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RESUMO RESULTADOS
MÉTODOS
Apoio Financeiro: FAPESP .
CONCLUSÕES
A proteína tub é regulada por insulina, leptina e pelo estado nutricional em hipotálamo e em
tecido adiposo de camundongos C57BL/6J
Santos, A.C; Quaresma, P.G.F; Weissman, L; Caricilli, A.M; Mendes, M.C; Cesquini; Saad, MJA; Prada,PO. 1,2 Departamento de Clínica Médica da Faculdade de Ciências Médicas –
UNICAMP, Campinas, SP.2Faculdade de Ciências Aplicadas – UNICAMP,Limeira, SP - Brasil
Caracterização do modelo de restrição calórica
Extração de tecidos e “Westernblotting”
Camundongos C57
Implantação de cânula
no ventrículo lateral
para injeções I.C.V.
Extração dos tecidos
após estímulo I.C.V..
Homogeneização do
tecidos e quantificação
de proteínas
Imunoprecipitação e
aplicação em gel de
poliacrilamida.
Transferência para
membrana de
poliacrilamida.
Bloqueio,
incubação com
anticorpos
primário e
secundário e
reação com kit
de
quimioluminesc
ência.
Densitometria
óptica das bandas.
Regulação da fosforilação em tirosina da tub em
hipotálamo de animais controles
Regulação da tub em Hipotálamo
Regulação da tub induzida por insulina e leptina em tecido adiposo branco
Animais Controles Animais DIO Animais db/db
Tecido Adiposo Epidididmal
A inibição da expressão da tub altera a regulação de proteínas ligadas à lipogênese e lipólise induzidas por insulina
Animais com RC
Camundongos tubby são obesos na idade adulta.
Recentemente demonstramos insulina (INS) e leptina
induzem fosforilação em tirosina (pTYR) da tub in vivo em
hipotálamo. Os objetivos do estudo são: a) investigar a
regulação da tub induzida por INS e leptina (LEP) in vivo
em hipotálamo de animais com obesidade induzida por
dieta (DIO) ou em restrição calórica (RC); b) investigar a
regulação da tub induzida por INS e LEP in vivo em tecido
adiposo epididimal (TAE) de animais DIO.
A RC (60 dias) reduziu a adiposidade e aumentou a
fosforilação em tirosina da tub induzida por INS. Em
paralelo, aumentou a fosforilação do IR, IRS-1 e Akt após
injeção intracerebroventricular (ICV) de INS. Neste mesmo
modelo, a injeção ICV de LEP aumentou a pTYR da tub,
em paralelo à ativação da via OBR/JAK2/STAT3 em
hipotálamo. Em contraste, em animais obesos o inverso
ocorreu. A pTYR da tub induzida por INS também foi
investigada no TAE e estava reduzida em animais com DIO
e em db/db após injeção na veia cava de INS. Após inibição
da expressão da tub com ASO (IP) houve aumento da
expressão e fosforilação de proteínas ligadas à lipólise e
redução da modulação das proteínas ligadas à lipogênese.
Peso Corpóreo Massa de Tecido Adiposo Epididimal
semanas
Massa de Tecido Adiposo Retroperitonial Massa de Tecido Adiposo
Mesentérico
CTL RC
Insulina Leptina ICV CTL DIO
Insulina
ICV
- + + CTL DIO
Leptina
ICV
+ +
Restrição Calórica Dieta Hiperlipídica
Sinalização Clássica da Insulina e da Leptina em hipotálamo de animais em RC ou em DIO
Leptina ICV
ICV
CTL RC
Tecido Adiposo Epidididmal Tecido Adiposo Epidididmal
PI3K
P IRS1/2
P AKT
STAT3 P
núcleo
FOXO1
P
STA
T3
P
P
JAK2
OBR Leptina
P P
P
IR
Insulina
P FOXO1
TUB TYR TYR
PO4 PO4
Efeitos Anorexigênicos
neuropeptídeos
TUB
Restrição Calórica Dieta Hiperlipídica
?
Núcleos do Hipotálamo
Tecido Adiposo Epidididmal
Insulina ICV
Proteínas ligadas à Lipogênese Proteínas ligadas à Lipólise
IP: IP:
SENSE ASO
Expressão da tub
IP:
- + - + +
TUB TYR TYR
PO4 PO4
Hipotálamo
Modulação da Ingestão alimentar
PI3K
P IRS1/2
P AKT
P
STA
T3
P
P
JAK2
OBR Leptina
P P
P
IR
Insulina
TUB TYR TYR
PO4 PO4
RC DIO
TUB TYR TYR
PO4 PO4
TUB TYR TYR
PO4 PO4
Tecido adiposo
IR
Insulina
Lipogênese e Lipólise
Insulina (veia cava)
Insulina (veia cava)
Insulina (veia cava)
Insulina Leptina