Presentacin de PowerPoint

METODOLOGIA EXPERIMENTAL:

1. Calibracin, validacin e implementacin de las tcnicas analticas que permitan identificar cianobacterias y cuantificar sus metabolitos en agua natural y potable; as como los mtodos para determinar las principales caractersticas fisicoqumicas y microbiolgicas (indicadores de la presencia de cianobacterias).

2) Realizacin de un programa de muestreo y caracterizacin fisicoqumica y microbiolgica delagua cruda y tratada, a lo largo del tren de tratamiento de la PPLB.

3) Anlisis estadstico de resultados.

Aguas a evaluar

Las muestras de agua a evaluar fueron recolectadas en: a) Homogeneizacin del agua cruda de la PPLB, b) a la entrada y salida de sedimentadores, y c) a la salida de la Planta Potabilizadora Los

Berros o efluente

Programa de muestreo

Refieren que la mayor concentracin de cianobacterias en los cuerpos de agua se presenta durante el lapso de julio a octubre, razn por la cual el programa de muestreo cubri de manera especial esos meses. Con el fin de disminuir errores en cada muestreo se consideraron los siguientes aspectos.

Los muestreos se realizaron una vez a la semana en los meses de junio a agosto, periodo de mayor florecimiento de cianobacterias en el ao. De septiembre a enero la recoleccin de muestras disminuy a una vez cada 15 das.

La toma de muestras se llev a cabo el mismo da de la semana y a la misma hora (los mircoles alrededor de las 12 horas).

Los puntos de muestreo de la PPLB fueron siempre en la superficie y en los mismos sitios. En los mdulos D y E se hicieron mezclas compuestas.

MUESTREO Y PRESERVACIN DE MUESTRAS

Las muestras, recolectadas por triplicado, se utilizaron para la medicin de los parmetros fisicoqumicos, microbiolgicos y de los metabolitos de cianobacterias. A continuacin se describe la tcnica de recoleccin y preservacin de cada parmetro.

Parmetros fisicoqumicos

Los parmetros fisicoqumicos determinados fueron: pH, temperatura, contenido de oxgeno disuelto, color, turbiedad, fosfatos, nitritos, nitratos y slidos suspendidos totales. Los primeros tres parmetros se midieron in situ a lo largo del tren de tratamiento. Los otros seis referentes al agua cruda y al efluente, se midieron en el laboratorio. Las muestras se recolectaron en frascos mbar de un litro, posteriormente, fueron llevadas en hieleras al laboratorio finalmente se colocaron en un cuarto fro para realizar su anlisis al da siguiente.

Parmetros microbiolgicos

Determinacin de clorofila-a: Las muestras se recolectaron en frascos mbar de un litro, se llevaron

en hieleras al laboratorio y se conservaron a una temperatura de 4C, para evitar su descomposicin gradual.

Muestreo de organismos: Cada muestra se recolect por duplicado en frascos mbar de un litro. En

la botella se agregaron 20 mL de formol al 36% (fijador de clulas). Estas muestras fueron llevadas en hieleras al laboratorio para su observacin.

Metabolitos de cianobacterias

Determinacin de 2-metilisoborneol (2-MIB) y geosmina (GEO): Se recolectaron muestras de 60 mL, en frascos de vidrio de 100 mL que contenan 15 g de cloruro de sodio (NaCl) y un agitador magntico; los frascos se sellaron con una septa y fueron llevados en hieleras al , para su anlisis al da siguiente.

Determinacin de anatoxina-a, cilindrospermopsina y microcistina: Se recolectaron muestras de 500 mL en frascos mbar, que fueron llevadas en hieleras al laboratorio y conservadas en un cuarto fro a 4C, para realizar al da siguiente su extraccin en fase slida.

TCNICAS ANALTICAS

Parmetros fisicoqumicos

Las tcnicas analticas y los equipos utilizados para cuantificar los parmetros fisicoqumicos determinados en las muestras de agua recolectadas en la PPLB

Parmetros microbiolgicos

Determinacin de clorofila-a: La determinacin de clorofila-a est constituida por dos etapas:

a) Extraccin de Clorofila-a:

Los pigmentos se extraen del concentrado planctnico con acetona acuosa y la absorbancia del

extracto se determina con un espectrofotmetro (HACH DR 2010).

Este procedimiento, que se describe a continuacin, se realiza con poca luz o sin luz, para evitar

procesos de degradacin de la clorofila-a y se utilizan tubos opacos o protegidos de la luz con papel

aluminio.

Metabolitos de cianobacterias

Determinacin de 2-MIB y GEO por SPME-GC-MS: En los anlisis para identificar y cuantificar los metabolitos causantes de olor y sabor terro-mohoso se utilizaron estndares de 2-metilisoborneol con 98% de pureza, y para geosmina con 97% de pureza.

La determinacin de los metabolitos 2-MIB y GEO, est constituida por dos etapas: a) microextraccin en fase slida y b) cuantificacin por el mtodo cromatogrfico de gases acoplado a espectrometra de masas. Para la cuantificacin se aplicaron dos etapas tanto a las muestras de agua recolectadas en la PPLB, como a soluciones estndar diluidas en agua destilada y preparadas para obtener la curva de calibracin. Para las curvas de calibracin, se prepararon soluciones en agua destilada a 5, 10, 20, 40, 80, 100 y 140 ng/L, y posteriormente se analizaron por microextraccin en fase slida acoplada a cromatografa de gases con detector de espectrmetro de masas (SPME-GCMS por sus siglas en ingls).

En la etapa previa a la de micro-extraccin en fase slida, las muestras se recolectaron en frascos de 100 mL con un volumen de muestra de 60 mL, se adicionaron con un embudo 15 g de NaCl (con 99.96% de pureza, marca J. T. Baker) para incrementar la volatilizacin de los metabolitos y se agrega una barra magntica. Las muestras se taparon para evitar la evaporacin de los metabolitos, se trasladaron en hielera y se dejaron en el cuarto fro del laboratorio a una temperatura de 4C.

Al da siguiente, se realiz la etapa de micro-extraccin en fase slida, en una parrilla de agitacin se coloc el frasco de la muestra y se introdujo el inyector, el cual tiene una fibra (Marca Supelco, 57348-U) de 50/30 DVB/CAR/PDMS (2 cm). Para que los dos metabolitos se adsorbieran en la fibra, con posterioridad, se agit magnticamente, de manera vigorosa mediante una parrilla de agitacin (870 rpm), durante 30 minutos a 60C.

La desorcin se realiz en el cromatgrafo de gases al momento de inyectar, durante 5 minutos en modo splitless a una temperatura de 250C; ste es un tipo de inyeccin de muestras en cromatografa de gases, apropiado para el anlisis de trazas .