Introduction sur la préparation

Je vais vous présenter mes lames de Trachée. Il faut prélever sur des souris qui viennent d’être euthanasiées. Faire une fixation chimique pour conserver l’état initial, grâce à du Carnoy. Après le temps de fixation, on élimine les fixateurs, on fait des rinçages dans des bains d’alcool 100. Une déshydratation est nécessaire pour l’inclusion en paraffine car elle est hydrophobe. On fait donc 2 bains d’alcool 100 pendant 1 heure chacun. On va ensuite inclure pour imprégner totalement l’organe et parfaire sa rigidité indispensable pour couper l’organe. On fait donc 2 bains de butanol pur (pour enlever l’alcool), on rajoute de la paraffine dans le deuxième bain de butanol, puis on fait 2 bains de paraffine pure. On procède ensuite à l’inclusion réelle en bloc rigide, à l’aide de barres de Leuckart. On fait ensuite des coupes au microtome (5 µm d’épaisseur), après taille du bloc en forme pyramidale. On obtient des rubans de coupes, que l’on dépose sur une lame, sur laquelle on a déjà déposé de l’eau albumineuse (Albumine-glycérine, eau et hydroxybenzoate de méthyle). On rajoute quelques gouttes d’eau distillée pour défroisser. On place la lame sur platine chauffante pour sécher, puis dans l’étuve à 37°C pendant 24h. On doit ensuite réhydrater l’organe pour le colorer, car les colorants sont aqueux, et que la paraffine est hydrophobe. On doit donc déparaffiner à l’Histolémon. On utilise ensuite les batteries de Borels pour réhydrater. On fait ensuite le montage final, pour l’observation, avec le baume du Canada, qui a un indice de réfraction proche du verre (1.55), est amorphe, et ne cristallise pas avec le temps. Mais il est hydrophobe et non miscible à l’alcool. On doit donc déshydrater les échantillons, avec les batteries de Borels en sens inverse et de l’Histolémon. On dépose alors le baume sur la lamelle, qu’on retourne sur la lame, on laisse sécher 24h à 37°C.

Présentation de l’organe

Localisation : Système respiratoire, tube flexible entre larynx et bronches.

Rôle physiologique : Espace mort respiratoire, permet à l’air d’atteindre les poumons en étant réchauffé, purifié et humidifié.

Présentation macroscopique : Adventice (cartilage hyalin), sous muqueuse et muqueuse (épithélium).

Présentation microscopiqueLames

Trachée complète au trichrome x40Adventice x200

Cartilage hyalin x200Sous-muqueuse et muqueuse x200

Epithélium et lumière x600Œsophage x100

Trachée complète au bleu de toluidine-éosine x 40Trachée complète au Bleu alcian – éosine x40

Trachée complète au Nitrate d’argent – vert-lumière x40

Coloration (Pourquoi ?)

Trichrome en 1 temps : composition : Azorubine S (E 122) (noyaux en rouge/rose), acide phosphomolybdique, vert solide (vert lumière très pur) (prend sur les fibres de collagène et les structures riches en mucopolysaccharides), solution aqueuse saturée en jaune Naphtol (structures acidophiles), acide acétique (fixation des colorants). Ici, réel intérêt pour cils et différentes structures.

Bleu de Toluidine – éosine : Colorant basique qui reconnait les structures acides comme l’ADN. Certaines mucines sont également colorées en rouge-pourpre, c’est la métachromasie. Ici, intérêt pour 2ème cartilage.

Bleu alcian – éosine : Colore les mucopolysaccharides acides, colorant basique qui se lie à structures acides – colorant de fond. Ici, aurait eu un intérêt pour les cellules caliciformes.

Nitrate d’argent – vert lumière : Colore les dépôts calciques en noir – Coloration de fond. Ici, intérêt pour prouver que c’est du cartilage (dépôts calciques).

Structures (Ouverture physiologique)

Adventice : tissu conjonctif lâche, adipocytes, vaisseaux sanguins, fibres de collagène pour attachement.

Cartilage hyalin : Anneaux cartilagineux reliés par muscle trachéal, extensible, permet passage aliments dans œsophage, en plus des mouvements de respiration. Empêche aussi la trachée de se collaber.

Sous-muqueuse : tissu conjonctif, supporte la muqueuse (vaisseaux sanguins). Glandes muqueuses et séromuqueuses (mucus).

Muqueuse : épithélium cylindrique cilié pseudostratifié (cellules ciliées prismatiques, cellules caliciformes). Chorion riche en fibres élastiques et très fin.

Critique de la coloration (Qualité, choix)

Problèmes déparaffinage ? Liaison cellules caliciformes.

Critique