Efecto Anatagonico de Trichoderma

7/25/2019 Efecto Anatagonico de Trichoderma

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Efecto antagónico “in vitro” de diferentes cepas de Trichodermasobre el agente patógeno Phytophthora causante de tizón tardío en

cultivo del tomate

Hernández Hernández Rolando, Hernández Santiago Cecilia, Romero Vázquez Tania,Solís Espinosa Modesto

Químico Farmacutico !i"logo, #gronomía, !iología $ En%ermería

&ni'ersidad #ut"noma Metropolitana, Calzada del Hueso (()), Col* Villa Quietud, +el*Co$oacán, C**, )-./), +*F* M0ico, Tel* 1- 23 4) ))

roodlan5outloo6*com, cecilia.378s58otmail*com, tromero'azquez5gmail*com $esso(.9/58otmail*com

Trimestre (-:;

RESUMEN

<a en%ermedad de tiz"n tardío en el tomate =Lycopersicum esculentum> causada por Phytophthora infestans presenta manc8as en 8o?as, tallos $ %rutos, siendo de rápida dispersi"n$ con un alto grado de 'irulencia, además es una de las más importantes de@ido a querepresenta prdidas del culti'o $ por ende econ"micas* Esta 8ortaliza tiene un alto grado de

consumo mundial $a sea %resco o como producto procesado, posicionándose M0ico como el.A productor $ el tercer e0portador, %ormando parte esencial para la economía $ generandoalrededor de 49 mil empleos directos en nuestro país* +e@ido a esto, es de gran importanciaerradicar la en%ermedad optando por la utilizaci"n de 8ongos antagonistas como Trichodermaharzianum y Trichoderma viride, que 8an presentado una alta acti'idad %rente a en%ermedadesen plantas causadas por pat"genos %Bngicos, considerándose una me?or alternati'a $a que nodaa al am@iente ni a las personas que lo mane?an* or otra parte, puede disminuir elpotencial de in"culo $a que produce enzimas que a$udan a descomponer materia orgánica@ene%iciosa para el culti'o, a di%erencia de plaguicidas químicos, los cuales tienen un ma$or grado de contaminaci"n am@iental $ un ele'ado costo* El prop"sito de esta in'estigaci"n %ueidenti%icar el e%ecto antag"nico de T. harzianum y T. viride so@re el pat"geno Phytophthora*ara la realizaci"n de este tra@a?o se seleccionaron cepas de T * harzianum Colima $ Morelos

$ T. viride con una cepa de P. infestans los cuales se inocularon in 'itro, mediante la tcnica deen%rentamiento o dual en ca?as de petri con medio agar:papa:de0trosa =+#>, con unaincu@aci"n a temperatura am@iente* ara cada aislamiento se realizaron cinco repeticionesDdurante el e0perimento se realizaron mediciones de los radios de crecimiento para o@ser'ar ele%ecto %ungicida de Trichoderma*

ala@ras cla'es control @iol"gico, Phytophthora, microorganismo antagonista, tiz"n tardío,Trichoderma

1

mailto:[email protected]











ndice

I. GTR;+&CCGI******************************************************************************************************9

GG* REVGSGI !G!<G;JRKFGC#

9* Culti'o de tomate

9*(* !otánica $ ta0onomía

9*9 ;rigen $ di%usi"n

9*3 Gmportancia en M0ico

3* Tiz"n tardío en tomate

3*( #gente causal =p8$top8t8ora in%estans en tomate>

3*9 lantas 8ospederas =culti'os a los que daa>

3*3 Sintomatología

3*- Epidemiología

3*1 Hongo %itopat"geno 8$top8t8ora in%estans

-* Mtodos de control

-*( Control @iol"gico

-*9 Tric8oderma

-*3 Mecanismos de acci"n de Tric8oderma

III. M#TERG#<ES L MT;+;S....................................................................................10Reporte de crecimiento de los aislamientos de Trichoderma harzianum $ Trichoderma viride

e'aluados contra Phytophthora.................................................................................11

IV. RES&<T#+;SV* +GSC&SGI........................................................................................................... 20

VI. CONCLUSIÓN

VII. REFERECG#S !G!<G;JRKFGC#S 25

2



GTR;+&CCGI

Control @iol"gico

El control @iol"gico comprende el uso de los enemigos naturales =depredadores,parásitos $ pat"genos> para el mane?o de plagas* Es importante conocer losorganismos @en%icos nati'os $ armonizar cualquier táctica de control de modo que losenemigos naturales no sean pertur@ados, o lo sean en el menor grado posi@le* Elam@iente puede ser manipulado en su %a'or, pro'e$ndoles de alimentossuplementarios $ sitios de re%ugio, desde donde se puedan desplazar 8acia los culti'os(atie! "##$%&

El control @iol"gico de %itopat"genos constitu$e una alternati'a para disminuir elpotencial de inoculo del suelo sin traer riesgos al medio am@iental* +entro de losmicroorganismos más utilizados en el control @iol"gico están los 8ongos de generoTrichoderma, o@?eto de in'estigaci"n en muc8os países (orr'a et al! $"%&

&na alternati'a dentro del control @iol"gico es el empleo de 8ongos antagonistas,cu$o conocimiento de su e%ecti'idad $ de su mecanismo de acci"n es esencial para eldesarrollo de una estrategia en la implantaci"n de una agricultura sosteni@le*

+i%erentes especies del gnero Tric8oderma 8an sido usadas como agentes de control@iol"gico de en%ermedades en la agricultura* <os más utilizados son Trichoderma

harzianum, T. viride y T. virens ()orres et al! $$*%&

En el suelo e0isten di'ersos microorganismos con capacidad antag"nica 8acia

microorganismos %itopat"genos, pero el más estudiado es Tric8oderma, de@ido a su%ácil $ rápido crecimiento además de sus características de micoparasitar a otros8ongos (+uiroz et al! $$*%&<os antagonistas contri@u$en a la atenuaci"n de los daos que causan lasen%ermedades en los agroecosistemas donde e0istan condiciones para su desarrollo $conser'aci"n* +esde los primeros estudios en esta temática $ 8asta el presente, entrelas especies más ampliamente estudiadas $ aplicadas como control @iol"gico, seencuentran las del gnero Trichoderma, de@ido a su e%icaz control, capacidadreproducti'a, plasticidad ecol"gica, e%ecto estimulante so@re los culti'os $recientemente se detect" su acci"n como inductor de resistencia sistmica en laplanta a di%erentes pat"genos (,nfante et al! $$#%&<os 8ongos son pequeos organismos, generalmente microsc"picos, que carecen decloro%ila $ de te?idos conductores* <a ma$oría de las ()) ))) especies de 8ongosconocidas son sapr"%itas $ 'i'en so@re la materia orgánica muerta, a la quedescomponen* El 8ongo antag"nico, es un organismo que tiene un e%ecto ad'ersoso@re la 'ida de otro organismo de di%erente especie, por interacci"n directa deparasitismo o depredaci"n o indirecta compitiendo por un recurso (-grios! "##"%&

3



Trichoderma Trichoderma spp, pertenecen a la lase. +euterom$cotina, Subclase.H$p8om$cetidae /rden. Moniales, 0amilia. Moniliceas =%igura (> (1una $$2

Mor%ología, características macrosc"picas las colonias se reconocen %ácilmente por su crecimiento rápido $ su coloraci"n, @lancas N 'erdes, amarillo N 'erdosasD las áreascon conidias se representan con anillos concntricos* #l re's de las colonias esusualmente no coloreado, amarillo, ám@ar o amarillo N'erde, $ muc8as especiesproducen grandes cantidades de clamidoesporas en culti'os sumergidos*Características microsc"picas, <os conidi"%oros son erectos, 8ialinos en su ma$oríarami%icados, no 'erticilados, los cuales pueden ser solitarios o en grupos* <as %iálidesson en %orma de @otella, Bnicas o en grupos, 8inc8adas en la regi"n central perodelgada 8acia el ápiceD son 8ialinas $ en ángulo recto con respecto a los conidi"%oros*<as conidias son unicelulares su@glo@osas u o@longas, lisas o equinuladas, 8ialinas o'erdes $ ocurren en masas en los ápices de las %iálides =%igura 9> (34vez! $$2%&

Condiciones de crecimiento, las me?ores condiciones de crecimiento de este 8ongoson Temperatura se desarrolla en un rango de (1:31 AC, siendo "ptima de 91AC*Humedad relati'a capaz de crecer entre el 9) $ 2) O siendo de 4) O a me?or pH de

/ a /*1 es el adecuado para su desarrollo pero puede so@re'i'ir en rangos ma$ores,de@ido a la capacidad que tiene de acidi%icar el medio en el que se encuentran,mediante secreci"n de ácidos orgánicos* Car@ono <a principal %uente de car@ono queasimila es celulosa (S4nc3ez! $$#. "5%&Há@itat de Trichoderma las especies de este gnero se encuentran ampliamentedistri@uidas por todas las latitudes $ se presentan naturalmente en di%erentesam@ientes, especialmente en aquellos que contienen materia orgánica o desec8os'egetales en descomposici"n (Martínez et al! $"6%&

4

Figura ( Trichoderma Sp*



El gnero Trichoderma %ue identi%icado en (24( $ 8a sido ampliamente estudiadoD esun 8ongo anaero@io %acultati'o microsc"pico, que se encuentran de manera natural enun nBmero importante de suelos agrícolas $ otros tipos de medio* En determinadas

condiciones pueden ser anaero@ios %acultati'os, lo que les permite mostrar una ma$or plasticidad ecol"gica* Trichoderma muestra di'ersa 'enta?as como agente de control@iol"gico, de@ido a su rápido crecimiento $ desarrolloD tam@in produce una grancantidad de enzimas capaces de degradar a otros organismos, cu$a secreci"n seinduce con la presencia de 8ongos Fitopat"genos* #lta capacidad enzimática queposeen para degradar sustratos, un meta@olismo 'ersátil $ resistencia a in8i@idoresmicro@ianos (,nfante et al! $$#%&

<as especies del gnero Trichoderma son los antagonistas más utilizados para elcontrol de en%ermedades de plantas producidos por 8ongos, de@ido a si u@icuidad, asu %acilidad para ser aisladas $ culti'adas, a su crecimiento rápido en un gran nBmero

de sustratos $ a que no atacan a plantas superiores (Ezzi77ani et al! $$5%&

Especies de Tric8oderma se 8an reportado como 8iperparásitos de un gran nBmero de8ongos %itopat"genos al atacar directamente $ producir la lisis de micelios $ tam@inde esclerocios de 8ongos (orr'a et al! $"%&

Mecanismos de acción de Trichoderma

<os mecanismos de acci"n Trichoderma como antag"nico, puede tener di%erentesmecanismos de acci"n entre los que se encuentran el micoparasitismo, competenciaanti@iosis e inducci"n de resistencia a las plantas* Micoparasitismo, este proceso demicoparasitismo sería uno de los principales mecanismos in'olucrados en elantagonismo de Trichoderma como agente @iocontrolador* Gncluiría el crecimiento delantagonista 8acia el pat"geno, desarrollándose alrededor de este o %ormandoestructuras similares a ganc8os o apresorios en la super%icie del 8ospedero, que lepermitirían, penetrar al interior =del pat"geno> $ por acci"n de enzimas líticas=quitinasa $ @ N G, 3 N glucanasa> degradar su pared celular* Competencia, esteproceso ocurre cuando dos o más organismos requieren el mismo recurso $ el uso deste por uno, reduce la cantidad disponi@le para el otro* <a competencia%undamentalmente se produce por recursos esenciales como car@ono, nitr"geno,8ierro $ espacio %ísico* &n mecanismo que recientemente 8a ganado ad8erentes es lacompetencia que se produce a ni'el de la rizos%era cuando se aplican cepas deTrichoderma, producindose un rápido crecimiento en con?unto con el desarrolloradicular de las plantas tratadas, compitiendo entonces a este ni'el por nutrientes $espacio* #nti@iosis, la acti'idad anti@i"tica de Trichoderma se de@ería a la secreci"nde sustancia anti@i"ticas o meta@olitos que in8i@en la acti'idad parasítica de lospat"genos* Estos meta@olitos serian 'olátiles $ no 'olátiles, del tipo anti@i"ticos como'iridin, tric8odermin, glio'iridin, glioto0in $ 8arzaniolide* +e todas estas micoto0inas lamás representati'a es tric8odermin que actuaría in8i@iendo la acti'idad ri@osomal delos pat"genos, por lo tanto su reproducci"n (entro de educación 7 tecnología.$$5%&

5



Hongo %itopat"geno P. infestans

<os 8ongos se reproducen principalmente mediante esporas, estas son estructurasreproductoras o especializadas para la propagaci"n del 8ongo, que consta de una o'arias clulas* <a ma$oría de las especies de 8ongos conocidas son estrictamentesapro%itas $ 'i'en so@re la materia orgánica muerta, a la que descomponen*

Hongo %itopat"genos Phytophthora Familia #l@uginaceae =mildiBs>, Jenero #l@ugo #*cándida produce la ro$a @lanca de las crucí%eras (-grios! "##"%&

Phytophthora, ataca a una gran 'ariedad de culti'o, la ma$oría de las especies del8ongo producen pudriciones de la raíz, a8ogamiento de plántulas $ pudriciones detu@rculos, cormos, tallos cortos $ otros "rganos* ;tras especies producen pudricionesde $emas o de %rutos $ algunas de ellas producen tizones %oliares que atacan al %olla?e,ramitas inmaduras $ %rutos (atie! "##$%&

Culti'os a los que daa Phytophthora Especies del Phytophthora causan 'arias en%ermedades en muc8os tipos de plantas,

desde plántulas de 8ortalizas anuales o de ornato 8asta ár@oles %orestales $ %rutalescomo P. cactorum origina la pudrici"n del tronco o collar del manzano, la pudrici"n depie $ de tallo del lirio, el tiz"n de la peonía, la muerte descendente de la azalea, lapudrici"n del tallo $ el marc8itamiento del antirrino o @oca de drag"n, la pudrici"n de laraíz del tr@ol dulce $ el tiz"n de la in%lorescencia del tulipán*

# continuaci"n se mencionan las demás especies importantes $ en%ermedades queproducen $ en donde se desarrollaP. capsici genera la pudrici"n de la raíz del pimiento, la zana8oria $ la cala@aza $ lapudrici"n del %uto del pimiento, tomate, @eren?ena $ de las cucur@itáceas, entre otrasplantas*

P. cambivora produce la pudrici"n de la raíz $ corona de los ár@oles*

P. cinnamomi produce la pudrici"n de la raíz del aguacate, azalea, castao, canelo,ro@le, pino, pia $ muc8os más ár@oles $ ar@ustos, así como tam@in la Pmuertedescendente ?arra8 de los @osques naturales de #ustralia*

P. citrophthora produce la pudrici"n del pie $ %rutos de los cítricos*

P. cryptogea produce la pudrici"n de la raíz del tomate $ del lirio acuático, así como lapudrici"n del tallo $ 8o?as de la glo0ínea*

P. erythroseptica prodBcela pudrici"n rosa de la papa, la pudrici"n @landa de losesque?es de la caa de azBcar $ el tiz"n %oliar del lirio acuático*

P. megasperma produce la pudrici"n de la raíz de las crucí%eras, zana8oria, papa,espinaca, remolac8a, mal'a real $ otras plantas (-grios! "##2%&

Phytophthora infestans en tomate<a especie que me?or se conoce es Phytophthora infestans, la causa del tiz"n tardíode la papa $ el tomate* Es una en%ermedad %ungosa ampliamente di%undida $ de

6



importancia econ"mica en Centroamrica por sus características epidmicas, loscostos de control $ disminuci"n en la producci"n =%igura(>*

Síntomas, la en%ermedad se puede presentar en cualquiera de las partes de la plantaen e0cepci"n de las raíces* El tiz"n tardío se mani%iesta inicialmente con la aparienciade manc8as acuosas circulares e irregulares u@icadas en las puntas de los @ordes delas 8o?as in%eriores* !a?o condiciones de muc8a 8umedad las manc8as se e0tiendenrápidamente $ %orman zonas paradas atizonadas, con @ordes irregulares* En el @ordede la lesi"n, en el en's de la 8o?a, se %orma una zona @lanca constituida por 8i%as del8ongo* osteriormente, los %oliolos son cu@iertos en su totalidad por la in%ecci"n $mueren (atie! "##$%& El tiz"n tardío puede destruir totalmente todas las plantas deuna zona de culti'o al ca@o de una o dos semanas cuando las condiciones climáticasson %a'ora@les $ cuando no se aplica ningBn mtodo de control (-grios! "##"%&

Epidemiología, el 8ongo puede diseminarse por el 'iento o por el trasplante deplántulas* Siendo el 8ongo P. infestans comBn en papa $ tomate* En presencia de una8umedad alta $ prolongada, todos los te?idos tiernos $ areos se marc8itan $ pudrencon rapidez* El %ruto tam@in presenta manc8as acuosas de color 'erde grisáceo que

pueden cu@rirlo totalmente* En ataques tempranos el 8ongo puede %ormar un anilloalrededor del tallo tierno, causándole la muerte en corto tiempo (atie! "##$%&

El culti'o de tomateEl tomate =<$copersicum esculentum Mill> es una de las especies agrícolas másconocidas $ e0portadas comercialmente a ni'el mundial* Esta especie es una de las8ortalizas de ma$or importancia para el consumo 8umano directo ()orres et al! $$*%&

(arre8o et al! $$9% seala que el culti'o de tomate es una 8ortaliza perteneciente ala %amilia de las Solanáceas* <a %amilia Solanaceae es reconocida mundialmente por su importancia en trminos de 'egetales culti'a@les $ el amplio rango de utilidadagron"mica de sus especies El tomate ocupa un lugar importante dentro de la

8orticultura mundial, $a que genera una %uerte entrada de di'isas para los paísese0portadores* <a planta requiere de climas $ suelos calientes $ de una estaci"n'egetati'a larga* Su ciclo de crecimiento de@e de ser li@re de 8eladas de cuatro mesesapro0imadamente*

Es una 8ortaliza que no tolera las 8eladas $ al mismo tiempo es in%ructí%era entemperaturas ele'adas* !otánica, la rami%icaci"n es generalmente simpoidal =lasramas laterales se desarrollan más que el e?e principal>* Mor%ología, es una planta

7

Fi ura 3: tomate co ti!o



perenne ='i'e durante más de dos aos> de porte ar@usti'o que se culti'a como anual*El culti'o se desarrolla @ien en un amplio rango de latitudes $ pre%iere am@ientescálidos con @uena iluminaci"n $ @uen drena?e* Humedad, la 8umedad relati'a "ptimaoscila entre /) $ 2) O* <uminosidad, 'alores reducidos de luminosidad pueden incidir de %orma negati'a so@re los procesos de la %loraci"n, %ecundaci"n, así como el

desarrollo 'egetati'o* Suelo, la planta no es mu$ e0igente en cuanto a suelos, e0ceptoen lo que se re%iere al drena?e $ pre%iere suelo ricos en material orgánica* Temperatura,la temperatura "ptima oscila de 9) a 3)A durante el día $ de ( a (4A durante la noc8eDtemperaturas superiores a los 3):31AC a%ectan la %ructi%icaci"n (epeda! $$#%&

Gmportancia del tomate en M0ico<a producci"n nacional del tomate se localiza principalmente en () estados de laRepB@lica Me0icana, de los cuales so@resalen Sinaloa, !a?a Cali%ornia orte $ sur,Morelos, Juana?uato, San <uis otosí, Mic8oacán $ alisco como los de ma$or super%icie culti'ada =%igura > (epeda! $$#%& <a importancia del culti'o se de@e aque es la 8ortaliza más di%undida en todo el mundo $ la de ma$or 'alor econ"mico*

Siendo M0ico el .A país en producir tomate $ el tercer país e0portador de esta8ortaliza* Gmportancia nacional $ mundial dentro de la producci"n de 8ortalizas, eltomate constitu$e una acti'idad de gran importancia para M0ico, %ormando una%uente de empleo, a la comercializaci"n $ e0portaci"n ()orres et al! $$*%&

Su importancia mundial se @asa en razones como su amplia 'ariedad de usos tantopara el consumo %resco, como para su trans%ormaci"n en productos como ?ugos,pastas, @e@idas, etc* Sin em@argo, en la producci"n se en%rentan pro@lemas como eluso e0cesi'o de agroquímicos* lagas $ en%ermedades son tam@in de los principalespro@lemas que a%ectan el culti'o, incrementando de esta manera los costos deproducci"n (epeda! $$#%&

"



ro@lema de in'estigaci"nTrichoderma es un 8ongo utilizado como %ungicida, por ello queremos compro@ar sue%icacia en el control de 8ongos pat"genos, como el pat"geno Phytophthora. Este8ongo implica anualmente prdidas econ"micas signi%icati'as, siendo los principalesculti'os daados tomate, maíz, c8ile morr"n, %resa, entre otros culti'os* Es por esoque por medio del e0perimento in 'i'ito, demostraremos si el Trichoderma es capaz de

limitar la acti'idad del pat"geno, por medio de la tcnica dual* En%ocándonos al daoque causa en el culti'o del tomate =Lycopersicum esculentum).

;@?eti'o general de in'estigaci"nGdenti%icar el e%ecto antag"nico del Trichoderma harzianum y Trichoderma viride so@reel pat"geno Phytophthora causante de tiz"n tardío en el culti'o de tomate*

;@?eti'os particulares de in'estigaci"nComparar la capacidad antag"nica del Trichoderma harzianum y Trichoderma viride

so@re el pat"geno Phytophthora*

+escri@ir la importancia del Trichoderma como @io:plaguicida

reguntas particulares de in'estigaci"nCuáles son los tipos de Trichoderma que e0istenU

Cuál es la importancia que tiene el tomate en M0icoU

Qu e%ectos tiene el Phytophthora %rente a la presencia de Trichoderma en el mismomedio de culti'oU

#

Figura 4: ma$a %o%e &e re$re&eta 'a& regioe& %e cu'ti(o %e



Qu e%ecto tiene el pat"geno Phytophthora en el culti'o del tomateU

usti%icaci"n de Gn'estigaci"nEl 8ongo Trichoderma siendo un microorganismo competiti'o o%rece una protecci"n@iol"gica a la planta, destru$e el in"culo pat"geno presente $ contri@u$e a pre'enir su

%ormaci"n* #demás se desea sustituir la %umigaci"n con @romuro de metilo, aplicaci"nde %ungicidas sistmicos $ localizaci"n de nue'as áreas no contaminadas por elpat"geno*

Hip"tesisSi Trichoderma es usado para control @iol"gico de di%erentes culti'os atacando 8ongospat"genos, entonces, se esperaría que controle el crecimiento de Phytophtora en elculti'o de tomate*

M#TERG#<ES L MT;+;SEl presente tra@a?o de in'estigaci"n se realiz" durante el trimestre (-:; en ella@oratorio de nematología agrícola de la &ni'ersidad #ut"noma Metropolitana, paraconocer el e%ecto antag"nico de Trichoderma so@re Phytophthora causante del tiz"ntardío culti'o de tomate*

Material biológico

Se utilizaron tres cepas de 8ongos antagonistas, T.harzianum de Morelos $ Colima, T.

viride =%otogra%ía (> $ una cepa del 8ongo %itopat"geno Phytophthora =%otogra%ía 9>proporcionadas por el la@oratorio de nematología agrícola de los cuales se realiz" laresiem@ra en ca?as de etri con medio +#*

-n4lisis de antagonismo in vitro

ara esta@lecer la capacidad in8i@itoria de los di%erentes aislamientos de Trichoderma

harzianum, $ T. viride, so@re Phytophthora, se a%ectaron prue@as en los resultados decrecimiento del pat"geno durante (3 días, para la e'aluaci"n se emple" la tcnicadual o de en%rentamiento, con un diámetro de 3*1cm de distancia entre cada uno, ladistancia de los microorganismos con respecto al @orde de la ca?a de etri %ue de 9cmEl dia 92 de octu@re se realizo la siem@ra dual donde se resem@r" el 8ongo pat"geno

10

Fotogra%ía (* Crecimiento de 8ongosantag"nico Trichoderma 9-()(-

Fotogra%ía 9* Cepa de Phytophthora9-()(-



con las di%erentes cepas de Trichoderma en ca?as de etri con medio +# : agar papade0trosa =%otogra%ía 3>* Realizamos 1 repeticiones de cada muestra con un grupotestigo el cual consisti" en sem@rar solo el pat"geno, las muestras se incu@aron entemperatura am@iente* +e las cuales las o@ser'aciones consistieron en medir eldiámetro de cada colonia diario 8asta el en%rentamientoD con la %inalidad de identi%icar

la competencia, anti@iosis $ para e'aluar el parasitismo

Reporte de crecimiento de los aislamientos de Trichoderma harzianum $ Trichoderma

viride e'aluados contra Phytophthora

<as ta@las de crecimiento se identi%icaron de di%erente color como se muestra enseguida

11

, -

Fotogra/a 3: mue&tra %e Phytophthora (A), rea'i!aci %e 'a

Fotogra%ías -, 1, /, 4 crecimiento en tcnica dual



12

Muestra testigo T. H *M 's8$top8t8ora

T* H*C 's 8$top8t8ora T. viride vs Phytophthora

)ue&tra te&tigo T.H. ) (&Phytophthor a

T . C (&Phytophthora

T. viride (&

Fotogra%ías 2, ., (), ((crecimiento correspondiente al dia 3)() tcnica dual

Foto ra%ías (9,(3, (-, (1 crecimiento de día 3(()9)(-



13

..) (&Phytophthor a

T.H. C (&Phytophthor a

T. viride (&Phytophthor a

T.H. ) (&Phytophthor a



)ue&tra te&tigo

)ue&tra te&tigo

Fotogra%ías (/ testigos, (4, (2, (. tcnica dual

Fotogra%ías 9) testigos, 9(,99, 93 tcnica dual



14





T.H. C (&

Phytophthor a


)ue&tra te&tigo

)ue&tra te&tigo

Fotogra%ías 9- testigos, 91,9/, 94 tcnica dual



15







)ue&tra te&tigo

)ue&tra te&tigo

Fotogra%ías 92 testigos, 9., 3),3( tcnica dual

Fotogra%ías 39 testigos, 33, 3-, 31 tcnica dual



16

T.H.) (&Phytophthor a



)ue&tra te&tigo

Fotogra%ías 3/ testigos, 34, 32, 3. tcnica dual

Fotogra%ías -) testigos, -(, -9,-3, tcnica dual



17


T.H.C (&Phytophthor a





)ue&tra te&tigo

)ue&tra te&tigo

Fotogra%ías -- testigo, -1, -/,-4 tcnica dual



1"

Fotograa 4". )ue&trate&tigo .i.

Fotograa 4#. T.h. m (&P. infestans.

Fotogra/a 50. T.h. (C) (&.i. Phytophthor a

Fotograa 51. T. v. (&Phytophthor a



RES&<T#+;S L +GSC&SGI

El antagonismo o capacidad antag"nica de aislamientos nati'os se compro@" dedistintas %ormas la primera midiendo el grado de micoparasitismo de cada antagonistael cual se determin" por la escala que proponen =ta@la(> (Su4rez et 4l& $$*%*

<a segunda e'aluaci"n de competencia por nutrientes $ espacio o la interacci"n de

Hongo:Hongo se e'alu" por medio de la tcnica de en%rentamiento por medio deculti'o dual =inz"n et al, (...> en agar +#”, con una distancia de 3*1cm entre cadauno, la distancia de los microorganismos con respecto al @orde de la ca?a de etri %uede 9cm, $ se incu@aron a temperatura am@iente de la ciudad de M0ico, la tercera see'alu" el porcenta?e de in8i@ici"n de crecimiento micelial =O MG> del pat"geno, paracalcular este se emple" el modelo matemático utilizado por =Figura 1/>, (:'rez et al.

$$$%&

1#

)ue&trate&tigo






Ta@la (* Escala para e'aluaci"n de la capacidad antag"nica

Jrado Capacidad antag"nica) inguna in'asi"n de la super%icie de la colonia del 8ongo pat"geno*( Gn'asi"n de W de la super%icie de la colonia del 8ongo pat"geno*9 Gn'asi"n de X de la super%icie de la colonia del 8ongo pat"geno*3 Gn'asi"n total de la super%icie de la colonia del 8ongo pat"geno*- Gn'asi"n total de la super%icie de la colonia del 8ongo pat"geno

esporulaci"n so@re ella

O M(Y =M! : M # M!> 0 ())

O M( Y orcenta?e de in8i@ici"n micelial

M # Crecimiento micelial in%luenciadoM! Crecimiento micelial li@re =Control de crecimiento>

Figura 1* orcenta?e de in8i@ici"n micelial*

-islamiento e identificación del antagonismo

Se o@tu'ieron los aislamientos T. Harzianum Colima, T. Harzianum Morelos $ T. iride,los cuales crecieron rápidamente $ con aspecto de pol'illoD las colonias eran de color

'erde oli'o con pequeas manc8as de color @lanco, esta característica macrosc"picaconcuerdan con las descritas por (34vez! $$2%* esto se de@e a las condiciones detemperatura $ lugar de incu@aci"n*

onfrontación in vitro de cepas de Trichoderma harzianum vs& Phytophthora sp&

Todos los tratamiento e'aluados de T. harzianum presentaron radios de crecimiento=RC#> al interior de la ca?a de etri, mu$ superiores al de los aislamientos pat"genosde Phytophthora =RC>* Sin em@argo, los tratamientos T . Harzianum Morelos :Phytophthora $ T. iride N Phytophthora %ueron aquellos donde en los antagonistasdesarrollaron el ma$or crecimiento con 'alores de 9*29 $ 9*2- cm respecti'amente

()abla 6%, además, se o@ser'" un rápido crecimiento de los pat"genos en la cepa T.Harzianum Colima:Phytophthora con un desarrollo de )*49 cm a los tres días =498oras> de la siem@ras ()abla 6% *Esto indica que pro@a@lemente, Trichoderma

harzianum pudo tener una tasa de incorporaci"n de nutrientes, tasa de meta@olismos$ un crecimiento superior a Phytophthora spD utilizando distintos tipos de in8i@ici"ncomo es la secreci"n de enzimas 8idrolíticas entre ellas celulasas, quitanasas,glucanasas (Su4rez et al, $$*% $ por acci"n de enzimas líticas =quitinasa $ Z N G, 3 Nglucanasa> que degradan la pared celular (entro de educación 7 tecnología! $$5%&

20



#unque se 8a$a presentado ma$or crecimiento en los primeros días por lacompetencia de nutrientes $ espacios por parte de los antagonistas, no e0istierondi%erencias signi%icati'as entre las 3 tcnicas duales T. Harzianum Morelos NPhytophthora, T. Harzianum Colima: Phytophthora $ T. iride N Phytophthora

)abla 6* Radios de crecimiento de pat"genos =RC> $ radios de crecimiento deantagonistas =RC#> de los - tratamiento, al igual la de testigo* Correspondientes a losculti'os duales de los aislamientos de Phytophthora, %rente a los distintos especies deT. harzianum y T. viride $ a los controles tanto de pat"genos =media de cada día>

8/a e&tigo )9 C9 V91 0.16 1.7 0.02 1."4 0.06 1.#2 0.062 0.42 2.12 0.2" 2.12 0.3 2.14 0.2"3 0.74 2.54 0.52 2.44 0.72 2.2" 0.664 1.0" 2.7 0.72 2.62 0."6 2.72 0.765 1.4 2.7" 0.72 2.62 0.#2 2.76 0.76

6 1.7" 2."2 0.76 2.6" 0."" 2."4 0.767 2.16 2."2 0.76 2.7 0.#3 2."2 0."" 2.44 2."2 0.76 2.7 0.#2 2."4 0."# 2.72 2."2 0.7 " 2.7 0.#4 2."4 0."10 3.1 2."2 0.76 2.7 0.#2 2."4 0."11 3.1 2."2 0.76 2.7 0.#2 2."4 0."12 3.36 2."2 0.76 2.7 0.#2 2."4 0."13 3.6 2."2 0.76 2.7 0.#2 2."4 0."

1.#"#230

76#2.646153

"460.643076#

232.5553"4

6150.7"53"46

152.6553"46

150.6"3076

#23

S1.150727

7520.347120

01#0.2347"30

420.271557

710.27#0046

410.31##11"

470.235350

257

21

)9: T. harzianum )ore'o& VS P. infestans C9: T. harzianum Co'ima (& P. infestans V9: T. viride (& P. infestans.



.

22

, -

P. i.P. i. T. h. (M) T. v.

<as @arras representan la media de crecimiento de las 1 repeticiones por dia=Phytophthora sp.> del modelo e0perimental in vitro mediante en%rentamientos en medio solido=+#> con los especies T. harzianum e0traídos en dos di%erentes partes =Colima $ Morelos> $

T. viride

Figura 5" ; 5#. Corotaci %e <;to$<t<ora ie&ta& .i. co ric<o%erma <ar!iaum C ; . (iri%e. =,>: i<iici %e' crecimieto(egetati(o %e .i. e $re&ecia %e .<. e e' me%io 8,. =->: Camio %eco'oramieto %e' me%io 8, $or e' atagoi&mo %e .<. me%iate 'a atiio&i&; mico$ara&iti&mo.



Figura /)* Tric8oderma 8arzianum =M> in8i@ici"n del 8$top8t8ora in%estans

Trichodema harzianum y T. viride demostr" un claro e%ecto antagonico contra

Phytophthora infestans en los culti'os duales pre'iamente in 'itro,, aumentado suacti'idad anti%ungica mediante la secresion de enzima 8idrolitico =?:(, 3:glucanasa>(Ezzi77ani M& et al $$5% $ posim@lemente otros, so@resaliendo otros,so@rescresiendo

$ reduciendo más de un 4) O =Ta@la -> la colonia de pat"geno*

Como podemos o@ser'ar, el crecimiento del 8ongo pat"geno =testigo> tiene uncrecimiento de 3*/ centímetros signi%ica el ()) O de desarrollo de estemicroorganismo, en un tiempo de (3 días =3(9 8oras*>, en ca@io a los otros tres cepasTHM, THC $ TV que se sem@raron con la tcnica dual con di%erentes especies deTrichoderma @a?o las mimas condiciones de temperatura, H $ tiempoD se o@tu'o elcrecimiento de la de los 3 sem@rados de la tcnica dual que %ue de un )*29 cm*

Esto quiere decir que pro@a@lemente a simple 'ista se puede a%irmar que el e%ecto delos antagonistas de los Trichoderma es positi'o*

En cuanto al micoparasitismo solo se present" en las - repeticiones de 1 de la cepaTHC:, teniendo una grado de 9 $ ( el cual se determin" por la escala que proponenSuárez Meza et ál* =9))2> =Ta@la (>* Esta se e'alu" por la in'asi"n de antagonista alpat"geno cu@riendo apro0imadamente la mitad de la colonia de Phytophthora en latcnica dual*

or esta raz"n, es necesario continuar con%irmando el antagonismo de las cepas deTric8oderma so@re Phytophthora sp, mediante análisis estadísticos =#;V#, Tu6e$>,

el cual se o@tu'o una di%erencia signi%icati'a =[)*)1> en la media de las cepas THM:,THC: $ TV: , teniendo una @re'e conclusi"n que dice de que al menos una cepatiene un crecimiento di%erente a los otrosD en este caso para especi%icar la cepadi%erente se realiz" una prue@a de Tu6e$, o@teniendo que la cepa de testigo esdi%erente a las THM:, THC: $ TV:, esta Bltimas tres son iguales estadísticamente*

ara tener una @ase más s"lida de acuerdo a nuestra 8ip"tesis se e'alu" elporcenta?e de índice micelial que realiza el antagonista 8acia al pat"geno*

23

C

T.h. (C)P. i.



Porcentaje de Inhibición Micelial (PIM).

Tabla 4. Antagonismo in vitro de Trichoderma harzianum y T. viride sobreP. sp.

Cepa M! M # T H OM(

THC: 3*/ )*.9 9*4 )*9 4-*-

THM: 3*/ )*4/ 9*29 )*9 42*2

TV: 3*/ )*2 9*2- )*9 44*4

M# crecimiento micelial in%luenciado, M!, crecimiento micelial li@re =Control>, T* Trichoderma

H Halo, OM( orcenta?e de Gn8i@ici"n Micelial =GM>

Figura 4(* orcenta?e de in8i@ici"n micelial =GM>, de Phytophthora sp. en presencia de T*8arzianum $ T* 'iride* +atos calculados empleando el modelo matemático utilizado por rez

et al. =9)))>, donde GM =O M(>Y =M! : M # M!> 0 ())*

24



Figura -* Crecimiento radial de Phytophthora sp. testigo, en presencia de T*8azianum $ T* 'iride* )9: Trichoderma harzianum )ore'o& VS Phytophthora sp. C9: Trichoderma

harzianum Co'ima (& Phytophthora sp. V9: Trichoderma viride (& Phytopthora

sp.

En esta descripci"n anterior de la ta@la de crecimiento se a%irma@a que el Trichoderma

se caracteriza por ser un antagonista, por eso se realiz" este modelo matemático por (:'rez et al, $$$%! (0igura ;2%! a%irmando nue'amente que el Trichoderma tiene unO de in8i@ici"n so@re los 8ongos pat"genosD en la cepa THC: un 4-*-O, en el THM: un 42*2O $ en la TV: un 44*4O de in8i@ici"n micelial* <a cepas de T. harzianum

utilizados presentaron un modo de acci"n %a'ora@le por la competencia de nutrientes $

espacio, $a que crecen rápidamente, superando el crecimiento del Phytophthora sp,impidiendo el desarrollo de este =%igura 4(> =Ta@la ->.

Conclusi"n<os aislamientos de Trichoderma e'aluados en este estudio son e%icientes, encondiciones in vitro, para el control de P. infestans del tomate* +emostrando un claroe%ecto antag"nico, mediante la acti'idad de competencia, micoparasitismo $ anti@iosis

REFERECG#S !G!<G;JRKFGC#S(* #grios J* Manual de enfermedades de las plantas. (\ ed* M0ico Ciencia $tecnología S*#D (..(*

9* #grios J* Fitopatología* M0ico Ciencia $ tecnología S*#* (../, 3() N 3((*

25



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-* Catie* ro$ecto regional mane?o integral de plagas* Juía para el mane?o integradode plagas del culti'o del tomate* Costa Rica (..)*

1* Centro de educaci"n $ tecnología* Manual de producci"n $ utilizaci"n deTrichoderma spp* ]Manual^* Santiago de C8ile 9))-*

/* Cepeda S*M* !l tomate ro"o cultivo y control parasitológico * (\ ed* M0ico TrillasD9)).*

4* C8á'ez M* roducci"n de Trichoderma sp. L e'aluaci"n de su e%ecto en culti'o decrisantemo =#endranthema grandifora> ]Tesis^* !ogotá onti%ica &ni'ersidada'erianaD 9))/*

2* Ezzi$$ani M* Sanc8ez C* #8med #* Requena M* $ Candela M* Trichoderma

harzianum como biofungicida para el biocontrol de Phytophthora capsici en plantas de

pimiento $%apsicum annuum L.). Espaa* #nales de @iología* 9))-D 9/ 31:-1*

.. Gn%ante +, Martinez !, Jonzalez , $ Re$es L* Mecanismos de acci"n deTrichoderma %rente a 8ogos %itopat"genos* Re'* rotecci"n Veg* 9)).D 'ol* 9-=(>(-:9(*

()* Martínez !, Gn%ante + $ Re$es L* Trichoderma spp* $ su %unci"n en el control deplagas en los culti'os* Re'* rotecci"n Veg* 9)(3D 'ol* 92=(>(:((*

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(-* Quiroz F, Ferrara R, #larc"n #, $ <ara M* #ntagonismo in 'itro de cepas de

/spergillus $ Trichoderma 8acia 8ongos %ilamentosos que a%ectan al culti'o del a?o*Re'ista me0icana de micología*9))2D 'ol* 9/*

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(/* Suárez C, Fernández R, Valero , Jámez R $ áez #* #ntagonismo in 'itro deTrichoderma harzianum Ri%ai so@re &usarium solani =Mart*> Sacc*, asociado a la

26



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Documents

Efecto Anatagonico de Trichoderma