Universidad del Valle de Mxico

Campus: Chapultepec

Microbiologa Mdica

Coprocultivo

Integrantes:Simn Zetune CaldernEduardo Prez VallesAsael Gonzlez Martnez

Practica # 2Coprocultivo

Objetivo

Marco Terico

Se denominacoprocultivoa la siembra de una muestra adecuada de heces en medios de cultivo apropiados para el desarrollo de bacterias entricas patgenas. Muestra adecuada es aquella que ha sido recolectada durante el periodo agudo de la enfermedad, cuando es ms fcil comprobar presencia de pus, moco o sangre, y antes de la administracin de antimicrobianos.

Para realizar el examen se emplean heces que no tengan ms de media hora de obtenidas, o muestras tomadas directamente del recto con un hisopo de algodn. Cuando las siembras no se pueden efectuar de inmediato o la muestra demora en llegar al laboratorio, se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1 ml de un lquido conservador, o bien, depositar en ste el hisopo rectal.

Los coprocultivos se realizan para identificar parsitos, enfermedades entrales y virus en el aparato gastrointestinal. De las muestras que se pueden estudiar, la que tienen ms probabilidades de contenerel mayor nmero y variedad de microorganismos es la materia fecal. En el coprocultivo clsico se examinan las heces fecales para detectar y descartar Salmonella, Shigella, Yersinia, E. colienteropatogena y cultivos deSthaphy lococcus.

Cuando las siembras no se pueden efectuar de inmediato o la muestra demora en llegar al laboratorio, se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1 ml de un lquido conservador, o bien, depositar en ste el hisopo rectal.

El lquido o solucin conservadora se prepara de la siguiente manera:Microbiologa Mdica NaCl 4.2 g K2HPO4 3.1 gv KH2PO4 1.0 g Glicerol 300 ml H2O 700 ml

Este lquido, al que se le aade rojo fenol, se distribuye en tubos, que se esterilizan en autoclave durante 20 minutos a 120 C. Las muestras tomadas mediante hisopado rectal pueden ser portadas en tubos que contengan medio de Cary-Blair, colocando el hisopo en su interior.

flora normalflora patgena

Bacteroides fragilis.Lactobacilus spp.( anaerobios).Clostridium perfringensPeptostreptococcus spp.Proteus spp.Candida spp.Pseudomona spp.Salmonella typhiSalmonella spp.Shigella spp.Escherichia coli (enterotoxina).Klebsiella spp.Yersinia enterocoltica.Vibrio cholerae.

Para facilitar el aislamiento de bacterias entricas patgenas se utilizan medios de enriquecimiento y medios selectivos. Los ms empleados son los siguientes:

Agar Sal Manitol

Este medio, esdiferencialdebido a que se pueden detectar microorganismosfermentadores de manitol y selectivo por su elevada concentracin de cloruro de sodio, por lo que se utiliza paramicroorganismos estafilococos, en este caso la deteccin va enfocada aStaphylococcus aureus. Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Staphylococcus, basado en la tolerancia que poseen a una alta concentracin de cloruro sdico (7,5%). Sirve tambin como medio diferencial de cepas fermentadoras del manitol. Staphylococcus aureus en condiciones anaerobias es la nica especie del gnero que produce esta fermentacin. Este medio utiliza la misma base que el gar Sangre. Antiguamente se aadan los hematies a la base fundida y se elevaba la temperatura para lisarlos parcialmente y que soltasen al medio su componente. Esto daba al medio su habitual color pardo chocolate. Composicin: extracto de carne, peptona, cloruro sdico, manitol, rojo fenol, agar y agua destilada.

Agar Salmonella-Shigella:

Este medio selectivo, empleado para aislarSalmonellayShigellaejerce una buena inhibicin sobre agentes coliformes, sin limitar el desarrollo de los patgenos gramnegativos. Se utiliza especialmente junto al agar-sulfito de bismuto, para siembra de materiales provenientes de medios enriquecedores, como caldo tetrationato y caldo con selenito. Contiene sales biliares, lactosa, citrato y tiosulfato sdico, citrato frrico, verde brillante y rojo neutro como indicador.ShigellaySalmonella,como tambin otros agentes que no fermentan la lactosa, aparecen como colonias lisas, transparentes a opacas; las pocas colonias fermentadoras de la lactosa que se pueden desarrollar tienen color rojo y un centro negro. Conviene sealar que la bilis o las sales biliares inhiben el crecimiento de microorganismos grampositivos y esporulados sin interferir en el crecimiento de los bacilos gramnegativos.

La inhibicin de microorganismos Gram positivos se debe a su contenido de sales biliares, verde brillante y citratos. La diferenciacin de los microorganismos entricos se logra por la incorporacin de lactosa en el medio. Los microorganismos que fermentan la lactosa producen cido, el cual al reaccionar con el indicador rojo neutro, forma colonias de color rojo. Los microorganismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. Este ltimo grupo contiene la mayora de los microorganismos patgenos intestinales incluyendo Salmonella y Shigella. El tiosulfato de sodio y el citrato frrico, facilitan la deteccin de sulfuro de hidrgeno, manifestndose por colonias con centro.

Composicin por Litro:0. 0. Peptona de casina y carne- 5g0. Extracto de carne de buey- 5g0. Lactosa- 10g0. Citrato sdico- 8.5g0. Tiosulfato sdico- 8.5g0. Citrato de hierro- 1g0. Sales Biliares- 8.5g0. Rojo neutro- 0.025g0. Agar- 15g0. Verde brillante- 0.3mg0.

Agar MacConkey.

Es un medio selectivo-diferencial que contiene sales biliares, las cuales inhiben la flora gram positiva. Los agentes del grupo coliforme dan colonias de color rojo, debido a que fermentan la lactosa. En cambio,SalmonellayShigellasp. forman colonias incoloras.Este medio es ligeramente selectivo ya que la concentracin de sales Biliares, que inhiben el crecimiento de los microorganismos Gram positivos, es baja en relacin con otros medios similares. Se incluye tambin cristal violeta para inhibir el crecimiento de las bacterias Gram positivas, especialmente estafilococos y enterococos. La diferenciacin de organismos entricos se lleva a cabo con la combinacin de Lactosa con el indicador Rojo neutro.Se producen colonias rosas a rojas si el aislado es capaz de fermentar la Lactosa y colonias sin color en caso contario.

LECTURA: Colonias lactosa (-): incoloras (= no hay fermentacin de la Lactosa).Salmonella,Shigella,Pseudomonas Colonias lactosa (+): rosa/rojo ladrillo rodeadas de un halo de sales biliares precipitadas.E. coli(rosa/roja),E. aerogenes(rosa y mucosa)

MaterialCantidad

Puente de Tincin 1

Asa Bacteriolgica 1

Mechero 1

Porta Objetos 10

SustanciasCantidad

LugolLo necesario

Cristal violeta Lo necesario

Safranina Lo necesario

Alcohol - AcetonaLo necesario

Aceite de inmersin Lo necesario

Equipo

Microscopio ptico

Material Biolgico

Muestra de SS fecales

Procedimiento

Toma con el asa estril un poco de materia fecal y depositarla cerca de la orilla de cada una de las placas.

Proceder al aislamiento por el mtodo de estra cruzada.

Incubar a 37oC por 24 a 48 horas

Interpretar el resultado, anotando las caractersticas morfolgicas de cada colonia diferente que haya crecido

Hacer un frotis de cada colonia diferente, y teirlo con Gram.

Resultados

EMB

Se detectaron 2 tipos de colonias:

Colonia Rosa mexicano:Forma.- ConvexaBorde.- EnteroAgrupacin.- Circular

Colonia morada con contorno verde metalico:Forma.- Convexa Borde.- EnteroAgrupacin.- Circular

Bacilos Gram - Bacilos Gram -

SS (Salmonella Shigella)

Colonia Amarillas con manchas negras en medioForma.- ConvexaBorde.- EnteroAgrupacin.- Circular

Bacilos Gram -

Mac Conkey

Se detectaron dos tipos de colonias:

Colonia Translucida:Forma.- ConvexaBorde.- EnteroAgrupacin.- Circular

Colonia Rosa:Forma.- Convexa Borde.- EnteroAgrupacin.- Puntiforme

Cocos Gram - Bacilos Gram -

Pruebas bioqumicas

MIO

Color original.- Morado

Positivo al reactivo de Kovac.- Presencia de un anillo rosa, lo cual indica que es positivo al indol Tope amarillo.- Negativo a ornitina Turbio.- Movilidad de la bacteria

TSI

Color original.- Naranja

Cambio de color a amarillo.- Utiliza Sacarosa

Presencia de Gas

CITRATO DE SIMONS

Color original.- Verde

Cambio de color a azul.- Indica que es positivo a la prueba de Citrato

Anlisis de Resultados

Las enterobacterias son las principales bacterias causales de de las infecciones intestinales, estando entre ellas las mas graves (salmonelosis y shigelosis).- Su forma de contagio es muy facil y muy comun en paises subdesarrollados.Ya que es principalmente por contaminacion fecal y, al haber una mala educacion sanitaria, ausencia de servicios higienicos (letrinas adecuadas, falta de agua potable), hace que estos tipos de infecciones sean por lo dems frecuentes.- Una caracteristica comun es el aumento de la incidencia de estas enfermedades el epocas de verano, por el mismo motivo de la informalidad en la venta de la comida, refrescos, helados, y otros, preparados con mala higiene o no cuidados correctamente de la contaminacion.psatogenas.En esta caso al hace nuestro anlisis encontramos dos tipos de colonias en el medio EMB encontramos dos tipos de colonias y se rebel que fueron bacilos gran(-) y gran(+), los bacilos gran negativos es una caracterstica normal del tracto gastro intestinal, en el caso de que hubieran sido muy delagdos podramos hablar de una infeccin por campylobacter; en el caso de los bacilos gram negativos se puede hablar de clostridium difificileEn el agar SS que medio selectivo empleado para aislarSalmonellayShigella se encontraron bacilos gran negativos que como se menciono antes son habituales del el tracto gastro intestinal.En el agar de Mac Conkey encontramos dos tipos de colonias unas rosas que eran pertenecientes a bacilos gram negativo y otra colonia tranparente perteneciente a cocos que tambin son normales en lael traco gastrointestinal en caso de haber sido positivos se puede hablar de una posible infeccin por estafilococo,

Conclusin El propsito de esta prctica fue identificar las finalidades de un anlisis prococultivo de laboratorio as como saber que agar usar para este anlisis y para qu sirve cada uno y los organismos esperados tener en cada medio ya que son selectivos y de esta manera poder identificar rpidamente las bacterias patgenas y comunes en las heces por la tcnica de la tincin de gram adems observamos algunas pruebas bioqumicas que se le hacen a diferentes medios para de estar manera interpretar diferentes factores como si la bacteria tiene movilidad si hay presencia de gas en otras particularidades

Bibliografa http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/maconkeyagar.htmhttp://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com/