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COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 1
Comparación Entre Cinco Técnicas Coprológicas para el Diagnóstico de Laboratorio de
Quistes de Balantidium coli en Muestras Fecales de Cerdos
Becerra Arias Viviana
Universidad de Santander
Facultad de Ciencias Exactas, Naturales y Agropecuarias
Medicina Veterinaria
Bucaramanga
2020
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 2
Comparación Entre Cinco Técnicas Coprológicas para el Diagnóstico de Laboratorio de
Quistes de Balantidium coli en Muestras Fecales de Cerdos
Becerra Arias Viviana
Trabajo de Grado para Optar el Título de Médico Veterinario
Director
Pinilla Juan Carlos
PhD en Ciencias Veterinarias
Universidad de Santander
Facultad de Ciencias Exactas, Naturales y Agropecuarias
Medicina Veterinaria
Bucaramanga
2020
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 3
UNIVERSIDAD DE SANTANDER - UDES
ACTA DE EVALUACIÓN PARA TRABAJO DE GRADO
PROGRAMA MEDICINA VETERINARIA
ACTA No. 048
En Bucaramanga, a los 11 días del mes de diciem bre de 2020, se reunió el Comité de Proyectos de Grado, con asistencia de los docentes que a continuación firman el acta de “Evaluación para t rabajos de grado” : Viviana Becerra Arias CODIGO: 13351075 TITULO DEL PROYECTO: “Comparación entre cinco técnicas coprológicas para el diagnóst ico de laboratorio de quistes de Balantidium coli en muestras fecales de cerdos .” CONCEPTO: Aprobado CALIFICACIÓN TOTAL: TRES PUNTO OHO (3.8) OBSERVACIONES: EN CONSTANCIA FIRMAN:
________________________________ _______________________________
Dr. ALBEIRO PATIÑO HERRERA Dr. JORGE ALBERTO SOLANO M.
Director Programa MV Jurado
________________________________ ________________________________
Dr. JUAN CARLOS PINILLA L. Dr. ALBEIRO PATIÑO HERRERA Director Trabajo de Grado Jurado
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Agradecimientos
Al Todopoderoso que me concedió la inteligencia, perseverancia, fortaleza espiritual,
mental, emocional y material, para lograr los objetivos propuestos.
A mi director de tesis el Dr. Juan Carlos Pinilla, quién gentilmente me permitió formar
parte de este proyecto y que gracias a su apoyo, guía y orientación se logró culminar
satisfactoriamente.
A los profesores, que con su paciencia, comprensión, tolerancia y dedicación,
compartieron sus conocimientos para mi desarrollo profesional.
A los compañeros, que con su actitud positiva hicieron de esta experiencia, una vivencia
llena de momentos agradables e inolvidables.
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 5
Tabla de Contenido
pág.
Introducción .................................................................................................................................. 11
1. Objetivos.............................................................................................................................. 15
1.1 Objetivo General ................................................................................................................. 15
1.2 Objetivo Específicos ............................................................................................................ 15
2. Marco Teórico ..................................................................................................................... 16
2.1 Balantidium coli .................................................................................................................. 16
2.2 Epidemiología del Parásito .................................................................................................. 16
2.3 Diagnóstico .......................................................................................................................... 17
3. Metodología ......................................................................................................................... 20
3.1 Diseño del Estudio ............................................................................................................... 20
3.2 Población ............................................................................................................................. 20
3.3 Muestra ................................................................................................................................ 20
3.4 Tipo de Muestreo ................................................................................................................. 20
3.5 Recolección de la Información ............................................................................................ 21
3.6 Análisis Estadístico ............................................................................................................. 22
3.7 Consideraciones Éticas y Bioéticas ..................................................................................... 23
4. Resultados............................................................................................................................ 25
5. Discusión ............................................................................................................................. 27
6. Conclusiones........................................................................................................................ 31
Referencias Bibliográficas ............................................................................................................ 32
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 6
Lista de Tablas
pág.
Tabla 1 Recuperación de Quistes de Balantidium coli Mediante las 5 Técnicas Parasitológicas
Empleadas (N = 279). ................................................................................................................... 25
Tabla 2 Concordancia de los Resultados Obtenidos Mediante las Técnicas Aplicadas al
Diagnóstico de Quistes de Balantidium coli (N=279). ................................................................. 26
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Resumen
Título
Comparación entre Cinco Técnicas Coprológicas para el Diagnóstico de Laboratorio de
Quistes de Balantidium coli en Muestras Fecales de Cerdos Traspatio del Área Metropolitana de
Bucaramanga.
Autor
Becerra Arias Viviana
Palabras Clave
Balantidium coli, quistes, técnicas coprológicas, concordancia, parásito.
Descripción
Balantidium coli hace parte del grupo de protozoarios ciliados y es el único miembro de la
familia Balantidiidae capaz de afectar a los humanos llegando a comprometer gravemente su
salud. Para la recuperación de B. coli de materia fecal se debe tener en cuenta el estadio en que
se encuentra el parásito, pero, no hay una técnica coprológica estandarizada que garantice el
correcto diagnóstico.
Este trabajo tiene como objetivo determinar la concordancia de cinco técnicas
coprológicas en el diagnóstico de quistes de B. coli en muestras fecales de cerdos de granjas
traspatio del área metropolitana de Bucaramanga. Se realizó un estudio de corte transversal en el
que se implementaron cinco técnicas coprológicas (centrifugación-flotación, McMaster, examen
directo con lugol y solución salina 0,87% y tinción de Ziehl-Neelsen) a 279 muestras fecales de
cerdos de criaderos traspatio, previo consentimiento del propietario. Se utilizó el índice Kappa
para determinar la concordancia entre las técnicas. Entre las técnicas utilizadas, el examen
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 8
directo con Lugol mostró la mayor recuperación recuperación de quistes de B. coli con 52.7%,
seguido del examen directo con solución salina al 0.87% con un 37.6% de muestras positivas. La
concordancia entre las técnicas mostró un coeficiente kappa estadísticamente significativo para
los exámenes directos realizados con lugol y solución salina al 0,87% (k=0.41).
Conclusiones: Las técnicas coprológicas que mostraron mayor eficiencia para recuperar
quistes de B. coli fueron las directas, siendo la solución de Lugol la que permitió mayor
captación del diagnóstico frente a la solución salina al 0,87%. Además, la concordancia entre
estas dos técnicas mostró un acuerdo moderado, lo que demuestra que realizar ambas técnicas
puede mejorar la detección del parásito.
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 9
Abstract
Title
Comparison Between Five Coprological Techniques for Laboratory Diagnosis of
Balantidium coli cysts in Fecal Samples From Backyard Pigs in the Metropolitan Area of
Bucaramanga
Author
Becerra Arias Viviana
Keywords
Balantidium coli, cysts, coprological techniques, concordance, parasite.
Description
Balantidium coli is part of the group of ciliated protozoa and is the only member of the
Balantidiidae family capable of affecting humans, seriously compromising their health. For the
recovery of B. coli from fecal matter, the stage of the parasite must be taken into account, but
there is no a standarized coprological technique that guarantees a correct diagnosis.
This work aims to determine the concordance of five coprological techniques in the
diagnosis of B. coli cysts in fecal samples of pigs from backyard farms in the metropolitan area
of Bucaramanga. A cross-sectional study was carried out in which five coprological techniques
(centrifugation-flotation, McMaster, direct examination with lugol and saline solution 0.87% and
Ziehl-Neelsen staining) were implemented on 279 fecal samples from pigs from backyard farms,
prior consent of the owner. The Kappa index was used to determine the concordance between the
techniques. Among the techniques used, the direct examination with lugol showed the highest
recovery of B. coli cysts with 52.7%, followed by the direct examination with 0.87% saline with
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 10
37.6% positive samples. The agreement between the techniques showed a statistically significant
kappa coefficient for the direct examinations performed with lugol and 0.87% saline solution
(k=0.41).
Conclusions: The stool techniques that showed the greatest efficiency to recover B. coli
cysts were the direct ones, being the Lugol's solution the one that allowed greater uptake of the
diagnosis compared to 0.87% saline. In addition, the concordance between these two techniques
showed moderate agreement, showing that performing both techniques can improve parasite
detection.
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 11
Introducción
Balantidium coli es un protozoario ciliado, el cual es el agente infeccioso de la
Balantidiasis y tiene como hábitat el intestino grueso de cerdos, primates y humanos. B. coli se
puede transmitir vía oro-fecal por contacto directo con las heces de animales portadores; sin
embargo, existen medios de diseminación como el agua y alimentos contaminados que pueden
actuar como fuentes de infección. Por su forma de transmisión, es de esperarse que humanos que
conviven estrechamente con cerdos puedan desarrollar la enfermedad, y es por este potencial
zoonótico que el parásito ha despertado interés en zonas donde hay limitaciones en el acceso al
agua y a infraestructura sanitaria (Schuster y Ramirez-Avila, 2008).
Los individuos infectados pueden ser asintomáticos o presentar síntomas muy marcados.
En la fase asintomática se dice que la persona está en estado portador y cuando se presentan
síntomas se clasifican según la gravedad de éstos. La aparición de diarrea sin moco o sangre y
estreñimiento esporádico son catalogados como síntomas leves. La fase aguda cursa con dolor
abdominal, tenesmo y diarrea con presencia de moco y sangre; sintomatología similar a una
amebiasis; por lo que es recomendable hacer un diagnóstico diferencial. La fase crónica es
asociada a periodos alternados de diarrea disentérica, dolor abdominal, deshidratación, fiebre y
pérdida de peso (Ministerio de salud, 2015).
Aunque en algunos lugares las infecciones pueden ser esporádicas, existen regiones en
las que la balantidiasis es endémica (García et al., 2008). Además, se ha determinado que la
prevalencia del parásito es mayor en países cuyos climas presentan una alta temperatura y
humedad ambiental lo cual favorece su propagación, a diferencia de climas fríos y secos, donde
son menos prevalentes (Condemayta, Condemayta, Ruelas e Ibañez, 2018).
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 12
Se ha comprobado la circulación permanente del parásito en países como Filipinas,
Nueva Guinea y áreas rurales de Sur América, donde se reporta una prevalencia aproximada de
0,5 a 1%, especialmente en países como Bolivia, Brasil, Chile, Ecuador, Perú y Costa Rica
(Mayén-Estrada, et al., 2016). En Colombia, un estudio reportó una prevalencia de B. coli de
42% en cerdos de granjas tecnificadas y semi-tecnificadas en el municipio de Cundinamarca,
asociado especialmente a hembras gestantes y lactantes y a lechones lactantes y destetados, lo
que se atribuyó a condiciones de estrés propias de su condición fisiológica. Por otra parte, la
prevalencia de este y otros parásitos evaluados se relacionó con el consumo de agua no tratada
(Mendoza-Gómez, et al., 2015). Sin embargo, para Santander no se encontraron registros de
estudios sobre este parásito. El mismo estudió evaluó la prevalencia de B. coli en los trabajadores
de las granjas y encontró que 9,1% presentó la infección. En este caso, los casos estuvieron
relacionados con malas condiciones de salubridad, carencia de servicios básicos y hábitos
higiénico-sanitarios deficientes, aspectos que favorecen la permanencia del parásito en el
ambiente (Mendoza-Gómez, et al., 2015).
Por lo general, el porcentaje de las personas infectadas por el B. coli no es elevado debido
a que el ser humano, por naturaleza, es lo suficientemente refractario a la infección (Devera,
2018). Además, la alimentación se considera que favorece la infección de este parásito, su
desarrollo y crecimiento en el huésped humano ya que una dieta pobre en proteínas, calorías,
vitamina A y rica en carbohidratos, puede favorecer el desarrollo de parasitosis múltiples
(Gezuele, et al., 2005). Esto último es importante, debido a que cuando B. coli es el único
huésped dentro del organismo se comporta como un simple comensal y no puede penetrar la
mucosa; pero, cuando otros parásitos u agentes infecciosos lesionan la mucosa, B. coli se
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 13
comporta como un invasor secundario, llegando al fondo de lesiones ulcerosas, agravándolas
(Quiroz, 2005).
El diagnóstico parasitológico de la balantidiasis consiste en determinar la presencia del
parásito en la materia fecal por medio de microscopía óptica, ya sea de trofozoítos cuando está
con consistencia líquida, o de quistes cuando tiene consistencia sólida y semisólida (Sánchez,
2013). Para el diagnóstico se han desarrollado diversas técnicas que permiten minimizar los
detritos fecales y tratan de facilitar la visualización del parásito. Cada una tiene bases propias y
diferentes procesos e igualmente sus ventajas y limitaciones. Así, por ejemplo, la flotación en
solución salina saturada de NaCl posiblemente es la solución mas usada en los laboratorios de
parasitología, porque con ella se pueden observar la mayoría de los ooquistes. También se
utilizan técnicas como la de McMaster, cuando se requiere realizar un estimado del número de
quistes por gramo de heces para dar una indicación clínica (Serrano, et al., 2010).
Ante las múltiples técnicas de diagnóstico disponibles, un estudio brasileño comparó
cinco técnicas para detectar quistes de B. coli en heces de cerdos y primates y encontró que el
parásito se diagnosticó con mayor frecuencia con la técnica directa (22,4%), seguida por la
técnica de sedimentación de Lutz (21%) y la técnica de Ritchie modificada (20,5%), mientras
que las técnicas de flotación no fueron eficientes para recuperarlo. Sin embargo, al analizar la
concordancia entre las técnicas, encontraron que el mayor coeficiente kappa estuvo entre las
técnicas directa y de sedimentación de Lutz (0,41), por lo cual es necesario estandarizar las
pruebas y explorar en la búsqueda de la técnica más adecuada para esta especie, teniendo en
cuenta que deberá elegirse de acuerdo al estadio en que se encuentre el parásito (Barbosa, et al.,
2016).
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 14
Por otro lado, el ICA, en el 2020, informó que en el área metropolitana de Bucaramanga
contaba con un total de 24.473 porcinos de los cuales 18.694 pertenecían a granjas traspatio y
5.779 a granjas tecnificadas (ICA, 2020). Teniendo en cuenta que las infecciones por
protozoarios son muy frecuentes en las explotaciones porcinas de campo o traspatio debido a la
mayor dificultad para controlar la transmisión de estas infecciones, la cría de cerdos en el área
metropolitana se convierte en un factor potencial para diseminar la infección en la población.
Adicionalmente, la cadena de distribución de estos criaderos de traspatio puede tener
deficiencias en los controles sanitarios, permitiendo mantener la cadena de contagio.
Teniendo en cuenta el contexto productivo del área metropolitana y la problemática
asociada a la presentación de casos de zoonosis por B. coli, es necesario fortalecer las actividades
de detección temprana de esta enfermedad mediante pruebas eficientes y estandarizadas que
permitan posteriormente realizar intervenciones por parte de las autoridades competentes,
manteniendo la integridad de los seres humanos, sin poner en riesgo la seguridad alimentaria de
la región. Por lo tanto, este estudio se fundamenta en la aplicación de pruebas coprológicas
estandarizadas para realizar los diagnósticos de B.coli en muestras fecales de cerdos traspatio del
área metropolitana de Bucaramanga, de las cuales hasta el momento tampoco existen informes,
datos y/o estudios al respecto con el fin de responder a la siguiente pregunta de investigación
¿Cuál es la concordancia de cinco técnicas de diagnóstico de quistes del protozoario B. coli, en
cerdos de granjas de traspatio?.
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 15
1. Objetivos
1.1 Objetivo General
Determinar la concordancia de cinco técnicas coprológicas en el diagnóstico de quistes de
B. coli en muestras fecales de cerdos de granjas traspatio del área metropolitana de
Bucaramanga.
1.2 Objetivo Específicos
Determinar la recuperación de quistes de B. coli en muestras fecales de cerdos.
Comparar la concordancia del diagnóstico de B. coli entre las técnicas
coprológicas.
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2. Marco Teórico
2.1 Balantidium coli
Balantidium coli es un protozoario que pertenece a la familia Balantidiidae, orden
Vestibuliferida, clase Litostomatea, phylum Ciliophora y reino Protista (Lee et al., 1985). Hace
parte del grupo de protozoarios ciliados y es el único miembro de la familia Balantidiidae capaz
de afectar a los humanos llegando a comprometer gravemente su salud (Sánchez, 2013).
Su transmisión al humano ocurre por vía oro-fecal a través de agua o alimentos
contaminados con el quiste, generalmente del hospedero natural, el cerdo; aunque se reporta que
también puede ocurrir transmisión humano-humano (Schuster y Ramirez-Avila, 2008).
Este parásito tiene dos etapas evolutivas: el trofozoíto y el quiste. El trofozoíto es la etapa
patógena; presenta cilios, una forma ovoide y puede llegar a medir hasta 170 micras. Cuando
llega a su etapa de madurez, bajo condiciones propicias, pierde los cilios y desarrolla una doble
pared que le permite convertirse en quiste y alcanzar la etapa infectante. El quiste es esférico u
ovalado con dimensiones aproximadas entre 45 y 75 micras. Su pared doble y gruesa lo hace
resistente a condiciones desfavorables (Devera, 2018). Cuando dicho quiste se encuentra en el
estómago, la producción de jugos gástricos disuelve sus paredes, prosigue su camino hacia el
intestino donde cambia su etapa evolutiva a trofozoíto y continua su proceso de multiplicación
(Ministerio de Salud, 2015).
2.2 Epidemiología del Parásito
Un estudio consolidó las investigaciones realizadas entre 1989 y 2019 y encontró 27
artículos de 22 paises de Asia, Africa y Sur América en los que se reporta una prevalencia en
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 17
cerdos del parásito que oscila entre 0,7 y 100%. Otras especies como bovinos, búfalos, ovejas.
Cabras, caballos y primates también pueden ser parasitados por B. coli (Ahmed et al., 2020).
Es cosmopolíta y se distribuye especialmente en zonas tropicales y subtropicales en las
cuales se favorece la supervivencia del quiste, aunque parece tener buena adaptabilidad a
condiciones menos ideales como zonas urbanas y países no tropicales (Schuster y Ramirez-
Avila, 2008). Además, debido a que el cerdo es el principal hospedero de B. coli, el parásito
afecta principalmente a porcicultores de granjas traspatio en contacto estrecho, quienes, debido a
sus frágiles condiciones económicas, no implementan los estándares establecidos y requeridos
para este tipo de actividades (Beltrán et al., 2016). Adicionalmente, la disposición inapropiada
del excremento de cerdos y humanos facilita la contaminación de fuentes de agua y alimento.
2.3 Diagnóstico
El diagnóstico de B. coli se realiza a través de la detección, en heces frescas o fijadas en
formol, del trofozoíto o el quiste. Dentro de las técnicas coprológicas utilizadas en el
diagnóstico, existen diferentes opciones dependiendo del estadio del parásito. En heces diarreicas
se espera que se observen fácilmente los trofozoitos, mientras que en heces sólidas o semisólidas
se observan especialmente los quistes (Sánchez, 2013). En esta investigación se seleccionaron las
siguientes técnicas:
a) Examen directo con solución salina: Esta técnica cualitativa es empleada
especialmente para diagnóstico de protozoarios intestinales, tanto en forma de trofozoitos como
de quistes, aunque a veces suele usarse para diagnóstico de helmintos. Para su ejecución, en una
lámina se coloca una o dos gotas de solución salina al 0,87% y con un palillo se mezcla con un
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 18
poco de heces frescas hasta obtener una película clara y poco gruesa. Se coloca la laminilla y se
observa al microscopio con objetivo de 10 o 40X.
b) Examen directo con Lugol parasitológico: Es similar a la técnica anterior, solo que
en este caso se emplea Lugol para la mezcla, el cual tiñe muy bien los quistes.
c) Técnica Centrifugación – flotación con solución de azúcar-sal: hace parte de las
técnicas de enriquecimiento que permiten obtener una mayor concentración del número de
formas parasitarias. Para el montaje se debe hacer una suspensión de las heces en solución salina
fisiológica, se filtra, se añade agua corriente y se centrifuga por 5 minutos. Se elimina el
sobrenadante y se llena el tubo con solución de azúcar-sal y se cubre con una laminilla para
llevarlo nuevamente a la centrifuga a 1500 rpm por 5 minutos. Se retira la laminilla, se pone
sobre una lámina y se observa al microscopio con objetivo de 40X.
d) Técnica convencional de McMaster: Es una técnica cuantitativa que permite
detectar nematodos y quistes de protozoarios. Se adiciona 42 ml de agua corriente a 3 g de heces
frescas, se homogeniza la mezcla y se filtra; posteriormente se centrifuga a 1500 rpm durante 2
minutos y se elimina el sobrenadante. Se agrega solución salina saturada y se homogeniza la
mezcla, para finalmente, llenar las cámaras de McMaster y observar en el microscopio con el
objetivo de 10X (Velez, 1995).
e) Técnica de Ziehl-Neelsen modificado: Es útil para visualizar quistes de protozoos
que son ácido alcohol resistentes. Se realiza una extensión fina de las heces sobre la lámina y una
vez seca, se fija con etanol. Luego se cubre la preparación con fucsina fenicada durante 5
minutos. Se lava y se decolora con ácido sulfúrico durante un minuto; se vuelve a lavar y se
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 19
cubre con azul de metileno. Se lava, se seca y se visualiza en el microscopio con objetivo 100X y
aceite de inmersión (Tahvildar-Biderouni y Salehi, 2014).
Métodos diagnósticos alternativos incluyen biopsia rectal, lavado broncoalveolar (ya que
ocasionalmente formas extraintestinales pueden incluir órganos como la pleura y los pulmones) y
cultivo en medios similares en los que se cultiva E. histolytica, en un rango amplio de
temperatura (24 a 40º) (Solaymani-Mohammadi y Petri, 2006). También, se han identificado
trofozoitos en ulceras, en el momento de la necropsia y algunos estudios han reportado el uso de
microscopia de transmisión y electrónica de barrido. Adicionalmente, existen métodos de
análisis molecular basados en secuencias de genes ITS y rRNA 18S para confirmar infecciones
por B. coli en ovejas tibetanas con historia de diarrea (Ahmed et al., 2020).
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 20
3. Metodología
3.1 Diseño del Estudio
Estudio de corte transversal para evaluación de técnicas diagnósticas.
3.2 Población
En Santander se registra un total de 3.262 predios porcinos y 81.155 animales, lo que
equivale a 1,3% del total nacional. Aproximadamente el 98% de los cerdos se encuentran en
producciones traspatio y el porcentaje restante se cría en confinamiento. Del total de la
producción del departamento, el 20% se localiza en los municipios de Piedecuesta,
Bucaramanga, Floridablanca y Girón y de estos, el 97% se cría en granjas traspatio (ICA, 2020).
De acuerdo con lo anterior, la población estuvo conformada por cerdos de criaderos
traspatio del área metropolitana de Bucaramanga.
3.3 Muestra
Para determinar el tamaño de la muestra se empleó una fórmula descrita por Thrusfield
en 2007 para cálculo del tamaño muestral con prevalencia conocida en poblaciones grandes: n =
Z² (p)*(q) / EMA² (6% de error máximo asociado y 95% de nivel de confianza). Utilizando una
prevalencia global parasitaria esperada de 50% (Pulido-Villamarín et al. 2013) se determinó un
“n” = 279 muestras que fueron distribuidas proporcionalmente según la población de los
municipios, de 32 criaderos de la zona.
3.4 Tipo de Muestreo
Se diseñó un muestreo de tipo aleatorizado (Lohr, 1999) empleando una tabla de números
aleatorios para ubicar geográficamente el criadero dentro del municipio. En los criaderos se
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 21
seleccionaron cerdos de manera aleatoria para la toma de la muestra fecal. La unidad de
muestreo estuvo conformada por los animales.
3.5 Recolección de la Información
En cada criadero se colectaron aleatoriamente muestras fecales en lechones de 3 y 4
meses sin signos de diarrea y previo consentimiento informado y firmado por el propietario. La
muestra fecal se tomó directamente de la ampolla rectal del animal, utilizando guantes de látex
para tal fin. Se colectaron 20 gramos de materia fecal de cada animal seleccionado y se
adicionaron 3 gotas de formalina al 10% para su conservación. Todas las muestras se colectaron
en envases de plástico previamente identificados y se introdujeron en una cava refrigerada para
ser trasladadas al Laboratorio de investigación de Medicina Veterinaria, ubicado en la clínica
Veterinaria de la Universidad de Santander, donde fueron conservadas en refrigeración hasta su
procesamiento.
Se realizaron las siguientes técnicas coprológicas:
a) Técnica Centrifugación – flotación con solución de azúcar-sal: se tomaron
aproximadamente 4g de heces con un baja lenguas, en un vaso de precipitado. Se adicionó 20 ml
de agua destilada, se mezcló y se filtró con una gaza. Luego se llevó en un tubo de ensayo a la
centrifuga a 1500 rpm durante 5 minutos, se eliminó el liquido y con un hisopo se revolvió el
sedimento. Se adicionó solución azúcar-sal hasta el borde y se colocó un cubreobjetos durante 5
minutos. Después se colocó sobre una lámina portaobjetos para revisarla al microscopio.
b) Técnica convencional de McMaster: Se utilizó una solución saturada de NaCl con
500 g de azúcar (d= 1,30 g/ml). Se tomaron aproximadamente 4g de heces en un vaso de
compota, se adicionó 20 ml de la solución mencionada anteriormente, se mezcló y se filtró con
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 22
una gaza. Con una pipeta se introdujo una sub-muestra en la cámara de conteo de McMaster, que
posteriormente se observó en el microscopio.
c) Examen directo con Lugol parasitológico: con un palillo se tomó un poco de
heces, en una lámina portaobjetos se mezclaron con una gota de Lugol y se retiraron fibras y
fragmentos gruesos. Se colocó un cubreobjetos y se observó al microscopio.
d) Examen directo con solución salina: se realizó el mismo proceso anterior pero con
algunas gotas de solución salina al 0,87%.
e) Técnica de Ziehl-Neelsen modificado: Se extendió una pequeña muestra de heces
con un palillo en una lámina portaobjetos y se fijó durante unos minutos con el mechero. Luego
se adicionaron gotas de fucsina y se esperó 5 minutos. Se lavó con agua del grifo y se
adicionaron unas gotas de alcohol acido. Se lavó nuevamente y se adicionaron unas gotas de azul
de metileno. Se esperó un minuto para realizar la ultima lavada y llevar finalmente al
microscopio (López y Peña, 2020).
Se consideró positiva la prueba ante la presencia de al menos un quiste de B. coli en la
muestra.
3.6 Análisis Estadístico
Los resultados obtenidos se analizaron mediante la prueba de Chi cuadrado para
determinar diferencias estadísticas entre los valores de frecuencia arrojados por las pruebas. Se
utilizó el índice Kappa (k) para determinar la concordancia entre las técnicas de diagnóstico
parasitológico. El índice kappa se interpretó de la siguiente manera: <0, acuerdo deficiente; 0-
0,20, leve acuerdo; 0,21 a 0,40, acuerdo justo; 0,41-0,60, acuerdo moderado; 0,61-0,80, acuerdo
sustancial; y 0,81-1,0, concordancia casi perfecta (Landis y Koch 1977). El nivel de significancia
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 23
para los análisis fue del 5%. Los cálculos se realizaron con el programa SPSS versión 21 (SPSS,
2012).
3.7 Consideraciones Éticas y Bioéticas
De acuerdo con los principios establecidos en la norma nacional, en el Capítulo VI de la
Ley 84 De 1989 “Por la cual se adopta el Estatuto Nacional de Protección de los Animales y se
crean unas contravenciones y se regula lo referente a su procedimiento y competencia” y según
el título V de la Resolución 8430 de octubre 4 de 1993 “Por la cual se establecen las normas
científicas, técnicas y administrativas para la investigación en salud”, esta investigación se
consideró como investigación de Riesgo Mínimo y en cumplimiento con los aspectos
mencionados en los artículos 87, 88, 89, 92 y 93 de la presente resolución, este estudio se
desarrolló conforme a los siguientes criterios:
a) Este proyecto se llevó a cabo según normas aprobadas por el Comité de Ética de
la Universidad de Santander.
b) Aun cuando la manipulación y procesos con los animales (por parte del grupo de
investigadores) reviste riesgo mínimo, se siguieron todas las Normas de Bioseguridad
establecidas para estos procedimientos, lo mismo que el descarte de residuos biológicos y
químicos que se generaron.
c) En el análisis de laboratorio se siguieron las normas de bioseguridad de
laboratorio de medicina veterinaria.
d) Solamente se utilizaron el mínimo número de animales requerido para obtener
resultados científicamente válidos.
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 24
e) Los investigadores y demás personal trataron a los animales como seres sensibles
y consideraron como un imperativo ético el cuidado y uso apropiado. Evitaron que se les causara
innecesariamente dolor, sufrimiento, angustia o daño duradero.
f) No se realizaron procedimientos quirúrgicos o dolorosos en animales no
anestesiados, paralizados por agentes químicos.
g) Para este proyecto se tomaron 10 gramos de muestra fecal de cada uno de los
cerdos de los criaderos visitados.
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 25
4. Resultados
Entre las técnicas coprológicas evaluadas, el examen directo con Lugol mostró la mayor
recuperación de quistes de B. coli con 52.7%, seguido del examen directo con solución salina al
0.87% con un 37.6% de muestras positivas. La técnica de centrifugación – flotación con
azúcar/sal logró recuperar quistes en el 29.7% de las muestras mientras que las técnicas de
McMaster y Ziehl-Neelsen arrojaron un bajo porcentaje de captación de quistes. Adicionalmente,
se detectó una diferencia estadísticamente significativa en la capacidad de recuperación de
quistes entre las técnicas (tabla 1).
Tabla 1
Recuperación de Quistes de Balantidium coli Mediante las 5 Técnicas Parasitológicas
Empleadas (N = 279).
Técnica Positivos Negativos % p-value
Solución de Lugol 147 132 52,7
0.000
Solución salina 0,87% 105 174 37,6
Centrifugación/flotación 83 196 29,7
McMaster 53 226 19
Ziehl-Neelsen 1 278 0,35
Nota: Estadísticamente significativo (p<0.05).
Como se muestra en la tabla 2, en cuanto a la concordancia de las técnicas, se reportó un
coeficiente kappa estadísticamente significativo que muestra un acuerdo moderado entre los
exámenes directos realizados con lugol y solución salina al 0,87% (k=0.41). Entre la técnica de
McMaster y el examen directo con solución salina, y la técnica de centrifugación – flotación con
azúcar/sal y el examen directo con solución salina se observó un kappa estadísticamente
significativo que indicó un acuerdo justo (k=0.35 y k=0.28 respectivamente). Las demás
comparaciones mostraron coeficientes kappa muy bajos que indican acuerdo deficiente, y que
adicionalmente no evidenciaron significancia estadística.
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 26
Tabla 2
Concordancia de los Resultados Obtenidos Mediante las Técnicas Aplicadas al Diagnóstico de
Quistes de Balantidium coli (N=279).
Técnica k p-value
Lugol x BS 0.41 0.000
MM x BS 0.35 0.005
CF x BS 0.28 0.000
MM x CF 0.03 0.500
BS x ZN -0.1 0.340
Lugol x ZN -0.02 0.500
CF x ZN -0.02 0.580
MM x ZN -0.03 0.490
Lugol x CF -0.05 0.900
Lugol x MM -0.005 0.230
Nota: k = índice de concordancia kappa/ CF = Centrifugación/Flotación; MM = McMaster; ZN= Ziehl-Neelsen; BS
= solución salina / Estadísticamente significativo (p<0.05).
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 27
5. Discusión
Las técnicas directas mostraron una mayor capacidad para recuperar quistes de B. coli.
Esto es importante teniendo en cuenta que las técnicas de examen directo de heces suelen ser
útiles por la facilidad para llevar a cabo el procedimiento y la rapidez para obtener los resultados;
sin embargo, cargas parasitarias bajas pueden limitar su uso y por eso suelen combinarse con
otras técnicas para aumentar su eficiencia. La falta de estandarización en la preparación y
montaje de la prueba, errores de lectura y condiciones biológicas del parasito, como su estadio y
la excreción intermitente, pueden generar diferencias en los resultados reportados para una
misma prueba (Polanco et al., 2015).
Entre las dos técnicas directas, la de Lugol captó mayor número de muestras infectadas.
Esto coincide con Vélez, quien reporta que el Lugol se usa específicamente para evidenciar
quistes porque los tiñe bien de un color amarillento, mientras que la solución salina es indicada
para detectar trofozoitos gracias a que permite conservar sus movimientos. Sin embargo, también
se utiliza la solución salina porque el quiste conserva su morfología normal, pero se observa
transparente con un citoplasma ligeramente granuloso, lo cual podría hacer que no se visualice
con la misma facilidad que con la técnica de Lugol (Vélez, 1995).
Después de los métodos directos, la técnica de centrifugación-flotación con azúcar/sal fue
la que logró mejor capacidad de recuperación de quistes. Esto contradice el estudio de Barbosa et
al., en el que las técnicas de flotación (de Faust y Sheather modificada) tan solo lograron captar
5,1% y 0,7% de muestras positivas, respectivamente (Barbosa, et al., 2016). Las técnicas de
flotación se basan en lograr la concentración de los quistes por flotación en un líquido de mayor
densidad que ellos, mientras que los detritos van al fondo; para su montaje se pueden usar
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 28
diferentes soluciones y, es posible que sea en esta elección donde se explique la diferencia en la
recuperación de quistes. Por ejemplo, se reporta que el sulfato de zinc utilizado en la técnica de
Faust puede hacer que los quistes regresen al fondo, se retraigan o se deformen (Vélez, 1995).
También, es determinante verificar la densidad de la solución, ya que puede ocurrir que se
retrase la flotación de los quistes o que nunca ocurra, además, se debe cuidar el tiempo de reposo
para permitir la flotación, sin que los detritos también lo hagan, o los quistes se deformen
(Figueroa-Castillo et al., 2015).
La técnica de McMaster también se fundamenta en el principio de flotación usando
solución salina saturada; y en el presente estudio fue una de las técnicas de menor desempeño.
Esta técnica depende de la producción diaria de quistes, la cual está influenciada por factores
fisiológicos del hospedero, medicamentos, alimentación, volumen diario de heces, distribución
de huevos en las heces, entre otras (Figueroa-Castillo et al., 2015).
La técnica de Zielh-Neelsen solo detectó una prueba positiva. Esta coloración es usada
especialmente para diagnostico de infecciones producidas por Criptosporidium y se realiza sobre
un extendido de heces previamente concentrado (Muñoz et al., 2014) que permite ver los quistes
de color rojo sobre fondo azul. Es posible que este sea el motivo por el cual la tinción tuvo un
mal desempeño, ya que en el presente estudio se realizó directamente sobre el extendido de heces
sin implementar alguna técnica de flotación o sedimentación previa.
Se garantizó que los cerdos a los que se le tomó la muestra no tuvieran diarrea ya que el
enfoque del estudio era comparar las técnicas en cuanto a recuperación de quistes más no de
trofozoitos. Esto era determinante para el estudio, ya que se ha reportado que los quistes de B.
coli se observan con mayor frecuencia en cerdos sin diarrea, posiblemente porque no hay
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 29
dilución de la carga parasitaria causada por el exceso de agua de las heces diarreicas (Schubnell,
2016).
Por otro lado, se encuentran estudios que utilizan diferentes técnicas coprológicas para
determinar el diagnóstico de B. coli (Symeonidou et al., 2020; Schubnell, 2016; da Silva
Barbosa, 2016), sin embargo, el interés no es evaluar la concordancia de las pruebas, sino
utilizarlas sinérgicamente para detectar la mayor cantidad de muestras infectadas.
Adicionalmente, se reportan múltiples metodologías y protocolos de montaje de las pruebas, que
hacen difícil realizar la comparación de los resultados observados en el presente estudio con
otras investigaciones.
La determinación de infección por B. coli solo se realizó en forma cualitativa teniendo en
cuenta que, si se detectaba al menos un quiste, se consideraba prueba positiva. Esto permitió
utilizar el coeficiente kappa para evaluar la concordancia de las técnicas debido a que es la
prueba ideal cuando se cuenta con variables dicotómicas (prueba positiva o negativa) (Cohen,
1960).
La mayor concordancia se observó entre las pruebas directas, aunque fue moderada. Esto
podría explicarse porque estas técnicas permiten solo examinar una pequeña parte de las heces y
es posible que los quistes no se encuentren distribuidos uniformemente en toda la muestra, por lo
tanto, podría haber diferencias en la recuperación de los quistes. También, estas pruebas
dificultan la identificación de quistes porque es inevitable que permanezca cierta cantidad de
detritos que los oculten (Figueroa-Castillo et al., 2015). Podría ser por estas razones por las
cuales se reporta que, en la práctica, se puede realizar el montaje de una misma lámina de un
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 30
frotis con Lugol y al lado uno con solución salina (Vélez, 1995), y coincide con los resultados
del presente estudio que muestran que las dos técnicas pueden potenciar el diagnóstico de B. coli.
La prueba de McMaster y el examen directo con solución salina al 0,87% obtuvieron un
acuerdo justo, al igual que la prueba de centrifugación-flotación en azúcar/sal y el examen
directo con solución salina al 0,87%. Esto refuerza la teoría de que combinar un examen directo
con algún método de concentración puede aumentar la capacidad de detección de las técnicas
(Polanco, 2015).
La concordancia entre los métodos restantes fue deficiente y no significativa, lo cual
contrasta con el estudio de Barbosa et al., quienes encontraron algún nivel de concordancia entre
todas las combinaciones de las cinco técnicas usadas en su estudio. Sin embargo, hay que tener
en cuenta que ellos usaron el examen directo, dos pruebas de centrifugación-flotación, una
prueba de centrifugación-sedimentación y una de sedimentación espontánea (Barbosa, et al.,
2016). El presente estudio no evaluó ninguna prueba de sedimentación, además, incluyó la
tinción de Ziehl-Neelsen la cual no arrojó resultados favorables.
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 31
6. Conclusiones
Las técnicas coprológicas que mostraron mayor eficiencia para recuperar quistes de B.
coli fueron las directas, siendo la solución de Lugol la que permitió mayor captación del
diagnóstico frente a la solución salina al 0,87%. Las técnicas basadas en centrifugación-
flotación, incluida la técnica de McMaster tuvieron un poder limitado para captar los quistes,
mientras que la tinción de Zielh-Neelsen no fue efectiva para realizar el diagnóstico.
La concordancia más alta se encontró entre las técnicas directas con Lugol y solución
salina 0,87%, lo que demuestra que realizar ambas técnicas puede mejorar la detección del
parásito. La prueba de McMaster y el examen directo con solución salina al 0,87% y la prueba de
centrifugación-flotación en azúcar/sal y el examen directo con solución salina al 0,87%
mostraron una concordancia baja pero significativa. Las demás comparaciones entre las técnicas
no mostraron acuerdo significativo.
COMPARACIÓN TÉCNICAS COPROLÓGICAS 32
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