Epstein-Barri ja tsütomegaloviiruse serodiagnostika

Maire Tehvre

EBV Epstein-Barri viirus e. HHV-4

(Human herpesvirus 4)

EBV

Herpesviiruste perekonnast.Üks tavalisemaid viirusi inimesel.Esineb kogu maailmas.Enamus inimesi infitseeritud, kulg tihti

asümptomaatiline, kuid harilikult põhjustab infektsioosset mononukleoosi (glandular fever- näärmete palavik)

EBV ajalugu

1889 Saksa arst Pfeiffer kirjeldas haigust, mida iseloomustab palavik, lümfadenopaatia, halb enesetunne, hepatosplenomegaalia.

1900 alguses kirjeldati hulgaliselt sarnaseid haigusjuhte.

EBV ajalugu

1932 Paul Bunnell tuvastas seerumist heterofiilsed antikehad ägeda infektsioosse mononukleoosi ajal.

1964 Michael Epstein ja Yvonne M.Barr kirjeldasid esimest inimese tuumori viirust Burkitti lümfoomi rakuliiniil. Hiljem hakati nimetama Epstein-Barri viirus.

EBV morfoloogia

Struktuur tüüpiline herpesviiruste perekonnale.

Kuulub gammaherpesviiruste alaperekonda.

EBV levik

• Süljega (kissing disease)• Oraalne sekretsioon• Veretooted, siirdatud organid• Intrauteriinselt

Arengumaades 80-100% 3-6a. lastest infitseeritud. Kliiniliselt kerge kuluga.

Arenenud maades esineb hilisemas vanuses (10-30a). Kliiniliselt mononukleoosi sündroom.

EBV kliiniline piltLastel: mittespetsiifilised infektsioonid, pikaleveninud

subfebriliteet, lümfadenopaatia, köha, nohu, farüngiit.Infektsioosne mononukleoos: halb enesetunne, väsimus,

lümfadenopaatia, tonsillofarüngiit, hepatosplenomegaalia, kõhuvalu

EBVga seotud tuumorid: B-rakuline lümfoom Burkitt´i lümfoom Nasofarüngeaalkartsinoom Leiomüosarkoom

– Komplikatsioonid – hepatiit, trombotsütopeenia, autoimmuunhaigus, Reye sündroom

- Inf. mononukleoosi sümptomid, kui IgM on negatiivne

- kas gripilaadsed sümptomid on põhjust. EBV-st- kui maksahaiguse korral negatiivne hepatiidi

seroloogia- eelneva EBV nakkuse kindlaks tegemine- antikehade konts. jälgimine

EBV-milleks testida?

EBV diagnostilised testidInfektsioosne mononukleoosPaul-Bunneli testMono Spot test – kiistestid heterofiilsete

antikehade määramiseks– posit. varases EBV staadiumis– negat. hilises staadiumis– 10% lastest heterofiilsed antikehad puuduvad

EBV infektsioon– Kaudne immuunfluorestsents

EBV diagnostilised testidMikroskoopia – slaid-test VCA, EBNA ja EA vastaste

antikehade määramiseks– Tundlik, spetsiifiline– Vajalik vilunud töötaja– Fluorestsentsmikroskoobi olemasolu– Manuaalne dokumentatsioon, subjektiivsus

Bio-chip slaid-test – kõik vajaminevad antigeenid ühel slaidil

– Kõrge töökoormus, manuaalne dokumentatsioon, subjektiivsus

EBV diagnostilised testidCLIA kemiluminestsents immuunanalüüs –luminomeetriline EIA test ak-de määramiseks

– tundlik, spetsiifiline– täielikult automatiseeritud– käsitsi tööd vähe, automatiseeritud

andmete edastamineELISA kolorimeetriline antikehade määramine

– tundlik, spetsiifiline– teostatakse manuaalselt või

automatiseeritult

EBV diagnostilised markerid

EBV markeridEA IgM /IgG varajase antigeeni vastased

antikehad – ilmuvad haiguse ägedas faasis.IgG muutub mittemõõdetavaks 3-6 kuu pärastVCA IgM ilmub inf. alguses. Kaob 4-6 nädala

pärast.VCA IgG max. 2-4 nädalal, aeglaselt langeb. Püsib

kogu elu.EBNA IgG ilmuvad aeglaselt 2-4 kuud. Püsivad

kogu elu.

EBV diagnostiline algoritm

EBV diagnostiline algoritm

EBV diagnostiline algoritm

CMV tsütomegaloviirus

CMV

Kuulub herpesviiruste perekonda. Kahespiraalne DNA viirus.

Inimestel küllalt levinud infektsioon. Haiguse kulg kerge või asümptomaatiline.

Infektsioonid rasedatel, vastsündinutel ja immuunsupresseeritud inimestel võivad põhjustada olulisi meditsiinilisi riske.

Üsasisene infektsioon – tüsistusena vaimne alaareng, koorioretiniit, kuulmise langus, neuroloogilised probleemid.

CMVVõib esineda

– primaarinfektsioon– reinfektsioon eksogeense viirusega– reaktivatsioon latentsest viirusest

CMV IgG antikehad ei pruugi tagada kaitset korduva haigestumise eest.

Nakatumine: – kongenitaalne infektsioon – ema viirus

nakatab loodet läbi platsenta. Võib põhjustada enneaegselt-, surnult sündivust.

CMV nakatumineOmandatud infektsioon - vastsündinu nakatumine

sünnitusteede läbimisel või hilisemas elus otsesel kokkupuutel teiste inimeste sekreetidega.

Erilist tähelepanu pöörata immuundefitsiitsetele patsientidele, eriti organtransplanteeritud haigetele.

CMV esikohal viiruste transplantatsiooni patoloogias. Eluohtlikud tüsistused.

CMV diagnostika

• Viiruse isoleerimine• pp65 viiruse varase antigeeni või CMV-DNA

määramine• ELISA uuring – CMV IgM, IgG antikehade

määramine• Kliinilise vere uuring

CMV diagnostika• Immuunhistokeemiline uuring.

Poolkvantitatiivne. CMV persisteerub leukotsüütides. Peamine

viiruse maatriksi valk on pp65 antigeen, mis ekspresseerub juba CMV nakkuse varases staadiumis. Sobib hästi varaseks diagnoosimiseks, kui CMV antikehade määramine on veel ebatäpne.

• CMV DNA – PCR meetod. Kiire, hea tundlikkusega. Reaalaja PCR võimaldab määrata ka viiruse hulka veres.

Kui CMV IgM positiivne

• Kas positiivne IgM on värske infektsiooni tunnus või on jääk IgM?

• Kas positiivne IgM on ristreaktsioon?• Millal on infektsioon omandatud?

Positiivne CMV IgM → edasine uuring

CMV IgM, IgG

8.5

30

15

45

100

300

1000

2000

0

IgG

IU/m

l

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1413 15 16

MonthsExposure

Cutoff IgGCutoff IgM

IgG

IgM

Acute stage Chronic / latent stage

4

3

1

2

Rat

io Ig

M

Early

acu

te

Acu

te

Sub-acute

CMV algoritm

Kokkuvõte

• Kuldne standard CMV seroloogias puudub• Madala aviidsusega tulemused alati ei tõesta

primaarinfektsiooni.• Ristreaktsioonid EBV ja RF-ga.• CMV ja EBV eristamine lisauuringutega• Positiivseid CMV IgM tulemusi alati täiendavalt

edasi uurida, et täpselt diagnoosida ema CMV infektsiooni ja minimaliseerida mittevajalikke amniotsenteese.

TÄNAN TÄHELEPANU EEST!ÜHISELT ABIKS!