Bismillah Semprop Yessy

8/14/2019 Bismillah Semprop Yessy

1/25

AKTIVITAS KOMBINASI EKSTRAK TEMULAWAK,

KUNYIT DAN JAHE MERAH SEBAGAI AGEN KO-

KEMOTERAPI 5-FLUOROURACIL PADA

SEL KANKER KOLON WiDr

diajukan oleh :

YESSY KHOIRIYANIG1F010008

kepada

UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMANFAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU-ILMU KESEHATAN

JURUSAN FARMASIPURWOKERTO

2013

Pembimbing:

1. Sarmoko,M.Sc.,Apt.2. HenyEkowati,M.Sc.,Apt.

Penguji:

1. EstiDyahUtami,M.Sc.,Apt.2. EkaPrasastiNurRachmani,M.Sc.,Apt.


2/25

Agenko-kemoterapiyangmeningkatkanefektivitasmelalui

peningkatanefeksitotoksik

KANKERKOLON

1.DiIndonesia,kankermerupakanpenyebabkematiannomortigasetelahpenyakit

jantungdanstroke(Zainetal.,2007).

Salahsatujeniskankeryangmemiliki

prevalensitinggiyaitukankerkolon

2.BerdasarkandataNationalCancerInstitute,angka

kematianakibatkankerkolonlebihdari33%padatahun2008(Ries

etal.,2007)

5-Fluorouracil(5-FU)merupakanagen

kemoterapiutamayangdigunakanuntukterapikankerkolontetapi

efektivitasnyabarumencapai15%sehinggadiperlukanpengembanganagenko-kemoterapiuntukmeningkatkanefektivitas

terapidengan5-FU(MeyerhardtandMayer,

2005).

Temulawak,kunyitdanjahemerahmemilikiaktivitassabagai

antikanker.

Latar

Belakang


3/25


4/25

Tujuan Penelitian

1

MengujiaktivitassitotoksikkombinasiekstrakC.xanthorrhiza,C.longadanZ.officinalecv.Rubrumpada selkanker kolonWiDryangdinyatakandenganIC50.

2

MengujiaktivitassitotoksikkombinasiekstrakC.xanthorrhiza,C.longadanZ.officinalecv.RubrumdibandingkandenganekstraktunggalnyapadaselkankerkolonWiDryangdinyatakandenganIC50.

3

Mengetahui efek sinergisme kombinasi ekstrakC.xanthorrhiza,C.longa dan Z.officinale cv. Rubrum dengan 5-Fluorouracilsebagaiagenko-kemoterapimelaluipeningkatanefeksitotoksik.


5/25

Manfaat Penelitian

Memberikan informasi ilmiah mengenai aktivitas sitotoksik darikombinasi ekstrak C.xanthorrhiza, C.longa dan Z.officinale cv.RubrumsebagaiantikankerpadaselkankerkolonWiDr.

1

MemberikaninformasiilmiahmengenaiaktivitassitotoksikdarikombinasiekstrakC.xanthorrhiza,C.longadanZ.officinalecv.RubrumdibandingkandenganekstraktunggalnyasebagaiantikankerpadaselkankerkolonWiDr.

2

MeningkatkankegunaankombinasiekstrakC.xanthorrhiza,C.longadanZ.officinalecv.Rubrumsebagaibahanobat-obatanalamisebagaiagenko-kemoterapi5-Fluorouracildalampengobatankankerkolon.

3


6/25

KeaslianPenelitian

Ekowatietal.(2012)AktivitassitotoksikZingiberofficinale,PiperretrofractumdankombinasikeduanyaterhadapselmyelomadiperolehIC50berturut-turut28,36dan55g/ml.Zingiber officinale,Piperretrofractumdankombinasikeduanyadilaporkanmemiliki aktivitas sitotoksik terhadap sel kanker WiDr dengannilaiIC50Zingiberofficinale,Piperretrofractumdankombinasikeduanyaberturut-turut74, 158 dan 64g/ml.

Kurapati(2012)

KombinasiekstrakC longadan Z officinale memiliki efek sitotoksik lebihbesarpadacelllinekankerprostatPC-3M.

Milacicetal.(2009)

Kurkumin pada C longa memilikikemampuanuntukmenghambatproteasomedanmenginduksiapoptosispadaselkankerkolonHCT-116danSW480.

Chintana(2008) Kurkumin pada C longadan C xanthorrhizaefektifmenghambatproliferasiselkankermelaluiinduksiapoptosisdenganmempengaruhiekspresi cyclooxygenase-2(COX-2)danvascularendhothelialgrowthfactor(VEGF)sebagaiangiogenicbiomarkerpadakanker.

Cheahetal.(2006)

Xanthorrhizol yang terkandung dalam C xanthorrhizamampumencegahterjadinyainflamasi,karsinogenesisdanmetastasismelaluipenghambatanCOX-2jugamenginduksiterjadinyasitotoksikdanapoptosispadaselMCF-7.


7/25

Biologi Kanker

Kankermerupakansuatupenyakitselyangditandaidenganhilangnya fungsi kontrol sel terhadap regulasi daursel maupun fungsi homeostatis selpadaorganismemultiseluler.Salahsatupenyebabperubahaniniadalah

terpejannyaselnormalolehzat-zatkarsinogen,diantaranyasenyawa-senyawakimia,fisikdanbiologis

(Balmeretal.,2005).

Mutasi yang terjadi pada DNA di dalam gen yangmeregulasi siklus sel (pertumbuhan,kematiandanpemeliharaansel)akan menyebabkan penyimpangan siklussel, dan salah satu akibatnya adalah pembentukan kankeratau karsinogenesis.Proseskarsinogenesissecarabertahapdiawalidenganprosesinisiasi,dilanjutkandengan

promosidanberlanjutdenganprogresidariselnormalmenjadiselkankerataumalignantcell(Aggarwaland

Shishodia,2006).


8/25


9/25

TerapiKankerKolon

PengobatandasarkankerkolonPengangkatan

tumor dan pembuluh limfe (pembedahan) dan

sebagian besar penderita kanker kolonmemerlukankemoterapi.

The National Comprehensive Cancer Network(Anonim, 2005) memperkenalkan rejimen

kemoterapiuntukterapiadjuvankankerkolon.


10/25


11/25

SelWiDr

Sel WiDr merupakan sel kanker kolonmanusia yang diisolasi dari kolonseorang wanita berusia 78 tahun. SelWiDr merupakan turunan sel kanker

kolonyanglainyakniselHT-29(Chenetal.,1987).

Terjadi mutasi gen p53 yaitu

terjadinya perubahan residu argininmenjadi histidin (Noguchi et al .,1979). Namun, p21 pada sel WiDryang masih normal memungkinkanuntuk terjadinya penghentian daursel(Liuetal.,2006).


12/25

Agen Kemoterapi 5-FU

5-Fluorouracil (5-FU)agen kemoterapi utama untukterapi kanker kolon. 5-FU adalah antimetabolit yang

bekerja secara antagonis dengan timin terhadapaktivitas enzim timidilat sintetase (TS).

Dibandingkan dengan agen kemoterapi yang lain, 5-FU memiliki selektivitas yang tinggi pada aktivitas TS

dan efek samping yang ditimbulkan relatif lebihringan.

Namun, efektivitas 5-FU sebagai agen kemoterapibaru mencapai 15% sehingga diperlukan

pengembangan agen ko-kemoterapi untukmeningkatkan efektivitas terapi dengan 5-FU

(Meyerhardt andMayer, 2005).


13/25

Temulawak,Kunyit

danJaheMerahTemulawak(CurcumaxanthorrhizaRoxb.) Temulawakmengandungsenyawazingiber,kurkumin,xanthorrizol,benzofurandanminyakatsiri

James and Mukhtar (2007), Mukherjee et al. (2007), dan Singh and Anggarwal(2010),menunjukanbahwakurkuminbekerjadengancaramenghambattelomerasepadaprosesreplikasiDNApadaselkanker.

Kunyit(CurcumalongaL.)

Kunyit mengandung minyak asiri dengan senyawanya antara lain, sineol,borneol,zingiberene,curcumene

Chintana (2008)menjelaskan bahwa kandungan kurkumin padaC. longa danC.xanthorrhixa efektif menghambat proliferasi sel kanker melalui induksi apoptosisdengan mempengaruhi ekspresi cyclooxygenase-2 (COX-2) dan vascularendhothelialgrowthfactor(VEGF)sebagaiangiogenicbiomarkerpadakanker.

JaheMerah(Zingiberofficinalecv.Rubrum)

Kandunganaktifpadajahemerahyaitugingerol,paradol,shogaol,zingerone,resindanminyakatsiri

Nigam et al. (2009) menjelaskan bahwa kandungan senyawa 6-gingerol dan 6-paradol dalam Z. officinale mempengaruhi fase istirahat siklus sel dan induksi

apoptosis sel kanker melalui peningkatan ekspresi gen p-53, Bax level, danpenurunanekspresigenBcl-2.


14/25

Sitotoksik

Sitotoksik merupakan kemampuan suatu senyawa kimia untukmenghancurkansel tertentu (Rodeetal.,2004).Salah satu metode yangdigunakan untuk uji sitotosik adalah MTT assay yang didasarkan padaaktivitas enzim yang dapat diukur secara kolorimetri.PereaksiMTTmerupakangaramtetrazoliumyangdapatdipecahmenjadi

kristal formazanolehsistemsuksinat tetrazoliumreduktaseyang terdapatdalam jalurrespirasiselpadamitokondriayangaktifpadaselyangmasihhidup.

Uji sitotoksik digunakan untukmenentukan parameter nilai IC50. Nilai IC50dibawah1000g/mLmenunjukkanadanyapotensiekstrakujisebagaiagenkemoprevensi.


15/25

Ko-Kemoterapi Kanker

Kombinasikemoterapi(ko-kemoterapi)merupakan strategi terapi denganmengkombinasikan suatu senyawa dengan agen kemoterapi.Kombinasikemoterapibertujuanuntukmeningkatkanefektivitaspengobatandan

menurunkanefeksampingagenkemoterapi.

Metode yang umum digunakan untukmengevaluasikombinasiobatadalahIsobologramdanCombinationIndexCI).AnalisisCImenghasilkan suatu nilai parameterkuantitatif yang menggambarkan efikasi kombinasi


16/25

Landasan Teori

Katzung(2004)obatantikankerdiharapkanmemilikitoksisitasselektif

artinyamenghancurkanselkankertanpamerusakseljaringannormal.Pengobatankankersecaratradisionaldiharapkandapatmenurunkantoksisitasdanefek

samping.

Beberapapenelitianmenunjukkanbahwapenggabungan tanaman dapatmeningkatkan efektivitas karenakombinasitersebutmemilikimekanismeyangsalingmendukungdenganefek

sampingminimal(BeinfieldandKornglod,

2005).


17/25


18/25

Metode Penelitian

Penelitiandilaksanakan

selama6bulandiLaboratoriumTaksonomi

FakultasBiologi,LaboratoriumBiologiFarmasidanLaboratoriumRisetUniversitas

JenderalSoedirmanPurwokerto.

Waktu dan

Tempat

Penelitian

Neracaanalitik,BSC,mikrokultur96

,mikropipet,inkubatorCO2,

mikroskopinverted,

ELISAreader,cameradigital.

Alat

Rimpangtemulawak,

kunyitdanjahemerah,etanol

96%,5-Fluorouracil,cell

lineWiDr,mediumRPMI,

FBS,PBS,yellow

MTT.

Bahan


19/25

Rancangan Penelitian

Variabelbebas

konsentrasikombinasiekstraktemulawak,kunyit,jahemerah,

kombinasiketigaekstrakdan5-Fluorouracil.

Variabelterikat AktivitassitotoksikyangdinyatakandenganIC50(nilai

konsentrasiyangmenghasilkanpenghambatanjumlahselkanker50%)serta

efeksinergismeyangdinyatakandenganCI(Combinationindeks).

Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental laboratorium.

Penelitian dilakukan menggunakan ekstrak temulawak, kunyit dan jahe

merah sebagai senyawa uji terhadap sel kanker kolon WiDr. Uji aktivitas

sitotoksik dan uji ko-kemoterapi dilakukan dengan metode Yellow MTT

assay.


20/25

Skema Tahapan Penelitian


21/25

assay1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A T T T K K K JM JM JM TKJ TKJ TKJB T T T K K K JM JM JM TKJ TKJ TKJC T T T K K K JM JM JM TKJ TKJ TKJD T T T K K K JM JM JM TKJ TKJ TKJE T T T K K K JM JM JM TKJ TKJ TKJF T T T K K K JM JM JM TKJ TKJ TKJG 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU M M MH 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU 5-FU KS KS KS

Gambar 3.2. Skema pengisian mikrokultur untuk uji sitotoksikKeterangan :

T = Ekstrak temulawak

K = Ekstrak kunyit

JM = Ekstrak jahe merah

TKJ = Kombinasi ekstrak temulawak, kunyit dan jahe merah

5-FU = 5-Fluorouracil

M = Medium RPMIKS = Kontrol sel (sel WiDr dan medium RPMI)


22/25

Uji Ko-Kemoterapi

Tabel 3.1. Konsentrasi kombinasi ekstrak tekuja dan 5-Fluorouracilyang

digunakan dalam penelitian

5-FluorouracilIC50)

Tekuja IC50)1/8 1/4 3/8 1/2

1/8 1/8:1/8 1/8:1/4 1/8:3/8 1/8:1/21/4 1/4:1/8 1/4:1/4 1/4:3/8 1/4:1/23/8 3/8:1/8 3/8:1/4 3/8:3/8 3/8:1/21/2 1/2:1/8 1/2:1/4 1/2:3/8 1/2:1/2


23/25

Analisis Data

Analisis data persentasi penghambatan sel dihitung dengan rumus:

Analisis data IC50yang diperoleh dilakukan uji Kolmogorov-Smirnov

dilanjutkan dengan uji One Way Anova untuk mengetahui adanyaperbedaaan efek sitotoksik antar kelompok uji Least Significant Diffrence

(LSD) untuk membandingkan perbedaan efek sitotoksik antar kelompok.

D (D1 Dan D2) adalah konsentrasi senyawa uji yang digunakan untuk

uji kombinasi dan Dx (Dx1 dan Dx2) adalah konsentrasi senyawa

tunggal yang diperoleh dari intrapolasi persen viabilitas sel yang

menghambat x persen pertumbuhan sel dalam perlakuan


24/25

Menurut Reynolds and Maurer (2005) berbagai tingkatsinergismeatauantagonismediinterpretasikanmenggunakannilaiCIpadatabel3.2.berikut:

Tabel 3.2. Interpretasi nilai indeks kombinasi

Nilai CI Interpretasi< 0,1 Efeksinergissangatkuat0,1-0,3 Efeksinergiskuat0,3-0,7 Efeksinergis0,7-0,9 Efeksinergisringan-sedang0,9-1,1 Mendekatiefekaditif1,1-1,45 Efekantagonisringan-sedang

1,45-3,3 Efekantagonis>3,3 Efekantagoniskuat-sangatkuat

Analisis Data


25/25

Documents

Bismillah Semprop Yessy