201101biologia Guia Laboratorio

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

GUÍA COMPONENTE PRÁCTICO

201101– BIOLOGIA

CARMEN EUGENIA PIÑA LOPEZ Director Nacional

BIBIANA AVILA Acreditador

BOGOTA Octubre 2010

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2. ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIEN TO

La presente guía fue diseñada en el año 2005 por Carmen Eugenia Piña López, MSc. Ciencias Biológicas; MSc. Docencia Universitaria; Especialista en Nutrición Animal Sostenible; Especialista en Informática y Multimedia. Docente de la UNAD desde 1986

La presente guía ha tenido tres actualizaciones con la participación de las tutoras Yurby Salazar y Bibiana Ávila durante los cuales se han realizado mejoramientos académico-pedagógicos y didácticos con la incorporación de Objetos Virtuales de Aprendizaje

Con el fin de que el estudiante tenga una preparación previa del material a utilizar y de los procedimiento a seguir se incorporaron links a videos demostrativos donde se muestra paso a paso cada uno de los procedimientos que el estudiante debe realizar en la práctica presencial. Cada video cuenta con su respectivo formato de observación lo cual le facilitará la comprensión y el desarrollo de la práctica.

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/multimedia.htm

Se diseñó una simulación de microscopía en donde el estudiante puede manipular el microscopio de manera virtual y de esta manera realizar un entrenamiento previo al desarrollo de los laboratorios. El link donde está publicado el simulador: http://canal.unad.edu.co/laboratorio/index/main.html

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3. INDICE DE CONTENIDO

Pág.

INTRODUCCIÓN 5

CARACTERISTICAS GENERALES 5

DESCRIPCIÓN DE PRÁCTICAS 8

PRÁCTICA No. 02 – MICROSCOPÍA 13

PRACTICA No. 03 – LA CÈLULA 40

PRACTICA No. 04 – DIVERSIDAD MICROBIANA 51

PRACTICA No . 05- MITOSIS Y MEIOSIS 58

PRACTICA No. 06 TEJIDOS VEGETALES 64

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4. LISTADO DE TABLAS

1 Equivalencia de milímetros en micras 29

2 Observaciones realizadas 34

4.1 LISTADO DE GRÁFICOS Y FIGURAS

1El Microscopio y sus partes 15

2 Objetivos 15

3 Ocular 16

4 Platina 17

5 Condensador y Diafragma 17

6 Tornillos Macrométrico y Micrométrico 18

7 Poder de aumento 20

8 Poder de definición 20

9 Poder de penetración o profundidad 21

10 Poder de resolución 22

11 Objetivo donde se visualiza el aumento y la apertura numérica 22

12 Distancia Focal 23

13 Formación de la imagen invertida 25

14 Refracción de la Luz 26

15 Corrección de la refracción de la Luz 27

16 Campo de visión 27

17 montaje de papel milimetrado 28

18 Papel milimetrado con aumento de 4X 28

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18 Papel milimetrado con aumento de 4X 29

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5. CARACTERÍSTICAS GENERALES

Introducción Las guías para las prácticas de biología, son un importante dispositivo de ayuda pedagógica y didáctica en el proceso de formación profesional que inician los estudiantes de los programas de pregrado de Ingeniería de Alimentos, Regencia de Farmacia, Zootecnia, Agronomía, Ingeniería Agroforestal y Psicología. Estas guías están descritas de manera clara y sencilla con el fin de que la ejecución práctica pueda hacerse completamente. Antes de realizar la parte práctica se recomienda ver cada uno de los videos presentados en el curso de Biología en el link Multimedia, http://www.unad.edu.co/curso_biologia/multimedia.htm para hacerse una idea del material a utilizar y procedimiento a seguir lo cual le facilitará la comprensión y el desarrollo de la práctica Quienes deseen descargar los videos en su computador pueden hacerlo ver orientaciones al final de la guía.

Justificación Un aspecto importante de la formación profesional en los campos de Ciencias Agrarias, Psicología, Ingeniería de Alimentos, Regencia de Farmacia, corresponde al saber hacer, evidenciado en competencias psicomotoras que facilitan el ejercicio profesional, por representar un dominio de procesos complejos necesarios para la realización cotidiana de actividades sistémicas y la resolución de problemas, en las cuales se integran la aplicación de procedimientos y estrategias (saber hacer) con la comprensión del contexto (saber conocer) y con el despliegue de iniciativa y creatividad (saber ser). Un ejemplo específico de este tipo de competencia es el aprendizaje procedimental del manejo del microscopio, ya que en todo lo relacionado con la observación de componentes o muestras microbiológicas como base para diagnósticos y toma de decisiones, es fundamental poseer

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la competencia de manipulación del microscopio en un nivel de automatización o de experticia.

Una manera efectiva de alcanzar esta experticia en el manejo del microscopio es el desarrollo de laboratorios para una ejercitación personal.

Intencionalidades formativas

Propósitos Integrar al perfil de formación profesional del estudiante la capacidad de desempeñarse con seguridad y con experticia en los procedimientos propios de un laboratorio de biología.

Objetivos

Identificar y aplicar las normas de bioseguridad, identificar los componentes del microscopio óptico y los procedimientos correctos de manipulación del microscopio para observación de muestras biológicas, así como la identificación de componentes celulares y microorganismos.

Metas

Que cada estudiante al terminar la práctica pueda desarrollar el cuestionario evaluativo y presentar un informe correcto de los procedimientos aplicados.

Competencias

• Comportamiento bio seguro en el laboratorio

• Manipulación correcta del microscopio óptico

• Identificación correcta de componentes celulares, microorganismos

Denominación de prácticas

Práctica 1: Normas de seguridad en el laboratorio

Practica 2: Microscopía

Practica 3: La célula

Práctica 4 : Diversidad Microbiana

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Práctica 5: Mitosis y Meiosis

Práctica 6. Los tejidos Vegetales

Número de horas 12

Porcentaje 18 %

Curso Evaluado por proyecto

SI___ NO __X__

Seguridad industrial

La primera práctica hace referencia a las Normas de seguridad en el laboratorio. Se entrega reglamento de prácticas de laboratorio

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6. DESCRIPCIÓN DE PRÁCTICAS

PRACTICA No. 01 – Normas de seguridad en el laborat orio

Tipo de practica Presencial Autodirigida X Remota Otra ¿Cuál

Porcentaje de evaluación 1% Horas de la práctica 0.15 Temáticas de la práctica Bioseguridad e higiene en el laboratorio Intencionalidades formativas

Propósito(s)

Desarrollar en el estudiante la competencia de comportamiento bioseguro en el laboratorio de biología.

Objetivo(s)

Conocer y cumplir las principales normas de seguridad e higiene que se deben seguir en el laboratorio, con el fin de evitar posibles riesgos, tanto para las personas como para el medio ambiente.

Meta(s)

Observar el video normas de seguridad en el laboratorio y contestar las preguntas presentadas en el formato de observación del video

Competencia(s) Se basan en el dominio la relación cognitivo-procedimental orientada a:

1. Argumentar el concepto de bioseguridad aplicado al uso del laboratorio de biología.

2 .Transferir a situaciones concretas las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio de biología

3. Aplicar la capacidad de evitar en el laboratorio

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daños a su salud

Fundamentación Teórica

La bioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las normas y técnicas en el desarrollo de las prácticas que se realizan en el laboratorio para prevenir la exposición del personal y del medio ambiente a cualquier riesgo.

Los riesgos pueden estar relacionados con las propias instalaciones, con las muestras de origen biológico, con los procedimientos y manipulaciones que se realicen.

Principales Normas

Las principales normas a tener en cuenta para el desarrollo de prácticas en el laboratorio de Biología son las siguientes:

• En la zona de trabajo del laboratorio no se debe consumir alimentos ni bebidas para evitar riesgos de contaminación. • Está prohibido fumar en el área del laboratorio o sus alrededores. Recordemos que se trabaja con gas y que algunos químicos generan vapores inflamables. • No se deben llevar a la boca lápices, etiquetas o cualquier otro material utilizado en el laboratorio. • Se debe mantener el laboratorio limpio y aseado. Por consiguiente al terminar la práctica se debe descontaminar la superficie de trabajo. • Las manos se deben lavar después de manipular material infeccioso, así como al abandonar el laboratorio. • Todo estudiante debe hacer uso de la bata blanca, esto le protegerá la ropa del contacto con reactivos y colorantes empleados en el laboratorio. • Sólo se debe permitir el paso a la zona de trabajo del laboratorio a las personas autorizadas. Durante el trabajo se mantendrán cerradas las puertas del laboratorio. • No se debe pipetear con la boca. • Debe utilizarse siempre un dispositivo de pipeteo • Todas las pipetas deben tener tapones de algodón para reducir la contaminación de los dispositivos de pipeteo. • Todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel con materiales potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes. Los guantes deben ser desechados antes de salir del área de trabajo. • Jamás se debe salir de la misma con los guantes puestos, ni con ellos se debe coger el teléfono.

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• Marque y rotule adecuadamente las láminas. Deben llevar claramente escrito en un lugar visible, el nombre o identificación del grupo de trabajo, practica realizada y fecha. • Una vez concluida la práctica, proceda a organizar el sitio de trabajo, desinfectando el mesón con toallas de papel humedecidas con hipoclorito de sodio o alcohol y dejando tanto el material como el equipo utilizado limpio y en el lugar adecuado. • Es importante conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulación. • Es necesario conocer el manejo de cada uno de los equipos existentes en el laboratorio. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de haberlos calentado con el fin de evitar roturas. • En neveras que no posean un sistema de protección antideflagración no deben almacenarse reactivos que contengan compuestos volátiles inflamables como éter etílico. • Los productos inflamables como gases, alcohol, éter, entre otros deben mantenerse alejados de la llama del mechero. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. • Se debe lavar muy bien la cristalería que se utilice. Preste atención y cuidado al manipular cristalería mojada. • En el laboratorio habrá un recipiente plástico, para cristalería rota y para plásticos que hayan estado en contacto con cultivos de células o virus. Por favor, deseche cada cosa en el envase apropiado. • Mantenga despejadas las áreas. Trate de traer la menor cantidad posible de pertenencias al laboratorio. Coloque sus pertenencias en un área designada o donde no estorben.

Descripción de la práctica

Para el desarrollo de esta práctica el estudiante debe observar el video normas de seguridad en el laboratorio y contestar las preguntas presentadas en el formato de observación del video

Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instr umentos)

Observación del video sobre normas de bioseguridad http://www.unad.edu.co/curso_biologia/videoseguridad.htm

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Software a utilizar en la práctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la práctica.

Computador y observación del video.

Seguridad Industrial

La presentación del video evita riesgos físicos y psicológicos al estudiante.

Metodología

Conocimiento previo para el desarrollo de la práctica: la fundamentación teórica sobre normas de bioseguridad. Forma de trabajo: El estudiante puede observar sólo o en grupo el video desde su computador personal o desde un computador institucional bajo la guía de tutores regionales si tiene esa facilidad. Procedimiento:

Aplicación de cada paso de esta guía en su secuencia.

Sistema de Evaluación

La evaluación se llevará a cabo por medio de las siguientes actividades

1. Presentación del pre-informe sobre los laboratorios, el cual incluye las respuestas a las preguntas sobre observación de videos y las respuestas a los cuestionarios de cada práctica.

2. Evaluaciones parciales presenciales al iniciar la práctica

3. Presentación de informes de prácticas realizadas en el laboratorio, el cual incluye también el pre-informe

3. Resolución de cuestionarios para medir el rendimiento después de las prácticas Informe o productos a entre gar

La respuesta a las siguientes preguntas:

Cuestionario para el pre-informe

1.1 ¿Que es bioseguridad?

1.2 ¿Cuáles serían para usted las normas básicas de bioseguridad en el

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laboratorio de biología?

1.3 ¿Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud? 1.4 Conclusiones

Los puntos del Informe final son:

• Titulo • Objetivos • Resumen de la información teórica • Esquema o diagrama de flujo en orden riguroso por cada observación • Respuesta a cuestionario que encuentre en la guía de práctica. • Conclusiones • Referencias bibliográficas

Rúbrica de evaluación

Cumplimiento de todos los puntos del informe y las evaluaciones= 5.0

Informe completo de los procedimientos de la práctica sin solución completa del cuestionario = 3.5

Informe incompleto de procedimientos y del cuestionario = 2.0

No presentación del informe de procedimientos ni del cuestionario = 0.0

Retroalimentación

A cargo del tutor regional

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PRACTICA No. 02 – Microscopía

Tipo de practica

Presencial x Autodirigida Remota

Porcentaje de evaluación 3,5% Horas de la practica 2,20 Temáticas de la práctica Identificación de componentes y manipulación del

microscopio para observación de muestras previamente preparadas.

Intencionalidades formativas

Propósitos: comprender el funcionamiento del microscopio y el procedimiento para su manipulación correcta.

• Objetivos Señalar los componentes mecánicos y ópticos que constituyen el microscopio.

• Realizar montajes húmedos • Comprobar las propiedades que posee el

microscopio. • Realizar correctamente el manejo del

microscopio óptico • Calcular el diámetro del campo de visión • Comprobar los principios en que se basa la

microscopía óptica. • Desarrollar en trabajo colaborativo el informe de

laboratorio

Metas El estudiante debe explicar con fluidez los tipos de microscopio existentes, los componentes del microscopio óptico, sus poderes y los principios generales de la microscopía.

Competencias Son competencias con énfasis procedimental, referidas a:

1. Capacidad de identificar y manipular los

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componentes del microscopio.

2. Realizar montajes húmedos 3. Preparar y observar muestras biológicas.

4. Comprobar las propiedades que posee el microscopio.


video:_El microscopio parte 1

video:_EL microscopio parte 2

Tipos de Microscopio

El Microscopio óptico simple

Constituido por una lente biconvexa única o lupa que hace converger los rayos luminosos que la atraviesan en un punto denominado foco y a una distancia focal muy corta.

El Microscopio óptico Compuesto

El microscopio se define como un instrumento óptico formado por un sistema de lentes: objetivos y oculares que amplían los objetos extremadamente pequeños para posibilitar su observación. La lente del objetivo proporciona una imagen intermedia ampliada del objeto, es decir, funciona como una lente simple, y la lente del ocular que recoge la imagen dad por el objetivo y la aumenta.

El Microscopio electrónico

Este microscopio en lugar de una fuente de luz, utiliza un haz de electrones que se desplazan en el vacío y en línea recta. Con el microscopio electrónico es posible observar objetos muy pequeños como los virus que no pueden ser resueltos con el microscopio óptico.

En el microscopio óptico en lugar de lentes se emplean campos magnéticos que enfocan los haces de electrones.

El Microscopio óptico Compuesto: componentes

A continuación se describen las partes que lo conforman:

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Figura 1 El Microscopio y sus partes

Los objetivos : están localizados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza metálica, denominada revólver o porta objetivos , que permite cambiarlos fácilmente. Estos generan una imagen real, invertida y aumentada, esta imagen intermedia es captada y sufre una nueva ampliación por el ocular.

Figura 2 Objetivos

Los objetivos más frecuentes son los de 4X, 10X, 40X y 100X aumentos. Este último de 100x se llama de inmersión ya que para su utilización se necesita aplicar aceite de cedro sobre la preparación. Y se utiliza para observar láminas coloreadas completamente secas.

El poder de aumento de cada objetivo se indica en el número grabado en la manga del lente. Generalmente el objetivo de 4X se encuentra marcado por un

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anillo rojo, el de 10X por un anillo de color amarillo, el de 40=x con un anillo de color azul y el de 100X con un anillo de color blanco.

La abertura numérica se encuentra (A.N.) se encuentra grabada en la manga del objetivo, junto a la indicación del aumento.

0,30 En el objetivo de 10X



A medida que aumenta la A.N. disminuyen las dimensiones de la lente frontal, montada en la base del objetivo. La lente del objetivo de 100x tiene el tamaño de una cabeza de alfiler es mayor el poder de resolución. Además a medida que aumenta A.N. es mayor el poder de resolución. Cuanto mayor sea el poder de resolución del objetivo, será más clara la imagen y aumentará la capacidad de poner de manifiesto detalles adyacentes muy cercanos, separándolos y aclarándolos. El poder de resolución máximo de un buen microscopio es aproximadamente 0,25 nanómetros, el poder de resolución del ojo humano es de 0,25 milímetros

Figura 3 Ocular

Los oculares se denominan así porque están muy cercanos al ojo. Su función es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. El poder de aumento del ocular se encuentra marcado en el ocular. Un ocular por 4 aumenta 4 veces la imagen que produce el objetivo. Un ocular por 6 la aumenta 6 veces. Un ocular por 10 la aumenta 10 veces Nunca se deben tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, se deben limpiar muy suavemente con un papel de óptica

El tubo óptico: es una cámara oscura unida mediante una cremallera. Tiene el revólver con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior.

El Brazo : es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie con el tubo.

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Platina

Figura 4 Platina

Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un carro c on un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento que permite mover la preparación de delante hacia atrás o de izquierda a derecha y viceversa. Está dotado de una escala graduada para medir de forma precisa las observaciones.

El condensador : es un sistema de lentes convergentes situadas bajo la platina, su función es la de concentrar la luz generada por la fuente de iluminación hacia la preparación.

Figura 5 Condensador y Diafragma

Diafragma-iris Es una cortinilla que regula la cantidad de luz que entra en el condensador, eliminando los rayos demasiado desviados. Se acciona mediante una perilla. Esta situado debajo de la platina, inmediatamente debajo del condensador. La disminución del diafragma permite visualizar partes de protozoos u hongos se utiliza en las preparaciones frescas

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Figura 6 Tornillos Macrométrico y Micrométrico

Tornillo Macrométrico: Se encuentra en la parte inferior del microscopio. Sirve para alejar o acercar el tubo y la platina moviéndola de arriba hacia abajo y viceversa. Permite un enfoque aproximado o grueso de la muestra Tornillo micrométrico : Generalmente se encuentra incorporado al tornillo macrométrico. Sirve para dar claridad a la imagen al lograr un ajuste fino y preciso, mediante movimiento de la platina hacia arriba y hacia abajo de forma lenta. Ambos tornillos llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.

La fuente de iluminación : se trata de una lámpara halógena de intensidad graduable. Está situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en su superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan la visualización.

Por último definimos el pie o base: sirve como base del microscopio y tiene un peso suficiente para dar estabilidad al aparato. En él se integra la fuente luminosa.

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Poderes o capacidades del microscopio

Figura 7 Poder de aumento

Poder de aumento: Permite magnificar la imagen. Corresponde al aumento (A) dado por la relación: Tamaño de la imagen / tamaño del objeto. La ampliación es igual al producto del aumento del lente ocular por el del objetivo. Cada objetivo y cada ocular tienen grabado el número de veces que aumentan la imagen. Si la imagen del objeto, se hace aumentar 40 veces mediante el objetivo y enseguida 10 mediante el ocular, su aumento total será 10X40= 400

¿Cómo se calcula el aumento de una muestra? Se multiplica el aumento que señala el ocular por el aumento del objetivo dando como resultado el aumento total de la muestra o número de veces en que el objeto se encuentra ampliado con respecto a su tamaño original. Aumento total = aumento del ocular X aumento del objetivo

Figura 8 Poder de definición

Poder de definición

Es la capacidad del microscopio para formar imágenes nítidas y con contornos definidos

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Figura 9 Poder de penetración o profundidad

Poder de penetración o profundidad

Permite visualizar los diferentes planos de una preparación y está dado por el ajuste de precisión que se logra con el tornillo micrométrico

Poder de resolución es la capacidad de presentar dos puntos que se encuentran muy cercanos entre sí como separados, lo cual permite observar detalles de los objetos que con el ojo humano no se podrían ver. El ojo humano no puede ver separados dos puntos cuando su distancia es menor a una décima de milímetro. Con el Microscopio óptico, el poder separador máximo es de 0,2 décimas de micra. Mejora la visión unas 500 veces con relación a la del ojo humano

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Figura 10 Poder de resolución

En la imagen de la izquierda se observan espacios blancos entre la tinta negra que a simple vista no serían vistos

En la imagen de la derecha se observan varias fibras de hilo que a simple vista no serían vistas.

Figura 11 Objetivo donde se visualiza el aumento y la apertura numérica

El poder de resolución depende de la longitud de onda ( λ ) y de la apertura numérica del objetivo (A.N.)

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El Poder de resolución esta dado por la formula:

Poder de resolución= λ

2x A.N.

A.N: relaciona el ángulo de apertura de los rayos de luz, que provienen de la muestra, con el índice de refracción.

Principios generales de microscopía

Principios ópticos

Una lente sencilla (biconvexa) posee dos focos, uno a cada lado de la lente (F y F´). Cuando los rayos luminosos pasan a través de la lente se concentran en el foco. La distancia focal es la distancia entre el centro de la lente y el punto en donde convergen los rayos.

La distancia focal de una lente depende del índice de refracción del material del cual está hecha, y del medio que envuelve la lente. Por eso, es diferente la distancia focal de una lente en el agua, que esta misma en el aire. Como también es diferente la distancia focal de una lente de vidrio en comparación con una construida en plástico.

Figura 12 Distancia Focal http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/lenses/simplethinlens/index.html

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Cuanto más pequeña es la distancia focal de una lente tanto mayor es su aumento. Si el objeto se coloca a distancia mayor del foco, se obtiene una imagen real invertida, mientras que si el objeto se localiza a una distancia menor del foco la imagen será virtual. A medida que se aleja el objeto del foco, la imagen se percibe más pequeña.

Figura 12 Distancia Focal http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/lenses/simplethinlens/index.html

La distancia de trabajo focal de un objetivo, es el espacio que existe entre la superficie de la lente del objetivo y la laminilla, una vez se encuentre enfocada la preparación. A mayor aumento del objetivo la distancia de trabajo disminuye.

Como determinar la posición de los objetos observad os

Los objetos que se observan en el campo microscópico se pueden localizar en

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relación con las manecillas del reloj.

Los objetos que aparecen en la parte inferior del fondo del campo microscópico se encuentran realmente en la parte superior.

Los objetos en el lado izquierdo del campo microscópico se encuentran realmente al lado derecho.

Desplazamiento del objeto

Si se mueve el portaobjetos hacia la derecha, el objeto examinado se desplazará hacia la izquierda. Si se mueve el portaobjetos hacia usted, el objeto examinado se alejará.

Formación de la imagen real invertida

Figura 13 Formación de la imagen invertida

Las imágenes se observan invertidas por las lentes.

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Refracción de la luz

Figura 14 Refracción de la Luz

La distancia focal de una lente depende del índice de refracción del material del cual está hecha y del medio que envuelve la lente.

Cuando los rayos de luz se mueven en un medio homogéneo como el aire, se propagan en línea recta, pero cuando caen sobre la superficie de un medio de diferente densidad, a la del medio en el cual se venía propagando, cambian de dirección y de velocidad a estos cambios se les conoce como refracción de la luz.

Los rayos de luz procedentes de los objetos sumergidos en el agua se desvían al atravesar dos medios de diferente densidad (agua-aire), originando este efecto de refracción. Por ejemplo si introducimos un lápiz en un vaso con agua, el lápiz se verá cortado al pasar del agua al aire.

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En la práctica de microscopía encontramos diferentes medios: aire, agua aceite de inmersión y vidrio, cuyos índices de refracción son 1.0, 1.33, 1.51, .1.54 respectivamente. Al observar una muestra a través del microscopio, los rayos de luz tienen que atravesar estos medios y son refractados cambiando su dirección.

Figura 15 Corrección de la refracción de la Luz

Al aplicar el aceite inmersión se entre el preparado y la lente, aceite de inmersión, que tiene un índice de refracción igual al de la lente y evita la refracción de los rayos luminosos.

Campo de Visión

Figura 16 Campo de visión

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El campo de visión de un microscopio es la zona circular que se observa al mirar la preparación bajo un determinado aumento. Para medir el campo de visión de un microscopio, se debe usar una unidad llamada micra. Una micra equivale a 0,0001 mm; en otras palabras, hay 1000 micras en un milímetro. El diámetro de este campo es su medida.

Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que seguir los siguientes pasos:

Figura 17 montaje de papel milimetrado

a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.

b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos

c) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la línea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual

Figura 18 Papel milimetrado con aumento de 4X

d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la preparación quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observación nítida. Esta distancia s e conoce como distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo

e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel

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milimetrado con el borde del campo de visión.

Figura 18 Papel milimetrado con aumento de 4X

f) Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos líneas es un milímetro) y estimar aproximadamente la fracción sobrante, si la hay. El resultado será el diámetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular).

g) Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores, hay que tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es decir, se verá menos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, el campo será la mitad, si el aumento es el triple, el diámetro será la tercera parte, etc. (inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar un sencillo cálculo matemático para saber el nuevo diámetro.

Así se puede calcular los diámetros de objetos microscópicos, células, amibas, vistos. Recuerde que aunque la escala está marcando mm usted lo leerá en micras .

Tabla 1 Equivalencia mm en micras

Medida en mm (escala del portaobjetos)

Equivalencia en µm

Tamaño de las marcas (divisiones)

1mm 1000 µm grandes

0.1 mm 100 µm medianas

0.01mm 10 µm más pequeñas

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Preparaciones

Las preparaciones pueden ser de varios tipos:

a. Frescas: Son montajes generalmente húmedos. La muestra se observa sin modificar, diluida o concentrada. Permite observar la movilidad de los microorganismos vivos. Se utiliza también para observar procesos como la mitosis, meiosis, la formación d esporas.

Para realizar un montaje húmedo se debe verter una gota de agua o del líquido que contiene los microorganismos en el centro de una lámina portaobjetos y cubrirlo con una laminilla cubreobjetos. Para evitar la evaporación se puede sellar el espacio que hay entre el portaobjetos y el cubreobjetos con vaselina o alguna sustancia similar.

Frescas ligeramente modificadas: Las muestras se pueden diluir con agua o con agua con sal, esta última evita que la presión osmótica del medio no sea demasiado baja. Se puede aplicar un colorante o reactivo para observar mejor las estructuras.

b. Fijadas y teñidas: Se coloca una suspensión homogénea de microorganismos en una gota de agua sobre el portaobjetos y se fija (mediante calor o agentes químicos) y después se tiñen mediante diferentes técnicas. Estas preparaciones se observan sin cubreobjetos y, habitualmente, con objetivos de inmersión.

Manejo del Microscopio

Para realizar las preparaciones se deben alistar los siguientes elementos.

MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR

Bata Blanca, Guantes. Papel absorbente, Paños de cocina Jabón Tapabocas. Papel y lápiz para tomar apuntes Resueltas las preguntas sobre la observación de videos y las que se solicite en cada práctica Agua estancada o de solución de tierra de infusorios Papel milimetrado Hilos de colores Tela de cuadros 2 centímetros Recorte de periódico con la letra asimétrica: Pude ser la letra e o la letra a Láminas portaobjetos, Laminillas (por grupo)

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papel absorbente

MATERIALES QUE LE SERÁN SUMINISTRADOS EN EL LABORAT ORIO

Lamina con extendido coloreada

Microscopio

Aceite de inmersión

Papel de Arroz o de óptica

Alcohol isopropílico

Descripción de la practica

3. Uso del microscopio

Organización del proceso paso a paso

Realización de Montaje húmedo

Tome con una pipeta agua estancada o de solución de tierra de infusorios

Coloque la gota de agua estancada o de solución de tierra de infusorios sobre una lámina porta-objeto

Tome una laminilla cubreobjetos, en posición oblicua, (45 grados) y apoyando una arista sobre la lámina al lado de la gota, déjela caer suavemente.

Tome una gota de

la muestra de agua

estancada

Colóquela sobre una

lámina portaobjetos,

y cúbrala con una

laminilla.

Retire el

exceso de

agua por los

bordes,

usando papel

absorbente.

Observe el

montaje

realizado al

microscopio en

4x, 10x y 40x.

Dibuje sus

observaciones

anotando el

aumento utilizado

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Manejo del microscopio

Encienda el microscopio

Coloque el objetivo de menor aumento 4X

Baje la platina completamente girando el tornillo macrométrico.

Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones

Tome la lámina con la preparación fíjese que esté completamente seca en la parte inferior

Coloque la lámina con la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas.

Procure que la preparación quede centrada, girando el tornillo para desplazamiento del carro móvil

Gire el tornillo macrométrico en sentido contrario a las agujas del reloj para subir la platina hasta el tope. Debe hacerlo mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación.

Cierre o abra el diafragma hasta una posición intermedia, accionando su perilla en sentido contrario a las agujas del reloj para que la luz no sea ni muy brillante ni demasiado tenue.

Inicie la observación con el objetivo de 4X.

Mirando a través de los oculares, separe lentamente el objetivo de la preparación con el tornillo macrométrico en sentido de las agujas del reloj.

Hasta lograr observar la imagen

Cuando se observe algo nítida la muestra, gire el tornillo micrométrico hasta obtener un enfoque fino

Gire el revolver

Coloque el objetivo de 10X

Visualice con el objetivo de 10X y detalle las estructuras

Gire el revólver y visualice con el objetivo de 40X enfoque con el tornillo micrométrico y detalle las estructuras

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Detalle como el campo se reduce y el alga y el protozoo se observan mejor.

Observación con el objetivo de inmersión 100X

Se utiliza para la observación de muestras fijadas, no para muestras frescas

Coloque el objetivo de inmersión de manera que el orificio de la platina quede entre el objetivo de 100X y el de 40X

Suba totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que aplicar el aceite

Coloque una gota de aceite de inmersión sobre la preparación en el círculo de luz

Coloque una lámina coloreada sobre la platina

Ubique el objetivo el objetivo de 100x

Suba la platina lentamente hasta que la lente toque la gota de aceite

Observe la imagen con aumento de 100X

En esta preparación se muestran eosinófilos un tipo de células sanguíneas coloreados con colorante de Wright

Limpie el objetivo de inmersión con un papel especial para óptica y alcohol isopropílico

Deje el objetivo de menor aumento en posición de trabajo

3.1. De la muestra de agua estancada tome una gota y colóquela en una lámina portaobjetos, cubra con una laminilla.

3.2 Retire el exceso de agua por los bordes usando papel absorbente.

3.3 Observe el montaje realizado al microscopio con aumentos de 4x, 10x y 40x.

En el informe debe incluirse el siguiente cuadro que debe registrar las observaciones realizadas.

Tabla 2 Observaciones realizadas

34

OBJETO OBSERVADO

AUMENTO UTILIZADO

DIBUJO ANÁLISIS Y CONCLUSIONES

Agua estancada 4X

10X

40X

3.4 ¿Qué organismos pueden observarse en la gota de agua estancada?

3.5 ¿Son todos de igual tamaño y forma?

3.6 ¿Se observan organismos móviles o estáticos?

4. Comprobación de los poderes o capacidades del m icroscopio óptico

4.1 Realice un montaje húmedo con la letra asimétrica y obsérvela al microscopio siguiendo los pasos anteriores. 4.2 Calcule el aumento del tamaño del objeto observado para cada objetivo del microscopio con el cual le correspondió trabajar.

4.3 ¿Cómo se manifiesta el poder de aumento al observar la letra?

5. Realice un montaje húmedo con un centímetro cuadrado de papel milimetrado y obsérvelo al microscopio 5.1 Calcule el diámetro del campo de visión para un aumento de 4x en un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.

Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que seguir los siguientes pasos:

35

a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.

b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos

C) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la línea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual

d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la preparación quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observación nítida. Esta distancia s e conoce como distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo

e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel milimetrado con el borde del campo de visión.

36

f) Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos líneas es un milímetro) y estimar aproximadamente la fracción sobrante, si la hay. El resultado será el diámetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular).

g) Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores, hay que tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es decir, se verá menos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, el campo será la mitad, si el aumento es el triple, el diámetro será la tercera parte, etc. (inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar un sencillo cálculo matemático para saber el nuevo diámetro.

Así se puede calcular los diámetros de objetos microscópicos, células, amibas, vistos.

5.2 Calcule el diámetro del campo de visión para aumentos de 10X, 40X del mismo cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.

5.3 Compare la anchura del campo visual con cada uno de los tres objetivos

5.4 ¿Con cuál objetivo el campo de visión es mayor con el de mayor o menor aumento?

6. Realice un montaje húmedo con tres hebras de hilo superpuestas y obsérvelas al microscopio

6.1 Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine:

a. ¿Cómo se manifiesta el poder de resolución? b. ¿Cómo se manifiesta el poder de aumento? c. ¿Cómo se manifiesta el poder de definición? d. ¿Cómo se manifiesta el poder de penetración o profundidad?

37

6.2 ¿Cuál es la utilidad del microscopio? 6.3 ¿En qué montaje se observó mejor el poder de penetración?

7. Comprobación de los principios ópticos del micr oscopio

Después de observar la letra asimétrica, Conteste las siguientes preguntas:

7.1 ¿Al observar la letra asimétrica: ¿Se ve invertida, o en la misma posición en

que estaría si se viera a simple vista? ¿Parece como si se viera por un espejo?

7.2 ¿Al mover la preparación hacia la derecha. ¿Hacia dónde se mueve la

imagen?

7.3 ¿Al alejara el portaobjeto o la muestra de usted hacia donde se nueve la

imagen?

7.4 ¿Si la distancia focal es mayor el tamaño del objeto es mayor o menor?

8. Tome la lámina con el extendido coloreado y obsérvela en el microscopio enfocando primero con el objetivo de 10x, luego ponga una gota de aceite de inmersión sobre el extendido y ubique el objetivo de 100x.

Describa los detalles observados con cada objetivo.

Al finalizar el trabajo deje el microscopio en su correcta posición, limpie los objetivos, colóquele la funda y guarde en su puesto.

Al terminar de desarrollar las prácticas usted debe ingresar al foro colaborativo del curso y participar con sus 4 compañeros de grupo colaborativo en la elaboración del informe de laboratorio respondiendo a las anteriores preguntas compare las respuestas de los 5 integrantes y consolídelas en un solo documento que enviarán al foro para la retroalimentación y calificación por parte de su tutor.

Recursos a utilizar en la p ráctica (Equipos / instrumento s)

Observación del video sobre microscopía

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MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR

Bata Blanca, Guantes. Papel absorbente, Paños de cocina Jabón Tapabocas. Papel y lápiz para tomar apuntes Resueltas las preguntas sobre la observación de videos y las que se solicite en cada práctica Agua estancada o de solución de tierra de infusorios Papel milimetrado Hilos de colores Tela de cuadros 2 centímetros Recorte de periódico con la letra asimétrica: Pude ser la letra e o la letra a Láminas portaobjetos, Laminillas (por grupo) papel absorbente

MATERIALES QUE LE SERÁN SUMINISTRADOS EN EL LABORAT ORIO

Lamina con extendido coloreada

Microscopio

Aceite de inmersión

Papel de Arroz o de óptica

Alcohol isopropílico

Software a utilizar en la practi ca

Simulador de Microscopía

Metodología

Previo al desarrollo de la práctica: leer detenidamente la fundamentación teórica relacionándola con los objetivos y metas de aprendizaje Procedimiento: seguir las actividades del video y presentar la evaluación.

Al terminar de desarrollar las prácticas usted debe ingresar al foro colaborativo del curso y participar con sus 4 compañeros de grupo colaborativo en la elaboración del informe de laboratorio respondiendo a las anteriores preguntas compare las respuestas de los 5 integrantes y consolídelas en un solo documento que enviarán al foro para la retroalimentación y calificación por parte de su tutor.

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Se calificará el informe del laboratorio con las respuestas al cuestionario:

Preguntas adicionales para el informe final

2.15 Observe cuál es el valor de los oculares_________________

2.16 Observe cual es el valor de cada uno de los objetivos_____,______,________,______

2.17 Calcule el aumento logrado para cada objeto observado en su práctica de laboratorio (Al multiplicar el valor del ocular por el valor del objetivo se obtiene el aumento del tamaño del objeto que observamos).

Informe o productos a entregar

Trabajo colaborativo y presentación de informe con las respuestas al cuestionario


Debe seguir estrictamente las instrucciones dadas en el procedimiento para la práctica y entregar el informe al tutor respectivo.

Retroalimentación

El tutor le entregará oportunamente tanto la calificación como la retroalimentación sobre logros y errores del informe.

7. FUENTES DOCUMENTALES

Curso de biología. UNAD.

Guía de laboratorio de biología. UNAD.

40

PRACTICA No. 03 – LA CÈLULA

Tipo de practica Presencial X Autodirigida Remota Otra ¿Cuál

Porcentaje de evaluación 3,5% Horas de la practica 2, 20 Temáticas de la práctica Intencionalidades formativas

Propósito(s)

Al terminar el laboratorio sobre la célula, el estudiante estará capacitado para:

• Elaborar montajes de células

• Diferenciar células vegetales de células animales a través del microscopio

• Identificar orgánulos celulares con base en la capacidad de ampliación del microscopio.

• Describir las diferentes formas y tamaños de las células

• Determinar la relación que existe entre estructura y función

• Observar la ciclosis o movimiento del citoplasma

Objetivo(s)

• Describir las diferentes formas y tamaños de las células

• Identificar las diferentes estructuras y organelos que posee una célula, con base en la capacidad de ampliación del microscopio óptico.

• Describir las diferentes formas y tamaños de una célula

• Señalar las diferencias fundamentales entre

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una célula animal y una vegetal • Reconocer que una célula puede constituir un

organismo. • Describir la ciclosis o movimiento del

citoplasma

Meta(s)

Dominio del procedimiento para observación celular al microscopio e identificación precisa de organelos celulares.

Competencia(s)

• Capacidad de manejo procedimental del microscopio para la observación celular

• Capacidad de identificar, dibujar y explicar el rol de los organelos celulares observados al microscopio


Observar los siguientes videos:

Video: Célula parte 1 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_celula-1.htm

Vídeo: Célula parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_celula_2.htm Leer del módulo:

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/tcelular.htm http://www.unad.edu.co/curso_biologia/esfunorganeuc.htm

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/tejorgsist.htm#ancla2

42

Descri pción de la prá ctica

Antes de iniciar las prácticas usted debe haber leído el capítulo correspondiente en el curso de biología, observado los videos de preparación previa y resuelto las preguntas sobre la observación de videos y lo que se solicite en cada práctica. Recursos a utilizar en la práctica (Equipos / instr umentos)

MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR:

Bata Blanca, Guantes. Papel absorbente, Paños de cocina, Jabón, Láminas y laminillas Tapabocas. Papel y lápiz para tomar apuntes

Bulbo de cebolla Allium cepa, Papa, Tomate, Hojas de Elodea, Laminas portaobjetos y Laminillas, Cuchilla o bisturí, Pinza, Tijeras pequeñas, hisopos

MATERIALES QUE LE SERÁN SUMINISTRADOS EN EL LABORAT ORIO:

1 caja de petri, Aguja o asa recta, Algodón, Alcohol, Lancetas, Lugol Solución salina, Aceto carmín, Azul de metileno, Safranina, Colorante de Wright Microscopio

Software a utilizar en la práctica u otro tipo de r equerimiento para el desarrollo de la práctica.

Metodología

Observación de tejido epidermal de cebolla 1. Tome la cebolla y sobre la epidermis de la misma utilizando la cuchilla, haga un corte

2. Levante suavemente con la pinza una capa delgada y transparente de la parte interna, éste es el tejido epidermal.

3. Extiéndalo sin invertirlo sobre una lámina porta objetos.

4. Coloque una gota de lugol sobre el tejido epidermal. O si prefiere adicione una gota de agua.

5. Deje actuar el colorante lugol durante 5 minutos.

6. Acerque una laminilla, en posición oblicua, y apoyando una arista sobre la lámina al lado de la gota, déjela caer suavemente sobre la gota.

43

7. Enseguida proceda a la observación de la preparación con pequeño aumento de 10x. Anote sus observaciones

8. A continuación revise la preparación con el objetivo de 40x .Anote sus observaciones

Observación de tejido parenquimatoso en un corte tr ansversal de papa:

Elabore un montaje para observación del tejido parenquimatoso en un corte transversal de papa:

1. Tome el bisturí y haga un corte transversal de la papa, este corte debe ser tan fino que la apariencia de la porción que obtenga sea transparente.

2. En una caja de petri con agua, enjuague el corte para sacar el exceso de almidón, contenido en las células de los tejidos de la papa.

3. Elabore un montaje húmedo como se indicó anteriormente.

4. Observe con el objetivo de 10x. Anote sus observaciones

5. Observe el montaje con el objetivo de 40x

Observación de tejido epidermal y parénquima clorof ílico en hoja de Elodea

Para observación de tejido epidermal y parénquima clorofílico utilice una hoja de Elodea , planta acuática común en lagos y acuarios

1. Tome con la pinza una ramita de Elodea y corte con las tijeras una hojita. 2. Extiéndala sin invertirla sobre una lámina portaobjetos, adicione una gota de agua y cúbrala con una laminilla.

3. Observe detenidamente a través del microscopio con aumento 10x, 40x Anote sus observaciones

4. Observe el movimiento del citoplasma

Observación de cromoplastos en pulpa de tomate

Para continuar realice un montaje con pulpa de tomate e identifique los cromoplastos:

1. Con una hoja de afeitar o bisturí, haga una incisión y separe la cáscara. 2. Extraiga una pequeña porción de pulpa con el extremo de una aguja y espárzalo sobre un porta objetos seco. No adicione agua.

44

3. Coloque encima un cubreobjetos y comprima suavemente con los dedos hasta obtener un completo aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate.

4. Identifique las células con el objetivo de 10X 5. Seleccione el mejor grupo de células y luego pase al objetivo de 40x. Anote sus observaciones

Observación de células escamosas epiteliales

1. Coloque una pequeña gota de solución salina en el centro del portaobjetos. 2. Con un palillo raspe suavemente el interior de su mejilla, de abajo hacia arriba.

3. Coloque el producto de este raspado en la gota de solución salina.

4. Coloree con una gota de acetocarmin, azul de metileno o safranina.

6. Coloque el cubre objetos y observe al microscopio con objetivo de 40x y 100x e identifique las células de forma irregular

Anote sus observaciones

Observación de células sanguíneas

A continuación realice un extendido para observación de células sanguíneas:

1. Desinfecte con un algodón humedecido en alcohol la punta del dedo anular o índice, deje secar el alcohol y con la lanceta, haga una punción en la yema del dedo.

2. Coloque una pequeña gota en una lámina portaobjetos limpia y seca. 3. Coloque otra lámina en ángulo agudo sobre la primera, acérquela a la sangre

y deslice suavemente en forma continua hasta formar una capa o frotis delgado.

4. Deje secar la preparación al medio ambiente. 5. Una vez seca la lamina aplique sobre el frotis el colorante de Wright y déjelo

actuar durante cuatro minutos. Con este procedimiento el colorante fijará la preparación.

6. Lave el exceso de colorante con agua de la llave y deje secar la lámina verticalmente.

7. Observe al microscopio con el objetivo de pequeño y mediano aumento e identifique los glóbulos rojos, leucocitos y plaquetas.

8. Posteriormente observe la preparación con el objetivo de 100X y detalle la forma de los eritrocitos, plaquetas y neutro filos. Anote sus observaciones

Formato de observaciones y datos importantes.

Epidermis de Cebolla.

45

Dibuje lo que observa y describa cómo son las células

Parénquima de papa.


10X sin colorante

10 X con colorante

40 X sin colorante 40 x con colorante

10X sin colorante 10 X con colorante

40 X sin colorante 40 x con colorante

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Epidermis y parénquima de Elodea.


Cromoplastos en pulpa de tomate.


Células escamosas epiteliales.


Células sanguíneas


10X 40 X

10X 40 X

40X

100 X

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Conclusiones:

Deben estar relacionadas con la diferencia entre las células epidérmicas vegetales y parenquimatosas vegetales; diferencias entre las células animales y vegetales, (forma tamaño, distribución, entre otros)

40X

100 X



1. Presentación del pre-informe sobre los laboratorios, el cual incluye las respuestas a las preguntas sobre observación de videos y las respuestas a los cuestionarios de cada práctica. Los puntos del pre-informe son:

• Titulo • Objetivos • Resumen de la información teórica • Esquema o diagrama de flujo en orden riguroso por cada observación • Respuesta a cuestionario que encuentre en la guía de práctica

2. Evaluaciones parciales presenciales al iniciar algunas prácticas

3. Presentación de informes de prácticas realizadas en el laboratorio, el cual incluye también el pre-informe

3. Resolución de cuestionarios para medir el rendimiento después de las prácticas


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Aspectos mínimos que debe llevar un informe final (que se entregará al tutor tradicional para su calificación)

1. Titulo

2. Objetivos

3. Resumen de la información teórica

4. Esquema de pasos para las observaciones en el laboratorio o diagrama de flujo en orden riguroso por cada observación

5. Respuesta a cuestionario de cada práctica

5. Descripción detallada de las observaciones

6. Conclusiones

7. Referencias bibliográficas


Informe completo con todos los cuestionarios resueltos = 5.0

Informe con todos los procedimientos seguidos y cuestionario parcialmente resuelto = 3.5

Informe incompleto en procedimientos y en solución del cuestionario = 2.0

Ausencia de informe = 0.0

Retroalimentación


49

PRACTICA No. 04 – DIVERSIDAD MICROBIANA


Porcentaje de evaluación 3,5 % Horas de la practica 2, 20 Temáticas de la práctica Intencionalidades formativas

Propósito(s)

Aprender a identificar microorganismos de las diversas clases taxonómicas.

Objetivo(s)

• Reconocer en placas de cultivo diferentes tipos de microorganismos, en especial Colonias de bacterias y hongos.

• Conocer y aplicar la técnica de tinción de Gram

• Identificar bacterias Gram positivas y Gram negativas

• Observar microscópicamente bacterias con endosporas (Bacillus)

• Observar microscópicamente hongos. • Observar microscópicamente levaduras. • Observar microorganismos de fermentación

ácido láctica y fermentación alcohólica a partir del kumis o yogurt.

• Observar protozoarios y algas en muestras de agua

Meta(s)

Identificación correcta de los microorganismos observados al seguir las instruciones de la guía de laboratorio.

Presentar el informe correspondiente

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Competencia(s)

• Montar muestras de microorganismos para observarlas al microscopio

• Reconocer en diferentes habitats y sustrator la diversidad biológia de microorganismos

• Realizar frotis fijo con tinción de Gram


Leer el capítulo sobre microorganismos, en el curso virtual de biología de UNAD

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/intromicrorg.htm

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/bacterias.htm

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/protozoos.htm

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/algas.htm

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/hongos.htm


A través de esta práctica el estudiante podrá realizar una descripción macroscópica de las colonias bacterianas y de hongos, de microorganismos como protozoos y micro algas, además de adquirir destrezas en técnicas de tinción.


Material suministrado

Cultivos de diversos hongos y bacterias en cajas de petri, Cultivo de Bacillus

Levadura de panadería, Solución salina, Agua destilada

Coloración de Gram (cristal violeta, lugol, alcohol acetona y safranina)

Verde de Malaquita, Safranina 0.5%, Lactofenol, Azul de Metileno, Rojo neutro

Alcohol o Metanol, Aceite de inmersión, Mechero, Asa recta y de argolla

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Papel de filtro, Tubo de ensayo, Papel de filtro, Tubo de ensayo, Microscopio

Varilla de vidrio

Material que deben llevar

Yogur casero o probiótico, Agua estancada , Agua azucarada, Tajada de pan


Metodología

Entre los principales grupos de microorganismos se encuentran: bacterias, hongos, algas y protozoarios.

PROCEDIMIENTO:

1. Observación macroscópica de colonias;

Realice una descripción macroscópica de las colonias bacterianas y de hongos que le son entregadas en las cajas de petri. Haga un cuadro donde describa la forma (puntiforme, circular, rizoide, irregular y filamentosa), el borde (entero, ondulado o filamentoso), la elevación (plana, elevada, convexa, crateriforme y acuminada) y la superficie (lisa o rugosa, mate o brillante, seca o cremosa, invasiva o superficial)

Colonia Forma Borde Elevación Superficie

COLORACION DE GRAM desarrolle el siguiente diagrama de flujo antes de su ingreso al laboratorio

52

A partir de una de las colonias de los cultivos dados realice un frotis de la siguiente manera:

1. Tome una lamina portaobjetos limpia y en ella coloque una gota de solución salina.

2. Con un asa previamente esterilizada a la llama del mechero, obtenga una pequeña muestra de las colonias observadas. Mézclela en la gota de solución salina que coloco en el portaobjetos.

3. Déjela secar al aire libre y fíjela pasándola por la llama del mechero.

Posteriormente proceda a colorear con la tinción de gram de la siguiente manera:

1. Cubra la preparación con cristal violeta y déjela actuar por 1 minuto. Lave con agua corriente.

2. Cubra la preparación con lugol y déjelo actuar por 1 minuto. Lave con agua corriente.

3. Agregue alcohol acetona y déjelo actuar por 5 segundos. Lave con agua corriente.

4. Adicione safranina y déjela actuar por 30 segundos. Lave con agua corriente y ponga a secar la lámina.

5. Ubique la lámina en el microscopio, localice las bacterias con el objetivo de menor aumento y observe en detalle a mayor aumento.

6. Identifique las células observadas. Anote sus observaciones.

OBSERVACION DE ESPORAS desarrolle el siguiente diag rama de flujo antes de su ingreso al laboratorio

A partir del cultivo en caja de petri marcado como Bacillus, prepare un extendido del microorganismo.

1. Fije por calor y cubra todo el portaobjetos con una solución de verde de Malaquita.

2. Caliente hasta emisión de vapores y siga dicho calentamiento durante 3 minutos.

3. Lave con agua y cubra con solución de safranina. Deje actuar 30 segundos. Lave con agua y deje secar la lámina.

4. Enfoque con el objetivo de inmersión y observe los bacilos y en su interior las esporas ubicadas en un extremo. Anote sus observaciones.

BACTERIAS DE LA CAVIDAD BUCAL desarrolle el siguien te diagrama de flujo antes de su ingreso al laboratorio

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1. Prepare una lámina portaobjetos limpia y sin grasa.

2. Tome un escotillón desechable, páselo por el borde de la encía en la parte que hace contacto con los dientes.

3. La muestra extraída con el escotillón colóquela sobre una lámina portaobjetos.

4. Deje secar por sí sola la lámina durante unos minutos con el fin de definir el frotis.

5. Pase lentamente el portaobjetos a través de la llama del mechero, con esto se fija el frotis.

6. Deje enfriar y coloree con la tinción de Gram como se indicó anteriormente.

7. Deje secar la lámina y ubique las células con el objetivo de menor aumento y luego observe con el objetivo de inmersión.

8. Tenga en cuenta que las bacterias Gram positivas toman coloración violeta y las Gram negativas coloración roja. Anote sus observaciones.

OBSERVACION DE MOHOS Desarrolle el siguiente proced imiento en casa 8 días antes del laboratorio

1. Prepare una solución de agua azucarada y agregue 20 gotas de esta a una tajada de pan, déjela por espacio de media hora al aire libre.

2. Almacénela en una bolsa plástica y ciérrela. Guárdela en un lugar oscuro a 30°C y obsérvela diariamente.

3. Cuando el pan esté enmohecido, coloque en un portaobjetos una pequeña gota de

Prepare una solución de

agua azucarada y agregue

20 gotas de esta a una

tajada de pan, déjela por

espacio de media hora al

aire libre.

Almacene en una bolsa

plástica cerrada.

Guárdela en un lugar

oscuro a 30°C y

obsérvela diariamente.

Selle herméticamente y

transporte al laboratorio el día

54

solución de lactófenol.

4. Luego con un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2 cm toque la superficie del pan enmohecido.

5. Pegue la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.

Elimine el colorante sobrante con un papel de filtro.

6. Observe al microscopio con objetivo de 40X e identifique el micelio y las hifas.

El procedimiento anterior también puede hacerlo con frutas u hortalizas dañadas que presenten en su superficie mohos. Anote sus observaciones.

OBSERVACION DE LEVADURAS desarrolle el siguiente di agrama de flujo antes de su ingreso al laboratorio

1. Tome un poco de levadura de panadería y colóquela en un tubo de ensayo que contenga agua con azúcar.

2. Incube a 37°C durante 15 minutos esto producirá el desarrollo de las levaduras.

3. Con una varilla de vidrio tome una gota del cultivo anterior y extiéndala en el portaobjetos. Deje secar al aire

4. Adicione dos gotas de azul de metileno y deje actuar durante tres minutos

5. Coloque una laminilla y elimine el exceso de colorante con papel de filtro.

6. Observe al microscopio e identifique las levaduras por su forma ovalada.

Observe que algunas presentan gemaciones. Anote sus observaciones.

BACTERIAS DEL YOGUR desarrolle el siguiente diagra ma de flujo antes de su ingreso al laboratorio

1. Tome una lámina portaobjetos y en ella coloque una gota de agua destilada.

2. Con un asa de argolla, obtenga una gota de yogur y mézclela con la gota de agua colocada en el portaobjetos.

3. Deje secar completamente la lámina. Pásela 3 veces por la llama del mechero. Tenga cuidado de no sobre calentar la muestra.

4. Cubra la preparación con alcohol o metanol por unos segundos para eliminar la parte grasa.

55

5. Escurra el alcohol y deje secar al aire. Luego cubra el extendido con azul de metileno durante 2 minutos. Lave el exceso de colorante y deje secar.

6. Enfoque el microscopio con el objetivo de mayor aumento e identifique los estreptococos y los lactobacilos. Anote sus observaciones.

BACTERIAS DEL SUELO desarrolle el siguiente diagram a de flujo antes de su ingreso al laboratorio

1. Entierre horizontalmente un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardín, déjela allí durante 5 días.

2. Transcurrido este tiempo saque la lamina y fíjela pasándola tres veces por la llama del mechero.

3. Limpie los bordes del portaobjetos y la parte que no va a teñir.

4. Luego coloree la lamina con safranina al 0.5% durante 1 minuto. Lave el exceso de colorante y deje secar.

5. Observe al microscopio con el objetivo de mayor aumento y anote sus observaciones.

ALGAS Y PROTOZOOS desarrolle el siguiente diagrama de flujo antes de su ingreso al laboratorio

1. Tome una muestra de agua estancada con un cuentagotas y deposítela en el centro de un portaobjetos. Coloque un cubreobjetos.

2. Observe la preparación al microscopio. Mueva lentamente la preparación, e identifique las algas y los protozoos.

3. Añada unas gotas de rojo neutro por el borde del cubre para que penetre en la preparación y puedas ver los microorganismos, que por su transparencia son difíciles de observar.

5. Anote sus observaciones.



1. Presentación del pre-informe sobre los laboratorios, el cual incluye las respuestas a las preguntas sobre observación de videos y las respuestas a los cuestionarios de cada práctica.

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2. Evaluación parcial presencial al iniciar la práctica

3. Presentación del informe de prácticas realizadas en el laboratorio, el cual incluye también el pre-informe

3. Resolución de cuestionarios para medir el rendimiento después de las prácticas


Cumplimiento de todos los puntos del informe y la evaluación = 5.0




Diligenciamiento de los formatos para cada uno de los diagramas:

FORMATO #1

bacterias tinción

Enfoque

40X

Enfoque 100X

forma Gran (-)

Gram (-)

Observaciones

FORMATO #2

hongos tinción

Enfoque

40X

Enfoque 100X

Estructuras nombre Observaciones

57

FORMATO #3

levaduras tinción

Enfoque

40X

Enfoque 100X

Reproducción Observaciones

(Utilice lápices de colores)

• Análisis de resultados • conclusiones • bibliografía


58

PRACTICA No. 05 – MITOSIS Y MEIOSIS



Propósito(s)

Aprender a diferenciar los periodos del ciclo celular

Objetivo(s)

• Manejar correctamente los materiales y reactivos específicos de la práctica.

• Identificar cada uno de los periodos que comprende el ciclo celular

• Relacionar cada cambio presente en las células meristemáticas, con las diferentes fases de la mitosis.

• Reconocer los procesos de la meiosis con base en el material suministrado.

Meta(s)

Poder explicar el ciclo celular con ilustraciones de observaciones reales al microscopio

Competencia(s)

Dominio de la observación celular en sus diferentes ciclos de mitosis y meiosis


59

División celular contenido del módulo:

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/divcelular.htm

Videos

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis1.htm

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis2.htm


El estudiante observará el ciclo celular con ilustraciones de observaciones reales al microscopio


SE LE SUMINISTRARÁ:

Microscopio , aceite de inmersión, Pipeta Pasteur, Vaso de precipitado , cubeta de disección, Aceto orceina, Eosina

Metanol, Bisturí, micropreparados que ilustran los procesos de mitosis y meiosis


Metodología

Desarrolle el siguiente diagrama de flujo antes de su ingreso al laboratorio ;

Coloque la preparación al microscopio e inicie la observación con el objetivo de 10x e identifique las células, cambie al objetivo de 40X para detallar las células. Observe los núcleos y cromosomas en color rosáceo – morado. Ubique el objetivo de 100 x y anote sus observaciones diferenciando cada uno de los aumentos mencionados.

Detenidamente y distinga células en interfase, en división celular, las diferentes etapas de la mitosis y meiosis, no olvide hacer dibujos de lo observado.

60

Para el desarrollo de esta práctica utilice bulbos de cebolla, Allium cepa y realice preparaciones con la raíz de material fijado y teñido, una vez obtenidos los extendidos de células obsérvelos al microscopio óptico.

1. Con ayuda de una pinza retire la capa externa marronacea o rosácea y lave con abundante agua, esto se realiza para eliminar restos de sustancias con las que frecuentemente han sido tratadas para inhibir o retardar la germinación de las raicillas.

2. Llene un vaso de precipitados con agua y coloque un bulbo de cebolla sujeto con dos o tres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua.

3. Póngalo a germinar a 25°C o a temperatura ambien te durante 3 días, al cabo de estos aparecerán numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm. de longitud.

4. Revise diariamente y procure que la corona no se deseque para lo cual es necesario rellenar con agua cada 24 horas.

5. Cuando las raíces tengan entre 0.5 y 1 cm de longitud, realice cortes de raíz de aproximadamente 2 – 3 mm a partir del ápice.

6. colóquelas en una lámina portaobjetos. Adiciona una gota del colorante aceto orceina o eosina.

7. Coloque el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Con ayuda de la punta de una lanceta, de unos golpecitos sobre el cubre objetos sin romperlo, de modo que la raíz quede extendida.

8. Use papel de filtro para retirar el exceso de colorante realice una suave presión, evitando que él cubre objetos resbale. Si la preparación está bien asentada no hay peligro de rotura por mucha presión que se realice.

9. Selle todos los bordes del cubre objetos con esmalte transparente, para evitar que se seque y de esta manera conservar la preparación durante varios días.

10. Coloque la preparación al microscopio e inicie la observación con el objetivo de 10x e identifique las células.

11. Cambie al objetivo de 40X para detallar las células. Observe los núcleos y cromosomas en color rosáceo – morado.

12. Ubique el objetivo de 100 x y anote sus observaciones anotando las diferencias en cada uno de los aumentos mencionados.

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13. Trate de observar detenidamente las preparaciones y distinga células en interfase y células en división y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosis

Realice dibujos de lo observado.

Observaciones

Coloque la preparación al microscopio e inicie la observación con el objetivo de 10x e identifique las células.

Escriba alguna anotación importante

Cambie al objetivo de 40X para detallar las células. Observe los núcleos y cromosomas en color rosáceo – morado. Dibújelos

Escriba alguna anotación importante

Ubique el objetivo de 100 x y anote las diferencias en cada uno de los aumentos mencionados.

Trate de observar detenidamente las preparaciones y distinga células en interfase y células en división y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosis

Realice dibujos de las fases que distinga, tenga en cuenta la posición de los cromosomas para identificar las fases.

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Conclusiones. REFERIDAS A LOS OBJETIVOS


Evaluaciones de los conceptos previos, presentadas únicamente durante el desarrollo de las prácticas

Se calificará el informe final con las observaciones solicitadas en esta guía en la metodología. El Informe Final, entregado al culminar el último encuentro

Evaluación final, sobre todos los conceptos trabajados en las prácticas.


PREINFORME

Antes de la práctica, cada estudiante debe desarrol lar la siguiente consulta bibliográfica :

Defina y explique de manera grafica la mitosis y meiosis, detallando sus etapas y las células en las que se presenta este proceso

Los gráficos y las descripciones de las observaciones pedidas, como parte del informe de la práctica.

INFORME

En el informe debe incluirse el siguiente cuadro que debe registrar las observaciones realizadas.

Dibuje en su formato 2 o 3 de las células observadas, señalando en el dibujo a que tipo de tejidos pertenecen e identifique lo siguiente.

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OBJETO OBSERVADO

AUMENTO UTILIZADO

DIBUJO ANÁLISIS Y CONCLUSIONES

Responda las siguientes preguntas

a. ¿Qué etapas de la meiosis y mitosis observo? b. ¿Qué proceso se esta desarrollando en las etapas observadas? c. ¿Que tipo de células se están observando? d. ¿Cuantos cromosomas poseen las células en mitosis? e. ¿Cuántos cromosomas poseen las células en meiosis?






Retroalimentación


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PRACTICA No. 06 – TEJIDOS VEGETALES

Tipo de practica Presencial x Autodirigida Remota Otra ¿Cuál


Propósito(s)

Esta práctica permite a los estudiantes comprobar la diversidad y especialización de los tejidos vegetales , además de adquirir la habilidad para realizar cortes a mano alzada

Objetivo(s)

• Comprobar la diversidad y especialización de las células vegetales y sus agrupaciones en tejidos.

• Agudizar el sentido de la observación de las estructuras vegetales, aspecto importante para comprender la morfología vegetal.

Meta(s)

Diferenciar los tipos de tejido vegetal

Competencia(s)

Adquirir habilidad en la elaboración de cortes a mano alzada y en coloración


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Módulo de biología UNAD en la parte correspondiente a tejidos vegetales.

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/tejorgsist.htm#ancla2

http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_Tej_vegetales.htm


Esta práctica permite a los estudiantes comprobar la diversidad y especialización de los tejidos vegetales , además de adquirir la habilidad para realizar cortes a mano alzada

Recursos a util izar en la práctica (Equipos / instrumentos)

Debe llevar:

Hoja de lirio, Hoja de olivo, Hoja de Elodea, Rama de hiedra, Bulbo de cebolla

Tomate, Papa, Pera, Raíces de cebolla, Lápiz de madera de cedro

Bisturí o cuchilla, Pinza, Láminas portaobjetos y Laminillas

Se le suministrará :

Fluoroglucina, Acido clorhídrico, Verde brillante, microscopio


Metodología

En esta práctica observe a través del microscopio la morfología de los distintos tejidos vegetales.

Antes de la práctica, cada estudiante debe desarrol lar la siguiente consulta bibliográfica :

1. Describa los diferentes tipos de tejidos vegetales explicando su función. 2. Nombre las diferencias en las plantas vasculares y no vasculares y entre plantas dicotiledóneas y monocotiledones

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1. TEJIDO PROTECTOR

Desarrolle el siguiente diagrama de flujo antes de su ingreso al laboratorio ;

1. Tome una hoja de lirio y con un bisturí haga una pequeña incisión en el limbo

2. Con ayuda de una pinza levante la capa externa para obtener una lámina fina.

3. Coloque la lámina fina obtenida en el portaobjetos y agregue una gota agua.

4. Enfoque al microscopio con objetivo de 10x y 40x. Identifique los ostiolos y los cloroplastos. Anote sus observaciones.

Observe otro ejemplo de tejido epidérmico realizando un montaje con cebolla como se explico en la práctica de la célula.

Observe al microscopio con el objetivo de menor aumento e identifique la forma de las células epiteliales. Con el objetivo 40X identifique los nucleolos.

Otro ejemplo de tejido protector puede observarlo en la hoja de olivo.

Raspe el envés de una hoja de olivo.

Coloque el raspado en una lámina y adicione una gota de agua.

Observe los pelos escamiformes con forma de sombrilla. Anote sus observaciones

TEJIDO PARENQUIMÁTICO DE ALMACENAMIENTO.

Desarrolle el siguiente diagrama de flujo antes de su ingreso al laboratorio

Realice un montaje con pulpa de tomate como se explicó en la práctica de la célula. Observe al microscopio y anote sus observaciones.

Realice un montaje con el raspado de papa como se indico en la práctica de la célula. Observe al microscopio y anote sus observaciones.

Realice un montaje con la hoja de Elodea como se indico en prácticas anteriores. Observe al microscopio y anote sus observaciones.

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TEJIDOS MECÁNICOS O DE SOSTÉN.


Raspe con un cuchillo o bisturí una parte pequeña de mesocarpio de pera y colóquela en un portaobjetos.

Cubra la muestra con fluoroglucina durante 2 minutos.

Elimine el exceso y cubra con ácido clorhídrico.

Coloque una lámina portaobjetos y observe el microscopio con objetivo de 40x. Anote sus observaciones.

TEJIDOS CONDUCTORES


Realice un corte longitudinal y fino de un lápiz de madera de cedro. Coloque las virutas en un portaobjetos, adicione agua. Coloque una laminilla y observe al microscopio.

Realice finos cortes perpendiculares del pecíolo de la hiedra, a la dirección del tallo; mínimo cuatro cortes.

Deposítelos en una lámina y adicione verde brillante durante 5 minutos. Lave con agua corriente.

Cubra la lámina con fluoroglucina durante 2 minutos.

Transcurridos los 2 minutos elimine el exceso de colorante.

Cubra con ácido clorhídrico, coloque un cubreobjetos y observe al microscopio. Anote sus observaciones.

TEJIDO MERISTEMATICO


Realice un montaje con la raíz de la cebolla como se indico en la práctica de

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mitosis. Observe las células que se encuentran en mitosis.


Se calificará el informe Informe o productos a entregar

INFORME:

EN EL INFORME DEBE INCLUIRSE EL SIGUIENTE CUADRO QUE DEBE REGISTRAR LAS OBSERVACIONES REALIZADAS.

OBJETO

OBSERVADO

AUMENTO

UTILIZADO

DIBUJO ANÁLISIS Y

CONCLUSIONES

Además en el informe se deben responder as siguientes preguntas:

MATERIAL BIOLÓGICO: OBSERVACIÓN DE TEJIDOS

Dibuje en su formato 2 o 3 de las células observadas, señalando en el dibujo a que tipo de tejidos pertenecen e identifique lo siguiente.

¿Qué forma tiene las células observadas? ¿Señale las partes de cada una de las células observadas e identifíquelas su nombre. ¿Defina claramente la función de cada tejido?



Informe completo de los procedimientos de la práctica sin solución completa del

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cuestionario = 3.5



Retroalimentación


Documents

201101biologia Guia Laboratorio