FCF 0518FCF 0518KT FCF/USPKT FCF/USP24/03/201024/03/2010

INFECINFECÇÕÇÕES VIRAISES VIRAIS

~ 400 diferentes v~ 400 diferentes v íírus humanosrus humanos•• DoenDoen çças viraisas virais : : -- agudas ou cragudas ou cr ôônicasnicas-- sintomsintom ááticas ou assintomticas ou assintom ááticasticas-- graves ou graves ou benben íígnasgnas-- VVáários vrios v íírus causam rus causam sintomas ~ ousintomas ~ ou1 v1 víírus causam vrus causam v áárias doenrias doen ççasas

•• ConsequConsequ êênciasncias de uma infecde uma infec çãção viralo viral-- efeito efeito citopcitop ááticotico-- efeito lefeito l ííticotico-- corpcorp úúsculos de inclussculos de inclus ãão o -- formaforma çãção de sinco de sinc íícioscios-- transformatransforma çãção neoplo neopl áásicasica-- mecanismo mecanismo imunopatolimunopatol óógicogico-- danificam resistdanificam resist êência inatancia inata-- induz autoinduz auto --imunidadeimunidade-- quebra de tolerquebra de toler âância imunolncia imunol óógicagica-- depledeple çãção dos LT CD4+o dos LT CD4+-- formaforma çãção de ICo de IC

Vaz, A.; Vaz, A.; TakeiTakei , K.; Bueno, , K.; Bueno, E.C.E.C. –– ImunoensaiosImunoensaios . Fundamentos. Fundamentose Aplicae Aplica çõçõ es. Guanabara es. Guanabara KooganKoogan , Rio de Janeiro,, Rio de Janeiro,20072007

Agente etiolAgente etiolóógico, tipo gico, tipo gengenôômicomico, principais manifesta, principais manifestaçõções cles clíínicas e nicas e ttéécnicas de diagncnicas de diagnóóstico laboratorial de doenstico laboratorial de doençças virais.as virais.

Agente viral FamíliaGenom

aDoença

Métodos laboratoriais mais empregados

Respiratórios

Adenovírus Adenoviridae DNAInfecções do trato respiratório superior e inferior, conjuntivite, diarréia

Sorológico, cultura celular

Rinovírus A e B Picornaviridae RNA Infecções do trato respiratório superiorSorológico, cultura celular. Geralmente desnecessário.

Coxsackievírus Picornaviridae RNAPleurodinia, herpangina, doença da mão-pé-e boca

Sorológico, cultura celular

Coronavírus Coronaviridae RNA Infecções do trato respiratório superiorSorológico, cultura celular, microscopia eletrônica

Vírus Influenza A -C Orthomyxoviridae RNAInfluenza. Principal causa de gripe pandêmica e epidêmica

Sorológico, cultura celular, IFD

Vírus parainfluenza 1 - 4 Paramyxoviridae RNAInfecções do trato respiratório superior e inferior, crupe

Sorológico, cultura celular, shell-vial, IFD

Vírus sincicial respiratório –RSV

Paramyxoviridae RNA Bronquiolite, pneumoniaSorológico, cultura celular, IFD

Digestivos

Vírus da caxumba Paramyxoviridae RNA Caxumba, pancreatite, orquite Sorológico, cultura celular

Rotavírus Reoviridae RNA Diarréia infantil

Microscopia eletrônica, detecção do vírus nas fezes por ELISA ou por aglutinação de partículas/látex

Agente Norwalk Caliciviridae RNA Gastroenterite

Agente viral FamíliaGenom

aDoença

Métodos laboratoriais mais empregados

Vírus da hepatite B – HBV Hepadnaviridae DNA Hepatite B aguda e crônica.Sorológico, detecção Ag viral, molecular

Vírus da hepatite C – HCV Flaviviridae RNA Hepatite C aguda e crônica Sorológico, molecular

Vírus da hepatite D – HDV Agente subviralDelta vírus

RNA Hepatite D aguda e crônica (com HBV)Sorológico

Vírus da hepatite E – HEV Caliciviridae RNAHepatite E aguda. Transmissão oral-fecal

Sorológico

Sistêmicos com erupções cutâneas

Vírus do sarampo Paramyxoviridae RNA Sarampo Cultura celular, sorológico

Vírus da rubéola Togaviridae RNARubéola e síndrome da rubéola congênita

Sorológico

Parvovírus B19 Parvoviridae DNAEritema infeccioso, anemia aplásticaanemia hemolítica crônica

Histológico, sorológico, molecular

Vírus da vacínia Poxviridae DNA Varíola

Vírus varicela-zoster – VZV Herpesviridae DNA Varicela, herpes-zosterCultura celular, shell-vial, sorológico, IFD

Vírus herpes simples 1 – HSV 1

Herpesviridae DNALesão herpética (labial), gengivoestomatite, furúnculos, encefalite

Cultura celular, sorológico, microscopia eletrônica, molecular, IFD

Vírus herpes simples 2 – HSV 2

Herpesviridae DNA Lesão herpética genital, encefaliteCultura celular, sorológico, microscopia eletrônica e molecular, IFD

Agente viral FamíliaGenom

aDoença

Métodos laboratoriais mais empregados

Sistêmicos com distúrbios hematopoiéticos

Citomegalovírus – CMV Herpesviridae DNADoença da inclusão citomegálica, CMV congênita

Sorológico, cultura celular, shell-vial, antigenemia e molecular

Epstein-Barr vírus – EBV Herpesviridae DNAMononucleose infecciosa, linfoma de Burkitt, carcinoma de nasofaringe

Sorológico, anticorpos heterófilos

Vírus linfotrópico T humano -HTLV-I

Retroviridae RNALeucemia/linfoma de células T do adulto, paraparesia espástica tropical

Sorológico

HTLV-II Retroviridae RNAProvável associação com doença neurológica semelhante à paraparesia espástica tropical e ataxia

Sorológico

Vírus da imunodeficiência humana adquirida – HIV-1 e HIV-2

Retroviridae RNASíndrome da imunodeficiência humana adquirida (AIDS)

Sorológico, detecção de Ag, molecular

Arbovírus e Febre hemorrágica

Vírus da Dengue 1-4 Togaviridae RNA Dengue, febre hemorrágica Sorológico, Ac em LCR

Vírus da febre amarela Togaviridae RNA Febre amarela Sorológico, Ac em LCR

Crescimentos verrucosos

Papilomavírus humano – HPV Papillomaviridae DNA Condiloma, carcinoma cervicalCitológico, molecular. Sorologia de baixo valor diagnóstico

Agente viral FamíliaGenom

aDoença

Métodos laboratoriais mais empregados

Sistema nervoso central

Vírus da poliomielite Picornaviridae RNA Poliomielite Sorológico, cultura celular

Vírus da raiva Rhabdoviridae RNA RaivaSorológico só para a avaliação da vacinação, coloração FA

JC Vírus Papovaviridae DNALeucoencefalopatia multifocal progressiva

Microscopia eletrônica

Vírus da encefalites arboviraisTogaviridae RNA

Encefalite oriental, do Oeste, e Venezuelana

Sorológico ou isolamento viral, Ac em LCR

Adaptado de Samuelson J. DoenAdaptado de Samuelson J. Doen çças Infecciosas. In: as Infecciosas. In: ContranContran RS, RS, KumarKumar B, Collins T. B, Collins T. Robbins Robbins –– PatologiaPatologiaestrutural e funcional.estrutural e funcional.Traduzido por Barbosa FB, Vasconcelos MM, Traduzido por Barbosa FB, Vasconcelos MM, VoeuxVoeux PJ, 6PJ, 6ªª ed. Rio de Janeiro: Guanabara ed. Rio de Janeiro: Guanabara KooganKoogan , 2000. p. 300., 2000. p. 300.Adaptado de Adaptado de http://virologyhttp://virology --online.com/questions/89online.com/questions/89 --1.htm1.htm . Acesso em 10/01/2006.. Acesso em 10/01/2006.

Vaz, A.; Vaz, A.; TakeiTakei , K.; Bueno, , K.; Bueno, E.C.E.C. –– ImunoensaiosImunoensaios . Fundamentos e Aplica. Fundamentos e Aplica çõçõ es. Guanabara es. Guanabara KooganKoogan , Rio de Janeiro,, Rio de Janeiro,2007 2007

DIAGNDIAGNÓÓSTICO LABORATORIAL DAS VIROSESSTICO LABORATORIAL DAS VIROSES

DETECDETECÇÃÇÃO DO AGENTE, O DO AGENTE, AgAg OU DO OU DO ÁÁCIDO NUCLCIDO NUCLÉÉICOICO

•• Isolamento viral por cultura do vIsolamento viral por cultura do v íírusrus•• Microscopia e Microscopia e imunomicroscopiaimunomicroscopia eletreletr ôônicanica•• Citologia e histologia Citologia e histologia –– InclusInclus õões cito/nucleares, IFI, Shell es cito/nucleares, IFI, Shell vialvial•• DetecDetec çãção do o do áácido nuclcido nucl ééico ico -- amplicaamplica çãçãoo do do áácido nuclcido nucl ééico ico -- amplificaamplifica çãção do sinal o do sinal

TTÉÉCNICA SOROLCNICA SOROL ÓÓGICAGICA

AnticorposAnticorpos-- detecdetec çãção de o de IgMIgM, , IgAIgA e e IgGIgG de alta e baixa avidez, de alta e baixa avidez, -- Uso de Uso de AcAc Mo como ferramenta de detecMo como ferramenta de detec çãçãoo

AntAnt íígenosgenos-- lisadolisado viralviral-- antant íígeno viral purificadogeno viral purificado-- antant íígeno recombinadogeno recombinado-- peptpept íídeo sintdeo sint ééticotico

BIOLOGIA MOLECULAR NO DIAGNBIOLOGIA MOLECULAR NO DIAGN ÓÓSTICOSTICOLABORATORIALLABORATORIAL

•• DETECDETECÇÃÇÃO DO O DO ÁÁCIDO NUCLCIDO NUCLÉÉICOICONATNATbDNAbDNACaptura hCaptura h ííbridabridaHibridaHibrida çõçõ es es

•• GENOTIPAGEMGENOTIPAGEMLiPALiPA , sorol, sorol óógica gica sequenciamentosequenciamento

•• PRODUPRODUÇÃÇÃO DE REAGENTES/INSUMOS LABORATORIAISO DE REAGENTES/INSUMOS LABORATORIAISAcAc monoclonais para monoclonais para imunoensaiosimunoensaios , caracteriza, caracteriza çãção/purificao/purifica çãçãoode antde ant íígenosgenosAgAg recombinantes para diagnrecombinantes para diagn óóstico, vacinas, stico, vacinas, etcetc

* Visa regiões conservadas em ambos HIV-1/ HCV paraassegurar

a detecção de todos os subtipos/genótipos

5'UT 3'UTC E1 E2/NS1NS2 NS3 NS4 NS5

HIV-1

HCV

gag pol vif envLTR

Regiões alvo das sondas de captura, amplificação e detecção

Região 5 'UT

Região LTR Região pol

EnsaioEnsaio Chiron Chiron ProcleixProcleix HIVHIV--1/HCV 1/HCV AmplificaAmplifica çãçãoo —— LocalizaLocaliza çãçãoo

APLICAAPLICA ÇÃÇÃO DOS TESTES QUALITATIVOSO DOS TESTES QUALITATIVOSDE DETECDE DETECÇÃÇÃO DO O DO ÁÁCIDO NUCLCIDO NUCLÉÉICOICO

•• Elevada Elevada sensibilidadesensibilidade•• Detecta o agente durante a Detecta o agente durante a janela janela sorolsorol óógica gica –– diagndiagn óósticosticoprecoceprecoce

•• Detecta Detecta viremiaviremia•• Monitoramento do Monitoramento do tratamentotratamento•• DiagnDiagn óóstico stico definitivo definitivo –– esclarece resultados sorolesclarece resultados sorol óógicosgicosinconclusivos ou indeterminadosinconclusivos ou indeterminados

•• Detecta transmissDetecta transmiss ãão o congcong êênitanita•• DiagnDiagn óóstico em stico em imunodeficientesimunodeficientes•• Detecta Detecta mutamuta çõçõ es es e o surgimento de mutantes resistentese o surgimento de mutantes resistentes•• GenotipagemGenotipagem

PERFIL CLPERFIL CL ÍÍNICO, SOROLNICO, SOROLÓÓGICO E VIRAL DA HEPATITE CGICO E VIRAL DA HEPATITE CJANELA SOROLJANELA SOROL ÓÓGICAGICA

Titu

loT

itulo

rela

tivo

rela

tivo

antianti--HCVHCV

ALTALT

anosanosmesesmeses0 3 60 3 6

JanelaJanela

ExposiExposiçãçãoo SintomasSintomas + + ouou --

HCV RNAHCV RNA

VAZ, A VAZ, A etet al. al. ImunoensaiosImunoensaios. Princ. Princíípios e Aplicapios e Aplicaçõções. Guanabara es. Guanabara KooganKoogan, Rio de Janeiro, 2007, Rio de Janeiro, 2007

0 6 12 1 2 3 0 6 12 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 4 5 6 7 8 9 10 11 semanassemanas anosanos

////00

1.0001.000

101022

1.01.066

LT CD4/mmLT CD4/mmLT CD4/mmLT CD4/mmLT CD4/mmLT CD4/mmLT CD4/mmLT CD4/mm33333333 CargaCarga viralviral

FaseFase agudaaguda FaseFase crcr ôônicanica AIDSAIDS

CargaCarga viralviral

LT CD4+LT CD4+

AnticorposAnticorpos

MARCADORES LABORATORIAIS NA INFECMARCADORES LABORATORIAIS NA INFEC ÇÃÇÃO POR HIV/AIDSO POR HIV/AIDSNIVEIS DE VIREMIANIVEIS DE VIREMIA

10 20 30 40 50 60 70 80 900

TTíítulostulos,,RNA viralRNA viralAg e AcAg e Ac

HIV-1RNA Ac - HIV-1

p24 Ag

Dias Dias apapóóss infecinfecçãçãoo20 30 40 50 90

TTíítulostulosRNA viralRNA viral

e Ace Ac

10 60 70 800

HCV RNAAc - HCV

PerfilPerfil de RNA do HIV e do HCV e de RNA do HIV e do HCV e marcadoresmarcadores sorolsorol óógicosgicos apapóóss InfecInfec çãçãoo

Ref. Ref. ChironChiron , 2004, 2004

JANELA SOROLJANELA SOROL ÓÓGICAGICAPrecocidade no diagnPrecocidade no diagn óóstico pstico p óós infecs infec çãçãoo

Ref. Saldanha, 1999Ref. Saldanha, 1999Saldanha, 2000Saldanha, 2000

DetecDetec çãção (dias)o (dias)TesteTeste

HCVHCV HIVHIV

PCRPCR 11 11 -- 1616 1111

AgAg 15 15 -- 2020 1616

AntiAnti --HCVHCV 40 40 -- 6060 2222

Hepatite B 1: 63.000 unidadesHepatite B 1: 63.000 unidadesHTLV I/II 1:641.000 unidadesHTLV I/II 1:641.000 unidadesHepatite C 1:125.000 unidades (sorolog ia)Hepatite C 1:125.000 unidades (sorolog ia)

1:1.600.000 unidades (sorologia + N1:1.600.000 unidades (sorologia + N AT)AT)HIV 1:493.000 unidades (sorol ogia)HIV 1:493.000 unidades (sorol ogia)

1:1.900.000 unidades (sorologia + N1:1.900.000 unidades (sorologia + N AT)AT)

TransfusTransfus ãão de sangue o de sangue ou derivados ou derivados –– riscos riscos

de transmissde transmiss ãão duranteo durantea janela sorola janela sorol óógica gica

RESPOSTA AO TRATAMENTORESPOSTA AO TRATAMENTO

•• Para o genPara o gen óótipo 1tipo 1 –– Teste quantitativoTeste quantitativo-- semana semana 12 12 apapóós ins in íício do tratamento: cio do tratamento: negativanegativa çãçãoo ou queda ou queda de de >>2 2 loglog nos nnos n ííveis de RNA do HCV em relaveis de RNA do HCV em rela çãção o àà carga viralcarga viralinicial: continuar o inicial: continuar o tratamento por 48tratamento por 48 semanas. Se RNA do HCVsemanas. Se RNA do HCVnegativo: negativo: repetir aprepetir ap óós 24s 24 semanas. Se negativo semanas. Se negativo �������� Resposta Resposta sustentadasustentada

•• Para os genPara os gen óótipos 2 e 3tipos 2 e 3 –– Teste qualitativoTeste qualitativo-- semana 24 de tratamento: semana 24 de tratamento: negativanegativa çãçãoo..Repetir teste qualitativo apRepetir teste qualitativo ap óós s 24 semanas24 semanas : : se negativo se negativo �������� respostarespostasustentadasustentada

TESTES QUANTITATIVOS : MONITORAMENTO DO TESTES QUANTITATIVOS : MONITORAMENTO DO TRATAMENTOTRATAMENTO

Terapia combinadaTerapia combinada : : PegPeg--INFINF(alfa(alfa --2a, alfa2a, alfa --2b) 1x semana 2b) 1x semana (subcut(subcut âânea) + nea) + ribavirinaribavirina (2x dia)(2x dia)

HCVHCV

• Pré-tratamento - Quantificação inicial ( baseline ) de HCV RNA pode ser usada como uma referência na determinaçãoda duração da terapia em pacientes com genotipo 1.

• Fator preditivo de tratamento - Quantificação de HCV RNA pode ser usada como uma referência precoce na avaliaçãoda eficácia da terapia (meses 1-3).

•• PrPréé--tratamentotratamento -- QuantificaQuantifica çãçãoo inicialinicial ((baselinebaseline ) de HCV ) de HCV RNA RNA podepode ser ser usadausada comocomo umauma referrefer êênciancia nana determinadetermina çãçãoodada duradura çãçãoo dada terapiaterapia emem pacientespacientes com com genotipogenotipo 1.1.

•• FatorFator preditivopreditivo de de tratamentotratamento -- QuantificaQuantifica çãçãoo de HCV RNA de HCV RNA podepode ser ser usadausada comocomo umauma referrefer êênciancia precoceprecoce nana avaliaavalia çãçãoodada eficefic ááciacia dada terapiaterapia ((mesesmeses 11--3).3).

EASL Consensus Statement J Hepatol 1999;30:956EASL Consensus Statement J Hepatol 1999;30:956 --961961Davis G, Gish R ACG Monograph 2001Davis G, Gish R ACG Monograph 2001

HCVHCVTESTES QUANTITATIVOS MONITORAMENTO DA TERAPIATESTES QUANTITATIVOS MONITORAMENTO DA TERAPIA

HCV: EX DE THCV: EX DE TÉÉCNICAS MOLECULARESCNICAS MOLECULARES

•• PCRPCR ((AmplicorAmplicor HepatitisHepatitis C C VirusVirus TestTest , , version 2,0, Roche) sensibilidade 50 UI/mLversion 2,0, Roche) sensibilidade 50 UI/mL

•• TMATMA –– 5 a 10 UI/mL5 a 10 UI/mL•• In In househouse –– 100 a 1.000 UI/mL100 a 1.000 UI/mL•• nestednested PCRPCR –– 100 UI/mL100 UI/mL

•• QuantitiativoQuantitiativo –– AmplicorAmplicor Monitor Monitor testtestversion 2,0 version 2,0 –– 600 a 85.000 UI/mL600 a 85.000 UI/mLou 1.620 a 2.295.000 cou 1.620 a 2.295.000 c óópias/ mLpias/ mL

•• bDNAbDNA -- >0,2 >0,2 MeqMeq/mL/mL

CDC, 2003CDC, 2003

LIMITES DE DETECLIMITES DE DETECÇÃÇÃO DE TESTES QUANTITATIVOSO DE TESTES QUANTITATIVOSExsExs . de testes encontrados no mercado. de testes encontrados no mercado

COBAS AMPLICOR HCV Monitor (RTCOBAS AMPLICOR HCV Monitor (RT --PCR) 600 PCR) 600 -- 5 x 105 x 1055

VERSANT HCV RNA 3.0 VERSANT HCV RNA 3.0 AssayAssay ((bDNAbDNA ) 615 ) 615 -- 7.7 x 107.7 x 1066

TaqManTaqMan HCV RNA (RTHCV RNA (RT--PCR) 10 PCR) 10 -- 10 x 1010 x 1066

ABBOTT MOLECULAR HCV ASR (RTABBOTT MOLECULAR HCV ASR (RT --PCR) 25 PCR) 25 –– 50 x 1050 x 1066

HBsAgHBsAg –– RESULTADOS FALSOS NO ELISA RESULTADOS FALSOS NO ELISA

FalsosFalsos --positivospositivos em:em:•• Plasma Plasma heparinizadoheparinizado•• Hemoglobina ou bilirrubina Hemoglobina ou bilirrubina •• InfecInfec . agudas ou cr. agudas ou cr ôônicasnicas•• DoenDoen çças autoas auto --imuneimune•• DoenDoen çça hepa hep áática crtica cr ôônicanica•• GrGráávidasvidas

FalsosFalsos --negativosnegativos em: em: •• Janela do coreJanela do core•• Baixos nBaixos n ííveis de veis de HBsAgHBsAg•• Mutante do gene SMutante do gene S•• CoCo--infecinfec çãção com HCV/HDVo com HCV/HDVRef. WERBER, 2004Ref. WERBER, 2004

ELUCIDAELUCIDA ÇÃÇÃO DE RESULTADOS SOROLO DE RESULTADOS SOROL ÓÓGICOSGICOSFalsos, inconclusivos, indeterminadosFalsos, inconclusivos, indeterminados

BIOMOL NA DETECBIOMOL NA DETEC ÇÃÇÃO DE MUTANTES DO VO DE MUTANTES DO VÍÍRUS RUS DA HEPATITE BDA HEPATITE B

Gene S e prGene S e pr éé--SS•• Afeta Afeta antigenicidadeantigenicidade do determinante do determinante aa

-- HBsAgHBsAg indetectindetect áável pela sorologiavel pela sorologia-- vacina nvacina n ãão protege contra HBV selvagemo protege contra HBV selvagem

Gene Gene polpolcepas cepas resistentesresistentes àà ananáálogo de logo de nucleosnucleos íídeosdeoscomo como LamivudinaLamivudina e e FamciclovirFamciclovir

•• Gene XGene X•• PrPréé--core e corecore e core

afeta afeta HBeAgHBeAg que que modula modula a resposta imunea resposta imune

Risco de transmissRisco de transmiss ãão vertical o vertical verticalverticalHBVHBV•• MMããe e HBeAgHBeAg + : 70%+ : 70%•• MMããe e antianti --HBeHBe+ : 10%+ : 10%HCVHCV•• RN de mRN de m ããe infectada: 5,6 e infectada: 5,6 –– 9,0%9,0%

DETECDETECÇÃÇÃO DE INFECO DE INFECÇÃÇÃO CONGO CONGÊÊNITA / PERINATALNITA / PERINATAL

DETECDETECÇÃÇÃO DE INFECO DE INFECÇÃÇÃO EM IMUNOSSUPRIMIDOSO EM IMUNOSSUPRIMIDOS•• AcAc podem resultar negativos na presenpodem resultar negativos na presen çça da infeca da infec çãçãoo

Diagnóstico • AcAc IgGIgG maternos passivamente maternos passivamente

transferidos no soro do RNtransferidos no soro do RN•• AcAc IgMIgM pouco senspouco sens ííveisveis

•• Fazer PCR!Fazer PCR!

BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA BIOLOGIA MOLECULAR APLICADA ÀÀ PRODUPRODUÇÃÇÃO O DE KITS/INSUMOS PARA O DIAGNDE KITS/INSUMOS PARA O DIAGN ÓÓSTICOSTICO

HEPATITE CHEPATITE C

19751975 Hepatite Hepatite nnããoo--AA, n, nããoo--BB

TransmissTransmiss íível em chimpanzvel em chimpanz ééss

19891989 Clonagem e SeqClonagem e Seq üüenciamentoenciamento

HepatitisHepatitis C C VirusVirus -- HCVHCV

kit sorolkit sorol óógico padronizado gico padronizado ANTESANTES da detecda detec çãção do HCV!o do HCV!

NS5ANS5A NS5BNS5BNS3NS3E2NS1 P7E2NS1 P7E1E155’’NCRNCR CC NS2NS2 NS4NS4 33’’NCRNCR

ORGANIZAORGANIZA ÇÃÇÃO GENO GENÔÔMICA DO HCVMICA DO HCV

RegiRegi ãão estruturalo estruturalProteProte íínasnas

NNúúcleocleo ----capscaps íídeodeo**

Protease/Protease/HelicaseHelicase

RegiRegi ãão no n ãão estruturalo estrutural

RNA RNA polimerasepolimeraseRNA dependenteRNA dependente

RegiRegi ããoohipervarihipervari áávelvel

(2.0)(2.0)

C22C22--3r3r C33rC33r

55--11--1r1r

(1.0)(1.0)

(2.0)(2.0)

C100C100--3r3r

C100C100rr

(3.0)(3.0)

NS5rNS5r

(3.0)(3.0)

GlicoproteGlicoprote íínasnasdo envelopedo envelope

MetMetáálolo --proteaseprotease

9400 9400 ntnt3033 aa

C200C200

(3.0)(3.0)

C22C22--pp

(2,0)(2,0)

C33cC33c

CofatorCofatorda da serinaserinaproteaseprotease

??

AgAg de 1de 1ªª. gera. gera çãçãoo

AgsAgs de 2de 2ªª. gera. gera çãçãoo

Ags de 3ª. geração

HCV ELISAHCV ELISA e IMMUNOBLOTe IMMUNOBLOT

GERAGERA--ÇÃÇÃOO

ANO ANTÍGENOS SENSIB.DIAS DIAS apapóós s

infecinfec çãçãoo

11ªªgeragera çãçãoo

19901990 C100C100--3 3 770%0% ~ 120~ 120

22ªªgeragera çãçãoo

19921992 C22C22--3p 3p + + C33c + C33c + C100C100--33

8888--95%95%8888

33ªªgeragera çãçãoo

19941994 C22C22--3p 3p + + C33c +C33c +C100C100--33 +NS5 +NS5

>97%>97% 6666

GENOTIPAGEM GENOTIPAGEM -- HCVHCV

RNA do HCV RNA do HCV -- ALTA HETEROGENEIDADEALTA HETEROGENEIDADE

•• EscapeEscape imunolimunol óógico: persistgico: persist êência da infecncia da infec çãção o no hospedeirono hospedeiro

•• Taxa estimada de Taxa estimada de mutamuta çõçõ eses –– 1.92 x 101.92 x 10 --33 por spor s íítio, tio, por anopor ano

•• Sem Sem imunidade cruzadaimunidade cruzada entre cepasentre cepas•• AssociaAssocia çãção entre > diversidade o entre > diversidade gengen ôômicamicae taxa para >e taxa para > cronicidadecronicidade

•• Dificulta desenvolvimento de Dificulta desenvolvimento de vacinasvacinas FarciFarci , 2000, 2000

Resposta ao tratamentoResposta ao tratamento ::• GenGenóótipos 2, 3, 5 e 6 tipos 2, 3, 5 e 6 -- 6 meses6 meses

1 e 4 1 e 4 -- 1 ano1 anoPrognProgn óósticostico ::•• GenGenóótipo 1b tipo 1b -- evolui mais para a cirrose e CHCevolui mais para a cirrose e CHC

pior para o fpior para o f íígado transplantadogado transplantadoKit diagnKit diagn óósticostico : : •• GenGenóótipo 1 tipo 1 éé protprot óótipotipo

GenotipagemGenotipagem do HCVdo HCV

IndicaIndica çõçõ es da es da GenotipagemGenotipagem

TratamentoTratamento

Resposta sorolResposta sorol óógicagica

Carga viralCarga viral

TransplanteTransplante

Epidemiologia Epidemiologia

VacinasVacinas

LiPALiPA ®® ((InnogeneticsInnogenetics ) )

GENOTIPAGEMGENOTIPAGEM

COMPLEXIDADE GENÉTICADO HCV

Categoria Homologia da Categoria Homologia da

sequsequ êênciancia (%)(%)

TipoTipo 66 66 -- 6969SubtipoSubtipo 77 77 -- 8080IsoladoIsolado 91 91 -- 9595QuasispeciesQuasispecies > 98> 98

FCF/USP

KT FCF/USPHSPE

EPIDEMIOLOGIAEPIDEMIOLOGIAGENGENÓÓTIPOS DO HCV TIPOS DO HCV -- DOADORES DE SANGUEDOADORES DE SANGUE

Doadores de Sangue (n = 34)

1a18%

1b38%1

3%

2a3%

2b3%

3a32%

1b+3a3%

Bassit, 1998 – Dissertação de Mestrado – FCF-USP

HCV HCV –– distribuidistribui çãção mundial dos geno mundial dos gen óótipostipos

1b, 3a, 1a

2a 2b

2c

1a 1b

2a 2b 3a

5a

1b

4a

1b 3a

1a 2c1a

2a

2b

1a

1b

3a

3b-3f

1b 1b

6a

1a 2b 3a

2a 2c

3a 1a 3a

LAU et al., 1996; SIMMONDS et al. 1966a; SMMONDS et al ., 1966b; GISH & LAU, 1997; MAERTENS & STUYVER, 1997; mison ET AL., 1997; SIMMON DS, 1997.

AssociaAssocia çãção entre o entre gengen óótipos do HCV e resposta tipos do HCV e resposta terapterap êêuticautica (RS, RR, NR) ao IFN (RS, RR, NR) ao IFN αααααααα--2a 2a nos nos

pacientes com HCpacientes com HC --CC

020406080

100

1a 1b 2 3 RSRS

RRRR

NRNR

GenGenóótipos do HCVtipos do HCV

Fre

qF

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êüê n

cia

de

resp

ost

a (%

)n

cia

de

resp

ost

a (%

)

BassitBassit , 1998 , 1998 –– DissertaDisserta çãção de Mestrado o de Mestrado –– FCFFCF--USPUSP

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Rea

tivid

ade

(%)

C1 C2 E2/NS1 NS3 NS4 NS5

Tipo 1

Tipo 3

BassitBassit , 1998 , 1998 –– DissertaDisserta çãção de Mestrado o de Mestrado –– FCFFCF--USPUSP

REATIVIDADE ANTICREATIVIDADE ANTIC ÓÓRPICA RPICA ÀÀDIFERENTES DIFERENTES GENGENÓÓTIPOSTIPOS DO HCVDO HCV

HCV HCV –– CANDIDATOS CANDIDATOS ÁÁ VACINASVACINAS

DificuldadesDificuldades

•• Diversidade Diversidade gengen ôômicamica•• NNãão o propagpropag áávelvel in in vitrovitro•• Sem modelo animal adequadoSem modelo animal adequado

suscetsuscet ííveis veis -- ssóó homens e homens e chimpanzeschimpanzes

•• Imunidade nImunidade n ãão protege contra HCV de outroso protege contra HCV de outrosgengen óótipostipos

Ref. Ref. –– ABRIGNANI,S. ABRIGNANI,S. –– AdvancesAdvances in in HepatitisHepatitis C, 1(5):11C, 1(5):11--12, 200112, 2001

BIOLOGIA MOLECULAR NA INVESTIGABIOLOGIA MOLECULAR NA INVESTIGA ÇÃÇÃO O DE NOVOS AGENTES DE NOVOS AGENTES

1965 B (DNA)

1973 A (RNA)

1977 D (RNA)

1989 C (RNA)

1990 E (RNA)Redução na incidência de HPT não-A, não-B

VÍRUS DAS HEPATITES

HEPATITES NANEHEPATITES NANE

HGV HGV TTVTTV

SANBANSANBANYONBAN YONBAN

SEN VIRUSSEN VIRUSTLMV (TLMV (TTVTTV--likelike mini mini virusvirus ))

PREVALPREVAL ÊÊNCIA DE NCIA DE HGVHGV RNA E ANTIRNA E ANTI --E2 EM E2 EM GRUPOS DE ALTO RISCO (%)GRUPOS DE ALTO RISCO (%)

Categoria N HGV RNA AntiCategoria N HGV RNA Anti --E2 ExposiE2 Exposi çãçãoo

UsuUsu áário de drogasrio de drogasTackeTacke etet alal 99 38 41 7599 38 41 75DilleDille etet alal 27 4 85 727 4 85 733PilotPilot --MatiasMatias etet alal 40 5 73 7840 5 73 78

Doadores de sangue pagosDoadores de sangue pagosDilleDille etet alal 50 26 34 6050 26 34 60PilotPilot --MatiasMatias etet alal 42 5 33 3842 5 33 38

HemodiHemodi áálise lise OguchiOguchi etet alal 392 11 8 19392 11 8 19

Ref.Ref.-- KIYOKAWA, K. & TANAKA, E. KIYOKAWA, K. & TANAKA, E. –– IntervirologyIntervirology , 42:185, 42:185--195, 1999195, 1999

PrevalPreval êência do ncia do TTVTTV (UTR) e positividade da (UTR) e positividade da N22 em diferentes populaN22 em diferentes popula çõçõ eses

81,281,2

97,797,7

42,342,3

85.385.3

5,55,5

Doadores de Sangue Doadores de Sangue CoagulopatasCoagulopatas CrianCriançças/adolescentesas/adolescentes

N22N22++ (%)(%)

UTRUTR--AA++ ((%%))

T T VT T V

TTV TTV éé o agente das hepatites no agente das hepatites n ãão A no A n ãão Go G??

•• NiveisNiveis de de viremiaviremia e ALTe ALT sem sem correlaccorrelac ããoo•• TTV nTTV nãão piora a o piora a cursocurso da infecda infec çãção por HCVo por HCV•• FrequFrequ êênciancia de infecde infec çãção por o por TTV ~ emTTV ~ em

populapopula çãção com e sem hepatiteo com e sem hepatite•• Alta Alta prevalpreval êênciancia na populana popula çãção normalo normal

(>90% no Jap(>90% no Jap ãão)o)•• Algumas Algumas cepas cepas ssãão mais patogo mais patog êênicas? nicas?

MATSUMOTO MATSUMOTO etet alal –– HepatologyHepatology , 30:283, 30:283--288, 1999288, 1999

•• VVÍÍRUS AINDA DESCONHECIDO RUS AINDA DESCONHECIDO ????????•• ALGUNS GENALGUNS GEN ÓÓTIPOS PATOGTIPOS PATOGÊÊNICOS NICOS ????????•• FATORES DO HOSPEDEIRO FATORES DO HOSPEDEIRO ????????•• MUTAMUTAÇÃÇÃO O ????????

HEPATITES NHEPATITES NÃÃO A NO A NÃÃO EO E

BIOLOGIA MOLECULAR BIOLOGIA MOLECULAR

Temos muito trabalho pela frente!!Temos muito trabalho pela frente!!

...e muitas oportunidades para voc...e muitas oportunidades para voc êês s fazerem grandes descobertas!! fazerem grandes descobertas!!