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CENTRO UNIVERSITÁRIO UNIVATES
PROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO STRICTO SENSU
MESTRADO EM BIOTECNOLOGIA - PPGBiotec
AVALIAÇÃO DOS POLIMORFISMOS RS7903146 E RS12255372 DO
GENE TCF7L2 NO DESENVOLVIMENTO DO DIABETES
MELLITUS TIPO 2
Cristiane dos Santos Costa
Lajeado, maio de 2014
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Cristiane dos Santos Costa
AVALIAÇÃO DOS POLIMORFISMOS RS7903146 E RS12255372 DO
GENE TCF7L2 NO DESENVOLVIMENTO DO DIABETES
MELLITUS TIPO 2
Dissertação apresentada ao Programa de
Pós-Graduação em Biotecnologia, do
Centro Universitário UNIVATES, como
parte da exigência para a obtenção do
grau de Mestre em Biotecnologia, na linha
de pesquisa Aspectos Moleculares em
Processos Fisiopatológicos
Orientadora: Profª Drª Júlia Pasqualini
Genro
Coorientadora: Profª Drª Verônica Contini
Lajeado, maio de 2014
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AGRADECIMENTO
Mais uma etapa está se findando e parece que foi ontem que tudo começou.
A elaboração do projeto, a ansiedade do processo seletivo, o início das aulas e os
desafios enfrentados em cada disciplina que se iniciava até à conclusão do tão
esperado mestrado. E não foi fácil, mas quem disse que seria?
Agradeço à todos que desde o inicio estiveram comigo nesta caminhada. Aos
meus pais, que sempre me ensinaram e me mostraram valores importantes, sempre
me apoiando e me incentivando em minhas escolhas. Pai e Mãe, vocês são meus
exemplos de trabalho, persistência e caráter e sei que vocês abdicaram de muitos
sonhos para que os meus se realizassem, e este é mais um deles, e à vocês eu
dedico esta minha felicidade. Agradeço de maneira especial à minha filha, Maria
Eduarda, que me ensinou o que é amar. Um amor infinito, incondicional. Ela que
sempre me acompanhou em muitas conquistas e agora novamente, me apoiando e
entendendo os inúmeros momentos que a mãe precisa estudar. Obrigada por
compreender a minha ausência e os momentos que não estivemos juntas.
À professora Dra. Júlia Pasqualini Genro, que me fez “mergulhar” no mundo
da genética, agradeço por todo apoio, incentivo, dedicação e paciência e que além
de professora e orientadora se mostrou uma grande amiga, caminhando comigo
nesta jornada. Às professoras Dra Verônica Contini e Dra Simone Morelo Dal Bosco,
pelos ensinamentos e pelo apoio desde o princípio. Com certeza vocês foram
minhas mestres para que eu chegasse até o fim. Aos demais professores do
PPGBiotec que contribuíram para meu aperfeiçoamento, dividindo seus
conhecimentos e experiências. À coordenadora do PPGBiotec, professora Dra
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Cláucia F. Volken de Souza, que sempre se fez presente, mostrando todo seu apoio
e entusiasmo. À todos os colegas do PPGBiotec, pelo apoio, companheirismo, pelas
experiências divididas e pelos momentos descontraídos de bate-papo. E por último,
mas não menos importante, à todos os meus amigos, de longe e de perto, que me
acompanharam ao longo dessa trajetória, me apoiando, me incentivando e vibrando
comigo em cada etapa e em cada conquista.
Todos vocês fizeram parte desta caminhada e com certeza foram muito
importantes para que eu chegasse até aqui. Muito Obrigada!
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“Tenha sempre dois hábitos:
persistência e paciência, pois você merece alcançar todos os sonhos!
É preciso muita fibra para chegar às alturas e, ao mesmo tempo,
muita flexibilidade para se curvar ao chão."
Autor Desconhecido
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RESUMO
Introdução: O Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2) é uma doença complexa, metabólica e multifatorial que afeta a qualidade de vida dos acometidos. Estima-se que até 2025 ocorra um aumento de 170 % em sua prevalência. O DM2 tem como principal característica a hiperglicemia que a longo prazo leva à disfunções em diversos tecidos e órgãos. As causas da doença envolvem fatores ambientais e fatores genéticos. Dentre os principais genes envolvidos na patogênese dessa doença está o transcription factor 7 like- (TCF7L2) estando fortemente associado ao DM2. Objetivo: O objetivo deste estudo foi investigar a associação dos polimorfismos rs7903146 e rs12255372 do gene TCF7L2 em uma população de diabéticos e não diabéticos do RS. Metodologia: Participaram da pesquisa 579 indivíduos, sendo 261 portadores de DM2 e 318 saudáveis. Os indivíduos eram provenientes da região do Vale do Taquari e da região metropolitana de Porto Alegre. As amostras do DNA encontravam-se extraídas e estocadas no Laboratório de Biotecnologia da UNIVATES. Os parâmetros bioquímicos (glicose e hemoglobina glicada) foram determinados utilizando kits comerciais da marca Bioclin®. Os polimorfismos foram genotipados através da técnica de descriminação alélica Teqman (Applied Biosystems), em equipamento de PCR em tempo real (StepOne). O equilibrio de Hardy-Weinberg foi calculado através do teste do qui-quadrado. As análises estatísticas foram calculadas comparando diabéticos e não diabéticos e as associações entre os polimorfismos genéticos e as variáveis de gravidade dos indivíduos com DM2 foram avaliadas através do ANOVA para amostras independentes. Resultados: Foram observadas diferenças significativas em relação ao Índice de Massa Corporal (IMC), hemoglobina glicada e glicose nos pacientes diabéticos da região metropolitana. Observou-se uma diferença significativa em relação à frequência alélica do polimorfismo rs7903146 nos pacientes com DM2. Por outro lado, não se encontrou associação positiva comparando portadores do alelo T com as variáveis clínicas (glicose em jejum e hemoglobina glicada). Conclusão: O alelo T, considerado de risco, apresentou-se fortemente associado nos indivíduos diabéticos, confirmando a associação dessa variante com o DM2, sugerindo que ele possa estar influenciando no desenvolvimento do DM2, mas não atue modulando a severidade da doença, uma vez que não encontramos marcadores genéticos para as diferenças bioquímicas. Ressalta-se a importância de novas pesquisas para confirmar esses achados. Palavras-chave: Diabetes Mellitus tipo 2. Genética. Gene TCF7L2.
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LISTA DE ILUSTRAÇÕES
Figura 1 – Localização do gene TCF7L2 ..................................................................17
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LISTA DE TABELAS
Tabela 1 – Incidência do Diabetes tipo 2 em diferentes regiões................................11
Tabela 2 – Estudos relacionados aos Polimorfismos (rs7903146 e rs12255372) do
gene TCF7L2..............................................................................................................20
Tabela 3 – Classificação internacional de peso para adultos segundo IMC..............26
Tabela 4 – Descrição clínica das amostras provenientes do Vale do Taquari..........28
Tabela 5 – Descrição clínica das amostras provenientes da Região Metropolitana..29
Tabela 6 – Frequências alélicas e genotípicas dos polimorfismos rs7903146 e
rs12255372 do gene TCF7L2 nos indivíduos com DM2 e sem DM2.........................29
Tabela 7 – Avaliação da influência do polimorfismo rs7903146 do gene TCF7L2 nas
variáveis clínicas dos pacientes com DM2.................................................................30
Tabela 8 – Avaliação da influência do polimorfismo rs12255372 do gene TCF7L2
nas variáveis clínicas dos pacientes com DM2..........................................................30
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LISTA DE ABREVIATURAS
ADA American Diabetes Association
AVC Acidente Vascular Cerebral
DM2 Diabetes Mellitus tipo 2
DNA Ácido desoxirribonucléico
DVP Doença Vascular Periférica
EDTA Ácido etileno diaminotetracético
GWAS genome-wide associations studies
HbA1c Hemoglobina Glicada
HBB Hospital Bruno Born
HGT Hemoglicoteste
HHEX Hematopoietically expressed homeobox
IMC Índice de massa corporal
KCNJ11 PotassiumiInwardly-rectifying channel J11
OMS Organização Mundial da Saúde
PCR Reação em cadeia da polimerase
PPAR-gama Receptor ativo por proliferados de peroxissoma
SBD Sociedade Brasileira de Diabetes
SLC30A8 Solute carrier 30 – 8
SM Síndrome Metabólica
SNP Single Nucleotide Polymorphism
TCF7L2 Transcription factor 7-like 2
TCLE Termo de consentimento livre e esclarecido
Wnt Wingless
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SUMÁRIO
1 INTRODUÇÃO........................................................................................................11
1.1 Tema ...................................................................................................................13
1.2 Problema ............................................................................................................13
1.3 Objetivos ............................................................................................................13
1.3.1 Objetivo geral ..................................................................................................13
1.3.2 Objetivos específicos .....................................................................................13
1.4 Justificativa ........................................................................................................14
2 REFERENCIAL TEÓRICO .....................................................................................15
2.1 Diabetes Mellitus tipo 2 .....................................................................................15
2.1.1 Genética do DM2 ............................................................................................16
2.2 Gene TCF7L2 X DM2..........................................................................................17
3 PROCEDIMENTOS METODOLÓGICOS ..............................................................23
3.1 Delineamento da pesquisa................................................................................23
3.2 Sujeitos da pesquisa............................... ..........................................................23
3.3 Extração de DNA ...............................................................................................25
3.4 Avaliações bioquímicas ....................................................................................25
3.5 Avaliação Nutricional.........................................................................................26
3.6 Análise molecular ..............................................................................................26
3.7 Análise estatística ............................................................................................ 26
3.8 Considerações Éticas.......................................................................................27
4 RESULTADOS .......................................................................................................28
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5 DISCUSSÃO ..........................................................................................................31
6 CONCLUSÃO ........................................................................................................34
REFERÊNCIAS .........................................................................................................35
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1 INTRODUÇÃO
O Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2) é uma doença metabólica, complexa e
multifatorial que afeta a qualidade e o estilo de vida dos acometidos, reduzindo sua
expectativa de vida, podendo levar à morte em razão das complicações decorrentes
(LYRA et al, 2006).
O DM2 tornou-se uma epidemia mundial, estima-se que sua prevalência
possa aumentar de 2,8% para mais de 4,4% até 2030 (STEEMBURGO; AZEVEDO;
MARTÍNEZ, 2009). Já no Brasil, a previsão é de que ocorra um aumento de 170%
entre 1995 e 2025 (GRILLO et al., 2006). O Rio Grande do Sul tem a terceira capital
do país com mais habitantes com DM2, cerca de 6,3% (MINISTÉRIO DA SAÚDE,
2014). Sua incidência está relacionada com as diferenças geográficas e raciais. A
Tabela 1 mostra a incidência em diferentes regiões do mundo.
Tabela 1 – Incidência do Diabetes tipo 2 em diferentes regiões
Populações Incidência (%) África 0,3 – 17,9 Ásia 1,2 – 14,6 Austrália 2,5 Europa 0,7 – 11,6 Estados Unidos 8,7 Chile 6,3 Argentina 9,6 Oriente Médio 4,6 – 40
Fonte: Tong, 2009; Ministério da Saúde, 2014.
O DM2 caracteriza-se pela hiperglicemia que pode ocorrer por mecanismos
como a secreção de insulina diminuída, resistência à insulina nos tecidos periféricos
e também pela produção aumentada de glicose pelo fígado (TONG et al., 2009). As
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consequências a longo prazo ocorrem em razão de alterações micro e
macrovasculares, levando a disfunção e danos em diversos órgãos. Indivíduos
acometidos têm maior chance de apresentar doença vascular aterosclerótica, como
doença coronariana, doença arterial periférica e doença vascular cerebral
(SOCIEDADE BRASILEIRA DE DIABETES - SBD, 2003).
A doença manifesta-se através de alguns sintomas, como perda de peso,
poliúria, polidipsia e infecções. Mesmo que o paciente esteja assintomático, os
níveis glicêmicos podem estar discretamente elevados, em um grau que possa
causar alterações funcionais e morfológicas por um longo período, antes que se
tenha um diagnóstico estabelecido (SBD, 2003).
O DM2 é uma doença comum de etiologia multifatorial onde estão envolvidos
fatores ambientais e genéticos. Fatores ambientais e de estilo de vida estão
diretamente relacionados com o DM2. O sedentarismo, hábitos alimentares
inadequados e o desenvolvimento de sobrepeso e obesidade são fatores que podem
estar relacionados à dificuldade no controle da glicemia, aumentando a resistência à
insulina e os níveis de glicose no sangue (MIHAESCU et al., 2011; KIM et al., 2012;
STEYN et al., 2004).
Em relação à contribuição genética, estudos de família mostram que os genes
desempenham papel importante no desenvolvimento do DM2. Recentemente,
varreduras genômicas (genome-wide associations studies – GWAS) vêm apontando
muitas variantes genéticas associadas ao DM2. Dentre estas, um dos genes mais
fortemente associados à doença é o gene TCF7L2. Este gene possui muitos
polimorfismos descritos, entretanto a maioria dos estudos sugere as variantes do
tipo SNP (Single Nucleotide Polymorfhism) rs7903146 e rs12255372 como as mais
relevantes para a genética do DM2 (CHANG et al., 2007; AMOLI et al., 2010;
GRANT et al., 2009; LYSSENKO et al., 2007).
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1.1 Tema
Estudo de associação dos polimorfismos rs7903146 e rs12255372 do gene
TCF7L2 com o Diabetes Melitus tipo 2.
1.2 Problema
Os polimorfismos rs7903146 e rs12255372 estão associados com o Diabetes
Mellitus tipo 2 na amostra em questão?
1.3 Objetivos
1.3.1 Objetivo geral
Investigar a associação dos polimorfismos rs7903146 e rs12255372 do gene
TCF7L2 com o DM2 em uma amostra do Rio Grande do Sul.
1.3.2 Objetivos específicos
Descrever as frequências alélicas e genotípicas dos polimorfismos
rs7903146 e rs12255372 do gene TCF7L2.
Comparar as frequências alélicas e genotípicas dos polimorfismos
rs7903146 e rs12255372 entre casos e controles para investigar
associação.
Verificar se existe diferença em relação aos níveis séricos de hemoglobina
glicada e glicose em jejum em pacientes com DM2 entre os genótipos de
ambos os polimorfismos.
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1.4 Justificativa
A alta incidência e prevalência do DM2 vêm aumentando de forma
significativa no Brasil e no mundo. Esta doença crônica e progressiva tem
consequências importantes que afetam a qualidade de vida do indivíduo. O aumento
na sua incidência e os prejuízos causados à saúde, geram elevados custos aos
cofres públicos, podendo ser considerado um problema de saúde publica.
Considerando que a etiologia do DM2 está fortemente relacionada com os
fatores genéticos, identificá-los torna-se importante para entender melhor a
patogênese da doença, bem como ajudar na busca de novos alvos terapêuticos e
talvez, no futuro, auxiliar no diagnóstico e na prevenção do DM2.
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2 REFERENCIAL TEÓRICO
2.1 Diabetes Mellitus tipo 2
O Diabetes Mellitus tipo 2 (DM2) é uma doença metabólica e multifatorial que
está entre as principais causas de morbidade e mortalidade no Brasil e no mundo,
sendo responsável por cerca de 90% dos pacientes diabéticos em todo o mundo
(SHARIFAH et al., 2013).
A insulina é um hormônio potente produzido pelas células beta-pancreáticas e
que exerce efeitos metabólicos principalmente no fígado, no tecido adiposo e no
músculo esquelético (CERSOSIMO; DeFRONZO, 2006). O DM2 é causado pela
deficiência na secreção e pela resistência à ação da insulina, sendo caracterizada
por uma hiperglicemia no sangue (REIS; VELHO, 2002; KOTA et al., 2012; American
Diabetes Association – ADA, 2014). Nessa doença, se observa uma resistência na
captação de glicose que é estimulada pela insulina, independente na hiperglicemia,
e a deterioração dessa tolerância vai depender da capacidade do pâncreas em
manter essa hiperinsulinemia crônica. Anormalidades na secreção de insulina pode
levar à resistência e a um comprometimento na captação de glicose pelos tecidos
periféricos podendo causar, de forma secundária, falência das células β, levando à
sintomas agudos e complicações crônicas (McLELLAN et al., 2007).
De acordo com Scheffel et al. (2004), as complicações crônicas do DM2
variam de acordo com a população estudada, porém estes pacientes estão
propensos de duas a quatro vezes mais a morrer de doença cardíaca em relação a
não diabéticos e apresentam quatro vezes mais chance de ter doença vascular
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periférica (DVP) e acidente vascular cerebral (AVC). Essa doença é apontada,
ainda, como a principal causa de cegueira em adultos entre 20 e 74 anos.
O DM2 é uma doença complexa e embora sua etiologia não esteja bem
compreendida, estudos apontam que fatores genéticos, juntamente com fatores
ambientais podem estar relacionados ao seu desenvolvimento. (NEUMAN et al.,
2010, ALIBEGOVIC et al., 2010).
Entre os principais fatores ambientais estão o sedentarismo e o consumo
elevado de energia, levando a obesidade e à resistência à insulina. Estudos
apontam que pessoas que consomem uma dieta rica em cereais integrais e ácidos
graxos poliinsaturados, associada ao consumo reduzido de alimentos com alto
índice glicêmico e atividade física regular, apresentam risco diminuído para o
desenvolvimento da doença (McLELLAN et al., 2007).
Em relação aos fatores genéticos, o DM2 é considerado uma doença
poligênica onde a suscetibilidade genética é determinada por vários genes que
contribuem para a predisposição, onde cada gene tem um pequeno efeito em cada
indivíduo (LINDER et al., 2012).
2.1.1 Genética do DM2
Acredita-se que a identificação e a caracterização de variantes genéticas que
predispõem ao DM2 são fundamentais para o completo entendimento da doença. A
importância da genética está apoiada em diversos fatos, entre os quais, um maior
grau de concordância entre gêmeos monozigóticos no DM2, comparados aos
dizigóticos. Estes estudos sugerem uma herdabilidade considerável, em torno de
50% - 80%, evidenciando que fatores genéticos tem papel importante na
suscetibilidade à doença. (STEYN et al., 2004; REIS; VELHO, 2002).
A descoberta de inúmeras variantes genéticas importantes para o DM2
revelou vários reguladores-chave envolvidos na homeostase da glicose e na
secreção de insulina nos seres humanos. As varreduras genômica – GWAS, tem
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sido importantes para esta descoberta (LONG et al., 2012). Varreduras genômicas
de doenças complexas como DM2, apresentam uma heterogeneidade genética
complexa e ainda existe uma parcela grande de herdabilidade genética inexplicável.
(CICCACCI et al., 2012; BILLINGS et al., 2010). Os GWAS são os principais
métodos para se estabelecer a ligação entre genótipo e fenótipo, sendo útil na
identificação de variações genéticas familiares, descobrindo variantes genéticas de
múltiplos genes com efeitos individualmente pequenos (BILLINGS et al., 2010).
Estudos moleculares apontam diversos genes implicados no DM2. Alguns
genes identificados em varreduras genômicas: o gene do receptor ativo por
proliferados de peroxissoma (PPAR-gama), gene potassium inwardly-rectifying
channel J11 (KCNJ11), solute carrier 30 – 8 (SLC30A8), hematopoietically
expressed homeobox (HHEX). (GRANT; MORRE; FLOREZ, 2009; CHANG et al.,
2007; STEYN et al., 2007).
Dentre os genes implicados na susceptibilidade do DM2, um dos genes mais
fortemente associados é o gene TCF7L2. Polimorfismos de nucleotídeo único
(SNPs) deste gene têm sido associado de forma consistente ao DM2 em populações
diferentes (MUENDLEIN et al, 2011; CICCACCI et al., 2012; WARODOMWICHIT et
al., 2009; AMOLI et al., 2010; ALIBEGOVIC et al., 2010).
2.2 Gene TCF7L2 X DM2
A proteína TCF7L2 é codificada pelo gene TCF7L2 que está localizado no
braço longo do cromossomo 10 (10q25.3), composto por 217.429 pares de base, 14
éxons e 13 íntrons. Codifica 602 aminoácidos e apresenta 4768 polimorfismos do
tipo SNP (Gene Card, 2014).
Figura 1 – Localização do gene TCF7L2
Fonte: Gene Card, 2014
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O TCF7L2 (Transcription factor 7-like 2), também conhecido como TCF4, é
uma proteína que atua como um fator de transcrição de células T, desempenhando
papel chave na via de sinalização Wnt e está implicada na homeostase da glicose. A
via de sinalização Wnt está envolvida na auto-regulação das células, assim como,
na miogênese, embriogênese e adipogênese. A Wnt desempenha função importante
na proliferação de células-β e na secreção de insulina, no desenvolvimento e
amadurecimento do pâncreas, assim como as ilhas de Langerhans. Sugere-se que
ela atue regulando a expressão gênica do proglucagon em células enteroendócrinas
através da via Wnt (GRANT et al., 2006; JIN ; LIU, 2008; ALIBEGOVIC et al., 2010;
WARODOMWICHIT et al., 2009; SMITH, 2007; GENE CARD, 2014; BACQUER et
al., 2011). O gene da insulina parece ser um alvo de TCF7L2, já que a expressão do
gene da insulina foi relatada por estar fortemente associada com a expressão do
gene TCF7L2 e de ser diminuída após o silenciamento do gene TCF7L2. (MUSSIG
et al., 2010).
Da mesma forma que a via Wnt é necessária para a miogênese, sua
inativação no TCF7L2 promove adipogênese, de forma que o aumento da
adiposidade, verificada pelo índice de massa corporal (IMC), é um grande fator de
risco para desenvolvimento do DM2 e doenças cardiovasculares (OLSSON et al.,
2009). O gene TCF7L2 também é expresso em vários órgãos e tecidos, como
fígado, cérebro, músculo e tecido adiposo, importantes para a homeostase
metabólica. Nestes tecidos, o papel fisiológico ainda não está bem definido e pode-
se descobrir novos mecanismos pelos quais variantes do gene TCF7L2 estão
associados ao risco de DM2 (CHIANG et al., 2012; NOBREGA, 2013).
Estudos revelam que portadores do alelo de risco (alelo T) dos SNPs
rs7903146 e rs12255372 deste gene, possuem risco aumentado de DM2, mesmo
em indivíduos magros ou ainda desenvolver DM2 ou obesidade por mecanismos
independentes (OLSSON et al., 2009). Além disto, estudos populacionais têm
mostrado de forma consistente que variantes do gene TCF7L2 predispõe
significativamente ao risco de DM2. Para os polimorfismos citados a frequência do
alelo T apresenta-se significativamente maior em indivíduos diabéticos quando
comparados com sujeitos sem a doença, mostrando um importante risco para o
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desenvolvimento da doença (BODHINI et al., 2007; PALIZBAN et al., 2012; MATTEI
et al., 2012).
Na Tabela 2, observa-se alguns estudos de associação importantes destes
polimorfismos com o DM2 ou fenótipos relacionados. Long et al. (2012), analisaram
29 SNP’s e 7 deles estavam associados ao DM2 e um deles foi o rs7903146,
apontando o alelo T como possível alelo de risco para o DM2 em uma população de
africanos americanos. Relata-se ainda, que a secreção de insulina é
significativamente diminuída em portadores do alelo T, apresentando também, maior
sensibilidade à insulina em uma população Dinamarquesa (ALIBEGOVIC et al.,
2010). Um estudo brasileiro aponta ainda, que o alelo T está fortemente associado à
DM2 em pacientes com doença coronariana quando comparados com indivíduos
saudáveis (MARQUEZINE et al., 2008). Assim também, outro estudo com diabéticos
e não diabéticos relatou associação positiva dessas variantes com aterosclerose
coronariana em pacientes com DM2 (MUEDLEIN et al., 2011). Outros estudos,
porém, não encontram associação destes polimorfismos com o DM2 (EREQUAT et
al., 2010; CHANDAK et al., 2007; OLSSON et al., 2009).
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TABELA 2 – Estudos relacionados aos Polimorfismos (rs7903146 e rs12255372) do gene TCF7L2 Polimorfismo
(SNP) População (Amostra)
País (Etnia)
Desfecho Avaliado Resultados Referência
rs7903146 219 DM2 114 Controles
Jerusalém Palestina
DM2 Nenhuma associação entre genótipos de TCF7L2 e as variáveis (sexo, idade e IMC). DM2 → genótipo TT diagnóstico com idade mais precoce, comparado com CC e CT.
EREQAT et al., 2010
rs7903146 rs12255372
1.031 DM2 38 mil Controles
Ásia Índios
DM2 Frequência alelo T em ambos foi ↑ em DM2.
BODHINI et al., 2007
rs7903146 4.288 Americanos Africanos 1.554 casos 2.734 Controles
EUA GWAS – DM2 29 SNP analisados → 7 associados à DM2 Entre eles, o rs7903146 atingiu nível de significância GWAS (P=36x10(-8)), com razão de chance de 1,32 para o alelo T.
LONG et al., 2012
rs7903146 rs12255372
955 DM2 399 Controles
Índios DM2 Todos mostraram ↑ do risco relativo em homozigotos TT, com maior risco do rs12255372. Nos Controles: Associação do rs12255372 com > glicose plasmática em jejum, em 2h e na homeostase de resistência á insulina.
CHANDAK et al., 2007.
rs7903146 rs12255372
760 Controles 760 DM2
Taiwan China
DM2 Nenhuma associação com DM2 em chineses.
CHANG et al., 2007
rs7903146 rs12255372
222 tolerantes à glicose 72 homens 150 mulheres
Nipo-Brasileira Intolerância à glicose O alelo T não está associado à intolerância à glicose. Portadores do genótipo CT: níveis menores de insulina após 2h da ingestão (75g glicose) comparado com CC
FRANCO et al., 2011
rs7903146 rs12255372
154 DM2 171 Controles
Itália Doenças associadas à DM
Ambos SNPs forte associação com a suscetibilidade à DM2 rs7903146 → portadores do genótipo TT estão mais associados à retinopatia diabética, doença cardiovascular, DAC (doença arterial coronariana) → dobro de risco.
CICCACCI, et al., 2012
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Polimorfismo (SNP)
População (Amostra)
País (Etnia)
Desfecho Avaliado Resultados Referência
rs7903146 38 homens saudáveis
Dinamarca Secreção e resistência à insulina
Portadores do alelo T → secreção de insulina significativamente diminuída comparado com genótipo CC. Portadores do alelo T, em jejum, apresentaram reduzido as concentrações de glucagon no plasma, comparados com portadores do genótipo CC Portadores do alelo T → maior sensibilidade à insulina
ALIBEGOVIC et al., 2010
rs7903146 rs12255372
1.630 DM2 1.064 Controles
Japão DM2 Alelo T → Ambos mostraram associação à DM2
HAYASHI, et al., 2007
rs7903146 884 DM2 513 Controles
Tunísia DM2 Alelo T > suscetibilidade à DM2 Risco 56% > entre os indivíduos portadores do genótipo TT, comparado com portadores CC.
EZZIDI, et al., 2009
rs7903146 560 pacientes com DC 1.449 Controles
Brasil DM2 O alelo T está fortemente associado à DM2 em pacientes com doença coronariana (DC), preponderante no sexo masculino.
MARQUEZINE, et al., 2008
rs7903146 rs12255372
2.214 DM2 1.873 Controles
Japão DM2 Alelos menores mostraram associação com DM2
MIYAKE, et al., 2008
rs7903146 rs12255372
.650 pacientes submetido à angiografia (suspeita de DAC)
Áustria Associação da DAC com DM2
Ambos SNP estão significativamente associados ao ↑ da glicose e associados à Dm2 no genótipo comum em homozigotos. rs7903146 associado com DAC caracterizado por angiografia. Ambas variantes foram associadas com DAC em pacientes DM2. Nada significativo em não-diabéticos (ambos casos p=0,001). Ambas variantes estão associadas à extensão da lesão coronariana
MUENDLEIN et al., 2011
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Polimorfismo (SNP)
População (Amostra)
País (Etnia)
Desfecho Avaliado Resultados Referência
rs12255372 588 DM2 597Controles
Rússia DM2 Alelo T → associação ao risco de DM2, aumentando em homozigotos TT. Em homozigotos portadores desta variantes de risco → diminuição da função na homeostase das células β.
POTAPOV, et al., 2010
rs7903146 980 pacientes com nefropatia diabética 924 Controles
Polônia Complicações em DM2
Homozigotos TT → associação com nefropatia > associação em pacientes com DM precoce
BURACZYNSKA, et al., 2011
rs7903146 110 pacientes ambulatoriais com DM2 80 Controles
Pérsia DM2 Homozigotos TT → associação à DM2. PALIZBAN, et al., 2012
rs7903146 rs12255372
1.083
Ascendência Européia
DM2 e síndrome metabólica
Portadores do Alelo T → maior nível de glicose plasmática em jejum e menor função da células β → maior risco de SM Não demonstrou associação com DM2 (pop. Pequena de DM) ↑ plasma total (VLDL), ↓ LDL, ↑ concentração plasmática em jejum (TG)
WARODOMWICHIT, et al., 2009.
rs12255372 236 DM2 255 Controles
Irã DM2 Alelo T → aumento do risco de DM2
ALAMI et al.;2012
rs7903146 rs12255372
159 obesos 16 com DM2 143 controles
Europeus Níveis de glicose e Hb1Ac em DM2
Não observou-se associação positiva entre esses fatores.
OLSSON, et al., 2009
Fonte: Elaborada pela mestranda
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3 PROCEDIMENTOS METODOLÓGICOS
3.1 Delineamento da pesquisa
Trata-se de uma pesquisa de abordagem transversal quantitativa do tipo
caso-controle, que utilizou amostras de indivíduos divididos grupos casos e controles
provenientes do Vale do Taquari, RS e da região metropolitana de Porto Alegre, RS.
3.2 Sujeitos da pesquisa
AMOSTRA 1: CASOS
Sub-amostra 1: Casos (Vale do Taquari)
A amostra foi composta por 87 indivíduos com DM2 dos municípios do Vale
do Taquari, provenientes do Programa SISHiperdia, sendo uma continuidade à
pesquisa intitulada “Identificação de fatores de risco em indivíduos diabéticos e
hipertensos usuários e não usuários do fitoterápico Bauhinia forficata (pata-de-vaca)
cadastrados no programa SISHiperdia/MS, de 2009 a 2010, na 16ª Coordenadoria
Regional de Saúde/RS”.
Critérios de inclusão
Foram incluídos indivíduos diabéticos, maiores de 18 anos, que aceitaram
participar por 12 meses de coletas trimestrais de sangue, para a avaliação do HGT e
Hemoglobina Glicada (HbA1C), nas Unidade Básica de Saúde.
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Sub-amostra 2: Casos (Região metropolitana de Porto Alegre)
A amostra foi composta de 174 indivíduos com DM2, sob qualquer tipo de
tratamento, que frequentavam as unidades básicas e centros de saúde de Novo
Hamburgo, Ivoti, Taquara, Igrejinha e Porto Alegre.
Critérios de inclusão
Foram incluídos indivíduos com idade entre 35 e 75 anos de idade. Foi
realizada uma avaliação bioquímica dos participantes para a obtenção dos seguintes
parâmetros: níveis de glicose e HbA1c
Critérios de exclusão para ambas as amostras
Foram excluídos os indivíduos que tiveram algum impedimento médico, tais
como cardiopatias, nefropatias, e distúrbios de coagulação, que possuíam alguma
doença infecto-contagiosa conhecida, doença renal, ou doença adrenal que
provoque hiper ou hipoadrenalismo, anões, deficientes mentais que não
compreenderam o termo de consentimento livre e esclarecido (TCLE), mulheres
grávidas e indivíduos com câncer.
GRUPO 2: CONTROLES
Sub-amostra 3: Controles (Região metropolitana de Porto Alegre)
O grupo controle, composto por 81 indivíduos, incluiu voluntários não
portadores de DM2 e que respeitassem os critérios de exclusão adotados para o
grupo de participantes com DM2, da região metropolitana de Porto Alegre.
Critérios de inclusão
Os critérios de inclusão foram idade entre 35 e 75 anos, níveis normais de
glicose (inferior a 99 mg/dL) e níveis de HbA1c inferiores a 6,5%.
Sub-amostra 4: Controles (Vale do Taquari)
A amostra foi composta por usuários do Serviço de Hemodinâmica do
Hospital Bruno Born de Lajeado (HBB), RS. Foram incluídos 237 participantes no
estudo, selecionados como indivíduos não diabéticos com base nos níveis séricos
de glicose em jejum (inferior a 99 mg/dL).
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Critérios de inclusão
Foram incluídos neste estudo indivíduos, maiores de 18 anos, que foram
submetidos ao exame de cateterismo cardíaco. Na realização do exame de
cateterismo, foram coletadas amostras de sangue periférico, para extração de DNA
e análises bioquímicas.
Critérios de exclusão para ambas as amostras
Foram excluídos os indivíduos que não aceitaram participar da pesquisa, os
que estavam inconscientes e os que não tiveram discernimento do que estava sendo
proposto na pesquisa.
3.3 Extração de DNA
As amostras de DNA dos casos e dos controles, já se encontravam extraídas
e estocadas, em freezer a -4 ºC, no laboratório de Biotecnologia do Centro
Universitário UNIVATES. As amostras de DNA foram obtidas a partir de sangue
periférico, coletado em tubo contendo ácido etileno diaminotetracético (EDTA, 25
mM), segundo um protocolo baseado na técnica descrita por Lahiri e Nurnberger
(1991).
3.4 Avaliações bioquímicas
As dosagens laboratoriais foram realizadas no laboratório de bioquímica da
Instituição, em equipamento automatizado de Bioquímica Mindray BS120, através do
método cinético enzimático, utilizando reagentes da marca Bioclin. A interpretação
dos resultados utilizou como referência os valores contidos na bula de cada kit. Os
exames bioquímicos analisados foram glicemia de jejum e hemoblobina glicada.
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3.5 Avaliação Nutricional
Foi realizado como avaliação Nutricional o Índice de massa corporal (IMC),
que é uma medida internacional utilizada para classificar se um indivíduo está no
peso ideal. É determinado pela divisão do peso em quilogramas pelo quadrado da
altura em metros (kg/m2). A classificação internacional para adultos, segundo IMC,
pode ser vista na Tabela 3.
Tabela 3 – Classificação internacional de peso para adultos segundo IMC
Classificação IMC (kg/m2)
Baixo peso < 18,50
Magreza severa < 16,00
Magreza moderada 16,00 – 16,99
Magreza suave 17,00 – 18,49
Eutrofia 18,50 – 24,99
Excesso de peso > 25,00
Pré-obesidade 25,00 – 29,99
Obeso > 30,00
Obesidade grau I 30,00 – 34,99
Obesidade grau II 35,00 – 39,99
Obesidade grau III > 40,00
Fonte: OMS, 1998
3.6 Análise Molecular
A genotipagem dos polimorfismos rs7903146 e rs12255372 do gene TCF7L2
foi realizada pela pesquisadora, através da técnica de discriminação alélica TaqMan
(Applied Biosystems, Foster City, CA), em equipamento de PCR em Tempo Real
StepOne (Applied Biosystems), de acordo com o protocolo do fabricante.
3.7 Análise Estatística
As análises estatísticas foram realizadas com o software SPSS, tendo como
nível de significância adotado p<0,05. Casos e controles foram comparados através
do teste do qui-quadrado e Pearson (variáveis categóricas) ou através do teste t
para amostras independentes (variáveis contínuas). As associações entre os
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polimorfismos genéticos e as variáveis de gravidade dos indivíduos com DM2 foram
avaliadas através do ANOVA para amostras independentes, considerando
portadores versus não portadores do alelo de risco.
3.8 Considerações Éticas
As pesquisas citadas foram aprovadas pelo Comitê de Ética e Pesquisa do
Centro Universitário UNIVATES, obedecendo às exigências da ética em pesquisa
em humanos.
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4 RESULTADOS
A pesquisa foi composta por quatro grupos, totalizando 579 indivíduos. No
grupo de indivíduos do Vale do Taquari, a média de idade apresentou diferença
significativa quando comparados casos e controles (p=0,03). Quanto à
antropometria, casos apresentaram valores maiores do índice de massa corporal
(IMC), com média de 30,96Kg/m², enquanto os controles apresentaram média de
27,08Kg/m², mostrando uma diferença significativa (p<0,001). A descrição clinica
das amostras está descrita na Tabela 4.
Tabela 4 – Descrição clínica das amostras provenientes do Vale do Taquari
Pacientes com DM2
(N = 87)
Indivíduos sem DM2
(N = 237) Valor p
Idade (anos) 64,32 (9,9) 61,40 (11,0) 0,03
Gênero (masculino) 23 (26,4) 139 (58,6) <0,001
IMC (kg/m2) 30,96 (4,9) 27,08 (4,9) <0,001
HbA1c (mg/dL) 6,90 (1,9) - -
HGT (mg/dL) 140,45 (49,5) - -
Glicose em jejum (mg/dL) - 88,61 (9,6) -
Os dados estão expressos como média e (desvio padrão) ou N e (%). Abreviações: índice de massa corporal (IMC); hemoglobina glicada (HbA1C); hemoglicoteste (HGT).
O grupo da região metropolitana de Porto Alegre foi composto por 255
indivíduos, divididos em casos com DM2 (N=174) e controles sem DM2 (N=81).
Destes, 83 (58,9%) são do gênero masculino (p=0,007). Quanto ao parâmetro
antropomético, verificou-se que os casos apresentaram valores maiores do IMC com
média de 30,38Kg/m², enquanto os controles apresentaram média de 27,65Kg/m².
Essa diferença é estatisticamente significativa (p<0,001).
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Entre casos e controles, os parâmetros bioquímicos apresentaram uma
diferença significativa nos níveis de glicose em jejum e hemoglobina glicada
(HbA1c). Para a glicose, a média no grupo caso foi de 151,99mg/dL e para os
controles foi de 83,93mg/dL, (p<0,001). Os níveis de Hb1Ac também foram
estatisticamente significativos (p<0,001), como mostra a Tabela 5.
Tabela 5 – Descrição clínica das amostras provenientes da Região Metropolitana
Pacientes com DM2
(N = 174)
Indivíduos sem DM2 (N = 81)
Valor p
Idade (anos) 58,79 (10,6) 56,91 (10,3) 0,19
Gênero (masculino) 66 (37,9) 17 (21) 0,007 IMC (kg/m2) 30,38 (5,0) 27,65 (4,3) <0,001 HbA1c (mg/dL) 11,02 (16,8) 5,71 (0,4) <0,001 Glicose em jejum (mg/dL) 151,99 (58,2) 83,93 (17,4) <0,001
Os dados estão expressos como média e (desvio padrão) ou N e (%). Abreviações: índice de massa corporal (IMC); hemoglobina glicada (HbA1C).
Na tabela 6 descreve-se as frequências alélicas e genotípicas em casos e
controles dos dois polimorfismos analisados. As frequências genotípicas em ambos
os polimorfismos não revelaram um desvio significativo dos valores esperados para
o equilíbrio de Hardy-Weinberg.
Tabela 6 – Frequências alélicas e genotípicas dos polimorfismos rs7903146 e
rs12255372 do gene TCF7L2 nos indivíduos com DM2 e sem DM2
Polimorfismo Pacientes com DM2
Pacientes sem DM2
Valor p
rs7903146 N=256 N=308 Alelo C 0,64 0,70 0,04 Alelo T 0,36 0,30
CC 105 (41%) 151 (49%) 0,15
CT 119 (46,5%)
127(41,2%)
TT 32 (12,5%) 30 (9,7%)
rs12255372 N=256 N=301 Alelo G 0,66 0,69 0,32 Alelo T 0,34 0,31
GG 107 (41,8%)
142 (47,2%) 0,42
GT 123 (48%) 129 (42,9%)
TT 26 (10,2%) 30 (10%)
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Observa-se uma diferença significativa em relação à frequência alélica do
polimorfismo rs7903146. O alelo T apresentou uma frequência de 36% nos casos e
30% nos controles (p=0,04).
Na tabela 7 verifica-se a comparação dos valores de glicose em jejum e
hemoglobina glicada entre portadores e não portadores do alelo T para o
polimorfismo rs7903146 em indivíduos com DM2. Não observa-se diferença
estatisticamente significativa nas variáveis investigadas. Na tabela 8, apresenta-se a
mesma comparação para o polimorfismo rs12255372, e também não há diferenças
significativas.
Tabela 7 – Avaliação da influência do polimorfismo rs7903146 do gene TCF7L2 nas
variáveis clínicas dos pacientes com DM2
Variáveis Portadores do alelo T (TT + TC)
Não portadores (CC).
Valor p*
N Média Desvio padrão
N Média Desvio padrão
Glicose em jejum (mg/dL)
102 153,14 (54,3) 72 150,36 (63,8) 0,76
HbA1c (mg/dL)
151 9,76 (15,3) 105 9,58 (12,0) 0,91
Abreviações: hemoglobina glicada (Hb1Ac).
Tabela 8 – Avaliação da influência do polimorfismo rs12255372 do gene TCF7L2
nas variáveis clínicas dos pacientes com DM2
Abreviações: hemoglobina glicada (HbA1C)
Variáveis Portadores do alelo T (TT + TG)
Não portadores (GG)
Valor p*
N Média Desvio padrão
N Média Desvio padrão
Glicose em jejum (mg/Dl)
99 150,47 55,3 72 154,03 63,3 0,69
HbA1c (mg/dL) 149 9,75 15,4 107 9,53 11,9 0,90
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5 DISCUSSÃO
Em relação às variáveis clínicas avaliadas observa-se diferenças
estatisticamente significativas entre casos e controles para IMC e Hb1Ac e glicose
em jejum.
De acordo com Helgason et al (2007), o IMC é um importante fator de risco
para o DM2. Neste estudo, o IMC foi estatisticamente significativo (p<0,001) quando
comparados casos e controles, mostrando que indivíduos com DM2 apresentaram
IMC maior, caracterizados pela OMS, como obesos. Diversos estudos têm avaliado
a associação de marcadores inflamatórios e o risco de doenças cardiovasculares.
De acordo com Sumita, Andriolo (2008), existe uma estreita relação entre os níveis
elevados de glicose e o diabetes. A hemoglobina glicada (Hb1Ac) apresenta-se
como uma ferramenta importante na avaliação e no controle do diabetes. O estudo
apresenta os casos provenientes da região metropolitana apresentando níveis
maiores de Hb1Ac quando comparados com controles (p<0,001). De acordo com o
autor acima citado, níveis de Hb1Ac acima de 7%, indicam maior risco de
complicações micro e macrovasculares do diabetes, e quando persistentemente
elevados causam danos ao organismo e o descontrole prolongado resulta em
complicações em diversos tecidos e falência de diversos órgãos.
Alves, Lima e Oliveira (2011), em um estudo Brasileiro, avaliaram alguns
fatores de risco para o desenvolvimento da nefropatia diabética, entre eles a Hb1Ac.
Os autores analisaram 166 pacientes com diagnóstico de DM2 e verificaram que
83% dos pacientes apresentavam níveis elevados de Hb1Ac (>7%), demonstrando
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que mesmo com terapias hipoglicemiantes, os pacientes não apresentavam um
controle glicêmico adequado. Estes dados vão ao encontro dos achados neste
estudo, onde os níveis de Hb1Ac encontram-se elevados na população diabética,
com média de 11,02% e mesmo com diagnóstico definido, estes valores continuam
alterados nos pacientes diabéticos desta amostra.
Segundo Chen et al (2004), o inadequado controle glicêmico de paciente
diabéticos tipo 2 pode causar consequências graves para a saúde e é um fator de
risco importante para o desenvolvimento de complicações do DM2. Um adequado
controle glicêmico leva à menos complicações. Este estudo apresentou os níveis de
glicose aumentados e estatisticamente significativos (p<0,001), mostrando que
pacientes diabéticos ainda apresentam um controle glicêmico falho.
Este estudo aponta uma associação positiva e estatisticamente significativa
(p=0,04) com a variante rs7903146 do gene TCF7L2 com o DM2. Chiang et al
(2012), apontam em seu estudo o TCF7L2 como um dos genes mais importantes
para o DM2, sendo confirmado por diversos outros estudos envolvendo grupos
étnicos diferentes, sendo que dois SNPs mostram robusta associação com DM2, o
rs7903146 e rs12255372. Os autores citam o estudo que genotipou 1100 diabéticos
alemães e os resultados confirmaram que SNPs do TCF7L2 estão associados com a
secreção de insulina diminuída. No estudo de Bo et al (2009), os valores de glicose
foram significativamente associados com o alelo de risco (T). Estes dados estão de
acordo com o encontrado neste estudo e de forma positiva mostrando que o alelo de
T do rs7903146 pode ser considerado alelo de risco para o DM2. De acordo com
Izzidi et al (2009) em um estudo caso e controle com uma população árabe incluiu
1397 indivíduos avaliando diversos SNP’s entre eles o rs7903146. Apenas esta
variante mostrou associação com o alelo de risco (T) com o DM2, sendo este risco
de 56% para portadores do genótipo TT quando comparados com genótipo CC.
Nesta população verifica-se um risco aumentado para portadores do alelo T, assim
como é relatado na população européia e muitos outros grupos étnicos. Ciccacci et
al (2012) em um estudo caso controle, mostra o rs7903146 do gene TCF7L2
fortemente associado ao DM2 e ainda forte associação com a doença coronariana.
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Quando compara-se as medidas bioquímicas entre os genótipos dos
polimorfismos rs7903146 e rs12255372, nos pacientes com DM2, não observa-se
nenhuma associação positiva. Olsson et al (2009) também não encontraram
associação positiva destes SNP’s com o DM2. Já Peng et al (2012), encontraram
associação significativa dos dois polimorfismos com o risco de DM2. Em nosso
estudo, as medidas bioquímicas de glicose em jejum e Hb1Ac apontaram valores
aumentados nos portadores do alelo T nos diabéticos, porém não foram
estatisticamente significativos. De acordo com Wardodomvichit et al (2009), ao
investigarem dois SNP’s do TCF7L2 em 1083 indivíduos europeus, que demonstrou
os portadores do alelo T do rs7903146 com maior nível glicose em jejum e menor
função das células β, sugerindo a forte associação deste SNP com a secreção de
insulina prejudicada.
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6 CONCLUSÃO
Neste estudo mostrou-se a associação do alelo de risco do polimorfismo
rs7903146, do gene TCF7L2 com o DM2 confirmando o papel desta variante na
população estudada. Com os resultados encontrados em nossa pesquisa, pode-se
concluir que o alelo de risco (T) do gene TCF7L2, está associado à doença
sugerindo que este gene possa estar influenciando no desenvolvimento do DM2,
mas não atue modulando a severidade da doença, uma vez que não encontrou-se
diferença entre os genótipos para os marcadores bioquímicos.
Apesar do grande avanço na compreensão das determinantes genéticas, a
elucidação dos mecanismos que estão implicados no desenvolvimento do DM2
ainda não estão bem compreendidos. A análise de variáveis genéticas pode levar a
uma melhor compreensão dos mecanismos moleculares do DM2, onde este
conhecimento poderá aproximar ainda mais o desenvolvimento de estratégias
eficazes de tratamento e prevenção. Portanto, ressalta-se a importância da
realização de novas pesquisas, de forte impacto estatístico para confirmar nossos
achados.
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35
REFERÊNCIAS
ALAMI, Faranak M; et al. Association of the TCF7L2 rs 12255372 (G/T) variant with type 2 diabetes mellitus in an Iranian population. Genetics and Molecular Biology, São Paulo, v. 35 (2), p. 413-417, 2012.
ALIBEGOVIC, Amra C.; et al The T-Allele of TCF7L2 rs7903146 associates with a reduced compensation of insulin secretion for insulin resistance induced by 9 days of bet rest. Diabetes, v. 59, p. 836-843, 2010.
ALVES, Claudia P.A.; LIMA, Carla S.; OLIVEIRA, Fábio J. L. Nefropatia diabética: avaliação dos fatores de risco para seu desenvolvimento. Rev Bras Clin Med, v.9(2), p. 97-100, 2011. AMERICAN DIABETES ASSOCIATION. Disponível em: <http://www.diabetes.org/diabetes-basics> Acesso em 25 Jan. 2012.
AMOLI, Mahsa M.; et al Replication of TCF7L2 rs7903146 association with type 2 diabetes in an Iranian population. Genetics and Molecular Biology, São Paulo, v. 33, n.3, 2010.
BACQUER, Olivier L.; et al. TCF7L2 splice variants have distinct effects on β-cell turnover and function. Human Molecular Genetics, EUA, v. 20(1); p. 1906-1915, 2011.
BILLINGS, Liana; FLORES, Jose. The genetics of type 2 diabetes: what have we learned from GWAS? Annals of the New York Academy of Sciences, New York, p. 59-77, 2010.
BO, Simona; et al. Effects of TCF7L2 polymorphisms on glucose values after a lifestyle intervention. Am J Clin Nutr, v. 90, p. 1502-1508, 2009.
BODHINI, Dhanasekaran; et al The rs12255372(G/T) and rs7903146(C/T) polymorphisms of theTCF7L2 gene are associated with type 2 diabetes mellitus in Asian Indians. Elsevier Journal, India, v. 56, p. 1174-1178, 2007.
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.uni
vate
s.br/
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36
BURACZYNSKA, Monika ; et al. Transcription factor 7-like 2 (TCF7L2) gene polymorphism and complication/comorbidity profile in type 2 diabetes patients. Diabetes Research and Clinical Practice, Poland, v. 93 (3) , p. 390-395, 2011.
CERSOSIMO, Eugenio; DeFRONZO, Ralf A.Insulin resistence and endothelial dysfunction: the road map to cardiovascular desease. Diabetes Metabolism Rev, v. 22, p:423 – 436, 2006.
CHANDAK, Giriraj R; et al. Common Variants in the TCF7L2 gene are strongly associated with type 2 diabetes mellitus in the Indian populations, Daibetologia, v. 50, p. 63-67, 2007.
CHANG, Yi-Cheng ; et al. Association Study of the Genetic Polymorphisms of the Transcription Factor 7-like 2 (TCF7L2) Gene and Type 2 Diabetes in the Chinese Population. Diabetes, Taiwan, v. 56 (10), 2007.
CHIANG, Yu-Ting; et al. The role of the signaling pathway in increntin hormone production and function. Frontiers in Physiology, Canadá, v.3, p. 1-14, 2012.
CICCACCI, Cinzia; et al. TCF7L2 gene polymorphisms and type 2 diabetes: association with retinopathy and cardiovascular autonomic neurpathy, Acta Diabetol, v. 50(5), p. 789-799, 2012.
EREQAT, Suheir; et al. Association of a common variant in TCF7L2 gene with type 2 diabetes mellitus in the Palestinian population. Acta Diabetologica, Palestine, v. 47 (1), p. 195-198, 2010.
EZZIDI, Intissar; et al. Contribution of type 2 diabetes associated loci in the Arabic population from Tunisia: a case-control study. Biomedcentral Medical Genetics, Tunisia, v. 10 (33), 2009.
FRANCO, Luciana F; et al. Variants of transcription factor 7-like 2 (TCF7L2) gene and incident glucose intolerance in Japoneses-Brazilians. Brazilian Journal of Medical and Biological Research. São Paulo, v. 44 (3), p. 240-244, 2011.
GRANT, Richard W., MOORE, Allan F.; FLOREZ, José C. Genetic architecture of type 2 diabetes: recent progress and clinical implications. Diabetes Care, Alexandria, v. 32(6), p.1107–1114, 2009.
GRANT, Struan F. A., et al. Variant of transcription factor 7-like 2 (TCF7L2) gene confers risk of type 2 diabetes. Nature Genetics, v. 38(3), p. 320-23, 2006. GRILLO, Maria F. F.; GORINI, Maria I. P. C.. Caracterização de pessoas com Diabetes Mellitus Tipo 2. Revista Brasileira de Enfermagem. Brasília, v. 60 (1), p. 49-54, 2006.
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IVAT
ES
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p://w
ww
.uni
vate
s.br/
bdu)
37
HAYASHI, Toshihid; et al. Replication study for the association of TCF7L2 with susceptibility to type 2 diabetes in a Japonese population. Diabetologia, Japan, v. 50 (5), p. 980 – 4, 2007.
JIN, Tianru; LIU, Ling. The Wnt Signaling Pathway Effector TCF7L2 and Type 2 Diabetes Mellitus. Molecular Endocrinology, Canadá, v. 22 (11), p. 2383-2392, 2008.
KIM, So Hun; et al. Association between Nutrient Intake and Obesity in Type 2 Diabetic Patients from the Korean National Diabetes Program: A Cross – Sectional Study. Journal of Korean Medical Science, Korea, v. 27 (10), p. 1188-1195, 2012.
KOTA Sunil K; et al. Genetics of type 2 diabetes mellitus and other specific types of diabetes; its role in treatment modalities. Diabetes, Metabolic, Syndrome and Obesity, Índia, v. 6 (1), p.54-8, 2012.
LINDER, Katarzyna; et al. Allele summation of diabetes risk genes predicts impaired glucose tolerance in female and obese individuals. Plos One. v. 7(6). p. 38224
LYSSENKO, Valeriya; et al. Mechanisms by which common variants in the TCF7L2 gene increase risk of type 2 diabetes. The journal of clinical investigation, v.117(8), p. 2155-2163, 2007.
LONG, Jirong; et al. Evaluation of Genome-wide Association Study-identified Type 2 Diabetes Loci in African Americans. American Journal of Epidemiology, EUA, v.176 (11), p. 995-1001, 2012.
LYRA, Ruy; et al. Prevenção do Diabetes Mellitus Tipo 2. Arquivo Brasileiro de Endocrinologia e Metabologia, São Paulo, v. 50 (2), p. 239-249, 2006.
MARQUEZINE, Guilherme F; et al. TCF7L2 variant genotypes and type 2 diabetes risk in Brazil: significant association, but not a significant tool for risk stratification in the general population. Biomedcentral Medical Genetics, Brazil, v. 9 (106), p. 1-8, 2008.
MATTEI, Josiemer; et al. TCF7L2 genetic variants modulate the effect of dietary fat intake on changes in body composition during a weight-loss intervation. Am J Clin Nutr, v. 96(5), p. 1129-1136, 2012. doi : 10.3945/ajcn.112.038125. McLELLAN, Katia C. P.; et al. Diabetes mellitus do tipo 2, sindrome metabólica e modificação no estilo de vida. Rev Nutr. Campinas, v 20(5), p. 515-524, 2007. MIHAESCU, Raluca; et al. Genetic risk profiling for prediction of type 2 diabetes. PLOS Currents, v. 11 (3), 2011.
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UN
IVAT
ES
(htt
p://w
ww
.uni
vate
s.br/
bdu)
38
MINISTÉRIO DA SAÚDE. Brasil, 2012. Disponível em: <http://www.portadasaude.saude.gov.br> Acesso em: 20 Fev. 2014.
MIYAKE, Kazuaki; et al. Association of TCF7L2 polymorphisms with susceptibility to type 2 diabetes in 4.087 Japonese subjects. The American Journal of Human Genetics, Japan, v. 53 (2), P. 174-80, 2008.
MUENDLEIN, Axel; et al. Single Nucleotide Polymorphisms of TCF7L2 Are Linked to Diabetic Coronary Atherosclerosis. Plos One, v. 6 (3), p. 1-7, 2011.
NEUMAN, Rosalind J. et al. Gene-gene interactions lead to higher risk for development of type 2 diabetes in an Ashkenazi Jewish population. Plos One, v. 5(3), 2010
NOBREGA, Marcelo A. TCF7L2 and glucose metabolism: time to look beyond the pancreas. Diabetes, v. 62(3), p. 706-708, 2013. doi: 10.2337/db12-1418.
OLSSON, Ludmila P; et al. Alternative splicing of TCF7L2 gene in omental and subcutaneous adipose tissue and risk of type 2 diabetes. Plos one, v. 4(9):e7231, 2009. doi: 10.1371/journal.pone.0007231.
PALIZBAN, Abbasali; et al. Association of a common variant in TCF7L2 gene with type 2 diabetes mellitus in a Persian population. Clinical and Experimental Medicine, v. 12 (2), p. 115-9, 2012.
PENG, Sihua; et al. TCF7L2 gene polymorphisms and type 2 diabetes risk: a comprehensive and updated meta-analysis involving 121174 subjects. Oxford Journals (Mutagenesis), China, 2012.
POTAPOV, Viktor A; et al. TCF7L2 rs12255372 and SLC30A8 rs13266634 confer susceptibility to type 2 diabetes in a Russian population. Russian Journal of Genetics, Russian, v.46 (8), p. 1001-1008, 2010.
REIS, André; VELHO, Gilberto. Bases genéticas do Diabetes Mellitus Tipo 2. Arquivo Brasileiro de Endocrinologia e Metabologia, São Paulo, v. 46 (4), p. 426-432, 2002. SHARIFAH, Intan Q. S. I.; et al. Potential Biomarkers of insulin resistence and atherosclerosis in type 2 diabetes mellitus patients witch coronary artery disease. International Journal of Endocrinology, p. 1-11, 2013.
SHEFFEL, Rafael S.; et al. Prevalência de complicações micro e macrovasculares e de seus fatores de risco em pacientes com diabetes melito do tipo 2 em atendimento ambulatorial. Rev Assoc Med Bras, Porto Alegre, v. 50(3), p.263-267, 2004.
BD
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liote
ca D
igita
l da
UN
IVAT
ES
(htt
p://w
ww
.uni
vate
s.br/
bdu)
39
SMITH, Ulf. TCF7L2 and type 2 diabetes—we WNT to know. Diabetologia; v. 50, p. 5–7, 2007.
SOCIEDADE BRASILEIRA DE DIABETES. Consenso Brasileiro sobre diabetes 2002: diagnóstico e classificação do diabetes melito e tratamento do diabetes melito do tipo 2. DHIAGRAPHIC, Rio de Janeiro, 72 pág, 2003.
STEEMBURGO, Thais; AZEVEDO, Mirela; MARTÍNEZ, José Alfredo. Interação entre gene e nutriente e sua associação à obesidade e ao diabetes melito. Arquivo Brasileiro de Endocrinologia e Metabologia, São Paulo, v. 53 (5), p. 497-508, 2009.
STEYN, Nelia P.; et al. Diet, nutrition and the prevention of type 2 diabetes. Public Health Nutrition, Finland, v. 7 (1A), p. 147-165, 2004.
SUMITA, Nairo Massakazu and ANDRIOLO, Adagmar. Importância da hemoglobina glicada no controle do diabetes mellitus e na avaliação de risco das complicações crônicas. J. Bras. Patol. Med. Lab. v. 44(3), p. 169-174, 2008.
TCF7L2 Gene.Gene Cards. The human gene compendium, EUA, mai. 2012. Disponível em: <http://www.genecards.org/cgibin/carddisp.pl?gene=TCF7L2&search=TCF7L2> Acesso em: 20 Fev. 2014.
TONG, Yu; et al. Association between TCF7L2 gene polymorphisms and susceptibility to type 2 diabetes mellitus: a large Human Genome Epidemiology (HuGE) review and meta-analysis. Biomedcentral Medical Genetics, Chengdu, v. 10 (15), 2009.
WARODOMWICHIT, Daruneewan; et al. Polyunsaturated Fatty Acids Modulate the effect of TCF7L2 gene variants on postprandial lipemia. The Journal of Nutrition, EUA, v. 139, p. 439-446, 2009
