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PESQUIZA E IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES

3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

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Page 1: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

PESQUIZA E IDENTIFICACIÓN DE

ANTICUERPOS IRREGULARES

Page 2: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

ALOINMUNIZACIÓN

Diagnóstico de aloinmunización

Exposición a antígenos eritrocitarios

30 sistemas / 257 antígenos

(DANIELS, 2005)

Page 3: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

(MOREIRA et al, 1996; GIBLETT, 1961)

Inmunogenicidad del antígeno

D > K > c > E > Fya > Jka Dia (?!)

Origen étnica

Frecuencia de los antígenos

Frecuencia de las transfusiones

ALOINMUNIZACIÓN

Page 4: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

•Características del

anticuerpo

Temperatura de reactividad

“in vitro”

Naturaleza (natural o

inmune)

Ativación de C “in vitro”

Clase Ig

Autoinmune

Características del antígeno

Sensibilidad a enzimas

proteolíticas

Efecto de dosis

Imunogenicidad

Forma de coneción y

expresión en la membrana,

ex: Dombrock e Wrb-GPA.

Genética, ej:

FYB x FY

CARACTERÍSTICAS DE LOS ANTÍGENOS Y

ANTICUERPOS

Page 5: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Antígeno Frecuencia %

Cauc. africanos

D 85 92

C 68 27

c 80 96

E 29 22

e 98 98

Características

Anticuerpos Naturales, inmunes

(IgG e IgM)

RT / DHRN

autoanticuerpos

T.A., AGH e ENZIMA

Efecto de dosis

Genes RHD e RHCE (cromosoma 1)

2 Proteínas altamente homólogas

Proteínas intergrales con 417 aa,

48 antígenos

Antígenos mas comunes: D, C, c, E, e

417 aa

NH2

COOH

C/c

103ser>pro

E/e

226pro>ala

Sistema Rh (004-ISBT)

Page 6: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Gen KEL (cromosoma 7)

Proteína: 732 aa

24 antígenos

Características

Clase IgG, raramente IgM

activa complemento

RT / DHR

AGH

Imunogenicidad

COOH

NH2

K/k (Met>Thr)193

Kpa/Kpb (Trp/Arg)281

Jsa/Jsb (Pro/Leu)597antígenos Frecuencia%

Cauc. africanos

K 9 2

k 100 100

Kpa 2 <1

Kpb 100 100

Jsa <1 20

Jsb 100 99

Sistema Kell (006-ISBT)

Page 7: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Gen FY (cromosoma 1)

Proteína: 338 aa

6 antígenos

Características:

Clase IgG, raramente IgM

Activa complemento

RT / DHR

AGH

Fya e Fyb (sensíbles a enzimas)

antígenos Frequencia %

Cauc. africanos

Fya 66 10

Fyb 83 23

Fy3 100 32

El fenotipo Fy(a-b-) en africanos es debido a mutaciones de punto 33t>c,

em el sítio GATA1, que impide la expresión eritróide del alelo FYB (gen Fy).

COOH

NH2

Fya/Fyb

(Gly/Asp)

42

Anti-Fy3

Sistema Duffy (008-ISBT)

Page 8: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Gen HUT11 (cromosoma 18)

Proteína: 391 aa

3 antígenos

Características:

Efecto de dosis (Jka)

Classe IgG

Activa complemento

RT / DHR

AGH y enzima

Antígenos Frecuencia%

Cauc. Afr.

Jka 77 92

Jkb 74 49

Jk3 100 100

COOHNH2

Jka/Jkb (Asp/Asn)280

Sistema Kidd (009-ISBT)

Page 9: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Genes GYPA e GYPB

(cromosoma 4)

43 antígenos

GPA importante para la expresión

de Wrb

Características:

T. A. y AGH. ( IgM e IgG)

RT e DHR (rara)

Efecto de dosis

Sensibilidad a enzimas

(excepción Ag U)

antígenos Frecuencia%

Dadores africanos

M 78 74

N 72 75

S 55 31

s 89 93

U 100 100

Ena 100 100

Mk 100 100

M

Ser

Ser

Thr

Thr

Gly

1

5

N

Leu

Ser

Thr

Thr

Glu1

29Met/Thr S/s

UPapaína

Tripsina -quimiotripsina

72

72

40

131Glicoforina B

Glicoforina A

N’

Leu

Ser

Thr

Thr

Glu

5

65

Sistema MNS (002-ISBT)

Page 10: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Gen DI (cromosoma 17)

Proteína: 911 aa

21 antígenos

anticuerpos

Clase IgG

Aactiva complemento

RT / DHR

AGH

Inmunogenicidad

Antígenos Frecuencia%

Dadores Asiáticos

Dia 3 13

Dib 100 100

Wra 1 1

Wrb 100 100

COOHNH2

Dia/Dib

(854Leu/Pro)

400-408

Wra/Wrb

(658Lys/Glu)

Sistema Diego (0010-ISBT)

La expresión de Wrb depende

de la presencia de GPA.

Page 11: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Telen et al, 1990; Spring et al, 1994 ; Rios et al, 2002

gen DO (cromosoma 12)

Glicoproteína (GPI): 314 aa

4 antígenos (fenótipo nulo: Gya-)

HPN

antígenos Frecuencia%

caucasianos africanos

Doa 67 55

Dob 82 89

Joa 100 100

Hy 100 100

Gya 100 100

características

Clase IgG

RT: inmediata / tardía

AGH, Enzima

108

117

Hy (Gly)

Joa (Thr)

265 Doa/Dob

Asn/Asp

NH2

Sistema Dombrock (0014-ISBT)

Page 12: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

PESQUIZA DE ANTICUERPOS IRREGULARES

(HEDDLE et al, 1995; REDMAN et al, 1996; ISSIT & ANSTEE, 1998; SCHONEWILLE et al, 2000; CHARACHE et al, 1990)

•AloiNmunización: Riesgo / frecuencia

2,6% - 8,4% receptores eventuales

+ 60% receptores crônicos

•Persistencia del anticuerpo (26% / 10 meses)

Anticuerpos Kidd: < tiempo de detección

30 – 60% RTH

•Respuesta inmune 7 dias después de la transfusión

Anti-Jka (4dias)

Page 13: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

PREVENIR

REACCIONES HEMOLÍTICAS TRANSFUSIONALES AGUDAS O

TARDÍAS

Discrepancias entre la tipificación directa y reversa ABO

Acs (anti-A1; anti-I; anti-IH; anti-N y otros)

Panel compuesto por dos o tres células grupo O fenotipadas para los

principales antígenos eritrocitarios

Antígenos con efecto de dosis

R1R1; R2R2; Jk(a+b-) e M+N-

PESQUIZA DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Page 14: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

•Soluciones potencializadoras de las reaciones PAI

Macromoléculas (proteínas o polímeros - ↓ potencial de

repulción)

Ex: Albumina bovina (*) o Polietilenglicol

Soluciones de baja fuerza iônica (LISS)

Enzimas proteolíticas (↓ nube iônica)

•Test Indirecto da Antiglobulina Humana

Tubo

Gel centrifugación

Microplaca (?)

PESQUIZA DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Page 15: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Castilho, 1997

PESQUIZA DE ANTICUERPOS IRREGULARES

Page 16: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS

IRREGULARES

Page 17: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS

IRREGULARES

PAI POSITIVO

1 ou + Aloanticuerpo(s)

PAI (P)

auto-control y CD (N)

PAI (P) y auto-control (P)

Ag alta frecuenncia

Fenotipo Nulo

Efecto de dosis

Page 18: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS

IRREGULARES

PAI POSITIVO

PAI (P)

auto-control y CD (N)

PAI (P) y auto-control (P)

Auto frio interferencias

CD

negativopositivo

Auto-anticuerpo(s) Auto + Aloanticuerpo(s)

complemento

Page 19: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Page 20: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

•Panel de identificación

AGH X Enzimático

•Panel de células seleccionadas

R1R1; R2R2; fenotipos raros (Mk, Tja, k, Rh17, Kpb)

• Adsorcióno Seleción células o técnicas

Tratamiento enzimático de células seleccionadas

•Congelamiento de hematíes

Nitrógeno líquido

•Fenotipificación / genotipificación

RECURSOS IMUNOHEMATOLÓGICOS

Page 21: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Caso 1

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Paciente/donante: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado Obs

fenótipo D C E c e Cw K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s LISS ENZ

1 R1wR1 + + 0 0 + 0 0 + 0 + + 0 + 0 0 + 1+ 0

2 R1R1 + 0 + + + 0 + + + + + + 0 + + + 1+ 2+

Page 22: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Caso 1) Identificación en muestras conteniendo + de 1 anticuerpo.

Paciente/donante: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado Obs

fenótipo D C E c e Cw K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s LISS

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + + + + 0 0 + 0 + 1+

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + + 0 0 + + + + + 0

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + + 0 + 1+

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + + 0 + 0 + + + 0 1+

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 + 0 + 1+

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 1+

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 1+

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + + + + + + 0 + + 1+

9 rr 0 0 0 + + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 0

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 1+

11 auto 0

X X X X X X X X X X XX X

OBS: antígeno Fyb y sensible a enzimas proteolíticas.

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Page 23: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Paciente/donante: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s LISS ENZ

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + + + + 0 0 + 0 + 1+ 0

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + + 0 0 + + + + + 0 0

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + + 0 + 1+ 0

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + + 0 + 0 + + + 0 1+ 3+

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 + 0 + 1+ 0

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 1+ 3+

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 1+ 0

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + + + + + + 0 + + 1+ 0

9 rr 0 0 0 + + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 0 0

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 1+ 0

11 auto 0 0

Caso 1) Identificación en muestras conteniendo + de 1 anticuerpo.

X X X X X X X X X X XX XX

Anticuerpos identificados: anti- Fyb, - E

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Page 24: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Caso 2

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Paciente/donante: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado Obs

fenótipo D C E c e Cw K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s Liss ENZ

1 R1wR1 + + 0 0 + 0 0 + 0 + + 0 + 0 0 + 1+ 0

2 R1R1 + 0 + + + 0 + + + + + + 0 + + + 0 0

Page 25: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Paciente/donante: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado Obs

fenótipo D C E c e Cw K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s Liss 18º

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + + + + 0 0 + 0 + 0 0

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + + 0 0 + + + + + 0 2+

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + + 0 + 0 2+

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + + 0 + 0 + + + 0 0 2+

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 + 0 + 0 0

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 0

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 2+ 3+

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + + + + + + 0 + + 2+ 3+

9 rr 0 0 0 + + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 2+ 3+

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 0 2+

11 auto 0 0

Caso 2) Efecto de dosis.

Anticuerpo identificado: anti-M

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Page 26: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Caso 3

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Paciente/donante: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Kpa Kpb Fya Fyb Jka Jkb M N S s Liss ENZ

1 R1wR1 + + 0 0 + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 + 3+ 4+

2 R1R1 + 0 + + + 0 + + 0 + + + + + 0 + + + 3+ 4+

Page 27: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Paciente/donanter: O Rh negativo nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Kpa Kpb Fya Fyb Jka Jkb M N S s LISS ENZ

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + 0 + 3+ 4+

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + + + + + 3+ 4+

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 0 + + + + + + + 0 + 3+ 4+

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + 0 + + 0 + 0 + + + 0 3+ 4+

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 0 + 3+ 4+

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 3+ 4+

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 3+ 4+

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + + 0 + + 3+ 4+

9 rr 0 0 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 3+ 4+

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + 0 + 3+ 4+

11 auto 0 0

Caso 3) antígeno de alta frecuencia poblacional.

Fenotipificación: Kp(a+b-)

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Page 28: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Caso 3) antígeno de alta frecuencia poblacional alo-adsorción con rr

Anti- Kpb, - D, - C

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Paciente/donanter: O Rh negativo nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Kpa Kpb Fya Fyb Jka Jkb M N S s LISS ENZ

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + 0 + 3+ 4+

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + + + + + 3+ 4+

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 0 + + + + + + + 0 + 3+ 4+

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + 0 + + 0 + 0 + + + 0 3+ 4+

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 0 + 3+ 4+

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 0

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 0

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + + 0 + + 0 0

9 rr 0 0 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 0 0

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + 0 + 0 0

11 auto 0 0

Page 29: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Caso 4

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Paciente/donante: nº de la muesstra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Kpa Kpb Fya Fyb Jka Jkb M N S s Liss ENZ

1 R1wR1 + + 0 0 + 0 0 + 0 + 0 + + 0 + 0 0 + 2+ 0

2 R1R1 + 0 + + + 0 + + 0 + + + + + 0 + + + 1+ 0

Page 30: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Caso 4) antígeno de alta frecuencia poblacional.

Fenotipificación:Fy(a-b+) M-N-S-s-

PRESENCIA DE ALOANTICUERPOS

Paciente/donante: O Rh negativo nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Kpa Kpb Fya Fyb Jka Jkb M N S s LISS 18°

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + 0 + + + + 0 0 + 0 + 2+ 3+

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + 0 + + 0 0 + + + + + 1+ 3+

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 0 + + + + + + + 0 + W 3+

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + 0 + + 0 + 0 + + + 0 1+ 3+

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 0 + W 3+

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + 0 + + + 0 + 0 + 1+ 3+

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 2+ 3+

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + + 0 + + 2+ 3+

9 rr 0 0 0 + + 0 + + 0 + + 0 + 0 + 0 + 0 2+ 3+

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + 0 + 1+ 3+

11 auto 0 0

Page 31: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTO-CONTROL POSITIVO

Page 32: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

PATOLOGIAS causas investigar

Anemia hemolítica auto-

imune en caliente / frio.

IgG / IgM / IgA / Complemento

Sistema Rh y utros

Caracterizar a Ig y

Complemento

Enfermedad hemolítica

del recién nacido

Incompatibilidad sanguínea

materno-fetal

Identificar el Ac

(tipificación y elución)

Reacción transfusional

hemolítica

Error técnico

Aloanticuerpo en bajo título

Identificar el Ac

(Elución e IAI)

Anemia inducida por

droga

a-metildopa Historia clínica

Poliaglutinación Coloides

Reaciones inflamatorias

Historia clínica

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O AUTO-

CONTROL POSITIVO

Page 33: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Presencia de auto-anticuerpos y complemento

Ampla reactividad

Interfieren en la investigación e identificación de aloanticuerpo

Investigación

AGH monoespecífica (IgG e C)

32% dos pacientes con AHAI presentan aloanticuerpos

DIFICULTADES

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O AUTO-

CONTROL POSITIVO

Page 34: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

¿QUE HACER ?

Inactivación de complemento

Disociación Fenotipificación / Auto-adsorción de la muestra de suero

Pesquiza e identificación de aloanticuerpos

Genotipificación

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O AUTO-

CONTROL POSITIVO

Page 35: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Disociación de los auto-anticuerpos

Temperatura (Acs frios)

Difosfato de cloroquina

ZZAP

Glicina EDTA

Auto-adsorción

Necesidad de grandes volúmes de hemtíes

Tiempo para realización del procedimento

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O AUTO-

CONTROL POSITIVO

Page 36: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Hematíes LI AGH

I 3+ 1+

II 3+ 2+

Auto 3+ W

Caso 5: autocontrol positivo a temperatura ambiente

INVESTIGAR HISTORIA TRANSFUSIONAL RECIENTE

REALIZAR C.D. (reacción hemolítica transfusional o auto-inmune)

REALIZAR AUTO-ADSORCIÓN EN FRIO

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O AUTO-

CONTROL POSITIVO

Page 37: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Paciente/donante: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s LI AGH

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + + + + 0 0 + 0 + 3+ W

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + + 0 0 + + + + + 3+ 2+

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + + 0 + 3+ 1+

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + + 0 + 0 + + + 0 3+ 2+

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 + 0 + 3+ W

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 3+ W

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 3+ 1+

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + + + + + + 0 + + 3+ 2+

9 rr 0 0 0 + + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 3+ 2+

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 3+ W

11 auto 3+ W

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Caso 5: autocontrol positivo a temperatura ambiente

Page 38: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

AgAg

Ag

Ag

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Page 39: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

AgAg

Ag

AgAg

Remoción del auto-anticuerpo frio con

lavado de los hemtíes con Nacl (0,9%)

a 37ºC

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Page 40: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

AgAg

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Remoción del auto-anticuerpo frio

con lavado de los hemtíes con Nacl

(0,9%) a 37ºC

Page 41: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Muestra con auto-anticuerpo frio + aloanticuerpo

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

AgAg

Page 42: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Auto-adsorción en frio 4°C

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

AgAg

Page 43: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Muestra adsorbida para test de

IAI

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Page 44: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Paciente/donanter: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s LI AGH

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + + + + 0 0 + 0 + 0 0

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + + 0 0 + + + + + W 2+

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + + 0 + 0 0

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + + 0 + 0 + + + 0 1+ 2+

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 + 0 + 0 0

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 0

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 0

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + + + + + + 0 + + 0 2+

9 rr 0 0 0 + + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 W 2+

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 0 0

11 auto 0 0

Anticuerpos identificados: anti-S

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Caso 5: autocontrol positivo a temperatura ambiente

Page 45: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Hematíes LI AGH

I 0 2+

II 0 2+

Auto 0 2+

Caso 6

(auto control positivo en AGH)

•INVESTIGAR HISTÓRIA TRANSFUSIONAL RECIENTE

•REALIZAR C.D. (reación hemolítica transfusional o auto-inmune)

•REALIZAR DISOCIACIÖN y AUTO-ADSORCIÓN A 37°C

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Page 46: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Paciente/donante: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s LI AGH

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + + + + 0 0 + 0 + 0 2+

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + + 0 0 + + + + + 0 2+

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + + 0 + 0 2+

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + + 0 + 0 + + + 0 0 2+

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 + 0 + 0 2+

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 2+

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 2+

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + + + + + + 0 + + 0 2+

9 rr 0 0 0 + + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 0 2+

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 0 2+

11 auto 0 2+

CASO 6) Identificación en muestras con auto control positivo e AGH .

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Page 47: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Disociación del auto anticuerpo

con Difosfato de cloroquina (CDP)

20% en PBS (pH 7,2)

Ag

Ag

AgAg Ag

Ag

Ag

AgAg

Ag

Ag

AgAg

AgAg

CDP

CDP

CDP

CDP

CDP

CDPCDPCDP

CDP

CDP

CDP

CDP

CDP

CDP

CDP

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Page 48: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Ag

Ag

AgAg Ag

Ag

Ag

AgAg

Ag

Ag

AgAg

AgAg

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Dissociación del auto anticuerpo

con Difosfato de cloroquina (CDP)

20% en PBS (pH 7,2)

Page 49: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Muestra co auto-anticuerpo frio + aloanticuerpo

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

AgAg

Page 50: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Auto-adsorción a 37°C

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

Ag

AgAg

Page 51: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Muestra adsorbida para test de

IAI

Page 52: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Paciente/donante: nº de la muestra:

Sistema Rh Kell Duffy Kidd MNS resultado

fenótipo D C E c e Cw K k Fya Fyb Jka Jkb M N S s LI AGH

1 R1wR1 + + 0 0 + + 0 + + + + 0 0 + 0 + 0 0

2 R1R1 + + 0 0 + 0 + + + 0 0 + + + + + 0 2+

3 R1R1 + + 0 0 + 0 + 0 + + + + + + 0 + 0 2+

4 R2R2 + 0 + + 0 0 0 + + 0 + 0 + + + 0 0 0

5 r’r 0 + 0 + + 0 0 + + + + + 0 + 0 + 0 0

6 r”r 0 0 + + + 0 0 + 0 + + + 0 + 0 + 0 0

7 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + 0 + + 0 0 + 0 0

8 rr 0 0 0 + + 0 0 + + + + + + 0 + + 0 0

9 rr 0 0 0 + + 0 + + + 0 + 0 + 0 + 0 0 2+

10 rr 0 0 0 + + 0 0 + 0 + + + + + 0 + 0 0

11 auto 0 0

CASO 6) Identificación en muestras con auto control positivo e AGH .

Anticuerpos identificados: anti-K

TEST DE COOMBS DIRECTO POSITIVO O

AUTOCONTROL POSITIVO

Page 53: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

Técnicas de congelamiento

Sueros raros y anticuerpos contra antígenos públicos

•Panel de células selecionadas y fenotipos nulos

Fenotipificación es siempre fundamental

Técnicas de disociación

Técnicas de adsorción (auto o alo):•Frío / caliente/ enzimáticas.

CONCLUSIÓN

Paneles de hemátíes

história transfusional, obstétrica y diagnóstico

PESQUIZA E IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS

IRREGULARES

Page 54: 3_Pesquiza e Identificacion de Anticuerpos DIAMED

•DANIELS, G. Human Blood Groups. Oxford: Blackwell Science, 1995. 737p.

•VERGELEN-TYLER, V. (Ed.). Technical Manual. 13. ed. Bethesda: American

Association of Blood Banks, 1999. 798p.

•DANIELS, G & BROMILOW, I. Essential Guide to Blood Groups. Oxford:

Blackwell Publishing, 2007. 99p.

•MOLLISON, P. L.; ENGELFRIET, C. P.; CONTRERAS, M. Blood transfusion

in clinical medicine. 10 ed. Oxford: Blackwell Science, 1997.

Referencias bibliográficas