实验五　叶绿体的分离与荧光观察

一 . 实验目的

• 1 ．通过植物细胞叶绿体的分离，了解细

胞器分离的一般原理与方法；了解差速离

心 Differential centrifugation 特点与用途

• 2 ．了解菠菜叶绿体的形态、分布与数量。

二　实验原理

• 采用差速离心分离细胞器；

– 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体

——内质网与高基体——核蛋白体；

• 叶绿体具有荧光现象，可利用荧光显微镜观察。

• 菠菜叶富含叶绿体，可采用徒手切片观察 其形态

和分布；

Low speed

High speed

Differential centrifugation

三、实验用品• 1 ．器材

– 离心机、研钵或组织捣碎机、显微镜、天平、离心管、纱布、烧杯、量筒、滴管、载玻片、盖玻片

• 2 ．材料– 新鲜菠菜叶

• 3 ．试剂– 0.35mol/L 氯化钠溶液

四、实验方法• （一）叶绿体的分离与观察1. 取新嫩菠菜叶，洗净檫干、去梗，称 30g ，分批放入研钵。2. 加入 0.35mol/L 氯化钠溶液， 共 150ml ，研磨，制成匀浆；3. 将匀浆用６层纱布过滤于烧杯中；4. 取滤液４ ml 在 1000r/min 离心２ min ，取上清；5. 上清液 3000r/min 离心５ min ．去上清，沉淀即为叶绿体；6. 加 0.35mol/L 氯化钠溶液悬浮沉淀；7. 取叶绿体悬液１滴于载玻片上，加盖片：8. 普通光镜下观察；荧光显微镜下演示• （二）菠菜叶徒手切片观察• 新嫩菠菜叶斜切面１片， 0.35mol/L 氯化钠溶液１滴；加盖片轻压：光镜下

观察叶绿体在表皮细胞和保卫细胞中的分布；荧光显微镜下演示。

五　实验结果与分析

• 1 ．简述：叶绿体的分离原理和方法；• 2 ．绘图：菠菜叶肉细胞的形态，显示叶

绿体。