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Dominguezia - Vol. 29(2) - 2013Fecha de recepción: 4 de agosto de 2013Fecha de aceptación: 25 de noviembre de 2013

Caracteres farmacognósticos para el control de calidadde Petiveria alliacea, Lippia graveolens y Tagetes lucida

Bonier M. Garrido, Sindy C. Polanco, Isabel C. Gaitán, Armando Cáceres, María E. Paredes*

Universidad de San Carlos de Guatemala, Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia, Edificio T-12, CiudadUniversitaria, Zona 12, Guatemala.Escuela de Química Biológica, Departamento de Citohistología.

*Autor a quien dirigir la correspondencia: maruparedess@yahoo.com

Resumen

Esta investigación se centró en el estudio de tres especies de plantas aromáticas de uso popular en Guatema-la: Petiveria alliacea, Lippia graveolens y Tagetes lucida, que se aplican para el tratamiento de enfermeda-des gastrointestinales. A partir del material vegetal fresco y seco, se determinaron las característicasmacroscópicas, organolépticas, micromorfológicas y fitoquímicas de cada especie, a los fines de establecerlas que puedan ser utilizadas para su respectivo control de calidad. P. alliacea presenta hojas hipostomáticascon estomas paracíticos, mesófilo con dos capas de parénquima en empalizada y de 4 a 5 de parénquimaesponjoso, donde encontramos cristales de oxalato de calcio en forma de estiloide; el nervio medio estáconstituido por hasta 6 haces vasculares dispuestos en arco. L. graveolens presenta hojas anfistomáticas conestomas anomocíticos; en las epidermis se observan diferentes tipos de tricomas glandulares y no glandula-res; el nervio medio está constituido por 5 a 6 haces vasculares dispuestos en arco. T. lucida presenta hojashipostomáticas con estomas anomocíticos y anisocíticos, mesófilo isobilateral con abundantes cavidadessecretoras; el nervio medio está constituido por 3 haces vasculares con casquetes de esclerénquima y vainaesclerificada. Se identificaron para cada especie los metabolitos que podrían estar relacionados con los usospopulares atribuidos.

Pharmacognostic characters for the quality control ofPetiveria alliacea, Lippia graveolens, and Tagetes lucida

Summary

This research was focused on the study of three species of aromatic plants popularly used in Guatemala forthe treatment of gastrointestinal diseases, Petiveria alliacea, Lippia graveolens, and Tagetes lucida. Macro-scopic, organoleptic, micro morphological and phytochemical characteristics of each species were deter-mined from fresh and also dried plant material, to establish those that can be used for its quality control.P. alliacea exhibit hypostomatic leaves with paracytic stomata, 2 layers of palisade parenchyma and 4 to 5 ofspongy parenchyma, styloid crystals and even 6 vascular bundles drawing an arch with 2 different types ofcollenchyma, in midrib. L. graveolens shows amphystomatic leaves with anomocytic stomata, variety of

Palabras clave: Petiveria alliacea - Lippia graveolens - Tagetes lucida - micromorfología - metabolitos secundarios - control decalidad.Key words: Petiveria alliacea - Lippia graveolens - Tagetes lucida - micromorphology - secondary metabolites - quality control.

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glandular and non-glandular trichomes on epidermal projections, a flattened arch with 3 accessory vascularbundles in midrib. T. lucida shows hypostomatic leaves with anisocytic and anomocytic stomata, isobilateralmesophyll with several secretory cavities, 3 vascular bundles adjoined with sclerenchymatic caps and sur-rounded by sclerenchymatous cells, in midrib. Also for each species, secondary metabolites that can berelated to their popular medicinal uses were identified.

Introducción

Según los informes de la Organización Mundial dela Salud (OMS), desde 1993 el 80 % de la pobla-ción mundial recurre a la medicina tradicional paraatender sus necesidades primarias de asistenciamédica (OMS, 2003).

En Guatemala existe una larga tradición del usode plantas medicinales, relacionado con la gran di-versidad biológica y cultural del país; es así que losmayas observaron los efectos de muchas plantasmedicinales y sus yerbateros o curanderos domina-ron el conocimiento de la herbolaria, utilizando di-versas hierbas para el tratamiento de la sintoma-tología de diversas enfermedades (Xiu-Chacón,1998). Actualmente la población guatemalteca si-gue utilizando las plantas para el tratamiento de en-fermedades de diversa índole, como en el caso delas afecciones gastrointestinales, que son la prime-ra causa de morbilidad nacional, y para las que seutilizan particularmente diversas plantas aromáticas(Cáceres y Girón, 2002; Pöll, 2005).

El hombre, a lo largo de su historia, ha utilizadoplantas aromáticas para aliviar algunas de sus do-lencias y para aromatizar los sitios de sus rituales olos lugares donde moraba. Desde entonces, esossabores y olores fueron formando parte de su cultu-ra e idiosincrasia (Dey y Harbone, 2002).

Las plantas aromáticas constituyen un conjuntode especies vegetales de diversas familias, denomi-nadas así debido a la presencia de glándulassecretoras que contienen aceites esenciales. Esasglándulas se encuentran localizadas en diversos te-jidos y órganos, como flores, hojas, brotes, tallos,madera, corteza, frutos, semillas, raíces y rizomas.Vierten el producto de secreción al exterior o al in-terior de esa estructura. (Alleman, 2003; Domínguezy Castro, 2002). Los aceites esenciales presentanvariadas propiedades organolépticas y actividadesmedicinales, tanto antioxidantes como antimicro-bianas; de ahí que sean utilizadas en diferentes par-tes del mundo en medicina tradicional para tratarpadecimientos gastrointestinales, respiratorios, fe-

briles, reumáticos y dermatológicos. En general, lasplantas medicinales se comercializan de diversasformas: frescas, secas, fragmentadas, pulverizadas,en cápsulas, o en extractos líquidos. Como se con-sideran naturales, no están sujetas a las mismas re-gulaciones que tienen los medicamentos de sínte-sis; sin embargo, pueden causar problemas a la sa-lud si no se utilizan correctamente o si se encuen-tran adulteradas o falsificadas.

Las drogas vegetales requieren el cumplimientode las Buenas Prácticas de Manufactura, desde sulugar de origen hasta su utilización con fines medi-cinales (Cuassolo y col., 2010).

Para asegurar la calidad de la materia prima sonimportantes los siguientes aspectos: identificaciónpor medio de características botánicas, organo-lépticas, macroscópicas y microscópicas, así comoel perfil cromatográfico, reacciones de identifica-ción y parámetros de pureza, entre los que se in-cluyen humedad, cenizas y rendimiento de aceitesesenciales.

Este estudio se enfocó en el establecimiento delos caracteres farmacobotánicos previamente men-cionados, de tres especies aromáticas nativas de Gua-temala y popularmente utilizadas para el tratamien-to de afecciones gastrointestinales (Cáceres, 2006;Pöll, 2005): Petiveria alliacea L. (“apacín”), Lippiagraveolens HBK. (“orégano”) y Tagetes lucida Cav.(“pericón”) en fase fenológica de follaje y floración.Con la finalidad de establecer caracteres diagnósti-cos que contribuyan a garantizar la identidad de es-tas especies, especialmente cuando se distribuyensecas y fragmentadas que dificulta su identificaciónbotánica.

Materiales y métodos

Se elaboraron ejemplares de herbario de las tres espe-cies en estudio atendiendo las recomendaciones deGiberti (1998); el material, botánico de P. alliacea fuerecolectado en Samayac, Suchitepéquez, L. graveolensy T. lucida se recolectaron en la Colección y Huerto

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Productivo de Plantas Medicinales y Aromáticas, dela Facultad de Agronomía, Universidad de San Carlosde Guatemala (USAC). La identificación y el depósi-to de ejemplares de las tres plantas se realizó en elHerbario de Biología de Guatemala (BIGU), de la Es-cuela de Biología, Facultad de Ciencias Químicas yFarmacia, USAC y fueron incorporadas con los nú-meros 52519, 52520 y 52521 respectivamente.

Para cada especie se elaboró una descripción bo-tánica diagnóstica a fin de facilitar su identificaciónen el campo. En los estudios morfológicos se em-plearon órganos en completo estado de desarrollo.La evaluación morfológica de la droga seca se rea-lizó bajo microscopio estereoscópico.

Los caracteres microscópicos de las hojas, lostallos y la raíz se determinaron a partir de prepara-dos de planta fresca obtenidos mediante cortes amano alzada (Gattuso y Gattuso, 1999).

Los cortes fueron teñidos con safranina yfastgreen para la observación de estructurashistológicas (Gattuso y Gattuso, 1999). Además, seprepararon diafanizados en las hojas de las tres es-pecies, y se analizaron ambas caras de las láminasfoliares para establecer las características epidérmi-cas y el índice de estomas (Gattuso y Gattuso, 1999).Las observaciones fueron hechas en microscopioóptico Fisher Scientific Micromaster II y digita-lizadas con el programa Micron USB, West OverScientific.

Se determinaron los porcentajes de rendimientode aceite esencial que contenía cada una de las plan-tas siguiendo la metodología de hidrodestilación(Henao y col., 2010; Solís y col., 2003).

Se realizaron pruebas de pureza de las cenizastotales y la humedad para garantizar la calidad delmaterial vegetal utilizado en los ensayos. Las ceni-zas fueron determinadas por medio de la igniciónde la materia seca en crisoles previamente tarados,en una mufla a 600 ºC durante tres horas; luego deese período, se evaluaron las cenizas, que estabandentro de la gama de colores que iba desde el grishasta el blanco; por lo tanto, los crisoles fueron pe-sados y las cenizas, determinadas. La humedad fuedeterminada por termogravimetría.

Se confirmó de manera cualitativa la presenciade cuatro metabolitos secundarios en las tres espe-cies evaluadas: alcaloides, flavonoides, saponinasy taninos, por medio de cromatografía en capa fina,con los extractos vegetales obtenidos de estas espe-cies por percolación y concentración en rotavapor

(Solís y col., 2003). Todos los análisis numéricos serealizaron en un mínimo de tres repeticiones.

Resultados

Descripción botánica y características organo-lépticas diagnósticas

Petiveria alliacea es una hierba perenne, de aproxi-madamente 60 cm de alto, tallos delgados,ramificados, con fuerte olor aliáceo, de actividadlacrimógena. Hojas simples con filotaxis alterna;forma elíptica a oblanceolada, ápice agudo, baseredondeada, peciolada; de margen o borde ondula-do, coloración verde, más oscura en el haz. Tieneraíz profunda, leñosa con coloración blanco-amari-llenta (Figura 1, A).

Su materia médica son las hojas y raícesdesecadas.

En la droga seca, compuesta por las hojas, au-mentan la tonalidad de la coloración verde, compa-rada con el espécimen fresco. Conservan su oloraliáceo, son quebradizas al tacto (Figura 1, B). Laraíz seca es fuertemente aromática, presenta un co-lor blanquecino opaco, es quebradiza al tacto y sutextura es rugosa (Figura 1, C).

Lippia graveolens, es un arbusto leñoso perennede 1,6 m de alto, tallos leñosos, ramificados, delga-dos, con fuerte olor característico de la planta. Ho-jas simples con filotaxis decusada, de coloraciónverde, y es de mayor intensidad en el haz que en elenvés; oblanceolada, ápice obtuso, peciolada; mar-gen o borde crenado (Figura 1, D). La droga vege-tal consiste en las hojas, que cambian su tonalidadde verde claro a verde fuerte, conserva su olor ca-racterístico ligeramente picante y fresco, las hojasson delgadas y quebradizas al tacto (Figura 1, E).

Tagetes lucida es una hierba perenne de 45 a 58cm de alto, tallo delgado, ramificado, con fuerte aro-ma anisado. Tiene hojas simples con filotaxis opues-ta; son de forma oblanceolada, el ápice es agudo,base connada, son sésiles, de margen dentado, de 3a 5 cm de largo y 2 a 3 cm de ancho. A trasluz lashojas presentan una gran cantidad de glándulasoleosas. Las flores son liguladas de color amarillo,se disponen en capítulos y estos, en inflorescenciatipo corimbo. Las partes aéreas (tallo, hojas y flo-res) (Figura 1, F) son las partes que se utilizan comodroga vegetal.

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Figura 1.- Ejemplares de las especies estudiadas

A. Ejemplar de Petiveria alliacea L.; B. Droga, hoja, desecada; C. Droga, raíz, desecada; D. Ejemplar de Lippiagraveolens HBK.; E. Droga, hoja desecada; F. Ejemplar de Tagetes lucida Cav.

D

BA

C

E F

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La droga seca de la materia vegetal de T. lucidacambia su tonalidad de verde fuerte a un verde unpoco más atenuado, mientras que el color de las flo-res se intensifica. El olor característico dulce y ani-sado, persiste. La consistencia de las hojas es que-bradiza al tacto.

Caracteres micromorfológicos e histológicos parala identificación

Petiveria alliacea L.

HojaVista superficialLa hoja de P. alliacea en vista superficial presentavenación cerrada reticulada de tipo broquidódroma(Figura 2, A). En la sección paradérmica y en eldiafanizado de la hoja se observan células epidér-micas con paredes anticlinales gruesas y ligeramenteonduladas que muestran puntuaciones primarias. Lahoja es hipostomática con estomas de tipo paracítico(Figura 2, B). Presenta escasos tricomas simplespluricelulares aglandulares, que pueden tener de dosa más de diez células, y están ubicados en ambascaras de la hoja y sobre los nervios principales (Fi-gura 2, C).

Corte transversalEn el corte transversal (CT) se observa mesófilodorsiventral, epidermis unistrata con células de ta-maño irregular en ambas caras; las células de la epi-dermis adaxial son más altas que las de la cara abaxial.En ambos lados se observa una cutícula delgada. Elparénquima en empalizada es irregular y presenta deuno a dos estratos de células cortas y largas; elparénquima esponjoso, con aproximadamente cincoestratos de células, ocupa entre el 60 y el 70 % delmesófilo. El nervio medio está constituido por cincoa seis haces vasculares de tipo colateral abierto, es-tán enclavados en el parénquima esponjoso y dispues-tos en forma de arco; junto al floema se observancasquetes de esclerénquima. En la zona del nerviomedio y adyacente a la epidermis adaxial encontra-mos colénquima laminar; junto a la epidermis abaxialobservamos colénquima lagunar (Figura 2, E) Enambos parénquimas se observan grandes cristalesestiloides de oxalato de calcio (Figuras 2, C y D).

Se evidencia además, la presencia de tricomas sim-ples de bicelulares a pluricelulares situados en la epi-dermis en la zona del nervio medio (Figura 2, E).

RaízEl CT de la raíz presenta una peridermis pluries-tratificada, y un cilindro vascular con estructura anó-mala; se observa una estructura con xilema com-pacto central, seguido por anillos de xilema alter-nando con anillos de parénquima que contienen is-lotes de floema. En todos los parénquimas se en-cuentran estiloides y cristales tetraédricos de oxalatode calcio.

Lippia graveolens HBK.

HojaVista superficialLa hoja de L. graveolens en vista superficial pre-senta venación simple, abierta y reticulada de tipocraspedódroma (Figura 3, A). El diafanizado del lim-bo foliar muestra una hoja anfistomática con estomasdel tipo anomocítico. Las células epidérmicas de lacara adaxial presentan células con paredes anticli-nales lisas y ligeramente gruesas, mientras que enla cara abaxial presentan paredes anticlinalessinuosas y delgadas (Figura 3, B). En las epidermisse observan gran cantidad de tricomas eglandularesy glandulares (Figuras 3, B y C).

PelosTricomas eglandularesUnicelulares, simples, verrucosos, de base ancha yextremo agudo y pueden estar en línea con la epi-dermis o elevados sobre columnas epidérmicas dedos o más células. Presentan cistolitos en la base dela célula tricomática (Figuras 3, D y E).

Tricomas glandularesSésiles, cabezuela unicelular (peltados), (Figura3, D); pie 1-2 celular, cabeza unicelular achatada(Figuras 3, B y D); pie bicelular, corto y cabeza dedos células (Figura 3, C); pie pluricelular largo ycabeza unicelular pequeña (Figura 3, E).

Corte transversalEn el CT del limbo foliar se observa el mesófilodorsiventral con epidermis unistrata e irregular, for-mada por células rectangulares de paredes periclinalesrectas y delgadas (Figuras 3 D y E ). En la cara adaxialpresenta una sola capa de parénquima en empalizadaformada por células largas que aproximadamenteocupan la mitad del grosor de la hoja y tres capasirregulares de parénquima esponjoso.

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Figura 2.- Petiveria alliacea L.

A. Tipo de venación de la hoja, materia fresca: vena primaria (1), venación cerrada (2), venas secundarias (3), venaciónreticulada (4) (10x); B. Sección paradérmica de la hoja, epidermis abaxial, se observan estomas paracíticos: célulassubsidiarias (1), células oclusivas (2), ostiolo (3) (400x); C. Tricomas no glandulares de la cara abaxial, cristalesestiloides de oxalato de calcio (200x); D. Corte transversal de la hoja: células de epidermis adaxial (1), células irregularesdel parénquima en empalizada (2), estiloide de oxalato de calcio (3) (200x); E. Corte transversal de la hoja: epidermisadaxial (1), epidermis abaxial (2), parénquima en empalizada (3), parénquima esponjoso (4), colénquima (5-6),parénquima (7-8), haz vascular (9), floema, (10), xilema (11), epidermis abaxial (12) (100x).

A

E

B C

D

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Figura 3.- Lippia graveolens HBK.

A. Hoja en vista superficial; B. Diafanizado de limbo foliar, células epidérmicas y estomas anomocíticos, epidermisabaxial y adaxial (200x); C. Corte transversal de hoja, dos tipos de tricomas glandulares pluricelulares (400x); D.Corte transversal de hoja gran cantidad de tricomas: haz (1), envés (2), parénquima en empalizada (3), parénquimaesponjoso (4), tricomas glandulares peltados (5) y capitados (6), nervadura secundaria (7) (50x); E. Corte transversalpor nervio medio, tricomas glandulares de base larga y no glandulares sobre proyecciones (200x).

ED

CB

A

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En el transcorte se observa gran cantidad detricomas glandulares y no glandulares, como losdescriptos en la vista superficial. (Figuras 3, D yE). El nervio medio del limbo foliar está constitui-do por 5 a 6 haces vasculares colaterales abiertos,dispuestos en arco y enclavados en el parénquimaesponjoso (Figura 3, E).

Tagetes lucida Cav.

HojaVista superficialLa hoja de T. lucida en vista superficial presentauna venación abierta y reticulada de tipo craspe-dódroma (Figura 4, A). En el diafanizado del limbofoliar se observa una hoja hipostomática, conestomas anisocíticos y anomocíticos. Las célulasepidérmicas presentan paredes anticlinales gruesasy sinuosas (Figura 4, B). Se observan escasostricomas eglandulares en ambas epidermis.

Corte transversalEn el CT del limbo foliar se observa un mesófilounifacial o equibilateral. Presenta epidermis unistrataen ambas superficies de la hoja, seguida en amboslados por una capa de parénquima en empalizada,cuyas células son más altas hacia la epidermisadaxial que hacia la epidermis abaxial. El parén-quima esponjoso, situado entre ambos parénquimasen empalizadas, presenta grandes cavidadessecretoras (Figura 4, C). El nervio medio del limbofoliar es poco prominente y presenta tres hacesvasculares de tipo colateral abierto, uno más grandey central, y dos laterales de menor tamaño. Los ha-ces presentan casquetes de esclerénquima pertene-cientes al floema y una vaina de células grandesesclerificadas (Figura 4, D). Debajo de las epider-mis adaxial y abaxial, y reforzando los hacesvasculares encontramos colénquima tipo laminar. Seobservan escasos tricomas eglandulares en ambasepidermis y sobre el nervio central.

TalloCorte transversalEn el CT del tallo se puede observar la formapoligonal, epidermis uniestratificada seguida de unaa dos hileras de colénquima tipo laminar, más desa-

rrollado en los ángulos; el cilindro vascular presen-ta hasta 24 haces colaterales y de 10 a 12 casquetesde esclerénquima, dispuestos en una eustela muycompacta; cercanos a la epidermis se observan con-ductos secretores (Figura 4, E).

En las tablas 1, 2 y 3 se presentan los datos co-rrespondientes a las estructuras identificadas de lastres especies estudiadas.

Tamizaje fitoquímico

La presencia de metabolitos secundarios se evaluópor medio de la técnica de cromatografía en capafina. Los resultados de esas pruebas se presentan enla tabla 4.

AlcaloidesPara la prueba de CCF se utilizaron los estándaresde atropina que presentó un Rf de 0,85 y el depapaverina, que no dio una banda identificable. Tresde las muestras analizadas presentaron bandas enesa región, con Rf de 0,88 (hoja de P. alliaceae,hoja de L. graveolens y hoja de T. lucida). El restode bandas no pudieron ser identificadas.

PolifenolesPara la identificación de los polifenoles se utili-zaron los estándares de quercetina (Rf: 0,61),rutina (Rf: 0,14), hiperósido (Rf: 0,34 y ácidoclorogénico (Rf: 0,29). Las dos muestras anali-zadas de T. lucida (pre-floración y floración)presentaron una banda cercana a la región de larutina. Las hojas de T. lucida en prefloraciónpresentaron ácido clorogénico, y las hojas deP. alliacea presentaron una banda en la regióndel hiperósido. El resto de bandas no pudieronser identificadas.

SaponinasSe utilizó el estándar de saponina que dio un Rf de0,78 y una coloración violeta, el estándar dediosgenina con un Rf de 0,88 y el estigmasterol conun Rf de 0,97. Todas las muestras presentaron ban-das en la región visible para los tres estándares uti-lizados, a excepción de T. lucida en floración, quesolo presentó una banda correspondiente al estándarde saponina.

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Figura 4.- Tagetes lucida Cav.

A. Hoja vista superficial; B. Diafanizado de limbo foliar células epidérmicas, estomas anomocíticos y anisocíticos (200x);C. Corte transversal de hoja mesófilo isobilateral con cavidades secretoras; D. Corte transversal del limbo a nivel del nerviomedio: epidermis adaxial y colénquima (1), casquete de esclerénquima (2) (200x); E. Transcorte de tallo (100x).

A

CB

ED

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Tabla 3.- Morfoanatomía de hoja y tallo de Tagetes lucida Cav. Estructura Características Resultados

Nervación Abierta reticulada pinnada, craspedódroma.

Estomas Hipostomática, estomas anisocíticos y anomocíticos.

Epidermis Uniestratificada en ambas superficies.

Hoja

Mesófilo Equibilateral, parénquima en empalizada bajo ambas caras y esponjoso central con gran cantidad de cavidades secretoras.

Nervio medio Tres haces vasculares colaterales abiertos.

Indumento Escasos tricomas glandulares unicelulares y no glandulares pluricelulares.

Tallo Estructura primaria Presenta haces colaterales abiertos. Tiene euestela. Colénquima laminar. Conductos secretores.

Tabla 2.- Morfoanatomía de hoja de Lippia graveolens HBK. Estructura Características Resultados

Nervación Abierta reticulada simple, craspedódroma.

Estomas Anfistomática, estomas anomocíticos.

Epidermis Uniestrata en ambas caras.

Mesófilo Dorsiventral. Una capa de parénquima clorofíliano en empalizada con células largas.

Hoja

Nervio medio Haces vasculares: 5 a 6 colaterales abiertos dispuestos en arco.

Indumento Tricomas glandulares con cabeza unicelular y bicelulares, no glandulares largos y cortos sobre proyecciones epidérmicas.

Tabla 1.- Morfoanatomía de hoja y raíz de Petiveria alliacea L.

Estructura Características Resultados

Nervación Cerrada reticulada, broquidódroma.

Estomas Hoja hipostomática, estomas del tipo paracíticos.

Epidermis Unistrata en ambas caras, células epidermis adaxial más altas con irregularidades.

Mesófilo Dorsiventral. Parénquima en empalizada uni o biestratificado e irregular. Otros: cristales estiloides de oxalato de calcio.

Nervadura central Haces vasculares del tipo colateral abierto.

Hoja

Indumento Tricomas pluricelulares predominando los no glandulares o tectores.

Raíz Estructura secundaria Cilindro vascular con estructura anómala, se observa una estructura con xilema compacto central.

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Porcentajes de rendimiento de aceites esenciales yextracto vegetal

Se determinaron los porcentajes de rendimiento tan-to de la extracción de aceites esenciales como laobtención del extracto vegetal. Al evaluar los resul-tados de las tres plantas, el mayor porcentaje en laobtención, tanto de extracto vegetal como de aceiteesencial, lo mostró L. graveolens; en cuanto a lacomparación de las dos etapas fenológicas de T. lu-cida, la etapa de floración fue la que obtuvo el ma-yor rendimiento de estos dos parámetros.

Parámetros de pureza (humedad y cenizas totales)

En la determinación de cenizas totales, la hoja de P.alliacea mostró los mayores porcentajes de cenizastotales con un promedio de 16,42 %, L. graveolens,12,01 %, raíz de P. alliaceae, 11,83 %, T. lucida enfase de prefloración, 10,58 %, y en fase de flora-ción, 8,62 %. El porcentaje de humedad para todaslas muestras fue menor del 10 %.

Discusión

Los resultados obtenidos en este estudio permitie-ron establecer caracteres farmacobotánicos útiles

para el control de calidad de las especies aromáti-cas: P. alliacea, L. graveolens y T. lucida.

Las características botánicas encontradas en P.alliacea coinciden con las descripciones realizadaspor otros autores para la familia Phytolaccaceae yel género Petiveria (Cáceres, 2006; Di Stasi yHiruma-Lima, 2002; Rzedowski y de Rzedowski,2000). El olor aliáceo y la propiedad lacrimógenade esta especie se debe a que, tanto la raíz como lahoja cuentan con un alto contenido de derivados delaminoácido cisteína, compuesto sulfurado comopetivericina, tiosulfinato, petiveriina, etc., pero enespecial, se atribuye a la sulfina (Cáceres, 2006).Estas características le confieren actividad anti-fúngica y antibacteriana y los compuestos poli-sulfurados son los más activos (López y Pérez, 2010;Muñoz, 2011).

Los caracteres micromorfológicos observadosen el CT del limbo foliar como, mesófilo bifacial,epidermis unistrata y la presencia de colénquimaen la nervadura central, es propia de la familiaPhytolaccacea; sin embargo, Duarte y Lopes(2005), informaron para la especie, colénquimaangular; en nuestro estudio el colénquima adya-cente a la epidermis abaxial es de tipo lagunar y eladyacente a la epidermis adaxial es de tipo lami-nar. Cáceres (2006) informa para esta especie,solo colénquima laminar. La presencia de grandes

Tabla 4.- Cromatografía en capa fina para confirmar la presencia de metabolitos secundarios de interés

H: hoja; R: raíz.

P. alliacea L. graveolens T. lucida (prefloración)

T. lucida (floración)

Rf de la droga vegetal evaluada Estándares utilizados

Metabolitos H R H H H Rf

Alcaloides 0,88 0,33 0,51 0,67 0,88

0,88 0,94

ND ND

Atropina Papaverina

0,85 ND

Polifenoles 0,33 0,42 0,45 0,93

0,18 0,29 0,43 0,93

0,18 0,45 0,93

Rutina Ac. clorogénico Hiperósido Quercitin

0,14 0,29 0,34 0,61

Saponinas 0,74 0,85 0,97

0,76 0,87

0,970

0,76 0,91 0,97

0,76 0,90 0,97

0,78 Saponina Diosgenina Stigmasterol

0,78 0,88 0,97

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cristales estiloides de oxalato de calcio ha sido in-formada por otros investigadores (Cáceres, 2006;Metcalfe y Chalk, 1972), lo cual coincide con esteestudio, no así con los informes de Duarte y Lopes(2005), quienes expresaron pequeños cristales pris-máticos, además, informaron un máximo de cincohaces vasculares en arco en CT del nervio medio,mientras que en este estudio se encontraron hastaseis, al igual que lo expresado por Metcalfe y Chalk(1972). Se encontraron tricomas pluricelulares detipo no glandular o tectores, que además de tenerun valor en la identificación de las especies, ga-rantizan protección ante los insectos, incluso deestar relacionados en la regulación de la tempera-tura y la hidrofugación (Duarte y Lopes, 2005;Martínez y col., 2004).

En este estudio, al igual que lo sostenido porDuarte y Lópes (2005), se encontró una hojahipostomática con estomas de tipo paracítico; no seencontraron los estomas anisocíticos informados porCáceres (2006). En el CT del limbo foliar se obser-vó un parénquima en empalizada irregular con unao dos capas de células cortas.

Para L. graveolens, la descripción botánica rea-lizada coincide con lo observado por Cáceres (2009)y Pöll (2005). Las observaciones del cambio de co-lor de la droga vegetal al secarse, así como volversefrágil y conservar su olor característico, correspon-de a lo evaluado por Nuñez y col. (2007) que des-cribieron a la familia Verbenaceae.

También para otras especies del género se ha des-crito la presencia de mesófilo bifacial y colénquimaasociado a ambas epidermis en la zona del nerviomedio, así como haces vasculares colaterales abier-tos dispuestos en forma de arco (Milaneze-Gutierrey col., 2003); sin embargo, la presencia de uno atres haces accesorios puede considerarse importan-te, ya que otras especies de Verbenaceae, presentandiferente distribución y cantidad de haces acceso-rios. Las hojas anfistomáticas son características dela familia (Bonzani y Col., 1997). Los tricomastectores cumplen funciones de defensa, mientras quelos glandulares colaboran en la secreción de sustan-cias de interés, como aceites esenciales, entre otras(Bonzani y col., 1997; Molina, 2008). La variabili-dad de tricomas encontrados en L. graveolens, tan-to glandulares como no glandulares, son caracterís-ticos de la familia (Bonzani y col., 1997; Martínez-Natarén y col., 2011; Metcalfe y Chalk, 1972).Cáceres (2006), describe los tricomas glandulares

con cabeza bicelular y pie unicelular, con cabezaunicelular y pie bicelular observados en este estu-dio; sin embargo, no describe los tricomas peltados,que sí son descritos por Martínez-Natarén y col.(2011), quienes además, mencionan el efecto de losfactores ambientales sobre la densidad de lostricomas. Concluyeron que la densidad de tricomasaumenta con la humedad del lugar de crecimientode L. graveolens.

Para T. lucida, la descripción botánica corres-ponde a lo descrito por otros autores (Cáceres, 2009;García Sánchez y col., 2012; Pöll, 2005), la identi-ficación organoléptica, tanto en su etapa de follajecomo floración, se caracteriza porque el aroma desus hojas es fuertemente anisado, hecho que ha oca-sionado que en muchas poblaciones rurales, dondees ampliamente utilizado, se lo conozca como“anisillo” (García Sánchez y col., 2012).En la etapa de floración la hoja tiene una gran can-tidad de glándulas oleosas, que coincide con lo en-contrado por Visintin y Bernardello (2005), quie-nes describieron a la familia Asteraceae, y en espe-cífico al género Tagetes.

La descripción micromorfológica de la materiafresca indica que tiene una epidermis uniestratificadaen ambas superficies de la hoja, tal y como Metcalfey Chalk (1950) y Mercado y col. (2006), señalaronpara la familia Asteraceae, aunque no se considerade valor diagnóstico debido a que puede variar encondiciones ambientales (Milán y col., 2006). Asi-mismo, estos autores describieron que la familiaAsteraceae comúnmente tiene hojas con mesófilodel tipo dorsiventral. Sin embargo, en este estudioT. lucida presentó un mesófilo tipo isobilateral, quesegún los autores mencionados es común encontrarloen hojas erguidas o pendulares y está relacionadocon condiciones ambientales. Nuestros resultadoscoinciden con lo informado por García-Sánchez ycol. (2012) quienes también informaron el mesófilobifacial y cavidades secretoras, tanto en el mesófilocomo en la nervadura central.

En nuestro estudio, la nervadura central presentade uno a tres haces vasculares, lo cual difiere de lomencionado por García Sánchez y col. (2012) quie-nes mencionan que la nervadura central tiene doshaces vasculares. Sin embargo, la presencia deesclerénquima y una vaina esclerosada sí es informa-da por ellos. La nervadura central poco prominenteha sido descrita en otras especies de Asteraceae(Zambare y col., 2010). Para T. lucida, el indumento

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está formado por escasos tricomas de tipo no glandu-lar, que para este estudio fueron más abundantes enla cara adaxial, contrario a lo informado por GarcíaSánchez y col. (2012); estos autores informan soloestomas de tipo anomocítico, y en este estudio seencontraron además, anisocíticos.

En cuanto al tamizaje fitoquímico de las tres es-pecies en estudio, en la cromatografía en capa fina,se confirma que los alcaloides encontrados para L.graveolens, la hoja de P. alliacea y la hoja de T.lucida en follaje corresponden a atropina, al com-pararlos con el Rf del estándar utilizado,

En la cromatografía en capa fina, los Rf‘ encon-trados para L. graveolens, P. alliacea y T. lucida enfollaje pueden compararse con los tres estándaresutilizados, la saponina, la diosgenina y el stigmas-terol; en consecuencia, se confirma que las tres plan-tas tienen estos tipos de saponinas (Martínez Pilar ycol., 2003; Cáceres, 2006, Teleguario, 2008).

El porcentaje de humedad de las tres especiesevaluadas se encontraba dentro de los rangos acep-tables especificados por la OMS (<10 %), lo cualgarantiza que el material vegetal utilizado en esteestudio se encontraba secado adecuadamente.

El porcentaje de ceniza indica el contenido desustancias inorgánicas. El valor límite según laOMS es de 12 %, con todas las muestras evalua-das dentro de los límites establecidos a excepciónde la hoja de P. alliacea; sin embargo, en otrosestudios se informan valores de cenizas totales de17,61 % y de 15 %. (Cáceres, 2006). Este parámetropuede ser influenciado por muchas variables, en-tre las que se pueden mencionar la época del añoen que fue recolectada la muestra, las propiedadesfísicas del suelo en el que es cultivada la planta. Apesar de que este valor presenta gran variabilidad,incluso en repeticiones del mismo material eva-luado, puede llegar a carecer de valor en la carac-terización de la materia de estudio, aunque al igualque el valor de porcentaje de humedad, garantizala calidad del material vegetal utilizado (Solís ycol., 2003).

Una característica de las tres especies evaluadases que sus aceites esenciales también son de impor-tancia médica; en P. alliacea el rendimiento de acei-tes esenciales fue de 0,68 %. Considerando que seha reconocido al aceite esencial de la raíz como demayor actividad medicinal, sería interesante com-parar los componentes tanto del aceite de las hojascomo el de la raíz (Martínez Pilar y col., 2003).

El porcentaje de rendimiento obtenido para L.graveolens fue de 1,45 %; un estudio previo(Quezada, 2008) determinó que para las hojas de L.graveolens el porcentaje de rendimiento experimen-tal es de entre 1,252 a 1,528 % dependiendo delárea; al hacer las correspondientes comparacionesse determina que los porcentajes de rendimiento sonmuy similares (Quezada, 2008).

El porcentaje de rendimiento para T. lucida enetapa fenológica de prefloración presentó un ran-go de 0,75 %; para este porcentaje no se cuentacon un dato teórico que sirva para comparación.Para T. lucida en etapa de floración el porcentajede rendimiento fue de 0,84 %, mientras que el ob-tenido en un estudio previo, fue de 0,26 %. Estedato puede verse influenciado por la época de re-colección, ya que el contenido de aceite esencialaumenta con la mayor cantidad de precipitaciónpluvial. Además, se ha informado mayor cantidadde aceite si la recolección se realiza por la mañana(Samol y Santizo, 2011).

Igualmente al determinarse los porcentajes derendimiento de los extractos vegetales se conclu-ye que tanto los porcentajes de extracto sólidocomo de aceite esencial dependen mucho de lascondiciones climáticas y de estrés de la planta, loque puede interferir igualmente en la producciónde metabolitos secundarios. Entre esos factorespodemos mencionar tanto la falta como el excesode lluvia, las cantidades de sol que recibe, el climade la región donde se encuentra el cultivo, si laregión es distinta a la nativa. Puede interferir igual-mente el tipo de suelo en el que se asienta la plan-ta, su inclinación y la vegetación circundante(Moriconi y col., 2009).

Concluimos que las tres especies estudiadas pre-sentan características organolépticas muy particu-lares, especialmente P. alliacea y T. lucida, sin em-bargo, existen otras plantas medicinales con oloressimilares, por lo que al encontrarse secas y frag-mentadas, los caracteres micromorfológicos de lashojas aportan herramientas muy útiles para el esta-blecimiento del control de calidad de las tres espe-cies, especialmente los de la vena media, el mesófilo,y los tipos de tricomas y estomas. Sería importanterealizar índices numéricos que pueden ser muy úti-les para diferenciar adulteraciones con plantas delmismo género. De igual forma las característicasfitoquímicas y fisicoquímicas pueden contribuir adeterminar la calidad de las drogas vegetales.

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Garrido y col.

Agradecimientos

A la Facultad de Agronomía, especialmente al inge-niero agrónomo Vicente Martínez y a su equipo detrabajo y al Departamento de Ecología, por la valio-sa ayuda brindada para la realización de la fase botá-nica experimental. Al Laboratorio de Bioensayos, alDepartamento de Citohistología y al Laboratorio deInvestigación de Productos Naturales (LIPRONAT),de la Facultad de Ciencias Químicas y Farmacia porsu colaboración y supervisión en la fase fitoquímicay la interpretación de los resultados.

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