ARTICULO #1

Las bajas concentraciones de zinc en la mucosa gástrica se asocia con una mayor gravedad de La inflamación inducida por Helicobacter pylori

Resumen

Antecedentes: La infección crónica por Helicobacter pylori es la causa más común de cáncer gástrico. H. pylori induce el estrés oxidativo, mientras que los resultados de deficiencia de zinc en el aumento de la sensibilidad a la misma. En Ecuador, la prevalencia de cáncer gástrico y la deficiencia de zinc son altos. La hipótesis de que la deficiencia de zinc en el pueblo ecuatoriano podría causar aumento de H. pylori inducida por la inflamación de la mucosa gástrica asociada con menores concentraciones en los tejidos de zinc.

Métodos: Trescientos cincuenta y dos pacientes con dispepsia sometidos a endoscopia para obtener biopsias de la mucosa gástrica. El diagnóstico de la infección por H. pylori y su gravedad, la histopatología, la concentración de zinc de la mucosa y la intensidad de la inflamación se determinaron.

Resultados: H. inSected pylori pacientes sin gastritis crónica atrófica tenían menores concentraciones de zinc en la mucosa gástrica de los pacientes no infectados con el mismo tipo de gastritis (25 ± 1,3 225,3 vs 426,2 ± 279,9 ng / mg de proteína; ^ = 0,016). Teniendo en cuenta todos los pacientes, más grave es la infección por H. pylori, el más alto es el porcentaje de sujetos con infiltración de polimorfonucleares (PMN) (p = 0,0001). Los pacientes con alta infiltración de PMN tenían concentraciones más bajas de zinc la mucosa que los pacientes con infiltración de PMN baja (35,2 ± 20,7 vs 242,9 ± 191,8 ng / mg de proteína, p = 0,021).

Conclusiones: El grado de inflamación en el H. pylori gastritis inducida parece ser modulada por la concentración en los tejidos gástricos de zinc.

Más del 50% de la población mundial está infectada por Helicobacter pylori [1]. La infección crónica por H. pylori se asocia con la gastritis y la úlcera péptica [2], y es también la causa más común de cáncer gástrico [3], el cáncer gástrico es la segunda causa más común de mortalidad por cáncer en todo el mundo [4 [; Sin embargo, existen importantes diferencias regionales en la prevalencia del cáncer gástrico. Europa Occidental y Estados Unidos tienen una incidencia más baja, mientras que Japón, China y América del Sur tienen una mayor incidencia [3,4]. En Ecuador, el cáncer gástrico es un problema grave de salud pública que representa el 12,7% de los casos de cáncer, con una prevalencia de 29 casos por cada 100.000 habitantes [5].

H. pylori tiene éxito en sobrevivir a los efectos de los muchos componentes de la respuesta del huésped inmune innata y adaptativa [2,6,7], por H. pylori tiene muchos factores de virulencia que le permiten sobrevivir en este ambiente hostil, como la ureasa, flagelos , cag sistema de secreción tipo IV, y la proteína activadora de neutrófilos (NAP) [2 [. El sistema permite CAG

H. pylori para transferir a la célula huésped citoplasma diferentes proteínas bacterianas que modulan las funciones de la célula hospedadora [8 [. Una de las principales funciones de CAG es la activación de la interleuquina-8 (IL-8) la expresión génica. IL-8 es un potente neutrófilos (polimorfonucleares - PMN) factor quimiotáctico en 19 a 1 |. Una vez atraídos, estos PMN son activados por el PAN para llevar a cabo sus funciones inflamatorias [12]. PMN activados producen grandes cantidades de especies reactivas del oxígeno (ROS) que facilitan la eliminación de bacterias.

Se ha demostrado que el daño a la mucosa gástrica durante la infección por H. pylori es causada principalmente por el aumento de ROS y el estrés oxidativo como consecuencia [13-15], catalasa, superóxido dismutasa (SOD), tiorredoxina y glutatión reductasa se ha demostrado para servir a importantes funciones en la defensa de la mucosa frente a la infección por H. pylori [I6-19 |. H. pylori gástrica inducida por la inflamación mucosa se caracteriza por un aumento de SOD manganeso y la reducción de la SOD cobre / zinc | I7 |. También se ha demostrado que después de erradicación de H. pylori, el contenido gástrico mucosa de los rendimientos de SOD cobre / zinc a niveles normales [18). Además ¬ más, un estudio reciente demostró que la sobreexpresión-sión de la tiorredoxina enzima antioxidante, en un modelo murino de infección por H. pylori, no sólo reduce el estrés oxidativo, pero también inhibe la quimiotaxis de PMN [20]. Todos estos hallazgos ponen de relieve el papel del estrés oxidativo en la patogénesis de H. pylori inducida.

El zinc es un micronutriente abundante intracelular que participa en una amplia variedad de procesos celulares [21]. Resultados de deficiencia de zinc en un aumento de la sensibilidad al estrés oxidativo [22-24]. Como el zinc participa en varias funciones celulares críticas, especialmente de reparación del ADN, se ha sugerido que la deficiencia de zinc puede aumentar el riesgo de cáncer [23,25,26 |. La deficiencia de zinc es un importante problema de salud pública en el Ecuador [27,28 [. Hay evidencia de que la deficiencia de zinc en personas de América Latina, en particular de las regiones andinas como Ecuador, se debe tanto a la falta de fuentes nutricionales de zinc en su dieta y el aumento de consumo de salvado de cereales que contienen fitatos, que son quelantes fuertes de los minerales y por lo tanto prevenir la absorción de zinc [29], dado el riesgo de deficiencia de zinc en las

poblaciones andinas y el papel del zinc en la respuesta al estrés oxidativo, la hipótesis de que la población pobre que vive en una región andina del Ecuador han aumentado H. py/or/- inducida por el daño inflamatorio en la mucosa gástrica asociada con menores concentraciones de zinc mucosas.

Sujetos y métodos

Diseño y población

El estudio se realizó en el Hospital Pablo Arturo Suárez, en la ciudad de Quito, Ecuador. Este hospital atiende a una población de bajos ingresos que es principalmente de españoles e indígenas (mestizos) de fondo. Sin perjuicio de inscripción se llevó a cabo desde 2000 hasta 2003. El diseño del estudio y el protocolo fue aprobado por los comités de bioética de la Corporación Ecuatoriana de Biotecnología y el de la Organización Panamericana de la Salud (OPS).

Los pacientes de la atención de la búsqueda de sexo, bien sea en el hospital de entre 35-69 años de edad con diagnóstico de dispepsia y que estaban dispuestos a dar su consentimiento informado por escrito eran elegibles para participar. Los criterios de exclusión incluyeron tratamiento previo para H. pylori en los últimos 6 meses, el uso regular de agentes antimicrobianos locales o sistémicas (por ejemplo, antibióticos y bismuto), y la presencia de otras enfermedades graves (cáncer, insuficiencia cardiaca, renal o respiratoria).

Después de la inscripción, los participantes del estudio se sometieron endo ¬ examen microscópico para obtener biopsias de la mucosa gástrica. A partir de estas biopsias el diagnóstico de la infección por H. pylori y su gravedad, los cambios histopatológicos, la concentración de zinc, y la intensidad de la inflamación se determinaron.

Definiciones

Dispepsia

La dispepsia se define como la presencia de dolor epigástrico poco después de comer o dolor epigástrico continuo acompañado de náuseas y / o vómitos y / o malestar abdominal.

La gastritis histológica

Las observaciones histológicas se clasificaron de acuerdo con el Taller Internacional que evaluó y revisó el Sistema de Sydney para la presentación de informes de la gastritis con ligeras variaciones [30]. La gastritis crónica se determinó por la presencia de células mononucleares (linfocitos, células plasmáticas y macrófagos). Diagnósticos histológicos fueron clasificados como: normal, no la gastritis atrófica crónica, gastritis crónica atrófica, metaplasia intestinal o displasia. Si las células PMN estuvieron presentes, la gastritis se define como la gastritis crónica activa. Infiltración de PMN fue calificada como leve, moderada y severa de acuerdo con el Sistema de Sydney.

H. pylori colonización

La colonización por H. pylori se determinó por la presencia de OI bacilos cortos característica como se evidencia por tinción de Giemsa, ya sea en las criptas de la mucosa o unido al epitelio. Tres categorías de infección por H. pylori se determinó | 30 |: I, leve, ii un bajo número de bacterias presentes, 2, moderada, si un mayor número de bacterias dispersas estaba presente, y 3, grave, si las colonias pequeñas o bacterias agregadas estaban presentes.

Procedimientos endoscópicos y evaluaciones de laboratorio

Durante la gastroscopia nueve biopsias se obtuvieron: tres de la incisureantrum (1, 2 y 3), tres de la curva mayor del antro (4, 5, y 6), y tres del corpus (7, 8 y 9) . Las biopsias 1, 2, 3, 4, 7, 9 y se utiliza para identificar H. pylori y para histopatología. Las biopsias 5, 6, 8 y se utilizaron para medir las concentraciones tisulares de zinc.

Histopatología

Un total de 12 diapositivas por sujetos fueron estudiados. Seis láminas fueron teñidas con Giemsa para identificar a H. pylori. Las otras seis láminas fueron teñidas con hematoxilina-eosina para el estudio histopatológico. Para el control de calidad, un observador experimentado que desconocía a la primera lectura a cabo una segunda lectura de las diapositivas. En el caso de desacuerdo entre ambas observaciones, los criterios diagnósticos del segundo observador (MD) prevaleció.

Determinación de la concentración de zinc en tejido gástrico

Zinc mucosas se determinaron las concentraciones en el Departamento de Agricultura de EE.UU., Grand Forks de Investigación de Nutrición Humana del Centro en Dakota del Norte. Las biopsias fueron conservados a -20 ° C hasta su análisis. Tres muestras de mucosa para cada individuo se reunieron y se solubilizan en hidróxido de sodio / sodio solución de sulfato de dodecil durante 24 horas a temperatura ambiente. Quinientos microlitros de células solubilizadas se añadió a 2 ml de ácido nítrico. La mezcla se procesa en el digestor AIM500 bloque (Ai Científico, Saxonburg, PA, EE.UU.) como sigue: 100 ° C durante 35 minutos, 120 ° C durante 120 minutos, 130 ° minutos CFOR 90, y 145 ° C durante 140 minutos. Este ciclo se repitió una vez. Cuando las muestras fueron seco y fresco, ¡ml de peróxido de hidrógeno se añadió. Las muestras se procesaron de nuevo en el digestor bloque AIM bajo las mismas condiciones que anteriormente. Antes del análisis, 2 ml de 5% de ácido nítrico y se incubó a temperatura ambiente durante I hora. Cada muestra fue analizada en el PerkinElmer Optima 3300 DV de acoplamiento inductivo con plasma de argón Espectrómetro de Emisión Atómica (Perkin Elmer, Wellesley, MA, EE.UU.). Las biopsias fueron codificados, y el investigador de realizar determinaciones de zinc desconocía el diagnóstico histopatológico. La concentración de la mucosa zinc se expresaron en ng / mg de proteína. La concentración de proteína se determinó en las muestras solubilizadas por el método del ácido bicinconínico de Smith et al. [31].

Análisis estadístico

La entrada de datos y la gestión se realizó utilizando el software Epi-Info versión 6.04d (Centros para el Control y Prevención de Enfermedades, Atlanta, GA, EE.UU.). Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el programa SPSS versión 11.5 (SPSS Inc., Chicago, IL, EE.UU.).

Las estadísticas descriptivas de la evidencia histológica de infección por H. pylori, el diagnóstico histopatológico, la presencia de PMN en las biopsias y la concentración de zinc en la mucosa gástrica, se calcularon. La concentración de zinc en promedio en la mucosa gástrica se comparó entre H. pylori positivos y negativos biopsias, entre los pacientes infectados por H. pylori con gastritis no atrófica y los pacientes no infectados con gastritis nonatrophic, y entre los grados de infiltración de PMN en la mucosa gástrica. Además, la relación entre la gravedad de la infección por H. pylori y la infiltración gástrica por PMN se evaluó. Las diferencias de medias y porcentajes fueron evaluados por el / la prueba de chi cuadrado y la prueba de Student, respectivamente. Un nivel de significación de <0,05 fue aceptada.

Los datos de concentración de zinc en la mucosa gástrica no se distribuyen normalmente. El análisis no paramétrico producido los mismos resultados que los de la paramétrica.

Resultados

Trescientos cincuenta y dos pacientes fueron incluidos. Aunque se obtuvieron biopsias de 352 pacientes para histopatología, colonización de H. pylori y para la determinación de la concentración de zinc en la mucosa, a sólo 338 determinaciones de la concentración de zinc se incluyen en el análisis debido a que el intento inicial para procesar 14 muestras a nivel local no. De todos los pacientes, el 70% eran mujeres (245/352) y el 93,2% de los pacientes (328/352) tenían evidencia histológica de infección por H. pylori.

El diagnóstico histológico

Veinte y cuatro de cada 352 pacientes fueron infectados por H. pylori. De los pacientes infectados, casi la mitad (48,5%) no tenían gastritis crónica atrófica. La gastritis atrófica crónica y metaplasia fueron vistos en casi una cuarta parte de los pacientes. En contraste, la displasia se encuentran raramente (Tabla I).

La concentración de zinc en biopsias gástricas

Infectados con H. pylori pacientes con chronicgastritis no atrófica (n = 1 54) tenían concentraciones más bajas de zinc en la mucosa gástrica de los pacientes no infectados con similares hallazgos histológicos (n = I 1) (251,3 ± 225,3 vs 426,2 ± 279,9 ng / mg de proteínas, p = 0,016). Cuando todos los temas fueron analizados (n = 338), aquellos pacientes con presencia de H. pylori en su mucosa gástrica tenían concentraciones relativamente más bajos de zinc en la mucosa gástrica en comparación con los pacientes sin infección por H. pylori. Esta diferencia no fue estadísticamente significativa (256,4 ± 214,7 vs 321,2 ± 269,8 ng / mg de proteína;. P = 179).

La presencia de polimorfonucleares en infectados por H. pylori pacientes

La correlación entre la severidad de la infección por H. pylori y la infiltración gástrica por las células PMN fue evaluada en todos los pacientes. Se encontró que el más grave es la infección por H. pylori, mayor es el porcentaje de sujetos con infiltración de PMN (p = 0,0001) (Tabla 2).

La presencia de células polimorfonucleares y de concentración de zinc mucosa gástrica en pacientes con infección por H. pylori

Las concentraciones más bajas de zinc se observa en pacientes con PMN en su mucosa gástrica (n = 169) que en pacientes sin infiltración de PMN (n = 147) (232,45 ± 192,36 vs 283,84 ± 235,48 ng / mg de proteína, p = 0,034). Además, los pacientes con infiltración de PMN moderada (n = 8) tenían concentraciones más bajas de zinc en comparación con los pacientes con infiltración de PMN baja (n = 161) (35,2 ± 20,7 vs 242,9 ± 191,82 ng / mg de proteína, p = 0,021) ( fig. 1).

Discusión

Hemos encontrado que las concentraciones relativamente bajas de zinc mucosas gástricas en todos los H. pylori infectadas pacientes se correlaciona con la infiltración de aumento por las células PMN y, en consecuencia, aumento de la inflamación. Además, la infección por H. pylori se correlaciona con una reducción significativa en la concentración de cinc en la mucosa gástrica de los pacientes infectados con esta bacteria y habiendo no atrófica gastritis crónica.

H. pylori asociada a la inflamación es reconocida como una característica importante de la carcinogénesis gástrica [32], Por otra parte, la virulencia de la infección por H. pylori y el ambiente del estómago también juegan un papel determinante en el resultado de esta infección. Uno de los mecanismos por los cuales H. pylori induce la inflamación es por la generación de ROS por la infiltración de células polimorfonucleares [18]. La deficiencia de zinc induce el estrés oxidativo en células de mamífero con el consiguiente daño oxidativo del ADN [23,25,26], estos mecanismos de sugerir una explicación de nuestros hallazgos. La infección por H. pylori junto con la concentración de zinc más bajos en la mucosa gástrica induciría un aumento del estrés oxidativo, que se asocia con aumento de la inflamación. Esto explicaría nuestro hallazgo de bajas concentraciones significativas de zinc en la mucosa gástrica en pacientes con gastritis no atrófica crónica e infección por H. pylori, en comparación con aquellos sin infección.

En respuesta a la infección por H. pylori, las células epiteliales gástricas producen la quimioquina IL-8 [33], lo que induce la quimiotaxis y la migración transepitelial de células PMN. Los neutrófilos recryited al sitio de la inflamación generan ROS. Nuestros resultados demuestran una correlación directa entre la severidad de la infección por H. pylori y el grado de infiltración de PMN. Además, hemos encontrado que el grado de infiltración de células PMN se correlaciona inversamente con la concentración de zinc en la mucosa gástrica. Esto sugiere que los pacientes con concentraciones bajas de zinc mucosa gástrica han aumentado la inflamación causada por la infiltración aumentada de las células PMN.

Nuestra hipótesis era que la población ecuatoriana, con una alta prevalencia de deficiencia de zinc que se caracteriza por concentraciones plasmáticas de zinc [29,34], puede tener un mayor riesgo de daño inflamatorio aumenta con la infección por H. pylori. Nuestro estudio es el primero en informar de las concentraciones de zinc en la mucosa gástrica. Como el zinc es esencial para la función de numerosos enzimas intracelulares, la concentración de cinc en la mucosa gástrica puede ser un buen indicador del estado de zinc. Sin embargo, un problema potencial es la ausencia de determinación de zinc en plasma en nuestro estudio. Aunque todavía es controvertido o no la concentración plasmática de cinc es el mejor marcador para evaluar el estado de zinc; concentración plasmática de zinc es sin embargo ampliamente utilizar como una medida del estado de cinc. Determinación de las concentraciones plasmáticas de zinc en nuestro estudio nos ha permitido correlacionar con la de la mucosa gástrica para tener una mejor idea sobre el estado de zinc.

Una limitación adicional de nuestro estudio es la falta de cultivo bacteriano o test de la ureasa para confirmar la infección por H. pylori. Sin embargo, la coloración de Giemsa tiene una sensibilidad del 91%, una especificidad del 100% y una exactitud del 95% [35], Otra limitación fue el escaso número de sujetos no infectados.

Este es un problema difícil de resolver debido a la abrumadora cantidad de infectados con H. pylori entre los sujetos con dispepsia en el Ecuador [5],

La observación de que la infección por H. pylori en la presencia de las concentraciones de zinc de baja en los resultados de la infiltración de la mucosa gástrica en el aumento de células PMN y la inflamación aumentada sugiere una posible explicación para el aumento de la incidencia de cáncer gástrico en los países en desarrollo, como Ecuador, donde la deficiencia de zinc y H . pylori son importantes problemas de salud pública. Se ha demostrado que la suplementación de zinc inhibe H. py / en 'inducida por inflamación de la mucosa gástrica oxidativo en jerbos [36,37], Por otra parte, en un pequeño ensayo clínico aleatorio, un compuesto de zinc en combinación con la terapia triple (el lansoprazol, amoxicilina, claritromicina) mejoró significativamente la tasa de curación para H. pylori [38], Sin embargo, este estudio no evaluó los cambios histopatológicos relacionados con la infección por H. pylori o erradicación. Tomados en conjunto, proponemos que la deficiencia de zinc se asocia con infiltración de PMN mayor en la mucosa gástrica y la inflamación consecuente. Como la inflamación es el principal mecanismo de infección por H. pylori asociada a la carcinogénesis gástrica, se sugiere que los suplementos de zinc tenerse en cuenta para futuros estudios como un método complementario para el tratamiento y la erradicación de H. pylori.

ARTICULO #2

El efecto de la infección por Helicobacter pylori en la velocidad de crecimiento en los niños pequeños de las comunidades urbanas pobres en Ecuador

Andrey I. Egorova, 'b, Semperteguib Fernando, c, d, Bertha Estrella b, c, d, Egasc Josefina, e, Elena N. Naumovab'f, Jeffrey K. Griffiths bf

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO

Objetivo: caracterizar los efectos potenciales de las infecciones por Helicobacter en la velocidad de crecimiento en niños con bajo nivel socioeconómico jóvenes en un país en desarrollo.

Métodos: Los niños fueron reclutados en los suburbios pobres de Quito, Ecuador. Normalmente nutridos, moderadamente y sustancialmente los niños desnutridos (que se define utilizando el peso para la edad de las puntuaciones Z en la contratación) forman capas iguales. Seis medidas de altura y peso fueron recogidos durante un año. Inscripción y salir de las muestras de suero fueron analizadas para IgG anti-Helicobacter y salir de las heces diarreicas no la prueba del antígeno de Helicobacter.

Resultados: De los 124 participantes (edad de matricularse de 19 ± 9 meses), 76 (61%) de antígeno fecal excretada en la salida (estaba infectado). De éstos, 44 eran seropositivos al menos una vez (infecciones crónicas) y 32 seronegativos probado dos veces (las infecciones nuevas o en fase aguda). La velocidad de crecimiento lineal ajustado durante el seguimiento en los niños con las nuevas infecciones se redujo en un 9,7 (3,8, 15,6) mm / año en comparación con los controles no infectados y 6,4 (0,0, 12,9) mm / año en comparación con los niños con infecciones crónicas. Los efectos de las infecciones por Helicobacter en el crecimiento ponderal no fueron significativas.

Conclusión: Estos resultados sugieren que la velocidad de crecimiento lineal se reduce en los niños pequeños durante la fase inicial de la infección por Helicobacter.

1. Introducción

Helicobacter pylori es un importante patógeno que puede causar gastritis, úlceras gástricas y duodenales, gástricas y cáncer.1 Esta bacteria está adaptada exclusivamente a la infección crónica por el estómago humano. Se provoca una respuesta de tipo Th1 predominantemente inmunológico, que puede ser responsable de la gastritis síntomas.2, 3 infecciones suelen propagarse a través de contactos de persona a persona, pero el agua 2 ¬ transmitidas por la transmisión también puede occur.4 En los países en desarrollo, adquirir la mayoría de la gente la infección a principios de childhood.2, 5 La adquisición de la infección es a menudo seguida de síntomas transitorios gastritis aguda y el ácido gástrico secretion.2 deprimida, 6,7 Helicobacter se ha demostrado que altera la absorción de nutrientes y vitaminas, 8,9 y retardar el crecimiento en los niños en el desarrollo de países6 ,10-13

Las personas infectadas por Helicobacter excretan antígeno de Helicobacter. Las pruebas de antígenos en heces tiene una excelente sensibilidad y especificidad en comparación con otras pruebas invasivas de diagnóstico en niños.14-18 también induce la infección por Helicobacter fuertes anticuerpos responses.19 Los experimentos con animales han demostrado que el desarrollo de una respuesta de anticuerpos reduce symptoms.20 gastritis en los seres humanos, IgG seroconversión ocurre varios meses después de la infection.21, 22 Este lapso de tiempo entre la infección y la seroconversión de IgG se ha utilizado para definir las fases agudas (antes de la seroconversión) y crónica (después de la seroconversión) de infección.23-25 Los anticuerpos también persisten tras la erradicación espontánea de Helicobacter, que algunas veces se produce en ¬ children.26

El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos de las infecciones pylori tanto crónicos como agudos H. en el crecimiento lineal y ponderal en los niños pequeños ecuatorianos.

2. Métodos

Este estudio prospectivo se está dentro de un estudio más amplio de los efectos de micronutrientes (vitamina A y / o zinc) la suplementación en los niños pequeños (manuscrito en revisión). El estudio de los padres se registró en www.ClinicalTrials.gov (NCT00228254). Para que el estudio de los padres, los niños de 6 a 36 meses fueron reclutados en los suburbios pobres de Quito, Ecuador, en las sesiones de reclutamiento de la comunidad en abril-mayo de 2002 y 2003. Peso para la edad y talla para la edad de las puntuaciones de desviación estándar o Z-score (WAZ y HAZ) se estimaron utilizando los EE.UU. los datos del Centro Nacional de Estadísticas de Salud de referencia. Los niños desnutridos fueron intencionalmente más de ¬ muestra: sustancialmente desnutridos (WAZ <-2), ligeramente mal alimentado ¬ (-2 <WAZ <-1), y los niños normalmente criadas (WAZ> -1) forman una tercera parte cada uno de la población de estudio . Niños con desnutrición severa (peso <60% del valor normal ajustado por edad) fueron excluidos del estudio y se refirió a los centros de rehabilitación nutricional. Después de la

contratación, los niños fueron asignados al azar a la intervención o de los grupos de placebo, y fueron seguidos durante aproximadamente un año a partir de junio. Este manuscrito presenta los datos recogidos en el grupo placebo.

Una encuesta de hogares se llevó a cabo en la inscripción para evaluar demográficos, socioeconómicos y de higiene. Las enfermeras del estudio visitaron a todos los niños durante el seguimiento cuatro veces por semana para buscar los síntomas respiratorias y diarreicas. Los parámetros de crecimiento se midieron en reclutamiento y aproximadamente cada 10 semanas a partir de entonces, para un total de seis mediciones por niño. Tomaron muestras de sangre de cada niño después de un ayuno durante la noche a la inscripción y la salida para medir los niveles de micronutrientes.

Todos los aspectos de este estudio anidado fueron aprobados por los comités de ética de la Tufts University School of Medicine de Boston y la Corporación Ecuatoriana de Biotecnología en Quito. Separe los consentimientos informados se obtuvieron de los padres o tutores de cada niño participante para el estudio de los padres y el estudio anidado.

Restos de las muestras de suero fueron analizadas para anti-Helicobacter respuestas de IgG utilizando kits comerciales de la prueba ELISA obtenidas a partir de IBL Inmuno-laboratorios biológicos (Hamburgo, Alemania). Estos kits incluyen una microplaca recubierta con una mezcla de proteínas purificadas bacterianos que contienen antígenos CagA y VacA, secundaria horserad ¬ ISH conjugado con peroxidasa anti-humano solución de anticuerpo, y un conjunto de normas. Los valores de densidad óptica para anti-Helicobacter respuestas de IgG fueron convertidas en concentraciones unidad arbitraria (U / ml) y dichotomized utilizando una microplaca específico valores de corte. Al final del seguimiento (salida del estudio), los participantes de este estudio anidado también proporcionó una diarrea no muestra fecal, que se analizó para antígeno de Helicobacter excreta con un sándwich de anticuerpos monoclonales basados en ELISA (Hp StAR ™, Dako A / S, Glostrup, Dinamarca). Los resultados Helicobacter fecales de ensayo se clasificó en el valor de densidad óptica de 0,15 según las instrucciones del fabricante. Todas las pruebas de laboratorio se llevaron a cabo en la Universidad Católica del Ecuador (Pontificia Universidad Católica del Ecuador) en Quito. Se recogieron muestras de los hogares por enfermeras del estudio, entregado al laboratorio en contenedores refrigerados, y se almacenó a -20 ° C hasta su análisis.

Los niños fueron clasificados como infectados o no infectados sobre la base de los resultados de su prueba de antígeno de heces. Los niños infectados fueron clasificadas en base a su serología como tener (1) infecciones crónicas (dieron un resultado positivo en la inscripción y / o salida) o (2) nuevos o infecciones agudas de las fases (seronegativos y probado dos veces).

Los datos fueron analizados con el programa SAS v 9.2 (SAS Institute, Cary, NC, EE.UU.). Factores de riesgo demográficos y socioeconómicos de la infección Helicobacter-ter se analizaron mediante regresión logística. Los datos sobre el crecimiento durante el seguimiento se analizaron mediante modelos de regresión mixtos de efectos mediante procedimiento de SAS GLIMMIX.

3. Resultados

Sólo los niños del grupo placebo que presentaron sus no-diarreicas muestras fecales a la salida del estudio se incluyeron en este análisis (N = 124). De ellos, 26 niños representaron en el 2002 ¬ 2003 cohorte de este estudio los padres y 98 niños representaron la cohorte 2003-2004 (20% y 71%, respectivamente, del brazo de placebo de cada cohorte). El desglose de la población estudiada por género, los estratos del estado nutricional y el estado de la infección por Helicobacter se presentan en la Tabla 1.

La edad al momento del reclutamiento varió de 4,6 a 35,7 meses, la media ± desviación estándar de 19,0 ± 8,5 meses. La duración media ¬ ción de seguimiento (intervalo entre la primera y la última medición antropo-métrica) fue de 388 días, la desviación estándar de 26 días, rango de 277-413 días. La edad media a la salida de estudio fue de 31,8 meses. Normalmente los niños desnutridos fueron, en promedio, más joven que los niños desnutridos considerablemente, mientras que los niños que no estaban infectados y los niños que tenían infecciones de fase aguda fueron, en promedio, más joven que los niños con infecciones en fase crónica (Tabla 1).

Setenta y seis (61%) participantes en el estudio estaban infectados con H. pylori (antígeno excretado) en la salida del estudio (infecciones agudas y crónicas combinados). Un desglose detallado de la población de estudio por el estado de la infección y la serología se presentan en la Tabla 2. Entre los 44 niños que fueron clasificados como una infección crónica, 41 (93%) eran seropositivos en la salida. Entre los 48 niños que no estaban infectadas con Helicobacter, sólo cuatro (8%) eran seropositivos en la salida.

Las tasas de prevalencia de la infección por Helicobacter en la salida de estudio fue de 73% en sustancial desnutrición, el 47% de desnutrición leve, y el 67% de los niños normalmente nutridos. Aunque las probabilidades de infección en los niños desnutridos moderadamente fueron significativamente menores que en los controles que normalmente nutridos (p = 0,03), el patrón incompatible con una mayor probabilidad de infección en niños desnutridos sustancial sugiere que esta asociación observada se debió a un efecto aleatorio. Condiciones de hacinamiento (tres o más personas por habitación) era el único indicador socio-

económico asociado con la infección por Helicobacter (examen de heces positivo) en el análisis de regresión logística: odds ratio 2,67 (IC del 95% intervalo de confianza (IC) del 1,04, 6,91, p = 0,04), el ajuste para los estratos del estado nutricional y la edad.

Análisis preliminar de regresión mixta efecto en la etapa de desarrollo del modelo ha demostrado que las velocidades de crecimiento ajustados durante el seguimiento fueron similares en los tres estratos del estado nutricional. Por lo tanto, los términos de interacción entre el estado nutricional y el tiempo no se incluyeron en el modelo final. Los episodios de diarrea o enfermedades respiratorias durante el seguimiento, así como las condiciones de hacinamiento, no se asociaron significativamente con el crecimiento de velocidad. Por lo tanto, estas variables tampoco se incluyeron en el modelo final. Altura a la inscripción y la velocidad de crecimiento en los niños que dieron positivo, al menos una vez, pero tuvo resultado negativo de antígeno fecal en la salida (erradicar la infección por Helicobacter) no difirió significativamente o sustancialmente de las de los niños que tenían todas las pruebas de heces y serológica negativa (p> 0,5 para ambas pruebas). Esto confirmó que la inclusión de todas las pruebas fecales negativos-los niños en el grupo de control, independientemente de su estado serológico era apropiado.

El modelo final de efectos mixtos para el crecimiento lineal incluyó los efectos aleatorios para intercepción, la edad y edad al cuadrado. Los efectos principales se presentan en la Tabla 3. El efecto no lineal de la edad en el crecimiento lineal se modeló utilizando un polinomio cúbico. Las variables de indicador de género y los estratos del estado nutricional se utiliza para modelar los efectos de estos parámetros en la altura a la inscripción. Las niñas fueron significativamente más corto y más ligero que los niños, los niños desnutridos sustancialmente ¬ empobrecidas y desnutridas leve fue significativamente más corto y más ligero que los niños normalmente nutridos.

Las previsiones de la velocidad media de crecimiento lineal en niños que tenían 19 meses de edad al ingreso (promedio de edad de los participantes) y se mantuvo libre de infecciones por Helicobacter (todas las pruebas negativo) fue de 96 mm / año. Para modelar los efectos de las infecciones por Helicobacter en la velocidad de crecimiento, el modelo de regresión contiene dos términos de interacción entre variables indicadoras para los nuevos y crónicas Helicobacter Bacter las infecciones y las variables continuas de tiempo de inscribirse ¬ ción. Ajustada por edad, la velocidad de crecimiento durante el seguimiento se redujo en los niños con nuevas infecciones por Helicobacter un 9,7 (IC 95% 3,8, 15,6) mm / año, en comparación con los controles, mientras que el efecto de las infecciones crónicas era débil y no significativa (Tabla 3) . Un análisis más detallado (no se muestra en la Tabla 3) demostraron que la edad ajustada a la velocidad de crecimiento en los niños seronegativos infectados (nuevas infecciones) se redujo en un 6,4 (IC 95% 0,0, 12,9) mm / año (p = 0,05) en comparación con los niños infectados (seropositivos infecciones crónicas). En el análisis de regresión estratificada, los efectos perjudiciales ajustados de nuevas infecciones por Helicobacter en la velocidad de crecimiento fue muy similar en niños y niñas, 10.5 (IC 95%: -0,9; 21,9) mm / año y 9,0 (IC 95%: -2,2, 20,1) mm / año, respectivamente.

Los efectos sobre el crecimiento de Helicobacter ponderal se analizaron mediante modelos mixtos de regresión similares efectos (excepto el efecto de la edad se modeló utilizando un polinomio de segundo grado). Los efectos perjudiciales de la ajustados en función de las nuevas infecciones por Helicobacter y crónicos en la velocidad de crecimiento ponderal eran pequeñas y no significativas, 53 (IC del 95% -147, 253) g / año (p = 0,6) y 10 (IC del 95% -173, 193) g / año (p = 0,9), respectivamente.

4. Discusión

El principal hallazgo de este estudio fue que las nuevas infecciones por Helicobacter definido como positivo de la prueba del antígeno fecal y serología negativa se asocia con la reducción del crecimiento lineal en niños pequeños. El déficit estimado en la velocidad de crecimiento promedio durante un año de seguimiento en niños con infecciones nuevas en comparación con los controles no infectados era casi de 10 mm / año, que se traduce en aproximadamente un 10% más lento el crecimiento lineal. No hubo evidencia de la recuperación del crecimiento en niños con infección crónica por Helicobacter. Estos resultados muestran que las infecciones por Helicobacter contribuido sustancialmente al déficit de crecimiento pronunciado en los jóvenes niños y niñas ecuatorianas de vecinos pobres de las ciudades ¬ campanas.

El hallazgo de este estudio está de acuerdo con investigaciones anteriores en Colombia, que también ha demostrado el efecto perjudicial de la infección por Helicobacter en el crecimiento de tener la razón más pronunciada después de la infección.13 Se podría especular que la infección crónica se asocia con un patrón diferente de la inflamación gástrica que se no causa un efecto perjudicial sobre el crecimiento en niños. Seroconversión de la IgG, que se produce varios meses después de la infección en los niños, puede servir como un biomarcador de la transición a la fase crónica de la infección. Akhiani et al.20 demostraron que el desarrollo de una respuesta de anticuerpos anti-Helicobacter se asocia con disminución de la inflamación gástrica, pero la colonización mejorada en modelos animales y especuló que el anti-Helicobacter bacteriemia anticuerpos puede facilitar la persistencia de este patógeno.

El efecto perjudicial de la nueva infección por Helicobacter en la velocidad de crecimiento lineal en estos niños ecuatorianos fue casi el doble de 5 mm / año efecto observado previamente en Colombia niños.11 Esta discrepancia puede explicarse por diferentes poblaciones de origen y, al menos en parte, un muestreo aleatorio efecto. El efecto sobre el crecimiento de

Helicobacter ponderal en estos niños ecuatorianos era pequeña y no significativa, lo cual es consistente con los resultados de investigaciones previas en Colombia.11, 13

Este estudio utilizó un anticuerpo monoclonal del antígeno fecal prueba de ELISA para la detección de infecciones por Helicobacter y pruebas serológicas de ELISA IgG de clasificar las infecciones como la nueva (serología negativa) o crónica (serología positiva), utilizando una clasificación de la infección previamente desarrollado scheme.22-24 Se ha demostrado previamente que la Hp StAR ™ anticuerpo monoclonal prueba de ELISA para antígeno de Helicobacter fecal puede ser utilizado como un indicador fiable de la infección por Helicobacter en los niños, ya que se compara muy bien con pruebas diagnósticas invasivas, así como el test del aliento con urea-13C, con una sensibilidad que va desde el 94,4% al 98,2% y una especificidad del 94,7% a 98,1%, según

La tasa de prevalencia del 61% de las infecciones por Helicobacter en estos niños y niñas ecuatorianas según lo determine la StAR ™ Hp prueba del antígeno fecal es similar a la tasa de prevalencia del 53% en niños colombianos de 2 años de edad, según lo determinado por la prueba del aliento con urea-13C, 5, pero superiores a la tasa de prevalencia del 23% reportado en otro grupo de niños colombianos que se encontraban, en promedio, de aproximadamente 4 años de age.11

Una limitación de este estudio fue la falta de pruebas de antígenos en heces Helicobacter momento de la inscripción. Esto no permite una evaluación más precisa del tiempo de la infección por Helicobacter y la duración de sus efectos sobre el crecimiento. Por otra parte, los episodios graves de diarrea en los participantes del estudio fueron tratados con antibióticos, alterando la historia natural del episodio. Por lo tanto, la falta de asociación entre los episodios de diarrea y el crecimiento no pueden ser generalizables a la población de origen de bajo nivel socioeconómico los niños ecuatorianos. Las fortalezas de este estudio incluyen la recopilación de datos detallados del crecimiento y el empleo de una población de origen socioeconómico homogéneo. Los resultados de este estudio proporcionan una evidencia más de perjudiciales efectos sobre el desarrollo de Helicobacter en los niños pequeños que viven en malas condiciones económicas.