27

28

2. IDENTIFIKACIJA AKTIVNE FARMACEUTSKE SUPSTANCE

�Ako se koristi tečna hromatografija moraju biti najmanje dve metode i to biti kombinovane sa različitim tipovima detekcije: HPLC – DAD i HPLC –MS.

�Mora biti specifična i pouzdana metoda –najpouzdanija metoda za identifikaciju Infra crvena spektroskopija!

�Postupak mora biti takav da obezbedi jasno razlikovanje ispitivane susptance od strukturno sličnih supstanci

�Ako je supstanca u obliku soli – radi se specifična reakcija za so

�Za optički aktivne supstance metoda koja se primenjuje mora omogućiti razdvajanje i razlikovanje enantiomera

9/27/2014

15

29

3. ODREĐIVANJE SADRŽAJA AKTIVNE FARMACEUTSKE SUPSTANCE

Ista metoda može se koristiti za određivanje sadržaja aktivne

farmaceutske supstance i za određivanje prisustva srodnih supstanci

Metoda: HPLC

Nespecifične metode – titrimetrija, spektrofotometrija

Za određivanje sadržaja nečistoća – HPLC metoda

30

4. ISPITIVANJE NEČISTOĆA

organskih, neorganskih i rezidualnih rastvarača

Organske nečistoće :

� polazne supstance i sporedni proizvodi postupka sinteze

� degradacioni proizvodi

Neorganske nečistoće:

� elementi u tragovima (katalizatori)

Rezidualni rastvarači:

� koriste se u različitim fazama sinteze aktivne farmaceutske

supstance

9/27/2014

16

Metode koje se koriste za ispitivanje

Organske nečistoće :

� Metoda tečne hromatografije sa različitim tipovima detekcije (UV,

Diode Array, MS...)

Neorganske nečistoće:

� različiti limit testovi, atomska apsorpciona spektroskopija

Rezidualni rastvarači:

� Metoda gasne hromatografije sa različitim tipovima detekcije

31

Značaj ispitivanja nečistoća

32

9/27/2014

17

Kontrola novih farmaceutskih oblikaKontrola novih farmaceutskih oblikaISPITIVANJE SPECIFIKACIJA METODA

Izgled Skoro bele, okrugle, bikonveksne tablete sa jedne strane sa unakrsnom

podeonom crtom

Vizuelno

Identifikacija aktivne supstance1. HPLC2. UV

1. odgovara2. odgovara

1. Ph. Eur. 2.2.29. tečna hromatografija2. Ph. Eur. 2.2.25 apsorpciona

spektrofotometrijaIdentifikacija hlorida Beo talog Reakcija taloženja

Određivanje aktivne supstance 95,0 %–105,0 % u odnosu na deklarisani sadržaj

(4,75–5,25 mg AS/tableti)

Ph. Eur. 2.2.29. tečna hromatografija

Degradacioni proizvodi Pojedinačne neidentifikovane ≤ 0,2 %Ukupne ≤ 0,5 %

Ph. Eur. 2.2.29. tečna hromatografija

Brzina rastvaranja Q =75 % za 45 minuta Ph. Eur. 2.9.3. aparatura sa lopaticama, medium: 500 mL 0,1 N HCl, brzina rotiranja

50 rpm HPLCOtpornost na lomljenje 35 N -90 N Ph. Eur. 2.9.8.Uniformnost sadržaja

Frekvenca testiranja: svaka serija do

prolaska 10 uzastopnih serija a nakon

toga 1 godišnje

n=10: AV ≤ 15,0 (L1);n=30: AV ≤ 15.0 (L1) i bez pojedinačnog

sadržaja < 0,75×M ili> 1,25×M

Ph. Eur. 2.9.40

Prosečna masa tabletaFrekvenca testiranja: 1 serija godišnje

230 mg ± 5 %(218,5 mg do 241,5 mg)

Sistem za merenje

Mikrobiološka čistoćaUkupan broj aerobnih mikroba

Ukupan groj plesni gljivicaOdsustvo E. coli

Frekvenca testiranja: svaka serija do

prolaska 5 uzastopnih serija a onda

svaka deseta serija sa minimumom 1

serje godišnje

≤ 103 cfu/g≤ 102 cfu/g

Odgovara u 1 g

Ph. Eur. 2.6.12 i 2.6.13

33

Specifčna ispitivanja

� Opis

� Identifikacija aktivne

farmaceutske supstance

� Određivanje sadržaja

aktivne farmaceutske

supstance

� Određivanje nečistoća

Zajednička ispitivanja

Zavise od vrste farmaceutskog oblika

34

9/27/2014

18

Ispitivanja specifična za tablete

1. Određivanje brzine rastvaranja

2. Raspadljivost

3. Ujednačenost mase/sadržaja

4. Određivanje sadržaja vode

5. Čvrstina i/ili frijabilnost

6. Ispitivanje mikrobiološke čistoće

35

ISPITIVANJE ZAHTEVI REZULTATI

Izgled Skoro bele, okrugle, bikonveksne tablete sa jedne strane sa unakrsnom podeonom crtom

Odgovara

Identifikacija aktivne supstance1. HPLC2. UV

1. odgovara2. odgovara

Odgovara

Identifikacija hlorida Beo talog OdgovaraOdređivanje aktivne supstance

95,0 %–105,0 % u odnosu na deklarisani sadržaj(4,75–5,25 mg AS/tableti)

Odgovara100,2 %

(5,01 mg AS/tbl)Degradacioni proizvodi

Pojedinačne neidentifikovane ≤ 0,2 %Ukupne ≤ 0,5 %

Odgovara0,05 %0,14 %

Brzina rastvaranja Q =75 % za 45 minuta Odgovara92,8 %

Otpornost na lomljenje 35 N -90 N Odgovara80 N

Uniformnost sadržaja n=10: AV ≤ 15,0 (L1);n=30: AV ≤ 15,0 (L1) i bez pojedinačnog sadržaja < 0,75×M ili

> 1,25×M

Odgovara

Prosečna masa tableta 230 mg ± 5 %(218,5 mg do 241,5 mg)

Odgovara231,0 mg

Mikrobiološka čistoćaUkupan broj aerobnih mikroba

Ukupan groj plesni gljivicaOdsustvo E. coli

≤ 103 cfu/g≤ 102 cfu/g

Odgovara u 1 g

Odgovara

Sertifikat analize tableta

36

9/27/2014

19

Ispitivanja specifična za tečne farmaceutske oblike za per os primenu

1. pH rastvora

2. Određivanje brzine rastvaranja

3. Ujednačenost mase/sadržaja

4. Određivanje sadržaja vode

5. Određivanje sadržaja alkohola

6. Ispitivanje materija koje se mogu ekstrahovati iz pakovanja

7. Distribucija veličine čestica

8. Redisperzibilnost

9. Reološka svojstva

10. Vreme potrebno za rekonstituisanje

11. Ispitivanje mikrobiološke čistoće 37

Ispitivanja specifična za parenteralne preparate1. pH vrednost rastvora

2. Sterilnost

3. Endotoksini/pirogeni

4. Ujednačenost mase/sadržaja

5. Određivanje sadržaja vode

6. Vidljive i subvidljive čestice

7. Ispitivanje materija koje se mogu ekstrahovati iz pakovanja ili

sistema zatvaranja kontejnera

8. Distribucija veličine čestica

9. Redisperzibilnost

10. Osmolarnost

11. Vreme potrebno za rekonstituisanje

12. Ispitivanje funkcionalnosti sistema 38

9/27/2014

20

39

Na koji način može da se obezbedi odgovarajući kvalitet lekova?

� Izbor odgovarajućeg proizvoda� Dug rok upotrebe� Prihvatljiva stabilnost� Prihvatljiva bioraspoloživost

� Izbor odgovarajućih dobavljača� Po potrebi izmena dobavljača� Uzimanje uzoraka od novih dobavljača� Postavljanje specifičnih zahteva za dobavljača (na primer o

bioraspoloživosti supstance i stabilnosti)

� Sertifikovanje proizvodnje� GMP sertifikat proizvođača� Sertifikovanje proizvoda i serije proizvoda� Nasumična testiranja

40

�Upotreba farmakopejskih referentnih standarda u

ispitivanju

�Za označavanje proizvoda koristiti jezik zemlje u

kojoj se lek izdaje

�Koristiti odgovarajuće pakovanje koje će zadovoljiti

kriterijume za čuvanje i transport

� Odgovarajući način čuvanja, transporta,

distribucije i upotrebe

Pored toga i :

...

9/27/2014

21

41

Ko je sve odgovoran za očuvanje kvaliteta proizvodaKo je sve odgovoran za očuvanje kvaliteta proizvoda??

Kvalitet lekova

Agencija za lekove

Lekari, stomatolozi,

svi koji propisuju

lekove

Službe koje učestvuju u

nabavci lekova

Apoteke Pacijenti

Broj koji je karakterističan za datu analizu i datum izdavanja sertifikata

Podaci o uzorku koji se ispituje

Ispitivan

ja i d

ob

ijeni

rezultati

Konačan zaključak o kvalitetu ispitivanog proizvoda

Potpis odgovornih osoba

42

9/27/2014

22

+ Serifikat analizePuštanje

leka u

promet

43