14
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍA SEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICA FECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00 FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30 PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA NOMBRE: INSTRUCCIONES: Seguir la indicaciones y proporcionar la información solicitada de manera concisa y clara. El examen deberá ser devuelto impreso y únicamente con la información solicitada. 1. Proponer un gen que codifique para una proteína de interés biotecnológico o farmacéutico o ambiental. (valor 4 puntos) a. Indicar que base de datos utilizó NCBI b. Indicar el numero de acceso del gen NM_002273.3 c. Indicar el nombre del gen así como de la proteína para la cual codifica. /gene="KRT8" /gene_synonym="CARD2; CK8; CYK8; K2C8; K8; KO" /note="cytokeratin 8; CK-8; keratin-8; cytokeratin-8; type-II keratin Kb8" /codon_start=1 /product="keratin, type II cytoskeletal 8" /protein_id="NP_002264.1 d. Indicar a que organismo pertenece este gen ORGANISM Homo sapiens e. Comentar sobre la importancia biotecnológica o farmacéutica o ambiental de este gen. Este gen es miembro del tipo II de la familia queratina agrupado en el brazo largo del cromosoma 12. Las queratinas Tipo I y Tipo II se heteropolimerizan para formar filamentos de tamaño intermedio en el citoplasma de células epiteliales. El producto de este gen típicamente dimeriza con queratina 18 para formar filamentos intermediarios en simples células epiteliales de una sola capa. Esta proteína juega un papel in mantener la integridad de la estructura celular y también funciona en la transducción de señales además de la diferenciación celular. La mutacion en este gen causa cirrosis criptogénica. La cirrosis criptogénica constituye del 3-30% de todos los casos de cirrosis. Típicamente se diagnostica después de una evaluación

Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

Embed Size (px)

DESCRIPTION

Vector de expresion, Diseño de Primers

Citation preview

Page 1: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONANOMBRE:INSTRUCCIONES: Seguir la indicaciones y proporcionar la información solicitada de manera concisa y clara. El examen deberá ser devuelto impreso y únicamente con la información solicitada.

1. Proponer un gen que codifique para una proteína de interés biotecnológico o farmacéutico o ambiental. (valor 4 puntos)

a. Indicar que base de datos utilizóNCBI

b. Indicar el numero de acceso del gen  NM_002273.3

c. Indicar el nombre del gen así como de la proteína para la cual codifica. /gene="KRT8" /gene_synonym="CARD2; CK8; CYK8; K2C8; K8; KO" /note="cytokeratin 8; CK-8; keratin-8; cytokeratin-8; type-II keratin Kb8" /codon_start=1 /product="keratin, type II cytoskeletal 8" /protein_id="NP_002264.1”

d. Indicar a que organismo pertenece este genORGANISM Homo sapiens

e. Comentar sobre la importancia biotecnológica o farmacéutica o ambiental de este gen.

Este gen es miembro del tipo II de la familia queratina agrupado en el brazo largo del cromosoma 12. Las queratinas Tipo I y Tipo II se heteropolimerizan para formar filamentos de tamaño intermedio en el citoplasma de células epiteliales. El producto de este gen típicamente dimeriza con queratina 18 para formar filamentos intermediarios en simples células epiteliales de una sola capa. Esta proteína juega un papel in mantener la integridad de la estructura celular y también funciona en la transducción de señales además de la diferenciación celular. La mutacion en este gen causa cirrosis criptogénica. La cirrosis criptogénica constituye del 3-30% de todos los casos de cirrosis. Típicamente se diagnostica después de una evaluación exhaustiva que incluye diagnóstico serológico, para eliminar etiologías identificables y usualmente después de una biopsia hepática. Los principales factores de riesgo para cirrosis criptogénica son: esteatohepatitis no alcohólica (NASH), obesidad, diabetes e hiperlipidemia. Hay factores genéticos que podrían explicar la progresión de esteatosis a cirrosis. Los polimorfismos en genes que codifican citocinas, leptina, queratinas y proteínas del metabolismo de hierro, pueden explicar la susceptibilidad a desarrollar cirrosis.

Mostrar la secuencia del gen seleccionado en formato FASTA dejando la información que aparece después del símbolo > (en caso de que la secuencia sea muy larga, utilizar tamaño de

letra 5).

>gi|196162709|ref|NM_002273.3| Homo sapiens keratin 8 (KRT8), mRNAAAAAGGCCATTCCTGAGAGCTCTCCTCACCAAGAAGCAGCTTCTCCGCTCCTTCTAGGATCTCCGCCTGGTTCGGCCCGCCTGCCTCCACTCCTGCCTCTACCATGTCCATCAGGGTGACCCAGAAGTCCTACAAGGTGTCCACCTCTGGCCCCCGGGCCTTCAGCAGCCGCTCCTACACGAGTGGGCCCGGTTCCCGCATCAGCTCCTC

Page 2: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONAGAGCTTCTCCCGAGTGGGCAGCAGCAACTTTCGCGGTGGCCTGGGCGGCGGCTATGGTGGGGCCAGCGGCATGGGAGGCATCACCGCAGTTACGGTCAACCAGAGCCTGCTGAGCCCCCTTGTCCTGGAGGTGGACCCCAACATCCAGGCCGTGCGCACCCAGGAGAAGGAGCAGATCAAGACCCTCAACAACAAGTTTGCCTCCTTCATAGACAAGGTACGGTTCCTGGAGCAGCAGAACAAGATGCTGGAGACCAAGTGGAGCCTCCTGCAGCAGCAGAAGACGGCTCGAAGCAACATGGACAACATGTTCGAGAGCTACATCAACAACCTTAGGCGGCAGCTGGAGACTCTGGGCCAGGAGAAGCTGAAGCTGGAGGCGGAGCTTGGCAACATGCAGGGGCTGGTGGAGGACTTCAAGAACAAGTATGAGGATGAGATCAATAAGCGTACAGAGATGGAGAACGAATTTGTCCTCATCAAGAAGGATGTGGATGAAGCTTACATGAACAAGGTAGAGCTGGAGTCTCGCCTGGAAGGGCTGACCGACGAGATCAACTTCCTCAGGCAGCTATATGAAGAGGAGATCCGGGAGCTGCAGTCCCAGATCTCGGACACATCTGTGGTGCTGTCCATGGACAACAGCCGCTCCCTGGACATGGACAGCATCATTGCTGAGGTCAAGGCACAGTACGAGGATATTGCCAACCGCAGCCGGGCTGAGGCTGAGAGCATGTACCAGATCAAGTATGAGGAGCTGCAGAGCCTGGCTGGGAAGCACGGGGATGACCTGCGGCGCACAAAGACTGAGATCTCTGAGATGAACCGGAACATCAGCCGGCTCCAGGCTGAGATTGAGGGCCTCAAAGGCCAGAGGGCTTCCCTGGAGGCCGCCATTGCAGATGCCGAGCAGCGTGGAGAGCTGGCCATTAAGGATGCCAACGCCAAGTTGTCCGAGCTGGAGGCCGCCCTGCAGCGGGCCAAGCAGGACATGGCGCGGCAGCTGCGTGAGTACCAGGAGCTGATGAACGTCAAGCTGGCCCTGGACATCGAGATCGCCACCTACAGGAAGCTGCTGGAGGGCGAGGAGAGCCGGCTGGAGTCTGGGATGCAGAACATGAGTATTCATACGAAGACCACCAGCGGCTATGCAGGTGGTCTGAGCTCGGCCTATGGGGGCCTCACAAGCCCCGGCCTCAGCTACAGCCTGGGCTCCAGCTTTGGCTCTGGCGCGGGCTCCAGCTCCTTCAGCCGCACCAGCTCCTCCAGGGCCGTGGTTGTGAAGAAGATCGAGACACGTGATGGGAAGCTGGTGTCTGAGTCCTCTGACGTCCTGCCCAAGTGAACAGCTGCGGCAGCCCCTCCCAGCCTACCCCTCCTGCGCTGCCCCAGAGCCTGGGAAGGAGGCCGCTATGCAGGGTAGCACTGGGAACAGGAGACCCACCTGAGGCTCAGCCCTAGCCCTCAGCCCACCTGGGGAGTTTACTACCTGGGGACCCCCCTTGCCCATGCCTCCAGCTACAAAACAATTCAATTGCTTTTTTTTTTTGGTCCAAAATAAAACCTCAGCTAGCTCTGCCAATGTCAAAAAA

f. En caso de que el gen seleccionado tenga intrones, removerlos y mostrar la secuencia ya sin intrones (en caso de que la secuencia sea muy larga, utilizar tamaño de letra 5).

mol_type="mRNA"

g. Mostrar la secuencia de la proteína

>gi|4504919|ref|NP_002264.1| keratin, type II cytoskeletal 8 [Homo sapiens]MSIRVTQKSYKVSTSGPRAFSSRSYTSGPGSRISSSSFSRVGSSNFRGGLGGGYGGASGMGGITAVTVNQSLLSPLVLEVDPNIQAVRTQEKEQIKTLNNKFASFIDKVRFLEQQNKMLETKWSLLQQQKTARSNMDNMFESYINNLRRQLETLGQEKLKLEAELGNMQGLVEDFKNKYEDEINKRTEMENEFVLIKKDVDEAYMNKVELESRLEGLTDEINFLRQLYEEEIRELQSQISDTSVVLSMDNSRSLDMDSIIAEVKAQYEDIANRSRAEAESMYQIKYEELQSLAGKHGDDLRRTKTEISEMNRNISRLQAEIEGLKGQRASLEAAIADAEQRGELAIKDANAKLSELEAALQRAKQDMARQLREYQELMNVKLALDIEIATYRKLLEGEESRLESGMQNMSIHTKTTSGYA

GGLSSAYGGLTSPGLSYSLGSSFGSGAGSSSFSRTSSSRAVVVKKIETRDGKLVSESSDVLPK

Page 3: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA

2. Utilizando el vector pET28a (ver mapa anexo) resolver y responder a los siguientes puntos tomando en cuenta el gen seleccionado en el punto 1. (valor 4 puntos)

a. Proponer un par de sitios de restricción en el polilinker para insertar el gen seleccionado en el punto 1. Proporcionar el nombre y la secuencia de los sitios de restricción.

BamHI y EagIb. ¿Dónde son cortados los sitios seleccionados en 2a y que tipo de extremos se

generan?

BamHI5’… G G A T C C … 3’3’… C C T A G G … 5’

“Sticky Ends”

EagI

5'...C G G C C G... 3'3'...G C C G G C... 5'

“Sticky Ends”

c. Verificar que estos sitios de restricción no estén presentes en el gen seleccionado en el punto 1. Mostrar los resultados obtenidos al digerir el gen en el digestor de la página de New England Biolabs (http://tools.neb.com/NEBcutter2/index.php) de que estas enzimas no cortan. En caso de que corten, volver al punto 2a y proponer otros sitios de corte.

# Enzyme Specificity 1   AbsI  CC TCGA GG

 2   Acc65I  G GTAC C

 3   AccI  GT MK AC

 4   AclI  AA CG TT

Page 4: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA

 5   AfeI  AGC GCT

 6   AflII  C TTAA G

 7   AgeI  A CCGG T

 8   AhdI  GACNN N NNGTC

 9   AjuI  (N)5 (N)7GAA(N)7TTGG(N)6 (N)5

 10   AlfI  NN (N)10GCA(N)6TGC(N)10 NN

 11   AlwFI  GAAAY(N)5RTG

 12   ApaLI  G TGCA C

 13   ApyPI  ATCGAC(N)18 NN

 14   AscI  GG CGCG CC

 15   AseI  AT TA AT

 16   AsiSI  GCG AT CGC

 17   AvrII  C CTAG G

 18   BaeI  (N)5 (N)10ACNNNNGTAYC(N)7 (N)5

 19   BamHI  G GATC C

 20   BanI  G GYRC C

 21   BarI  (N)5 (N)7GAAG(N)6TAC(N)7 (N)5

 22   BciVI  GTATCC(N)5 N

 23   BclI  T GATC A

 24   BmgBI  CAC GTC

 25   BpuEI  CTTGAG(N)14 NN

 26   BsaBI  GATNN NNATC

 27   BsbI  CAACAC(N)19 NN

 28   BsgI  GTGCAG(N)14 NN

 29   BsiEI  CG RY CG

 30   BsiWI  C GTAC G

 31   BsmBI  CGTCTCN NNNN

 32   BsmI  GAATG CN

 33   BspDI  AT CG AT

 34   BspEI  T CCGG A

 35   BspHI  T CATG A

 36   BspQI  GCTCTTCN NNN

 37   BsrGI  T GTAC A

 38   BssHII  G CGCG C

 39   BstAPI  GCAN NNN NTGC

Page 5: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA

 40   BstBI  TT CG AA

 41   BstZ17I  GTA TAC

 42   BtgZI  GCGATG(N)10 NNNN

 43   BtsI  GCAGTG NN

 44   ClaI  AT CG AT

 45   CspCI  NN (N)11CAA(N)5GTGG(N)10 NN

 46   DraI  TTT AAA

 47   DraIII  CAC NNN GTG

 48   DrdIV  TACGAC(N)18 NN

 49   EagI  C GGCC G

 50   EcoNI  CCTNN N NNAGG

 51   EcoRI  G AATT C

 52   EcoRV  GAT ATC

 53   FalI  (N)5 (N)8AAG(N)5CTT(N)8 (N)5

 54   FseI  GG CCGG CC

 55   GdiII  C GGCC R

 56   HaeII  R GCGC Y

 57   HaeIV  (N)6 (N)7GAY(N)5RTC(N)9 (N)5

 58   HgaI  GACGC(N)5 (N)5

 59   HgiEII  ACC(N)6GGT

 60   HpaI  GTT AAC

 61   KasI  G GCGC C

 62   KpnI  G GTAC C

 63   MaqI  CRTTGAC(N)19 NN

 64   MauBI  CG CGCG CG

 65   MluI  A CGCG T

 66   MmeI  TCCRAC(N)18 NN

 67   MreI  CG CCGG CG

 68   NarI  GG CG CC

 69   NdeI  CA TA TG

 70   NotI  GC GGCC GC

 71   NruI  TCG CGA

 72   NsiI  A TGCA T

 73   PacI  TTA AT TAA

 74   PasI  CC CWG GG

Page 6: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA

 75   PcsI  WCGNNN N NNNCGW

 76   Pfl1108I  TCGTAG

 77   PflFI  GACN N NGTC

 78   PmeI  GTTT AAAC

 79   PpiI  (N)5 (N)7GAAC(N)5CTC(N)8 (N)5

 80   PshAI  GACNN NNGTC

 81   PsiI  TTA TAA

 82   PsrI  (N)5 (N)7GAAC(N)6TAC(N)7 (N)5

 83   PvuI  CG AT CG

 84   RceI  CATCGAC(N)18 NN

 85   RleAI  CCCACA(N)9 NNN

 86   RpaB5I  CGRGGAC(N)18 NN

 87   RpaBI  CCCGCAG(N)18 NN

 88   RsrII  CG GWC CG

 89   SacII  CC GC GG

 90   SalI  G TCGA C

 91   SapI  GCTCTTCN NNN

 92   SbfI  CC TGCA GG

 93   ScaI  AGT ACT

 94   SdeOSI  NN (N)11GACNNNNRTGA(N)10 NN

 95   SexAI  A CCWGG T

 96   SfoI  GGC GCC

 97   SgrAI  CR CCGG YG

 98   SgrDI  CG TCGA CG

 99   SnaBI  TAC GTA

 100   SpeI  A CTAG T

 101   SphI  G CATG C

 102   SpoDI  GCGGRAG

 103   SrfI  GCCC GGGC

 104   Sse8647I  AG GWC CT

 105   SspI  AAT ATT

 106   StuI  AGG CCT

 107   SwaI  ATTT AAAT

 108   TatI  W GTAC W

 109   TfiI  G AWT C

Page 7: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA

 110   TsoI  TARCCA(N)9 NN

 111   TspGWI  ACGGA(N)9 NN

 112   TsuI  GCGAC

 113   Tth111I  GACN N NGTC

 114   UbaF14I  CCA(N)5TCG

 115   UbaF9I  TAC(N)5RTGT

 116   UbaPI  CGAACG

 117   XbaI  T CTAG A

 118   XmnI  GAANN NNTTC

d. Diseñar un PAR de iniciadores (primers) para amplificar por PCR el gen seleccionado en 1. Mostrar solo el PAR de iniciadores seleccionados.

e. ¿Qué condiciones de temperatura y tiempos se necesitan para amplificar un producto de PCR con los primers diseñados?

Temperatura de entre 60.05 y 59.38 °C.Tiempo 1.802 minutos

Page 8: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA

f. Mostrar la secuencia del producto de PCR amplificado.

231-gcagcaactt tcgcggtggc ctgggcggcg gctatggtgg ggccagcggc atgggaggca tcaccgcagttacggtcaac cagagcctgc tgagccccct tgtcctggag gtggacccca acatccaggc cgtgcgcacc caggagaagg agcagatcaa gaccctcaac aacaagtttg cctccttcat agacaaggta cggttcctgg agcagcagaa caagatgctg gagaccaagt ggagcctcct gcagcagcag aagacggctc gaagcaacat ggacaacatg ttcgagagct acatcaacaa ccttaggcgg cagctggaga ctctgggcca ggagaagctg aagctggagg cggagcttggcaacatgcag gggctggtgg aggacttcaa gaacaagtat gaggatgaga tcaataagcgtacagagatg gagaacgaat ttgtcctcat caagaaggat gtggatgaag cttacatgaacaaggtagag ctggagtctc gcctggaagg gctgaccgac gagatcaact tcctcaggca gctatatgaa gaggagatcc gggagctgca gtcccagatc tcggacacat ctgtggtgct gtccatggac aacagccgct ccctggacat ggacagcatc attgctgagg tcaaggcaca gtacgaggat attgccaacc gcagccgggc tgaggctgag agcatgtacc agatcaagta tgaggagctg cagagcctgg ctgggaagca cggggatgac ctgcggcgca caaagactga gatctctgag atgaaccgga acatcagccg gctccaggct gagattgagg gcctcaaagg ccagagggct tccctggagg ccgccattgc agatgccgag cagcgtggag agctggccat taaggatgcc aacgccaagt tgtccgagct ggaggccgcc ctgcagcggg ccaagcagga catggcgcgg cagctgcgtg agtaccagga gctgatgaac gtcaagctgg ccctggacat cgagatcgcc acctacagga agctgctgga gggcgaggag agccggctgg agtctgggat gcagaacatg agtattcata cgaagaccac cagcggctat gcaggtggtc tgagctcggc ctatgggggc ctcacaagcc ccggcctcag ctacagcctg ggctccagct ttggctctgg cgcgggctcc agctccttca gccgcaccag ctcctccagg gccgtggttg tgaagaagatcgagacacgt gatgggaagc tggtgtctga gtcctctgac gtcctgccca agtgaacagc tgcggcagcc cctcccagcc tacccctcc-1589

g. ¿Cómo cambiarían estos iniciadores si se quisiera introducir los sitios de restricción seleccionados en 2a?

BamHIG GATC C Forward primer GCAGCAACTTTCGCGGTGGC +

G GATC C Reverse primer GGAGGGGTAGGCTGGGAGGG

Page 9: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA

EagI C GGCC G Forward primer GCAGCAACTTTCGCGGTGGC +

C GGCC G Reverse primer GGAGGGGTAGGCTGGGAGGG

h. ¿sobre que antibiótico se deberán crecer las células a las que se les introduce el vector pET28a?

Kanamicina.

i. ¿cuál es el origen del promotor T7? ¿cómo es que este promotor es funcional en bacteria? ¿la polimerasa de origen bacteriano reconoce este promotor? Si no es así, que polimerasa lo reconoce?

El Origen del Promotor T7 es VIRAL. El promotor del fago T7 necesita la ARN polimerasa específica del mismo fago, por lo que si queremos expresar genes bajo ese promotor, hay que clonar simultáneamente el gen de la polimerasa de T7. Normalmente este gen de la polimerasa se inserta en el cromosoma de E. coli o en el profago  (la versión insertada del cromosoma del  en las células lisogénicas) y bajo el control del promotor de lac. Entonces se procede a transformar las células con la construcción genética dotada del gen de interés aguas abajo del promotor del T7. Cuando añadimos el inductor IPTG, se induce el gen de la polimerasa de T7, proteína que transcribe a gran nivel el gen que hemos clonado.

3. Utilizando la siguiente secuencia (valor 2 puntos):Seq1. ATGTTCCATTTGACAAGCAGAGATGGGGAACCAAGAATGATAGTGGGAAAGAATGAGAGAGGTAAGTCACTTCTGTTTAAAACTGCAAGTGGAATTAATATGTGCACACTGATTGCAATGGATCTAGGGGAGATGTGTGATGATACAGTAACTTACAAGTGTCCTCATATTACAGAGGTTGAACCAGAAGATATAGACTGCTGGTGCAATTTGACCTCAACTTGGGTAACTTATGGCACTTGCAATCAAGCCGGTGAGCATAGAAGGGATAAGCGTAGCGTGGCATTGGCCCCTCATGTCGGCATGGGACTTGACACTCGAACTCAGACTTGGTAA

a. Realizar un Blast en el NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastn&BLAST_PROGRAMS=megaBlast&PAGE_TYPE=BlastSearch&SHOW_DEFAULTS=on&LINK_LOC=blasthome) e indicar de que gen se trata.

Page 10: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA

b. Utilizando la secuencia seq1 y seq2 (proporcionada en este punto), realizar un alineamiento pairwise (http://www.ebi.ac.uk/Tools/psa/emboss_matcher/nucleotide.html) de las dos secuencias utilizando las herramientas disponibles en Expasy. Mostrar el alineamiento y resaltar las diferencias. ¿Cuál es el porcentaje de identidad?

Seq2. ATATTCCATTTGACAAGCAGAGATGGGGAACCAAGAATGATAGTGGGAAAGAATGAGGGAGGTAAGTCACTTCTGTTTAAAACTGCAAGTGGAATTAATATGTGCACACTGATTGCAATGGATCTAGGTGAGATGTGAGATGATACAGTAACTTACAAGTGTCCTCATATTACAGAGGTTGAACCAGAAGATATAGACTGCTGGTGCAATTTGACCTCAACTTGGGTAACTTATGGCACTTGCAATCAAGCCGGTGAGCATAGAAGGGATAAGCGTAGCGTGGCTTTGGCCCCTCATGTCGGCATGGGACTTGACACTCGAACTCAGACTTGGTA

EMBOSS_001 1 ATGTTCCATTTGACAAGCAGAGATGGGGAACCAAGAATGATAGTGGGAAA 50||.|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||

EMBOSS_001 1 ATATTCCATTTGACAAGCAGAGATGGGGAACCAAGAATGATAGTGGGAAA 50

EMBOSS_001 51 GAATGAGAGAGGTAAGTCACTTCTGTTTAAAACTGCAAGTGGAATTAATA 100|||||||.||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||

EMBOSS_001 51 GAATGAGGGAGGTAAGTCACTTCTGTTTAAAACTGCAAGTGGAATTAATA 100

EMBOSS_001 101 TGTGCACACTGATTGCAATGGATCTAGGGGAGATGTGTGATGATACAGTA 150||||||||||||||||||||||||||||.||||||||.||||||||||||

EMBOSS_001 101 TGTGCACACTGATTGCAATGGATCTAGGTGAGATGTGAGATGATACAGTA 150

EMBOSS_001 151 ACTTACAAGTGTCCTCATATTACAGAGGTTGAACCAGAAGATATAGACTG 200||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||

EMBOSS_001 151 ACTTACAAGTGTCCTCATATTACAGAGGTTGAACCAGAAGATATAGACTG 200

EMBOSS_001 201 CTGGTGCAATTTGACCTCAACTTGGGTAACTTATGGCACTTGCAATCAAG 250||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||

EMBOSS_001 201 CTGGTGCAATTTGACCTCAACTTGGGTAACTTATGGCACTTGCAATCAAG 250

EMBOSS_001 251 CCGGTGAGCATAGAAGGGATAAGCGTAGCGTGGCATTGGCCCCTCATGTC 300||||||||||||||||||||||||||||||||||.|||||||||||||||

EMBOSS_001 251 CCGGTGAGCATAGAAGGGATAAGCGTAGCGTGGCTTTGGCCCCTCATGTC 300

EMBOSS_001 301 GGCATGGGACTTGACACTCGAACTCAGACTTGGTA 335|||||||||||||||||||||||||||||||||||

EMBOSS_001 301 GGCATGGGACTTGACACTCGAACTCAGACTTGGTA 335

Page 11: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA

Page 12: Bioinformatica-Tecnologías de Recombinacion Genética

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONALUNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE BIOTECNOLOGÍASEGUNDO EXAMEN PARCIAL DE TECNOLOGÍA DE LA RECOMBINACIÓN GENÉTICAFECHA Y HORA DE APLICACIÓN: 26 ABRIL 2011, 10.00FECHA Y HORA DE ENTREGA : 28 ABRIL 2011, 8.30PROF. JESÚS AGUSTIN BADILLO CORONA