ESTRUCTURA, PROPIEDADES Y FUNCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

TRANSFERENCIA DE MATERIAL GENÉTICO I: CONJUGACIÓN

Composición de los ácidos nucleícos

Purinas

PirimidinasAdenina Guanina

Citosina Uracilo Timina

Polímeros lineales de nucleótidos. Nucleótidos cuyos grupo fosfato unen las posiciones 3’ y 5’ de residuos de azúcar consecutivos.

Los fosfatos de estos polinucleótidos tienen carga negativa a pH fisiológico

DNA

22 to 26 Å ancho

Plásmidos• Fragmentos de ADN extracromosómicos. Los plásmidos o

vectores se replican y transcriben de manera independiente del AND cromosómico.

Algunas características de los plásmidos:

• Confieren resistencia a antibióticos.• Confieren resistencia a metales.

pBR322

• Transformación

• Transducción

• Conjugación

Mecanismos de transferencia horizontal de material genético:

Cambio heredable de una célula u organismo conseguido por DNA exógeno.Sólo algunas bacterias pueden ser transformadas, éstas reciben el nombre de competentes.

• El virus bacteriófago se comporta como un vector intermediario entre dos bacterias.

Fusión temporal de dos organismos unicelulares para el intercambio sexual de material genético

Factor F • Elemento en plásmido que le confiere la capacidad de

ser transferido de una bacteria que lo posee a una bacteria que carece de este factor por conjugación. Este factor es portado en el episoma* F

• * Episoma: elemento genético en bacteria que se puede replicar libre en el citoplasma o puede ser insertado y replicado en el cromosoma bacteriano. Un ejemplo de episoma es el plásmido

Tipos de plásmido de acuerdo al factor F

• Plásmidos conjugativos contienen “tra-genes”, los cuales ejecutan complejos procesos de conjugación, como la transferencia de plásmidos a otra bacteria.

• Plásmidos “movilizables” sólo pueden transferirse en presencia de un plásmido conjugativo.

Plasmido F

- Bacterias F+ : si el factor F se encuentra libre en el citoplasma.

- Bacterias Hfr : si el factor F se encuentra integrado en el cromosoma bacteriano.

-Bacterias F-: carecen del factor F (células receptoras)

CONJUGACIÓN BACTERIANA

Apareamiento entre las bacterias: F+ y F-

Células Hfr (high frequency recombination)Apareamiento entre las bacterias: Hfr y F-

Procedimiento experimentalE. coli JM1452StrR (Receptora) + E. coli W3110/F´KmTn3 en LB (Donadora)Tubo con 1 mL LB, 0.5 mL de JM y 0.2 mL de W3Incubación a 37°C por 1 hora sin agitación.Caja petri LB con 2% estreptomicina

E. coli JM1452Str E. coli W3110/F´KmTn3

Mezcla

Sembrado por estría

Incubación por 24 horas a 37 °C, refrigerar a 4 °CParchar 50 colonias aisladas en LB con 1) Estreptomicina y 2) KanamicinaIncubar 24 h a 37 °CObservar y analizar resultadosReportar % de colonias transconjugantes

Sembrado por estría

Actividades para la siguiente semana

Actividad Fecha

1. Protocolo experimental. Conjugación.

A) Realizar conjugación (lleva máximo 1 h y media) y se deja incubando (24 h).Sembrar por estría

Martes 1 de Octubre

2. Protocolo experimental. Conjugación continuación.

B) Parchar 50 colonias de las cepas aisladas en el paso B e incubar 24 h.

Miércoles 2 de Octubre

3. Actividad: Sacar cajas, Observar crecimiento y determinar el porcentaje de colonias transconjugantes

Jueves 3 de Octubre