Contribución al estudio del extracto de regaliz yde los ácidos glicirrícico y glicirretínico

por

Daniel Sanroma y Beovide

PRESENTADO EN LA SESIÓN DEL 8 DE NOVIEMBRE DE 1933 POR ELACADÉMICO D. O. FERNÁNDEZ

El orden en que se hace la exposición de este trabajo es el siguiente:(1) Procedencia y composición química de la raíz de regaliz.—Su

extracto y aplicaciones.(2) Glicirrina o ácido glicirrícico.—Propiedades y otras especies en

que se encuentra.—Glicirrizato amónico comercial.(3) Métodos de obtención de la glicirricina.(4) Trabajos anteriores:a) Análisis cuantitativo de los cuerpos integrantes de la raíz de re-

galiz y de su extracto.b) Constitución de los ácidos glicirrícicos y glicirretínico.(5) Resumen de nuestro trabajo.

( i ) PROCEDENCIA Y COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA RAÍZDE REGALIZ.—SU EXTRACTO.—APLICACIONES

De largo tiempo se viene empleando en Farmacia la raíz de regalizo de palo dulce (Glycyi'ríza Glabra L) como edulcorante y pectoral. Estaespecie botánica de la familia de las Leguminosas comprende dos varie-dades diferenciadas por Regel y Herder: la var. a typica y la var. ß

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glandulifera (regaliz de España u Oficinal y regaliz de Rusia, respectiva-mente), siendo la primera muy corriente en nuestro suelo y en especialen Aragón, Castilla y Alicante, y viviendo la .segunda, desde Hungríahasta la Siberia, en Persia, Afghanistan, etc.

Esta raíz, cuando está entera, se presenta en trozos de longitud va-riable, a veces hasta un. metro, del grueso de un dedo o algo más, flexi-bles, con la superficie asurcada longitudinalmente y con verrugas o cica-trices de las raicillas de trecho en trecho.

Consta de una corteza gruesa y de una parte leñosa central, siendo lacorteza parda por fuera y de color amarillo, lo mismo que el leño, por laparte interna. En el comercio se presenta mondada y seca en pedazos deunos diez centímetros de longitud (i ).

En la composición química de esta especie, tanto en una como enotra variedad, intervienen: almidón, azúcar, esparraguina, ácido màlico,tanino, una resina acre y como principio particular la glicirricina o ácidoglicirrícico, que se encuentra solubilizada en forma de su sal calcica ypotásica (2).

El extracto del comercio, se prepara por extracción de esta raíz conagua caliente y concentración consiguiente a baja presión hasta .sequedad.Es una masa negra, rompiéndose con fractura brillante, y casi comple-tamente soluble en agua caliente. Su sabor es dulce al principio, dejandoal final un sabor amargo especial que es debido a la resina que es arras-trada por la ebullición (i) .

A algunos extractos les añaden glucosa comercial con objeto de au-mentar su poder edulcorante.

Debido a sus propiedades edulcorantes se emplean grandes cantidadesde este extracto en la fabricacion.de bebidas refrescantes no alcohólicasy en la del tabaco de mascar.

Forma también parte de innumerables preparados medicinales, talescomo ciertos tónicos en los que va asociado a los extractos de genciana ode quina, a la quinina, etc.; algunas pastillas en las que al mismo tiem-po que sirve como escipiente para la formación de la masa actúa porsus propiedades adulcorantes y emolientes.

El polvo de este material .se emplea también en la formación de ma-sas pilulares y en la elaboración de ciertos polvos compuestos, entre loscuales se encuentran los de Tully, en los que va asociado al sulfato demorfina, alcanfor -j carbonato calcico (4).

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(2) GLICIRRICINA O ACIDO GLICIRRICICO.—PROPIEDADESY OTRAS ESPECIES EN QUE SE ENCUENTRA.—GLICIRRIZA-

TO AMÓNICO COMERCIAL

El sabor dulce se lo comunica al extracto la glicirricina o ácido gli-cirrícico, llamado también azúcar de regaliz o de palo dulce, que se en-cuentra, como anteriormente hemos dicho, solubilizado en forma de susal calcica y potásica; y de la disolución acuosa puede ser precipitadomediante la adición de un ácido mineral, en forma de una masa resi-nosa (4).

Este principio es considerado por Gubier (i) como un alimento res-piratorio y un condimento azucarado, y no se altera por la influenciade los fermentos existentes en las primeras vías de los febricitantes nipor la de los esporos del Oidium Albicans, tan frecuentes en las enfer-medades graves y prolongadas, y con su empleo puede evitarse a los en-fermos la inapetencia, la dispepsia y la insuficiencia de su reparación or-gánica.

Se encuentra también, según varios autores (2), en la raíz del Poly-podium vulgares, en la del P. pennatifidum, en la parte herbácea delMyrrhys odorata, en la raíz del Periandra 'mediaterranea, en la cortezade monesia (Chrysophilum glycyphlaeum), etc. Aún está en duda si lasarcocolina de la sareocola, zumo desecado de la Panaea sarcocolla, asícomo la sustancia dulce de otras diferentes plantas tales como el Ono-nis spinosa y el Astragalus glycypheus, es idéntica a la glicirricina.

Una sustancia que también se emplea mucho como edulcorante conel nombre de glicina, es el glicirrizato amónico del comercio. Este glici-rrizato amónico se obtiene por extracción, mediante agua fría, de laraíz de regaliz cortada en pequeños trozos, se hierven los líquidos ex-tractivos para separar los albuminóides que se hayan extraído, pues és-tos se coagularán por el calor; se filtra entonces, y el filtrado se con-centra y se le adiciona ácido sulfúrico en pequeña cantidad. Como an-teriormente dijimos, el ácido glicirrícico está solubilizado en el extrac-to en forma de sus sales calcica y potásica, y por lo tanto se encontra-rá en los líquidos extractivos. Como es natural, al añadir el ácido sul-fúrico éste desalojará el ácido glicirrícico de sus sales, y siendo insolu-ble en agua en estado libre, quedará precipitado. Se recoge dicho preci-pitado y se lava con agua hasta que las aguas del lavado no den conel cloruro bárico la reacción del ácido sulfúrico. Una vez lavado, se di-suelve en amoníaco diluido y la solución se filtra y evapora a sequedad

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a calor suave. El residuo triturado se empapa con amoníaco alcohólicoy se deseca a la temperatura más baja posible (2).

Fijándose en el método de preparación de este glicirrizato amónico,fácilmente se comprenderá que este cuerpo no puede ser una sustanciapura, pues en la precipitación con ácido sulfúrico no solamente precipi-tará el ácido glicirrícico sino otras varias gomas y resinas que a esegrado de acidez se insolubilizan en el agua.

Entre las sustancias que el ácido sulfúrico precipita y que siguenacompañando al ácido glicirrícico primero y al glicirrizato amónico lue-go, se encuentran: el amargo de glicirricina C30 H57 N G^ sustanciaamorfa, nitrogenada y de sabor amargo intenso; y la resina de glicirri-cina, amorfa también, pardo-oscura, que se disuelve en alcohol y en loslíquidos acuosos de reacción alcalina con color amarillo intenso, y que,fundida con potasa, produce diferentes ácidos grasos volátiles y ácidoparaoxibenzoico (2).

Este glicirrizato amónico o glicina se presenta en masas pardo-ama-rillentas, fácilmente soluble en agua y en alcohol, especialmente si seañade una gota de amoníaco, dando líquidos de intenso sabor dulce.

Í3) MÉTODOS DE OBTENCIÓN DE LA GLICIRRICINA

La glicirricina o ácido glicirrícico tiene constitución de éter y estáformado por la condensación de dos moléculas de ácido giucurónico, áci-do monocarboxílico derivado de la glucosa por oxidación del grupo al-cohólico extremo, con una molécula de ácido glicirretínico, de cuya cons-titución trataremos más adelante. Este ácido glicirretínico es monocar-boxílico y tiene además dos funciones oxhidrílicas, que son las que pier-de al unirse con las dos moléculas de ácido giucurónico para formar elácido glicirrícico.

De lo expuesto se deduce que el ácido glicirrícico tiene tres gruposcarboxílicos: dos correspondientes a las dos moléculas de ácido giucuró-nico y uno al ácido glicirretínico; por tanto, podrá originar esteres ysales metálicas. En esta segunda propiedad se basan los procedimien-tos de obtención de este cuerpo.

Citaremos dos métodos que hemos comparado, haciendo al final al-guna pequeña consideración acerca de los motivos por los cuales creemosmás práctico el adoptado por nosotros. Estos dos métodos los descom-pondremos en partes para su más fácil comparación.

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El método empleado primeramente (2), se puede dividir en cuatropasos :

(i) Purificación del extracto separando gran cantidad de almidón ygoma.

Para esto se disuelve el extracto de regaliz del comercio en agua yse añade alcohol de forma que la mezcla hidroalcohólica adquiera unariqueza de 75 % de alcohol. De esta forma precipitan gran cantidad degomas y almidón que son solubles en agua e insolubles en mezcla hidro-akohólica de estas proporciones.

(2) Precipitación del ácido glicirrícico impuro.

Una vez filtrada y concentrada a sequedad la solución hidroalco-hólica, el extracto purificado se disuelve en poca agua caliente y se aña-de el 3 % del peso de la solución, de ácido sulfúrico. Este ácido sulfú-rico desalojará al ácido glicirrícico de sus sales, y siendo insoluble enestado libre, precipitará acompañado de las resinas e impurezas que se-ñalamos al tratar del glicirrizato amónico comercial.

(3) Sal potásica impura.

Una vez recogido y seco el ácido glicirrícico impuro, se disuelve enalcohol de 95° y se añade solución de potasa alcohólica hasta que todoel ácido glicirrícico haya precipitado al estado de su sal potásica, que esinsoluble en alcohol de esta graduación.

(4) Sal de plomo y ácido Ubre.

La sal potásica recogida se disuelve en alcohol diluído y se precipi-ta su sal de plomo por medio del acetato de plomo. Esta sal de plomosuspendida en el mismo alcohol diluido se somete a la acción de una co-rriente de ácido sulfhídrico que dejará en libertad el ácido glicirrícico,el cual se disolverá en el alcohol, formando al mismo tiempo sulfuro de

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plomo, que por ser insoluble precipitará. La disolución filtrada se eva-pora a sequedad, y el residuo se cristaliza de ácido acético.

El método seguido después, empleado por P. Karrer, IW. Karrer yJ. Chao (5) y adoptado también por nosotros para la obtención de lasal potásica, comienza por precipitar el ácido glicirrícico impuro direc-tamente del extracto, después obtiene la sal potásica por el mismo pro-cedimiento anterior, y esta sal potásica recogida la cristaliza de ácidoacético.

Como se ve fácilmente de la comparación de ambos métodos, en elsegundo desaparecen la purificación del extracto y la obtención de la salde plomo con el consiguiente paso áe ácido sulfhídrico para dejar el áci-do en libertad. Esto, además del ahorro considerable de tiempo, suponeun menor consumo de alcohol, que por el primer método se gastaba engrandes cantidades para la precipitación de gomas y féculas.

(4) TRABAJOS ANTERIORES

Los trabajos efectuados sobre la raíz de regaliz o su extracto, y enespecial sobre la glicirricina y la glicirretina, se pueden dividir en dosgrupos:

(a) Trabajos de análisis cuantitativa de los principios integrantes, y(b) Trabajos acerca de la constitución de los ácidos glicirrícico y glici-rretínico.

(a) Trabajos de análisis cuantitativa de los principios integrantes de lamiz de regaliz y de su extracto.

Los principales trabajos en este sentido son debidos a Ella Eriksson(6) en 1911 y a Houseman (7) en 1912. Ambos dan un procedimientode análisis de la raíz de regaliz y de su extracto, que si bien no se dife-rencian en la valoración de la glucosa y de la sacarosa, son de tipo com-pletamente distinto en la de la glicirricina.

Los análisis cuantitativos de azúcares se reducen a privar de resinas,gomas y otras impurezas, los líquidos extractivos de la raíz o la solucióndel extracto y titular los azúcares por los procedimientos corrientes dereducción (propiedad del grupo aldehídico) antes y después de practicarla inversión. En el primer caso la cantidad de óxido de cobre precipita-da será la correspondiente a la glucosa libre, y en el segundo, será la.

- Sói -

correspondiente a la glucosa y a la sacarosa, calculándose por diferenciala correspondiente a la sacarosa.

En cuanto a la valoración de la glicirricina hay una diferencia no-table entre los dos métodos: Ella Eriksson se basa en las propiedades re-ductoras del ácido glucurónico debidas a su grupo aldehídico, y en cam-bio Houseman emplea para su método el carácter ácido de la glicirricina,obteniendo su sal amónica, siendo una determinación volumétrica la pri-mera y gravimetrica la segunda.

Para efectuar la determinación de la glicirricina por el método dereducción, es necesario primero privar de gomas y almidón a los líqui-dos extractivos, para lo cual se les añade alcohol de 90° a partes igua-les. Una vez hecho esto, hay que hidrolizar el ácido glicirrícico, pueslas propiedades reductoras son debidas, como dijimos anteriormente, algrupo aidehídico del ácido glucurónico, que lo pierde al condensarse conel ácido glicirretínico para formar la glicirricina. El ácido glucurónicolibre, se titula con líquido de Fehling, y de la cantidad de óxido cupro-so precipitado se calcula el ácido glucurónico y por la cantidad de éste,la correspondiente de ácido glicirrícico.

El método gravimetrico consiste en lo siguiente: Se disuelve el ex-tracto en agua, y las gomas se precipitan por adición de alcohol los ex-tractos alcohólicos se concentran a sequedad y el residuo se disuelve enpoca agua, precipitándose el ácido glicirrícico de su solución acuosa, pormedio de ácido sulfúrico.

Este ácido glicirrícico se lava con agua saturada de éter hasta queésta .salga sin color, disolviéndolo luego en alcohol de 95° y evaporándo-se la solución alcohólica en cápsula tarada con unas gotas de amoníacopara formar la sal amónica neutra. Por la cantidad de extracto emplea-do, el peso molecular del ácido glicirrícico, y sabiendo que éste tiene tresgrupos ácidos, basta una sencilla regla de tres para calcular la riquezaen glicirricina. una vez pesado el residuo de la cápsula.

En el primer método vemos que para hacer la determinación hemosde llevar a cabo primeramente la hidrólisis del ácido glicirrícico. Pre-sentando este ácido gran resistencia a hidrolizar.se, operación que hayque efectuarla en condiciones especiales, nos ha parecido más prácticoy por lo menos tan exacto el procedimiento gravimetrico, que es el queseguimos en la determinación de la glicirricina del extracto de que par-timos para la ejecución de este trabajo.

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(b) Trabajos sobre la constitución de los ácidos glicirrícico y glicirre-tínico.

Los principales trabajos en este sentido han .sido llevados a cabo porTschirch y Gauchman (3) en 1910, por Houseman (8) en 1916 y porA. Karrer, W. Karrer y J. Chao (5) en 1921.

Los primeros, por hidrólisis del ácido glicirrícico, obtienen el ácidoglicirretínico. Consideran la glicirricina como una especie de glucósidoformado por la condensación de una molécula ácido glicirretínico condos moléculas de ácido glucurónico en esta forma:

Clf" HO; CH—(CHOH),-U1-CHOH—COOH/ • • • • • - • •

C91H4aO3—COOH\

X CH Ha CH—(CHOH).,—CH—CHOH—-COOH:!._.„.:. i¡ O - .

O—CH—(CHOH).,—CH—CHOH —COOH/

- C31H430,—COOH

' O— CH - (CHOH),,— CH—GHOH—COOHI

O - i

Al tratar de investigar sobre la constitución del ácido glicirretínico,opinan que se trata de un ácido cíclico, no saturado, desprovisto de gru-pos metoxilos y etoxilos. Efectúan una destilación con gris de cinc y unaoxidación con permanganato potásico, obteniendo naftalina en el primer

S'y\ _ I^VCOOHcaso "y ácido itálico ;¡ en el segundo.

V;I-COOH

De estas dos operaciones sacan en consecuencia que el ácido glici-

— i°¿

rretínico es un ácido dioxiderivado de la naftalina, atribuyéndole la fór-mula siguiente:

C21H3903--COOH

OH!

OH

corrasi::ndiendo por tanto al ácido glicirrícico esta otra:

( ,,HM03—COOH

O 1

O—CH—(CHOH),—CH-CHOH COOH

O—CH—(CHOH)2—CH—CHOH—COOH

O

Houseman publica un trabajo (8) en 1916 en el que asegura encon-trar 1,09 % de nitrógeno en el ácido glicirrícico, cantidad que por tresrecristalizaciones sucesivas de ácido acético, asciende a 1,89 %.

Más tarde, en 1921, P. Karrer, ¡W. Karrer y J. Chao vuelven a tra-bajar sobre este asunto, y al tratar de hacer el análisis cuantitativo delnitrógeno, se encuentran con un gas que resulta ser metano. Obtienen elderivado diacetilado del ácido glicirretínico y los ésteres metílico y etí-lico, observando que éstos son insolubles en la lejia de sosa, y por re-ducción con ácido yodhídrico y fósforo rojo, llegan al ácido desoxiglici-rretínico.

Rebaten la teoría de Tschirch y Gauchman diciendo que no se tratade un dioxiderivado de la naftalina, pues las grupos oxhidrilos carecende carácter fenólico, porque en caso de tenerlo formarían con la sosalos fenatos correspondientes disolviéndose en ella. Creen que se trata deun cuerpo de estructura muy complicada de la serie alifática o hidro-aromática muy difícil de caracterizar por medio de oxidaciones parcia-les, como por todos los demás métodos empleados para esclarecer cons-tituciones.

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Hacen una destilación con gris de cinc, y una calefacción en el vacíoobteniendo unas sustancias oleaginosas muy pobres en oxígeno, siendonegativos todos sus ensayos para investigar el núcleo fundamental.

Dicen que la naftalina que a veces se pudiera producir en estas ca-lefacciones proviene de la condensación de productos pirogenados.

Por todos estos motivos, estos autores opinan que la fórmula ideadapor Tschirch y Gauchman no tiene razón de ser.

(5) RESUMEN DE NUESTRO TRABAJO

Observando la pequeña cantidad de glicirricina que contienen losextractos de regaliz que se emplean como edulcorantes (7 % como mí-nimum) (2) , creímos que pudiera ser interesante el adoptar un métodosencillo de obtención de un producto que tuviera un porcentaje elevadode este principio, y pensamos en el glicirrizato potásico, porque apartede ser uno de los principios integrantes del extracto es un cuerpo quecristaliza bien.

Hemos comenzado haciendo la valoración en glicirricina del extractoempleado con objeto de tener un dato de referencia sobre el cual basarlos cálculos del rendimiento. El procedimiento de valoración seguido esel de Percy y Houseman (9) basado, como anteriormente dijimos, en laobtención de la sal amónica del ácido glicirrícico, calculando por el pesode ésta y la cantidad de extracto empleada en la valoración, la riquezade dicho extracto en glicirricina.

Una vez hecha la valoración del extracto hicimos unos ensayos decomparación entre los dos métodos de obtención de glicirricina descri-tos anteriormente. En el primer método tropezamos con el inconvenien-te de un gran consumo de alcohol para precipitar las gomas, aparte delconsiderable tiempo invertido en la operación. Con el método de P. Ka-rrer, \V. Karrer y J. Chao (5) desaparecen estos inconvenientes, pues dela solución acuosa del extracto se precipita directamente sin purificaciónprevia el ácido glicirrícico impuro, suprimiendo además al final la for-mación del glicirrizato de plomo con el consiguiente paso de ácido suli-hidrico para libertar el ácido glicirrícico. Este ha sido el método adop-tado por nosotros, al cual le hemos añadido algún pequeño detalle en-caminado a la más sencilla ejecución del procedimiento.

El glicirrizato potásico obtenido por este procedimiento, ha resultadode un 99,91 % de pureza ,valorado según el procedimiento de Percy yHouseman seguido anteriormente en la valoración del extracto, habien-

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do conseguido aislar en forma de su sal potásica el 79, 27 % del ácidoglicirrícico existente en el extracto.

Una vez obtenido el glicirrizato potásico, efectuamos su hidrólisis si-guiendo el mismo procedimiento que siguieron Tschirch y Gauchman (3 )con el ácido glicirrícico puro; obtenido el ácido glicirretínico, encontra-mos grandes dificultades para conseguirlo cristalizado de los disolventesempleados por otros autores, tales como ácido acético, mezclas de ácidoacético y éter de petróleo, etc., hasta que después de varias pruebas locristalizamos de su disolución de teracloruro de carbono. Obtenido yaeste cuerpo hemos intentado aclarar en parte las discrepancias existen-tes en cuanto a su núcleo fundamental y si entra o no el nitrógeno for-mando parte de las moléculas de estos dos ácidos. Para ello hemos efec-tuado primeramente una valoración alcalimétrica del ácido glicirretínicoy haciendo los cálculos con un equivalente igual al peso molecular deeste ácido, el error en el resultado no llega a un 0,01 %, lo cual pruebaque la sosa y el ácido no se han combinado más que por el grupo car-boxílico sin haber intervenido para nada los oxhidrilos, como hubieraocurrido en el caso de que éstos tuvieran carácter fenólico.

Para tratar de aislar el núcleo fundamental en el caso de que éstefuese la naftalina, hemos repetido la destilación con gris de cinc segui-da por Tschirch y Gauchman (3), obteniendo unos cuerpos aceitosos eulos cuales los intentos para caracterizar naftalina (15) por medio de supicrato han resultado negativos. Hemos hecho un segundo ensayo orien-tado en este mismo sentido, consistente en la calefacción con selenio,procedimiento seguido por O. Diels y Anna Rarsten (i6) con la ergos-terina, el àcido còlico y ciertas resinas, y después por L. Ruzicka yG. Thoman (13) con la colesterina y los ácidos' biliares. El fundamentode esta operación consiste en la dehidrogenación y consiguiente rupturade cadenas llevada a cabo por el selenio, transformándose éste en hidró-geno seleniado. Una vez efectuada la dehidrogenación hemos hecho unarrastre con vapor de agua de la masa resultante sin que en las aguasde destilación hayamos conseguido identificar la naftalina.

En lo que se refiere al nitrógeno, hemos hecho las clásicas reaccionesde Lassaigne y de la cal sodada (14), tanto en el glicirrizato potásicocomo en el ácido glicirretínico, con resultados también negativos encuanto a su existencia en ambos casos.

Con las aguas de la hidrólisis en las que se encuentra el ácido glu-curónico caracterizado por sus reacciones (17), hemos intentado dos en-sayos para tratar de aislarlo, consistentes: el primero (12) en la forma-ción del glucuronato de cinc, añadiendo a las aguas solución de acetato

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de cinc, y disolución de la sal resultante en ácido sulfúrico diluído paradejar en libertad! el ácido glucurónico que no conseguimos cristalizarloni aun concentrando los líquidos a consistencia de jarabe. El segundoensayo consistió (io) en la precipitación del ácido sulfúrico existenteen las aguas de hidrólisis por medio del carbonato bárico y el agua debarita; se separa el sulfato bárico y el filtrado se concentra en el vacíoa consistencia de jarabe y se le añade alcohol. De esta forma precipitaun producto higroscópico que se ennegrece al aire, formado por ácidoglucurónico, puesto que reduce el Fehling y da todas sus reacciones (17),y sales inorgánicas; producto que no conseguimos cristalizar.

Basándonos en la propiedad de los grupos = C O de condensarse conla fenilhidracina y sus derivados para dar cuerpos que a veces cristali-zan muy bien, hemos intentado obtener el producto derivado del ácidoglucurónico por condensación con la 2 .4 dinitro íenilhidracina (n).La reacción -e efectuaría en esta forma:

i ~°--|COOH-CHOH-CH- (CHOH)2—CHOH + H2N—NH

^Y-NO,

N0„i! . _ _ _

COOH—(CHOH) 4 —CH=N—NH—/Y-NO.,

Obtuvimos un cuerpo rojo pardo que funde a 168° y que con la lejíade sosa da un color violeta intenso. No pudiendo obtenerlo cristalizado,no nos pareció oportuno practicar su análisis.

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PARTE EXPERIMENTAL

(i) Valoración del extracto de regaliz.(2 ) Preparación del glicirrizato potásico.

(a) Acido glicirrícico impuro.(b) Sal potásica impura.(c) .furmcación de la sal potásica.(d) Valoración de la sal potásica.(e) Cálculo del rendimiento.(f) Investigación del nitrógeno.

(3) Hidrólisis del ácido glicirrícico.(4) Valoración del ácido glicirretínico.(5) Investigación del núcleo fundamental del ácido glicirretínico.

^a) Destilación con gris de cinc.(b) Dehidrogenación con selenio.

(6) Acido glúcurónico.(a) Reacciones.(b) Operaciones bêchas para aislarlo.(c) Glucurón 2 .4 dinitro íenil hidrazona.

(7 ) Conclusiones.(&) Bibliografía.

(i) VALORACIÓN DEL EXTRACTO DE REGALIZ

Como dijimos anteriormente, el método gravimetrico de Percy yHouseman (6) está íundado en la obtención del glicirrizato amónico, re-lacionando luego el peso de esta sal con el del extracto empleado.

El procedimiento es el siguiente:Se ponen en un tubo de centrífuga 0,5 gramos de extracto con 4 c. c.

de agua y se deja estar por la noche; se deshace con un agitador, seañaden 4 c. c. de alcohol de 75° y 14 c. c. de 95'°, y se deja estar du-rante tres horas. La parte no disuelta serán gomas y almidón. Al cabode estas tres horas se centrifuga y se lava el residuo dos veces con 19 c. c.de alcohol de 75'° cada vez. Los extractos alcohólicos .se concentran enbaño maria y se secan en el vacío. Se toma el residuo con 2,5 c. c. deagua caliente, se filtra y se lava el ñlttro con 5 c. c. de agua calientetambién; se enfría el filtrado a 15°, se le añade el 3 % de su peso deácido sulfúrico concentrado y se centrifuga, dejándolo estar por la no-

che en la nevera. (Este ácido sulfúrico habrá dejado en libertad el áci-do glicirrícico.) El centrifugado se lava con 15 c. c. de agua fría satu-rada de éter y se vuelve a centrifugar repitiéndose esta operación unavez más, disolviéndolo luego en 30 c. c. de alcohol de 95°. Para recupe-rar la pequeña cantidad de glicirricina que ha pasado coloide a las aguas,se les añade unas gotas de amoníaco, se concentran a la mitad y se vuel-ven a tratar como se ha dicho anteriormente. Los extractos alcohólicosunidos se evaporan a sequedad con pocas gotas de amoníaco y se dejanen el desecador hasta que dos pesadas consecutivas no varíen.

Hacemos dos ensayos sucesivos.

Cálculos.

(') (2)Pesos de las cápsulas con los residuos 19,8320 20,9822

— — sin — 19,7860 20,9360

Peso de los residuos 0,0460 0.0462

0,0460 X "oo(1) = o-r = 9,20 %

° 9i20 + 9i24

0,0462 X I0° „,(2) = —^- P = 9,24 "/„

°0

9,22 °/0 de glicirrato amónico.

Peso molecular de! ácido glicirrícico 894— — glicirrizato amónico 145

894

x

x = J^X 9,2£_ _ s^72 ̂ de ácido glicin.icico.945

Riqueza determinada en glicirrizato amónico 9,22 °/0

— — ácido glicirrícico 8,72 "Y,,

(2) PREPARACIÓN DEL GLICIRRIZATO POTÁSICO

(a) Acido glicirrícico impuro.

Disolvemos i.ooo gramos de extracto de regaliz en io litros de aguacaliente y sin aguardar a que se enfríe se le añade el 3 % de su pesode ácido sulfúrico concentrado (330 gramos) ; cuando el líquido está a

— Sog —

unos 60° se revuelve con una espátula de madera y alrededor de ésta seconglomera una masa negra gomosa que está formada por el ácido glici-rrícico más gomas y féculas que han precipitado por el ácido sulfúrico.Estas masas, una vez frías y secas, se vuelven duras y fácilmente pul-verizables. (Peso, 150 gramos.) La precipitación por ácido sulfúrico sedebe hacer en caliente, pues en caso contrario el precipitado toma unaspecto pulverulento y es muy dificultoso de recoger.

(b) Sal potásica impura.

50 gramos de ácido glicirrícico impuro reducido a polvo, se calienta3. reflujo durante una hora con 800 c. e. de alcohol de 95° que disuelveel ácido glicirrícico y deja sin disolver las gomas y otras impurezas;se filtra la solución alcohólica una vez fría y se le añade disolución tam-bién alcohólica de potasa al io % por pequeñas porciones de forma quequede un pequeño defecto de potasa, pues si está en exceso, la sal re-sultante resulta sumamente higroscópica.

El precipitado se recoge en una micha a poca presión y se deja secaren desecador de vacío sobre ácido sulfúrico. (Peso de la sal, 35 gramos.)

(c) Purificación de la sal potásica.

Los 35 gramos de sal potásica impura y seca, se disuelven en la me-nor cantidad posible de ácido acético glacial caliente, y al cabo de dosdías cristaliza completamente, formándose una masa cristalina que se es-curre a la trompa en lo posible y se termina de secar sobre plato poroso.P. F. hasta los 300" no funde. (Peso, 26 gr.).

Para cristalizar de ácido acético la sal potásica, ha de estar seca,pues si está humedecida con alcohol tarda más tiempo en cristalizar ono cristaliza.

(d) Valoración de la sal potásica.

La valoramos por el mismo procedimiento de Percy y Houseman queliemos empleado en la valoración del extracto, efectuando también dos«nsayos con 0,5 gramos de glicirrizato potásico.

— 570 —

Cálculo.

(O (2)

Pesos de las cápsulas con los residuos 20,2544 21,404^— — sin — 19,7860 20,0360

Pesos de los residuos 0,4684 0,4685

(l) = _?!46800oo_ = g3)680/o

' -^8J--A=9í,69o/0degK,NHí

= 93,70 % }0,4085 X I0°

(2) = Oi5 = Va,/- -/O ;

Peso molecular del glicirrizato amónico 945— — ácido glicirrícico 894— — glicirrizato potásico 1008

945 894

93,68—2i2S_cLlL-2_ = 88,64 o/, de ácido glicirrícico.

945

894 394 j ,008X88,64 .. . ,. . . . . rj x = =99,91 °/0 de gUcu-nzato de l\.88,64 lOoS \ 8<>4

Riqueza determinada en glicirrizato amónico 93,69 °/0

— — ácido glicirrícico... 88,64 °/o— — glicirrizato petásico 99,9' °/t>

(e) Cálculo del rendimiento.

Acido glicirrícico impuro obtenido de 1000 grs. de extracto 150 grs.

Glicirrizato potásico puro obtenido de 50 grs. de ácido glicirricico impuro. 26 grs.

5o 26 1 26 X iS°> x = — =78 grs. de sal de K °/no de extracto.

150 x t\ 5°

Equivalente en ácido glicirrícico,

88,64 X 7«IOO 88,64

x = _^Xíl±^_-í— = 69,13 de ácido glicirricico °/no-x

Acido glicirricico existente en el extracto 87,20 grs. °/„(,— — obtenido 69,13 grs. °/on

Pérdida en 1000 gramos de extracto 18,07 Krs- °/o»

Kendimiento práctico en ácido glicirrícico.

— ' * -- = 79^27 °/0 del contenido en el extracto.

— 57' —

(f) Investigaciones del nitrógeno.

Hicimos los dos ensayos siguientes (14): i.° Tomamos en un tubode ensayo una pequeña cantidad de glicirrizato potásico y se mezcla condiez veces su volumen de cal sodada. Se calienta. En caso de que hubie-se nitrógeno, se desprendería amoníaco que se caracterizaría por su olory porque aproximando a la boca del tubo una varilla humedecida conácido clorhídrico se formarían humos blancos de cloruro amónico. 2.°En un tubo de ensayo pequeño se toma una pequeña cantidad de glici-rrizato potásico y un trocito de sodio: se calienta al rojo y se introduceel tubo en un vaso con agua fría. El tubo se rompe, y en caso de habernitrógeno queda éste disuelto en el agua al estado de cianuro sódico ycianuro potásico que se identifican transformándolos en ferrocianuros al-calinos con unos cristales de sulfato ferroso, y los ferrocianuros alcali-nos en ferrocianuro férrico (azul de Prusia) mediante unas gotas de clo-ruro férrico en medio ácido.

Las dos reacciones han dado resultado negativo respecto a la pre-sencia de nitrógeno.

(3) HIDRÓLISIS DEL GLICIRRIZATO POTÁSICO

Los procedimientos corrientes de hidrólisis de glucósidos (ebullicióncon pequeñas cantidades de ácidos o álcalis, etc.), no van bien en estecaso particular, pues siendo un producto resistente a la hidrólisis, éstaha de llevarse a cabo a temperatura y presión más elevada, empleandoun autoclave para este objeto.

Seguimos el mismo procedimiento de Tschrich y Gauchman (3) conla diferencia que empleamos la sal potásica y no el ácido puro.

8 gramos de glicirrizato potásico se colocan con 800 c. c. de ácido sul-fúrico al i % en un matraz cónico de i.ooo c. c. cuya boca se obstruyecon algodón; se calienta en autoclave a presión durante dos horas, laprimera a 130° y la segunda a 140°. Al cabo de las dos horas queda con-cluida la hidrólisis y se separa un cuerpo blanco grisáceo que se recogepor filtración a la trompa y se lava con agua hasta que las de lavado noden precipitado alguno con el cloruro de bario. (Peso, 4 gramos.)

Cuerpo insoluble en agua, poco soluble en éter y tetradoruro de car-bono en frío y más en caliente, y francamente soluble en alcohol, cloro-formo, ácido acético y benceno.

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El Cuerpo así obtenido se extrae por alcohol (70 c. c.) calentándoloa reflujo durante media hora, y la solución alcohólica después de filtra-da y fría se vierte sobre diez veces su volumen de agua ligeramente aci-dulada con unas gotas de ácido acético. El precipitado se recoge y des-pués de seco se recristaliza de tetracloruro de carbono. P. F. 245° (Peso,2,5 gramos.)

(4) VALORACIÓN DEL ACIDO GLICIRRETINICO

Hemos dicho que el ácido glicirretínico es un ácido monocarboxilicocon dos funciones oxhidrilicas. Si una cantidad pesada de este cuerpo ladisolvemos en una determinada cantidad de alcohol y esta solución lavaloramos con sosa empleando la fenolftaleina como indicador, puedenocurrir dos cosas: que la sosa no se combine con el ácido más que por elgrupo carboxilo, o que se combine también por los oxhidrilos. En el pri-mer caso el equivalente del ácido glicirretínico sería igual al peso mole-cular, y podríamos asegurar que los grupos — O H no tienen carácterfenólico. En cambio, en el segundo caso el equivalente sería menor queel peso molecular y los — OH tendrían tal carácter.

Si una vez efectuada la valoración empleamos, al hacer los cálculos,un equivalente igual al peso molecular, y el resultado es satisfactorio,no habrá duda respecto a la ausencia total de grupos fenólicos, pues encaso de que existiesen, contribuirían éstos a un mayor consumo de sosaen la valoración, que se traduciría luego en un resultado absurdo.

Práctica de la operación.

Se disuelven 0,25 gramos de ácido glicirrícico cristalizado de tetraclo-ruro de carbono, en alcohol, completando la solución hasta 50 c. c.

Tomamos 20 c. c. de la solución, y con fenolftaleina como indicador,la valoramos con sosa N/ioo de F = 0,99.

Hacemos dos valoraciones sucesivas:

Cantidades de sosa N/ioo F = o.oo empleadas ' „ I 18.62 q c. c.y * ' 18,6 c. c. , ' J

Cantidad de sosa N/ioo correspondiente: 18,625 X 0,99 = 18,438 c. c.Equivalente empleado de ácido glicirretínico : 0,00542 igual a la

i/ioo.ooo parte del peso molecular.X = 18,438 X 0,00542 = 0,09999 grs. de principio puro en 20 c. c.

de solución equivalentes a 0,1 gramo de ácido glicirretínico.Pureza del ácido glicirretínico 99,99 %

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(S) INVESTIGACIÓN DEL NUCLEO FUNDAMENTAL DELACIDO GLICIRRETINICO

(a) Destilación con gris de cinc.

Se mezcla i gramo de ácido glicirretínico con i gramo de gris decinc y se coloca la mezcla en un tubo de ensayo cerrado con tapón ytubo largo de desprendimiento. Se calienta a fuego directo hasta que enel tubo de desprendimiento se condense un líquido aceitoso, que lo di-solvemos en poco alcohol. A esta solución alcohólica se le añade solu-ción también alcohólica de ácido picrico, pero no precipita el picrato denaftalina como debía de hacerlo en caso de encontrarse naftalina en eldestilado (15).

(b) Dehidrogenación con selenio.

Se mezclan en un mortero 2 gramos de ácido glicirretínico con 5gramos de selenio en polvo y lo calentamos en un matraz con refrige-rante de aire a la temperatura de 300" por espacio de hora y media. Lamasa negra resultante se destila en corriente de vapor de agua, que encaso de haberse formado naftalina la arrastraría. El destilado es com-pletamente transparente, y añadiendo solución acuosa de ácido picricono se forma ni el más ligero enturbiamiento, lo que prueba que en laoperación no se ha producido naftalina.

INVESTIGACIÓN DEL NITRÓGENO EN EL ACIDO GLICIRRE-TÍNICO

Repetimos con el ácido glicirretínico los mismos ensayos que hemosefectuado con el glicirrizato potásico, con resultado igualmente negativopara la presencia de nitrógeno en este cuerpo.

(6) ACIDO GLUCURONICO

(a) Reacciones del ácido glucuróníco.

En las aguas madres de la hidrólisis del ácido glicirrícico queda e]ácido glucurónico, que lo hemos caracterizado por las reacciones siguien-tes (17):

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Con disolución clorhídrica de orcina, hirviendo durante algún tiem-po, da una coloración verde, acelerándose y reforzándose la reacción conunas gotas de cloruro férrico.

Con naftoresorcina y ácido clorhídrico, coloración violeta soluble enéter.

(b) Operaciones seguidas para aislarlo.

Con las aguas de hidrólisis del ácido glicirrícico hacemos dos ensa-yos para tratar de aislar el ácido glucurónico.

(1) A una porción de estas aguas de hidrólisis añadimos soluciónde acetato de cinc (12) hasta que deje de precipitar. Recogido el preci-pitado de glucuronato de cinc, lo disolvemos en la menor cantidad po-sible de ácido sulfúrico 3,5 normal en caliente sin conseguir que crista-lice por enfriamiento, ni aun después de haberlo concentrado en el vacíohasta consistencia de jarabe.

(2) Otra porción de estas aguas calentadas a 6o" (io) las neutra-lizamos con carbonato bárico y agua de barita hasta que no azulee elpapel rojo Congo. Se filtra, y el filtrado separado de sulfato bárico seconcentra en el vacío hasta consistencia de jarabe; se le añade tres ve-ces su peso de alcohol, con lo que precipita un producto higroscópico quese ennegrece al aire. E *.e cuerpo reduce el licor de Fehling y da todaslas reacciones del ácid glucurónico, pero no conseguimos cristalizarlo.

(c) Glucuron 2 .4 dínitro jenil hidrazona.

i.ooo c. c. de aguas de hidrólisis neutralizadas con carbonato de ba-rio y agua de barita y filtradas, se concentran en el vacío hasta el vo-lumen de 50 c. c., y le añadimos solución en ácido sulfúrico al io % de2 .4 dinitro fenil hidracina (n), precipita un cuerpo rojo que, recogidoy lavado con gran cantidad de agua fría y una vez seco, funde a 168".(Peso, 1,2 gramos.)

Intentamos cristalizarlo en distintos disolventes (alcohol, ácido ací-tico) sin conseguirlo.

Las disoluciones alcohólicas de este cuerpo dan un color violeta in-tenso con lejía concentrada de sosa.

No nos ha parecido oportuno practicar el análisis elemental de estasustancia en la imposibilidad de obtenerla cristalizada.

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CONCLUSIONES

i.B De la valoración del extracto de regaliz que empleamos en laejecución de este trabajo, resulta que contiene un 8,72 % de ácido gli-cirrícico.

2.a El glicirrizato potásico obtenido alcanza una pureza del 99,91por TOO.

3.a Hemos aislado en forma de su .sal potásica el 79,27 % del áci-do glicirrícico existente en el extracto de regaliz.

4.a El glicirrizato potásico así como el ácido glicirretínico carecenen absoluto de nitrógeno.

5.a El ácido glicirrícico ha sido cristalizado por primera vez de sudisolución de tetradoruro de carbono.

6.a De la valoración del ácido glicirretínico llevada a cabo, se de-duce un equivalente químico igual al peso molecular y la ausencia decarácter fenólico de sus grupos oxhidrilos.

7." En las diferencias existentes entre Tschirch y Gauchman poruna parte, y P. Karrer, W. Karrer y J. Chao por otra, nos indinamosa poner la razón de parte de los segundos, pues aparte de lo dicho en lacondusión anterior, en los ensayos efectuados para investigar el núcleofundamental del ácido glicirretínico, en ninguno de ellos hemos podidoidentificar la naftalina.

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BIBLIOGRAFIA

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