4 Esterilidad_MIGollan_MAsco y Pasdilla

7/26/2019 4 Esterilidad_MIGollan_MAsco y Pasdilla

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EnsayodeEsterilidadAptituddelaMetodologa

Uruguay 469 - 6 A, Bs. As. SAFYBI APINAM

09 de octubre de 2013

Bioq. Mara Ins Gollan

Lic. Mirtha Ascoy Padilla

ENSAYODEESTERILIDAD

Segnlasdistintasfarmacopeas,esterilidadeselestadolibredemicroorganismosvivosdetodotipo.Esteconceptoesfcildeenunciarperoenlaprctica no

sepuede

demostrar.

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ENSAYODEESTERILIDAD

PASOSINVOLUCRADOS

1.Controles

2.Muestreo

3.Mediosdecultivousados

4.MtododelEnsayo(FiltracinporMembrana,TransferenciaDirecta)

5.Observacineinterpretacindelosresultados

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ENSAYODEESTERILIDADMTODOSANALTICOS

MtododeFiltracinporMembrana:eselmtododeeleccin.Consisteenfiltrarelproductoatravsdeunamembrana,cuyotamaodeporopermitaretenerlosmicroorganismosquepudieranestarpresentesenelmismoyluegocultivarlos,introduciendolamembrana

enmedios

adecuados

para

el

desarrollo

de

los

mismos.

TipodeMuestrasparaelMtododeFiltracinporMembrana: Lquidosmisciblesenvehculosacuosos Slidosfiltrables Formassemislidasyaceitessolublesenmiristatode

isopropilo Aerosolesestriles Dispositivosmdicosesterilizados Jeringasprellenadas

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MtododeFiltracinporMembrana:

Lamuestradisueltaesfiltradaatravsdeunamembranacompuestaporsteresdecelulosade0,45mdeporo,queretienelosmicroorganismos.

Setransfiereelvolumennecesariodecadarecipiente,encondicionesdeasepsia,directamentesobrelamembrana.

Selavalamembranaconnomenosde3porcionesde100mlcadaunaconlasolucindelavadocorrespondiente.

Unavezterminadalafiltracinseintroducelamitadolamembranaenteraen100mldecadaunodelosmedios.

Utilizandounsistemacerradodefiltracin,setransfierenlos

medios

de

cultivo

directamente

en

los

dispositivos

estriles

sobrelas

membranas.

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MtododeTransferenciaDirecta:lamuestraesinoculadadirectamenteenelmediodecultivo.Elvolumendelamuestranodebesuperar el10%delvolumendemediodecultivo.Seempleacuandonoesposiblefiltrarelproducto.

TipodeMuestrasparaelMtododeTransferenciaDirecta: Lquidosnofiltrables

Formassemislidas

yaceites

insolubles

Slidosnofiltrables Algodnpurificado,gasa,apsitosquirrgicos,materialpara suturasy

productosrelacionados. Dispositivosmdicosesterilizados. Jeringasestrilesvacas

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ENSAYODEESTERILIDADMEDIOSDECULTIVO

Seempleandosmediosbsicosparaelensayo:

MEDIOFLUDODETIOGLICOLATO(FMT): Estemedioeselindicadoparainvestigarlapresencia

debacteriasaerobiasyanaerobias.

CALDODEPEPTONASdeCASENAySOJA(TSB): Estemedioeselindicadoparainvestigarlapresencia

debacteriasaerobias,hongosylevaduras.

Temperaturadeincubacin: FMT Seincubaentre30y35C. TSB Seincubaentre 20y25C.

Tiempodeincubacin: FMT yTSB Seincubadurante14das. TSB Seincubadurante14das.

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ENSAYODEESTERILIDADDILUYENTESYLQUIDOSDELAVADO

SolucinA:aguapeptonadaal1,pH:7.1 0.2.

SolucinD:aguapeptonadaal1 +1mldepolisorbato80,en 1

l,pH:

7.1 0.2.

SolucinK:peptonayextractodecarne+10grdepolisorbato80,en1l,pH:6.9 0.2.

Betalactamasa:paraPenicilinasyCefalosporinas,enlaSolucinA.

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ENSAYODEESTERILIDAD

Sedebecontrolar:

Lafertilidaddelmediodecultivo.Laposibilidaddedetectarunacontaminacinbaja.

Laesterilidaddelmediodecultivo.

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ENSAYODEESTERILIDADMEDIOSDECULTIVO

CadamediodecultivoutilizadodebesometerseaunensayodePromocindeCrecimiento demododecomprobarquepuedenproliferarmicroorganismosdiferentes,tantoencondicionesaerobiascomoanaerobias(inculoentre10y100ufc/ml).Paraelloseusancepasexigentesdesdeelpuntodevistadelasnecesidadesnutritivasydelascondiciones

deaerobiosis

yanaerobiosis.

Algunas

de

estas

cepas

puedenser:FMT:

StaphylococcusaureusATCC6538 Pseudomonasaeruginosa ATCC9027 Micrococcusluteus

(Kocuriarhizophila)ATCC9341 ClostridiumsporogenesATCC19404Bacteroidesvulgatus

ATCC8482

TSB: BacillusspizizeniiATCC6633 CandidaalbicansATCC10231 AspergillusbrasiliensisATCC16404

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ENSAYODEESTERILIDADCONTROLES

POSITIVO,deambosmedios,conuninculopequeo(nomayorde100ufc/ml).

NEGATIVO,deambosmedios.

BLANCODELENSAYO,testigoenelcualsepasar solucindiluyentey/odelavadoporotramembranaquesesiembradelamismamaneraquelaanteriordondesepas lamuestra.

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READE

TRABAJO:

ElEnsayodeEsterilidadsiempredeberealizarseenunreadededicacinexclusiva.

Elreadebeserdelamismaclasedereausadaparalasoperacionesdefabricacin,estril/aspticadeproductos.

Fuente.OPSRedPARFDocumentoTcnicoN 11BuenasprcticasdelaOMSparaLaboratoriosdeMicrobiologaFarmacutica Enero2013.

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ENSAYODEESTERILIDAD

CONTROLES

READETRABAJO:Monitoreomicrobiolgico

Grado Muestreodeaire

(UFC/m3)

Placasdeexposicin

(90mm)(UFC/4hs)

Placasdecontacto(55mm)

(UFC/placa)

Impresindeguantes

(cincodedos)

(UFC/guante)

A


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ENSAYODEESTERILIDAD

CONTROLES

GABINETEDEFLUJOUNIDIRECCIONAL:IntegridaddelfiltroHEPAEficienciadelequipoLosgabinetesdeflujounidireccional,as como

laslmparasgermicidassesometernperidicamenteacontroles.

AUTOCLAVE:ValidacindelosprocesosMonitoreodelosciclosconIB

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ESTUFADEESTERILIZACINPORCALORSECO:

Validacindelosprocesos

MonitoreodelosciclosconIB

MEDIOSDE

CULTIVO:

Control deesterilizacin

PromocindelCrecimiento

ESTUFASDEINCUBACIN:

Calibracinymonitoreo

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PERSONAL:

Losoperadores,nomsdedos,debenestarequipadosconropasadecuadasyestriles,camisolnomameluco,barbijo,cubrecalzadoyguantes.

Elpersonalquerealiceelensayodebeposeersuficienteexperienciayestarautorizado.

Lainterpretacindelosresultadosdeber hacerlounapersonaconestudiosdeMicrobiologaoquesehayaadiestradoenello.

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Sialdaceroelproductoenturbiaelmediodecultivo,yaseaparalametodologadefiltracinpormembranaoparasiembradirecta,pasadoslos14dasdeincubacin,debertransferirseporcionesnomenoresa1mldelmediode

cultivoal

mismo

medio

yacontinuacin

incubar

el

recipienteoriginalyeldetransferenciadurantenomenosde4das.

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ENSAYODEESTERILIDAD

INTERPRETACINDE

LOS

RESULTADOS

Sinohayevidenciadecrecimientomicrobianoenlarepeticindelensayo,lamuestracumpleconelensayo.

Sihayevidenciadecrecimientomicrobianoenlarepeticindelensayo,lamuestranocumpleconelensayo.

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APTITUD

Unmtodomicrobiolgicoesaptoparaundeterminadoensayocuandosedemuestraquelosproductosaensayar,elmtodo,losmaterialesyelequipamiento

autilizar,

no

interfiereneneldesarrollodeeventualesmicroorganismospresentesenlasmuestrasyquelosresultadosobtenidosseanconfiables.

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APTITUD

Laaptituddelensayodeesterilidadsellevaacabocuando:

Seefectaelensayoparaunproductonuevo.

Siemprequeexistauncambioenlascondicionesexperimentalesdelensayo.

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MUESTREON D E UNIDADES DEL LOTE N M NIMO DE UNIDADES A ANALIZAR PARA CADA MEDIO

DE CULTIVO

Inyectables

< que 100 10% o 4 (el que sea mayor)

> que 100 pero que 500 10

> que 500 2% o 20 (el que sea menor)

SPGV 2% o 10 (el que sea menor)

Antibiticos slidos: envases de < 5 g. 20

Antibiticos slidos: envases a 5 gr. 6

Productos oftlmicos y no inyectables

que 200 5% o 2 (el que sea mayor)

> que 200 10

Productos biomdicos

100 paquetes 10% o 4 (el que sea mayor)

> 100 y 500 10

> 500 2% o 20 (el que sea menor)

Productos slidos a granel

de 4 envases Todos

> de 4 y de 50 20% o 4 (el que sea mayor)

> de 50 2% o 10 (el que sea mayor)

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CANTIDADESAENSAYARPARAPRODUCTOSSLIDOS

CONTENIDO DE CADA ENVASE CANTIDAD MNIM A TOMADA DE CADAENVASE PARA CADA MEDIO DE CULTIVO

< 50 mg Todo el contenido de cada envase

> 50 mg y < 300 mg Mitad del contenido de cada envase pero no < de

50 mg

300 mg a 5 g 150 mg

> 5 g 500 mg

Antibiticos 150 mg

Algodn, gasa, apsitos quirrgicos 100 mg/paquete

Suturas y otros materiales descartables Envase completo

Otros dispositivos mdicos Dispositivo completo, cortado en piezas o

desarmado

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CANTIDADESAENSAYARPARAPRODUCTOSLIQUIDOSYOTRASPREPARACIONES

CONTENIDO DE CADA ENVASE CANTIDAD MNIMA TOMADA DE CADA ENVASE PARACADA MEDIO DE CULTIVO

Lquidos (distintos de antibiticos)

< 1 ml Todo el contenido de cada envase

de 1 a 40 ml Mitad del contenido de cada envase pero no < 1 ml

> de 40 ml y no > a 100 ml 20 ml

> a 100 ml 10 % del contenido del envase, pero no < a 20 ml

Antibiticos lquidos 1 ml

Preparaciones insolubles, cremas, y ungentosa ser suspendidos o emulsionados

La muestra de cada envase no debe ser < a 200 mg

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ENSAYODEAPTITUDMTODOFILTRACINPORMEMBRANA:Conclusiones

Sielcrecimientodeltubo MUESTRA+INCULOescomparablealtuboCONTROLPOSITIVO,usandolamismacantidaddelavados,significaqueelensayoesapto.

SielcrecimientodeltuboMUESTRA+INCULOnoescomparablealtuboCONTROLPOSITIVO,significaqueelproductocontieneinhibidores delcrecimientoquenosehanpodidoeliminar.

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ENSAYODEAPTITUDMTODOFILTRACINPORMEMBRANA:Consideraciones

Sielproductoinhibeelcrecimiento:

Serepetir elensayoconmayorcantidaddelavados.Se

puedelavar

hasta

10

veces

con

un

volumen

de

100

ml

por

vez.

Sepuedeagregarunagenteneutralizanteo unaBetalactamasa.

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ENSAYODEAPTITUDMTODODETRANSFERENCIADIRECTA

Inculo:Entre10y100ufc/ml.

1tubodecadamediodecultivoconMUESTRA+INCULO.

1tubodecadamediodecultivoconInculocomo

CONTROLPOSITIVO.

1tubodecadamediodecultivocomocontrolnegativo.

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ENSAYODEAPTITUDMTODODETRANSFERENCIADIRECTA:Conclusiones

SielcrecimientodeltuboMUESTRA+INCULOescomparablealtuboCONTROLPOSITIVO,significaqueelproductonocontieneinhibidoresdelcrecimiento.

SielcrecimientodeltuboMUESTRA+INCULOnoescomparablealtuboCONTROLPOSITIVO,significa queelproductocontieneinhibidoresdelcrecimiento.

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ENSAYODEAPTITUD

MTODODE

TRANSFERENCIA

DIRECTA:

Consideraciones

Sielproductoinhibeelcrecimiento:

Usaragentesneutralizantes:lecitina,Tween(Polisorbato)80,azolectinaobetalactamasa.

Sinoesefectivo,sedebeincrementarlarelacinMediodecultivo/Muestra.Sepuedeusarhasta2.000mldeMediodecultivo.

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ENSAYODEAPTITUDTIEMPODEINCUBACIN

EP USP:Incubacinhasta5das.

FA7ma

edicin:

Incubacin

hasta

7das.

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APTITUD

Ladeterminacindelaaptituddeunametodologaesunademostracindequelaaplicacindelprocedimientorealizadonoseproducen:

RESULTADOSFALSOSNEGATIVOS

RESULTADOSFALSOSPOSITIVOS

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APTITUD


Efectobacteriostticoofungisttico:

De

el/los

activo/s

Delosexcipientes

Delosagentessanitizantesdelosenvases

Debidosalprocedimiento

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APTITUD


Mediosdecultivo:

Promocindecrecimiento

Geometraytamaodelenvasedondesepreparaelmediodecultivo

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APTITUD

RESULTADOSFALSOSPOSITIVOS

Debidoalamanipulacinhumana

Delambiente

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APTITUD

CONCLUSIONES

Laausenciadecontaminacinmicrobiana,evidenciadaporlosprocedimientosdescriptos,confirmaqueelproductosatisfacelosrequisitosdelensayodeesterilidad.

Noobstante,debidoalaslimitacionesinherentesalaestadsticadelmuestreo,esteresultadonopermiteasegurarla

esterilidadde

la

totalidad

del

lote.

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APTITUDCONCLUSIONES

Elensayodeesterilidadalquesesometeelproductoterminado

debeserconsideradoslocomo

laLTIMA

ETAPA

DE

UNA

SERIE

DEMEDIDAS DECONTROLqueestnespecificadasenlas

BUENASPRCTICASDEFABRICACIN

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MUCHAS GRACIAS POR SU

ATENCIN

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