Buletin Teknik Pertanian Vol. 9, Nomor 1, 2004 33

A sam amino merupakan komponen utama penyusunprotein, dan dibagi dalam dua kelompok yaitu asam

amino esensial dan non-esensial. Asam amino esensial tidakdapat diproduksi dalam tubuh sehingga sering harus di-tambahkan dalam bentuk makanan, sedangkan asam aminonon-esensial dapat diproduksi dalam tubuh. Asam aminoumumnya berbentuk serbuk dan mudah larut dalam air, namuntidak larut dalam pelarut organik nonpolar (Suharsono, 1970).

Tepung ikan dan bungkil kedelai mengandung proteinyang cukup tinggi, sehingga kedua bahan tersebut diguna-kan sebagai sumber utama protein pada pakan unggas, disamping pakan lainnya. Selain sebagai sumber protein,tepung ikan juga dapat digunakan sebagai sumber kalsium.Tepung ikan yang baik mempunyai kandungan protein kasar58-68%, air 5,5-8,5%, serta garam 0,5-3,0% (Boniran, 1999).Kandungan protein atau asam amino tepung ikan dipe-ngaruhi oleh bahan ikan yang digunakan serta prosespembuatannya. Pemanasan yang berlebihan akan menghasil-kan tepung ikan yang berwarna cokelat dan kadar proteinatau asam aminonya cenderung menurun atau menjadi rusak.

Sekitar 50% protein untuk pakan unggas berasal daribungkil kedelai dan pemakaiannya untuk pakan ayam pe-daging berkisar antara 15-30%, sedangkan untuk pakan ayampetelur 10-25% (Wina, 1999). Kandungan protein bungkilkedelai mencapai 43-48%. Bungkil kedelai juga mengandungzat antinutrisi seperti tripsin inhibitor yang dapat meng-ganggu pertumbuhan unggas, namun zat antinutrisi tersebutakan rusak oleh pemanasan sehingga aman untuk digunakansebagai pakan unggas. Bungkil kedelai dibuat melalui be-berapa tahapan seperti pengambilan lemak, pemanasan, danpenggilingan (Boniran, 1999). Bungkil kedelai yang baikmengandung air tidak lebih dari 12% (Hutagalung, 1999).

Untuk menyusun formulasi pakan ternak terutamaunggas, maka perlu diketahui faktor pembatas seperti protein,energi metabolis, dan asam-asam amino. Akhir-akhir ini adakecenderungan menyusun formulasi pakan berdasarkan daya

cerna terhadap asam amino. Oleh karena itu, analisis asamamino terutama pada tepung ikan dan bungkil kedelai perludilakukan.

Tulisan ini bertujuan untuk mendapatkan dan me-lengkapi data mengenai asam amino dari tepung ikan danbungkil kedelai. Data tersebut diharapkan dapat digunakansebagai bahan acuan untuk menyusun formulasi pakan.

BAHAN DAN METODE

Analisis dilakukan di laboratorium Balai Penelitian Ternak(Balitnak) pada tahun 1990-1994. Contoh analisis untuk asamamino dari tepung ikan dan bungkil kedelai diambil daricontoh yang dikirim ke laboratorium pelayanan analisis diBalitnak. Jumlah contoh tepung ikan dan bungkil kedelaimasing-masing 10 contoh.

Bahan kimia yang digunakan meliputi:

• Larutan HCl 6 N dan 0,1 N.

• Larutan penyangga trisodium sitrat 2H2O dengan tigavariasi pH yaitu pH 3,25 (0,2 N Na+ + 1% propanol), pH 3,95(0,4 N Na+), dan pH 6,4 (1 N Na+).

• Larutan litium asetat, terdiri atas 168 g Li(OH)3, 600 ml asamasetat glasial, dan 400 ml air bebas ion.

• Larutan ninhidrin, terdiri atas 200 ml larutan “DimethylSulfokside”, 66,66 ml larutan litium asetat, 5,32 g ninhidrin,0,22 g hidridantin, dan gas N2 murni.

• Larutan standar asam amino buatan Beckman yang me-ngandung 0,25 µmol/ml.

• Contoh tepung ikan dan bungkil kedelai yang sudahdikeringkan dalam freeze drier dan digiling halus, etanolabsolut, dan es kering.

Alat yang digunakan meliputi amino acid analyzerBeckman tipe CL 119, neraca analitik 5 desimal, oven pe-ngering vakum, tabung reaksi pyrex 10 ml yang bertutup, pHmeter, pipet tetes, pipet 3 ml, erlenmeyer 1.000 ml, pengadukmagnetik, serta alat penyaring dengan membran berukuran0,22 µm.

ANALISIS ASAM AMINO DALAM TEPUNG IKANDAN BUNGKIL KEDELAI

Saulina Sitompul1

1Teknisi Litkayasa Penyelia pada Balai Penelitian Ternak, Jln. Banjar-waru, Ciawi, Kotak Pos 221, Bogor 16002, Telp. (0251) 327150,Faks. (0251) 240754

34 Buletin Teknik Pertanian Vol. 9, Nomor 1, 2004

Hidrolisis Protein

Sebanyak 50 mg dari masing-masing contoh yang sudahkering dan halus ditimbang, kemudian dimasukkan ke dalamtabung pyrex 10 ml yang bertutup. Selanjutnya ditambahkan5 ml HCl 6 N dan dialiri gas nitrogen murni (Nitrogen HP),kemudian tabung ditutup dan diletakkan dalam oven dengansuhu 105-110oC selama 24 jam.

Pengeringan Hasil Analisis

Hasil hidrolisis dikeluarkan dari dalam oven, dibiarkansampai suhu ruang, kemudian disaring dengan kertas saringwhatman No. 41. Selanjutnya dipipet 1 ml larutan ke dalamtabung 10 ml, dibekukan dengan es kering dan dikeringkandalam pengering vakum.

Penetapan Asam Amino

Hasil hidrolisis yang sudah kering dilarutkan kembali denganHCl 0,1 N hingga volume 3 ml, diaduk dengan vortex sampaihomogen, dan disaring dengan alat penyaring denganukuran membran 0,22 µm. Sebanyak 100 µl hasil saringandiinjeksikan pada alat.

Parameter Alat

Sebanyak 100 µl contoh diinjeksikan ke dalam alat yangmenggunakan resin penukaran zat ion (cation exchange) W3buatan Beckman dengan ukuran kolom 6 x 460 mm, tinggiresin 220 mm, dan suhu kolom 70oC. Larutan penyangga yangdigunakan adalah trisodium sitrat dengan pH 3,25 (me-ngandung 0,2 N Na+ dan 1% propanol), pH 3,95 (mengandung0,4 N Na+), dan pH 6,4 (mengandung 1 N Na+). Kecepatan alirlarutan penyangga adalah 33 ml/jam, kecepatan alir larutanninhidrin 16,5 ml/jam, kecepatan kertas pencatat (recorder)6 inci/jam (1 inci = 2,54 cm), serta tekanan kolom 400-450 psi.Waktu alir larutan penyangga 1 adalah 37,6 menit, larutanpenyangga 2 adalah 86,3 menit, dan larutan penyangga 3adalah 9 menit. Pencucian dengan NaOH 0,1 N dilakukanselama 20 menit. Panjang gelombang adalah 570 dan 440 µm.Larutan yang diinjeksikan adalah 0,250 µmol/ml denganvolume 100 µl.

Pencatatan

Pencatat yang digunakan masih bersifat manual sehinggaperhitungan dilakukan dengan menghitung tinggi khromato-

gram standar dan tinggi khromatogram contoh. Masing-masing dihitung dalam satuan cm.

Perhitungan

Asam amino (%) =t. splt. std (0,250 µmol/ml x BM AA x 3 ml x 10-6 x df x 100%)

bobot contoh x 10-3 g

Keterangan:t. spl = tinggi puncak khromatogram contoht. std = tinggi puncak khromatogram standar0,250 µmol/ml = konsentrasi standar3 ml = volume akhir contohBM AA = bobot molekul masing-masing asam

aminodf = faktor pengenceran

Total asam amino adalah total asam amino yang diper-oleh dari hasil analisis contoh. Total protein adalah totalprotein yang terkandung dalam contoh. Penentuan totalprotein dilakukan dengan auto analyzer.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Pemisahan asam amino dilakukan pada kolom berisi resinpenukar kation (sulfonated polystyren) dengan gugusfungsional SO3 dalam bentuk Na+ pada larutan bufer sitratdengan perubahan pH, konsentrasi Na+, dan suhu kolomtertentu. Asam amino akan bereaksi dengan ninhidrin mem-bentuk warna violet dan dibaca pada kolorimeter padapanjang gelombang 725 µm. Asam amino prolin memilikireaksi yang berlainan dengan ninhidrin. Asam amino ini akanberkondensasi dengan ninhidrin dan menghasilkan warnaberbeda dengan asam amino lainnya. Spektrum absorbsinyaberada pada panjang gelombang 440 µm.

Kandungan asam amino dari contoh yang dianalisisdihitung dengan membandingkan atau mengkonversikannyadengan standar. Tinggi puncak masing-masing asam aminopada contoh dan pada standar dihitung dalam satuan cm.Sebagai contoh, perhitungan diambil dari contoh tepung ikanno. 1 (TI 1) dengan kromatogram pada Gambar 1 dan untukstandar kromatogramnya pada Gambar 2. Dalam hal ini bobotcontoh yang digunakan sebanyak 10 mg, volume 3 ml, danfaktor pengenceran contoh (df) 4. Untuk menghitung asamamino lisin pada contoh (Gambar 2), tinggi puncak asamamino lisin = 4,55 cm dan pada standar = 7,08 cm, BM lisin =146,2.

Buletin Teknik Pertanian Vol. 9, Nomor 1, 2004 35

Lisin =7,81 cm x 0,250 µmol/ml x 3ml x 4 x 146,2 x 10-6 x 100%13,13 cm

10 x 10-3 g= 2,82%

Untuk asam amino aspartat tingginya pada contoh 5,85 cmdan standar 5,30 cm; BM = 133,1

Aspartat =10,12 cm x 0, 250 µmol/ml x 3 ml x 4 x133,1 x 10-6 x 100%9,16 cm

10 x 10-3 g= 4,41%

Untuk asam amino metionin yang tingginya pada contoh 1,12cm dan standar 5,08 cm; BM = 149,2

Metionin =1,96 cm x 0,250 µmol/ml x 3 ml x 4 x 149,2 x 10 -6 x 100%8,85 cm

10 x 10-3 g= 0,99%

Hasil analisis asam amino 10 contoh tepung ikan dapatdilihat pada Tabel 1 dan untuk bungkil kedelai pada Tabel 2.

Kandungan asam amino dari masing-masing contoh ber-variasi, yang menunjukkan adanya keragaman contoh yangdikirim ke laboratorium untuk dianalisis. Total kandunganasam amino untuk tepung ikan berkisar 35,69-54,84%, se-dangkan untuk bungkil kedelai 34,55-42,18%. Tepung ikanyang baik memiliki kandungan protein 58-68% (Boniran,1999), dan untuk bungkil kedelai sekitar 43-48%.

Lisin dan metionin merupakan asam amino pembatasyang sering digunakan dan sangat diperhatikan dalamcampuran pakan unggas. Kebutuhan akan lisin berkisar 0,45-0,85% dan untuk metionin 0,10-0,32% (Parkhurt danMountney, 1988). Kandungan lisin dari 10 contoh tepungikan yang dianalisis adalah 2,71-3,90%, yang menunjukkanbahwa tepung ikan tersebut baik digunakan sebagai sumberlisin untuk pakan unggas. Kandungan metionin tepung ikanberada pada kisaran 0,99-2,71%, sehingga tepung ikan ter-sebut ideal digunakan sebagai sumber metionin untuk pakanunggas. Bungkil kedelai mengandung lisin 1,17-2,91% danmetionin 0,7-2,51%. Data tersebut juga menunjukkan bahwacontoh bungkil kedelai yang dianalisis dapat digunakansebagai sumber lisin dan metionin untuk pakan unggas.Tepung ikan juga mengandung protein 40,01-55,80% danuntuk bungkil kedelai 38,90-46,91%.

Walaupun kadar protein contoh tepung ikan masih dibawah standar tepung ikan yang bermutu baik, komposisi

Gambar 1. Diagram hasil pemisahan asam amino pada contoh tepung ikan no. 1 [TI 1]

1 0 0

9 0

8 0

7 0

6 0

5 0

4 0

3 0

2 0

1 0

0

Asp

arta

tT

reon

inSe

rin

Gli

sin

Ala

nin

Sist

in Val

in

Met

ioni

n

Leu

sin

Tir

osin Fe

nila

lani

n

Lis

inH

isti

din Am

onia Inte

rnal

st

anda

rA

GPA

Arg

inin

Glu

tam

atP

roli

n

λ 440 nm

λ 570 nm

Tin

ggi

krom

atog

ram

(c

m)

36 Buletin Teknik Pertanian Vol. 9, Nomor 1, 2004

lisin dan metioninnya sudah memenuhi syarat untuk di-gunakan sebagai sumber beberapa asam amino untuk pakanunggas. Kandungan protein bungkil kedelai dari contoh no.2, 3, 4, 5, dan 9 tidak memenuhi standar dan no. 6, 7, 8, dan 10sudah memenuhi standar. Namun asam amino pembatas

Tabel 1. Kandungan asam amino dari 10 contoh tepung ikan

Asam aminoKadar asam amino (%)1

TI 1 TI 2 TI 3 TI 4 TI 5 TI 6 TI 7 TI 8 TI 9 TI 10

Lisin 2 , 8 2 2 , 7 1 5 , 7 5 5 , 7 4 3 , 8 9 3 , 3 1 2 , 9 0 2 , 8 0 2 , 9 0 3 , 9 0Histidin 0 , 7 8 0 , 9 0 0 , 9 2 0 , 8 7 0 , 8 7 0 , 8 0 0 , 8 1 0 , 5 0 0 , 8 1 0 , 9 9Arginin 3 , 7 5 3 , 8 1 2 , 2 6 2 , 7 7 3 , 9 7 3 , 2 0 3 , 0 1 2 , 1 0 3 , 6 9 3 , 2 1Aspar ta t 4 , 4 1 4 , 8 0 5 , 1 4 5 , 9 0 4 , 0 6 3 , 9 0 2 , 9 9 2 , 9 9 4 , 2 5 4 , 7 0Treonin 2 , 3 4 2 , 3 0 2 , 4 8 2 , 8 3 2 , 2 0 2 , 1 0 1 , 8 0 2 , 0 1 2 , 5 1 2 , 9 1Serin 3 , 7 5 3 , 7 0 3 , 3 0 3 , 5 6 1 , 2 0 3 , 1 0 1 , 9 9 1 , 8 3 3 , 9 0 3 , 6 1Glutamat 7 , 0 5 8 , 1 0 6 , 5 2 7 , 2 9 5 , 8 3 4 , 8 0 4 , 1 0 4 , 2 7 8 , 0 1 7 , 0 0Pro l in 3 , 9 3 3 , 9 9 3 , 0 5 1 , 4 8 2 ,4 2 , 9 0 2 , 8 1 1 , 6 9 4 , 0 1 1 , 7 1Glisin 3 , 8 3 3 , 9 2 4 , 4 2 4 , 2 3 2 , 6 5 2 , 8 0 2 , 4 1 2 , 3 2 3 , 9 1 8 , 3 1Alanin 3 , 1 2 3 , 1 2 4 , 0 0 4 , 7 5 3 , 3 5 3 , 2 5 3 , 1 9 3 , 0 6 3,01 2 , 9 9Sistin 0 , 6 3 0 , 7 1 0 , 4 6 0 , 3 9 0 , 5 0 0 , 2 5 0 , 2 7 0 , 3 0 0 , 7 0 0 , 4 3Valin 3 , 2 7 3 , 3 0 3 , 2 0 1 , 3 4 3 , 4 7 2 , 2 0 2 , 1 9 2 , 1 7 3 , 0 7 1 ,501Met ionin 0 , 9 9 1 , 0 1 1 , 3 5 1 , 6 8 2 , 6 1 2 , 0 1 1 , 0 1 1 , 2 6 1 , 0 1 2 , 7 1Isoleusin 2 , 3 7 2 , 4 1 1 , 7 0 1 , 8 2 2 , 6 1 2 , 2 0 1 , 6 1 2 , 0 7 2 , 4 0 1 , 9 7Leusin 3 , 9 9 4 , 0 3 3 , 4 5 4 , 0 2 4 , 0 3 3 , 2 0 3 , 0 0 2 , 7 8 3 , 8 1 3 , 9 1Tirosin 1 , 5 9 1 , 7 0 1 , 0 1 1 , 0 5 2 , 6 0 1 , 9 0 1 , 0 1 1 , 6 3 1 , 3 9 1 , 9 0Fenilalanin 2 , 3 7 2 , 6 1 2 , 8 3 2 , 2 1 2 , 9 2 2 , 0 1 1 , 8 1 1 , 9 1 2 , 0 7 2 , 9 9

Total asam amino 50 ,99 53 ,12 51 ,84 51 ,93 49 ,16 43 ,93 36 ,91 35 ,69 51 ,45 54 ,84

Total protein 55 ,11 57 ,12 5 5 , 8 54 ,99 53 ,11 47 ,07 39 ,99 40 ,01 55 ,05 57 ,001Dihitung dalam bahan keringT I = tepung ikan1 - 1 0 = nomor contoh

seperti lisin dan metionin dalam semua contoh dapat diguna-kan sebagai sumber lisin dan metionin untuk pakan unggas.Hasil analisis asam amino dari tepung ikan dan bungkilkedelai yang disajikan dalam Tabel 1 dan 2 dapat digunakansebagai acuan untuk menyusun ransum pakan unggas.

Gambar 2. Diagram pemisahan asam amino pada standar

7 0

6 0

5 0

4 0

3 0

2 0

1 0

0

Asp

arta

tT

reon

inSe

rin

Glu

tam

atP

roli

n

Gli

sin

Ala

nin

Sist

in Val

in

Met

ioni

nIs

oleu

sin

Leu

sin

Tir

osin

feni

lala

nin

His

tidi

nL

isin

Am

onia

Inte

rnal

st

anda

rA

GPA

Arg

inin

λ 440 nm

λ 570 nm

Tin

ggi

krom

atog

ram

(c

m)

Buletin Teknik Pertanian Vol. 9, Nomor 1, 2004 37

Tabel 2. Kandungan asam amino dalam 10 contoh tepung kedelai

Asam aminoKadar asam amino (%)1

BK 1 BK 2 BK 3 BK 4 BK 5 BK 6 BK 7 BK 8 BK 9 BK10

Lisin 2 , 3 1 1 , 3 2 1 , 1 7 2 , 3 0 1 , 9 0 2 , 0 1 1 , 9 0 2 , 3 0 2 , 2 0 2 , 9 1Histidin 0 , 8 7 0 , 5 1 0 , 8 3 1 , 1 0 0 , 9 0 0 , 9 0 0 , 9 9 1 , 1 0 0 , 8 1 0 , 7 7Arginin 3 , 0 7 3 , 9 4 3 , 7 6 3 , 8 1 0 , 6 3 2 , 8 7 2 , 4 7 2 , 8 0 2 , 7 1 2 , 7 8Aspar ta t 3 , 0 6 3 , 4 3 2 , 7 1 3 , 1 0 4 , 1 0 3 , 0 1 3 , 2 9 4 , 0 1 2 , 9 9 2 , 8 1Treonin 2 , 0 2 3 , 9 5 2 , 6 4 2 , 7 0 2 , 0 0 2 , 0 6 2 , 0 0 1 , 7 0 1 , 0 8 1 , 2 0Serin 1 , 2 0 2 , 2 2 2 , 6 8 2 , 1 1 1 , 4 0 1 , 4 1 1 , 7 1 2 , 1 0 1 , 1 9 1 , 2 0Glutamat 3 , 8 1 4 , 6 2 5 , 7 7 7 , 3 0 4 , 4 0 5 , 7 0 4 , 0 1 7 , 3 0 3 , 9 1 4 , 7 1Pro l in 2 , 4 0 1 , 3 3 6 , 2 4 2 , 4 0 1 , 6 7 2 , 5 9 1 , 9 1 2 , 4 1 2 , 1 1 2 , 3 9Glisin 2 , 6 5 1 , 1 8 1 , 8 7 0 , 4 0 2 , 0 0 2 , 8 1 2 , 6 9 0 , 4 3 2 , 9 0 2 , 2 1Alanin 2 , 9 5 1 , 1 8 1 , 0 9 0 , 5 0 2 , 1 0 3 , 0 9 3 , 1 7 0 , 5 9 2 , 7 0 3 , 1 9Sistin 0 , 5 0 0 , 2 7 1 , 1 2 0 , 3 0 0 , 4 9 0 , 5 0 0 , 5 3 0 , 3 7 0 , 5 1 0 , 6 1Valin 3 , 4 7 3 , 1 0 0 , 2 9 0 , 2 0 3 , 1 0 2 , 6 0 2 , 9 9 2 , 2 8 2 , 2 7 3 , 0 9Met ionin 2 , 3 5 1 , 9 5 0 , 7 0 0 , 9 0 2 , 1 5 2 , 2 1 2 , 2 9 0 , 9 8 1 , 9 7 2 , 5 1Isoleusin 2 , 6 1 2 , 0 5 1 , 6 0 2 , 2 0 0 , 9 3 2 , 7 0 3 , 0 1 2 , 2 7 1 , 1 7 2 , 6 7Leusin 3 , 0 3 1 , 8 0 0 , 6 1 3 , 3 0 2 , 9 3 2 , 6 3 3 , 7 0 3 , 3 9 2 , 3 0 3 , 1 8Tirosin 2 , 6 0 2 , 0 2 2 , 6 6 1 , 7 0 1 , 7 5 2 , 0 1 2 , 7 1 1 , 7 9 2 , 1 0 2 , 5 7Fenilalanin 2 , 9 2 2 , 1 9 2 , 7 0 2 , 3 0 2 , 1 0 2 , 8 2 2 , 8 1 2 , 4 1 2 , 5 1 2 , 8 1

Total asam amino 41 ,82 37 ,06 38 ,44 36 ,62 34 ,55 41 ,92 42 ,18 38 ,23 35 ,43 41 ,61

Total protein 46 ,91 41 ,16 42 ,01 40 ,01 38 ,90 45 ,20 46 ,00 43 ,20 39 ,20 45 ,101Dihitung dalam bahan keringBK = tepung bungkil kedelai1 - 1 0 = nomor contoh

Hutagalung, R.I. 1999. Definisi dan Standar Bahan Baku Pakan.Kumpulan Makalah Feed Qualiy Management Workshop.American Soybean Association dan Balai Penelitian Ternak.hlm. 2-13.

Parkhurst, C.R. dan Mountney. 1988. Poultry Meat and EggProduction. Van Nostrand Reinhold, New York. p. 110-121.

Suharsono. 1970. Biokimia. Erlangga, Jakarta. hlm. 33-45.

Wina, E. 1999. Kualitas protein bungkil kedelai: Metode analisisdan hubungannya dengan penampilan ayam. KumpulanMakalah Feed Quality Management Workshop. AmericanSoybean Association dan Balai Penelitian Ternak. hlm. 1-3.

KESIMPULAN

Sepuluh contoh tepung ikan dan tepung bungkil kedelaiyang dianalisis memenuhi persyaratan untuk digunakansebagai sumber asam amino pembatas seperti lisin danmetionin, terutama untuk pakan unggas. Komposisi asamamino dari contoh tepung ikan dan tepung bungkil kedelaibervariasi.

DAFTAR PUSTAKA

Boniran, S. 1999. Quality control untuk bahan baku dan produkakhir pakan ternak. Kumpulan Makalah Feed QualityManagement Workshop. American Soybean Association danBalai Penelitian Ternak. hlm. 2-7.