D R V JT JUJP O B O E D I B SB D UF SJ[B UJP O P G F Y USF N P …webbook.me.go.kr/DLi-File/099/011/5622325.pdf · 2017-02-07 · pÉp I #JPMPH gi uat EsÙ nÊg Fuî ¦o vjá Bjá

특수 환경 미생물자원 발굴 특성 분석

2차년도

생물자원연구부 미생물자원과

Acquisition and characterization of

extremophile (Ⅱ)

Microorganism Resources Division

Biological Resources Research Department

2016

참여 연구진

소속 담당자 비고

국립생물자원관 강명석 총괄연구책임자

김민경 참여연구원

김경미 참여연구원

이기은 참여연구원

서울여자대학교 김명겸 참여연구원

Sathiyaraj Srinivasan 참여연구원

Gayathri Subramani 참여연구원

주은선 참여연구원

김은빛 참여연구원

전선화 참여연구원

김경상 참여연구원

김보민 참여연구원

김주영 참여연구원

맹수현 참여연구원

윤주희 참여연구원

소속 담당자 비고

서울여자대학교 오하경 참여연구원

윤혜경 참여연구원

문미선 참여연구원

한민지 참여연구원

강수민 참여연구원

제주대학교 박수제 참여연구원

고현우 참여연구원

황한빛 참여연구원

충북대학교 이성근 참여연구원

곽주한 참여연구원

고현호 참여연구원

경희대학교 배진우 참여연구원

김필수 참여연구원

KAIST 윤석환 참여연구원

김지선 참여연구원

김대현 참여연구원

이주희 참여연구원

- i -

요 약 문

1. 제 목

특수 환경 미생물자원 발굴 특성 분석 2차년도

2. 목 적

가. 특수 환경(방사선 노출, 기성, 호염, 호산성 환경, 이탄층, 멸종 기

동물 장내 등)에 서식하는 미생물자원 신종/미기록 후보종 발굴

나. 생물자원 활용을 한 배양체 확보

다. 생리학 특성 유 체 분석을 통한 특수 환경 미생물자원의 특성 분석

3. 연구내용 및 방법

가. 연구내용

1) 강릉 제주 해변 토양(방 사선 내성), 군산 강 하구(호 염성), 폐

산성폐수(호 산성), 서산 갯벌( 기성), 암산 용늪 (이탄층 ), 담비

사 향 노 루 장 내 (멸 종 기 동 물 장 내 )등 특수 환경 지역 시료 채집

조사를 통한 배양체 확보

2) 바코 드 유 자 분석, 형태 학 , 분자생물학 특성 분석을 통 한 신종 /

미기 록 후 보종 발굴을 한 종 동정

3) 생리학 특성 분석 유 체 정보 분석

나. 연구방법

1) 시료 채집 배양체 확보

가) 특수 환경별 목 에 맞는 환경에서 시료 채집

나) 특수 환경별 조건에 따른 농화배양을 통한 배양체 확보

2) DNA 바코드 유 자 분석을 통한 신종/미기록종 후보종 발굴

가) 16S rDNA 염기서열 분석을 통한 분자 생물학 분류 동정 계통도 작성

나) 분석 결과에 따라 신종/미기록종 후보종 발굴

3) 배양체 장기 보존 DB 입력

가) 배양체를 온냉동보존, 액체질소보존, 동결건조 등의 방법으로

장기 보존

- ii -

나) 배양체의 채집 정보, 동정 정보, 배양 정보 등을 국가 생물자원 리

시스템 DB에 입력

4) 생리학 특성 정보 유 정보 확보

가) 미생물 특성분석 시스템(Biolog)를 이용하여 생리학 특성 정보 확보

나) NGS 기법을 이용한 유 체 분석(Whole genome sequencing)

5) 분류 동정을 한 형태학 , 분자생물학 특성 분석

가) 자 미경 사진 등 화상자료 확보 배양 시 군집 형성 특성 등의

형태학 분석

나) G+C mol% 분석, Quinone 분석, 지방산 분석, 자 수용체/ 달체

분석 등의 분자생물학 분석

4. 연구결과

가. 방사선 내성, 호염성, 호산성, 기성, 이탄층 환경에서 신종/미기록 후보종 40종 발굴

연번 특수 환경 채집지

발굴(후보종)

계신종

미기록

종

1 방사선 내성 강릉 제주 해변 토양 4 16 20

2 호염성 군산항 갯벌 2 0 2

3 호산성제주도 선흘 섭이굴

구 달성군 폐 산0 8 8

4 기성 서산 갯벌 2 0 2

5 이탄층암산 용늪

오 산 소황병산늪 2 1 3

6멸종 기

동물 장내

담비

사향노루1 4 5

합계 11 29 40

1) 방 사 선 내 성, 호 염 성, 호 산 성, 이 탄 층 미생물자원 배 양 체 3 8 주 는

온 냉 동 동 결 건 조 보 존 , 기 성 배 양 체 2주 는 온 냉 동

액 체 질 소 보 존

나. Biolog를 이용하여 배양체 40주의 생리학 특성(pH, 염도, 항생제 내성,

- iii -

탄소원 이용 등)을 분석한 결과 호염성 균주 1주는 10%의 염도에서 생장

다. 방사선 내성이 높은 신종 후보종 2종, 호염성 신종 후보 2종, 이탄층 신종

후보 1종의 유 체 분석을 통해 Complete Genome Sequence 확보

1) Gene annotation 분석 결과, 분석된 2종의 방사선 내성 균주에는 DNA의

손상을 구조 으로 복구할 수 있는 UvrABC 유 자가 공통으로 존재

2) 호염성 균주에는 삼투압과 련된 유 자 ProXWV와 OpuBCBA가 공통

으로 존재하며, HB3 균주에는 Benzoate 분해 유 자가, HB8 균주에는

Benzene 분해 유 자가 존재

3) 분석된 1종의 이탄층 균주에는 양분이 결핍된 환경에서의 생존과 련된

PhoR, PhoB 유 자가 존재

5. 연구성과 및 활용계획

가. 신종/미기록종은 학술 검증 후 국가 생물종 목록에 추가

나. 확보한 원핵생물 배양체는 생물자원 배양센터를 통해 산학연에 분양

다. 생리학 특성 유 체 분석 정보 등을 유용 효소 등의 고부가가치

물질 생산에 활용

1) 방사선 내성 미생물이 갖는 DNA 복구 능력을 가진 물질이나 항염증

효능 물질을 이용한 의약품 개발

2) 호 염성 미생물은 방향 족 탄소 화합물의 분해 능력 을 갖 는 경우 가 많 아

유 류 오 염 정 화에 활용 가능

3) 호산성 미생물은 이온화된 속을 고정하는 능력을 갖는 경우가 많아

속 오염정화에 활용 가능

- iv -

목 차

요약문 ····················································································································· i

목차 ······················································································································ iv

표 목차 ··············································································································· vii

그림 목차 ·········································································································· viii

Abstract ············································································································· xii

Ⅰ. 서론 ················································································································· 1

1. 방사선 노출 ································································································· 1

2. 호염·호산성 ·································································································· 2

3. 기성 ··········································································································· 3

4. 이탄층 ··········································································································· 3

5. 멸종 기 동물 장내 미생물 ····································································· 4

Ⅱ. 연구방법 ········································································································· 6

1. 특수 환경 미생물자원 발굴 ····································································· 6

가. 시료 채취 지 ······················································································· 6

나. 시료 채취 방법 ······················································································· 6

다. 배양체 확보 방법 ··················································································· 8

라. DNA 바코드 유 자 분석 ·································································· 11

마. 신종 후보종과 미기록 후보종의 분석 ············································· 11

바. 배양체 장기 보존 DB입력 ···························································· 12

2. 생리학 특성 정보 확보 ······································································· 12

3. 유 정보 확보 ························································································· 13

4. 분류 동정을 한 형태학 , 분자생물학 특성 분석 ····················· 13

가. G+C mol% 분석 ··················································································· 13

나. Quinone 분석 ························································································· 14

다. Polar lipid 분석 ····················································································· 14

라. Fatty acid 분석 ···················································································· 15

마. DAP isomer 분석 ················································································· 15

바. DNA-DNA hybridization ··································································· 15

- v -

사. TEM(Transmission Electron Microscope) 촬 ·························· 16

아. SEM(Scanning Electron Microscope) 촬 ··································· 17

자. API test ·································································································· 17

Ⅲ. 연구결과 ······································································································· 18

1. 특수 환경 미생물자원 신종/미기록종 후보종 발굴 ·························· 18

가. 신종/미기록종 후보종의 분류군 ························································ 21

나. 방사선 내성 미생물 ············································································· 25

다. 호염성 미생물 ······················································································· 44

라. 호산성 미생물 ······················································································· 46

마. 기성 미생물 ······················································································· 52

바. 이탄층 미생물 ······················································································· 54

사. 멸종 기 동물 장내 미생물 ······························································· 57

2. 생리학 특성 정보 확보 ······································································· 62

가. 방사선 내성 미생물자원 신종 후보종 분류군 ······························· 62

나. 방사선 내성 미생물자원 미기록종 후보종 분류군 ······················· 64

다. 호염성 내성 미생물자원 신종 후보종 분류군 ······························· 83

라. 호산성 미생물 자원 미기록종 후보종 분류군 ······························· 85

마. 기성 미생물자원 신종 후보종 분류군 ········································· 91

바. 이탄층 미생물 자원 신종 미기록종 분류군 ······················· 92

사. 멸종 기 동물 장내 미생물 자원 신종/미기록종 후보종

분류군 ······································································································ 94

3. 유 정보 확보 ······················································································· 101

가. Halomonas sp. Hb3(호염성 신종 후보종) ···································· 101

나. Marinobacter sp. Hb8(호염성 신종 후보종) ······························· 103

다. Nibribacter sp. DG15C(방사선 내성 신종 후보종) ··················· 105

라. Rufibacter sp. DG31D(방사선 내성 신종 후보종) ······················ 107

마. Janthinobacterium sp. R-2-5(이탄층 신종 후보종) ·················· 109

Ⅳ. 고찰 ············································································································· 111

1. 방사선 내성 미생물의 특징 ································································· 111

2. 호산성 호염성 미생물의 특징 ······················································· 111

3. 기성 미생물의 특징 ··········································································· 113

- vi -

4. 이탄층 미생물의 특징 ··········································································· 113

5. 멸종 기 동물 장내 미생물의 특징 ··················································· 114

Ⅴ. 참고문헌 ····································································································· 115

부록 1. 특수 환경 미생물자원의 BIOLOG 분석 결과 ··························· 119

부록 2. 방사선 내성 미생물의 방사선 내성 분석 결과 ························· 159

- vii -

표 목 차

표 1. 시료 채집 지 정보 ··············································································· 6

표 2. 특수 환경 미생물자원 발굴 황 ······················································· 18

표 3. 특수 환경별 발굴종 목록 ····································································· 19

표 4. Halomonas sp. Hb3 유 체의 일반 특성 ······································ 101

표 5. Halomonas sp. Hb3 유 체의 COG 기반의 기능 범주 ···················· 101

표 6. Marinobacter sp. Hb8 유 체의 일반 특성 ································· 103

표 7. Marinobacter sp. Hb8 유 체의 COG 기반의 기능 범주 ··············· 103

표 8. Nibribacter sp. DG15C 유 체의 일반 특성 ································ 105

표 9. Nibribacter sp. DG15C 유 체의 COG 기반의 기능 범주 ··················· 105

표 10. Rufibacter sp. DG31D 유 체의 일반 특성 ································ 107

표 11. Rufibacter sp. DG31D 유 체의 COG 기반의 기능 범주 ················· 107

표 12. Janthinobacterium sp. R-2-5 유 체의 일반 특성 ··················· 109

표 13. Janthinobacterium sp. R-2-5 유 체의 COG 기반의 기능 범주········ 109

- viii -

그 림 목 차

그림 1. 시료 채취 채집 장소 ····································································· 7

그림 2. 바이오로그 미생물 특성 정보 분석 시스템 ····································· 12

그림 3. 방사선 내성 Bacillus 속 발굴종 15J4M-1의 계통수 ·················· 26

그림 4. 방사선 내성 Brevibacterium 속 발굴종 15J13-8의 계통수 ····· 27

그림 5. 방사선 내성 Carnobacterium 속 발굴종 16MFM10의 계통수 28

그림 6. 방사선 내성 Deinococcus 속 발굴종 KSM4-11의 계통수 ······· 29

그림 7. 방사선 내성 Exiguobacterium 속 발굴종의 계통수 ··················· 30

그림 8. 방사선 내성 Flavisolibacter 속 발굴종의 계통수 ······················ 31

그림 9. 방사선 내성 Larkinella 속 발굴종 SR1-5-4의 계통수 ············ 32

그림 10. 방사선 내성 Methylobacterium 속 발굴종의 계통수 ············· 33

그림 11. 방사선 내성 Microvirga 속 발굴종의 계통수 ·························· 34

그림 12. 방사선 내성 Nibribacter 속 발굴종의 계통수 ·························· 35

그림 13. 방사선 내성 Pantoea 속 발굴종의 계통수 ································ 36

그림 14. 방사선 내성 Pseudokineococcus 속 발굴종의 계통수 ··········· 37

그림 15. 방사선 내성 Psychrobacter 속 발굴종의 계통수 ····················· 38

그림 16. 방사선 내성 Rufibacter 속 발굴종의 계통수 ····························· 39

그림 17. 방사선 내성 Spirosoma 속 발굴종의 계통수 ··························· 40

그림 18. Rufibacter sp. DG31DT의 감마선 내성 실험 결과 ··················· 41

그림 19. Nibribacter sp. DG15CT의 감마선 내성 실험 결과 ················ 42

그림 20. Carnobacterium iners 16MFM10의 자외선 내성 실험 결과 ·············· 43

그림 21. Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C의 자외선 내성 실험 결과 ·· 43

그림 22. 호염성 Marinobacter 속 발굴종의 계통수 ································ 45

그림 23. 호염성 Halomonas 속 발굴종의 계통수 ···································· 46

그림 24. 호산성 발굴종 4-8, 4-10, 4-19의 계통수 ·································· 48

그림 25. 호산성 발굴종 B8의 계통수 ·························································· 49

그림 26. 호산성 발굴종 4-15, 4-20, AS15, AD38 계통수 ····················· 51

그림 27. 기성 발굴종 ANS1의 계통수 ····················································· 53

그림 28 기성 발굴종 ANS2의 계통수 ······················································ 53

그림 29. 이탄층 발굴종 R-2-5의 계통수 ····················································· 54

- ix -

그림 30. 이탄층 발굴종 JS821의 계통수 ···················································· 55

그림 31. 이탄층 발굴종 R-1-5의 계통수 ··················································· 56

그림 32. 멸종 기 동물 장내 발굴종 D7T301의 계통수 ························· 57

그림 33. 멸종 기 동물 장내 발굴종 M3R204의 계통수 ························ 58

그림 34. 멸종 기 동물 장내 발굴종 M3R205의 계통수 ························ 59

그림 35. 멸종 기 동물 장내 발굴종 M1T305의 계통수 ························ 60

그림 36. 멸종 기 동물 장내 발굴종 M1T307의 계통수 ························ 61

그림 37. 방사선 내성 Deinococcus 속 발굴종 KSM4-11의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 62

그림 38. 방사선 내성 Flavisolibacter 속 발굴종 LCS9T의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 63

그림 39. 방사선 내성 Nibribacter 속 발굴종 DG15CT의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 63

그림 40. 방사선 내성 Rufibacter 속 발굴종 DG31DT의

주사 미경과 배양체 사진 ····························································· 64

그림 41. 방사선 내성 Bacillus 속 발굴종 15J4M-1의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 65

그림 42. 방사선 내성 Brevibacterium 속 발굴종 15J13-8의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 66

그림 43. 방사선 내성 Carnobacterium 속 발굴종 16MFM10의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 67

그림 44. 방사선 내성 Exiguobacterium 속 발굴종 15J1-8의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 68

그림 45. 방사선 내성 Larkinella 속 발굴종 SR1-5-4의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 69

그림 46. 방사선 내성 Methylobacterium 속 발굴종의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 71

그림 47. 방사선 내성 Microvirga 속 발굴종의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 73

그림 48. 방사선 내성 Pantoea 속 발굴종 15J17K의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 75

- x -

그림 49. 방사선 내성 Pseudokineococcus 속 발굴종 15J13-6의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 76

그림 50. 방사선 내성 Psychrobacter속 발굴종의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 81

그림 51. 방사선 내성 Spirosoma 속 발굴종 15J8-11의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 82

그림 52. 호염성 Marinobacter 속 발굴종 Hb8의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 83

그림 53. 호염성 Halomonas 속 발굴종 Hb3의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 84

그림 54. 호산성 Achromobacter 속 발굴종 4-8의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 85

그림 55. 호산성 Aquitalea 속 발굴종 4-10의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 86

그림 56. 호산성 Acinetobacter 속 발굴종 4-15의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 87

그림 57. 호산성 Ideonella 속 발굴종 4-19의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 88

그림 58. 호산성 Pseudomonas 속 발굴종 4-20의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 88

그림 59. 호산성 Serratia 속 발굴종 AS15의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 90

그림 60. 호산성 Luteibacter 속 발굴종 AD38의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 90

그림 61. 호산성 Bradyrhizobium 속 발굴종 B8의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 91

그림 62. 기성 Desulfuromonas 속 Desulfovibrio 속 발굴종의

배양체 사진 ······················································································· 92

그림 63. 이탄층 Janthinobacterium 속 R-2-5의 자 미경과

배양체 사진 ······················································································· 92

그림 64. 이탄층 Methylomonas 속 JS821의 배양체 사진 ······················ 93

- xi -

그림 65. 이탄층 Curvibacter 속의 자 미경과 배양체 사진 ············· 94

그림 66. 멸종 기 동물 장내 Vagococcus 속 M7T301의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 95

그림 67. 멸종 기 동물 장내 Microbacterium 속 M3R204의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 96

그림 68. 멸종 기 동물 장내 Ochrobactrum 속 M3R205의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 97

그림 69. 멸종 기 동물 장내 Lysinibacillus 속 M1T305의

자 미경과 배양체 사진 ····························································· 99

그림 70. 멸종 기 동물 장내 Streptococcus 속 M1T307의

자 미경과 배양체 사진 ··························································· 100

그림 71. Halomonas sp. Hb3의 유 체 지도 ·········································· 102

그림 72. Marinobacter sp. Hb8의 유 체 지도 ····································· 104

그림 73. Nibribacter sp. DG15C의 유 체 지도 ···································· 106

그림 74. Rufibacter sp. DG31D의 유 체 지도 ······································ 108

그림 75. Janthinobacterium sp. R-2-5의 유 체 지도 ························· 110

- xii -

Ab stract

Biogeochemical cycles in extreme environments are largely unknown

due to the difficulty in handling extreme conditions at laboratory despite of

their prime importance. In extreme environments, extremophilic

microorganisms are playing a key role in controlling matter transformation.

The goal of this project is “discovering extremophilic microorganisms in

Korean Peninsula.” After agreement on “Nagoya Protocol,” securing

national biological resources is the most important issue. However, there is

limited report on the isolation of extremophilic microorganisms from South

Korea. Through this project, various extremophilic microorganisms

including acidophiles, halophiles, radiotolerants, microbes in peatland, gut

microbiome of endangered wild animals were isolated. Total 40 species of

extremophilic microorganisms were obtained: 11 novel species candidates;

29 species unreported in Korea. The properties of isolated extremophilic

microorganisms were investigated by physiological and biochemical and

genetic approaches. Complete genome sequence of five strains of novel

species candidates comprised of 2 strains of radiotolerants bacteria, 2

strains of halophiles and 1 strain of bacteria from peatland were obtained.

Thus, the aim of this project has been successfully achieved. Continuous

surveys and isolations of extremophilic microorganisms are required for

contributing to secure biological resources in Korea.

- 1 -

Ⅰ. 서 론

최근 생물다양성의 요성이 커지고 있어 각국에서는 자국의 생물을 찾기

한 연구가 활발하게 이루어지고 있다. 미생물은 지구 체 생물종의 약 60%

를 차지하면서 지구 생태계를 유지하고 지켜주는데 매우 요한 생물이다. 자연

계에 가장 많은 종이 분포할 것이라 추측하지만 가장 은 수만이 발견되었다.

한민국은 2000년 에 들어 매년 약 100여 종의 신종 원핵생물을 발굴하여 발

표하고 있는 연구 수 으로 신종 원핵생물 발굴 분야에서 세계 수 에 있는

국가이다. 이 게 새로운 미생물을 찾기 한 노력으로 일반 지역이나 환경이

아닌 심해, 화산, 남극, 북극과 같은 특수 환경에 한 조사가 선진국을 심으

로 이루어지고 있다. 이러한 특수 환경에 서식하는 미생물은 환경에 응하기

하여 특이한 효소 등을 생산하고 있어 산업 가치가 매우 높다. 특수 환경에

존재하는 미생물을 발굴하기 하여 국립생물자원 에서는 2013년 “환경복원에

활용 가능한 기성 원핵생물 고세균 조사․발굴 연구”, 2014년 “특수 환경

미생물자원 조사․발굴” 연구를 수행하 고, 2015년 “특수 환경 미생물자원 발

굴 특성 분석 I” 연구를 수행하 다(국립생물자원 , 2013, 2014, 2015). 이와

같은 노력으로 국내에서 총 81종의 특수 환경 미생물이 발굴되었다. 본 연구에

서는 지난 3년간의 연구와 연계하여 국내의 특수한 환경인 방사선 노출 환경,

고염도 산성 환경, 기성 환경, 이탄층, 멸종 기 장내에서 미생물을 발굴하

고자 한다.

1. 방 사 선 노 출

국내 원자력 발 규모는 체 발 량의 40% 이상으로 높은 에 지 의존도

를 보이고 한 의학, 생물학, 식품 등 분야에서 방사선기술이 넓게 이용되고 있

어서 올바른 국민 이해가 필요한 시 이다. 더불어. 방사선이 국민건강에 이바

지할 수 있는 기술 개발이 실하다.

방사선 내성 연구는 방사선에 노출된 세포가 방사선에 응하여 살아남고

이 때 형성된 활성물질을 찾아내는 연구이다. 방사선 내성 유 자의 발굴이 가

장 기 가 되고 있으며, 련된 발 물질이 최근에 항염증, 항산화, 미백, 항노화

등 활성을 보일 가능성이 커지면서 심이 증가되고 있다. 신속한 DNA 복구를

통한 노화방지 연구, 방사선 방어제를 이용한 방사선 피폭에 한 정상세포의

손상 완화, 암세포의 방사선 내성 감소를 한 내성 유 자 연구, 방사선 방어제

를 이용한 자외선 차단용 화장품 개발, 방사선 내성 생물체를 통한 오염된 환경

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의 생물학 정화 등의 분야에 응용될 수 있다.

표 인 방사선 내성 세균은 Deinococcus radiodurans이며 Deinococcus

속에는 수십 종의 방사선 내성 세균이 알려져 있다. 최근에 새로이 발견된

Deinococcus 속의 24개 종 에서 한국에서 발견된 종이 3분에 1에 달하며 한

국의 방사선 내성 연구가 세계에서 가장 활발히 이루어지고 있다. 이외에도

Hymenobacter, Spirosoma 등 새로운 속(genus)의 세균들이 방사선에 한 내

성을 가지고 있는 것으로 확인되었고, 이들의 방사선 내성이 Deinococcus 속의

내성과 비슷한 정도이다. 한반도의 토양에서 이들 속의 세균들이 많이 분포하면

상당 수가 새로운 종으로 발표가 되었다. 이들 세균들은 Deinococcus와 다른 분

류군에 속하기 때문에 새로운 방사선 내성 물질을 가지고 있을 가능성이 있고

따라서 새로운 활성물질을 발견하는 연구 재료가 될 수 있어 지속 인 발굴이

필요하다.

2. 호 염 ․ 호 산 성

국내의 고염 환경은 갯벌과 해양퇴 물을 비롯하여, 천일염 환경이 표

으로 알려져 있다. 이에 비하여 산성 환경의 경우, 고염 환경에 비하여 은 편

이다. 일반 인 토양이 산성화되어 있어 산성 환경으로 인식될 수 있으나, 이는

일반 인 토양의 특징 하나이다. 다만 국내에 다수 존재하는 폐 산 폐

미 부근에서 속과 침출수 등으로 인하여 일반 인 토양의 pH보다는 낮은

산성 환경을 찾을 수 있다. 호염성 호산성 미생물은 고염 산성 환경에 서

식하는 것으로 알려져 있는 미생물은 표 인 극한미생물로, 지구의 물질순환

에 큰 기여를 하는 것으로 보고되고 있으며 매우 독특한 사 특징을 지니고

있는 것으로 알려져 있다.

이번 연구에서는 구 달성군에 치한 폐 산 폐 미 토양을 비롯하여,

제주도 곶자왈 토양을 비롯하여, 고염 환경인 제주도 모슬포 해안등지의 해양퇴

물로부터 미생물 자원을 발굴하고자 하 다. 국내 산의 경우, 산업 고도화

환경오염에 한 심이 커져 차 폐쇄되었다. 여러 이유로, 이러한 국내의

특수 환경도 제한 이며, 어려운 근성 때문에 련 미생물의 발굴도 매우 드

물게 이루어지고 있다. 독특한 사 특징을 지닌 특수 환경 미생물들은 산업

과학 으로 그 활용도가 높게 평가되어, 과학 선진국을 심으로 활발히 탐

색 발굴되어 왔으며, 최근 분자생물학의 발 에 기여하고 있다.

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3 . 기 성

생물권내에서 기성 환경은 기를 하고 있는 표층을 제외하고 부분의

환경을 포함한다. 토양 퇴 층 수 cm 아래에서 시작되어 바다 퇴 층에 이르

는 등 범 가 넓고, 보다 다양한 환경이 포함된다. 하지만 기성 환경에서는 일

반 으로 육안으로 찰되는 진핵생물이 생존할 수 없으므로, 알려지지 않은 세

균과 고세균 미생물들이 부분을 차지한다.

미생물은 지구상 다양한 생물권에 존재하는 생물종의 약 60%를 차지하

고 있다고 추정되며, 산소를 자공여체로 하지 않고, 다양한 물리 조건의

기 환경에 존재하면서 다양한 화학 무기물을 자 공여체 혹은 자 수용체로

이용하기 때문에 기성 환경에서도 생존할 수 있는 특성을 가지고 있다. 기

성 미생물은 생물권 내의 호기성 미생물과 짝을 이루어 거 한 지구의 물질순환

고리를 완성하기는 데 기여를 하고 있다. 지 까지 밝 진 기성 미생물의 이

용 자수용체로 이용하는 물질은 산화된 질소, 철, 황, 탄소 이외에 환원 가능

한 형태의 비 속 우라늄 등의 속물질을 포함한다. 따라서 기성 미생물

의 생장 략은 자체가 환경산업에 이용할 수 있게 직결되어 있다. 기성 미생

물 자원은 다양한 환경에서의 활용가능한 생물자원의 범 를 넓히며 기존의 재

활용이 불가능했던 자원의 새로운 활용법 등의 생물산업에 필요한 자원의 탐색

에 큰 기여가 가능하다.

기성 환경에 존재하는 미생물에 한 발굴과 생리 특성에 한 연구는

기 상태의 유지의 어려움 등 배양 기법의 난 으로 인하여 잘 이루어지지 못

하여 왔다. 비교 최근에 차세 염기서열 분석 기법을 동원한 배양-비의존

기술의 개발로 기성에 존재하는 잘 알려지지 않은 미생물의 발굴에 많은 진

이 있었으며, 이를 통해 다양한 생리 특성을 가진 기 미생물의 생장 조

건을 측 개발함으로써 생물산업에 이용 가능한 부가가치가 높은 미생물 자원

의 확보를 용이하게 하고 있다.

4 . 이 탄 층

우리나라는 지형이 가 르기 때문에 주로 하천주변에 습지가 발달한다. 산

지의 높은 지 에 나타나는 습지 일부에 이탄습지가 발달하 다. 그러나 지

형상의 특징으로 인하여 이탄습지의 면 은 매우 소하며 재까지 발견된 고

산 습지의 부분이 이탄습지에 해당하며, 부분 1ha 후의 작은 습지로 나타

났다. 표 인 산지 습지로는 암산용늪, 무제치늪, 화엄늪, 신불산 고산습지

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가 있다(진득환, 2006). 이들은 환경부에서 습지보호지역으로 지정되어 리되고

있으며, 보호 리를 하여 습지 자체보다 더 넓은 면 이 보호지역으로 지정

되어 있다. 국립공원에 존재하는 산지습지로는 지리산에 존재하는 왕등재늪이

있으며, 물이끼와 사 과 식물이 우 하는 형 인 이탄습지의 형태를 보이고

있다. 오 산 습지는 오 산국립공원에 존재하는 질뫼늪, 소황병산늪, 조개동늪

을 총칭한다. 이들은 고산습지로서의 역할을 가지고 있으나 각각 다른 특성을

보인다.

지 까지 이산화탄소 흡수 감과 련 산림생태계를 제외한 여타의 자연생

태계는 상 으로 큰 심을 끌지 못했지만, 최근 습지 생태계가 새로운 온실

기체 감 방안의 일환으로 떠오르고 있다. 습지생태계는 총량 으로 봤을 때

주요한 온실기체인 이산화탄소를 흡수할 수 있는 반면에, 다른 온실기체인

메탄과 아산화질소는 습지생태계를 통해 방출된다고 알려져 있다. 메탄과 아산

화질소의 방출은 습지식물에 의해 흡수, 고정된 이산화탄소가 습지토양생태계에

존재하는 미생물들에 의해 사용되는 과정에서 일어난다.

습지토양에 존재하는 미생물의 많은 경우가 식물에 의해 고정, 유기물화된

탄소를 이용, 서식하면서 이를 다시 무기 이산화탄소로 환, 기 으로 방출

할 수 있다. 다양한 습지형태 북구에 리 분포하고 있는 이탄습지는 세계

토양 탄소량의 3분의 1을 축 하고 있으며, 장기 인 에서 탄소 장고로

기능하고 있다고 여겨지고 있다. 이탄습지는 기본 으로 낮은 pH, 상 으로

낮은 온도, 이탄습지에 서식하는 식물종이 방출하는 유기물의 특징 상 미생물에

의해 재 무기화될 수 있는 경향이 매우 제한된 환경이다. 따라서 이탄습지의 경

우 탄소가 고정되는 양이 재 무기화되는 양보다 많기 때문에 토양 내에 축 , 결

과 으로 탄소의 장고로 기능 할 수 있다고 알려져 있다. 따라서 이탄 습지 토

양 내에서 일어나고 있는 유기물의 분해 기작 이와 련된 미생물의 발굴

특성 분석이 필요하다.

5 . 멸 종 기 동 물 장 내 미생물

재까지 지구 으로 약 8만 2천여 종의 생물종이 우리 인간과 함께 살

고 있는 것으로 알려져 있다. 그러나 근 산업 명 이후 150년이라는 짧은 시

간 동안, 극심한 환경 변화로 인한 기후 변화, 서식지의 괴 등 다양한 요인으

로 인해 이 생물종 30% 이상이 세기 내에 멸종할 험성이 큰 것으로

악하고 있다(IUCN, 2012). 약 2만 여 종에 해당되는 생물종이 이러한 험에 놓

여 있는 것으로 악되고 있으며, 우리나라에서도 환경부가 멸종 기에 처한 야

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생생물을 법으로 지정하여 보호하기 시작한 1989년 이후 지속 으로 찰 보호

되고 있고, 2012년 야생생물 보호 리에 한 법률 제정으로 2016년 재

246종이 국가 지정 멸종 기 생물종으로 지정되어 보호되고 있다.

2000년 후반부터 시작된 장내 미생물 연구를 통해 인간과 같은 동물과 공

생하고 있는 장내 미생물의 역할에 해 많은 부분이 알려졌다. 장내 미생물은

장내 외벽에 자리하고 있으며 외부 병원성 미생물에 한 방어 외에도, 장 표피

세포의 손상 방지, 지방 축 조 , 난분해성 물질의 소화를 통한 양성분 달

등 동물의 사 과정에 요한 역할을 담당하고 있으며, 이 외에도 장 련 질

병, 자폐증, 아토피, 비만 등 다양한 역에서 그 요성이 크게 두되고 있는

상황이다(Turnbaugh et al., 2007, Round & Mazmanian, 2009).

이러한 장내 미생물 군집의 역할에 해서는 다양한 연구 방법을 통해 근할

수 있지만, 군집을 이루고 있는 미생물 개체 하나 하나에 해서는 여 히 분리를

통한 근이 가장 효과 으로 인식되고 있다(Fodor et al., 2012). 멸종 기 동물의

조직을 확보하고, 이를 통해서 그 동물과 함께 살고 있는 장내 미생물과 유 자원

을 확보한다면 해당 동물의 장내 미생물의 다양성을 악할 수 있고, 숙주 동물-

미생물-환경 사이의 상호작용을 규명하여 장내 미생물 군집 조성 변화를 통해 멸

종 기 동물의 건강 보존성을 향상시킬 수 있는 가능성이 있다(Becker et al.,

2014, Waite et al., 2012). 한, 멸종 기 동물이 멸종한 이후에는 장내 미생물과

같은 공생 생물의 확보가 불가능하다. 따라서 원히 회복할 수 없는 자원의 확보

가 매우 시 한 상황이며 이에 한 발굴 사업 연구가 필요하다.

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Ⅱ. 연구방법

1. 특수 환경 미생물자원 발굴

가. 시료 채취 지

방사선 내성 미생물 분리를 해 강릉 제주 해변 토양 시료를 채취하

고 호염성 미생물 분리를 해 서해안의 군산항 주변 갯벌( 라북도 군산시)에

서 토양 침 물 시료를 채취하 다. 호산성 미생물 발굴을 해 폐 폐수

등에서 시료를 채취하 고, 기성 미생물 분리를 해 충청남도 서산군 갯벌

의 침 물 토양 시료를 채취하 다. 이탄층 미생물의 분리를 해 용늪

소황병산늪의 침 물 시료를 채취하 다. 담비는 경기도 포천군 삼육리에서 로

드킬된 시료 으며, 사향노루는 강원도 화천군 화천읍 풍산리에서 렵에 의해

포획된 후 국립생물자원 으로 이송된 시료 다(표 1).

연번 구분 채집 지 치(GPS 정보)

1 방사선 내성 강릉 제주 해변 토양 N 35°51'38.0″, E 127°44'47.0″

2 호염성 군산항 갯벌 N 33°13'53.6" E 126°14'17.3"

3 호산성제주도 선흘 섭이굴

구 달성군 폐 산

N 33°30' 24.8" E 126°43'43.9“

N 35°46'52.5" E 128°40'18.6"

4 기성 서산 갯벌 N 37°11'11.3″, E 128°48'12.6″


오 산 소황병산늪

N 38°12'40.3″, E 128°08'06.3″

N 37°46'07.81″, E 128°40'50.4″

6멸종 기

동물 장내

담비

사향노루

경기도 포천군

강원도 화천군

표 1. 시료 채집 지 정보

나. 시료 채취 방법

토양 퇴 물 시료는 표면으로부터 1 cm 이하에서 주로 채취하며, 늪이나

논 등의 물이 있는 곳은 직경 10 cm, 길이 1 m의 스테인리스 을 사용한다. 스

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테인리스 을 이용하여 천공한 후, 스테인리스 에 흙이 빠져나가지 못하도록

하고 밖으로 빼어낸 후 멸균된 50 ml conical tube에 담아서 운반한다. 필요할

경우, 샘 링삽을 이용하여, 상층퇴 물을 제외하고, 퇴 물시료를 채취한다. 운

반된 시료는 빠른 시일 내에 배양하고 나머지는 냉장 조건을 유지하며 보 한

다.

토양 시료 채취 갯벌 시료 채취

산성 폐수 산성 산폐수의 pH 측정

출된 담비의 소화기 렵된 사향노루의 사체

그림 1. 시료 채취 채집 장소

호산성 균주 발굴을 하여 토양시료의 pH를 공정시험법을 이용하여 측정

을 시도하 다. 토양샘 과 증류수(D.W)를 넣어 vortex 등을 이용하여 충분히

섞은 뒤(sample:D.W=4:1), debris 등은 력을 이용하여 제거 한 뒤, pH 측정기

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를 이용하여 각 sample의 pH를 측정하 다. 결과의 신뢰도를 얻기 하여, 최소

2번 이상 측정하 다. 확보된 토양 pH 정보는 추후 호산성 미생물을 배양하기

한 기본 인 배양정보로 사용하 다.

멸종 기 장내 미생물의 발굴을 한 시료는 로드킬 등으로 국립생물자원

으로 이송된 멸종 기 야생 동물의 사체를 해부하여 소화기 을 출하고 출

된 장내의 내용물에서 시료를 채취하 다.

다. 배양체 확보 방법

1) 방사선 내성 미생물

채취한 토양시료를 한국원자력연구원에서 3 kGy의 감마선을 조사(radiation)

하고 조사된 토양을 실험실에서 멸균된 증류수 혹은 인산염 버퍼를 사용하여 순

차 희석방법으로 희석한 다음, R2A agar (BD Difco, USA)에 100 ㎕씩 도말

하 다. 고체배지에서 자란 콜로니들은 1차 으로 3 kGy의 방사선에 내성이 있

는 것으로 추정되는 콜로니들을 선택하고 계 배양하여 순수 분리하 다.

순수 분리된 콜로니들은 16S rDNA 염기서열을 시 싱 한 후 미기록종과

신종후보로 확인된 균주들은 한국원자력연구원에 다시 보내져서 방사선 내성을

재확인하 다.

방사선 내성을 2차로 재확인할 때는 감마선의 세기를 2, 4, 6, 8, 10 kGy로

다양하게 조사한 후, 감마선을 조사하지 않은 최 의 CFU와 방사선이 조사된

후 CFU의 log %로 그래 를 작성하 다. Broth에 cell을 희석하여 다양한 세기

의 감마선을 조사하고 broth를 고체배지에 순차 희석방법으로 도말하여 살아

남은 콜로니의 개수를 세는 방법으로 방사선 내성을 조사한다. 방사선 내성이

없는 E. coli의 경우 1 kGy의 감마선에 노출되면 백만 마리 1마리가 살아남

기 힘들다.

2) 호염․호산성 미생물

채취한 시료는 실험실에서 멸균된 증류수 혹은 인 으로 제작한 염 수를

사용하여 순차 희석방법으로 희석한 다음, 1/10로 희석된 R2A agar(BD

Difco, USA)와 인 으로 제작한 15%(w/v) NaCl 농도를 지닌 marine agar에

100 ㎕씩 도말하 다. 호산성 미생물의 배양을 해서 acidic 조건을 제공해주

며, 격한 pH 변화를 막기 하여 phosphate buffer 등을 제작하여 사용하 으

며, 필요할 경우 homo-PIPES buffer 등을 10 mM 이상 사용하 다.

호산성 미생물 배양을 하여, 1/10로 희석된 R2A plate를 이용하 으며, 배

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양온도조건은 25～30℃에서 정치배양을 시도하 다. 일주일 이상 배양 시도 시,

배지의 증발을 막기 해 배양기내에 수분을 히 제공하 다. 배양도 , 수시

로 plate를 체크하 으며, 곰팡이나 방선균이 자라는 것이 확인되면, 그 배양

plate는 별도 보 하 다.

호염성 미생물 배양을 하여, NaCl 농도가 15%(w/v)으로 조 된 marine

broth 는 haloarchaeal medium을 제작하여 이용하 으며, 배양온도 조건은

25～30℃ 정도에서 정치배양을 시도하 다. 한, 호염성 고세균의 성장은 다른

미생물에 비하여 느리기 때문에, 배지 내에 있는 수분 증발에 따른 염농도 변화

를 배제하고자 배양기내에 수분을 히 제공하 다. 배양도 , 수시로 plate를

체크하 으며, 미생물 콜로니를 확인하 다.

3) 기성 미생물

시료는 기본배지로써 AFW(artificial fresh water)나 ASW(artificial sea

water)에 넣어 배양하 다. AFW의 조성(DW l-1)은 1 g NaCl, 0.5 g MgCl2.6H2O,

0.33 g KCl, 0.1 g CaCl2.2H2O, 1.42 g Na2SO4, 0.2 g KH2PO4, 0.2 g NH4Cl, 0.1

g Yeast extract, 1 ml 1000 x vitamin solution, 1 ml 1000 x trace element

SL-10 solution, 1 ml 1000 x tungsten/selenite solution, 1 mg resazurin이다.

ASW의 조성(DW l-1)은 25 g NaCl, 4.3 g MgCl2.6H2O, 4.0 g MgSO4, 0.33 g

KCl, 0.1 g CaCl2.2H2O, 0.2 g KH2PO4, 0.2 g NH4Cl, 0.1 g Yeast extract, 1 ml

1000 x vitamin solution, 1 ml 1000 x trace element SL-10 solution, 1 ml 1000

x tungsten/selenite solution, 1 mg resazurin이다.

SRB는 sulfate reducing에 의하여 sulfide가 생성되므로 sulfide가 속 2가

이온과 반응하고 검은색 침 물을 만든다는 것을 착안하 다. 10 mM lactate가

들어있는 배지에 10 mM sulfate를 넣은 후, 1.7 mM FeSO4를 anaerobic agent

로 하여 배양하 다. 농화배양된 배지는 10-7까지 ASW나 AFW에서 연속 희석

(serial dilution)하 다. 연속 희석한 배지는 1.6% agarose 배지에서 roll tube를

제작하 다. Roll tube룰 제작하기 해서, 4 ml ASW 혹은 AFW에 0.08 g

agarose를 넣고 O2-free N2 gas 하에서 10분간 기체를 치환하고, 치환된 tube에

0.5 mM thioglycolate를 넣고 butyl rubber stopper로 하 다. 멸균을 해

aluminum cap으로 capping 한 후, 121℃, 1.5 기압에서 20분간 멸균하 다. 멸균

된 agarose 배지는 60℃ incubator에서 방치한다. 멸균된 agarose 배지에는

supplementary mixture (trace element, vitamin, tungsten/selenite, 1.7 mM

FeSO4.7H2O, 0.5 mM ascorbate)를 filtering 하여 보 하고, 모든 조작은 N2 gas

하에서 주사기를 이용하 다. 연속 희석 배지 0.8 ml와 supplementary mixture

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0.2 ml을 넣고 얼음 에서 빠르게 굳힌 후 30℃에서 배양하 다. 배양 후, 검은

색 콜로니는 같은 배지에 옮겨서 배양하고, 16S rRNA 유 자를 증폭한 후, 염

기 서열을 분석하 다.

철환원 미생물의 경우 Fe3+ 이온은 물에 녹지 않고 바닥에 붉은 색으로 가라

앉을 수 있는데, 환원을 통하여 Fe2+ 이온은 물에 용해 될 수 있지만, 배지 안에

sulfide 성분이 있으면 검은색 침 을 만드는데 배지의 색은 갈색에서 무색으로

바 다. 농화 배양된 시료는 10-7까지 serial dilution 한 후, roll tube를 통하여

콜로니를 얻고 같은 배양 배지에 콜로니를 옮겨 액체 배양하 다. Sulfide가 철

과 결합할 수 있으므로 그것을 피함과 동시에 cystein이 Fe2+가 결합하여 유색의

침 물을 만들기 때문에, roll tube 제작할 때 sulfide 신 cystein을 이용하

다. 탈질 미생물은 O2-free N2 하에서 10분간 기체 치환한 후 anaerobic agent를

넣지 않고 배양하 다. turbidity와 NO2-를 측정하여, 배양 정도를 알 수 있으며,

배양된 시료는 roll tube나 plating을 이용하여 배양하고, 얻어진 콜로니는 5 mM

nitrite와 1∼10 mM의 기질이 들어있는 배지에 넣어 배양하 다.

4) 이탄층 미생물

채취한 퇴 층 시료 1g을 멸균된 증류수를 사용하여 10-1에서 10-7까지 순

차 으로 희석하 다. 희석된 시료는 각 희석 배율 별로 1/50과 1/100로 희석

된 R2A Broth(BD Difco, USA)와 Noble Agar(BD Difco, USA)을 사용하여

제작한 150 mm agar plate에 100 ㎕씩 도말하 다. 도말된 agar plate는 호기

조건에서 25℃에서 4일간 배양하 다.

도말된 agar plate에 콜로니가 확인되면 1/10으로 희석된 R2A agar 배지

를 사용하여 확인된 콜로니를 분리하 다. 분리된 배양체는 배양온도 25℃에

서 순수 배양을 시도하 다. 배양도 , 수시로 plate를 체크하여, 곰팡이나 방

선균이 자라는 것이 확인되면 곰팡이나 방선균을 분리하여 다시 분리를 시도

하여 배양체를 확보하 다.

5) 멸종 기 장내 미생물

국립생물자원 에 수장된 멸종 기 동물 표본의 장내 내용물에서 배양체

를 확보하 다. 국립생물자원 으로 이송되는 멸종 기 동물의 사체는 부분

부패 방지 등을 해 동결된 상태로 이송되기 때문에, 장내 시료에 살아 있을

수 있는 미생물 최 한 많은 종을 확보하기 해서 장내 미생물이 배양되

는 다양한 배지를 이용하여 배양체를 확보하 다. 시료 약 1 g을 멸균된 식염

수를 사용하여, 10-1에서 10-7까지 연속 희석법에 따라 시료를 비하 다. 이

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게 희석된 시료를 Marine agar(BD Difco, USA), MRS agar(BD Difco,

USA), Tryptic soy agar(BD Difco, USA), R2A agar(BD Difco, USA)를 이

용하여 제작한 agar plate에서 100 ㎕씩 도말하 다. 시료가 도말된 agar plate

는 각각 20℃, 37℃의 온도에서 3일간 배양하 다. 도말된 agar plate에 콜로

니가 확인되면 새로운 배지를 사용하여 확인된 콜로니를 분리하 다.

라. DNA 바코드 유 자 분석

확보된 배양채의 16S rRNA 염기서열 분석을 하여 세균의 27F-1492R

primer set를 이용하여 PCR 증폭을 진행하 다. 이를 하여, Dyne

ready-2X-Go (DYNEBIO, Republic of Korea) 10μl와 3차 증류수 7 μl, forward

primer와 reverse primer를 각각 10 pmol씩 넣고, genomic DNA를 1 μl 넣어,

총 20 μl의 PCR 반응액을 만들어 비하 다.

유 자 증폭을 한, PCR 수행방법으로, 94°C에서 5분 동안 변성

(denaturation)과정을 거친 후 94°C에서 30 , 55°C에서 30 , 72°C에서 60 를

1회로 하여, 총 30회 반복 수행을 한 후 마지막으로 72°C에서 5분간 최종 신장

(extension) 과정을 수행하 다. 필요할 경우 반복 수행을 35회로 하여 충분한

PCR 산물을 얻었다. 증폭된 PCR 산물은 1.5%(w/v) agarose gel 기 동법을

이용하여 PCR 산물의 크기를 확인하 다. 크기가 확인된 PCR 산물을 정제한

후 염기서열을 결정하 다.

균주의 염기서열은 NCBI에서 제공하는 BLAST을 이용하여 근연 염기서열

을 결정한 후 EzTaxon server 2.1(Chun et al., 2007)을 이용하여 종 수 을 동

정하고 근연종을 분석하 고, Bioedit 로그램 등을 이용하여 reference 서열을

비롯하여 분리된 미생물의 서열을 같이 alignment하여 계통수를 그렸다. 계통수

작성 시, MEGA6 로그램에서 제공되는 neighbor-joining을 기본으로 하여 필

요할 경우 minimum-evolution 그리고 maximum-likelihood algorithms을 이용

하여 보다 정확한 정보를 확보하 다.

마. 신종 후보종과 미기록 후보종의 기

16S rRNA 유 자 염기서열 분석을 통하여 국외에서 발표된 종의 표 균

주와 98.7% 이상일 경우 국내 미기록 후보종으로 정하고 기존 종의 표 균주

와 98.7% 미만인 경우 신종 후보종으로 결정하 다. 미기록종의 가능성을 보여

주는 종명은 공인된 원핵생물 종의 목록을 정리한 “List of Prokaryotic names

with Standing in Nomenclature(www.bacterio.net)”와 비교하여 국내 미기록종

인지를 결정하 다.

- 12 -

16S rRNA 유 자 염기서열의 유사도만 분석하여 신종/미기록 후보종을 결

정한 것이기 때문에 최종 인 정은 아니며, 향후 형태학 , 생리학 , 분자생

물학 특성들을 비교하여 최종 으로 신종 혹은 미기록종인지 결정한다.

바. 배양체 장기 보존 DB 입력

신종/미기록 후보종으로 결정된 30개 배양체를 20% glycerol 용액이 들어있

는 cryovial에 균체를 탁하는 방법으로 glycerol stock 9개를 제작하 고, 동결

건조를 해 skim milk 용액에 탁한 후 동결건조하고 진공가압 상태에서 화

염 하는 방법으로 동결 건조 앰 10개를 제작하 다.

장기 보존이 완료된 배양체는 생물자원 리시스템에 정보를 입력하고 배양

체 번호를 부여하 다.

2. 생리 학 특성 정 보 확 보

특수 환경 미생물자원 배양체의 생리학 특성 분석을 하여, 바이오로그

미생물 동정 시스템(BIOLOG microbial identification systems)의 GEN Ⅲ plate

를 사용하여 30℃에서 24시간∼48시간 배양하여 BIOLOG의 microplate reader

를 통해서 발색 시약의 색변화 세포생장에 따른 불투명도(turbidity)를 측정

하 다. 측정된 값은 BIOLOG 소 트웨어를 통해 GEN Ⅲ DB와 matching 되어

GEN Ⅲ DB에 수록된 종 가장 가까운 종으로 동정된다. 한 GEN Ⅲ plate

의 96개 well negative control과 positive control을 제외한 94개 well을 통해

미생물자원 배양체의 71개 탄소원 이용성과 pH 염도 등에 한 배양체 특성

분석, 항생제에 한 내성 탐색 등 23개 화학물질 민감도를 분석하 다.

그림 2. 바이오로그 미생물 특성 정보 분석 시스템

- 13 -

3 . 유 정 보 확 보

방사선 내성 신종 후보종 DG31D, DG15C과 호염성 신종 후보종 Hb3과

Hb8, 이탄층 신종 후보종 R-2-5로부터 FastDNA SPIN kit(MP Biomedicals,

USA)을 사용하여 장 유 체 게놈을 추출한 후 1.2% agarose gel에서 기

동으로 DNA를 확인하 다. 확인된 DNA를 주형(template)으로 사용하여

SMRTbell Template Prep Kit 1.0(Pacific Bioscience, USA)를 통해 DNA

sequencing library를 제작하 다. 추출된 20 ug의 DNA를 gTube로 약 20 kb

의 DNA 조각을 얻을 수 있도록 단편화 반응을 시킨 후 이를 정제하여 단편

화 과정에서 생길 수 있는 nick non-blunt end를 보완하는 end-repair 과

정을 수행하 다. Repair 반응을 거친 DNA 조각들의 양 끝에 SMRTbell

adapter를 ligation 시킨 후 BluePippin(Sage Science, USA) 장비를 통해 20

kb의 DNA sequencing library 조각만을 elution하여 최종 인 library를 비

하 다. 제작된 PacBio SMRTbell sequencing library는 PacBio RS-II

(Pacific Bioscience, USA)장비를 통해 각 시료당 1 cell의 sequencing 반응을

수행하 다. Sequencing이 완료된 후 얻어진 raw data는 SMRT Analysis

Software version 2.3(Pacific Bioscience)을 통해 분석되었다. 사용된 로토콜

은 HGAP2로 parameter는 로그램에 내장된 default 조건을 사용하 다. 얻

어진 contig는 각 contig 양쪽을 BLAST하여 circularization을 시도한 후

annotation을 수행하 다. Assembly가 완료된 contig는 tRNAscan-SE1.21을

이용하여 tRNA을 찾은 후 cmsearch와 Rfam의 rRNA 모델을 이용하여

rRNA search를 수행하 다. 한 PilerCR CRT를 이용하여 CRISPR motif

를 탐색하 다. Gene prediction으로는 Prodigal을 이용하여 CDS region을 탐

색하 으며 cmsearch와 Rfam의 ncRNA 모델을 이용하여 ncRNA search를

수행하 다. 최종 으로 usearch를 이용하여 Prediction된 CDS 부분에 해

KEGG, Swissprot, EggNOG, SEED DB에 각각 similarity search를 통해

functional annotation을 수행하 다. 유 체 분석과정은 ㈜마크로젠에서 수행하

다.

4 . 분류 동 정 을 한 형 태 학 , 분자생물학 특성 분석

가. G+C mol% 분석

Genomic DNA(농도: 200～1,000 ng/μl) 20 μl를 1.5 ml tube에 넣고 100°C에

- 14 -

서 5분간 끓여주고 즉시 얼음에 넣어 안정화시켰다. 그 후 nuclease P1(100

U/ml pH 5.3) 20 μl를 넣고 37°C에서 1시간 동안 반응시킨 뒤 agarose gel을 이

용하여 기 동 후 밴드를 확인하여 단일 nucleotide로 분해되었는지 확인하

다. 단일 nucleotide로 분해되었다면 glycine buffer 20 μl를 넣은 후 alkaline

phosphatase from calf intestine(1000 U/ml in alkaline phosphatase buffer)를

넣고 37°C에서 3시간 이상 반응시켜 nucleoside 단 로 분해하 다. 분해된

DNA 시료는 reverse-phase HPLC를 이용하여 분석하 다(Mesbah et al.,

1989).

나. Quinone 분석

동결 건조된 세포 100～300 mg을 50 ml tube에 chloroform : methanol (2:1

v/v) 45 ml와 함께 넣어 혼합하 다. 넣어 후 상온의 Shaking incubator에서

1시간 이상 반응 시켜주었다. 반응 시킨 뒤 whatman filter paper(Advantec

filter paper No.2)를 이용하여 반응시킨 Cell을 걸러주고 투과된 용액을 취하

다. 투과된 용액을 vacuum rotary evaporator (50°C)를 사용하여 농축한 후

hexane 10 ml을 넣어서 녹이면서 Sep-Pak 6cc Cartridges (500 mg sorbent,

silica)를 hexane 5ml로 activation 시켜주고 hexane으로 녹인 quinone 용액을

Sep-Pak에 걸러주었다. Sep-Pak을 hexane : diethyl/ether (90:10 v/v) 20 ml으

로 걸러 후 다시 vacuum rotary evaporator (50°C)를 사용하여 농축하여 400

μl acetone으로 elution 시켜주었다. 최종 quinone용액을 HPLC를 이용하여 분석

한다(Hiraishi et al., 1996).

다. Polar lipid 분석

동결 건조된 세포 50～100 mg을 15 ml tube에 옮긴 후 methanol : D.

W.(100:10, v/v) 2 ml을 넣어 뒤 혼합하 다. 혼합한 후 petroleum ether 2 ml을

넣고 상온에서 15분 동안 교반시킨 후에 1500 rpm으로 5분 동안 상온에서 원심

분리하 다. 3가지 층이 생기게 되는데 이 upper layers는 quinone을 한 층

이므로 제거하고, 나머지 second layer와 pellets 층은 100°C에서 5분간 끓이고

37°C water bath에서 냉각시킨 후 chloroform : methanol : D. W.(90:100:30, v/v/v) 2.3 ml

을 넣고 상온에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 1500 rpm으로 5분 동안 상온에서 원

심분리하고 상층액은 새로운 15 ml tube로 옮겼다. Pellets에 chloroform :

methanol : D. W. (50:100:40, v/v/v/) 0.75 ml를 넣고 30분간 voltex 한 후 1500

rpm으로 5분 동안 상온에서 원심분리 하여 상층액을 직 에 옮긴 용액에 합쳐

주었다. 용액이 합쳐진 tube에 chloroform 1.3 ml, 0.3% NaCl 1.3 ml을 넣어주고

부드럽게 섞어 뒤 1500 rpm으로 5분 동안 상온에서 원심분리하 다. 3가지 층

- 15 -

이 생기게 되는데 이 upper layers와 second layer는 제거해주고 나머지 층은

vacuum rotary evaporator를 이용하여 40°C에서 농축시켰다. 농축된 성분을

chloroform : methanol (2:1, v/v) 60 μl로 elution 시킨 후 two-dimensional

TLC로 개하여 분석하 다. TLC 개 용액으로 solvent 1(chloroform :

methanol : D.W. (65:25:4, v/v/v))을 먼 사용하여 개가 끝나면 완 히 건조시

킨 후, TLC plate를 90° 회 하여 solvent 2(chloroform : acetic acid : methanol :

D.W.(80:15:12:4, v/v/v/v))로 개하여 분석하 다(Mininkin et al., 1984).

라. Fatty acid 분석

Reagent #1 (Sodium hydroxide: 45g, methanol: 150 ml, D.W: 150 ml)을 1 ml

넣고 비된 세포를 4 mm loop를 이용해 harvest 하여 1 loop 넣어주고 세포를 용액

에 완 히 풀어주었다. 5～10 동안 vortex한 뒤 100°C에서 5분간 끓여 후 5～10

동안 vortex하고 100°C에서 25분간 다시 끓여 후 즉시 얼음에 넣어 냉각시킨

다. 충분히 식으면 reagent #2 (6N HCl: 325 ml, methanol: 275 ml)을 2 ml 넣고 5～

10 간 vortex하고 80°C에서 10분간 반응시켰다. 반응 후 즉시 얼음에 넣어 냉각시

키고 reagent #3 (Hexane: 200 ml, Methy-tert Buty Ether: 200 ml)을 1.25 ml 넣고

10분간 아래로 뒤집어 주면서 섞은 후 bottom phase를 제거하 다. 여기에

reagent #4 (Sodium hydroxide: 10.8 g, D.W: 900 ml)을 3 ml 넣은 뒤 5분간 아래

로 뒤집어 주면서 섞은 후 top phase를 GC vial에 옮겨 MIDI 분석을 진행하 다

(Sasser M, 1990).

마. DAP isomer 분석

동결건조 된 세포 5 mg에 6 N HCl 200 μl을 넣은 후 water bath에서 100°C로

overnight으로 반응시키고 1.5 ml tube에 옮겨 13,000 rpm으로 10분 동안 상온에서

원심분리하 다. 상층액을 새로운 tube에 옮겨 evaporate를 이용하여 농축하 다.

농축 후에 D.W 300 μl로 elution 시켰다. Cellulose TLC plate에 개하여 분석하

다. TLC 개 용액으로 methanol : pyridine : 4 N HCl : D.W. (80:10:4:26, v/v/v/v)

을 이용하 다(Komagata et al., 1987)

바. DNA-DNA hybridization

Probe DNA, target DNA, negative DNA 각각 100ng/ul의 농도로 55ul씩

비하여 5분간 100°C에서 끓여주고 즉시 얼음에서 냉각시키고 PBSM

buffer(2X PBS 500ml, D.W. 300ml, 1M MgCl2 100ml)를 각각의 DNA 시료

tube에 넣은 후 충분히 섞어주었다. 그리고 96 well-microplate wells(96wells)에

분주하 다. 37°C에서 2시간 동안 DNA를 96 well plate에 붙이고 DNA solution

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을 제거하고 1X PBS buffer 200 μl씩 넣어서 각 well을 washing 해 후 60°C

에서 2시간 동안 건조시켰다. 건조가 완료되면 prehybridization solution(20X

SSC 10 ml, salmon sperm(1 mg/ml) 10 ml, 50X Denhart solution 10ml,

foramide 50 ml, D.D.W 20 ml) 200 μl를 각 well에 분주하여 37°C에서 1시간 동

안 반응시키는 동시에 500～1000 ng/μl 농도의 probe DNA에 0.5 mg/ml

photobiotin solution 10 μl를 넣고 30분간 뚜껑을 연 상태로 얼음에 두고 lamp

아래에서 30분간 반응시켰다. 반응 에는 5분에 한번씩 tube를 tapping 하 다.

lamp 반응이 끝난 뒤에 0.1 M Tris-HCl buffer (pH 9.0) 200 μl를 넣고 vortex

한 후, 1-butanol 100 μl를 넣고 vortex 하 다. 그리고 상온에서 13,000 rpm으로

10～20 간 원심분리한 뒤 upper layer를 제거하 다. 1-Butanol 첨가 제거

과정을 2번 반복하고 최종 으로 1-butanol을 제거 한 후 100°C에서 15분간 끓

여 후 즉시 얼음에서 냉각시켰다. 그리고 (target DNA 개수+2)*3 ml의

hybridization solution(Prehybridization solution 100 ml, Dextran sulfate 3～5

g)을 비하여 photobiotin 반응을 진행한 probe DNA를 분주하 다. 그리고 각

각의 모든 well에 hybridization solution을 100 μl씩 분주하 다. [0.41 X (G+C

mol% probe DNA) + 24.3°C]의 hybridization temperature를 계산하여 overnight

동안 hybridization 시켜주었다. Overnight 반응 후 hybridization solution은 버

리고 2X SSC 200 μl으로 3번 washing 하 다. 그리고 각각의 well에 solution

2[solution 1(BSA 0.20 g, triton X-100 40 μl, 1X PBS 40 ml), Streptavidine-β-

galactosidase 10 μl] 100 μl씩 넣어주고 37°C에서 30분간 반응시켰다. 반응시키

면서 4-MUF-Gal solution(1 M MgCl2 10 μl, 4-methylumbelliferyl-β-D-

galactopyranoside 1 mg, 1X PBS 10 ml, N,N-dimethyl formamide 100 μl)를

비하고 30분 반응이 끝난 뒤, solution 2를 제거하고 각각의 well을 1X PBS

(Containing 0.1% Triton X-100) 200 μl로 3번 washing 해 뒤 즉시

4-MUF-Gal solution을 100 μl씩 넣었다. 그 이후에 15분마다 fluorescence 측정

기로 흡 도를 측정하여 hybridization 정도를 분석하 다(Ezaki et al., 1989).

사. TEM(Transmission Electron Microscope) 촬

Parafilm을 2 cm(가로)*5 cm(세로)로 잘라 책상에 올려놓고 가장자리를

러 붙 다. D.W를 10 μl씩 세 번 따서 parafilm 에 분주하는데, 염색약(PTA

혹은 U.A) 10 μl도 같이 분주하 다. 이 때 분주 순서는 D.W, 염색약, D.W,

D.W 이다. 그리고 멸균된 이쑤시개를 사용하여 plate에서 colony(배양한지 2～3

일 된 균)를 어서 첫 번째 D.W에 1분간 담그고 grid를 1번 D.W에 1분간 두었

다. (이때 grid의 반짝이는 면을 D.W에 닿게 함) Grid를 whatman filter paper

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(Advantec filter paper No.2)를 사용하여 물기를 살짝 제거하고 염색약에 10

간 담근 후 filter paper에 염색약을 제거하 다. 염색이 끝난 이후에 나머지 3,4

번 D.W에 1 간 grid를 washing 해 뒤 TEM으로 촬 하 다(Schädler et al.,

2008).

아. SEM(Scanning Electron Microscope) 촬

1.5 ml tube에 2.5% glutar aldehyde 1 ml을 분주한 뒤 plate에서 colony를

white loop로 1loop harvest하여 충분히 섞어 뒤 상온에서 4시간 이상 고정시

켰다. 그리고 상온에서 8000 rpm으로 5분 동안 원심분리 시킨 뒤 상층액을 제거

하 다. 그리고 pH 7.4 phosphate buffer를 1 ml을 넣고 tapping을 충분히 하여

washing 한 뒤 상온에서 8000 rpm으로 5분 동안 원심분리하여 상층액을 제거

한 뒤 D.W 1 ml를 넣고 tapping 하여 washing 해 뒤 상온에서 8000 rpm으로

5분 동안 원심분리하 다. 이와 같은 D.W washing 과정을 3번 반복하 다.

Washing후에 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 100%(100%은 2번) EtOH 1 ml씩을

단계 으로 분주하 다. 이 과정에서 30% EtOH 1 ml를 세포가 들어있는 tube

에 분주 한 뒤 10분간 반응 시킨 뒤 상온에서 8000 rpm으로 5분 동안 원심분리

한 후 상층액은 버린 뒤 나머지 EtOH를 순차 으로 같은 방법으로 진행하 다.

EtOH 과정이 끝난 뒤에 hexamethyldisilazane(HMDS) 500 ml를 넣고 15분간

상온에서 반응 시킨 후, 상온에서 8000 rpm으로 5분 동안 원심분리하고 상층액

을 버려 다. 이와 같은 HMDS 과정을 3번 반복하여 진행하 다. 상층액을 완

히 제거하고 -20°C에서 1시간 동결하고, -80°C에서 1시간 동결하여 동결건조

시킨 후 SEM으로 촬 하 다(Adams et al., 1987).

자. API test

균주를 순수 배양하여 비하고 Incubation tray에 5 ml의 증류수를 첨가하

여 습도를 유지하 다. Incubation box에 균주에 한 사항을 기록하 다. NaCl

0.85% solution 2 ml에 순수 배양된 균주를 탁하여 McFaland Standard 0.5와

탁도를 맞추었다. 제조사(bioMerieux)에서 제공한 매뉴얼에 따라 API strip의

cupules에 차례로 시험균을 종하고 Incubation box를 덮어 30℃에 24시간 배

양한 후 독하여 결과를 분석하 다.

- 18 -

Ⅲ . 연구결 과

1. 특수 환경 미생물자원 신 종 / 미기 록 후 보 종 발굴

방사선 내성, 호염성, 호산성, 기성, 이탄층, 멸종 기 장내 등 국내의 다양

한 특수 환경으로부터 미생물자원 탐색 발굴을 통하여 11종의 신종 후보종

29종의 미기록 후보종을 발굴하 다.

본 연구에서 발굴된 특수 환경 미생물자원 미발굴종 40종은 1계 5문 9강 18

목 32과 35속에 포함되고 있으며 세부 으로 발굴된 신종 후보 11종은 1계 4문

6강 8목 9과 11속으로 구성되며, 미기록 후보 29종은 1계 4문 6강 12목 20과 24

속으로 구성되어 있다. 발굴된 신종 미기록 후보종은 논문 게재를 한 연구

를 지속 으로 수행하여 신종 미기록 후보종을 국제 으로 공인받기 한 활

발한 연구를 진행하고 있다. 당해 연도 발굴된 40종의 신종/미기록 후보종의 목

록은 표 2와 표 3과 같다.

연번 특수 환경 채집지발굴(후보종)

계신종 미기록종

1방사선

내성강릉 제주 해변 토양 4 16 20

2 호염성 군산항 갯벌 2 0 2

3 호산성제주도 선흘 섭이굴 구

달성군 폐 산0 8 8

4 기성 서산 갯벌 2 0 2


오 산 소황병산늪 2 1 3

6멸종 기

동물 장내

담비

사향노루1 4 5

합계 11 29 40

표 2. 특수 환경 미생물자원 발굴 황

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No. strain 최근연종16S rDNA유 사도(%) 분리원

구분특수환경

1 15J4M-1 Bacillus selenatarsenatis99.4 토양

미기록종방사선내성

2 15J13-8 Brevibacterium luteolum99.5 토양


3 16MFM10 Carnobacterium iners99.6 토양


4 KSM4-11 Deinoccous radioresistens98.0 토양

신종방사선내성

5 15J1-8 Exiguobacterium profundum98.7 토양


6 LCS9 Flavisolibacter tropicus94.9 토양


7 SR1-5-4 Larkinella insperata99.3 토양


8 15J10-8T5 Methylobacterium hispanicum99.9 토양


9 KSM3-9 Methylobacterium soli98.8 토양


10 15J8-3 Microvirga subterranea99.8 토양


11 15J7-3T5 Microvirga zambiensis99.2 토양


12 DG15C Nibribacter radioresistens98.6 토양


13 15J17K Pantoea eucrina99.8 토양


14 15J13-6 Pseudokineococcus lusitanus99.4 토양


15 15ML1C Psychrobacter cryohalolentis99.4 토양


16 216MGT3 Psychrobacter maritimus99.5 토양


17 216MGM6 Psychrobacter okhotskensis99.7 토양


18 16MFM4 Psychrobacter urativorans99.7 토양


19 DG31D Rufibacter radiotolerans97.1 토양


20 15J8-11 Spirosoma endophyticum99.3 토양


표 3. 특수 환경별 발굴종 목록

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No. strain 최근연종16S rDNA유 사도(%) 분리원

구분특수환경

21 Hb3 Halomonas ventosae98.6 해양퇴

신종호염성

22 Hb8 Marinobacter sediminum98.4 해양퇴

신종호염성

23 4-8 Achromobacter spanius99.9 토양

미기록종호산성

24 4-15 Acinetobacter bereziniae99.8 토양


25 4-10 Aquitalea magnusonii99.3 토양


26 B8 Bradyrhizobium erythrophle100 토양


27 4-19 Ideonella dechloratans99.7 토양


28 AD38 Luteibacter anthropi99.7 토양


29 4-20 Pseudomonas extremaustralis99.9 토양


30 AS15 Serratia fonticola99.9 토양


31 ANS2 Desulfovibrio piezophilus94.09 갯벌

신종기성

32 ANS1 Desulfuromonas palmitatis97.71 갯벌

신종기성

33 R-1-5 Curvibacter lanceolatus100 토양

미기록종 이탄층

34 R-2-5 Janthinobacterium lividum98.13 토양

신종이탄층

35 JS821 Methylomonas paludis97.76 토양

신종이탄층

36 M1T305 Lysinibacillus mangiferihumi 99.19 장내시료

미기록종 멸종 기 동물 장내

37 M3R204 Microbacterium oxydans99.85 장내시료


38 M3R205 Ochrobactrum pituitosum99.62 장내시료


39 M1T307Streptococcus gallolyticus

subsp. macedonicus99.70 장내시료


40 D7T301 Vagococcus panaei98.36 장내시료

신종 멸종 기 동물 장내

표 3. 특수 환경별 발굴종 목록(계속)

- 21 -

가. 신종/미기록종 후보종의 분류군

1) 신종 후보종의 분류군

Phylum Bacteroidetes

Class Chitinophagia

Order Chitinophagales

Family Chitinophagaceae

Genus Flavisolibacter sp. LCS9(방사선내성)

Genus Nibribacter sp. DG15C(방사선내성)

Genus Rufibacter sp. DG31D(방사선내성)

Phylum Deinococcus-Thermus

Class Deinococci

Order Deinococcales

Family Deinococcaceae

Genus Deinococcus sp. KSM4-11(방사선내성)

Phylum Firmicutes

Class Bacilli

Order Lactobacillales

Family Enterococcaceae

Genus Vagococcus sp. D7T301(멸종 기 동물 장내)

Phylum Proteobacteria

Class Betaproteobacteria

Order Burkholderiales

Family Oxalobacteraceae

Genus Janthinobacterium sp. R-2-5(이탄층)

Class Deltaproteobacteria

Order Desulfovibrionales

Family Desulfovibrionaceae

Genus Desulfovibrio sp. ANS2( 기성)

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Order Desulfurmonadales

Family Desulfuromonadacae

Genus Desulfuromonas sp. ANS1( 기성)

Class Gammaproteobacteria

Order Alteromonadales

Family Alteromonadaceae

Genus Marinobacter sp. Hb8(호염성)

Order Oceanospirillales

Family Halomonadaceae

Genus Halomonas sp. Hb3(호염성)

Order Methylococcales

Family Methylococcaceae

Genus Methylomonas sp. JS821(이탄층)

2) 미기록종 후보종의 분류군

Phylum Actinobacteria

Class Actinobacteria

Order Kineosporiales

Family Kineosporiaceae

Genus Pseudokineococcus lusitanus 15J13-6(방사선내성)

Order Micrococcales

Family Brevibacteriaceae

Genus Brevibacterium luteolum 15J13-8(방사선내성)

Family Microbacteriaceae

Genus Microbacterium oxydans M3R204(멸종 기 동물 장내)

Phylum Bacteroidetes

Class Cytophagia

Order Cytophagales

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Family Cytophagaceae

Genus Larkinella insperata SR1-5-4(방사선내성)

Genus Spirosoma endophyticum 15J8-11(방사선내성)

Phylum Firmicutes

Class Bacilli

Order Bacillales

Family Bacillaceae

Genus Bacillus selenatarsenatis 15J4M-1(방사선내성)

Family Planococcaceae

Genus Lysinibacillus mangiferihumi M1T305(멸종 기 동물 장내)

Family Incertae sedis

Genus Exiguobacterium profundum 15J1-8(방사선내성)

Order Lactobacillales

Family Carnobacteriaceae

Genus Carnobacterium iners 16MFM10(방사선내성)

Family Streptococcaceae

Genus Streptococcus gallolyticus subsp. macedonicus M1T307(멸종 기동물 장내)

Phylum Proteobacteria

Class Alphaproteobacteria

Order Rhizobiales

Family Bradyrhizobiaceae

Genus Bradyrhizobium erythrophle B8(호산성)

Family Brucellaceae

Genus Ochrobactrum pituitosum M3R205(멸종 기 동물 장내)

Family Methylobacteriaceae

Genus Methylobacterium hispanicum 15J10-8T5(방사선내성)

Genus Methylobacterium soli KSM3-9(방사선내성)

- 24 -

Genus Microvirga subterranea 15J8-3(방사선내성)

Genus Microvirga zambiensis 15J7-3T5(방사선내성)

Class Betaproteobacteria

Order Burkholderiales

Family Alcaligenaceae

Genus Achromobacter spanius 4-8(호산성)

Family Comamonadaceae

Genus Curvibacter lanceolatus R-1-5(이탄층)

Genus Ideonella dechloratans 4-19(호산성)

Order Neisseriales

Family Neisseriaceae

Genus Aquitalea magnusonii 4-10(호산성)

Class Gammaproteobacteria

Order Enterobacteriales

Family Enterobacteriaceae

Genus Pantoea eucrina 15J17K(방사선내성)

Genus Serratia fonticola AS15(호산성)

Order Pseudomonadales

Family Moraxellaceae

Genus Acinetobacter bereziniae 4-15(호산성)

Genus Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C(방사선내성)

Genus Psychrobacter maritimus 216MGT3(방사선내성)

Genus Psychrobacter okhotskensis 216MGM6(방사선내성)

Genus Psychrobacter urativorans 16MFM4(방사선내성)

Family Pseudomonadaceae

Genus Pseudomonas extremaustralis 4-20(호산성)

Order Xanthomonadales

Family Xanthomonadaceae

Genus Luteibacter anthropi AD38(호산성)

- 25 -

나. 방사선 내성 미생물

토양시료에 방사선을 조사한 후 살아남은 배양체의 16S rRNA 유 자 염기

서열을 확보하고, EzTaxon을 이용하여 기존 표 균주 DB와 비교하여 16S

rRNA 염기서열의 유사도를 확인하 다. 염기서열 유사도 분석 결과 확보된 방

사선 내성 미생물 배양체로 미기록종인 것은 Bacillus 속 1종, Brevibacterium

속 1종, Carnobacterium 속 1종, Exiguobacterium 속 1종, Larkinella 속 1종,

Methylobacterium 속 2종, Microvirga 속 2종, Pantoea 속 1종,

Pseudokineococcus 속 1종, Psychrobacter 속 4종, Spirosoma 속 1종으로 총

16종으로 확인되었다. 방사선 내성 신종 미생물로는 Deinococcus 속 1종,

Flavisolibacter 속 1종, Nibribacter 속 1종, Rufibacter 속 1종으로 확인되었다.

1) Bacillus 속 발굴종 (15J4M-1)

Bacillus 속은 1872년 Cohn에 의하여 최 로 보고되었으며 재까지 332개

의 종이 발표되었다. Bacillus subtilis가 이 속을 표하는 표 균주(type

species)이다.

발굴된 Bacillus 속 1종은 미기록종으로 발굴되었다. 균주명은 15J4M-1는

Bacillus selenatarsenatis와 16S rDNA 유사도가 99.4% 다. 이 균주는 98.7% 이

상이므로 미기록종으로 정하 다.

발굴된 Bacillus 속 미기록종 15J4M-1 균주에 하여 16S rDNA 염기서열을

이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다. 15J4M-1는 Bacillus

selenatarsenatis과 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 3).

2) Brevibacterium 속 발굴종 (15J13-8)

Brevibacterium 속은 1953년 Breed에 의하여 보고되었으며 재까지 50개

의 종이 발표되었다. Brevibacterium linens가 이 속을 표하는 표 균주(type

species)이다.

발굴된 Brevibacterium 속 1종은 미기록종로 발굴되었다. 균주명은 15J13-8

는 Brevibacterium luteolum와 16S rDNA 유사도가 99.5% 다. 이 균주는 98.7%

이상이므로 미기록종으로 정하 다.

- 26 -

그림 3. 방사선 내성 Bacillus 속 발굴종 15J4M-1의 계통수

- 27 -

발굴된 Brevibacterium 속 미기록종 15J13-8 균주에 하여 16S rDNA 염기

서열을 이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다. 15J13-8는

Brevibacterium luteolum과 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 4).

그림 4. 방사선 내성 Brevibacterium 속 발굴종 15J13-8의 계통수

- 28 -

3) Carnobacterium 속 발굴종 (16MFM10)

Carnobacterium 속은 1987년 Collins, Farrow, Phillips 등에 의하여 최 로

보고되었으며 재까지 12개의 종이 발표되었다. Carnobacterium divergens가

이 속을 표하는 표 균주(type species)이다.

발굴된 Carnobacterium 속 1종은 미기록종으로 발굴되었다. 균주명은

16MFM10는 Carnobacterium iners와 16S rDNA 유사도가 99.6% 다. 이 균주는

98.7% 이상이므로 미기록종으로 정하 다.

발굴된 Carnobacterium 속 미기록종 16MFM10 균주에 하여 16S rDNA 염

기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다. SR1-5-4

는 Carnobacterium iners와 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 5).

그림 5. 방사선 내성 Carnobacterium 속 발굴종 16MFM10의 계통수

4) Deinococcus 속 발굴종 (KSM4-11T)

Deinococcus 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Deinococcus-Thermus 문에

속하며 Deinococci 과에 속한다. Deinococcus 속은 1981년 Brooks와 Murray에

의하여 최 로 보고되었으며 재까지 59개의 종이 발표되었다. Deinococcus

radiodurans가 이 속을 표하는 표 균주(type species)이다. 방사선에 내성을

가지는 것으로 밝 졌고 그 이후로도 이 속에 포함된 종들은 모두 방사선 내성

을 가지고 있는 것으로 나타났다.

- 29 -

확보된 Deinococcus sp. KSM4-11T는 Deinoccous radioresistens 8AT의 16S

rRNA 유 자 염기서열과 98.0%의 유사도로 신종으로 정하 다.

발굴된 Deinococcus 속 신종 KSM4-11T 균주에 하여 16S rDNA 염기서열을

이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다. KSM4-11T은

Deinoccous radioresistens 8AT와 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 6).

그림 6. 방사선 내성 Deinococcus 속 발굴종 KSM4-11의 계통수

5) Exiguobacterium 속 발굴종 (15J1-8)

Exiguobacterium 속은 1984년 Collins 등에 의하여 보고되었으며 재까지

16개의 종이 발표되었다. Exiguobacterium aurantiacum가 이 속을 표하는 표

균주(type species)이다. 발굴된 Exiguobacterium 속 1종은 미기록종으로

발굴되었다. 균주명은 15J1-8는 Exiguobacterium profundum와 16S rDNA 유사

- 30 -

도가 99.3% 다. 이 균주는 98.7% 이상이므로 미기록종으로 정하 다. 발굴된

Exiguobacterium 속 미기록종 15J1-8 균주에 하여 16S rDNA 염기서열을 이

용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다. 15J1-8는

Exiguobacterium profundum과 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 7).

그림 7. 방사선 내성 Exiguobacterium 속 발굴종의 계통수

6) Flavisolibacter 속 발굴종 (LCS9T)

Flavisolibacter 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Bacteroidetes 문에 속하

며 Chitinophagaceae 과에 속한다. Flavisolibacter 속은 2007년 국내 연구자인

임완택 교수에 의하여 최 로 보고되었으며 재까지 4개의 종이 발표되었다.

Flavisolibacter ginsengiterrae가 이 속을 표하는 표 균주(type species)이

다. 최근 Flavisolibacter 속은 방사선에 내성을 가지는 것으로 밝 졌고 그 이후

이 속에 포함된 종들 방사선 내성을 가지고 있는 종들이 발표되고 있다. 이

속의 종들은 여러 환경에서 발견이 되고 있다. 확보된 Flaviosolibacter tropicus

LCS9T는 Flavisolibacter ginsengisoli KCTC 12657T의 16S rRNA 유 자 염기

서열과 94.9%의 유사도로 신종으로 정하 다.

- 31 -

발굴된 Flavisolibacter 속 신종 LCS9T 균주에 하여 16S rDNA 염기서열

을 이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다. LCS9T는

Flavisolibacter ginsengisoli와 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 8).

그림 8. 방사선 내성 Flavisolibacter 속 발굴종의 계통수

7) Larkinella 속 발굴종 (SR1-5-4)

Larkinella 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Bacteriodetes 문에 속하며

Cytophagaceae 과에 속한다. Larkinella 속은 2006년 Vancanneyt에 의하여 보고

되었으며 재까지 3개의 종이 포함되어 있다. Larkinella insperata가 이 속을

표하는 표 균주(type speices)이다. 최근 Larkinella 속은 방사선에 내성을

가지는 것으로 밝 졌고 그 이후 이 속에 포함된 종들 방사선 내성을 가지고

있는 종들이 발표되고 있다. 이 속의 종들은 여러 환경에서 발견이 되고 있다.

확보된 Larkinella 속은 미기록종 1종이다. 미기록 후보종인 SR1-5-4는 Larkinella

insperata와 99.3%의 유사도를 보 다. 이 균주의 16S rDNA 유사도가 98.7%

이상이므로 미기록종으로 정하 다. 발굴된 Larkinella 속 미기록종 SR1-5-4

균주에 하여 16S rDNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법을 이용

하여 계통수를 그렸다. SR1-5-4는 Larkinella insperata와 연 이 있는 것을 확

인하 다(그림 9).

- 32 -

그림 9. 방사선 내성 Larkinella 속 발굴종 SR1-5-4의 계통수

8) Methylobacterium 속 발굴종 (15J10-8T5, KSM3-9)

Methylobacterium 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Proteobacteria 문에 속

하며 Methylobacteriaceae 과에 속한다. Methylobacterium 속은 1976년 Patt 등

에 의하여 보고되었으며 재까지 51개의 종이 포함되어 있다. Methylobacterium

organophilum가 이 속을 표하는 표 균주(type species)이다.

확보된 Methylobacterium 속 미기록종 2종으로 구성된다. 미기록종인

15J10-8T5는 Methylobacterium hispanicum와 99.9%, KSM3-9는

Methylobacterium soli와 98.8%의 유사도를 보 다. 두 균주의 16S rDNA 유사

도가 98.7% 이상이므로 미기록종으로 정하 다.

발굴된 Methylobacterium 속 미기록종 15J10-8T5와 KSM3-9 균주에 하

여 16S rDNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수

를 그렸다. 15J10-8T5는 Methylobacterium hispanicum, KSM3-9는

Methylobacterium soli와 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 10).

- 33 -

그림 10. 방사선 내성 Methylobacterium 속 발굴종의 계통수

- 34 -

9) Microvirga 속 발굴종 (15J8-3, 15J7-3T5)

Microvirga 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Proteobacteria 문에 속하며

Methylobacteriaceae 과에 속한다. Microvirga 속은 2003년 Kanso와 Patel에 의

하여 최 로 보고되었으며 재까지 9개의 종이 포함되어 있다. Microvirga

subterranea가 이 속을 표하는 표 균주(type species)이다.

확보된 Microvirga 속 미기록종 2종으로 구성된다. 미기록 후보종인 15J8-3는

Microvirga subterranea와 99.8%, 15J7-3T5는 Microvirga zambiensis와

99.2%의 유사도를 보 다. 두 균주의 16S rDNA 유사도가 98.7% 이상이므로 미

기록종으로 정하 다.

발굴된 Microvirga 속 미기록종 15J8-3와 15J7-3T5 균주에 하여 16S

rDNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸

다. 15J8-3는 Microvirga subterranea, 15J7-3T5는 Microvirga zambiensis와

연 이 있는 것을 확인하 다(그림 11).

그림 11. 방사선 내성 Microvirga 속 발굴종의 계통수

- 35 -

10) Nibribacter 속 발굴종 (DG15CT)

Nibribacter 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Bacteroidetes 문에 속하며

Hymenobacteraceae 과에 속한다. Nibribacter 속은 2013년 장 엽 교수에 의하

여 보고되었으며 재까지 1개의 종이 발표되었다. Nibribacter koreensis가 이

속을 표하는 표 균주(type species)이다. 최근 Nibribacter 속은 방사선에

내성을 가지는 것으로 밝 졌다. 확보된 Nibribacter sp. DG15CT는 Nibribacter

koreensis JN607156T의 16S rRNA 유 자 염기서열과 98.6%의 유사도로 신종

으로 정하 다. 발굴된 Nibribacter 속 신종 DG15CT 균주에 하여 16S

rDNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다.

DG15CT는 Nibribacter koreensis와 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 12).

그림 12. 방사선 내성 Nibribacter 속 발굴종의 계통수

- 36 -

11) Pantoea 속 발굴종 (15J17K)

Pantoea 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Proteobacteria 문에 속하며

Enterobacteriaceae 과에 속한다. Pantoea 속은 1989년 Gavini 등에 의하여 최

로 보고되었으며 재까지 25개의 종이 포함되어 있다. Pantoea agglomerans

가 이 속을 표하는 표 균주(type species)이다.

확보된 Pantoea 속의 발굴종은 미기록종 1종이었다. 미기록종인 15J17K는

Pantoea eucrina와 99.8%의 유사도를 보 다. 이 균주의 16S rDNA 유사도가

98.7% 이상이므로 미기록종으로 정하 다.

발굴된 Pantoea 속 미기록종 15J17K 균주에 하여 16S rDNA 염기서열을

이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다. 15J17K는

Pantoea eucrina와 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 13).

그림 13. 방사선 내성 Pantoea 속 발굴종의 계통수

12) Pseudokineococcus 속 발굴종(15J13-6)

Pseudokineococcus 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Actinobacteria 문에

속하며 Kineosporiaceae 과에 속한다. Pseudokineococcus 속은 2011년 Jurado

등에 의하여 최 로 보고되었으며 재까지 2개의 종이 포함되어 있다.

- 37 -

Pseudokineococcus lusitanus가 이 속을 표하는 표 균주(type species)

이다. 확보된 Pseudokineococcus 속 미기록종 1종으로 구성된다. 미기록종인

15J13-6는 Pseudokineococcus lusitanus와 99.4%의 유사도를 보 다. 이 균주

의 16S rDNA 유사도가 98.7% 이상이므로 미기록종으로 정하 다.

발굴된 Pseudokineococcus 속 미기록종 15J13-6 균주에 하여 16S rDNA

염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다.

15J13-6는 Pseudokineococcus lusitanus와 연 이 있는 것을 확인하 다(그림

14).

그림 14. 방사선 내성 Pseudokineococcus 속 발굴종의 계통수

13) Psychrobacter 속 발굴종 (15ML1C, 216MGT3, 216MGM6, 16MFM4)

Psychrobacter 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Proteobacteria 문에 속하

며 Moraxellaceae 과에 속한다. Psychrobacter 속은 1986년 Juni와 Heym에 의

하여 보고되었으며 재까지 36개의 종이 포함되어 있다. Hymenobacter

roseosalivarius가 이 속을 표하는 표 균주(type species)이다.

확보된 Psychrobacter 속 미기록종 4종으로 구성된다. 미기록종인 15ML1C는

Psychrobacter cryohalolentis와 99.4%, 216MGT3는 Psychrobacter maritimus

와 99.5%, 216MGM6는 Psychrobacter okhotskensis와 99.7%, 16MFM4는

- 38 -

Psychrobacter urativorans와 99.7%의 유사도를 보 다. 네 개 균주의 16S

rDNA 유사도가 98.7% 이상이므로 미기록종으로 정하 다.

발굴된 Psychrobacter 속 미기록종 15ML1C, 216MGT3, 216MGM6와

16MFM4 균주에 하여 16S rDNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방

법을 이용하여 계통수를 그렸다. 15ML1C는 Psychrobacter cryohalolentis,

216MTG3는 Psychrobacter maritimus, 216MGM6는 Psychrobacter

okhotskensis, 16MFM4는 Psychrobacter urativorans와 연 이 있는 것을 확인

하 다(그림 15).

그림 15. 방사선 내성 Psychrobacter 속 발굴종의 계통수

- 39 -

14) Rufibacter 속 발굴종 (DG31DT)

Rufibacter 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Bacteroidetes 문에 속하며

Hymenobacteraceae 과에 속한다. Rufibacter 속은 2014년 Abaydulla 등에 의하

여 최 로 보고되었으며 재까지 4개의 종이 발표되었다. Rufibacter tibetensis

가 이 속을 표하는 표 균주(type species)이다. 최근 Rufibacter 속은 방사선

에 내성을 가지는 것으로 밝 졌다.

확보된 Rufibacter radiotolerans DG31DT는 Rufibacter immobilis

HG316123T의 16S rRNA 유 자 염기서열과 97.1%의 유사도로 신종으로 정

하 다(그림 16).

그림 16. 방사선 내성 Rufibacter 속 발굴종의 계통수

- 40 -

15) Spirosoma 속 발굴종 (15J8-11)

Spirosoma 속은 Bacteria의 범 에 들어가고 Bacteroidetes 문에 속하며

Cytophagaceae 과에 속한다. Spirosoma 속은 1894년 Migula 등에 의하여 최

로 보고되었으며 재까지 10개의 종이 발표되었다. Spirosoma linguale가 이

속을 표하는 표 균주(type species)이다. 최근 Spirosoma 속은 방사선에 내

성을 가지는 것으로 밝 졌고 그 이후 이 속에 포함된 종들 방사선 내성을

가지고 있는 종들이 발표되고 있다. 이 속의 종들은 여러 환경에서 발견이 되고

있다.

확보된 Spirosoma 속의 발굴종은 미기록종 1종이다. 미기록종인 15J8-11는

Spirosoma endophyticum와 99.3%의 유사도를 보 다. 이 균주의 16S rDNA 유

사도가 98.7% 이상이므로 미기록종으로 정하 다.

발굴된 Spirosoma 속 미기록종 15J8-11 균주에 하여 16S rDNA 염기서

열을 이용하여 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다. 15J8-11는

Spirosoma endophyticum와 연 이 있는 것을 확인하 다(그림 17).

그림 17. 방사선 내성 Spirosoma 속 발굴종의 계통수

- 41 -

16) 방사선 내성 신종/미기록종 주요종에 한 방사선 내성 분석 결과

방사선 내성 신종/미기록종 후보종 20종에 방사선 내성을 분석한 결과 모든

균이 내성이 있었다. 그 내성이 신종/미기록종 각 2종에 한 결과를 아래에

서술하고 나머지 결과는 부록 2에 첨부하 다.

가) Rufibacter sp. DG31DT

Rufibacter sp. DG31DT 균주의 방사선 내성을 양성 조군인 D.

radiodurans R1과 음성 조군인 E. coli K12와 비교하여 분석하 다. D.

radiodurans R1(■), E. coli K12(●)와 이 연구에서 분리한 DG31DT(▲) 균주를

감마선의 세기를 3, 6, 9, 12, 15 kGy로 변화시키면서 방사선 내성을 분석한 결

과이다. DG31DT(▲)는 3 kGy까지는 D. radiodurans R1(■)와 비슷한 방사선

내성을 보 고, 6 kGy에서는 R1과 2/3, 12 kGy에서는 R1과 약 1/10 수 의 내

성을 보 다. 음성 조군인 E. coli K12(●)는 3 kGy 세기의 감마선에서 완

사멸하 다(그림 18).

그림 18. Rufibacter sp. DG31DT의 감마선 내성 실험 결과

나) Nibribacter sp. DG15CT

Nibribacter sp. DG15CT 균주의 방사선 내성을 양성 조군인 D.

radiodurans R1과 음성 조군인 E. coli K12와 비교하여 분석하 다. D.

radiodurans R1(■), E. coli K12(●)와 이 연구에서 분리한 DG15CT(▲) 균주를

감마선의 세기를 3, 6, 9, 12, 15 kGy로 변화시키면서 방사선 내성을 분석한 결

과이다. DG15CT(▲)는 3 kGy까지는 D. radiodurans R1(■)와 비슷한 방사선

내성을 보 고, 6 kGy에서는 R1과 2/3, 6 kGy에서는 R1과 약 2/10 수 의 내성

을 보 다. 음성 조군인 E. coli K12(●)는 3 kGy 세기의 감마선에서 완 사

멸하 다(그림 19).

- 42 -

그림 19. Nibribacter sp. DG15CT의 감마선 내성 실험 결과

다) Carnobacterium iners 16MFM10

Carnobacterium iners 16MFM10 균 주의 방사선 내성을 양 성 조군인 D.

radiodurans R1과 음성 조군인 E. coli K12와 비교 하여 분석하 다. D.

radiodurans R1(■), E. coli K12(●)와 이 연구에서 분리한 16MFM10(▲) 균

주를 자외선 의 세기 를 300, 600, 900, 1,200 J/m2으 로 변화 시키면 서 방사 선 내

성을 분석한 결과이 다. 16MFM10(▲)는 100 J/m2까 지는 D. radiodurans R1

(■)와 비슷 한 방 사선 내성을 보 고, 300 J/m2에서 는 R1과 약 1/10 수 의 내

성을 보 고 1,200 J/m2까지 도 비슷 한 내성을 보 다. 음 성 조 군인 E. coli

K12(●)는 100 J/m2 세기 의 자외선에 서 완 사 멸하 다(그림 20).

라) Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C

Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C 균 주의 방 사선 내 성을 양 성 조 군

인 D. radiodurans R1과 음 성 조군인 E. coli K12와 비 교하여 분석하 다 .

D. radiodurans R1(■), E. coli K12(●)와 이 연구에 서 분리한 15ML1C(▲)

균주 를 자외 선의 세기 를 300, 600, 900, 1,200 J/m2으로 변화 시키면 서 방사 선

내성을 분석한 결과이 다. 15ML1C(▲)는 100 J/m2까지는 D. radiodurans R1

(■)와 비슷 한 방 사선 내성을 보 고, 300 J/m2에서 는 R1과 약 1/10 수 의 내

성을 보 고 600 J/m2에서는 약 1/100 수 의 내성을 보 다 . 음성 조군인

E. coli K12(●)는 100 J/m2 세기의 자외 선에서 완 사멸 하 다 (그림 21).

- 43 -

그림 20. Carnobacterium iners 16MFM10의 자외선 내성 실험 결과

그림 21. Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C의 자외선 내성 실험 결과

- 44 -

다. 호염성 미생물

해양퇴 물 시료를 artificial seawater medium에 히 희석하여 slurry화

한 뒤에, 15%(w/v) NaCl로 조 된 marine agar plate에 spreading하여, 배양된

colony들의 16S rRNA 유 자 염기서열을 확보하고, EzTaxon을 이용하여 기존

표 균주 DB와 비교하여 16S rRNA 염기서열의 유사도를 확인하 다. 염기서

열 유사도 분석 결과 확보된 호염성 미생물 배양체는 Marinobacter와

Halomonas 속 각각 1종씩, 총 2종이 확인되었다.

1) Marinobacter 속 발굴종 (Hb8)

Marinobacter 속은 1992년 Gauthier 등에 의하여 보고되었으며 재까지

40개의 종이 보고되었다. 부분의 종들은 해수, 해안모래, 퇴 물 등 다양한 해

양환경에서 발굴되었으며, 몇몇 종들은 aromatic aliphatic hydrocarbon 분해

와 연 이 있는 것으로 확인되고 있다.

발굴된 Marinobacter 속 1종은 신종 후보로 발굴되었다. 신종 후보종의 균

주명은 Hb8이다. 이 균주는 Marinobacter sediminum R65의 16S rRNA 유 자

유사도가 약 98% 다.

발굴된 신종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여

neighbor-joining 방법 등을 이용하여 계통수를 그렸다(그림 22).

2) Halomonas 속 발굴종 (Hb3)

Halomonas 속은 1980년 Vreeland 등에 의하여 보고되었으며 재까지 91

개의 종이 보고되었다. 부분의 종들은 염 을 포함한, 다양한 염 환경에서 발

굴되었으며, 몇몇 종들은 exopolysaccharid를 생산하는 것으로 확인되고 있다.

발굴된 Halomonas 속 1종은 신종 후보로 발굴되었다. 신종 후보종의 균주

명은 Hb3이다. 이 균주는 Halomonas ventosae Al12의 16S rRNA 유 자유사

도가 98.4% 다.

발굴된 신종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여


- 45 -

그림 22. 호염성 Marinobacter 속 발굴종의 계통수

- 46 -

그림 23. 호염성 Halomonas 속 발굴종의 계통수

라. 호산성 미생물

산성토양퇴 물 시료를 artificial freshwater medium에 히 희석하여

slurry화한 뒤에, pH를 4∼5로 조 된 R2A plate에 spreading하여, 배양된

colony들의 16S rRNA 유 자 염기서열을 확보하고 16S rRNA 염기서열의 유

사도를 확인하 다. 염기서열 유사도 분석 결과 확보된 호산성 미생물 배양체는

Betaproteobacteria 3종, Gammaproteobacteria 4종, Alphaproteobacteia 1종, 총

8종이 확인되었다.

- 47 -

1) Achromobacter 속 발굴종 (4-8)

Achromobacter 속은 1981년 Yabuuchi와 Yano에 의하여 보고되었으며

재까지 16개의 종이 보고되었다. Achromobacter xylosoxidans가 이 속을 표

하는 표 균주(type species)이다.

발굴된 Achromobacter 속 발굴종은 미기록종이었다. 이 균주는

Achromobacter spanius LMG5911의 16S rRNA 유 자 유사도가 99.85% 다.

발굴된 미기록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여


2) Aquitalea 속 발굴종 (4-10)

Aquitalea 속은 2006년 Lau 등에 의하여 보고되었으며 재까지 3개의 종이

보고되었다. Aquitalea magnusonii가 이 속을 표하는 표 균주(type species)

이다.

발굴된 Aquitalea 속 발굴종은 미기록종이었다. 이 균주는 Aquitalea

magnusonii LMG23054의 16S rRNA 유 자 유사도가 99.34% 다. 발굴된 미기

록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방

법 등을 이용하여 계통수를 그렸다(그림 24).

3) Ideonella 속 발굴종 (4-19)

Ideonella 속은 1994년 Malmqvist 등에 의하여 보고되었으며 재까지 3개

의 종이 보고되었다. Ideonella dechloratans가 이 속을 표하는 표 균주

(type species)이다.

발굴된 Ideonella 속 발굴종은 미기록종이었다. 이 균주는 Ideonella

dechloratans LMG5911의 16S rRNA 유 자 유사도가 99.71% 다. 발굴된 미기

록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방

법 등을 이용하여 계통수를 그렸다(그림 24).

- 48 -

그림 24. 호산성 발굴종 4-8, 4-10, 4-19의 계통수

- 49 -

4) Bradyrhizobium 속 발굴종 (B8)

Bradyrhizobium 속은 1982년 Jordan에 의하여 보고되었으며 재까지 32

개의 종이 보고되었다. Bradyrhizobium japonicum가 이 속을 표하는 표

균주(type species)이다.

발굴된 Bradyrhizobium 속 발굴종은 미기록종이었다. 이 균주는

Bradyrhizobium erythrophlei LMG28425의 16S rRNA 유 자 유사도가

99.85% 다. 발굴된 미기록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하

여 neighbor-joining 방법 등을 이용하여 계통수를 그렸다(그림 25).

그림 25. 호산성 발굴종 B8의 계통수

- 50 -

5) Acineobacter 속 발굴종 (4-15)

Acineobacter 속은 1954년 Brisou와 Prévot에 의하여 보고되었으며 재

까지 51개의 종이 보고되었다. Acinetobacter calcoaceticus가 이 속을 표하

는 표 균주(type species)이다.

발굴된 Acineobacter 속 발굴종은 미기록종이었다. 이 균주는

Achromobacter bereziniae LMG1003의 16S rRNA 유 자 유사도가 99.8%

다. 발굴된 미기록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여


6) Pseudomonas 속 발굴종 (4-20)

Pseudomonas 속은 1984년 Migula에 의하여 보고되었으며 재까지 235개

의 종이 보고되었다. Pseudomonas aeruginosa가 이 속을 표하는 표 균

주(type species)이다.

발굴된 Pseudomonas 속 발굴종은 미기록종이었다. 이 균주는 Pseudomonas

extremaustralis DSM17835의 16S rRNA 유 자 유사도가 99.85% 다. 발굴된

미기록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining

방법 등을 이용하여 계통수를 그렸다(그림 26).

7) Serratia 속 발굴종 (AS15)

Serratia 속은 1823년 Bizio에 의하여 보고되었으며 재까지 19개의 종이

보고되었다. Serratia marcescens가 이 속을 표하는 표 균주(type

species)이다.

발굴된 Serratia 속 발굴종은 미기록종이었다. 이 균주는 Serratia fonticola

LMG7882의 16S rRNA 유 자 유사도가 99.85% 다. 발굴된 미기록종 후보균

주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법등을 이용

하여 계통수를 그렸다(그림 26).

8) Luteibacter 속 발굴종 (AD38)

Luteibacter 속은 2005년 Johansen 등에 의하여 보고되었으며 재까지 3

개의 종이 보고되었다. Luteibacter rhizovicinus가 이 속을 표하는 표 균


발굴된 Luteibacter 속 발굴종은 미기록종이었다. 이 균주는 Luteibacter

anthropi CCUG25036의 16S rRNA 유 자 유사도가 99.7% 다. 발굴된 미기록

종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법

등을 이용하여 계통수를 그렸다(그림 26).

- 51 -

그림 26. 호산성 발굴종 4-15, 4-20, AS15, AD38의 계통수

- 52 -

마. 기성 미생물

서해 가로림만 조간 갯벌 시료를 이용하여 획득한 기성 미생물 배양체

는 Desulfuromonas 속 1종, Desulfovibrio 속 1종으로 확인되었다. 획득한

Desulfuromonas 속 1개 균주의 명명은 ANS1이며, Desulfovibrio 속 1개 균주의

명명은 ANS2이다.

1) Desulfuromonas 속 발굴종 (ANS1)

Desulfuromonas 속은 1977년 Pfennig and Biebl에 의해 보고되었으며, 분류

상 Desulfuromonadales와 Desulfuromonadaceae의 표 속이다. 이후 8종이 발

표되어 있으며, 주로 황 환원을 하는 Gram-negative 균속으로, 주로 염호나

기성의 해양 퇴 층 혹은 담수와 해수가 섞이는 지역에서 발견된다.

발굴된 Desulfuromonas 속 1개 신종후보군의 균주명은 ANS1이며

Desulfuromonas palmitatis와 16S rRNA 유 자의 97.71%의 유사도를 보여 신

종 후보종으로 정하 다. 발굴된 신종 후보종 ANS1에 하여 근연종들과의

16S rRNA gene 서열을 이용한 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그

렸다. 분류상 Probacteria; Deltaproteobacteria; Desulfurmonadales; Desulfuromonadacae;

Desulfuromonas에 속함을 확인하 다(그림 27).

2) Desulfovibrio 속 발굴종 (ANS2)

Desulfovibrio 속은 기성의 sulfate-reducing bacteria로써 다양한 환경에

서 발견된다. 오랫동안 기성으로 알려져 왔으나, 산소 존재 하에 제한 으

로 성장하며, 내기성을 가진다. 염수와 담수 모두 수침된 토양 등의 수계 환경에

서 높은 유기물 농도와 함께 쉽게 보이며, 동물의 장내에서 역시 발견되며 깊은

화강암질 암석의 균열속의 극도의 빈 양 생태계에서는 주요 군집 종으로 발견

된다. 한편, uranium (VI), chromium (VI) 그리고 iron (III) 등의 속을 환원시

키는 능력을 가지고 있어 bioremediator 역할로써 연구 상이기도 하다.

발굴된 Desulfovibrio 속 1개 신종후보군의 균주명은 ANS2이며

Desulfovibrio piezophilus와 16S rRNA 유 자의 94.09%의 유사도를 보여 신종

후보종으로 정하 다.

발굴된 신종 후보종 ANS2에 하여 근연종들과의 16S rRNA gene 서열을

이용한 neighbor-joining 방법을 이용하여 계통수를 그렸다. 분류상

Proteobacteria; Deltaproteobacteria; Desulfovibrionales; Desulfovibrionaceae

속함을 확인하 다(그림 28).

- 53 -

그림 27. 기성 발굴종 ANS1의 계통수

그림 28. 기성 발굴종 ANS2의 계통수

- 54 -

바. 이탄층 미생물

강원도 인제군 용늪과 오 산 소황병산늪 이탄층에서 신종 미생물 2종과 미기

록종 1종을 발굴하 다.

1) Janthinobacterium 속 발굴종 (R-2-5)

Janthinobacterium 속은 1978년 De Ley에 의하여 보고되었으며 재까지

2개의 종이 보고되었다. Janthinobacterium lividum이 이 속을 표하는 표


강원도 인제군 암산에 치한 용늪 퇴 층 구간에서 채취한 토양에서

이탄층 신종 후보종 1종을 분리하 다. 발굴된 균주명은 R-2-5로

Janthinobacterium lividum LMG2892의 16SrRNA 유사도가 98.13%로 신종으

로 정하 다. 발굴된 신종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하

여 neighbor-joining 방법 등을 이용하여 계통수를 그렸다(그림 29).

그림 29. 이탄층 발굴종 R-2-5의 계통수

- 55 -

2) Methylomonas 속 발굴종 JS821

Methylomonas 속은 1984년 Whittenbury and Krieg에 의하여 보고되었으

며 재까지 8개의 종이 보고되었다. Methylomonas methanica가 이 속을

표하는 표 균주(type species)이다.

강원도 오 산에 치한 이탄습지 소황병산늪 퇴 층 20 cm 구간에서 채

취한 토양에서 이탄층 미생물에서 신종 후보 1종을 분리하 다. 발굴된 균주

JS821 균주는 Methylomonas paludis DSM24973의 16S rRNA 97.76%으로 유

사도를 보여, 신종으로 정하 다. 발굴된 신종 후보균주에 하여 16S

rRNA 염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법 등을 이용하여 계통수를

그렸다(그림 30).

그림 30. 이탄층 발굴종 JS821의 계통수

- 56 -

3) Curvibacter 속 발굴종 (R-1-5)

Curvibacter 속은 2004년 Ding와 Yokota에 의하여 보고되었으며 재까

지 4개의 종이 보고되었다. Curvibacter gracilis가 이 속을 표하는 표 균


강원도 인제군 암산에 치한 용늪 퇴 층 구간에서 채취한 토양에서 이

탄층 미기록종 후보종 1종을 분리하 다. 발굴된 균주 R-1-5로는 Curvibacter

lanceolatus NBRC103051와 16S rRNA 100% 유사도를 보여 미기록종으로 정

하 다. 발굴된 미기록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여


그림 31. 이탄층 발굴종 R-1-5의 계통수

- 57 -

사. 멸종 기 동물 장내 미생물

확보된 멸종 기 동물 장내 미생물의 순수 배양체의 16S rRNA 유 자 염

기서열을 확보하고, EzTaxon을 이용하여 기존 표 균주 DB와 비교하여 16S

rRNA 염기서열의 유사도를 확인하 다. EzTaxon을 이용한 염기서열 유사도

분석 결과 확보된 멸종 기 장내 미생물 배양체 5종에서 기존 발굴된 미생물과

유 차이가 98.75% 이하로 확인되어 신종으로 악되는 Vagococcus 속 1종

과 기존 미생물과 유 차이가 98.75% 이상이지만, 한국에서는 발굴된 인

없는 미발굴종 4종을 확보하 다. 미발굴종으로는 Microbacterium 속 1종,

Ochrobactrum 속 1종, Lysinibacillus 속 1종, Streptococcus 속 1종이 발굴되었다

(그림 32, 33, 34, 35, 36).

1) Vagococcus 속 발굴종 (D7T301)

Vagococcus 속은 1990년 Collins 등에 의하여 보고되었으며 재까지 9개

의 종이 보고되었다. Vagococcus fluvialis가 이 속을 표하는 표 균주(type

species)이다.

멸종 기 동물인 담비 장내에서 신종 후보종 1종을 분리하 다. 발굴된 균

주명은 D7T301로 Vagococcus penaei LMG24833과 16SrRNA 유사도가

98.36%로 신종으로 정하 다. 발굴된 신종 후보균주에 하여 16S rRNA

염기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법 등을 이용하여 계통수를 그렸다

(그림 32).

그림 32. 멸종 기 동물 장내 발굴종 D7T301의 계통수

- 58 -

2) Microbacterium 속 발굴종 (M3R204)

Microbacterium 속은 1919년 Orla-Jensen에 의하여 보고되었으며 재까

지 97개의 종이 보고되었다. Microbacterium lacticum가 이 속을 표하는 표


멸종 기 동물인 사향노루 장내에서 분리된 균주 M3R204는 Microbacterium

oxydans JCM12414와 16SrRNA 유사도가 98.85%로 미기록종으로 정하 다.

발굴된 미기록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여


그림 33. 멸종 기 동물 장내 발굴종 M3R204의 계통수

- 59 -

3) Ochobactrum 속 발굴종 (M3R205)

Ochobactrum 속은 1988년 Holmes 등에 의하여 보고되었으며 재까지

17개의 종이 보고되었다. Ochrobactrum anthropi가 이 속을 표하는 표 균


멸종 기 동물인 사향노루 장내에서 분리된 균주 M3R205는 Ochrobactrum

pituitosum DSM22207과 16SrRNA 유사도가 99.62%로 미기록종으로 정하

다. 발굴된 미기록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용하여


그림 34. 멸종 기 동물 장내 발굴종 M3R205의 계통수

- 60 -

4) Lysinibacillus 속 발굴종 (M1T305)

Lysinibacillus 속은 2007년 Ahmed 등에 의하여 보고되었으며 재까지

16개의 종이 보고되었다. Lysinibacillus boronitolerans가 이 속을 표하는 표


멸종 기 동물인 사향노루 장내에서 분리된 균주 M1T305는

Lysinibacillus mangiferahumi과 16SrRNA 유사도가 99.19%로 미기록종으로

정하 다. 발굴된 미기록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염기서열을 이용

하여 neighbor-joining 방법 등을 이용하여 계통수를 그렸다(그림 35).

그림 35. 멸종 기 동물 장내 발굴종 M1T305의 계통수

- 61 -

5) Streptococcus 속 발굴종 (M1T307)

Streptococcus 속은 1984년 Rosenbach에 의하여 보고되었으며 재까지

117개의 종이 보고되었다. Streptococcus pyogene가 이 속을 표하는 표 균


멸종 기 동물인 사향노루 장내에서 분리된 균주 M1T307은 Streptococcus

gallolyticus subsp. macedonicus LMG18488과 16SrRNA 유사도가 99.70%로

미기록종으로 정하 다. 발굴된 미기록종 후보균주에 하여 16S rRNA 염

기서열을 이용하여 neighbor-joining 방법 등을 이용하여 계통수를 그렸다(그

림 36).

그림 36. 멸종 기 동물 장내 발굴종 M1T307의 계통수

- 62 -

2. 생리 학 특성 정 보 확 보

가. 방사선 내성 미생물자원 신종 후보종 분류군

1) Deinoccous sp. KSM4-11

KSM4-11 균주는 그람 음성을 나타내었으며, 짧은 막 모양이다(그림 37).

콜로니의 색은 진노랑색이고(그림 37), 세포 크기는 약 1.5-2.0 μm 다. 성장

온도는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. KSM4-11의 16S rRNA 유

자 염기서열을 분석한 결과, KSM4-11 균주는 Deinoccous radioresistens와

98.6% 상동성을 보여주었다. KSM4-11은 N–acetyl-β-glucosaminidase, acid

phosphatase, alkaline phosphatase, esterase (C4), β-galactosidase (ONPG), α

-glucosidase (starch hydrolysis), β-glucosidase, leucine arylamidase, valine

arylamidase 등의 효소들을 가지고 있다.

그림 37. 방사선 내성 Deinococcus 속 발굴종 KSM4-11의 자 미경과

배양체 사진

2) Flavisolibacter sp. LCS9T

LCS9T 균주는 그람 음성을 나타내었으며, 긴 막 모양이다(그림 38). 콜로

니의 색은 진노랑색이고(그림 38), 세포 크기는 약 2.2-3.5 μm 다. 성장 온도

는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. LCS9T의 16S rRNA 유 자 염기

서열을 분석한 결과, LCS9T균주는 Flavisolibacter ginsengisoli와 94.9% 상동

성을 보여주었다. LCS9T은 N-acetyl-β-glucosaminidase, acid phosphatase,

alkaline phosphatase, α-chymotrypsin, cystine arylamidase, β-galactosidase

(PNPG), α-glucosidase, β-glucosidase (esculin hydrolysis), leucine

arylamidase, naphtol-AS-BI-phosphohydrolase, protease (gelatin hydrolysis),

trypsin and valine arylamidase 등의 효소들을 가지고 있다.

- 63 -

그림 38. 방사선 내성 Flavisolibacter 속 발굴종 LCS9T의 자 미경과

배양체 사진

3) Nibribacter sp. DG15CT

DG15C 균주는 그람 음성을 나타내었으며, 짧은 막 모양이다(그림 39). 콜

로니의 색은 붉은색이고(그림 39), 세포 크기는 약 1.8-3.6 μm 다. 성장 온도

는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. DG15C의 16S rRNA 유 자 염

기서열을 분석한 결과, DG15C균주는 Nibribacter koreensis와 98.6% 상동성

을 보여주었다. DG15C는 acid phosphatase, alkaline phosphatase, α-

chymotrypsin, cystine arylamidase, esterase (C8), β-galactosidase (PNPG),

α-glucosidase (starch hydrolysis), β-glucosidase (esculin hydrolysis), leucine

arylamidase, naphtol-AS-BI-phosphohydrolase and valine arylamidase 등의 효

소들을 가지고 있다.

그림 39. 방사선 내성 Nibribacter 속 발굴종 DG15CT의 자 미경과

배양체 사진

4) Rufibacter sp. DG31DT

DG31DT 균주는 그람 음성을 나타내었으며, 짧은 막 모양이다(그림 40).

콜로니의 색은 연한 붉은색이고(그림 40), 세포 크기는 약 1.5-2.4 μm 다. 성

장 온도는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. DG31DT의 16S rRNA 유

자 염기서열을 분석한 결과, DG31DT 균주는 Rufibacter immobilis와 97.1%

- 64 -

상동성을 보여주었다. DG31DT는 acid phosphatase, alkaline phosphatase,

cystine arylamidase, esterase (C4), esterase (C8), β-galactosidase (ONPG),

α-galactosidase, α-glucosidase (starch hydrolysis), β-glucosidase, leucine

arylamidase, naphtol-AS-BI-phosphohydrolase and valine arylamidase 등의

효소들을 가지고 있다.

그림 40. 방사선 내성 Rufibacter 속 발굴종 DG31DT의 주사 미경과

배양체 사진

나. 방사선 내성 미생물자원 미기록종 후보종 분류군

1) Bacillus selenatarsenatis 15J4M-1

15J4M-1 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 편모(flagella)가 있고 막 모양

이다. 콜로니의 색은 연한 주황색이고(그림 41), 세포 크기는 약 1.0-1.5 μm 다.

성장 온도는 25℃ 으며 Marine agar 배지에서 잘 생장하 다. 15J4M-1의 16S

rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, 15J4M-1 균주는 Bacillus

selenatarsenatis와 99.4% 상동성을 보여주었다.

BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 15J4M-1는 acetic acid,

acetoacetic acid, N-acetyl-D-galactosamine, N-acetyl-D-mannosamine,

D-arabitol, L-arginine, D-aspartic acid, L-aspartic acid, D-cellobiose,

D-fructose, D-fructose 6-PO4, D-fucose, L-fucose, L-galactonic acid lactone,

D-galactose, D-galacturonic acid, gelatin, gentiobiose, D-gluconic acid, α-

D-glucose, D-glucose-6-PO4, glucuronamide, D-glucuronic acid, L-glutamic

acid, α-keto-glutaric acid, L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, α-

D-lactose, D-maltose, D-mannitol, D-mannose, D-melibiose, β-methyl-

D-glucoside, 3-methyl glucose, myo-inositol, pectin, propionic acid, glycyl-

L-proline, L-pyroglutamic acid, quinic acid, D-raffinose, L-rhamnose,

D-salicin, D-serine, L-serine, D-sorbitol, stachyose, sucrose, D-trehalose,

D-turanose를 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다.

- 65 -

그러나 N-acetyl-neuraminic acid, N-acetyl-D-glucosamine, L-alanine, ϒ-

amino-butryric acid, bromo-succinic acid, citric acid, dextrin, formic acid,

glycerol, L-histidine, α-hydroxybutyric acid, β-hydroxy-D,L-butyric acid,

p-hydroxy-phenylacetic acid, inosine, α-keto-butyric acid, D-malic acid,

L-malic acid, methyl pyruvate, mucic acid, D-saccharic acid, tween 40들을 탄

소원으로 이용하지 못했다.

그림 41. 방사선 내성 Bacillus 속 발굴종 15J4M-1의 자 미경과 배양체 사진

2) Brevibacterium luteolum 15J13-8

15J13-8 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 작은 막 모양이다(그림 42). 콜

로니의 색은 연한 노란색이고(그림 42), 세포 크기는 약 0.6-0.7 μm 다. 성장

온도는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. 15J13-8의 16S rRNA 유 자

염기서열을 분석한 결과, 15J13-8 균주는 Brevibacterium luteolum와 99.5% 상

동성을 보여주었다.

BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 15J13-8는 acetic acid,


N-acetyl-neuraminic acid, N-acetyl-D-glucosamine, L-alanine, ϒ-amino-

butryric acid, D-arabitol, L-arginine, L-aspartic acid, D-cellobiose, citric acid,

dextrin, formic acid, D-fructose, D-fructose 6-PO4, D-fucose, L-fucose,

L-galactonic acid lactone, D-galactose, D-galacturonic acid, gelatin,

gentiobiose, D-gluconic acid, α-D-glucose, D-glucose-6-PO4, glucuronamide,

D-glucuronic acid, L-glutamic acid, glycerol, L-histidine, α-hydroxybutyric

acid, p-hydroxy-phenylacetic acid, α-keto-butyric acid, α-keto-glutaric acid,

D-lactic acid methyl ester, α-D-lactose, D-malic acid, L-malic acid,

D-mannitol, D-mannose, D-melibiose, β-methyl-D-glucoside, 3-methyl

glucose, methyl pyruvate, mucic acid, myo-inositol, pectin, propionic acid,

glycyl-L-proline, L-pyroglutamic acid, quinic acid, D-raffinose, L-rhamnose,

- 66 -

D-saccharic acid, D-salicin, L-serine, D-sorbitol, stachyose, sucrose,

D-trehalose, D-turanose, tween 40를 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다. 그러

나 D-aspartic acid, bromo-succinic acid, β-hydroxy-D,L-butyric acid, inosine,

L-lactic acid, D-maltose, D-serine들을 탄소원으로 이용하지 못했다.

민감도 테스트 결과, 1% NaCl, 1% sodium lactate, 4% NaCl, 8% NaCl,

aztreonam, lithium chloride, nalidixic acid, niaproof 4, pH 6, potassium

tellurite, D-serine, sodium butyrate 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나

fusidic acid, guanidine HCl, lincomycin, minocycline, pH 5, rifamycin SV,

sodium bromate, tetrazolium blue, tetrazolium violet, troleandomycin,

vancomycin 조건 하에서는 발색이 되지 않았다.

그림 42. 방사선 내성 Brevibacterium 속 발굴종 15J13-8의 자 미경과

배양체 사진

3) Carnobacterium iners 16MFM10

16MFM10 균주는 그람 음성을 나타내었으며, 막 형모양이다(그림 43). 콜

로니의 색은 연한노란색이고(그림 43), 세포 크기는 약 1.5-2.0 μm 다. 성장 온

도는 25℃ 으며 Marine Agar배지에서 잘 생장하 다. 16MFM10의 16S rRNA

유 자 염기서열을 분석한 결과, 16MFM10 균주는 Carnobacterium iners와

99.6% 상동성을 보여주었다.

BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 16MFM10는 acetoacetic acid,

N-acetyl-D-galactosamine, N-acetyl-D-mannosamine, N-acetyl-neuraminic

acid, N-acetyl-D-glucosamine, L-arginine, dextrin, D-fructose, D-fructose

6-PO4, D-fucose, L-fucose, D-galactose, D-galacturonic acid, gentiobiose, α

-D-glucose, glucuronamide, D-glucuronic acid, glycerol, α-keto-butyric acid,

α-D-lactose, D-maltose, D-mannose, 3-methyl glucose, pectin, L-rhamnose,

D-saccharic acid, stachyose, sucrose, D-trehalose를 탄소원으로 하여 생장할

수 있었다. 그러나 acetic acid, L-alanine, ϒ-amino-butryric acid, D-arabitol,

- 67 -

D-aspartic acid, L-aspartic acid, bromo-succinic acid, D-cellobiose, citric

acid, formic acid, L-galactonic acid lactone, gelatin, D-gluconic acid,

D-glucose-6-PO4, L-glutamic acid, L-histidine, α-hydroxybutyric acid, β-

hydroxy-D,L-butyric acid, p-hydroxy-phenylacetic acid, inosine, α-keto-

glutaric acid, L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, D-malic acid, L-malic

acid, D-mannitol, D-melibiose, β-methyl-D-glucoside, methyl pyruvate,

mucic acid, myo-inositol, propionic acid, glycyl-L-proline, L-pyroglutamic

acid, quinic acid, D-raffinose, D-salicin, D-serine, L-serine, D-sorbitol,

D-turanose, tween 40들을 탄소원으로 이용하지 못했다.


aztreonam, fusidic acid, lincomycin, lithium chloride, minocycline, nalidixic

acid, pH 6, sodium butyrate, tetrazolium violet, troleandomycin 조건 하에서는

발색이 되었다. 그러나 guanidine HCl, niaproof 4, pH 5, potassium tellurite,

rifamycin SV, D-serine, sodium bromate, tetrazolium blue, vancomycin 조건

하에서는 발색이 되지 않았다.

그림 43. 방사선 내성 Carnobacterium 속 발굴종 16MFM10의 자 미경과

배양체 사진

4) Exiguobacterium profundum 15J1-8

15J1-8 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 편모(flagella)가 있고 작은 막

모양이다(그림 44). 콜로니의 색은 연한 몬색이고(그림 44), 세포 크기는 약

1.0-1.5 μm 다. 성장 온도는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. 15J1-8

의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, 15J1-8 균주는 Exiguobacterium

profundum와 99.3% 상동성을 보여주었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서

분석한 결과 15J1-8는 acetoacetic acid, N-acetyl-D-mannosamine, L-alanine,

L-arginine, L-aspartic acid, D-cellobiose, dextrin, D-fructose, D-fructose

6-PO4, L-galactonic acid lactone, D-galactose, D-galacturonic acid, gelatin,

- 68 -

gentiobiose, D-gluconic acid, α-D-glucose, glucuronamide, D-glucuronic acid,

L-glutamic acid, inosine, α-keto-glutaric acid, L-malic acid, D-maltose,

D-mannitol, D-mannose, D-melibiose, β-methyl-D-glucoside, 3-methyl

glucose, myo-inositol, pectin, propionic acid, glycyl-L-proline,

L-pyroglutamic acid, quinic acid, D-raffinose, L-rhamnose, L-serine,

stachyose, sucrose, D-trehalose, D-turanose 를 탄소원으로 하여 생장할 수 있

었다. 그러나 acetic acid, N-acetyl-D-galactosamine, N-acetyl-neuraminic

acid, N-acetyl-D-glucosamine, ϒ-amino-butryric acid, D-arabitol, D-aspartic

acid, bromo-succinic acid, citric acid, formic acid, D-fucose, L-fucose,

D-glucose-6-PO4, glycerol, L-histidine, α-hydroxybutyric acid, β-

hydroxy-D,L-butyric acid, p-hydroxy-phenylacetic acid, α-keto-butyric acid,

L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, α-D-lactose, D-malic acid, methyl

pyruvate, mucic acid, D-saccharic acid, D-salicin, D-serine, D-sorbitol, tween

40들을 탄소원으로 이용하지 못했다.


guanidine HCl, lithium chloride, pH 6, potassium tellurite, D-serine, sodium

butyrate, tetrazolium violet 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나 aztreonam,

fusidic acid, lincomycin, minocycline, nalidixic acid, niaproof 4, pH 5,

rifamycin SV, sodium bromate, tetrazolium blue, troleandomycin, vancomycin

조건 하에서는 발색이 되지 않았다.

그림 44. 방사선 내성 Exiguobacterium 속 발굴종 15J1-8의 자 미경과

배양체 사진

5) Larkinella insperata SR1-5-4

SR1-5-4 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 코일모양이다(그림 45). 콜로니

의 색은 연한 분홍색이고(그림 45), 세포 크기는 약 1.0-1.5 μm 다. 성장 온도

는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. SR1-5-4의 16S rRNA 유 자 염

- 69 -

기서열을 분석한 결과, SR1-5-4 균주는 Larkinella insperata와 99.3% 상동성을

보여주었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 SR1-5-4는

N-acetyl-D-galactosamine, D-fructose 6-PO4, N-acetyl-D-mannosamine,

N-acetyl-D-glucosamine, D-cellobiose, dextrin, D-fructose, D-fucose,

L-galactonic acid lactone, D-galactose, D-galacturonic acid, gentiobiose,

D-gluconic acid, α-D-glucose, D-glucose-6-PO4, glucuronamide, D-glucuronic

acid, α-D-lactose, D-maltose, D-mannose, D-melibiose, β-methyl-

D-glucoside, pectin, D-raffinose, L-rhamnose, D-salicin, stachyose, sucrose,

D-trehalose, D-turanose를 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다. 그러나 acetic

acid, acetoacetic acid, N-acetyl-neuraminic acid, L-alanine, ϒ-amino-butryric

acid, D-arabitol, L-arginine, D-aspartic acid, L-aspartic acid, bromo-succinic

acid, citric acid, formic acid, L-fucose, gelatin, β-hydroxy-D,L-butyric acid,

p-hydroxy-phenylacetic acid, inosine, α-keto-butyric acid, α-keto-glutaric

acid, L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, D-malic acid, L-malic acid,

D-mannitol, 3-methyl glucose, methyl pyruvate, mucic acid, myo-inositol,

propionic acid, glycyl-L-proline, L-pyroglutamic acid, quinic acid,

D-saccharic acid, D-serine, L-serine, D-sorbitol, tween 40들을 탄소원으로 이용

하지 못했다.

민감도 테스트 결과, 1% NaCl, aztreonam, nalidixic acid, pH 6, tetrazolium

blue, tetrazolium violet, vancomycin 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나 1%

sodium lactate, 4% NaCl, 8% NaCl, fusidic acid, guanidine HCl, lincomycin,

lithium chloride, minocycline, niaproof 4, pH 5, potassium tellurite, rifamycin

SV, D-serine, sodium bromate, sodium butyrate, troleandomycin 조건 하에서

는 발색이 되지 않았다.

그림 45. 방사선 내성 Larkinella 속 발굴종 SR1-5-4의 자 미경과 배양체 사진

- 70 -

6) Methylobacterium hispanicum 15J10-8T5

15J10-8T5 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 편모(Flagella)가 있고 작은 막

모양이다. 콜로니의 색은 연한 분홍색이고(그림 46), 세포 크기는 약 1.0-1.5

μm 다. 성장 온도는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. 15J10-8T5의

16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, 15J10-8T5 균주는

Methylobacterium hispanicum와 99.9% 상동성을 보여주었다. BIOLOG GEN

III 기기를 이용해서 분석한 결과 15J10-8T5는 acetic acid, acetoacetic acid,

D-aspartic acid, bromo-succinic acid, citric acid, D-fructose, glucuronamide,

L-glutamic acid, glycerol, β-hydroxy-D,L-butyric acid, α-keto-glutaric acid,

L-lactic acid, D-malic acid, L-malic acid, methyl pyruvate, mucic acid,

propionic acid, D-saccharic acid를 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다. 그러나

N-acetyl-D-galactosamine, N-acetyl-D-mannosamine, N-acetyl-neuraminic

acid, N-acetyl-D-glucosamine, L-alanine, ϒ-amino-butryric acid, D-arabitol,

L-arginine, L-aspartic acid, D-cellobiose, dextrin, formic acid, D-fructose

6-PO4, D-fucose, L-fucose, L-galactonic acid lactone, D-galactose,

D-galacturonic acid, gelatin, gentiobiose, D-gluconic acid, α-D-glucose,

D-glucose-6-PO4, D-glucuronic acid, L-histidine, α-hydroxybutyric acid,

p-hydroxy-phenylacetic acid, inosine, α-keto-butyric acid, D-lactic acid

methyl ester, α-D-lactose, D-maltose, D-mannitol, D-mannose, D-melibiose,

β-methyl-D-glucoside, 3-methyl glucose, myo-inositol, pectin, glycyl-L-

proline, L-pyroglutamic acid, quinic acid, D-raffinose, L-rhamnose, D-salicin,

D-serine, L-serine, D-sorbitol, stachyose, sucrose, D-trehalose, D-turanose,

tween 40들을 탄소원으로 이용하지 못했다.

민감도 테스트 결과, 1% sodium lactate, aztreonam, fusidic acid,

lincomycin, nalidixic acid, pH 6, rifamycin SV, sodium butyrate, tetrazolium

blue, tetrazolium violet 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나 1% NaCl, 4%

NaCl, 8% NaCl, guanidine HCl, lithium chloride, minocycline, niaproof 4, pH

5, potassium tellurite, D-serine, sodium bromate, troleandomycin, vancomycin


7) Methylobacterium soli KSM3-9

KSM3-9 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 편모(Flagella)가 있고 막 모양

이다. 콜로니의 색은 연한 분홍색이고(그림 46), 세포 크기는 약 1.5-2.0 μm 다.

- 71 -

성장 온도는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. KSM3-9의 16S rRNA

유 자 염기서열을 분석한 결과, KSM3-9 균주는 Methylobacterium soli와

98.8% 상동성을 보여주었다.

Methylobacterium hispanicum 15J10-8T5 Methylobacterium hispanicum 15J10-8T5

Methylobacterium soli KSM3-9 Methylobacterium soli KSM3-9

그림 46. 방사선 내성 Methylobacterium 속 발굴종의 자 미경과 배양체 사진

BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 KSM3-9는 formic acid,

D-fructose 6-PO4, D-fucose, L-fucose, D-galactose, glucuronamide,

D-glucuronic acid, L-glutamic acid, glycerol, α-keto-glutaric acid, L-lactic

acid, D-malic acid, L-malic acid, methyl pyruvate, L-rhamnose, D-saccharic

acid, L-serine을 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다. 그러나 acetic acid,


N-acetyl-neuraminic acid, N-acetyl-D-glucosamine, L-alanine, ϒ-amino-

butryric acid, D-arabitol, L-arginine, D-aspartic acid, L-aspartic acid,

bromo-succinic acid, D-cellobiose, citric acid, dextrin, D-fructose,

L-galactonic acid lactone, D-galacturonic acid, gelatin, gentiobiose, D-gluconic

acid, α-D-glucose, D-glucose-6-PO4, L-histidine, α-hydroxybutyric acid, β-

hydroxy-D,L-butyric acid, p-hydroxy-phenylacetic acid, inosine, α-keto-

- 72 -

butyric acid, D-lactic acid methyl ester, α-D-lactose, D-maltose, D-mannitol,

D-mannose, D-melibiose, β-methyl-D-glucoside, 3-methyl glucose, mucic

acid, myo-inositol, pectin, propionic acid, glycyl-L-proline, L-pyroglutamic

acid, quinic acid, D-raffinose, D-salicin, D-serine, D-sorbitol, stachyose,

sucrose, D-trehalose, D-turanose, tween 40들을 탄소원으로 이용하지 못했다.

민감도 테스트 결과, 1% sodium lactate, aztreonam, fusidic acid,

lincomycin, nalidixic acid, rifamycin SV, D-serine, sodium butyrate,

tetrazolium blue, tetrazolium violet 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나 1%

NaCl, 4% NaCl, 8% NaCl, guanidine HCl, lithium chloride, minocycline,

niaproof 4, pH 5, pH 6, potassium tellurite, sodium bromate, troleandomycin,


8) Microvirga subterranea 15J8-3

15J8-3 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 작은 막 모양이다(그림 47). 콜로

니의 색은 연한 노란색이고(그림 47), 세포 크기는 약 0.5-1.0 μm 다. 성장 온

도는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. 15J8-3의 16S rRNA 유 자 염

기서열을 분석한 결과, 15J8-3 균주는 Microvirga subterranea와 99.8% 상동성

을 보여주었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 15J8-3는 acetic

acid, acetoacetic acid, N-acetyl-D-mannosamine, N-acetyl-D-glucosamine,

D-cellobiose, dextrin, D-fructose, D-fructose 6-PO4, L-fucose, L-galactonic

acid lactone, D-galactose, D-galacturonic acid, gelatin, gentiobiose, D-gluconic

acid, α-D-glucose, D-glucose-6-PO4, glucuronamide, D-glucuronic acid,

inosine, α-keto-glutaric acid, L-lactic acid, L-malic acid, D-maltose,

D-mannitol, D-mannose, 3-methyl glucose, pectin, glycyl-L-proline,

L-rhamnose, L-serine, D-sorbitol, stachyose, sucrose, D-turanose를 탄소원으

로 하여 생장할 수 있었다.

그러나 N-acetyl-D-galactosamine, N-acetyl-neuraminic acid, L-alanine, ϒ-

amino-butryric acid, D-arabitol, L-arginine, D-aspartic acid, L-aspartic acid,

bromo-succinic acid, citric acid, formic acid, D-fucose, L-glutamic acid,

glycerol, L-histidine, α-hydroxybutyric acid, β-hydroxy-D,L-butyric acid,

p-hydroxy-phenylacetic acid, α-keto-butyric acid, D-lactic acid methyl ester,

α-D-lactose, D-malic acid, D-melibiose, β-methyl-D-glucoside, methyl

pyruvate, mucic acid, myo-inositol, propionic acid, L-pyroglutamic acid,

- 73 -

quinic acid, D-raffinose, D-saccharic acid, D-salicin, D-serine, D-trehalose,

tween 40들을 탄소원으로 이용하지 못했다. 민감도 테스트 결과, 1% NaCl, 1%

sodium lactate, fusidic acid, lincomycin, pH 6, potassium tellurite, sodium

butyrate, tetrazolium blue, tetrazolium violet 조건 하에서는 발색이 되었다. 그

러나 4% NaCl, 8% NaCl, aztreonam, guanidine HCl, lithium chloride,

minocycline, nalidixic acid, niaproof 4, pH 5, rifamycin SV, D-serine, sodium

bromate, troleandomycin, vancomycin 조건 하에서는 발색이 되지 않았다.

Microvirga subterranea 15J8-3 Microvirga subterranea15J8-3

Microvirga zambiensis 15J7-3T5 Microvirga zambiensis 15J7-3T5

그림 47. 방사선 내성 Microvirga 속 발굴종의 자 미경과 배양체 사진

9) Microvirga zambiensis 15J7-3T5

15J7-3T5 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 편모(Flagella)가 있고 작은 막

모양이다. 콜로니의 색은 연한 노란색이고(그림 47), 세포 크기는 약 0.5-1.0 μ

m 다. 성장 온도는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. 15J7-3T5의 16S

rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, 15J7-3T5균주는 Microvirga

- 74 -

zambiensis와 99.2% 상동성을 보여주었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서

분석한 결과 15J7-3T5는 N-acetyl-D-glucosamine, L-alanine, dextrin,

D-fructose 6-PO4, D-fucose, L-fucose, L-galactonic acid lactone,

D-galactose, D-galacturonic acid, glucuronamide, D-glucuronic acid,

L-glutamic acid, glycerol, β-hydroxy-D,L-butyric acid, D-mannose,

D-melibiose, methyl pyruvate, myo-inositol, L-rhamnose, D-sorbitol을 탄소원

으로 하여 생장할 수 있었다.

그러나 acetic acid, acetoacetic acid, N-acetyl-D-galactosamine,

N-acetyl-D-mannosamine, N-acetyl-neuraminic acid, ϒ-amino-butryric acid,

D-arabitol, L-arginine, D-aspartic acid, L-aspartic acid, bromo-succinic acid,

D-cellobiose, citric acid, formic acid, D-fructose, gelatin, gentiobiose,

D-gluconic acid, α-D-glucose, D-glucose-6-PO4, L-histidine, α-

hydroxybutyric acid, p-hydroxy-phenylacetic acid, inosine, α-keto-butyric

acid, α-keto-glutaric acid, L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, α-

D-lactose, D-malic acid, L-malic acid, D-maltose, D-mannitol, β-

methyl-D-glucoside, 3-methyl glucose, mucic acid, pectin, propionic acid,

glycyl-L-proline, L-pyroglutamic acid, quinic acid, D-raffinose, D-saccharic

acid, D-salicin, D-serine, L-serine, stachyose, sucrose, D-trehalose,


민감도 테스트 결과, 1% NaCl, aztreonam, fusidic acid, lincomycin,

nalidixic acid, pH 6, rifamycin SV, sodium butyrate, tetrazolium blue,

tetrazolium violet 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나 1% sodium lactate, 4%

NaCl, 8% NaCl, guanidine HCl, lithium chloride, minocycline, niaproof 4, pH

5, potassium tellurite, D-serine, sodium bromate, troleandomycin, vancomycin


10) Pantoea eucrina 15J17K

15J17K 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 편모(flagella)가 있고 작은 막

모양이다. 콜로니의 색은 연한 몬색이고(그림 48), 세포 크기는 약 0.5-1.0 μm

다. 성장 온도는 25℃ 으며 R2A배지에서 잘 생장하 다. 15J17K의 16S

rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, 15J17K 균주는 Pantoea eucrina와

99.8% 상동성을 보여주었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과

15J17K는 acetic acid, acetoacetic acid, N-acetyl-D-mannosamine,

- 75 -

N-acetyl-D-glucosamine, L-alanine, ϒ-amino-butryric acid, L-arginine,

L-aspartic acid, bromo-succinic acid, D-cellobiose, citric acid, dextrin, formic

acid, D-fructose, D-fructose 6-PO4, D-fucose, L-fucose, L-galactonic acid

lactone, D-galactose, D-galacturonic acid, gentiobiose, D-gluconic acid, α-

D-glucose, D-glucose-6-PO4, glucuronamide, D-glucuronic acid, L-glutamic

acid, glycerol, L-histidine, α-hydroxybutyric acid, inosine, α-keto-butyric

acid, L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, α-D-lactose, D-malic acid,

L-malic acid, D-maltose, D-mannitol, D-mannose, D-melibiose, β-

methyl-D-glucoside, 3-methyl glucose, mucic acid, myo-inositol, propionic

acid, glycyl-L-proline, quinic acid, L-rhamnose, D-saccharic acid, D-salicin,

D-serine, L-serine, D-sorbitol, sucrose, D-trehalose를 탄소원으로 하여 생장

할 수 있었다. 그러나 N-acetyl-D-galactosamine, N-acetyl-neuraminic acid,

D-arabitol, D-aspartic acid, gelatin, β-hydroxy-D,L-butyric acid,

p-hydroxy-phenylacetic acid, α-keto-glutaric acid, methyl pyruvate, pectin,

L-pyroglutamic acid, D-raffinose, stachyose, D-turanose, tween 40들을 탄소원

으로 이용하지 못했다.


guanidine HCl, lincomycin, lithium chloride, niaproof 4, pH 5, pH 6, potassium

tellurite, rifamycin SV, sodium bromate, tetrazolium blue, tetrazolium violet,

troleandomycin 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나 aztreonam, fusidic acid,

minocycline, nalidixic acid, D-serine, sodium butyrate, vancomycin 조건 하에

서는 발색이 되지 않았다.

그림 48. 방사선 내성 Pantoea 속 발굴종 15J17K의 자 미경과 배양체 사진

- 76 -

11) Pseudokineococcus lusitanus 15J13-6

15J13-6 균주는 그람 음성을 나타내었으며, 편모(flagella)가 있고 구모양이

다. 콜로니의 색은 연한 주홍색이다(그림 49). 성장 온도는 25℃ 으며 R2A배지

에서 잘 생장하 다. 15J13-6의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과,

15J13-6 균주는 Pseudokineococcus lusitanus와 99.4% 상동성을 보여주었다.

BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 15J13-6는 acetic acid,

acetoacetic acid, N-acetyl-D-galactosamine, N-acetyl-D-glucosamine,

L-alanine, D-arabitol, L-arginine, D-aspartic acid, D-cellobiose, dextrin,

formic acid, D-fructose, D-fructose 6-PO4, L-galactonic acid lactone,

D-galactose, D-galacturonic acid, gentiobiose, D-gluconic acid, α-D-glucose,

D-glucose-6-PO4, glucuronamide, D-glucuronic acid, L-glutamic acid,

glycerol, inosine, α-keto-butyric acid, α-keto-glutaric acid, α-D-lactose,

D-maltose, D-mannitol, D-mannose, D-melibiose, β-methyl-D-glucoside,

3-methyl glucose, pectin, propionic acid, L-rhamnose, D-saccharic acid,

D-salicin, L-serine, D-sorbitol, stachyose, sucrose, D-trehalose, D-turanose,

tween 40를 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다. 그러나, L-aspartic acid,

bromo-succinic acid, citric acid, D-fucose, L-fucose, gelatin, L-histidine, α

-hydroxybutyric acid, β-hydroxy-D,L-butyric acid, p-hydroxy-phenylacetic

acid, L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, D-malic acid, L-malic acid, 들

을 탄소원으로 이용하지 못했다. 민감도 테스트 결과, 1% NaCl, 1% sodium

lactate, 4% NaCl, aztreonam, lithium chloride, nalidixic acid, pH 5, pH 6,

potassium tellurite, sodium bromate, sodium butyrate, tetrazolium blue,

tetrazolium violet, vancomycin 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나 8% NaCl,

fusidic acid, guanidine HCl, lincomycin, minocycline, niaproof 4, rifamycin SV,

D-serine, troleandomycin 조건 하에서는 발색이 되지 않았다.

그림 49. 방사선 내성 Pseudokineococcus 속 발굴종 15J13-6의

자 미경과 배양체 사진

- 77 -

12) Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C

15ML1C 균주는 그람 음성을 나타내었으며, 구 모양이다. 콜로니의 색은 연

한 노란색이고(그림 50), 세포 크기는 약 0.6-1.0 μm 다. 성장 온도는 25℃ 으

며 R2A배지에서 잘 생장하 다. 15ML1C의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석

한 결과, 15ML1C균주는 Psychrobacter cryohalolentis와 99.4% 상동성을 보여

주었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 15ML1C는 acetic acid,

N-acetyl-neuraminic acid, L-alanine, ϒ-amino-butryric acid, D-arabitol,

L-aspartic acid, D-cellobiose, dextrin, D-fructose, D-fructose 6-PO4,

D-fucose, L-fucose, D-galacturonic acid, gelatin, α-D-glucose,

D-glucose-6-PO4, glucuronamide, L-glutamic acid, L-histidine, β-

hydroxy-D,L-butyric acid, L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, α-

D-lactose, D-malic acid, D-maltose, D-mannitol, D-mannose, D-melibiose, β

-methyl-D-glucoside, 3-methyl glucose, myo-inositol, pectin, propionic acid,

glycyl-L-proline, D-raffinose, L-rhamnose, L-serine, D-sorbitol, stachyose,

tween 40를 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다. 그러나 acetoacetic acid,

N-acetyl-D-galactosamine, D-aspartic acid, N-acetyl-D-mannosamine,

N-acetyl-D-glucosamine, L-arginine, bromo-succinic acid, citric acid, formic

acid, L-galactonic acid lactone, D-galactose, gentiobiose, D-gluconic acid,

D-glucuronic acid, glycerol, α-hydroxybutyric acid, p-hydroxy- phenylacetic

acid, inosine, α-keto-butyric acid, α-keto-glutaric acid, L-malic acid, methyl

pyruvate, mucic acid, L-pyroglutamic acid, quinic acid, D-saccharic acid,

D-salicin, D-serine, sucrose, D-trehalose, D-turanose 들을 탄소원으로 이용하지

못했다.


aztreonam, lincomycin, lithium chloride, nalidixic acid, pH 6, potassium

tellurite, rifamycin SV, D-serine, sodium bromate, sodium butyrate,

tetrazolium blue, troleandomycin 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나 fusidic

acid, guanidine HCl, minocycline, niaproof 4, pH 5, tetrazolium violet,


13) Psychrobacter maritimus 216MGT3

216MGT3 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 작은 막 모양이다. 콜로니의

색은 연한 노란색이고(그림 50), 세포 크기는 약 1.0-1.5 μm 다. 성장 온도는

- 78 -

25℃ 으며 Tryptic Soy Agar(TSA)배지에서 잘 생장하 다. 216MGT3의 16S

rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, 216MGT3균주는 Psychrobacter

maritimus와 99.5% 상동성을 보여주었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서

분석한 결과 216MGT3는 acetic acid, acetoacetic acid, N-acetyl-

D-glucosamine, L-alanine, ϒ-amino-butryric acid, L-aspartic acid, bromo-

succinic acid, citric acid, dextrin, formic acid, D-fructose, D-fructose 6-PO4,

D-fucose, L-fucose, L-galactonic acid lactone, D-galacturonic acid, gelatin,

gentiobiose, D-gluconic acid, α-D-glucose, glucuronamide, D-glucuronic acid,

L-glutamic acid, L-histidine, α-hydroxybutyric acid, β-hydroxy-D,L-butyric

acid, p-hydroxy-phenylacetic acid, α-keto-butyric acid, α-keto-glutaric acid,

L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, α-D-lactose, D-malic acid, L-malic

acid, D-maltose, D-mannitol, D-mannose, D-melibiose, β-methyl-D-glucoside,

mucic acid, pectin, propionic acid, glycyl-L-proline, L-pyroglutamic acid,

L-rhamnose, D-serine, L-serine, D-sorbitol, stachyose, sucrose, D-trehalose,

D-turanose, tween 40을 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다.

그러나 N-acetyl-D-galactosamine, L-arginine, N-acetyl-D-mannosamine,

N-acetyl-neuraminic acid, D-arabitol, D-aspartic acid, D-cellobiose,

D-galactose, D-glucose-6-PO4, glycerol, inosine, 3-methyl glucose, methyl

pyruvate, myo-inositol, quinic acid, D-raffinose, D-saccharic acid, D-salicin들

을 탄소원으로 이용하지 못했다.


aztreonam, lincomycin, lithium chloride, pH 6, potassium tellurite, rifamycin

SV, sodium butyrate, tetrazolium blue 조건 하에서는 발색이 되었다. 그러나

fusidic acid, guanidine HCl, minocycline, nalidixic acid, niaproof 4, pH 5,

D-serine, sodium bromate, tetrazolium violet, troleandomycin, vancomycin 조

건 하에서는 발색이 되지 않았다.

14) Psychrobacter okhotskensis 216MGM6

216MGM6 균주는 그람 음성을 나타내었으며, 편모(Flagella)가 있고 작은 막

모양이다. 콜로니의 색은 연한 노란색이고(그림 50), 세포 크기는 약 1.0-1.5

um 다. 성장 온도는 25℃ 으며 Marine Agar 배지에서 잘 생장하 다.

216MGM6의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, 216MGM6 균주는

Psychrobacter okhotskensis와 99.7% 상동성을 보여주었다. BIOLOG GEN III

- 79 -

기기를 이용해서 분석한 결과 216MGM6는 acetic acid, acetoacetic acid,

N-acetyl-D-glucosamine, L-alanine, ϒ-amino-butryric acid, D-arabitol,

L-arginine, D-aspartic acid, L-aspartic acid, D-cellobiose, dextrin,

D-fructose, D-fructose 6-PO4, D-fucose, L-fucose, L-galactonic acid lactone,

D-galactose, D-galacturonic acid, gentiobiose, D-gluconic acid, α-D-glucose,


glycerol, L-histidine, α-hydroxybutyric acid, β-hydroxy-D,L-butyric acid, α-

keto-glutaric acid, L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, D-malic acid,

L-malic acid, D-maltose, D-mannitol, D-mannose, D-melibiose, β-

methyl-D-glucoside, 3-methyl glucose, methyl pyruvate, mucic acid,

propionic acid, glycyl-L-proline, L-pyroglutamic acid, quinic acid,

L-rhamnose, D-saccharic acid, D-salicin, L-serine, D-sorbitol, sucrose,

D-trehalose, D-turanose, tween 40을 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다.

그러나 N-acetyl-D-galactosamine, citric acid, N-acetyl-D-mannosamine,

N-acetyl-neuraminic acid, bromo-succinic acid, formic acid, gelatin,

p-hydroxy-phenylacetic acid, inosine, α-keto-butyric acid, α-D-lactose,

myo-inositol, pectin, D-raffinose, D-serine, stachyose들을 탄소원으로 이용하지

못했다.


lincomycin, lithium chloride, pH 6, potassium tellurite, rifamycin SV, sodium

butyrate, tetrazolium blue, tetrazolium violet 조건 하에서는 발색이 되었다. 그

러나 aztreonam, fusidic acid, guanidine HCl, minocycline, nalidixic acid,

niaproof 4, pH 5, D-serine, sodium bromate, troleandomycin, vancomycin 조건

하에서는 발색이 되지 않았다.

15) Psychrobacter urativorans 16MFM4

16MFM4 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 구모양이다. 콜로니의 색은 연

한 노란색이고(그림 50), 세포 크기는 약 0.5-1.0 μm 다. 성장 온도는 25℃ 으

며 Marine Agar배지에서 잘 생장하 다. 16MFM4의 16S rRNA 유 자 염기서

열을 분석한 결과, 16MFM4 균주는 Psychrobacter urativorans와 99.4% 상동성

을 보여주었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 16MFM4는

acetic acid, acetoacetic acid, N-acetyl-D-galactosamine, L-alanine, ϒ-

amino-butryric acid, D-arabitol, L-arginine, D-aspartic acid, L-aspartic acid,

- 80 -

bromo-succinic acid, citric acid, dextrin, formic acid, D-fructose, D-fructose

6-PO4, D-fucose, L-fucose, L-galactonic acid lactone, D-galactose,

D-galacturonic acid, gelatin, gentiobiose, D-gluconic acid, α-D-glucose,


L-histidine, α-hydroxybutyric acid, β-hydroxy-D,L-butyric acid, α-keto-

butyric acid, α-keto-glutaric acid, L-lactic acid, D-lactic acid methyl ester, α

-D-lactose, D-malic acid, L-malic acid, D-maltose, D-mannose, D-melibiose,

β-methyl-D-glucoside, 3-methyl glucose, methyl pyruvate, mucic acid,

pectin, propionic acid, glycyl-L-proline, L-pyroglutamic acid, quinic acid,

D-raffinose, L-rhamnose, D-saccharic acid, D-serine, L-serine, stachyose,

tween 40을 탄소원으로 하여 생장할 수 있었다. 그러나 N-acetyl-

D-mannosamine, D-cellobiose, N-acetyl-neuraminic acid, N-acetyl-D-

glucosamine, glycerol, p-hydroxy-phenylacetic acid, inosine, D-mannitol,

myo-inositol, D-salicin, D-sorbitol, sucrose, D-trehalose, D-turanose들을 탄소

원으로 이용하지 못했다.


aztreonam, lincomycin, lithium chloride, pH 6, potassium tellurite, rifamycin

SV, D-serine, sodium butyrate, tetrazolium blue 조건 하에서는 발색이 되었다.

그러나 fusidic acid, guanidine HCl, minocycline, nalidixic acid, niaproof 4, pH

5, sodium bromate, tetrazolium violet, troleandomycin, vancomycin 조건 하에

서는 발색이 되지 않았다.

16) Spirosoma endophyticum 15J8-11

15J8-11 균주는 그람 양성을 나타내었으며, 편모(flagella)가 있고 막 모양

이다. 콜로니의 색은 연한 몬색이다(그림 51). 성장 온도는 25℃ 으며 R2A배

지에서 잘 생장하 다. 15J8-11의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과,

15J8-11 균주는 Spirosoma endophyticum와 99.4% 상동성을 보여주었다.

BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 15J8-11는 D-fucose, L-fucose,

N-acetyl-D-glucosamine, D-fructose 6-PO4, L-galactonic acid lactone,

D-galacturonic acid, gentiobiose, glucuronamide, D-glucuronic acid, α-

keto-butyric acid, methyl pyruvate, L-rhamnose, D-salicin를 탄소원으로 하여

생장할 수 있었다.

- 81 -

Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C

Psychrobacter maritimus 216MGT3 Psychrobacter maritimus 216MTG3

Psychrobacter okhotskensis 216MGM6 Psychrobacter okhotskensis 216MGM6

Psychrobacte rurativorans 16MFM4 Psychrobacter urativorans 16MFM4

그림 50. 방사선 내성 Psychrobacter속 발굴종의 자 미경과 배양체 사진

- 82 -

그러나 acetic acid, acetoacetic acid, N-acetyl-D-galactosamine, L-alanine,

N-acetyl-D-mannosamine, N-acetyl-neuraminic acid, ϒ-amino-butryric acid,

D-arabitol, L-arginine, D-aspartic acid, L-aspartic acid, bromo-succinic acid,

D-cellobiose, citric acid, dextrin, formic acid, D-fructose, D-galactose, gelatin,

D-gluconic acid, α-D-glucose, D-glucose-6-PO4, L-glutamic acid, glycerol,

L-histidine, α-hydroxybutyric acid, β-hydroxy-D,L-butyric acid,

p-hydroxy-phenylacetic acid, inosine, α-keto-glutaric acid, L-lactic acid,

D-lactic acid methyl ester, α-D-lactose, D-malic acid, L-malic acid,

D-maltose, D-mannitol, D-mannose, D-melibiose, β-methyl-D-glucoside,

3-methyl glucose, mucic acid, myo-inositol, pectin, propionic acid,

glycyl-L-proline, L-pyroglutamic acid, quinic acid, D-raffinose, D-saccharic

acid, D-serine, L-serine, D-sorbitol, stachyose, sucrose, D-trehalose,


민감도 테스트 결과, 1% NaCl, 1% sodium lactate, 4% NaCl, 8% NaCl, pH

6, potassium tellurite, tetrazolium blue, tetrazolium violet 조건 하에서는 발색

이 되었다. 그러나 aztreonam, fusidic acid, guanidine HCl, lincomycin, lithium

chloride, minocycline, nalidixic acid, niaproof 4, pH 5, rifamycin SV, D-serine,

sodium bromate, sodium butyrate, troleandomycin, vancomycin 조건 하에서는

발색이 되지 않았다.

그림 51. 방사선 내성 Spirosoma 속 발굴종 15J8-11의 자 미경과

배양체 사진

발굴된 20종의 방사선 내성 미생물에 해 감마선 혹은 자외선으로 방사선

내성을 확인하 으며, 방사선 내성 분석 결과는 부록 2에 첨부하 다.

- 83 -

다. 호염성 미생물자원 신종 후보종 분류군

1) Marinobacter sp. Hb8

Hb8 균주는 그람 양성을 나타내었으며, polar flagellum을 지닌 막 모양이

다. 콜로니의 색은 연한 크림, 세포 크기는 약 1.5-2.8 × 0.5-0.7 μm 다(그림

52). 성장 온도는 10-37℃ 으며 최 염농도는 5%(w/v)로 조 된 배지에서 잘

생장하 다. 균주는 oxidase와 catalase를 지니고 있었으며, nitrate를 nitrite로

환원하며, Tween 40과 gelatine을 분해할 수 있으나, starch나 esculin는 분해능

이 찰되지 않았다.

그림 52. 호염성 Marinobacter 속 발굴종 Hb8의 자 미경과 배양체 사진

한, Glucose, arabinose, mannose, mannitol, N-acetyl-glucosamine,

malate, citrate 와 phenyl acetate 들을 이용할 수 있으나, urease활성 indole

생성은 찰되지 않았다. Esterase (C4)와 β-galactosidase 활성은 찰되었으

나, trypsin, β-glucosidase, N-acetyl-β-glucosaminidase, alkaline phosphatase,

valine arylamidase, cystine arylamidase, acid phosphatase, naphtol-AS-Bl-

phosphohydrolase, α-galactosidase, β-galactosidase, α-glucosidase, β-

glucuronidase, α-mannosidase과 α-fucosidase 활성은 검출되지 않았다.

L-glutamic acid, L-pyroglutamic acid, L-lactic acid, D-malic acid, L-malic

acid, bromosuccinic acid, β-hydroxy-D,L-butyric acid, acetoacetic acid,

propionic acid와 acetic acid를 성장에 탄소 에 지원으로 사용하 다.

2) Halomonas sp. Hb3

Hb3 균주는 그람 음성이고, catalase와 oxidase를 지닌 세포 크기가 1.2-2.0

× 4.2-4.8 μm인 막 모양의 세포이다. 크림색을 지닌 colony이며(그림 53), 성장

온도는 5-45°C에서 찰되며, 최 염농도는 3.0-10.0% NaCl (w/v) 정도로 넓

- 84 -

은 범 를 지니고 있었다. indole 생성, D-glucose발표는 찰되지 않았다.

Gelatin, starch, esculin과 Tween 40 도 분해능이 없었다. alkaline phosphatase,

esterase (C4), α-chymotrypsin, β-glucuronidase, acid phosphatase,

naphthol-AS-Bl-phosphohydrolase, α-glucosidase와 β-glucosidase 활성은

찰되었다.

그러나, MR/VP test, esterase lipase (C8), lipase (C14), leucine

arylamidase, valine arylamidase, crystine arylamidase, trypsin, α-

galactosidase, β-glucosidase, N-acetyl-β-glucosaminidase, α-mannosidase,

와 α-fucosidase 활성은 찰되지 않았다. 탄소와 에 지원으로 sucrose,

glycerol, citric acid, capric acid, adipic acid, phenylacetic acid, propionic acid,

acetic acid, pectin, methyl pyruvate, D-trehalose, D-glucose, D-maltose,

D-turanose, D-malic acid, L-malic acid, L-arabinose, L-alanine, L-arginine,

L-serine, L-aspartic acid, L-glutamic acid, L-lactic acid, α-D-glucose,

glycyl-L-proline, α-hydroxy-butyric acid, β-hydroxy-D,L-butyric acid, α

-keto-butyric acid를 사용하 으며, gelatin, potassium gluconate, trisodium

citrate, gentiobiose, stachyose, 3-methyl glucose, glucuronamide, inosine,

Tween 40, myo-inositol, D-fucose, D-mannose, D-fructose, D-galactose,

D-raffinose, α-D-lactose, D-melibiose, D-salicin, D-cellobiose, D-sorbitol,

D-mannitol, D-arabitol, D-aspartic acid, D-serine, D-saccharic acid,

D-glucose-6-PO4, D-fructose-6-PO4, D-galacturonic acid, D-gluconic acid,

D-glucuronic acid, D-lactic acid methyl ester, L-galactonic acid lactone,

N-acetyl-D-glucosamine, mucic acid, N-acetyl-β-D-mannosamine,

N-acetyl-D-galactosamine, N-acetylneuraminic acid, quinic acid,

p-hydroxy-phenylacetic acid, r-amino-butyric acid, α-keto-glutaric acid,

formic acid는 사용하지 못하 다.

그림 53. 호염성 Halomonas 속 발굴종 Hb3의 자 미경과 배양체 사진

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라. 호산성 미생물 자원 미기록종 후보종 분류군

1) Achromobacter spanius 4-8

세포는 그람 염색 음성이며, 운동성이 있으며, 간균 형태이다. 콜로니 형태는

circular, raised, entire 이며, R2A, 30°C에서 2일 배양하며 연갈색을 보인다(그

림 54). Oxidase와 catalase는 양성임. API 20NE 테스트 결과, nitrate reduction,

gluconate, adipate, malate, citrate, phenyl-acetate에 양성 반응이나, Indole

production, glucose acidification, arginine dihydrolase, urease, β-glucosidase,

protease, β-galactosidase, D-glucose, L-arabinose, D-mannose, D-mannitol,

N-acetyl-glucosamine, D-maltose, caprate에 음성을 나타낸다. API 32GN 테스

트 결과에서는 propionate, valerate, citrate, L-histidine, 3-hydroxy-butyrate,

L-proline, itaconate, suberate, acetate, DL-lactate, L-alanine을 탄소원으로 이

용하나, D-mannitol, D-glucose, salicin, D-melibiose, L-fucose, D-sorbitol,

L-arabinose, caprate, 2-ketogluconate, 4-hydroxy-benzoate, L-rhamnose,

N-acetyl-glucosamine, D-ribose, inositol, D-sucrose, D-maltose, malonate,

5-ketogluconate, glycogen, 3-hydroxy-benzoate, L-serine은 탄소원으로 이용

하지 못한다. TEM을 통해 세포를 찰한 결과, 라젤라가 있는 간균 형태

다.

그림 54. 호산성 Achromobacter 속 발굴종 4-8의 자 미경과 배양체 사진

2) Aquitalea magnusonii 4-10

세포는 그람 염색 음성이며, 운동성이 있으며, 간균 형태이다. 콜로니 형태

는 circular, raised, entire이며, R2A, 30°C에서 2일 배양하며 갈색이며(그림

55) Oxidase와 catalase는 양성을 나타낸다. API 20NE 테스트 결과, nitrate

reduction, glucose acidification, arginine dihydrolase, D-glucose, D-mannitol,

N-acetyl-glucosamine, gluconate, caprate, malate, citrate, phenyl-acetate에

양성을 나타내나, Indole production, urease, β- glucosidase, protease, β

- 86 -

-galactosidase, L-arabinose, D-mannose, D-maltose, adipate에 음성이다.

API 32GN 테스트 결과, D-mannitol, D-glucose, D-sorbitol, propionate,

caprate, valerate, citrate, L-histidine, 3-hydroxy-butyrate, L-proline,

N-acetyl-glucosamine, D-ribose, inositol, D-sucrose, malonate, acetate,

DL-lactate, L-alanine, L-serine을 탄소원으로 이용하지만, salicin,

D-melibiose, L-fucose, L-arabinose, 2-ketogluconate, 4-hydroxy-benzoate,

L-rhamnose, D-maltose, itaconate, suberate, 5-ketogluconate, glycogen,

3-hydroxy-benzoate는 탄소원으로 이용하지 못한다. TEM을 통해 세포를

찰한 결과, oval 형태 다.

그림 55. 호산성 Aquitalea 속 발굴종 4-10의 자 미경과 배양체 사진

3) Acinetobacter bereziniae 4-15

세포는 그람 염색 음성이며, 운동성이 없으며, 간균 형태이다. 콜로니 형태는

circular, raised, entire이며, R2A, 30°C에서 2일 배양시 흰색의 집락을 나타낸다

(그림 56). Oxidase와 catalase는 양성이다.

API 20NE 테스트 결과, reduction of nitrates to nitrogen, glucose

acidification, D-mannitol, caprate, adipate, malatem, citrate,

phenyl-acetate 에 양성을 보이나 Nitrate reduction, Indole production,

arginine dihydrolase, urease, β-glucosidase, protease, β-galactosidase,

D-glucose, L-arabinose, D-mannose, N-acetyl-glucosamine, D-maltose,

gluconate 에는 음성이다. API 32GN 테스트 결과, citrate, D-mannitol,

L-fucose, D-sorbitol, propionate, caprate, valerate, L-proline, L-histidine,

3-hydroxy-butyrate, 4-hydroxy-benzoate, suberate, acetate, DL-lactate,

L-alanine 을 탄소원으로 이용하지만, D-glucose, salicin, D-melibiose,

L-arabinose, 2-ketogluconate, L-rhamnose, N-acetyl-glucosamine, D-ribose,

inositol, D-sucrose, D-maltose, itaconate, malonate, 5-ketogluconate,

- 87 -

glycogen, 3-hydroxy-benzoate, L-serine 은 탄소원으로 이용하지 못한다.

TEM 을 통해 세포를 찰한 결과, rod 형태이다.

그림 56. 호산성 Acinetobacter 속 발굴종 4-15의 자 미경과 배양체 사진

4) Ideonella dechloratans 4-19

세포는 그람 염색 음성이며, 운동성이 없으며, 간균 형태이다. 콜로니 형태는

circular, raised, entire이며, R2A, 30°C에서 2일 배양하며 연갈색을 보인다(그림

57). Oxidase는 양성이고 catalase는 음성이다.

API 20NE 테스트 결과, nitrate reduction, protease, D-glucose,

N-acetyl-glucosamine, D-maltose, gluconate, malate, citrate 에 양성을

보이고, Indole production, glucose acidification, arginine dihydrolase, urease,

β-glucosidase, β-galactosidase, L-arabinose, D-mannose, D-mannitol,

caprate, adipate, phenyl-acetate 에 음성이다. API 32GN 테스트 결과,

D-glucose, propionate, valerate, citrate, L-histidine, 3-hydroxy-butyrate,

4-hydroxy-benzoate, L-proline, N-acetyl-glucosamine, D-maltose, acetate,

DL-lactate, L-alanine, glycogen 을 탄소원으로 이용하지만, D-mannitol,

salicin, D-melibiose, L-fucose, D-sorbitol, L-arabinose, caprate,

2-ketogluconate, L-rhamnose, D-ribose, inositol, D-sucrose, itaconate,

suberate, malonate, 5-ketogluconate, 3-hydroxy-benzoate, L-serine 은

탄소원으로 이용하지 못한다.

5) Pseudomonas extremaustralis 4-20

세포는 그람 염색 음성이며, 운동성이 있으며, 간균 형태을 보인다. 콜로니

형태는 circular, raised, entire이며, R2A, 30°C에서 2일 배양하며, 흰색의 집락이

다(그림 58). Oxidase와 catalase는 양성이다.

- 88 -

API 20NE 테스트 결과, reduction of nitrates to nitrogen, arginine

dihydrolase, protease, D-glucose, L-arabinose, D-mannose, D-mannitol,

N-acetyl-glucosamine, gluconate, caprate, malate, citrate 에 양성 반응을

보이나, Nitrate reduction, Indole production, glucose acidification, urease,

β-glucosidase, β-galactosidase, D-maltose, adipate, phenyl-acetateIn 에 음성

이다. API 32GN 테스트 결과, D-mannitol, D-glucose, D-sorbitol,

L-arabinose, propionate, caprate, valerate, citrate, L-histidine,

2-ketogluconate, 3-hydroxy-butyrate, 4-hydroxy-benzoate, L-proline,

N-acetyl-glucosamine, D-ribose, inositol, itaconate, malonate, acetate,

DL-lactate, L-alanine, L-serine 을 탄소원으로 이용하지만 salicin,

D-melibiose, L-fucose, L-rhamnose, D-sucrose, D-maltose, suberate,

5-ketogluconate, glycogen, 3-hydroxy-benzoate 는 탄소원으로 이용하지

못한다.

그림 57. 호산성 Ideonella 속 발굴종 4-19의 자 미경과 배양체 사진

그림 58. 호산성 Pseudomonas 속 발굴종 4-20의 자 미경과 배양체 사진

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6) Serratia fonticola AS15

세포는 그람 염색 음성이며, 운동성이 있으며, 간균 형태임이다. 콜로니 형태

는 circular, raised, entire이며, R2A, 30°C에서 2일 배양시 크림색(그림 59)을 보

인다. Oxidase와 catalase는 양성이다.

API 20NE 테스트 결과, nitrate reduction, glucose acidification,

β-glucosidase, β-galactosidase, D-glucose, L-arabinose, D-mannose,

D-mannitol, N-acetyl-glucosamine, D-maltose, gluconate, malate, citrate,

phenyl-acetate 에 양성이나 Indole production, arginine dihydrolase, urease,

protease, caprate, adipate 에는 음성이다. API 32GN 테스트 결과,

D-mannitol, D-glucose, salicin, D-melibiose, D-sorbitol, L-arabinose,

propionate, valerate, citrate, L-histidine, 2-ketogluconate,

3-hydroxy-butyrate, L-proline, L-rhamnose, N-acetyl-glucosamine,

D-ribose, inositol, D-sucrose, D-maltose, itaconate, malonate, acetate,

DL-lactate, L-alanine, 5-ketogluconate, glycogen, 3-hydroxy-benzoate,

L-serine 을 탄소원으로 이용 하지만 L-fucose, caprate, 4-hydroxy-benzoate,

suberate 는 탄소원으로 이용하지 못한다.

7) Luteibacter anthropi AD38

세포는 그람 염색 음성이며, 운동성이 있으며, 간균 형태이다. 콜로니 형태는

circular, raised, entire 이며, R2A, 30°C에 2일 배양하며 연노랑색이다(그림 60).

Oxidase 는 양성이고, catalase는 음성이다.

API 20NE 테스트 결과, β-glucosidase, protease, β-galactosidase,

D-glucose, D-mannose, D-mannitol, N-acetyl-glucosamine, D-maltose,

caprate, malate 에 양성 반응이나, Nitrate reduction, reduction of nitrates to

nitrogen, indole production, glucose acidification, arginine dihydrolase,

urease, L-arabinose, gluconate, adipate, citrate, phenyl-acetate 에 음성이다.

API 32GN 테스트 결과, D-mannitol, D-glucose, salicin, D-melibiose,

propionate, caprate, valerate, L-histidine, 3-hydroxy-butyrate, L-proline,

L-rhamnose, N-acetyl-glucosamine, D-ribose, inositol, D-sucrose,

D-maltose, itaconate, suberate, acetate, DL-lactate, L-alanine, L-serine 을

탄소원으로 이용 가능하다. L-fucose, D-sorbitol, L-arabinose, citrate,

2-ketogluconate, 4-hydroxy-benzoate, malonate, 5-ketogluconate, glycogen,

3-hydroxy-benzoate 는 탄소원으로 이용하지 못한다.

- 90 -

그림 59. 호산성 Serratia 속 발굴종 AS15의 자 미경과 배양체 사진

그림 60. 호산성 Luteibacter 속 발굴종 AD38의 자 미경과 배양체 사진

8) Bradyrhizobium erythrophle B8

세포는 그람염색 음성이며, 운동성이 있으며, 간균 형태이다. 콜로니

형태는 circular, raised, entire 이며, R2A, 30°C 에서 2 일 배양하며,

상아색이다(그림 61). Oxidase 는 음성이고 catalase 는 양성이다.

API 20NE 테스트 결과, β-galactosidase, D-glucose, L-arabinose,

D-mannitol, N-acetyl-glucosamine, citrate 에 양성 반응이나, Nitrate

reduction, reduction of nitrates to nitrogen, indole production, glucose

acidification, arginine dihydrolase, urease, β-glucosidase, protease,

D-mannose, D-maltose, gluconate, caprate, adipate, malate,

phenyl-acetate 에 음성 반응이다. API 32GN 테스트 결과, D-mannitol,

D-glucose, L-fucose, L-arabinose, citrate, 3-hydroxy-butyrate,

4-hydroxy-benzoate, L-proline, L-rhamnose, N-acetyl-glucosamine,

D-ribose, inositol, D-sucrose, suberate, DL-lactate, L-alanine,

5-ketogluconate, 3-hydroxy-benzoate 를 탄소원으로 이용하지만, salicin,

D-melibiose, D-sorbitol, propionate, caprate, valerate, L-histidine,

- 91 -

2-ketogluconate, D-maltose, itaconate, malonate, acetate, glycogen,

L-serine 은 탄소원으로 이용하지 못한다.

그림 61. 호산성 Bradyrhizobium 속 발굴종 B8의 자 미경과 배양체 사진

마. 기성 미생물자원 신종 후보종 분류군

1) Desulfuromonas sp. ANS1

Desulfuromonas 속은 flagella를 가지는 기성의 sulfur-reducing

acetate-oxidizing 간균이며, acetate, ethanol, propanol, butanol, pyruvate을

자공여체로 sulfur, organic sulfide compounds, malate, fumarate를 자 수용체

로 하는 생리학 특성이 있다. 배양체 사진은 그림 62와 같다. BIOLOG GEN III

기기를 이용해서 분석한 결과 ANS1 균주는 BIOLOG GEN III에서 반응되는 모

든 기질을 이용하지 못했으며, 민감도 반응도 모두 음성 결과를 보 다.

2) Desulfovibrio sp. ANS2

Desulfovibrio속은 기성의 sulfate-reducing bacteria로써 uranium (VI),

chromium (VI) 그리고 iron (III)등의 속을 환원시키는 능력을 가지고 있어

bioremediator 역할로써 연구 상이다. 배양체 사진은 그림 62와 같다. BIOLOG

GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 ANS2 균주는 탄소원으로 L-Lactic acid,

L-malic acid를 탄소원으로 이용하 다. 민감도 반응은 모두 음성 결과를 보

다.

- 92 -

그림 62. 기성 Desulfuromonas 속 Desulfovibrio 속

발굴종의 배양체 사진

바. 이탄층 미생물 자원 신종 미기록종 분류군

1) Janthinobacterium sp. R-2-5

R-2-5는 그람 염색 음성이며, 운동성이 있으며, 간균 형태이다. 콜로니 형

태는 circular, raised, entire이며, R2A 배지에서 30°C, 2일간 배양하면, 갈색의

집락이 나타난다(그림 63). Oxidase는 양성이고 catalase는 음성이다. BIOLOG

GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 탄소원으로 Aceto Acetic acid, Acetic

acid, Aztreonam, N-Acetyl-D-Galactosamine, L-Alanine, L-Aspartic acid,

D-Cellobiose, Citric acid, D-Fructose, L-Fucose, D-Galactose,

D-Galacturonic acid, α-D-Glucose, L-Glutamic acid, α-Keto-Glutaric acid,

Glycerol, Inosine, L-Lactic acid, Lactone, D-Maltose, L-Malic acid,

D-Mannitol, D-Mannose, myo-Inositol, Pectin, Proline, Propionic acid,

Methy-Pyruvate, D-Serine, L-Serine, D-Sorbitol, Sucrose을 탄소원으로 이

용하 다. 민감도 테스트 결과, pH 6, 1% NaCl, 1% Sodium Lactate,

Rifamycin SV, Lincomycin, Vancomycin, Tetrazolium blue, Nalidixic acid,

Aztreonam에 반응되었다.

그림 63. 이탄층 Janthinobacterium 속 R-2-5의 자 미경과 배양체 사진

- 93 -

2) Methylomonas sp. JS821

Methylomonas 속은 1974년 Leadbetter에 의해 처음 보고되었으며, 메탄산

화미생물로서, 탄소 에 지원으로 메탄을 사용한다. 발견된 종과 가장 유사

한 Methylomonas sp. M5의 경우, 2011년 Nardy Kip에 의해 처음 보고되었으

며 소황병산늪과 같은 이탄층에서 분리되었다. M5 종은 생장 pH 범 가

3.5-6.5(최 생장 pH 5)로서, 산성 환경에서도 자랄 수 있는 메탄산화균이라

는 에서 발견에 의미가 있다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결

과 JS821는 탄소원으로 Acetic acid, Fructose, Glucuronam을 탄소원으로 이

용하 다(그림 64).

그림 64. 이탄층 Methylomonas 속 JS821의 배양체 사진

3) Curvibacter lanceolatus R-1-5

세포는 그람 염색 음성이며, 운동성이 없으며, 간균 형태이다. 콜로니 형태

는 circular, raised, entire이며, R2A, 30°C에서 2일 배양하며, 흰색이다(그림 65).

Oxidase와 catalase는 양성이다. API 20NE 테스트 결과, urease, D-glucose,

gluconate에 양성 반응이었고, Nitrate reduction, reduction of nitrates to

nitrogen, indole production, glucose acidification, arginine dihydrolase, β-

glucosidase, protease, β-galactosidase, L-arabinose, D-mannose, D-mannitol,

N-acetyl-glucosamine, D-maltose, caprate, adipate, malate, citrate,

phenyl-acetate에 음성 반응이었다. API 32GN 테스트 결과, D-glucose,

propionate, valerate, L-histidine, 3-hydroxy-butyrate, 4-hydroxy-benzoate,

L-proline, suberate, acetate, DL-lactate, L-alanine, 3-hydroxy-benzoate를 탄

소원으로 이용 가능하며, D-mannitol, salicin, D-melibiose, L-fucose,

D-sorbitol, L-arabinose, caprate, citrate, 2-ketogluconate, L-rhamnose,

- 94 -

N-acetyl-glucosamine, D-ribose, inositol, D-sucrose, D-maltose, itaconate,

malonate, 5-ketogluconate, glycogen, L-serine은 탄소원으로 이용하지 못하 다.

그림 65. 이탄층 Curvibacter 속의 자 미경과 배양체 사진

사. 멸종 기 동물 장내 미생물 자원 신종/미기록종 후보종 분류군

1) Vagococcus sp. D7T301

D7T301 균주는 그람 양성을 나타내었으며, TSA 배지에서 콜로니의 색은

연한 크림색을 보 으며(그림 66), 최 성장 온도는 37℃로 확인되었다.

D7T301 균주의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, D7T301 균주는

Vagococcus panaei와 98.36%의 유 상동성을 보여주었다. 한, DNA 추출

을 통해 GC-Content를 확인한 결과, 체 D7T301 균주의 염기 서열의

GC-Content는 약 31.7 mol%로 찰되었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서

분석한 결과 D7T301는 탄소원으로 Dextrin, D-Maltose, D-Trehalose,

D-Cellobiose, Gentiobiose, Sucrose, D-Turanose, α-D-Lactose, β-Methyl-

DGlucoside, D-Salicin, N-Acetyl-D-Glucosamine, N-Acetyl-β- DMannosamine,

N-Acetyl-D-Galactosamine, α-D-Glucose, D-Mannose, D-Fructose,

D-Galactose, 3-Methyl Glucose, D-Fucose, L-Fucose, L-Rhamnose, Inosine,

1% Sodium Lactate, Fusidic Acid, D-Serine, myo-Inositol, Glycerol,

D-Glucose-6-PO4, D-Fructose-6-PO4, Troleandomycin, Rifamycin SV,

Minocycline, L-Alanine, L-Histidine, Lincomycin, Guanidine HCl, Pectin,

D-Galacturonic Acid, L-Galactonic Acid Lactone, D-Glucuronic Acid,

Glucuronamide, Vancomycin, Tetrazolium Violet, Tetrazolium Blue, Methyl

Pyruvate, Nalidixic Acid, Lithium Chloride, Potassium Tellurite, α-

Keto-Butyric Acid, Acetoacetic Acid, Acetic Acid, Sodium Butyrate을 이용하

여 생장할 수 있는 것으로 확인되었다. 그러나, Stachyose, D-Raffinose,

D-Melibiose, N-Acetyl Neuraminic Acid, D-Sorbitol, D-Mannitol, D-Arabitol,

- 95 -

D-Aspartic Acid, D-Serine, Gelatin, Glycyl-L-Proline, L-Arginine, L-Aspartic

Acid, L-Glutamic Acid, L-Pyroglutamic Acid, L-Serine, Niaproof 4,

D-Gluconic Acid, Mucic Acid, Quinic Acid, D-Saccharic Acid,

p-HydroxyPhenylacetic Acid, D-Lactic Acid Methyl Ester, L-Lactic Acid,

Citric Acid, α-Keto-Glutaric Acid, D-Malic Acid, L-Malic Acid, Bromo-

Succinic Acid, Tween 40, γ-Amino-Butryric Acid, α-HydroxyButyric Acid,

β-Hydroxy-D, L-Butyric Acid, Propionic Acid, Formic Acid, Aztreonam,

Sodium Bromate은 탄소원으로 사용하지 못하는 것으로 악되었다.

그림 66. 멸종 기 동물 장내 Vagococcus 속 M7T301의 자 미경과

배양체 사진

2) Microbacterium oxydans M3R204

M3R204 균주는 그람 양성을 나타내었으며, R2A 배지에서 콜로니의 색(그

림 67)은 연한 노란색을 보 으며, 최 성장 온도는 20℃로 확인되었다.

M3R204 균주의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, M3R204 균주는

Microbacterium oxydans type strain과 99.85%의 유 상동성을 보여주었다.

한, DNA 추출을 통해 GC-Content를 확인한 결과, 체 M3R204 균주의 염기

서열의 GC-Content는 약 72.9 mol%로 찰되었다.

BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 M3R204는 탄소원으로

Dextrin, D-Maltose, D-Trehalose, D-Cellobiose, Gentiobiose, Sucrose,

D-Turanose, D-Salicin, D-Mannose, D-Fructose, N-Acetyl-D-Glucosamine,

N-Acetyl-D-Galactosamine, α-D-Glucose, D-Galactose, L-Rhamnose,

Inosine, 1% Sodium Lactate, myo-Inositol, Glycerol, Rifamycin SV,

L-Alanine, L-Histidine, Guanidine HCl, Pectin, Tetrazolium Blue, Methyl

Pyruvate, Nalidixic Acid, Lithium Chloride, α-Keto-Butyric Acid, Acetoacetic

- 96 -

Acid, Acetic Acid, Sodium Butyrate, D-Mannitol, Glycyl-L-Proline,

L-Aspartic Acid, L-Glutamic Acid, L-Serine, D-Gluconic Acid,

p-HydroxyPhenylacetic Acid, L-Lactic Acid, D-Malic Acid, L-Malic Acid,

Bromo-Succinic Acid, Tween 40, α-HydroxyButyric Acid, Propionic Acid,

Aztreonam, Sodium Bromate을 이용하여 생장할 수 있는 것으로 확인되었다.

그러나, α-D-Lactose, β-Methyl-DGlucoside, N-Acetyl-β-DMannosamine,

3-Methyl Glucose, D-Fucose, L-Fucose, Fusidic Acid, D-Serine,

D-Glucose-6-PO4, D-Fructose-6-PO4, Troleandomycin, Minocycline,

Lincomycin, D-Galacturonic Acid, L-Galactonic Acid Lactone, D-Glucuronic

Acid, Glucuronamide, Vancomycin, Tetrazolium Violet, Potassium Tellurite,

Stachyose, D-Raffinose, D-Melibiose, N-Acetyl Neuraminic Acid, D-Sorbitol,

D-Arabitol, D-Aspartic Acid, D-Serine, Gelatin, L-Arginine, L-Pyroglutamic

Acid, Niaproof 4, Mucic Acid, Quinic Acid, D-Saccharic Acid, D-Lactic Acid

Methyl Ester, Citric Acid, α-Keto-Glutaric Acid, γ-Amino-Butryric Acid, β

-Hydroxy-D, LButyric Acid, Formic Acid은 탄소원으로 사용하지 못하는 것으

로 악되었다.

그림 67. 멸종 기 동물 장내 Microbacterium 속. M3R204의


3) Ochrobactrum pituitosum M3R205

M3R205 균주는 그람 양성을 나타내었으며, R2A 배지에서 콜로니의 색은

연한 노란색을 보 으며, 최 성장 온도는 20℃로 확인되었다(그림 68).

M3R205 균주의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, M3R205 균주는

Ochrobactrum pituitosum의 type strain과 99.62%의 유 상동성을 보여주었

다. 한, DNA 추출을 통해 GC-Content를 확인한 결과, 체 M3R205 균주의

염기 서열의 GC-Content는 약 55.0 mol%로 찰되었다.

- 97 -

BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 M3R205는 탄소원으로

Dextrin, N-Acetyl-DGlucosamine, N-Acetyl-DGalactosamine, α-D-Glucose,

D-Mannose, D-Fructose, D-Galactose, L-Rhamnose, Inosine, 1% Sodium

Lactate, myo-Inositol, Rifamycin SV, L-Alanine, L-Histidine, Guanidine HCl,

Tetrazolium Blue, Methyl Pyruvate, Lithium Chloride, Acetoacetic Acid,

Acetic Acid, Glycyl-L-Proline, L-Aspartic Acid, L-Glutamic Acid, L-Serine,

L-Lactic Acid, D-Malic Acid, L-Malic Acid, Bromo-Succinic Acid, Propionic

Acid, Aztreonam, D-Fucose, L-Fucose, Troleandomycin, Lincomycin,

D-Galacturonic Acid, L-Galactonic Acid Lactone, D-Glucuronic Acid,

Vancomycin, Tetrazolium Violet, Potassium Tellurite, D-Sorbitol, D-Arabitol,

Niaproof 4, Citric Acid, γ-Amino-Butryric Acid을 이용하여 생장할 수 있는 것

으로 확인되었다.

그러나, D-Maltose, D-Trehalose, D-Cellobiose, Gentiobiose, Sucrose,

D-Turanose, D-Salicin, Glycerol, Pectin, Nalidixic Acid, α-Keto-Butyric Acid,

Sodium Butyrate, D-Mannitol, D-Gluconic Acid, p-HydroxyPhenylacetic Acid,

Tween 40, α-HydroxyButyric Acid, Sodium Bromate, α-D-Lactose, β

-Methyl-DGlucoside, N-Acetyl-β-DMannosamine, 3-Methyl Glucose, Fusidic

Acid, D-Serine, D-Glucose-6-PO4, D-Fructose-6-PO4, Minocycline,

Glucuronamide, Stachyose, D-Raffinose, D-Melibiose, N-Acetyl Neuraminic

Acid, D-Aspartic Acid, D-Serine, Gelatin, L-Arginine, L-Pyroglutamic Acid,

Mucic Acid, Quinic Acid, D-Saccharic Acid, D-Lactic Acid Methyl Ester, α

-Keto-Glutaric Acid, β-Hydroxy-D,LButyric Acid, Formic Acid은 탄소원으로

사용하지 못하는 것으로 악되었다.

그림 68. 멸종 기 동물 장내 Ochrobactrum 속 M3R205의


- 98 -

4) Lysinibacillus mangiferihumi M1T305

M1T305 균주는 그람 양성을 나타내었으며, R2A 배지에서 콜로니의 색은

연한 노란색을 보 으며(그림 69), 최 성장 온도는 37℃로 확인되었다.

M1T305 균주의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, M1T305 균주는

Lysinibacillus mangiferihumi의 type strain과 99.19%의 유 상동성을 보여

주었다. 한, DNA 추출을 통해 GC-Content를 확인한 결과, 체 M1T305 균

주의 염기 서열의 GC-Content는 약 35.9 mol%로 찰되었다.

BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 M1T305는 탄소원으로

Dextrin, N-Acetyl-DGlucosamine, N-Acetyl-DGalactosamine, D-Fructose,

D-Galactose, L-Rhamnose, Inosine, 1% Sodium Lactate, myo-Inositol,

L-Alanine, L-Histidine, Methyl Pyruvate, Lithium Chloride, Acetoacetic Acid,

Acetic Acid, Glycyl-L-Proline, L-Aspartic Acid, L-Glutamic Acid, L-Serine,

L-Lactic Acid, D-Malic Acid, L-Malic Acid, Bromo-Succinic Acid, Propionic

Acid, Aztreonam, D-Fucose, L-Fucose, D-Galacturonic Acid, L-Galactonic

Acid Lactone, D-Glucuronic Acid, Potassium Tellurite, D-Arabitol, Citric

Acid, γ-Amino-Butryric Acid, D-Trehalose, D-Cellobiose, Gentiobiose,

Sucrose, D-Turanose, D-Salicin, Glycerol, α-Keto-Butyric Acid, Sodium

Butyrate, D-Mannitol, D-Gluconic Acid, Tween 40, α-HydroxyButyric Acid,

β-Methyl-DGlucoside, N-Acetyl-β-DMannosamine, 3-Methyl Glucose,

D-Serine, D-Glucose-6-PO4, D-Fructose-6-PO4, Glucuronamide, Stachyose,

D-Melibiose, N-Acetyl Neuraminic Acid, D-Aspartic Acid, D-Serine, Gelatin,

L-Arginine, L-Pyroglutamic Acid, Mucic Acid, Quinic Acid, D-Saccharic

Acid, D-Lactic Acid Methyl Ester, α-Keto-Glutaric Acid, β-

Hydroxy-D,LButyric Acid, Formic Acid을 이용하여 생장할 수 있는 것으로 확

인되었다. 그러나, α-D-Glucose, D-Mannose, Rifamycin SV, Guanidine HCl,

Tetrazolium Blue, Troleandomycin, Lincomycin, Vancomycin, Tetrazolium

Violet, D-Sorbitol, Niaproof 4, D-Maltose, Pectin, Nalidixic Acid,

p-HydroxyPhenylacetic Acid, Sodium Bromate, α-D-Lactose, Fusidic Acid,

Minocycline, D-Raffinose은 탄소원으로 사용하지 못하는 것으로 악되었다.

- 99 -

그림 69. 멸종 기 동물 장내 Lysinibacillus 속 M1T305의 자 미경과

배양체 사진

5) Streptococcus gallolyticus subsp. macedonicus M1T307

M1T307 균주는 그람 양성을 나타내었으며, TSA 배지에서 콜로니의 색은

연한 노란색을 보 으며(그림 70), 최 성장 온도는 37℃로 확인되었다.

M1T307 균주의 16S rRNA 유 자 염기서열을 분석한 결과, M1T307 균주는

Streptococcus gallolyticus subsp. macedonicus의 type strain과 99.70%의 유

상동성을 보여주었다. 한, DNA 추출을 통해 GC-Content를 확인한 결

과, 체 M1T307 균주의 염기 서열의 GC-Content는 약 38.3 mol%로 찰되

었다. BIOLOG GEN III 기기를 이용해서 분석한 결과 M1T305는 탄소원으로

Dextrin, N-Acetyl-D-Glucosamine, D-Fructose, D-Galactose, L-Rhamnose,

1% Sodium Lactate, Acetoacetic Acid, Aztreonam, D-Fucose, Potassium

Tellurite, D-Trehalose, D-Cellobiose, Gentiobiose, Sucrose, D-Turanose,

D-Salicin, Sodium Butyrate, D-Mannitol, β-Methyl-DGlucoside, N-Acetyl-

β-DMannosamine, D-Serine, Glucuronamide, Stachyose, D-Melibiose, α-

D-Glucose, D-Mannose, Tetrazolium Blue, Vancomycin, Tetrazolium Violet,

D-Maltose, Pectin, Nalidixic Acid, α-D-Lactose, Fusidic Acid, D-Raffinose

을 이용하여 생장할 수 있는 것으로 확인되었다. 그러나, N-Acetyl-D-

Galactosamine, Inosine, myo-Inositol, L-Alanine, L-Histidine, Methyl

Pyruvate, Lithium Chloride, Acetic Acid, Glycyl-L-Proline, L-Aspartic Acid,

L-Glutamic Acid, L-Serine, L-Lactic Acid, D-Malic Acid, L-Malic Acid,

Bromo-Succinic Acid, Propionic Acid, L-Fucose, D-Galacturonic Acid,

L-Galactonic Acid Lactone, D-Glucuronic Acid, D-Arabitol, Citric Acid, γ

-Amino-Butryric Acid, Glycerol, α-Keto-Butyric Acid, D-Gluconic Acid,

Tween 40, α-HydroxyButyric Acid, 3-Methyl Glucose, D-Glucose-6-PO4,

- 100 -

D-Fructose-6-PO4, N-Acetyl Neuraminic Acid, D-Aspartic Acid, D-Serine,

Gelatin, L-Arginine, L-Pyroglutamic Acid, Mucic Acid, Quinic Acid,

D-Saccharic Acid, D-Lactic Acid Methyl Ester, α-Keto-Glutaric Acid, β-

Hydroxy-D,LButyric Acid, Formic Acid, Rifamycin SV, Guanidine HCl,

Troleandomycin, Lincomycin, D-Sorbitol, Niaproof 4, p-HydroxyPhenylacetic

Acid, Sodium Bromate, Minocycline은 탄소원으로 사용하지 못하는 것으로

악되었다.

그림 70. 멸종 기 동물 장내 Streptococcus 속 M1T307의 자 미경과

배양체 사진

- 101 -

3 . 유 정 보 확 보’16년 발굴된 신종 후보종 5종을 상으로 유 체를 분석하여 유 정보를

확보하 다.

가. Halomonas sp. Hb3(호염성 신종 후보종)

Halomonas sp. Hb3의 체 유 체 길이는 3,543,891 bp이고, G+C content

는 67.9%로 확인되었으며, tRNA와 rRNA는 각각 70개와 12개이다. 유 자는

3,319개이며, 이 CDS는 3,236개로 분석되었다(표 4).

특성 내 용

Genome size 3,543,891

GC ratio 67.9%

Number of contigs 1

Number of rRNA genes 12

Number of tRNA genes 70

Number of CDS 3,236

표 4. Halomonas sp. Hb3 유 체의 일반 특성

범주 유 자 수 %

Translation, ribosomal structure and biogenesis 227 7.01

RNA processing and modification 1 0.03

Transcription 159 4.91

Replication, recombination and repair 110 3.40

Cell cycle control, cell division, chromosome partitioning 38 1.17

Defense mechanisms 61 1.89

Signal transduction mechanisms 112 3.46

Cell wall/membrane/envelope biogenesis 171 5.28

Cell motility 8 0.25

Intracellular trafficking, secretion, and vesicular transport 31 0.96

Posttranslational modification, protein turnover, chaperones 147 4.54

Mobilome: prophages, transposons 12 0.37

Energy production and conversion 198 6.12

Carbohydrate transport and metabolism 141 4.36

Amino acid transport and metabolism 269 8.31

Nucleotide transport and metabolism 72 2.22

Coenzyme transport and metabolism 129 3.99

Lipid transport and metabolism 135 4.17

Inorganic ion transport and metabolism 169 5.22

Secondary metabolites biosynthesis, transport and catabolism 68 2.10

General function prediction only 229 7.08

Multiple COG category 286 8.84

Function unknown 209 6.46

Nohit against COG database 254 7.85

합계 3,236 100%

표 5. Halomonas sp. Hb3 유 체의 COG 기반의 기능 범주(functional categories)

- 102 -

COG 분석 결과 Amino acid transport and metabolism, General function

prediction only, Translation, ribosomal structure and biogenesis, Energy

production and conversion, Cell wall/membrane/envelope biogenesis,

Inorganic ion transport and metabolism category 련 유 자가 각각 체의

5% 이상을 차지하고 있었으며, 기능이 알려지지 않은 유 자(Function

unknown)가 6.46%(209개)를 차지했고, COG database에 매칭되지 않은 유 자

들도 약 7.9% 정도 차지하고 있었다(표 5).

유 체 분석 결과로 complete genome 염기서열을 얻었고 유 체 지도는 여섯

개의 원으로 구성되며, 각 원은 외곽으로부터 안쪽으로 rRNA tRNA, reverse

CDS, forward CDS, GC ratio와 GC skew의 정보를 담고 있다(그림 71).

그림 71. Halomonas sp. Hb3의 유 체 지도

- 103 -

나. Marinobacter sp. Hb8(호염성 신종 후보종)

Marinobacter sp. Hb8의 체 유 체 길이는 4.12 mb이고, G+C content는

55.9%로 확인되었으며, tRNA와 rRNA는 각각 52개와 9개이다. 유 자는 3,855

개이며, 이 CDS는 3,793개로 분석되었다(표 6).

특성 내 용

Genome size 4,121,005

GC ratio 55.9%

Number of contigs 1



Number of CDS 3,793

표 6. Marinobacter sp. Hb8 유 체의 일반 특성






Chromatin structure and dynamics 0 0


Nuclear structure 0 0





Cytoskeleton 1 0.03

Extracellular structures 0 0














Multiple COG category 405 10.68


합계 3,793 100%

표 7. Marinobacter sp. Hb8 유 체의 COG 기반의 기능 범주(functional categories)

- 104 -

COG 분석 결과 Amino acid transport and metabolism, General function

prediction only, Translation, ribosomal structure and biogenesis, Energy

production and conversion, Cell wall/membrane/envelope biogenesis 각

category로 체 유 자 5% 이상 분류되었으며, 기능이 알려지지 않은 유 자

(Function unknown)가 5.59%(212개)를 차지했고, COG category에 매칭되지 않

은 유 자들은 체 유 자들의 10.4%로 매우 높았다. 이러한 정보는 아직까지

그 기능이 유추되지 않은 유 자들이 존재하고 있음을 시하며, 보다 상세한 분

석을 통하여 기능성 유 자들을 유추할 필요가 있는 것으로 단된다(표 7).




그림 72. Marinobacter sp. Hb8의 유 체 지도

- 105 -

다. Nibribacter sp. DG15C(방사선 내성 신종 후보종)

Nibribacter sp. DG15C의 체 유 체 크기는 4,143,738 bp이고 G+C

content는 49.21%이다. tRNA와 rRNA는 각각 42개와 9개이다. 유 자는 3,555


특성 내 용

Genome size(bp) 4,143,738

GC ratio 49.21%

Number of contigs 1



Number of CDS 3,507

표 8. Nibribacter sp. DG15C 유 체의 일반 특성






Chromatin structure and dynamics 1 0.03


Nuclear structure 0 0.00





Cytoskeleton 0 0.00

Extracellular structures 3 0.09













Nohitagainst COG database 1,215 34.64

합계 3,507 100%

표 9. Nibribacter sp. DG15C 유 체의 COG 기반의 기능 범주(functional categories)

- 106 -

COG 분석 결과 General function prediction only, RNA processing and

modification, Cell wall/membrane/envelope biogenesis, Amino acid transport

and metabolism 련 유 자가 체 유 자 약 5% 이상으로 분류되었으며,

기능이 알려지지 않은 유 자(Function unknown)가 3.17%(111개)를 차지했고,

COG category에 매칭되지 않은 유 자들은 체 유 자들의 34.64%로 매우 높

았다. 이러한 정보는 아직까지 그 기능이 유추되지 않은 유 자들이 존재하고 있

음을 시하며, 보다 상세한 분석을 통하여 기능성 유 자들을 유추할 필요가 있

는 것으로 단된다(표 9).




그림 73. Nibribacter sp. DG15C의 유 체 지도

- 107 -

라. Rufibacter sp. DG31D(방사선 내성 신종 후보종)

Rufibacter sp. DG31D의 체 유 체 크기는 4,820,793 bp이고 G+C content

는 51.35%이다. tRNA와 rRNA는 각각 41개와 7개이다. 유 자는 3,937개이며,

이 CDS는 3,907개로 분석되었다(표 10).

특성 내 용


GC ratio 51.35%

Number of contigs 1



Number of CDS 3,907

표 10. Rufibacter sp. DG31D 유 체의 일반 특성

범 주 유 자 수 %Translation, ribosomal structure and biogenesis 192 4.91











Cytoskeleton 0 0.00














Nohitagainst COG database 1,456 37.27

Total 3,907 100%

표 11. Rufibacter sp. DG31D 유 체의 COG 기반의 기능 범주(functional categories)

- 108 -

COG 분석 결과 General function prediction only, Cell wall/membrane/envelope

biogenesis, Amino acid transport and metabolism, Translation, ribosomal

structure and biogenesis 련 유 자가 체 유 자 약 5% 이상으로 분류되

었으며, 기능이 알려지지 않은 유 자(Function unknown)가 3.17%(124개)를 차

지했고, COG category에 매칭되지 않은 유 자들은 체 유 자들의 37.27%로

매우 높았다. 이러한 정보는 아직까지 그 기능이 유추되지 않은 유 자들이 존재

하고 있음을 시하며, 보다 상세한 분석을 통하여 기능성 유 자들을 유추할 필

요가 있는 것으로 단된다(표 11).


개의 원으로 구성되며, 각 원은 외곽으로부터 안쪽으로 COG category, forward

strand RNAs, forward strand genes, reverse strand genes, reverse strand RNAs,

GC ratio와 GC skew의 정보를 담고 있다(그림 74).

그림 74. Rufibacter sp. DG31D의 유 체 지도

- 109 -

마. Janthinobacterium sp. R-2-5(이탄층 신종 후보종)

Janthinobacterium sp. R-2-5의 체 유 체 크기는 5,966,936 bp이고 G+C

content는 65.45%이다. tRNA와 rRNA는 각각 96개와 24개이다. 유 자는 5,216


특성 내 용


GC ratio 65.45%

Number of contigs 1



Number of CDS 5,095

표 12. Janthinobacterium sp. R-2-5 유 체의 일반 특성

범 주 유 자 수 %












Cytoskeleton 0 0.00















Multiple COG categroy 703 13.8


합계 5,095 100%

표 13. Janthinobacterium sp. R-2-5 유 체의 COG 기반의 기능 범주(functional categories)

- 110 -

COG 분석 결과 Signal transduction mechanisms, General function

prediction only, Transcription, Cell wall/membrane/envelope biogenesis, Amino

acid transport and metabolism, Energy production and conversion 련 유 자

가 체 유 자 약 5% 이상으로 분류되었으며, 기능이 알려지지 않은 유 자

(Function unknown)가 6.67%(340개)를 차지했고, COG database에 매칭되지 않

은 유 자들도 약 6.8% 정도 차지하고 있었다(표 13).


개의 원으로 구성되며, 각 원은 외곽으로부터 안쪽으로 forward strand CDS,

reverse strand CDS, tRNA, rRNA, GC ratio와 GC skew의 정보를 담고 있다(그림

75).

그림 75. Janthinobacterium sp. R-2-5의 유 체 지도

- 111 -

Ⅳ . 고 찰

1. 방 사 선 내 성 미생물의 특징

2015년 연구를 통해 잘 알려진 방사선 내성 속(genus)인 Deinococcus 속

이외에 Hymenobacter 속과 Spirosoma 속의 미생물들이 발굴되었는데, 본 연

구에서는 더 많은 속에서 방사선 내성 미생물들이 발굴되었다. Bacillus 속,

Brevibacterium 속, Carnobacterium 속, Exiguobacterium 속, Larkinella 속,

Methylobacterium 속, Microvirga 속, Nibribacter 속, Pantoea 속,

Pseudokineococcus 속, Psychrobacter 속, Rufibacter 속에서 방사선 내성 미

생물들이 발굴되었다. 따라서 향후에는 감마선 조사 후 좀 더 다양한 배양 조

건에서 배양한다면 자연계에 존재하는 방사선 내성 세균 분류군의 다양성을

밝힐 수 있을 것이다.

이와 더불어 방사선 조사 과 조사 후의 미생물 군집 분석을 통해 미생

물의 구성이 바 는 것을 확인한다면, 자연계에 존재하는 방사선 내성 미생물

의 다양성 발굴 목표를 설정하는데 도움이 될 것으로 사료된다.

본 연구에서 분석된 방사선 내성 DG15CT 균주의 유 체 분석 결과, 방사

선으로 괴된 유 자를 복구할 수 있는 DNA mismatch repair system을 가

지고 있는 것이 확인되었다. 이 시스템은 MutL, MutS, MutS domine

family(MutS-fam1, MutS-dom, MutS-dom4, MutS-dom5, and MutS-dom6)

를 가지고 있어서 genomic DNA의 안정성을 높이고 있다. 한 UvrABC

complex 효소를 가지고 있어서 감사선에 의한 DNA의 구조 변화를 복구할

수 있다. 그 외 UvrA, UvrA-dimer, UvrB, UvrC, UvrA-BFC, UvrA-para,

UvrA-dom 유 자를 가지고 있어서 DNA의 손상을 신속히 복구할 수 있다.

DG31DT 균주는 유 체 분석 결과, 방사선으로 괴된 유 자를 복구할

수 있는 DNA 복구 련 유 자를 가지고 있는 것이 확인되었다. 이 시스템은

손상된 nucleotide를 삭제하고 복구하는 기작으로 련 유 자로 excinuclease

ABC subunit A, excinuclease ABC subunit A, excinuclease ABC subunit

C19를 가지고 있다. 한 DG15CT 균주와 같이 UvrABC 련 유 자도 가지

고 있어 DNA 손상을 복구할 수 있다.

2. 호 산 성 호 염 성 미생물의 특징

본 연구를 통하여 국내의 표 인 특수환경인, 구 달성군의 폐 산지역

- 112 -

제주도 해안 퇴 물과 섭이굴의 토양샘 로부터 확보한 균주는 호염성

미생물 2종 호산성 미생물 8종으로 총 10종을 확보하 다. 이들 호염성 미생

물은 모두 신종으로 보고하 으며, 호염성을 포함하여 본 연구를 통하여 발굴

된 호산성 미생물의 경우, 모두 Proteobacteria 문에 분포하는 것으로 조사되

었다. 속 수 에서는 Achromobacter 속, Acinetobacteria 속, Aquitalea 속,

Bradyrhizobium 속, Halomonas 속, Ideonella 속, Luteibacter 속, Marinobacter

속, Pseudomonas 속, Serratia 속에 해당되는 균주가 확보되었다.

일반 해양 환경으로부터 보다 높은 염농도를 필요로 하는 호염성 미생물을

발굴하기 하여 통상 으로 사용되는 marine 배지가 아닌, 최종 15%(w/v)의

염농도 배지를 만들어 배양을 시도하 다. 동시에, 일반 으로 발굴이 잘 안되는

미생물, 특히 신종후보 등을 배양하기 하여 최소 배지를 제작하여 발굴을 시

도하 다. 이럴 경우, 통상 인 배지에 비하여, 보다 다양한 미생물을 확보할 수

있을 것이라 단하 다.

호산성 미생물의 경우, 낮은 pH를 지닌 액체배지를 토양시료와 섞어 slurry

화하여 한 희석법을 통하여 배양을 시도하 다. 일반 으로 토양 시료 내에

는 곰팡이 등을 효과 으로 제거하는 근법을 통하여, 호산성미생물을 보다

극 으로 발굴하고자 하 다. 추후연구에서는 산소 여부 미생물 간의 상호작

용 등을 활용하여, 보다 신규성이 강한 미생물 발굴이 요구된다. 이러한 근법

을 통하여, 본 연구에서 발굴된 호염성 미생물 자원들은 신종 후보종으로 확인

되었으며, 이들의 성장에 있어, 높은 염농도를 필요로 하는 것으로 분석되었다.

본 연구에서 분석된 H8 균주의 유 자 에서 catechol을 완 히 분해할 수

있는 pathway가 발견되었으며, benzene의 경우 phenol을 거쳐 catechol로 분해

될 수 있는 유 자원이 확인되었다. 더불어, osmotic pressure와 련된 표 인

compatible solute인 glycine betaine(ProXWV)과 osmoprotectant(OpuBCBA)와

련된 ABC transport를 지니고 있는 것이 확인되었고, sulfur oxidation과 련된

SOX system을 완벽히 지니고 있음이 확인되었다.

한, Hb3 균주는 Osmotic pressure와 련된 표 인 compatible solute인

glycine betaine(ProXWV), trehalose(ThuEFGK)과 osmoprotectant(OpuBCBA)와

련된 ABC transport를 가지고 있는 것이 확인되었다. 한 완벽한 denitrification

을 진행할 수 있는 유 자를 지니고 있으며, 특히 방향족 화합물인 benzoate를

catechol을 거쳐 acetyl-CoA로 분해할 수 있는 유 자를 지니고 있어 추가 인 연

구를 통한 검증이 필요하다.

- 113 -

3 . 기 성 미생물의 특징

기 으로 methyl-compounds를 이용하는 세균 종은 공업 으로 특히 활

용 가능성이 높으며, 석탄을 활용하여 공업 으로 바로 활용 가능하지 않

은 복합 유기물질을 분해하여 one carbon molecule 등의 공업 활용이 가능한

형태의 탄소화합물을 생산함으로써 에 지 효율을 높여 자원의 재활용을 꾀하

는 연구의 상으로 쳐지고 있다. 다양한 형태의 난분해성의 compouds를 분

해하는 효소들의 발굴을 해서는 보다 다양한 조건의 기 배양 스크리닝

이 필요하다. 본 연구에서는 minimal media를 이용하여 한정된 기질을 제공함

과 동시에 High-throughput screening을 해 96 well plate를 이용하고, 유동계

수법 (flow cytometry)를 이용하여 배양체의 성장을 확인함으로써 해당 기질을

이용하는 2개 신종을 발굴함과 동시에 이후에 진행 가능한 다양한 조건의 량

발굴탐색을 한 시스템을 구축하 다.

한 본 연구에서 획득한 Desulfovibrio 속의 신종 후보군의 경우 uranium

(VI), chromium (VI) 그리고 iron (III) 등의 속을 환원시키는 능력을 가지고

있어 bioremediator 역할로써 연구 상이기도 하다. 이러한 난분해성 물질을 분

해하는 미생물 는 환경복원에 활용 가능한 균주에 한 연구는 호기성 미생물

연구에서 오래 부터 진행되어 왔지만, 기성 미생물을 통한 배양 의존 난분

해성 물질 분해 연구에는 기 으로 난배양성 미생물을 배양하는 데에 요구되

는 기술 , 시간 요소에 의해 연구가 더디게 진행되어 왔다. 때문에 기 으

로 미생물을 스크리닝하여 순수 배양체를 확보하는 것은 학문 으로 요한 데

이터로 이용될 수 있으며, 추후 확보된 배양체의 생리학 특성 분석을 통한 특

이효소의 분석은 요한 자원으로 활용될 수 있다.

4 . 이 탄 층 미생물의 특징

지구온난화와 련하여 이탄층에 존재하는 메탄산화균에 한 요성이 커

지고 있다. 이는 이탄층( 세계 토지의 약 3%)에 서식하는 메탄산화균에 의한

메탄 감량이 크기 때문이다. 특히, 산성환경에서 생장하는 메탄산화균에 한

연구는 휘발성유기화합물(VOCs)로 오염된 산성 토양 지하수에서 메탄산화

균을 이용한 생물학 정화기법의 연구로 이어질 수 있어 국내외 으로 활발하

게 이루어지고 있다. 하지만 재까지 기록된 종의 수가 히 고 이탄 습지

의 경우, 유기물 산화로 인하여 산성환경이 만들어져 있는 곳이다. 따라서 이탄

습지에서 생장하는 메탄산화균 분리는 생물학 공학 으로 큰 의미를 지닌

다.

- 114 -

본 연구에서 분석된 방사선 내성 R-2-5T 균주의 유 체 분석 결과, 양

분이 없는 상황에서 살아남을 수 있는 유 자가 있는 것으로 확인되었다. 이

PhoR, PhoB 유 자의 역할로 이탄습지 내에 페놀릭과 같이 유기물 분해 감

물질들로 인해 미생물이 생장에 충분한 유기물이 공 되지 않는 환경에서 생

존할 수 있을 것으로 추정된다.

5 . 멸 종 기 동 물 장 내 미생물의 특징

동물의 장내 환경은 외부에서 일반 인 배양 조건을 맞춰 실험을 진행하

기에 어려움이 많은 특성이 있기 때문에 본 연구에서는 다양한 배지와 배양

조건을 조합하여, 최 한 다양한 장내 미생물을 확보하고자 하는 것을 목표로

실험을 진행하 다. 미생물은 부분 특정 배지에 선택 으로 성장하기 때문

에 이런 방법을 사용하 다. 따라서 앞으로 보다 다양한 장내 미생물 발굴을

해서는 배지의 조성과 환경 자체를 최 한 동물이 생존하고 있을 때의 장내

환경과 유사하게 조성하여, 이 에 보고되지 않은 새로운 미생물을 발굴하는

것이 필요하다.

이번에 확보한 멸종 기 동물의 장내 미생물 신종으로 확인된

Vagococcus sp. D7T301 균주는 이 에 물개, 고래, 벌 등 다양한 동물 내에서

발견되어 보고된 종으로, 외부 환경에 유래된 것이 아닌 실제 동물 장내에서 살

고 있을 것으로 악되나, 재 담비나 사향노루와 같은 멸종 기 동물의 장내

미생물의 군집 조사는 이루어 있지 않은 상황이기에, 신종 발굴과 함께 메타게

놈 분석 결과를 목하여, 보다 효과 인 발굴을 시도할 필요가 있다. 멸종 기

장내 미생물의 발굴은 단순하게 기존에 알려지지 않은 새로운 미생물의 발견과

보고를 넘어, 동물 생명활동에 요한 역할을 하고 있는 공생 세균의 생리학

인 특성의 확인으로 이어질 수 있기 때문에 로바이오틱스(probiotics)와 같은

소화 보조 면역 활동 향상 등 다양한 분야로 응용이 가능할 것으로 상된다.

- 115 -

Ⅴ . 참고 문 헌

국립생물자원 . 2013. 환경복원에 활용 가능한 기성 원핵생물 고세균

조사․발굴 연구

국립생물자원 . 2014. 특수 환경 미생물자원 조사․발굴

국립생물자원 . 2015. 특수 환경 미생물자원 발굴 특성 분석 I

진득환. 2006. 습지보 황과 책. 2006 세계습지의 날 기념 특별세미나

심포지엄 자료집. 해양수산부ㆍ환경부ㆍ순천시, 117-127.

Adams JL, Battjes CJ and Buthala DA. 1987. Biological specimen

preparation for SEM by a method other than critical point drying.

Proceedings of the 45th Annual Meeting of the Electron Microscopy

Society of America. Edited by G. W. Bailey. San Francisco Press, San

Francisco.

Becker MH, Richards-Zawacki CL, Gratwicke B and Belden LK. 2014. The

effect of captivity on the cutaneous bacterial community of the

critically endangered Panamanian golden frog (Atelopus zeteki).

Biological Conservation, 176: 199-206.

Chun J, Lee JH, Jung Y, Kim M, Kim S, Kim BK and Lim YW. 2007.

EzTaxon: a web-based tool for the identification of prokaryotes based

on 16S ribosomal RNA gene sequences. Int J Syst Evol Microbiol. 57:

2259-2261.

Ezaki T, Hashimoto Y and Yabuuchi E. 1989. Fluorometric deoxyribonucleic

acid deoxyribonucleic acid hybridization in microdilution wells as an

alternative to membrane filter hybridization in which radioisotopes are

used to determine genetic relatedness among bacterial strains. Int J

Syst Bacteriol. 39: 224-229.

Fodor AA, DeSantis TZ, Wylie KM, Ye Y, Hepburn T, Hu P, Sodergren

E, Liolios K, Huot-Creasy H, Birren BW and Earl AM. 2012. The

“most wanted” taxa from the human microbiome for whole genome

sequencing. PloS One. 7(7): e41294.

Hiraishi A, Ueda Y, Ishihara J and Mori T. 1996. Comparative lipoquinone

analysis of influent sewage and activated sludge by high-performance

liquid chromatography and photodiode array detection. J Gen Appl

Microbiol. 42: 457-469.

- 116 -

International Union for Conservation of Nature (IUCN). 2012. IUCN red list

of threatened species. Version 2011.1.

Kip N, Ouyang W, van Winden J, Raghoebarsing A, van Niftrik L, Pol A

and Jetten MS. 2011. Detection, isolation, and characterization of

acidophilic methanotrophs from Sphagnum mosses. Appl Environ

Microbiol. 77(16): 5643-5654.

Komagata K and Suzuki K. 1987. Lipids and cell-wall analysis in bacterial

systematics. Methods Microbiol. 19: 161-203.

Leadbetter ER. 1974. “Family Methylomonadaceae.” In: Buchanan and

Gibbons (Eds.). Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology. 8th Ed.

Mesbah M, Premachandran U and Whitman W. 1989. Precisemeasurement of

the G+C content of deoxyribonucleic acid by high performance liquid

chromatography. Int J Syst Bacteriol. 39: 159-167.

Meslé M, Dromart G and Oger P. 2013. Microbial methanogenesis in

subsurface oil and coal. Res Microbiol. 164: 959-972.

Mininikin DE, O’Donnell AG, Goodfellow M, Alderson G, Athalye M,

Schaal A and Parlett JH. 1984. Anintegrated procedure for the

extracition of bacterial isoprenoid quinones and polar lipids. Int J

Microbiol Methods. 2: 233-241.

Round JL and Mazmanian SK. 2009. The gut microbiota shapes intestinal

immune responses during health and disease. Nat Rev Immunol. 9: 313-323.

Oren A. 2014. Taxonomy of halophilic Archaea: current status and future

challenges. Extremophiles. 18: 825-834.

Oren A. 2015. Halophilic microbial communities and their environments.

Curr Opin Biotechnol. 33: 119-124.

Pruesse E, Quast C, Knittel K, Fuchs BM, Ludwig W, Peplies J and

Glöckner FO. 2007. SILVA: A comprehensive online resource for

quality checked and aligned ribosomal RNA sequence data compatible

with ARB. Nucleic Acids Res. 35: 7188–7196.

Saitou N and Nei M. 1987. The neighbor-joining method: a new method

for reconstructing phylogenetic trees. Mol Biol Evol. 4: 406-425.

Sasser M. 1990. Identification of bacteria by gas chromatography of cellular

fatty acids. MIDI Technical Note 101. MIDI Inc., Newark, DE, USA.

Schädler S, Burkhardt C and Kappler A. 2008. Evaluation of electron

- 117 -

microscopic sample preparation methods and imaging techniques for

characterization of cell-mineral aggregates. Geomicrobiology. 25: 228-239.

Sehgal S and Gibbons N. 1960. Effect of some metal ions on the growth

of Halobacterium cutirubrum. Can J Microbiol. 6: 165-169.

Tamura K, Stecher G, Peterson D, Filipski A and Kumar S. 2013. MEGA6:

Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 6.0. Mol Biol Evol.

30: 2725-2729.

Turnbaugh PJ, Ley RE, Mahowald MA, Magrini V, Mardis ER and Gordon

JI. 2006. An obesity-associated gut microbiome with increased capacity

for energy harvest. Nature. 444(7122): 1027-1131.

Ventosa A, Nieto JJ and Oren A. 1998. BIOLOGy of moderately halophilic

aerobic bacteria. Microbiol Mol Biol Rev 62, 504-544.

Ventosa A, Quesada E, Rodriguez-Valera F, Ruiz-Berraquero F and

Ramos-Cormenzana A. 1982. Numerical taxonomy of moderately

halophilic Gram-negative rods. J Gen Microbiol. 128: 1959-1968.

Waite DW, Deines P and Taylor MW. 2012. Gut microbiome of the

critically endangered New Zealand parrot, the kakapo (Strigops

habroptilus). PLoS One. 7(4): e35803.

Weber KA, Achenbach LA and Coates JD. 2006. Microorganisms pumping

iron: anaerobic microbial iron oxidation and reduction. Nat Rev

Microbiol. 4(10): 752–764.

Wrighton KC, Agbo P, Warnecke F, Weber KA, Brodie EL, DeSantis TZ,

Hugenholtz P, Andersen GL and Coates JD. 2008. A novel ecological

role of the Firmicutes identified in thermophilic microbial fuel cells.

ISME J 2: 1146–1156.

Yarza P, Yilmaz P, Pruesse E, Glöckner FO, Ludwig W, Schleifer KH,

Whitman WB, Euzéby J, Amann R and Rosselló-Móra R. 2014. Uniting

the classification of cultured and uncultured bacteria and archaea using

16S rRNA gene sequences. Nat Rev Microbiol. 12: 635–645.

Yim KJ, Cha IT, Lee HW, Song HS, Kim KN, Lee SJ, Nam YD, Hyun

DW, Bae JW, Rhee SK, Seo MJ, Choi JS, Choi HJ, Roh SW and Kim

D. 2014. Halorubrum halophilum sp. nov., an extremely halophilic

archaeon isolated from a salt-fermented seafood. Antonie van

Leeuwenhoek. 105: 603-612.

- 119 -

부록 1. 특수 환경 미생물자원의 BI O L O G 분석 결 과

방 사 선 내 성미생물(신 종 1) : Deinoccous sp. K S M4 - 11T

Biochemical testNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid -

Positive control + 1% Sodium Lactate - Glucuronamide -

Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid -

D-Maltose - D-Serine - Quinic acid -

D-Trehalose + D-Sorbitol - D-Saccharic acid -

D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin -

Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet -

Sucrose - myo-Inositol - Tetrazolium blue -

D-Turanose - Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid -

Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate -

pH6 - D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -

pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid -

D-Raffinose - D-Serine - Citric acid -

α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid -

D-Melibiose - Rifamycin SV - D-Malic acid -

β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid -

D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid -

N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline - Nalidixic acid -

N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine - Lithium chloride -

N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite -

N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid - Tween40 -

1% NaCl - L-Glutamic acid - γ-Amino-Butryric acid -

4% NaCl - L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid -

8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -

α-D-Glucose - L-Serine - α-keto-Butryric acid -

D-Mannose + Lincomycin - Aceto Acetic acid -

D-Fructose - Guanidine HCl - Propionic acid -

D-Galactose - Niaproof4 - Acetic acid -

3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -

D-Fucose - D-Galacturonic acid - Aztreonam -

L-Fucose - L-Galactonic acid Lactone - Sodium Butyrate -

L-Rhamnose + D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 120 -

방 사 선 내 성미생물(신 종 2) : Flavisolibacter sp. L C S 9 T




D-Maltose + D-Serine - Quinic acid -

D-Trehalose - D-Sorbitol - D-Saccharic acid -











β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +


N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline - Nalidixic acid -







α-D-Glucose + L-Serine - α-keto-Butryric acid -







L-Rhamnose - D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 121 -

방 사 선 내 성미생물(신 종 3 ) : Nibribacter sp. DG 15 C T


























D-Mannose - Lincomycin - Aceto Acetic acid -





L-Fucose - L-Galactonic acid Lactone + Sodium Butyrate -

L-Rhamnose - D-Gluconic acid + Sodium Bromate -

- 122 -

방 사 선 내 성미생물(신 종 4 ) : Rufibacter sp. DG 3 1DT






D-Cellobiose + D-Mannitol - Vancomycin -








α-D-Lactose + Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid -



















- 123 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 1) : Bacillus selenatarsenatis 15 J 4 M- 1

Biochemical testNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid +

Positive control + 1% Sodium Lactate - Glucuronamide +


D-Maltose + D-Serine - Quinic acid +

D-Trehalose + D-Sorbitol + D-Saccharic acid -

D-Cellobiose + D-Mannitol + Vancomycin -

Gentiobiose + D-Arabitol + Tetrazolium violet -

Sucrose + myo-Inositol + Tetrazolium blue -

D-Turanose + Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid -

Stachyose + D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate -

pH6 - D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster +

pH5 - D-Aspartic acid + L-Lactic acid +

D-Raffinose + D-Serine + Citric acid -

α-D-Lactose + Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid +

D-Melibiose + Rifamycin SV + D-Malic acid -

β-Methyl-D-Glucoside + Minocycline - L-Malic acid -

D-Salicin + Gelatin + Bromo-Succinic acid -

N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline + Nalidixic acid -

N-Acetyl-β-D-Mannosamin + L-Alanine - Lithium chloride +

N-Acetyl-D-Galactosamine + L-Arginine + Potassium Tellurite +

N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 -

1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -

4% NaCl + L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid -

8% NaCl + L-Pyroglutamic acid + β-Hydroxy-Butryric acid -

α-D-Glucose + L-Serine + α-keto-Butryric acid +

D-Mannose + Lincomycin - Aceto Acetic acid +

D-Fructose + Guanidine HCl - Propionic acid +

D-Galactose + Niaproof4 - Acetic acid +

3-Methy-Glucose + Pectin + Formic acid -

D-Fucose + D-Galacturonic acid + Aztreonam -

L-Fucose + L-Galactonic acid Lactone + Sodium Butyrate +

L-Rhamnose + D-Gluconic acid + Sodium Bromate -

- 124 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 2) : Brevibacterium luteolum 15 J 13 - 8


Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide +

Dextrin + Fusidic acid - Mucic acid +

D-Maltose - D-Serine + Quinic acid +

D-Trehalose + D-Sorbitol + D-Saccharic acid +




D-Turanose + Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid +

Stachyose + D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate +

pH6 + D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster +


D-Raffinose + D-Serine - Citric acid +


D-Melibiose + Rifamycin SV - D-Malic acid +

β-Methyl-D-Glucoside + Minocycline - L-Malic acid +

D-Salicin + Gelatin + Bromo-Succinic acid -

N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline + Nalidixic acid +

N-Acetyl-β-D-Mannosamin + L-Alanine + Lithium chloride +


N-Acetyl-Neuraminic acud + L-Aspartic acid + Tween40 +

1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid +

4% NaCl + L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid +

8% NaCl + L-Pyroglutamic acid + β-Hydroxy-Butryric acid +

α-D-Glucose + L-Serine + α-keto-Butryric acid -



D-Galactose + Niaproof4 + Acetic acid +

3-Methy-Glucose + Pectin + Formic acid +

D-Fucose + D-Galacturonic acid + Aztreonam +



- 125 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 3 ) : Carnobacterium iners 16MF M10



Dextrin + Fusidic acid + Mucic acid -


D-Trehalose + D-Sorbitol - D-Saccharic acid +


Gentiobiose + D-Arabitol - Tetrazolium violet +

Sucrose + myo-Inositol - Tetrazolium blue -

D-Turanose - Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid -

Stachyose + D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate -

pH6 + D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster -



α-D-Lactose + Troleandomycin + α-Keto-Glutaric acid -


β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline + L-Malic acid -


N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline - Nalidixic acid +


N-Acetyl-D-Galactosamine + L-Arginine + Potassium Tellurite -

N-Acetyl-Neuraminic acud + L-Aspartic acid - Tween40 -

1% NaCl + L-Glutamic acid - γ-Amino-Butryric acid -


8% NaCl + L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -

α-D-Glucose + L-Serine - α-keto-Butryric acid +

D-Mannose + Lincomycin + Aceto Acetic acid +

D-Fructose + Guanidine HCl - Propionic acid -

D-Galactose + Niaproof4 - Acetic acid -



L-Fucose + L-Galactonic acid Lactone - Sodium Butyrate +


- 126 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 4 ) : Exiguobacterium profundum 15 J 1- 8

Biochemical testNegative control - Inosine + D-Glucuronic acid +


Dextrin + Fusidic acid - Mucic acid -

D-Maltose + D-Serine + Quinic acid +









D-Raffinose + D-Serine - Citric acid -

α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid +

D-Melibiose + Rifamycin SV - D-Malic acid -


D-Salicin - Gelatin + Bromo-Succinic acid -



N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite +




8% NaCl + L-Pyroglutamic acid + β-Hydroxy-Butryric acid -



D-Fructose + Guanidine HCl + Propionic acid +



D-Fucose - D-Galacturonic acid + Aztreonam -

L-Fucose - L-Galactonic acid Lactone + Sodium Butyrate +


- 127 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 5 ) : Larkinella insperata S R1- 5 - 4






D-Cellobiose + D-Mannitol - Vancomycin +


Sucrose + myo-Inositol - Tetrazolium blue +




pH5 D-Aspartic acid - L-Lactic acid -





D-Salicin + Gelatin - Bromo-Succinic acid -


N-Acetyl-β-D-Mannosamin + L-Alanine - Lithium chloride -

N-Acetyl-D-Galactosamine + L-Arginine - Potassium Tellurite -









3-Methy-Glucose - Pectin + Formic acid -


L-Fucose - L-Galactonic acid Lactone + Sodium Butyrate -


- 128 -

방사선 내성 미생물 (미기록종 6): Methylobacterium hispanicum 15J10-8T5



Dextrin - Fusidic acid + Mucic acid +


D-Trehalose - D-Sorbitol - D-Saccharic acid +


Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet +

Sucrose - myo-Inositol - Tetrazolium blue +


Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate +

pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -


D-Raffinose - D-Serine - Citric acid +


D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid +


D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid +

N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline - Nalidixic acid +




1% NaCl - L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -


8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid +

α-D-Glucose - L-Serine - α-keto-Butryric acid +

D-Mannose - Lincomycin + Aceto Acetic acid +


D-Galactose - Niaproof4 - Acetic acid +


D-Fucose - D-Galacturonic acid - Aztreonam +

L-Fucose - L-Galactonic acid Lactone - Sodium Butyrate +


- 129 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 7 ) : Methylobacterium soli K S M3 - 9



Dextrin - Fusidic acid + Mucic acid -

D-Maltose - D-Serine + Quinic acid -







pH6 - D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster -

pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid +



D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid +







1% NaCl - L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -



α-D-Glucose - L-Serine + α-keto-Butryric acid -

D-Mannose - Lincomycin + Aceto Acetic acid -



3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid +




- 130 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 8 ): Microvirga subterranea 15 J 8 - 3





D-Trehalose - D-Sorbitol + D-Saccharic acid -






pH6 - D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster -







N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline + Nalidixic acid -

N-Acetyl-β-D-Mannosamin + L-Alanine - Lithium chloride -











D-Fucose - D-Galacturonic acid + Aztreonam -



- 131 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 9 ) : Microvirga zambiensis 15 J 7 - 3 T 5








Sucrose - myo-Inositol + Tetrazolium blue +











N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride -







D-Mannose + Lincomycin + Aceto Acetic acid -







- 132 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 10) : Pantoea eucrina 15 J 17 K








Sucrose + myo-Inositol + Tetrazolium blue +


Stachyose - D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate -


pH5 + D-Aspartic acid - L-Lactic acid +

D-Raffinose - D-Serine + Citric acid +


D-Melibiose + Rifamycin SV + D-Malic acid +


D-Salicin + Gelatin - Bromo-Succinic acid +



N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine + Potassium Tellurite +







D-Fructose + Guanidine HCl + Propionic acid +

D-Galactose + Niaproof4 + Acetic acid +

3-Methy-Glucose + Pectin - Formic acid +




- 133 -

방사선 내성 미생물(미기록종 11) : Pseudokineococcus lusitanus 15 J 13 - 6






D-Cellobiose + D-Mannitol + Vancomycin +

Gentiobiose + D-Arabitol + Tetrazolium violet +


D-Turanose + Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid -



pH5 + D-Aspartic acid + L-Lactic acid -







N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride +


N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid - Tween40 +









D-Fucose - D-Galacturonic acid + Aztreonam +

L-Fucose - L-Galactonic acid Lactone + Sodium Butyrate +

L-Rhamnose + D-Gluconic acid + Sodium Bromate +

- 134 -

방사선 내성 미생물(미기록종 12) : Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C




D-Maltose + D-Serine + Quinic acid -



Gentiobiose - D-Arabitol + Tetrazolium violet -

Sucrose - myo-Inositol + Tetrazolium blue +






α-D-Lactose + Troleandomycin + α-Keto-Glutaric acid -




N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline + Nalidixic acid +



N-Acetyl-Neuraminic acud + L-Aspartic acid + Tween40 +


4% NaCl + L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid -

8% NaCl + L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid +


D-Mannose + Lincomycin + Aceto Acetic acid -




D-Fucose + D-Galacturonic acid - Aztreonam +


L-Rhamnose + D-Gluconic acid - Sodium Bromate +

- 135 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 13 ) : Psychrobacter maritimus 216MG T 3





D-Trehalose + D-Sorbitol + D-Saccharic acid -

D-Cellobiose - D-Mannitol + Vancomycin -

Gentiobiose + D-Arabitol - Tetrazolium violet -


D-Turanose + Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid +




D-Raffinose - D-Serine + Citric acid +




D-Salicin - Gelatin + Bromo-Succinic acid +




N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 +






D-Fructose + Guanidine HCl Propionic acid +

D-Galactose - Niaproof4 Acetic acid +

3-Methy-Glucose - Pectin + Formic acid +




- 136 -

방사선 내성 미생물(미기록종 14) : Psychrobacter okhotskensis 216MGM6







Gentiobiose + D-Arabitol + Tetrazolium violet +



Stachyose - D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate +



D-Raffinose - D-Serine + Citric acid -











8% NaCl - L-Pyroglutamic acid + β-Hydroxy-Butryric acid +





3-Methy-Glucose + Pectin - Formic acid -




- 137 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 15 ) : Psychrobacter urativorans 16MF M4


Positive control - 1% Sodium Lactate + Glucuronamide +


D-Maltose + D-Serine + Quinic acid +






Stachyose + D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate +



D-Raffinose + D-Serine + Citric acid +




D-Salicin - Gelatin + Bromo-Succinic acid +
















- 138 -

방 사 선 내 성 미생물(미기 록 종 16) : Spirosoma endophyticum 15 J 8 - 11


















N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline - Nalidixic acid -







α-D-Glucose - L-Serine - α-keto-Butryric acid +






L-Fucose + L-Galactonic acid Lactone + Sodium Butyrate -


- 139 -

호 염 성 미생물(신 종 1) : Marinobacter sp. H b 8 T

Biochemical testNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid -Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose - D-Serine - Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol - D-Saccharic acid -D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin +Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet -Sucrose - myo-Inositol - Tetrazolium blue -D-Turanose - Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate -pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine - Citric acid -α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid -D-Melibiose - Rifamycin SV - D-Malic acid +β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid +N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline - Nalidixic acid -N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine - Lithium chloride +N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite +N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid - Tween40 +1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl + L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl + L-Pyroglutamic acid + β-Hydroxy-Butryric acid +α-D-Glucose - L-Serine - α-keto-Butryric acid -D-Mannose - Lincomycin - Aceto Acetic acid +D-Fructose - Guanidine HCl - Propionic acid +D-Galactose - Niaproof - Acetic acid +3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose - D-Galacturonic acid - Aztreonam +L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate -L-Rhamnose - D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 140 -

호 염 성 미생물(신 종 2) : Halomonas sp. H b 3 T


Positive control + 1% Sodium Lactate w Glucuronamide -

Dextrin w Fusidic acid - Mucic acid -



D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin +


Sucrose + myo-Inositol - Tetrazolium blue -



pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -




D-Melibiose - Rifamycin SV - D-Malic acid +


D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid w



N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine + Potassium Tellurite -



4% NaCl + L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid +

8% NaCl + L-Pyroglutamic acid w β-Hydroxy-Butryric acid +


D-Mannose - Lincomycin + Aceto Acetic acid w

D-Fructose - Guanidine HCl - Propionic acid +

D-Galactose - Niaproof - Acetic acid +



L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate +


- 141 -

호 산 성 미생물(미기 록 종 1) : Achromobacter spanius 4 - 8

Biochemical testNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid -Positive control + 1% Sodium Lactate - Glucuronamide -Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid +D-Maltose - D-Serine - Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol - D-Saccharic acid +D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin +Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet +Sucrose - myo-Inositol - Tetrazolium blue +D-Turanose - Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid +Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate +pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine - Citric acid +α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid +D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid +β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid -N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline - Nalidixic acid +N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine - Lithium chloride +N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite -N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 -1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl + L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid + β-Hydroxy-Butryric acid -α-D-Glucose - L-Serine - α-keto-Butryric acid -D-Mannose - Lincomycin + Aceto Acetic acid -D-Fructose - Guanidine HCl + Propionic acid -D-Galactose - Niaproof + Acetic acid +3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose - D-Galacturonic acid - Aztreonam +L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate -L-Rhamnose - D-Gluconic acid + Sodium Bromate -

- 142 -

호 산 성 미생물(미기 록 종 2) : Aquitaiea magnusonii 4 - 10

Biochemical testNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid -Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose - D-Serine - Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol + D-Saccharic acid -D-Cellobiose - D-Mannitol + Vancomycin +Gentiobiose - D-Arabitol + Tetrazolium violet +Sucrose + myo-Inositol + Tetrazolium blue +D-Turanose - Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid +Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate +pH6 + D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster -pH5 + D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine - Citric acid +α-D-Lactose - Troleandomycin + α-Keto-Glutaric acid +D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid +β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid +N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline + Nalidixic acid -N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride -N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine + Potassium Tellurite +N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 -1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid +4% NaCl - L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid +8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid +α-D-Glucose + L-Serine + α-keto-Butryric acid +D-Mannose - Lincomycin + Aceto Acetic acid +D-Fructose + Guanidine HCl - Propionic acid +D-Galactose - Niaproof + Acetic acid +3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose - D-Galacturonic acid - Aztreonam +L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate -L-Rhamnose - D-Gluconic acid + Sodium Bromate -

- 143 -

호 산 성 미생물(미기 록 종 3 ) : Ideonella dechloratant 4 - 19

Biochemical testNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid +Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide +Dextrin + Fusidic acid - Mucic acid +D-Maltose + D-Serine + Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol - D-Saccharic acid +D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin +Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet +Sucrose - myo-Inositol - Tetrazolium blue +D-Turanose - Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose - D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate +pH6 + D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster +pH5 + D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine + Citric acid +α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid +D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid +β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin + Bromo-Succinic acid +N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline - Nalidixic acid -N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride -N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite -N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 +1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid +4% NaCl - L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid +8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid +α-D-Glucose + L-Serine - α-keto-Butryric acid +D-Mannose + Lincomycin + Aceto Acetic acid +D-Fructose - Guanidine HCl - Propionic acid +D-Galactose + Niaproof - Acetic acid +3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid +D-Fucose + D-Galacturonic acid + Aztreonam +L-Fucose + Lactone + Sodium Butyrate +L-Rhamnose + D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 144 -

호 산 성 미생물(미기 록 종 4 ) : Acinetobacter bereziae 4 - 15

Biochemical testNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid -Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose - D-Serine + Quinic acid +D-Trehalose - D-Sorbitol - D-Saccharic acid -D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin +Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet +Sucrose - myo-Inositol - Tetrazolium blue +D-Turanose - Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate +pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 + D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine + Citric acid +α-D-Lactose - Troleandomycin + α-Keto-Glutaric acid +D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid +β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid +N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline - Nalidixic acid +N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride -N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite -N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 +1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid +4% NaCl - L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid + β-Hydroxy-Butryric acid +α-D-Glucose - L-Serine - α-keto-Butryric acid +D-Mannose - Lincomycin + Aceto Acetic acid -D-Fructose - Guanidine HCl + Propionic acid +D-Galactose - Niaproof + Acetic acid +3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose + D-Galacturonic acid - Aztreonam -L-Fucose + Lactone - Sodium Butyrate +L-Rhamnose - D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 145 -

호 산 성 미생물(미기 록 종 5 ) : Pseudomonas extremaustralis 4 - 20

Biochemical testNegative control - Inosine + D-Glucuronic acid +Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose - D-Serine + Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol + D-Saccharic acid +D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin +Gentiobiose - D-Arabitol + Tetrazolium violet +Sucrose - myo-Inositol + Tetrazolium blue +D-Turanose - Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid +Stachyose - D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate +pH6 + D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster -pH5 + D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine + Citric acid +α-D-Lactose - Troleandomycin + α-Keto-Glutaric acid -D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid -β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid +N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline + Nalidixic acid -N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride +N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite +N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 -1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl + L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -α-D-Glucose + L-Serine + α-keto-Butryric acid -D-Mannose + Lincomycin + Aceto Acetic acid -D-Fructose + Guanidine HCl + Propionic acid -D-Galactose + Niaproof + Acetic acid +3-Methy-Glucose + Pectin + Formic acid +D-Fucose - D-Galacturonic acid + Aztreonam +L-Fucose - Lactone + Sodium Butyrate -L-Rhamnose + D-Gluconic acid + Sodium Bromate -

- 146 -

호 산 성 미생물(미기 록 종 6) : Serratia fonticola AS 15

Biochemical testNegative control - Inosine + D-Glucuronic acid +Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -Dextrin + Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose + D-Serine + Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol + D-Saccharic acid +D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin +Gentiobiose + D-Arabitol + Tetrazolium violet +Sucrose - myo-Inositol + Tetrazolium blue +D-Turanose - Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid +Stachyose + D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate +pH6 + D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster -pH5 + D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose + D-Serine + Citric acid +α-D-Lactose - Troleandomycin + α-Keto-Glutaric acid -D-Melibiose + Rifamycin SV + D-Malic acid -β-Methyl-D-Glucoside + Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid +N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline + Nalidixic acid -N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride +N-Acetyl-D-Galactosamine + L-Arginine - Potassium Tellurite +N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 -1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl + L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -α-D-Glucose + L-Serine + α-keto-Butryric acid -D-Mannose + Lincomycin + Aceto Acetic acid -D-Fructose + Guanidine HCl + Propionic acid -D-Galactose + Niaproof + Acetic acid +3-Methy-Glucose + Pectin + Formic acid +D-Fucose - D-Galacturonic acid + Aztreonam +L-Fucose - Lactone + Sodium Butyrate -L-Rhamnose + D-Gluconic acid + Sodium Bromate -

- 147 -

호 산 성 미생물(미기 록 종 7 ) : Luteibacter anthropi AD3 8

Biochemical testNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid -Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -Dextrin + Fusidic acid + Mucic acid -D-Maltose + D-Serine + Quinic acid -D-Trehalose + D-Sorbitol - D-Saccharic acid -D-Cellobiose + D-Mannitol + Vancomycin +Gentiobiose + D-Arabitol + Tetrazolium violet +Sucrose + myo-Inositol + Tetrazolium blue +D-Turanose + Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose + D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate -pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 + D-Aspartic acid - L-Lactic acid -D-Raffinose - D-Serine - Citric acid -α-D-Lactose + Troleandomycin + α-Keto-Glutaric acid -D-Melibiose + Rifamycin SV + D-Malic acid -β-Methyl-D-Glucoside + Minocycline + L-Malic acid +D-Salicin + Gelatin + Bromo-Succinic acid -N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline + Nalidixic acid +N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride -N-Acetyl-D-Galactosamine + L-Arginine - Potassium Tellurite -N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid - Tween40 -1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl + L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid +α-D-Glucose + L-Serine + α-keto-Butryric acid -D-Mannose + Lincomycin + Aceto Acetic acid -D-Fructose + Guanidine HCl + Propionic acid -D-Galactose + Niaproof - Acetic acid -3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose + D-Galacturonic acid - Aztreonam +L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate -L-Rhamnose - D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 148 -

호 산 성 미생물(미기 록 종 8 ) : Bradyrhizobium erythrophle B8

BI O L O G T E S T

Negative control - Inosine - D-Glucuronic acid +


Dextrin - Fusidic acid + Mucic acid -



D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin +






pH5 + D-Aspartic acid - L-Lactic acid +


α-D-Lactose - Troleandomycin + α-Keto-Glutaric acid -

D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid -

β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline + L-Malic acid +



N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride -




4% NaCl - L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid +



D-Mannose - Lincomycin - Aceto Acetic acid +

D-Fructose - Guanidine HCl - Propionic acid +

D-Galactose + Niaproof - Acetic acid +

3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid +


L-Fucose + Lactone + Sodium Butyrate +


- 149 -

기 성 미생물(신 종 1) : Desulfuromonas sp. AN S 1T

BIOLOG TESTNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid -Positive control - 1% Sodium Lactate - Glucuronamide -Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose - D-Serine - Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol - D-Saccharic acid -D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin -Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet -Sucrose - myo-Inositol - Tetrazolium blue -D-Turanose - Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate -pH6 - D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid -D-Raffinose - D-Serine - Citric acid -α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid -D-Melibiose - Rifamycin SV - D-Malic acid -β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid -D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid -N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline - Nalidixic acid -N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine - Lithium chloride -N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite -N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid - Tween40 -1% NaCl - L-Glutamic acid - γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl - L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -α-D-Glucose - L-Serine - α-keto-Butryric acid -D-Mannose - Lincomycin - Aceto Acetic acid -D-Fructose - Guanidine HCl - Propionic acid -D-Galactose - Niaproof - Acetic acid -3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose - D-Galacturonic acid - Aztreonam -L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate -L-Rhamnose - D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 150 -

기 성 미생물(신 종 2) : Desulfovibrio sp. AN S 2T

BIOLOG TESTNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid -Positive control - 1% Sodium Lactate - Glucuronamide -Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose - D-Serine - Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol - D-Saccharic acid -D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin -Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet -Sucrose - myo-Inositol - Tetrazolium blue -D-Turanose - Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate -pH6 - D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine - Citric acid -α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid -D-Melibiose - Rifamycin SV - D-Malic acid -β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid -N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline - Nalidixic acid -N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine - Lithium chloride -N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite -N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid - Tween40 -1% NaCl - L-Glutamic acid - γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl - L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -α-D-Glucose - L-Serine - α-keto-Butryric acid -D-Mannose - Lincomycin - Aceto Acetic acid -D-Fructose - Guanidine HCl - Propionic acid -D-Galactose - Niaproof - Acetic acid -3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose - D-Galacturonic acid - Aztreonam -L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate -L-Rhamnose - D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 151 -

이 탄 층 미생물(신 종 1) : Janthinobacterium sp. R- 2- 5 T

BIOLOG TESTNegative control - Inosine + D-Glucuronic acid -Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose + D-Serine - Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol + D-Saccharic acid -D-Cellobiose + D-Mannitol + Vancomycin +Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet -Sucrose + myo-Inositol + Tetrazolium blue +D-Turanose - Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate +pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine + Citric acid +α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid +D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid -β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid -N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline + Nalidixic acid +N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride -N-Acetyl-D-Galactosamine + L-Arginine - Potassium Tellurite -N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 -1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl - L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -α-D-Glucose + L-Serine + α-keto-Butryric acid -D-Mannose + Lincomycin + Aceto Acetic acid +D-Fructose + Guanidine HCl - Propionic acid +D-Galactose + Niaproof - Acetic acid +3-Methy-Glucose - Pectin + Formic acid -D-Fucose - D-Galacturonic acid + Aztreonam +L-Fucose + Lactone + Sodium Butyrate -L-Rhamnose - D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 152 -

이 탄 층 미생물(신 종 2) : Methylomonas sp. J S 8 21T

BI O L O G T E S T

Negative control - Inosine - D-Glucuronic acid -

Positive control - 1% Sodium Lactate - Glucuronamide +


























D-Galactose - Niaproof - Acetic acid +



L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate -


- 153 -

이 탄 층 미생물(미기 록 종 1) : Curvibacter lanceolatus R- 1- 5

BI O L O G T E S T

Negative control - Inosine - D-Glucuronic acid -

Positive control - 1% Sodium Lactate - Glucuronamide +


























D-Galactose - Niaproof - Acetic acid -



L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate -


- 154 -

멸 종 기 동 물 장 내 미생물(신 종 1) : Vagococcus sp. D7 T 3 01T

BIOLOG TESTNegative control - Inosine + D-Glucuronic acid -

Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -




D-Cellobiose + D-Mannitol - Vancomycin -










β-Methyl-D-Glucoside + Minocycline + L-Malic acid -




N-Acetyl-D-Galactosamine + L-Arginine - Potassium Tellurite -





α-D-Glucose + L-Serine - α-keto-Butryric acid +


D-Fructose + Guanidine HCl + Propionic acid -

D-Galactose + Niaproof - Acetic acid -



L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate +


- 155 -

멸종 기 동물 장내미생물(미기록종 1) : Microbacterium oxydans M3R204

BIOLOG TESTNegative control - Inosine + D-Glucuronic acid -Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -Dextrin + Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose + D-Serine - Quinic acid -D-Trehalose + D-Sorbitol - D-Saccharic acid -D-Cellobiose + D-Mannitol + Vancomycin -Gentiobiose + D-Arabitol - Tetrazolium violet -Sucrose + myo-Inositol + Tetrazolium blue +D-Turanose + Glycerol + p-Hydroxy pheylacetic Acid +Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate +pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine - Citric acid -α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid -D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid -β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin + Gelatin - Bromo-Succinic acid +N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline + Nalidixic acid +N-Acetyl-β-D-Mannosamin + L-Alanine + Lithium chloride +N-Acetyl-D-Galactosamine + L-Arginine - Potassium Tellurite -N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 +1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl + L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid +8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -α-D-Glucose + L-Serine + α-keto-Butryric acid -D-Mannose + Lincomycin - Aceto Acetic acid +D-Fructose + Guanidine HCl - Propionic acid +D-Galactose + Niaproof - Acetic acid +3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose - D-Galacturonic acid - Aztreonam +L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate -L-Rhamnose + D-Gluconic acid + Sodium Bromate +

- 156 -

멸종 기 동물 장내미생물(미기록종 2) : Ochrobactrum pituitosum M3R205

BIOLOG TESTNegative control - Inosine + D-Glucuronic acid +Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide -Dextrin - Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose - D-Serine - Quinic acid -D-Trehalose - D-Sorbitol + D-Saccharic acid -D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin +Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet +Sucrose - myo-Inositol + Tetrazolium blue +D-Turanose - Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose - D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate -pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine - Citric acid +α-D-Lactose - Troleandomycin + α-Keto-Glutaric acid -D-Melibiose - Rifamycin SV + D-Malic acid +β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid -N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline - Nalidixic acid -N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride -N-Acetyl-D-Galactosamine + L-Arginine - Potassium Tellurite -N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid + Tween40 -1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid +4% NaCl - L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -α-D-Glucose + L-Serine + α-keto-Butryric acid -D-Mannose + Lincomycin + Aceto Acetic acid -D-Fructose + Guanidine HCl - Propionic acid -D-Galactose + Niaproof - Acetic acid +3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose + D-Galacturonic acid - Aztreonam +L-Fucose + Lactone + Sodium Butyrate -L-Rhamnose - D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 157 -

멸 종 기 동물 장내미생물(미기록종 3) : Lysinibacillus mangiferihumi M1T305

BIOLOG TESTNegative control - Inosine + D-Glucuronic acid +Positive control + 1% Sodium Lactate + Glucuronamide +Dextrin + Fusidic acid - Mucic acid +D-Maltose - D-Serine + Quinic acid +D-Trehalose - D-Sorbitol - D-Saccharic acid +D-Cellobiose - D-Mannitol - Vancomycin -Gentiobiose - D-Arabitol - Tetrazolium violet -Sucrose - myo-Inositol - Tetrazolium blue -D-Turanose - Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose - D-Glucose-6-PO4 + Methy-Pyruvate +pH6 - D-Fructose-6-PO4 + D-Lactic acid MethylEster +pH5 - D-Aspartic acid + L-Lactic acid +D-Raffinose - D-Serine + Citric acid +α-D-Lactose - Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid +D-Melibiose - Rifamycin SV - D-Malic acid +β-Methyl-D-Glucoside - Minocycline - L-Malic acid +D-Salicin - Gelatin - Bromo-Succinic acid -N-Acetyl-D-Glucosamine - Proline + Nalidixic acid -N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine + Lithium chloride +N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine + Potassium Tellurite +N-Acetyl-Neuraminic acud + L-Aspartic acid + Tween40 +1% NaCl + L-Glutamic acid + γ-Amino-Butryric acid +4% NaCl + L-Histidine + α-Hydroxy-Butryric acid +8% NaCl + L-Pyroglutamic acid + β-Hydroxy-Butryric acid +α-D-Glucose - L-Serine + α-keto-Butryric acid +D-Mannose - Lincomycin - Aceto Acetic acid +D-Fructose - Guanidine HCl - Propionic acid +D-Galactose - Niaproof - Acetic acid +3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid +D-Fucose + D-Galacturonic acid - Aztreonam +L-Fucose + Lactone + Sodium Butyrate +L-Rhamnose + D-Gluconic acid + Sodium Bromate -

- 158 -

멸종 기동물 장내미생물(미기록종 4) : Streptococcus gallolyticus subsp. macedonicus M1T307

BIOLOG TESTNegative control - Inosine - D-Glucuronic acid -Positive control + 1% Sodium Lactate - Glucuronamide -Dextrin + Fusidic acid - Mucic acid -D-Maltose + D-Serine + Quinic acid -D-Trehalose + D-Sorbitol - D-Saccharic acid -D-Cellobiose + D-Mannitol + Vancomycin -Gentiobiose + D-Arabitol - Tetrazolium violet +Sucrose + myo-Inositol - Tetrazolium blue -D-Turanose - Glycerol - p-Hydroxy pheylacetic Acid -Stachyose + D-Glucose-6-PO4 - Methy-Pyruvate -pH6 + D-Fructose-6-PO4 - D-Lactic acid MethylEster -pH5 - D-Aspartic acid - L-Lactic acid -D-Raffinose + D-Serine - Citric acid -α-D-Lactose + Troleandomycin - α-Keto-Glutaric acid -D-Melibiose + Rifamycin SV - D-Malic acid -β-Methyl-D-Glucoside + Minocycline - L-Malic acid -D-Salicin + Gelatin - Bromo-Succinic acid -N-Acetyl-D-Glucosamine + Proline - Nalidixic acid +N-Acetyl-β-D-Mannosamin - L-Alanine - Lithium chloride -N-Acetyl-D-Galactosamine - L-Arginine - Potassium Tellurite +N-Acetyl-Neuraminic acud - L-Aspartic acid - Tween40 -1% NaCl + L-Glutamic acid - γ-Amino-Butryric acid -4% NaCl - L-Histidine - α-Hydroxy-Butryric acid -8% NaCl - L-Pyroglutamic acid - β-Hydroxy-Butryric acid -α-D-Glucose + L-Serine - α-keto-Butryric acid -D-Mannose + Lincomycin - Aceto Acetic acid -D-Fructose + Guanidine HCl - Propionic acid -D-Galactose + Niaproof - Acetic acid -3-Methy-Glucose - Pectin - Formic acid -D-Fucose - D-Galacturonic acid - Aztreonam +L-Fucose - Lactone - Sodium Butyrate +L-Rhamnose - D-Gluconic acid - Sodium Bromate -

- 159 -

부록 2. 방 사 선 내 성 미생물의 방 사 선 내 성 분석 결 과

1) Bacillus selenatarsenatis 15J4M-1의 UVC 내성 실험 결과

2) Brevibacterium luteolum 15J13-8의 UVC 내성 실험 결과

- 160 -

3) Carnobacterium iners 16MFM10의 UVC 내성 실험 결과

4) Deinococcus sp. KSM4-11T의 방사선 내성 실험 결과

- 161 -

5) Exiguobacterium profundum 15J1-8의 UVC 내성 실험 결과

6) Flavisolibacter sp. LCS9T의 방사선 내성 실험 결과

- 162 -

7) Larkinella insperata SR1-5-4의 gamma선 내성 실험 결과

8) Methylobacterium hispanicum 15J10-8T5의 UVC 내성 실험 결과

- 163 -

9) Methylobacterium hispanicum KSM3-9의 UVC 내성 실험 결과

10) Microvirga subterranea 15J8-3의 UVC 내성 실험 결과

- 164 -

11) Microvirga zambiensis 15J7-3T5의 UVC 내성 실험 결과

12) Nibribacter sp. DG15CT의 방사선 내성 실험 결과

- 165 -

13) Pantoea eucrina 15J17K의 UVC 내성 실험 결과

14) Pseudokineococcus lusitanus 15J13-6의 UVC 내성 실험 결과

- 166 -

15) Psychrobacter cryohalolentis 15ML1C의 UVC 내성 실험 결과

16) Psychrobacter maritimus 216MGT3의 UVC 내성 실험 결과

- 167 -

17) Psychrobacter okhotskensis 216MGM6의 UVC 내성 실험 결과

18) Psychrobacter urativorans 16MFM4의 UVC 내성 실험 결과

- 168 -

19) Rufibacter sp. DG31DT의 gamma선 내성 실험 결과

20) Spirosoma endophyticum 15J8-11의 UVC 내성 실험 결과

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D R V JT JUJP O B O E D I B SB D UF SJ[B UJP O P G F Y USF N P …webbook.me.go.kr/DLi-File/099/011/5622325.pdf · 2017-02-07 · pÉp I #JPMPH gi uat EsÙ nÊg Fuî ¦o vjá Bjá