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SYBR Green miRNA 荧光定量 PCR. microRNA(miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为 22 个核苷酸的非编码单链 RNA 分子 , 它们在动植物中参与转录后基因表达调控。. miRNA 简介. miRNA 形成过程. 前体. 成熟体. 加尾法定量 PCR(QIAGEN) 茎环法定量 PCR(RIBO). SYBR 荧光定量检测 miRNA. 加尾法原理. 茎环法原理. 两种方法的比较. rno-miR-34b. 茎环法. 加尾法. hsa-miR-99a. 茎环法. 加尾法. - PowerPoint PPT Presentation
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SYBR Green miRNA荧光定量 PCR
miRNA 简介
microRNA(miRNA) 是一类由内源基因编码的长度约为 22 个核苷酸的非编码单链RNA 分子 , 它们在动植物中参与转录后基因表达调控。
miRNA 形成过程
前体
成熟体
SYBR 荧光定量检测 miRNA
• 加尾法定量 PCR(QIAGEN)
• 茎环法定量 PCR(RIBO)
加尾法原理
茎环法原理
两种方法的比较 加尾法 茎环法
逆转录 一次逆转录得到全部miRNA 、 pre-miRNA和 mRNA 的 cDNA ,操作简单,但是没有选择性
特异的茎环结构逆转录引物,每条 miRNA单独逆转录,特异性好,但是成本更高,工作繁琐
PCR 特异性 检测 mature miRNA的同时,也会检测到 pre-miRNA
特异性检测 mature miRNA ,可以避开 pre-miRNA
加尾法 茎环法
rno-miR-34b
加尾法 茎环法
hsa-miR-99a
hsa-miR-99a 表达量比较
Sample 加尾法表达量 茎环法表达量
1 1.00 1.00
2 1.05 0.91
3 0.64 0.77
策略1. 根据我们的经验,大部分样品中 pre-miRN
A 含量很低甚至没有,可以采用 QIAGEN加尾法进行 miRNA 的定量 PCR 检测。
2.PCR 特异性都很好的时候,两种方法得到的相对表达量一致。
3. 对于加尾法预实验有非特异性扩增的样品,采用 RIBO 茎环法进行检测。
谢 谢!