Upload
others
View
7
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
LABEMA – Life science and biotechnology expert
ATP-mittarit, mikrobien identifiointimenetelmäja CO2-tuotannon mittaaminen
HAMK, Hämeenlinna, 8.5.2018
Petri Muranen
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Hygienia ja omavalvonta
Swab-testit kuivamaljat kontaktimaljat laskeumamaljat Dipslide-pintanäytteenottoputket
a) Mikrobiologiset menetelmät
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Hygienia ja omavalvonta
3M™ Clean-Trace™ ATP –järjestelmä:
b) Luminometria / ATP
3M™ Clean-Trace™ Surface ATP pintanäytteille3M™ Clean-Trace™ Water ATP vesinäytteille
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Miten ATP-menetelmä eroaamikrobiologisista menetelmistä?
Mikrobiologinen menetelmä
kasvuviive 1-3 vrk mikrobit vaatii koulutusta
ATP
reaaliaikainen kokonaislika helppo, ei pitkäaikaista
koulutusta
LABEMA – Life science and biotechnology expert
1. ATP-menetelmä ATP (adenosiinitrifosfaatti) on runsasenerginen yhdiste =
siihen varastoituu energiaa ATP:tä on kaikissa elävissä soluissa:
ruoka hiiva bakteerit homeet
LABEMA – Life science and biotechnology expert
ATP-menetelmä perustuu lusiferaasi-entsyymin toimintaan: ATP + lusiferaasi = valoa
LABEMA – Life science and biotechnology expert
ATP-menetelmä mittaa kokonaislikaa mitä enemmän likaa (ATP:tä)
sitä enemmän syntyy valoa sitä suurempi mittaustulos (Relative Light Unit, RLU)
nopea, helpokäyttöinen reaaliaikainen toistettavat tulokset = luotettava trendianalyysi pitkäaikainen säilytys: jääkaapissa +2-8oC.
Ota tikut huoneenlämpöön vähintään 10 minuuttia ennen käyttöä lyhytaikainen säilytys : huoneenlämmössä +21oC 28 päivän ajan
LABEMA – Life science and biotechnology expert
PintanäytteenottoPidä tikkua peukalon ja etusormenvälissä niin, että tikkua on helppopyörittää.
Älä koske tikun pumpulipäähän tai varteen!
Paina tikkua kohti pintaa.
Pyöritä samalla tikkua ja kerää näytettä koko pumpulipäällä!
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Aktivoi tikku painamalla sinisestäpäästä niin pitkälle, että tikunpumpulipää uppoaa putkessaolevaan nesteeseen.
Pidä putkea peukalonja etusormen välissä. Heiluttele puoleltatoiselle vähintään 5 sekuntia.
Paina tikkuputkeen.
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Näytteenotto nesteestä
Pidä putkea peukalonja etusormen välissäja heiluttele puoleltatoiselle vähintään 5 sekuntia.
Ota näytenesteestä.
Laita tikku putkeen ja aktivoi se painamalla punaisesta päästä: muovipää uppoaanesteeseen.
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Mittaus avaa luminometrin kansi, aseta tikku sisään ja paina ”Mittanäyte”
lue tulokset suhteellisina RLU-yksiköinä
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Tulokset
LABEMA – Life science and biotechnology expert
LM1
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Tulosten toistettavuus
3M™ Clean-Trace™ 9% Kilpailija 1 25% Kilpailija 2 50% Kilpailija 3 75%
useita eri luminometritoimittajia
variaatiokerroin (CV%) kertoo poikkeamasta eli kuinka lähellä mittaustulokset ovat toisiaan
suuria eroja testien suorituskyvyssä = mittausten toistettavuudessa
LABEMA – Life science and biotechnology expert
toistettavuuden vaikutus käytännössä: turhaa siivousta
0 25 50 75 100 125 150
RLU of Result
Num
be
r o
f R
esults
~15% VÄÄRIÄ POSITIIVISIA, jos testin toistettavuus on huono(CV >38%)
TulosjakaumaCV=8%
TulosjakaumaCV=38%
tuhlataan aikaa ja rahaa, ei vaarallista
LABEMA – Life science and biotechnology expert
0 50 100 150 200 250 300 350
toistettavuuden vaikutus käytännössä: ei siivota riittävästi
RLU of Result
Num
be
r o
f R
esults
TulosjakaumaCV=8%
TulosjakaumaCV=38%
~15% VÄÄRIÄ NEGATIIVISIA, jos testin toistettavuus on huono(CV >38%)
liian optimistinen kuva hygieniatasosta, VAARALLISTA !!
LABEMA – Life science and biotechnology expert
erilainen signaalin tulkinta 3M™ Clean-Trace™ photomultiplier Kilpailija 1 photodiode
erot tikuissa 3M™ Clean-Trace™ koko tikun pää mitataan Kilpailija 1 vain huuhteluvesi mitataan
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Raja-arvot
Käyttäjien määriteltävissä omassa työympäristössään. Kansainvälisissätutkimuksissa 250 RLU:ta katsottu hyväksi tasoksi sairaaloissa
Käyttöpaikka OK ?? Hälytys
Tavallinen osasto < 500 500 – 1000 > 1000
Teho-os., leikkausos. < 250 250 – 500 > 500
Välinehuolto ja sterilointipalvelut
< 100 100 - 200 > 200
Esimerkkejä:
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Sovellusalueet ja asiakkaat siivousyritykset uimahallit terveystarkastajat sairaalat elintarviketeollisuus (käytössä jo 20 vuotta)
Atria, Saarioinen, HK… Valio panimot (Hartwall, Pyynikki)
Lisätietoja: [email protected]
LABEMA – Life science and biotechnology expert
2. Mikrobien identifiointimenetelmäBiolog MicroLog Manual
tunnistaminen perustuu bakteerien “sormenjälkeen”: 96 reaktiota mikrokuoppalevyllä yhdellä kerralla
LABEMA – Life science and biotechnology expert
sokerit
aminohapot
heksoosihapot
karboksyylihapot, esterit ja rasvahapot
hapan pH
NaCl
maitohappo
pelkistysvoima
Gram+ Gram-
heksoosi-PO4:t
71 hiilenlähdettä + 23 kemiallista herkkyystestiä
LABEMA – Life science and biotechnology expert
helppoa ja yksinkertaista: ei tarvita värjäyksiä, oksidaasitestiä, katalaasitestiä, vaan aerobiset G+ ja G- bakteerit samalla levyllä
vaaditaan puhdasviljelmä ja yksi pesäke pesäke siirrostetaan siirrostusliemeen, joka sekoitetaan siirrostusliemi lisätään levylle => inkuboitumaan 18 tunniksi tulosten tulkinta seuraavana päivänä
kunkin kuopan väriä verrataan valkoiseen taustaan (pos, neg, rajat.) tulos syötetään ohjelmaan, joka vertaa sitä tietokantaan => nimi
tietokannassa yli 1800 G+ ja G- mikrobia: 267 hiivaa, 361 anaerobia jne
LABEMA – Life science and biotechnology expert
täysin automaattinen
semi-automaattinen
manuaalinen
LABEMA – Life science and biotechnology expertLisätietoja: [email protected]
Asiakkaat Allergan
MedImmune
Pfizer
Apotex
Banner Pharmacaps
Amylin
Alcon
Biogen IDEC
Sun Pharmaceuticals
Sandoz
Ciba Vision
Genentech
Bristol Myers Squibb
Neogen
MSD
Fresenius Kabi
Bausch and Lomb
Bayer
Sanofi
Actavis
Baxter
Roche
Teva
GSK
Novartis
Mead Johnson
LABEMA – Life science and biotechnology expert
3. Panimohiivan laaduntarkkailu hiivalla on merkittävä panos oluiden makuun ja laatuun,
siksi on tärkeää saada luotettavaa tietoa sen toiminnasta fermentointikyvyn määrittäminen tapahtuu mittaamalla hiivojen
metabolian tuottaman hiilidioksidin määrää CO2-tuotannon määrä korreloi hiivan kunnon kanssa
ANKOMin valmistama GPM-laitteisto (Gas Production Measurement) on automaattinen mittausjärjestelmä kaasunmuodostuksen seurantaan
LABEMA – Life science and biotechnology expert
RF1-moduli
Puhdistusportti
Poistoventtiilikaasunäytteille
Pullokoot100, 250, 500 ja
1000 ml
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Langattomuus / etämittaukset kukin RFS-yksikkö voi johtaa 50 modulia ja inkubointipaikat voivat sijaita
hajallaan: langattomuus tarjoaa joustavuutta
LABEMA – Life science and biotechnology expert
GPM-laitteiston etuja pullojen inkubointi ja mittaukset tuotantolämpötilassa nopea, tuloksia saadaan riittävästi jo 2-3 tunnissa: jos hiiva on kunnossa,
kaasua muodostuu nopeasti (1 bar / alle 140 min) automaattinen järjestelmä korkissa on painetunnistin, joka mittaa kumuloituvaa painetta ja lähettää
tiedot inkubointilämpötilan ja mittausaikaväli (esim. 30-90 sek) säädettävissä
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Lisätietoja: [email protected]
Käytössäpanimoteollisuudessa, esim. Carlsbergillä useita satoja
Starter Pack
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Kiitos tarkkaavaisuudesta!www.labema.fi
LABEMA – Life science and biotechnology expert
Labema Suomi 1988
Labema OÜ Tallinna 1998
UAB Labema Vilna 2017
SIA Labema Riga (syksy 2018)
Labema kartalla