Doença Residual Mínima

Doença Residual MínimaDoença Residual Mínimaemem

HematologiaHematologia

Realizado Realizado por:por:

João João RodriguesRodrigues

Linfomas Não HodgkinLinfomas Não Hodgkin

• Dificuldade de DetecçãoDificuldade de Detecção

• Grande disseminaçãoGrande disseminação

Linfomas Não HodgkinLinfomas Não Hodgkin

• Razão de eliminação da doença:Razão de eliminação da doença:

– CompletaCompleta

– MRDMRD

– InexistenteInexistente

Doença Residual MínimaDoença Residual Mínima

Nível mais baixo de doença detectável Nível mais baixo de doença detectável pelos métodos disponíveis.pelos métodos disponíveis.

Técnicas de detecçãoTécnicas de detecção

• MorfologiaMorfologia

• Citometria de fluxoCitometria de fluxo

• CitogenéticaCitogenética

• Biologia MolecularBiologia Molecular

Tecnicas Moleculares

• Southern Blot

• PCR

• DNA Chips

ExtracçãoExtracção

• Southern Blot

ExtracçãoExtracção

PCR (Polymerase Chain Reaction)PCR (Polymerase Chain Reaction)

• Um par de primers sintéticos Um par de primers sintéticos

hibridizam com cada cadeia do DNA hibridizam com cada cadeia do DNA

alvo.alvo.

• Primers delimitam uma área que é Primers delimitam uma área que é

amplificada exponencialmente.amplificada exponencialmente.

• Síntese de uma cadeia Síntese de uma cadeia

complementar de DNA, por acção de complementar de DNA, por acção de

uma polimerase, através da adição uma polimerase, através da adição

sequencial de deoxinucleótidos.sequencial de deoxinucleótidos.

Annealing

Desnaturação

Extensão

PCRPCR

• No fim de cada ciclo, o número No fim de cada ciclo, o número

de moléculas de DNA duplica.de moléculas de DNA duplica.

PCRPCR• Métodos de detecçãoMétodos de detecção

–Electroforese em GelElectroforese em Gel

–Electroforese CapilarElectroforese Capilar

PCR em Tempo RealPCR em Tempo Real


• Métodos de detecção do produto de Métodos de detecção do produto de

amplificação:amplificação:

– Específicos da sequênciaEspecíficos da sequência

• Fluorescence Resonanse Energy TransferFluorescence Resonanse Energy Transfer

• Sondas TaqManSondas TaqMan

• Molecular BeaconsMolecular Beacons

– Não específicos da sequênciaNão específicos da sequência

• SYBR GreenSYBR Green



• DNA ChipsDNA Chips

Técnicas MolecularesTécnicas Moleculares

• Rearranjos clonais ou translocações Rearranjos clonais ou translocações envolvendo:envolvendo:

– Imunoglobulinas (Ig)Imunoglobulinas (Ig)

– Receptores das celulas T (TCR)Receptores das celulas T (TCR)

– Outros GenesOutros Genes


• Translocação 14;18 – BCL-2/IgHTranslocação 14;18 – BCL-2/IgH– Cromossoma 14Cromossoma 14

– Cromossoma 18Cromossoma 18


• Translocação 14;18 – BCL-2/IgHTranslocação 14;18 – BCL-2/IgH

– 70-90% dos LNH B Foliculares.70-90% dos LNH B Foliculares.

– 50% dos linfomas B de células 50% dos linfomas B de células indiferenciadas.indiferenciadas.

– 20-30% dos linfomas B de células grandes 20-30% dos linfomas B de células grandes difusas.difusas.

– Não está presente em outros linfomas.Não está presente em outros linfomas.




• Translocação 11;14 – BCL-1/IgHTranslocação 11;14 – BCL-1/IgH– Cromossoma 11Cromossoma 11

– Cromossoma 14Cromossoma 14



– 10-20% Células B prolinfociticas.10-20% Células B prolinfociticas.

– 20-25% dos mielomas múltiplos.20-25% dos mielomas múltiplos.

– 2-5% das LLC.2-5% das LLC.

– Linfoma esplénico, etc.Linfoma esplénico, etc.




• Rearranjos das populações Rearranjos das populações linfocitáriaslinfocitárias


• Diferenciação das células BDiferenciação das células B

– IgHIgH

– IgIgkk

– IgIgλλ


• Diferenciação das células TDiferenciação das células T

–TCR TCR δδTCR TCR γγ//δδ

–TCR TCR γγ

–TCR TCR ββTCR TCR αα//ββ

–TCR TCR αα


• Monoclonalidade TMonoclonalidade T

– TCR TCR ββ

• Cromossoma 7Cromossoma 7

– TCR TCR ββ

– TCR TCR ββ

•80% das LLA-T CD3-80% das LLA-T CD3-

•95% das LLA-T CD3+95% das LLA-T CD3+

•1/3 LLA-B percursoras1/3 LLA-B percursoras

•0-7% Células B maturas0-7% Células B maturas



– TCR TCR γγ


– TCR TCR γγ

– TCR TCR γγ

•>90 % LLA-T, LGL e LLP-T>90 % LLA-T, LGL e LLP-T

•50-75% LNH-T periféricos e micoses 50-75% LNH-T periféricos e micoses fungoidesfungoides

•60% LLA-B60% LLA-B

•Não presente em proliferações de cél. Não presente em proliferações de cél. NKNK



– TCR TCR δδ


– TCR TCR δδ


•Monoclonalidade BMonoclonalidade B

– Nas Cadeias Pesadas:Nas Cadeias Pesadas:• VH-JHVH-JH• DH-JHDH-JH

– IgHIgH


• Monoclonalidade BMonoclonalidade B

– Nas Cadeias Leves:Nas Cadeias Leves:

• Ig KIg K

– Ig Ig κκ


• Monoclonalidade BMonoclonalidade B

– Nas Cadeias Leves:Nas Cadeias Leves:

•Ig Ig λλ

– Ig Ig λλ


• Translocação 9;22 – BCR/ABLTranslocação 9;22 – BCR/ABL

– BCR – Cromossoma 22BCR – Cromossoma 22

– ABL – Cromossoma 9ABL – Cromossoma 9



RNA RNA RT-PCRRT-PCR cDNA cDNA



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