Análisis por electroforesis en geles de poliacrilamida de fracciones obtenidas durante

la purificación por cromatografía de intercambio iónico.

Marcador o Estándar de Peso Molecular(valores en kiloDaltons)

225 kDa150100 75 50 (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha) 35 25 15 10

GRUPO 3 - Gel NO Denaturante (al 12% )

1. Marcador Estándar

2. Extracto crudo – 2.5 uL

3. Extracto crudo – 3 uL

4. Extracto crudo – 5 uL

5. Tubo 3a (buffer sin NaCl) –fracción original.

6. Tubo 4c (0.5mM NaCl) -–fracción original.

7. Tubo 1d (1 mM NaCl) -–fracción original.

8. Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit.

9. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit.

10. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

50 kDa

1. Marcador Estándar

2. Extracto crudo – 2.5 uL

3. Extracto crudo – 3 uL

4. Extracto crudo – 5 uL

5. Tubo 3a (en buffer fosfato)

6. Tubo 4c (0.5mM NaCl)

7. Tubo 1d (1 mM NaCl)

8. Tubo 4b (0.25 mM NaCl)-precipit.

9. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) –precipit.

10. Tubo 6c (0.5 mM NaCl) – precipit.

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

50 kDa

GRUPO 3 - Gel denaturante (al 12% )

GRUPO 2 - Gel denaturante (al 15% )

1. Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado

2. Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original

3. Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit.

4. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado

5. Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original

6. Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado

7. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado

8. Marcador Estándar

9. Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original

10. Extracto crudo – 2.5 uL

NOTA : UTILIZAR ESTE GEL PARA HACER EL GRAFICO Y DETERMINAR EL PESO DE LA PIRAZINAMIDASA

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Pirazinamidasa

50 kDa

NOTA : Los datos de migración están en el último slide

Frente de corrida

Inicio de gel

GRUPO 2 - Gel NO Denaturante (al 12% )

1. Tubo 2d (1 mM NaCl) - precipitado

2. Tubo 1d (1 mM NaCl) – fracción original

3. Tubo 1d (1 mM NaCl)- precipit.

4. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) -precipitado

5. Tubo 4c (0.5 mM NaCl) -fracción original

6. Tubo 4c (0.5mM NaCl) - precipitado

7. Tubo 5b (0.25 mM NaCl) – precipitado

8. Tubo 4a (buffer sin NaCl) –fracción original

9. Extracto crudo – 2.5 uL

10. Marcador Estándar

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

50 kDa

Pirazinamidasa??? Cree usted que se pueda tomar el tamaño calculado a partir de este tipo de gel como un dato preciso?

Datos de migración del Gel denaturante (al 15% ) del Grupo 2

Migración (cm) y Pesos Moleculares (kDa)

0,2 - 225 kDa0,3 - 1500,48 - 1000,65 - 751 - 50 (banda de mayor intensidad, señalada con una flecha) 1,4 - 351,9 - 25 3 - 153,6 - 10

4,6 - frente de corrida2,3 - Pirazinamidasa (carril 2)