i

EFEK ANTIINFLAMASI BENZOIL EUGENOL SECARA TOPIKAL TERHADAP EDEMA KAKI YANG DIINDUKSI FORMALIN 0,5% PADA

MENCIT JANTAN GALUR SWISS

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Paulina Maya Octasari

NIM : 078114126

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA 2011

ii

iii

iv

v

vi

vii

PRAKATA

Penulis mengucapkan puji dan syukur kepada Tuhan Yang Maha Esa

karena atas berkat, rahmat dan cinta-Nya yang diberikan, penulis dapat

menyelesaikan skripsi yang berjudul ”Efek Antiinflamasi Benzoil Eugenol secara

Topikal terhadap Edema Kaki yang Diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit Jantan

Galur Swiss”.

Dalam proses pelaksanaan dan penyusunan skripsi yang merupakan tugas

akhir untuk memenuhi salah satu syarat guna memperoleh gelar Sarjana Strata

satu Farmasi (S. Farm.), program Studi Ilmu Farmasi Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta, penulis ingin. Maka ucapan terima kasih

yang tulus khususnya penulis tujukan kepada :

1. Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma atas dukungan yang

diberikan.

2. Bapak Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku dosen pembimbing dan penguji

yang telah mengarahkan, mendampingi, dan meluangkan waktu untuk

berdiskusi bersama penulis selama proses penelitian, penyusunan, hingga

selesainya skripsi ini.

3. Bapak Jeffry Julianus, M.Si. selaku dosen penguji skripsi yang telah

memberikan waktu, saran dan masukan demi kesempurnaan skripsi ini.

4. Ibu Phebe Hendra, M.Si., Ph.D., Apt. selaku dosen penguji skripsi yang telah

memberikan waktu, saran dan masukan demi kesempurnaan skripsi ini.

5. Bapak Drs. Mulyono, Apt. yang memberikan dukungan, semangat, dan doa

sehingga penulis semangat untuk melakukan yang terbaik.

viii

6. Staf laboratorium, Bapak Kayatno dan Bapak Yohanes Ratijo yang telah

banyak membantu selama penulis melakukan penelitian di Laboratorium

Imono.

7. Yustinus Bambang Suliestyo dan Yuliana Dwi Lestari atas doa, kesabaran,

nasehat dan dukungannya yang tidak pernah terlewatkan sehingga penulis

dapat semangat dalam menyelesaikan skripsi ini.

8. Adikku Sebastianus Harya Anggana, Valentina Yunita Lestiani, dan Yohanes

Guntur Sutirto yang memberikan semangat dan doa.

9. Pius Perwita Setyo Hadi terima kasih atas doa, kesabaran, kasih sayang,

pendapat, perhatian dan dukungannya.

10. Temanku Dani, Devi, Dika, Yosephine dan Yudi untuk kerjasama selama

melakukan dan menyelesaikan skripsi.

11. Dita, Olive, dan Frissa yang telah memberikan semangat dan dukungan.

12. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu persatu yang telah membantu

penulis dalam menyelesaikan skripsi ini.

Penulis menyadari masih banyak kekurangan dan ketidaksempurnaan

yang ada dalam penyusunan skripsi ini. Maka penulis mengharapkan kritik dan

saran yang dapat membuat karya ini menjadi lebih baik. Akhir kata, semoga

penelitian skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca terutama bagi perkembangan

ilmu kefarmasian.

Penulis

ix

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL .......................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING.................................................. ii

HALAMAN PENGESAHAN ............................................................................ iii

HALAMAN PERSEMBAHAN ......................................................................... iv

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ............................. v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ............................................................. vi

PRAKATA .......................................................................................................... vii

DAFTAR ISI ...................................................................................................... ix

DAFTAR TABEL .............................................................................................. xiii

DAFTAR GAMBAR ......................................................................................... xiv

DAFTAR LAMPIRAN ..................................................................................... xvi

INTISARI .......................................................................................................... xix

ABSTRACT ........................................................................................................ xx

BAB I. PENGANTAR ...................................................................................... 1

A. Latar Belakang ...................................................................................... 1

1. Permasalahan ............................................................................... 3

2. Keaslian penelitian ....................................................................... 3

3. Manfaat penelitian ....................................................................... 4

B. Tujuan Penelitian .................................................................................. 5

BAB II. PENELAAHAN PUSTAKA .............................................................. 6

A. Inflamasi ............................................................................................... 6

1. Definisi ........................................................................................ 6

x

2. Mekanisme ................................................................................... 7

3. Siklooksigenase-1 dan siklooksigenase-2 .................................... 9

4. Gejala ........................................................................................... 12

B. Antiinflamasi ......................................................................................... 13

C. Formalin ................................................................................................ 14

D. Etil Asetat .............................................................................................. 15

E. HealthyCoR

F. Eugenol .................................................................................................. 16

Virgin Coconut Oil (VCO) ................................................ 15

G. Benzoil Eugenol ..................................................................................... 17

H. Penghantaran Obat secara Topikal ........................................................ 18

I. Metode Pengujian Antiinflamasi ........................................................... 19

J. Landasan Teori ...................................................................................... 19

K. Hipotesis ................................................................................................ 21

BAB III. METODE PENELITIAN .................................................................... 22

A. Jenis dan Rancangan Penelitian .............................................................. 22

B. Variabel Penelitian .................................................................................. 22

C. Definisi Operasional ……....................................................................... 23

D. Bahan dan Alat Penelitian ...................................................................... 23

1. Bahan ............................................................................................... 23

2. Alat .................................................................................................. 24

E. Tata Cara Penelitian .................................................................................. 25

1. Orientasi waktu pengolesan senyawa terhadap edema kaki mencit 25

2. Orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif .................... 25

xi

3. Orientasi pelarut benzoil eugenol ................................................... 26

4. Penentuan peringkat konsentrasi benzoil eugenol .......................... 26

5. Pengelompokan hewan uji .............................................................. 26

6. Pengamatan ..................................................................................... 28

F. Tata Cara Analisis Hasil ......................................................................... 28

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ........................................................... 30

A. Hasil Orientasi Rentang Waktu Pengolesan Senyawa pada Edema

Kaki Mencit, Konsentrasi Kontrol Positif, dan Pelarut Benzoil

Eugenol ................................................................................................... 30

1. Hasil orientasi rentang waktu pengolesan senyawa pada edema

kaki mencit yang diinduksi formalin 0,5% ...................................... 30

2. Hasil orientasi konsentrasi kontrol positif eugenol secara topikal .. 34

3. Hasil orientasi pelarut benzoil eugenol dan peringkat

konsentrasinya ................................................................................. 37

B. Hasil Daya Antiinflamasi Benzoil Eugenol secara Topikal terhadap

Edema Kaki Mencit yang Diinduksi Formalin 0,5% ............................. 40

C. Hasil Uji Hubungan Linieritas antara Konsentrasi Benzoil Eugenol

terhadap Daya Antiinflamasi ................................................................ 50

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN............................................................. 52

A. Kesimpulan ............................................................................................. 52

B. Saran ....................................................................................................... 52

DAFTAR PUSTAKA ......................................................................................... 54

LAMPIRAN ........................................................................................................ 59

xii

BIOGRAFI PENULIS ........................................................................................ 98

xiii

DAFTAR TABEL

Tabel I. Komposisi VCO (Virgin Coconut Oil) ............................................ 16

Tabel II. Hasil analisis paired T-test orientasi rentang waktu pengolesan

setiap jam selama 5 jam pengamatan ............................................... 32

Tabel III. Hasil analisis paired T-test orientasi rentang waktu pengolesan

setiap 10 menit selama 1 jam pengamatan ....................................... 33

Tabel IV. Hasil analisis AUC total ketiga konsentrasi eugenol menggunakan

One-Way ANOVA dengan tingkat kepercayaan 95% ....................... 35

Tabel V. Hasil orientasi pelarut dan konsentrasi tertinggi yang didapatkan

dari masing-masing pelarut non polar yang diuji ............................ 38

Tabel VI. Rata-rata nilai AUC total pada mencit yang diinduksi formalin

0,5% selama 6 jam pengamatan ....................................................... 42

Tabel VII. Nilai persentase penghambatan inflamasi (tebal edema kaki

mencit) yang diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan... 46

Tabel VIII. Nilai persentase daya antiinflamasi benzoil eugenol 25% b/v;

benzoil eugenol 12,5% b/v; dan benzoil eugenol 6,25% b

/v .............. 47

xiv

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Diagram mediator-mediator inflamasi, prostaglandin dan

tromboksan yang dihasilkan akibat perombakan fosfolipid .......... 7

Gambar 2. Pembentukan prostaglandin H2 dari substrat asam arakidonat

oleh enzim COX-2 ........................................................................ 8

Gambar 3. Turunan karboksiklis dan heterosiklis yang terikat visinal dengan

moieties aril .................................................................................... 10

Gambar 4. Perbandingan penghambatan penempelan asam arakidonat pada

COX-2 dengan COX-1 saat diberikan obat yang selektif terhadap

COX-2 ........................................................................................... 11

Gambar 5. Struktur asam amino valin 523 ...................................................... 11

Gambar 6. Struktur etil asetat .......................................................................... 15

Gambar 7. Struktur eugenol ............................................................................ 16

Gambar 8. Struktur benzoil eugenol ................................................................ 17

Gambar 9. Skema penghantaran obat secara transdermal ............................... 18

Gambar 10. Skema jalannya penelitian ............................................................. 27

Gambar 11. Diagram batang orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol

positif ............................................................................................. 35

Gambar 12. Grafik rata-rata tebal edema kaki mencit yang diinduksi formalin

0,5% selama 6 jam pengamatan .................................................... 41

Gambar 13. Diagram batang nilai AUC total masing-masing perlakuan .......... 43

xv

Gambar 14. Diagram batang rata-rata persentase penghambatan inflamasi

(edema kaki mencit) yang diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam

pengamatan .................................................................................... 45

Gambar 15. Bagian sifat lipofil dan rantai pendek karboksil pada benzoil

eugenol ........................................................................................... 48

Gambar 16. Interaksi antara benzoil eugenol dengan asam amino valin ............ 49

Gambar 17. Grafik hubungan linieritas konsentrasi benzoil eugenol 6,25%

b/v; 12,5% b/v; 25% b/v terhadap persen penghambatan

inflamasi ........................................................................................ 50

xvi

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Elusidasi Struktur dari Benzoil Eugenol ....................................... 59

a. Grafik senyawa menggunakan Gas Chromatography ................... 59

b. Pencarian bobot molekul senyawa ................................................ 60

c. Elusidasi struktur menggunakan IR .............................................. 61

d. Elusidasi struktur menggunakan NMR ......................................... 62

Lampiran 2. Surat Keterangan Pembelian Mencit di LPPT-Universitas Gajah

Mada (UGM) ................................................................................ 63

Lampiran 3.

a. Sertifikasi Kalibrasi Caliper merk Mitutoyo ................................. 64

b. Tabel presisi jangka sorong merk Mitutoyo .................................. 66

Lampiran 4. Skema orientasi konsentrasi kontrol positif eugenol ..................... 66

Lampiran 5.

a. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi

formalin 0,5% dengan pengukuran setiap jam selama lima jam

pengamatan .................................................................................... 67

b. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi

formalin 0,5% dengan pengukuran setiap 10 menit selama 1 jam

pengamatan .................................................................................... 70

Lampiran 6.

a. Perhitungan Peringkat Konsentrasi Eugenol sebagai Kontrol

Positif ............................................................................................. 74

xvii

b. Hasil Analisa Rata-rata AUC total Eugenol 25% v/v, 50% v/v,

dan 100% v/v untuk Kontrol Positif menggunakan Metode

Analisis One-Way ANOVA Tingkat Kepercayaan 95%

kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe ..................................... 74

Lampiran 7.

a.

b.

Perhitungan konsentrasi benzoil eugenol menggunakan pelarut

non polar etanol 96% .................................................................... 77

c.

Perhitungan konsentrasi benzoil eugenol menggunakan pelarut

non polar kloroform ...................................................................... 77

Lampiran 8.

Perhitungan konsentrasi benzoil eugenol menggunakan pelarut

non polar etil asetat ........................................................................ 77

Perhitungan peringkat konsentrasi benzoil eugenol menggunakan

pelarut etil asetat ....................

Lampiran 9.

........................................................ 77

Hasil Analisa Tebal Edema Kaki Mencit yang diinduksi Formalin

0,5% menggunakan

Lampiran10.

One-Way ANOVA tingkat kepercayaan

95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe ............................. 78

a. Contoh perhitungan data tebal edema menjadi nilai AUC

b.

...................... 87

Hasil Analisa AUC total Setiap Kelompok Perlakuan menggunakan

One-Way ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan

dengan uji Scheffe .................................................................................. 87

xviii

Lampiran11. Perhitungan nilai persentase penghambatan inflamasi pada

kelompok kontrol eugenol 50% v/v; benzoil eugenol 25% b/v;

benzoil eugenol 12,5% b/v; dan benzoil eugenol 6,25% b/v ......... 91

Lampiran 12.Hasil analisa persentase penghambatan inflamasi menggunakan

Lampiran 13.

One-Way ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian

dilanjutkan dengan uji Scheffe ...................................................... 92

a. Perhitungan persentase daya antiinflamasi benzoil eugenol ......... 95

b. Hasil analisa persentase daya antiinflamasi benzoil eugenol

menggunakan

Lampiran 14.

One-Way ANOVA tingkat kepercayaan 95%

kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe ..................................... 95

Perhitungan nilai EC50 ................................................................. 97

xix

INTISARI Benzoilasi merupakan proses penghasilan senyawa turunan dengan

menambahkan gugus benzoil pada senyawa induk tertentu sehingga memiliki struktur yang lebih besar dibandingkan senyawa induknya. Benzoil eugenol merupakan hasil benzoilasi yang memiliki kecocokan dengan sisi aktif enzim siklooksigenase-2 sehingga diduga memiliki aktivitas antiinflamasi dengan menghambat biosintesis prostaglandin. Penelitian ini bertujuan untuk menguji secara in vivo efek antiinflamasi benzoil eugenol secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% pada mencit galur Swiss.

Pengujian aktivitas antiinflamasi benzoil eugenol dilakukan menggunakan formalin 0,5% dengan metode pengukuran jangka sorong setiap jam selama enam jam pengamatan setelah injeksi subplantar. Hewan uji dibagi menjadi tujuh kelompok, yaitu kelompok kontrol negatif formalin, etil asetat, VCO, kontrol positif eugenol 50% v/v, benzoil eugenol 25% b/v; 12,5% b/v; dan 6,25% b/v. Persentase penghambatan inflamasi benzoil eugenol dibandingkan dengan kontrol negatif formalin, etil asetat, dan kontrol positif eugenol 50% v

Hasil persentase penghambatan inflamasi benzoil eugenol 25%

/v. Semua pemberian senyawa uji dilakukan secara topikal.

b/v; 12,5% b/v; dan 6,25% b

/v secara berturut-turut sebesar 35,612%; 29,438%; dan 4,851%. Berdasarkan uji Regresi Linier semakin meningkatnya konsentrasi benzoil eugenol maka dapat meningkatkan % penghambatan inflamasi. Dari persamaan regresi linier tersebut didapatkan nilai EC50 sebesar 41,67%.

Kata kunci : topikal, benzoil eugenol, antiinflamasi, formalin

xx

ABSTRACT Benzoylation is processes that add a benzyl group to the main compound

so that produce bigger structure than main structure. Benzoyl eugenol is one of them that match with active-side of cyclooxygenase enzyme so that unexpectedly benzoyl eugenol can be an anti-inflammatory agent through inhibit prostaglandins biosynthesis. This study aims to prove that benzoyl eugenol really has in vivo anti-inflammatory effect in formaldehyde-induced hind paw oedema in mice.

Benzoyl eugenol was studied in formaldehyde-induced hind paw oedema in mice and the paw oedema was measured by vernier caliper every hour during six hour after subplantar injection. Mice divided into seven groups. There are negative control of formaldehyde, ethyl acetate, VCO, eugenol 50% v/v, benzoyl eugenol 25% b/v; 12.5% b/v; dan 6.25% b/v . Degree of anti-inflammatory of benzoyl eugenol was compared with negative control, ethyl acetate and positive control eugenol 50% v

The percentage of anti-inflammatory activity of benzoyl eugenol 25% /v. All of them were administered topically.

b/v; 12.5% b/v; and 6.25% b

/v are 35.612%; 29.438%; and 4.851%. According to the linier regression’s result, the increment of concentration benzoyl eugenol will cause the increment of anti-inflammatory effect. The effective concentration of benzoyl eugenol is 41.67%.

Key words: topical, benzyl eugenol, anti-inflammatory, formaldehyde .

1

BAB I

PENGANTAR

A. Latar Belakang

Peradangan atau inflamasi merupakan hal yang tidak asing lagi bagi

masyarakat. Yang dimaksud dengan peradangan atau inflamasi adalah respon

kompleks lokal terhadap benda asing, misalnya bakteri atau pada keadaan tertentu

terhadap bahan yang dihasilkan dari dalam tubuh. Respon inflamatoris adalah

respon secara patofisiologi pada jaringan mamalia akibat terkena infeksi

organisme, substansi kimia, luka fisik sehingga timbul bengkak yang diikuti

akumulasi lokal cairan plasma dan sel darah (Sobota, Szwed, Kasza, Bugno, and

Kordula, 2000). Peristiwa inflamasi ini ditandai dengan beberapa gejala yang khas

seperti calor, rubor, tumor (edema), dolor, dan functio lesa (Kee and Hayes,

1996).

Dua senyawa yang dapat menimbulkan inflamasi antara lain formalin dan

karagenin, dimana formalin dapat memberikan gejala inflamasi berupa edema dan

kemerahan terlihat lebih nyata dibandingkan dengan karagenin (Joseph, George,

and Nair, 2005). Formalin merupakan larutan formaldehid 37% yang

menimbulkan inflamasi dengan mekanisme bifasik yang terdiri dari fase

nosiseptif sebagai fase awal dan fase inflamasi sebagai fase kedua. Pada fase

kedua ini terjadi pelepasan mediator-mediator inflamasi seperti serotonin,

prostaglandin, bradikinin, dan histamin (Juma’a, Ahmed, and Hussain, 2009).

Pemberian obat antiinflamasi non steroid (AINS) secara per oral sering

dilakukan untuk menangani inflamasi tersebut. Akan tetapi, mayoritas obat

2

antiinflamasi non steroid dapat mengiritasi lambung karena ketidakselektifan

terhadap enzim siklooksigenase (COX). Hampir semua obat AINS bekerja pada

kedua isoform dari enzim siklooksigenase sehingga senyawa proteksi lambung

yang seharusnya dihasilkan oleh enzim siklooksigenase-1 (COX-1) dihambat

pembentukannya (Schror and Meyer-Kirchrath, 2000). Maka salah satu hal yang

dapat dilakukan untuk mengatasi permasalahan tersebut adalah mengubah jalur

pemberian secara per oral menjadi secara topikal.

Menurut Sadeghian, Seyedi, Saberi, Arghiani, and Riazi (2008), eugenol

(4-allyl-2-methoxyphenol) merupakan salah satu senyawa alam yang

menunjukkan aktivitas sebagai antispasmodik, antipiretik, antibakteri (Ayoola et

al., 2008), dan antiinflamasi dengan menghambat kemotaksis leukosit yang

dimiliki oleh setiap senyawa fenolik (Azuma, Ozasa, Ueda and Takagi, 1986) dan

menekan ekspresi siklooksigenase-2 (COX-2) (Magalhaes et al., 2010) pada

makrofag RAW 264,7 (Ozturk and Ozbek, 2005). Eugenol dapat mengalami

benzoilasi menjadi benzoil eugenol dengan penambahan gugus benzoil sehingga

menghasilkan senyawa yang memiliki struktur lebih besar dibandingkan senyawa

induknya. Lebar jalan masuk ke sisi aktif enzim COX-2 lebih besar dibandingkan

enzim COX-1 sehingga benzoil eugenol diduga memiliki keselektifan terhadap

enzim COX-2 (Vane, Botting, and Botting, 1996). Sifat lipofilisitas benzoil

eugenol akibat adanya dua cincin aromatis (Dannhardt and Laufer, 2000) yang

dihubungkan oleh rantai pendek karboksil memungkinkan senyawa tersebut

menghambat secara selektif enzim COX-2 sehingga biosintesis prostaglandin

tidak terjadi (Dewhirst, 1980). Benzoil eugenol juga dapat menghambat aktivitas

3

enzim 5-lipooksigenase yang telah terbukti secara in vitro (Sadeghian et al., 2008)

sehingga diduga memiliki aktivitas antiinflamasi.

1. Permasalahan

a. Apakah benzoil eugenol memiliki efek antiinflamasi secara topikal

terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5% pada mencit

jantan galur Swiss?

b. Berapakah persentase penghambatan inflamasi benzoil eugenol sebagai

agen antiinflamasi terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5%

pada mencit jantan galur Swiss?

c. Berapakah persentase daya antiinflamasi benzoil eugenol sebagai agen

antiinflamasi terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5% pada

mencit jantan galur Swiss?

d. Berapakah konsentrasi efektif (EC50) benzoil eugenol sebagai agen

antiinflamasi terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5% pada

mencit jantan galur Swiss?

2. Keaslian penelitian

Berdasarkan sumber-sumber informasi yang diperoleh, terdapat beberapa

penelitian ilmiah yang memiliki korelasi dengan penelitian yang akan

dilaksanakan oleh penulis. Penelitian ilmiah tersebut meliputi, Uji Efek

Antiinflamasi Krim Tipe A/M Ekstrak Etanolik Jahe 10% (Zingiber officinale

Roscoe) yang Diberikan Topikal terhadap Udem Kaki Tikus yang Diinduksi

Karagenin pernah dilakukan oleh Sri Budi Gunani (2009). Hasil penelitian

menunjukkan krim tipe A/M ekstrak etanolik jahe 10% memiliki daya

4

antiinflamasi dengan persentase penghambatan (45,10 + 11,18)% lebih kecil dari

Na diklofenak emulgel yang memiliki persentase penghambatan (76.47+13,16)%

(p=0,002).

Selain itu, penelitian yang berjudul Design and Synthesis of Eugenol

Derivatives, as Potent 15-lipoxygenase Inhibitors oleh Sadhegian et al., 2008

menunjukkan bahwa benzoil eugenol dapat menghambat aktivitas enzim

lipooksigenase dengan rentang penghambatan yang besar secara kimia komputasi.

Penelitian mengenai Efek Antiinflamasi Benzoil Eugenol secara Topikal

terhadap Edema Kaki yang diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit Jantan Galur

Swiss sejauh pengetahuan penulis belum pernah ada yang melakukan.

3. Manfaat penelitian

a. Manfaat teoritis

Hasil penelitian ini dapat digunakan untuk menambah informasi dan

perkembangan ilmu pengetahuan dalam bidang pengujian efek antiinflamasi

benzoil eugenol secara topikal terhadap edema yang diinduksi formalin

0,5%.

b. Manfaat praktis

Penelitian ini dapat dijadikan acuan dalam penanganan kasus

inflamasi menggunakan benzoil eugenol yang dapat dilakukan secara

topikal.

5

B. Tujuan Penelitian

1. Tujuan umum

Penelitian ini bertujuan untuk memberikan informasi bahwa benzoil

eugenol memiliki aktivitas antiinflamasi.

2. Tujuan khusus

a. Mengetahui ada tidaknya efek antiinflamasi secara topikal dari benzoil

eugenol terhadap edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% pada mencit

jantan galur Swiss.

b. Mengetahui persentase penghambatan inflamasi benzoil eugenol sebagai

agen antiinflamasi topikal terhadap edema kaki yang diinduksi formalin

0,5% pada mencit jantan galur Swiss.

c. Mengetahui persentase daya antiinflamasi benzoil eugenol sebagai agen

antiinflamasi topikal terhadap edema kaki yang diinduksi formalin 0,5%

pada mencit jantan galur Swiss.

d. Mengetahui konsentrasi efektif benzoil eugenol sebagai agen antiinflamasi

topikal terhadap edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% pada mencit

jantan galur Swiss.

6

BAB II

PENELAAHAN PUSTAKA

A. Inflamasi

1. Definisi

Inflamasi adalah respon jaringan hidup sebagai reaksi lokal atas

keberadaan benda asing, organisme hidup atau adanya luka. Reaksi ini meliputi

berbagai proses yang kompleks terdiri dari deretan aktivasi enzim, pelepasan

mediator, pengeluaran cairan, migrasi sel, pembongkaran dan perbaikan jaringan

(Vane et al., 1996). Definisi inflamasi juga dilakukan oleh Sobota et al. (2000)

yang mengatakan bahwa peradangan atau inflamasi adalah respon secara

patofisiologi pada jaringan mamalia akibat terkena infeksi organisme, substansi

kimia, luka fisik sehingga timbul bengkak yang diikuti akumulasi lokal cairan

plasma dan sel darah. Rhen and Cidlowski (2005) mendefinisikan inflamasi

sebagai respon reflektif tubuh terhadap infeksi, ikatan antibodi terhadap antigen di

dalam tubuh, iritasi mekanik, atau luka dan kerusakan jaringan. Pengamatan yang

lebih dekat pada daerah inflamasi menunjukkan terjadinya dilatasi pada pembuluh

darah sehingga darah pada daerah tersebut lebih banyak, serta terjadi bendungan

cairan lainnya yang menyebabkan daerah tersebut membengkak (Maffetone,

2002).

7

2. Mekanisme

Pada gambar 1 menunjukkan mekanisme terjadinya inflamasi akibat

adanya pelepasan mediator-mediator inflamasi oleh enzim siklooksigenase.

Fosfolipid yang terdapat di dalam membran dipecah oleh fosfolipase A2 ketika

dipicu oleh adanya neurotransmiter, neuromodulator, dan neurohormon. Salah

satu hasil pemecahan tersebut adalah asam arakidonat. Asam arakidonat

merupakan substrat bagi enzim siklooksigenase untuk menghasilkan prostanoid

berupa prostasiklin, tromboksan A2, prostaglandin E2, prostaglandin D2, dan

prostaglandin F2α (Fitzgerald and Patrono, 2001).

Gambar 1. Diagram mediator-mediator inflamasi, prostaglandin dan tromboksan yang dihasilkan akibat perombakan fosfolipid melalui enzim siklooksigenase

(Fitzgerald et al., 2001)

8

Asam arakidonat masuk ke dalam siklooksigenase melewati knob

hidrofobik yang merupakan penghubung antara protein ke membran. Asam

arakidonat masuk ke dalam sisi aktif siklooksigenase, dimana terjadi penambahan

dua molekul oksigen sehingga terbentuk prostaglandin endoperoksida (PGG2).

Prostaglandin endoperoksida masuk ke dalam sisi aktif peroksidase dimana gugus

heme membantu menghilangkan satu atom oksigen dari bentuk peroksida

sehingga menjadi prostaglandin H2 (PGH2) yang meninggalkan enzim

siklooksigenase dan berperan dalam penggumpalan darah, sensitivitas nyeri, dan

reaksi alergi (Gambar 2) (Amasino et al., 1996).

Gambar 2. Pembentukan prostaglandin H2 dari substrat asam arakidonat oleh enzim COX-2 (Amasino et al., 1996)

Peristiwa utama yang terjadi pada proses inflamasi adalah adanya

perubahan aliran vasa darah dan peningkatan permeabilitas sekuler. Pada

perubahan aliran vasa darah terjadi vasokonstriksi sementara yang kemudian

menjadi vasodilatasi yang berlebihan sehingga banyak aliran darah yang mengalir

ke daerah tersebut. Proses ini membuat daerah yang mengalami inflamasi menjadi

9

merah dan hangat. Vasodilatasi ini membuat sirkulasi darah menjadi melambat

dan terjadi peningkatan permeabilitas vaskular meningkat sehingga terjadi stasis.

Kemudian terjadi marginasi leukosit dan keluarnya cairan yang menyebabkan

terjadinya edema. Peristiwa penting yang kedua adalah terjadinya peningkatan

permeabilitas vaskular sehingga menyebabkan kebocoran endotel. Peristiwa ini

akan meningkatkan tekanan hidrostatik dan penurunan tekanan koloid osmotik

protein (Harijadi, 2009).

3. Siklooksigenase-1 dan siklooksigenase-2

Siklooksigenase-1 dan siklooksigenase-2 merupakan isoform dari

siklooksigenase yang memiliki struktur yang mirip satu sama lain.

Siklooksigenase-1 merupakan enzim konstitutif yang berperan dalam

mengkatalisis pembentukan prostanoid regulatoris pada berbagai jaringan,

terutama pada selaput lendir traktus gastrointestinal, ginjal, platelet dan epitel

pembuluh darah. Sedangkan enzim COX-2 merupakan enzim indusibel yang

ekspresinya dipicu oleh adanya stimuli radang, mitogenesis atau onkogenesis.

Namun seiring perkembangan waktu, selain merupakan enzim indusibel, enzim

ini termasuk dalam enzim konstitutif yang terdapat di berbagai jaringan, antara

lain ginjal, pembuluh darah, paru-paru, tulang, pankreas, sumsum tulang

belakang, dan selaput lendir lambung (Emran, 2002).

10

Menurut Dannhardt et al. (2000) senyawa yang termasuk dalam

penghambat enzim COX-2 adalah senyawa yang bersifat lipofil dan asam. Secara

struktural terdapat beberapa golongan inhibitor selektif COX-2, yaitu: (1) turunan

karbosiklis dan heterosiklis yang terikat visinal dengan moieties aril (Gambar 3),

(2) turunan diaril- atau aril/heteroaril-eter dan –tioeter, (3) turunan cis-stilben,

serta (4) keton diaril dan aril/heteroaril. Senyawa yang terdiri dari dua cincin

aromatik yang dihubungkan oleh rantai pendek akan berpotensi untuk

menghambat kerja enzim COX-2 dalam proses biosintesis prostaglandin

(Dewhirst, 1980).

Gambar 3. Turunan karboksiklis dan heterosiklis yang terikat visinal dengan moieties aril (Dannhardt et al., 2000)

11

Gambar 4. Perbandingan penghambatan penempelan asam arakidonat pada COX-2 dengan COX-1 saat diberikan obat yang selektif terhadap COX-2

Pada gambar 4 menunjukkan bahwa senyawa yang memiliki struktur

yang lebih besar akan lebih selektif terhadap enzim COX-2 karena jarak ‘mulut’

enzim COX-2 yang lebih besar dibandingkan dengan COX-1 (Vane et al., 1996).

Senyawa yang termasuk dalam penghambat selektif enzim COX-2 akan masuk

melalui knob hidrofobik pada protein siklooksigense kemudian menduduki sisi

aktif enzim dan berinteraksi dengan salah satu asam amino, valin 523 (Gambar 5)

sehingga mencegah masuknya asam arakidonat yang mengakibatkan

terhambatnya pelepasan mediator kimia inflamasi seperti prostaglandin (Amasino

et al., 1996). Senyawa-senyawa yang termasuk di dalamnya akan bekerja sebagai

antiradang yang setara dengan obat-obat antiinflamasi bukan steroid tetapi dengan

toksisitas yang lebih ringan terhadap saluran gastrointestinal (Emran, 2002).

NH2

CH3

H3C O

OH

Gambar 5. Struktur asam amino valin 523

12

4. Gejala

Secara garis besar, Kee et al. (1996) menyebutkan beberapa gejala yang

dapat dikenali dalam proses inflamasi antara lain adanya rubor (kemerahan),

edema (pembengkakan), kolor (panas), dolor (nyeri), dan functio laesa (hilangnya

fungsi).

Rubor atau kemerahan biasanya merupakan hal pertama yang terlihat di

daerah yang megalami peradangan yang disebabkan adanya dilatasi pembuluh

darah kecil dalam daerah yang mengalami kerusakan (Kee et al., 1996). Dengan

vasodilatasi maka aliran darah yang menuju ke daerah tersebut akan semakin banyak

sehingga terlihat warna kemerahan dan panas yang dirasakan (Karch, 2003).

Gejala paling nyata dari peradangan akut yang mungkin terjadi adalah

edema lokal. Gejala ini timbul karena adanya migrasi cairan dan sel-sel dari sirkulasi

darah ke jaringan-jaringan interstial. Campuran dari cairan dan sel yang tertimbun di

daerah peradangan disebut eksudat. Pada awal peradangan, sebagian besar isi dari

eksudat adalah cairan plasma, tetapi kemudian sel-sel darah putih akan meninggalkan

aliran darah kemudian tertimbun sebagai bagian dari eksudat (Price and Wilson,

1995).

Dolor atau rasa sakit dari reaksi peradangan dapat disebabkan oleh adanya

perubahan pH lokal atau konsentrasi lokal ion-ion tertentu dapat merangsang ujung-

ujung nosiseptor. Pengeluaran zat kimia tertentu seperti histamin, prostaglandin, dan

serotonin atau zat kimia bioaktif lainnya dapat merangsang nosiseptor. Selain itu,

edema yang terjadi mengakibatkan peningkatan tekanan lokal yang menimbulkan

rasa sakit (Price et al., 1995).

13

Gangguan fungsi (fungsiolaesa), merupakan reaksi peradangan yang

terlihat mudah untuk dimengerti, mengapa bagian yang bengkak terasa nyeri dan

berfungsi secara abnormal. Namun, sebetulnya tidak diketahui secara mendalam

bagaimana mekanisme terganggunya fungsi jaringan oleh adanya peradangan

(Price et al., 1995).

B. Antiinflamasi

Obat Anti-Inflamasi Non Steroid (OAINS) populer dengan menghambat

baik sistem enzim siklooksigenase maupun lipooksigenase intraseluler, yang

nantinya akan berpengaruh pada respon inflamasi yang terjadi dan menurunkan

produksi berbagai komponen prostaglandin (Babb, 1992). Penggunaan obat AINS

jangka panjang memiliki efek pada gastrointestinal seperti dispepsia dan rasa

nyeri pada abdomen, tidak jarang terjadi perforasi atau pendarahan pada lambung

atau duodenum (Fitzgerald et al., 2001). Salah satu solusi untuk mencegah

terjadinya iritasi lambung adalah dengan pemberian obat secara topikal. Selain

mencegah terjadinya iritasi lambung, sistem penghantaran secara topikal

bertujuan untuk menghindari berbagai masalah absorbsi pada saluran cerna seperti

deaktivasi oleh enzim pencernaan. Pemberian obat melalui transdermal juga dapat

meningkatkan bioavaibilitas dan efikasi obat dengan menghindari first-pass

elimination pada hati (Gunani, 2009).

Keefektifan dari pengobatan secara topikal bergantung pada kemampuan

penetrasi obat ke dalam kulit serta kemampuan untuk memasuki sirkulasi atau

diabsorbsi ke dalam jaringan yang lebih dalam untuk menghambat

siklooksigenase. Hal tersebut dipengaruhi oleh keseimbangan solubilitas lipid dan

14

aqueous agar permeasi optimal. Sekalipun kadar plasma dari pemberian OAINS

topikal relatif lebih rendah daripada pemberian OAINS secara oral, akan tetapi

studi komparatif yang dilakukan dengan zat aktif diklofenak menunjukkan tidak

terjadi perbedaan yang signifikan dengan rute pemberian oral maupun topikal

dalam terapi osteoartritis (Moore, 2004).

C. Formalin

Formalin adalah larutan formaldehid sekitar 37% yang larut dalam air.

Secara seketikan, formaldehid menghasilkan gugus hidroksimetil yang reaktif

pada asam amino seperti lysine (K), arginine (R), tyrosine (Y), asparagine (N),

histidine (H), glutamine (Q), and serine (S) (Sompuram, Vani, Messana, dan

Bogen, 2004). Asam-asam amino tersebut berikatan dengan protein dan molekul

besar. Formaldehid memiliki nilai koefisien difusi sebesar 0,79. Kecepatan

penetrasi jaringan oleh formaldehid relatif cepat, kurang lebih 1 mm/jam

(Goldstein et al., 2003). Kandungan unsur aldehida yang terdapat di dalam

formalin akan mudah bereaksi dengan protein sehingga menyebabkan kematian

sel (Hasyim, Hamam, dan Akil, 2006).

Di masyarakat, formalin digunakan sebagai bahan pengawet bahkan

disalahgunakan untuk mengawetkan makanan agar tidak mudah membusuk

(Hasyim et al., 2006). Selain digunakan sebagai bahan pengawet, formalin dapat

digunakan untuk penelitian pengujian antiartritis dan antiinflamasi suatu senyawa.

Formalin ini menghasilkan inflamasi lokal dan nyeri (Banerjee, Sur, Mandal, Das,

and Sikdar, 2000). Menurut Tanko, Kamba, Saleh, Musa, and Mohammed (2008),

formalin menimbulkan fase nosiseptif sebagai fase awal dan fase inflamasi

15

sebagai fase kedua. Selama fase kedua, formalin memicu terjadinya pelepasan

serotonin, histamin, bradikinin, dan prostaglandin.

D. Etil Asetat

Etil asetat merupakan salah satu pelarut non polar yang memiliki rumus

kimia C4H8O2 (Gambar 6). Senyawa ini tidak berwarna, larut dalam air dingin

maupun hangat, aseton, dietil eter, alkohol, dan benzen.

CH3

O

O

H2C

H3C

Gambar 6. Struktur etil asetat

Etil asetat menguap pada suhu 770

C. Senyawa ini sangat berbahaya jika

tertelan sehingga tidak dipergunakan untuk pelarut oral. Sifat iritasi dari etil asetat

pada kulit sangatlah sedikit tetapi jika terjadi kontak kulit yang berlangsung

berulang akan menyebabkan iritasi yang cukup serius (MSDS, 2008).

E. HealthyCo®

Virgin Coconut Oil (VCO) diperoleh dari biji matang dan segar dari

kelapa secara mekanik maupun natural dengan atau tanpa pemanasan dan bahan

tambahan apapun. Di dalam masyarakat, VCO bermanfaat untuk meningkatkan

daya tahan tubuh, mengeluarkan semua racun dan lemak jahat (LDL kolesterol

dan trigliserid), membunuh semua bakteri yang menyebabkan penyakit,

membunuh virus yang dikapsul lemak, dan meningkatkan kecantikan kulit serta

rambut (Yunus, 2009). Kandungan yang terdapat dalam VCO antara lain dapat

Virgin Coconut Oil (VCO)

16

dilihat pada tabel I. Dari komponen-komponen yang tercantum dalam tabel I,

asam lemak yang paling dominan di dalam HealthyCo®

Tabel I. Komposisi HealthyCo

Extra Virgin Coconut Oil

adalah asam laurat, yang mempunyai keunggulan dapat membentuk munolaurin di

dalam tubuh (Enig, 2001).

®

Extra Virgin Coconut Oil yang digunakan sebagai kontrol negatif (Yunus, 2009)

Komposisi Jumlah Gliserol Asam Laurat 48,74% Gliserol Asam Miristat 16,31% Gliserol Asam Kaprilat 10,91% Gliserol Asam Kaprat 8,10% Gliserol Asam Palmiat 7,38% Gliserol Asam Palmitoleat 5,56% Gliserol Asam Stearat 1,76% Gliserol Asam Kaproat 1,24% Vitamin E 3000 ppm

F. Eugenol

Eugenol (C10H12O2) (Gambar 7) merupakan isomer dari posisi betelfenol

yang ditemukan di tanaman Myrtaceae dan Lauraceae. Eugenol berwarna

kekuningan dan berbentuk cair (Gildemeister, 2009).

Gambar 7. Struktur eugenol (Gildemeister, 2009)

Senyawa ini sering digunakan sebagai wangi-wangian di bidang farmasi

dan digunakan dalam pembuatan vanilin. Di dalam tumbuhan, eugenol terkadang

17

ditemukan dalam bentuk glukosida yang dihasilkan dari proses hidrolisis, yaitu

hasil fermentasi (Gildemeister, 2009).

Menurut Sadeghian et al. (2008), eugenol (4-alil-2-metoksifenol)

merupakan senyawa alam yang menunjukkan aktivitas sebagai antispasmodik,

antipiretik, antibakteri (Ayoola et al., 2008), dan antiinflamasi (Ozturk et al.,

2005). Aktivitas antiinflamasi eugenol dengan beberapa mekanisme, antara lain:

menghambat kemotaksis leukosit yang dimiliki oleh setiap senyawa fenolik

(Azuma et al., 1986) dan menekan ekspresi COX-2 (

Eugenol memiliki titik didih 253

Magalhaes et al., 2010) pada

makrofag RAW 264,7 (Otzurk et al., 2005).

0C dan titik lebur sebesar -90

C. Senyawa

yang berbau cengkeh ini mudah terbakar, memiliki kestabilan yang cukup tinggi

tetapi akan mudah teroksidasi dengan adanya agen pengoksidasi yang kuat.

Senyawa ini berbahaya bila ditelan dan memiliki LD50 sebesar 2680 mg/kg BB

tikus. (MSDS, 2007).

G. Benzoil Eugenol

Benzoil eugenol (Gambar 8) merupakan senyawa derivat eugenol,

senyawa atsiri dalam minyak tumbuhan cengkeh (Syzygium aromaticum L.) dan

memiliki nama kimia 4-alil-2-metoksifenil benzoat (JECFA, 2005).

Gambar 8. Struktur benzoil eugenol (Taveira, Oliveira, Filho, and Braga, 2005)

18

Benzoil eugenol memiliki rumus kimia C17H16O3 dengan berat molekul

268,31 g/mol. Senyawa ini tidak larut dalam air, tetapi larut dalam minyak dan

etanol, merupakan komponen yang tidak berwarna, tidak berbau, dan berasa pahit.

Umumnya senyawa ini sebagai flavouring agent (JECFA, 2009) dan secara in

vitro dapat menghambat aktivitas enzim 5-lipooksigenase (Sadeghian et al.,

2008).

H. Penghantaran Obat secara Topikal

Gambar 9. Skema penghantaran obat secara transdermal (Gunani, 2009)

19

Obat yang diberikan secara transdermal akan masuk ke sirkulasi darah

melalui difusi pasif dari lapisan terluar kulit hingga masuk ke dalam jaringan di

bawah kulit. Tujuan pemberian obat secara topikal adalah untuk menghindari

berbagai masalah absorbsi pada saluran cerna, seperti deaktivasi oleh enzim

pencernaan dan iritasi lambung, dapat meningkatkan bioavaibilitas dan efikasi

obat dengan menghindari first-pass elimination pada hati (Gunani, 2009).

I. Metode Pengujian Antiinflamasi

Metode yang dapat digunakan untuk menguji aktivitas antiinflamasi

suatu senyawa antara lain mengukur eritema dan udem pada telinga hewan

pengerat, uji edema pada kaki hewan pengerat, uji induksi artritis pada hewan

pengerat (Evans and Williamson, 1996).

Telah dilakukan pengujian efek antiinflamasi dengan mengukur diameter

edema pada kaki tikus yang diinduksi formalin 50µL 2,5%v/v setiap satu jam

selama lima jam. Pengukuran diameter edema tersebut dilakukan menggunakan

vernier caliper (Tanko et al., 2008).

J. Landasan Teori

Pada dasarnya, inflamasi merupakan respon secara patofisiologi pada

jaringan mamalia akibat terkena infeksi organisme, substansi kimia, luka fisik

sehingga timbul bengkak yang diikuti akumulasi lokal cairan plasma dan sel darah

(Sobota et al., 2000). Formalin 0,5% sebanyak 0,025ml dilaporkan memiliki

aktivitas inflamasi pada kaki mencit (Vogel, 2002), yang terbagi dalam dua fase,

yaitu fase awal (0-5 menit) merupakan fase nosiseptif sedangkan fase kedua (20-

20

30 menit) merupakan fase inflamasi (Lu et al., 2009). Pada fase inflamasi,

formalin memicu terjadinya pelepasan mediator inflamasi berupa serotonin,

prostaglandin, histamin, dan bradikinin (Tanko et al., 2008). Respon perlindungan

terhadap adanya kerusakan jaringan tersebut terkadang terlalu berlebihan dan

dapat berbahaya sehingga perlu penanganan secara farmakologis (Mosaddek and

Rashid, 2008).

Eugenol sebagai komponen utama dari minyak cengkeh telah terbukti

memiliki aktivitas antiinflamasi dengan cara menghambat kemotaksis leukosit

yang dimiliki oleh setiap senyawa fenolik (Azuma et al., 1986) dan menekan

ekspresi COX-2 (Magalhaes et al., 2010). Eugenol memiliki banyak derivat yang

dapat disintesis menjadi senyawa tunggal dengan aktivitas antiinflamasi. Eugenol

yang mengalami benzoilasi akan menghasilkan derivat senyawa berupa benzoil

eugenol. Benzoil eugenol dihasilkan melalui penambahan gugus benzoat sehingga

menghasilkan struktur yang lebih besar sehingga kecenderungan untuk

menduduki sisi aktif enzim sikloksigenase-2 yang memiliki struktur yang lebih

besar lebih besar dibandingkan senyawa induknya, eugenol.

Menurut Dannhardt et al. (2000), senyawa yang bersifat lipofil dan asam

dapat menghambat ekspresi enzim siklooksigenase. Salah satu golongan senyawa

yang dilaporkan memiliki keselektifan terhadap enzim siklooksigenase-2 adalah

senyawa dengan turunan karbosiklis dan heterosiklis yang terikat visinal dengan

moieties aril. Penelitian terdahulu yang dilakukan oleh Dewhirst (1980)

melaporkan bahwa suatu senyawa yang memiliki dua cincin aromatis yang

21

dihubungkan oleh sebuah rantai pendek dapat menghambat biosintesis

prostaglandin oleh enzim COX-2.

Benzoil eugenol merupakan senyawa yang memiliki dua cincin aromatis

sehingga membuat senyawa tersebut bersifat lebih lipofil dibandingkan dengan

eugenol yang hanya memiliki satu cincin aromatis. Selain itu, benzoil eugenol

juga merupakan golongan senyawa karboksiklis dan heterosiklis yang terikat

visinal dengan moieties aril. Dua cincin aromatis yang dimiliki oleh benzoil

eugenol ini dihubungkan oleh rantai pendek karboksil. Dari uraian tersebut maka

dapat diduga bahwa benzoil eugenol memiliki potensi sebagai antiinflamasi.

K. Hipotesis

1. Pemberian benzoil eugenol secara topikal memiliki efek antiinflamasi terhadap

edema kaki mencit yang diinduksi formalin 0,5%.

2. Benzoil eugenol memiliki persentase penghambatan inflamasi secara topikal

terhadap edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% pada mencit jantan galur

Swiss.

3. Benzoil eugenol memiliki persentase daya antiinflamasi secara topikal terhadap

edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% pada mencit jantan galur Swiss.

4. Benzoil eugenol memiliki konsentrasi efektif sebagai agen antiinflamasi

topikal terhadap edema kaki yang diinduksi formalin 0,5% pada mencit jantan

galur Swiss.

22

BAB III

METODE PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian

Penelitian yang berjudul “Efek Antiinflamasi Benzoil Eugenol secara

Topikal terhadap Edema Kaki yang Diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit Jantan

Galur Swiss” merupakan jenis penelitian eksperimental murni dengan rancangan

acak lengkap pola searah.

B. Variabel Penelitian

Dalam penelitian yang berjudul “Efek Antiinflamasi Benzoil Eugenol

secara Topikal terhadap Edema Kaki yang Diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit

Jantan Galur Swiss” terdapat dua variabel, yaitu:

1. Variabel utama

Variabel utama dalam penelitian ini meliputi:

a. Variabel bebas : konsentrasi benzoil eugenol (% b

b. Variabel tergantung : tebal edema kaki pada mencit (cm)

/v)

2. Variabel pengacau

a. Variabel pengacau terkendali:

1) Subyek uji : mencit jantan galur Swiss

2) Umur subyek uji : 2-3 bulan

3) Berat badan subyek : 30-40 gram

4) Keadaan subyek : sehat

b. Variabel pengacau tak terkendali : variabilitas individu mencit

23

C. Definisi Operasional

1. Inflamasi merupakan respon kompleks lokal terhadap benda asing, misalnya

bakteri atau pada keadaan tertentu terhadap bahan yang dihasilkan dari dalam

tubuh.

2. Gejala inflamasi ditandai dengan rubor, kalor, dolor, edema, dan fungtio laesa.

Dalam hal ini yang diamati adalah edema (bengkak).

3. Benzoil eugenol adalah senyawa hasil sintesis dari bensil klorida dengan

eugenol. Benzoil eugenol yang digunakan dalam penelitian ini telah melalui uji

pembuktian senyawa dengan prosedur yang telah diverifikasi (Ramdani, 2011).

4. Waktu pemberian senyawa antiinflamasi dilakukan secara topikal setelah 1 jam

dari pemberian agen inflamasi.

5. Pemberian secara topikal dilakukan dengan mengoleskan senyawa ke seluruh

bagian edema kaki mencit dengan merata.

6. Tebal edema merupakan tebal telapak kaki yang diukur menggunakan jangka

sorong merk Mitutoyo.

D. Bahan dan Alat Penelitian

1. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah:

a. Hewan Uji

Hewan uji yang digunakan dalam penelitian ini adalah mencit jantan

galur swiss yang diperoleh dari Laboratorium Penelitian dan Pengujian

Terpadu (LPPT), Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.

24

b. Formalin 0,5% merk Bratachem

Formalin 0,5% merk Bratachem

®

®

c. Eugenol merk Sigma Aldrich

yang digunakan sebagai agen

penginflamasi didapatkan dari Laboratorium Farmakologi dan Toksikologi

Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Eugenol murni merk Sigma Aldrich

®

®

d. Benzoil eugenol

yang digunakan sebagai

kontrol positif didapatkan dari Laboratorium Kimia Organik Universitas

Sanata Dharma, Yogyakarta.

Benzoil eugenol yang digunakan didapatkan dari hasil sintesis

Ramdani (2011) di Laboratorium Kimia Organik Universitas Sanata

Dharma, Yogyakarta. Senyawa ini telah melewati proses pengujian senyawa

melalui elusidasi struktur di Universitas Gadjah Mada dengan prosedur yang

telah diverifikasi.

e. Virgin Coconut Oil (VCO) merk HealthyCo

Virgin Coconut Oil (VCO) merk HealthyCo

®

®

f. Etil asetat merk Bratachem

yang digunakan

sebagai kontrol negatif didapatkan dari Apotek Sanata Dharma, Yogyakarta.

Etil asetat merk Bratachem

®

®

2. Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah:

yang digunakan sebagai kontrol negatif

diperoleh dari Laboratorium Kimia Analisis Universitas Sanata Dharma,

Yogyakarta.

a. Kotak kaca tempat pengamatan tikus

25

b. Stopwatch merk Baby-G

c. Timbangan merk Ohaus

d. Alat-alat gelas

e. Jangka sorong merk Mitutoyo

f. Spuit injeksi subplantar

E. Tata Cara Penelitian

1. Orientasi waktu pengolesan senyawa terhadap edema kaki mencit.

Hewan uji dibagi dua kelompok ( masing-masing kelompok terdiri dari

3 ekor mencit) dimana kelompok I adalah kontrol (tidak diinjeksi formalin) dan

kelompok II diinjeksi formalin secara subplantar. Setiap jam tebal kaki mencit

diukur dan dihitung selisihnya kemudian dianalisis menggunakan paired T-test.

Waktu yang menunjukkan nilai p<0,05 merupakan waktu optimum

pengolesan.

2. Orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif

Hewan uji dibagi menjadi 4 kelompok (masing-masing kelompok

terdiri dari 3 ekor). Kelompok I sebagai kontrol edema (hanya diinjeksi

formalin), kelompok II, III, dan IV masing-masing diinjeksi formalin 0,5%

kemudian diolesi dengan eugenol 100% v/v; 50% v/v; 25% v

/v. Hasil selisih

edema diolah menjadi nilai AUC total yang kemudian dianalisis menggunakan

One-Way ANOVA. Kelompok yang memiliki nilai p<0,05 akan digunakan

sebagai kontrol positif.

26

3. Orientasi pelarut benzoil eugenol

Mengambil 10 mg benzoil eugenol dan meneteskan tetes demi tetes

pelarut non polar menggunakan pipet tetes hingga kristal benzoil eugenol larut

homogen. Mengkonversi jumlah tetesan ke dalam satuan mililiter.

4. Penentuan peringkat konsentrasi benzoil eugenol

Berdasarkan hasil orientasi pelarut benzoil eugenol didapatkan

perbandingan antara benzoil eugenol dan pelarut non polar yang sesuai.

Sebanyak 10 mg benzoil eugenol larut homogen dalam 0,04 ml etil asetat

sehingga didapatkan perbandingan 1:4. Dari perbandingan tersebut didapatkan

konsentrasi tertinggi yang dapat dibuat, yaitu sebesar 25% b/v (peringkat

konsentrasi III). Kemudian konsentrasi tertinggi tersebut dibagi dua menjadi

12,5% b/v (peringkat konsentrasi II) dan dibagi empat sebesar 6,25% b

5. Pengelompokan hewan uji

/v

(peringkat konsentrasi I).

Tiga puluh lima ekor mencit diukur ketebalan kaki menggunakan

jangka sorong. Kemudian diinjeksikan formalin 0,5% secara subplantar pada

kaki kiri mencit. Dari perlakuan tersebut hewan uji dibagi menjadi tujuh

kelompok besar yaitu kelompok kontrol negatif formalin, kelompok kontrol

negatif etil asetat, kelompok kontrol negatif Virgin Coconut Oil (VCO),

kelompok kontrol positif, kelompok benzoil eugenol I, kelompok benzoil

eugenol II, dan kelompok benzoil eugenol III. Setelah 1 jam dilakukan

pengukuran ketebalan kaki mencit setiap kelompok. Kemudian segera setelah

diukur, setiap kelompok diolesi senyawa yang telah ditentukan kecuali

27

kelompok kontrol negatif formalin. Pada kelompok kontrol negatif etil asetat

diolesi etil asetat sedangkan kelompok kontrol negatif VCO diolesi VCO yang

dilakukan pada daerah edema. Pada kelompok kontrol positif diolesi eugenol

konsentrasi 50% v/v. Pada kelompok benzoil eugenol I diberikan benzoil

eugenol 6,25% b/v, pada kelompok benzoil eugenol II diberikan benzoil

eugenol konsentrasi 12,5% b/v, sedangkan pada kelompok benzoil eugenol III

diberikan benzoil eugenol konsentrasi 25% b/v.

Gambar 10. Skema jalannya penelitian

Keterangan:

Kel. I : Kelompok Kontrol Negatif Formalin 0,5% Kel II : Kelompok Kontrol Negatif Etil Asetat Kel. III : Kelompok Kontrol Negatif VCO Kel. IV : Kelompok Positif Eugenol 50% vKel. V : Kelompok Benzoil Eugenol 6,25%

/v b

Kel VI : Kelompok Benzoil Eugenol 12,5% /v

b

Kel VII : Kelompok Benzoil Eugenol 25% /v

b/v

28

6. Pengamatan

Pengamatan dilakukan dengan cara mengukur ketebalan edema kaki

kiri mencit dengan menggunakan jangka sorong setiap jam selama enam jam.

F. Tata Cara Analisis Hasil

1. Analisis hasil dilakukan dengan mengukur ketebalan edema kaki kiri mencit

menggunakan jangka sorong.

2. Nilai selisih edema tiap jam diukur dan dihitung nilai AUC total masing-

masing perlakuan dengan rumus

Keterangan: AUC0-6 = Area di bawah kurva dari jam ke-0 sampai ke 6 (cm2

yn-1 = Luas area pigmentase pada jam ke-(n-1) (cm.jam)

2

yn = Luas area pigmentase pada jam ke-n (cm)

2

xn-1 = jam ke- (n-1) (jam) )

xn = jam ke-n (jam) (Ikawati, Supardjan, dan, Asmara, 2007)

3. Menghitung persentase penghambatan inflamasi dengan rumus

Penghambatan inflamasi (%) =

Keterangan: (AUC 0-x)0 = rata-rata nilai AUC total kontrol negatif (cm.jam) (AUC 0-x)n = nilai AUC total pada kelompok perlakuan replikasi ke- (cm.jam)

(Ikawati, Supardjan, dan, Asmara, 2007)

29

4. Menghitung persentase daya antiinflamasi senyawa uji dengan rumus:

Daya antiinflamasi (%) =

Keterangan: (AUC0-x)y = rata-rata nilai AUC total kontrol positif (cm2

(AUC0-x)n = nilai AUC total pada kelompok perlakuan replikasi ke- (cm.jam)

2

.jam)

5. Nilai AUC total masing-masing perlakuan dianalisis menggunakan uji

Kolmorogorof-Smirnov, dilanjutkan analisis ANOVA satu arah taraf

kepercayaan 95% dan uji Scheffe.

6. Jika terdapat nilai p< 0,05 yang menandakan adanya perbedaan yang bermakna

dilakukan analisis lanjutan menggunakan metode Post Hoc.

30

BAB IV

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penelitian yang berjudul Efek Antiinflamasi Benzoil Eugenol secara

Topikal terhadap Edema Kaki yang Diinduksi Formalin 0,5% pada Mencit Jantan

Galur Swiss bertujuan untuk mengetahui apakah senyawa benzoil eugenol

memiliki efek antiinflamasi secara topikal terhadap edema kaki yang diindukasi

oleh formalin 0,5%. Penelitian ini merupakan bagian dari suatu rangkaian

penelitian besar yang bertujuan untuk mengetahui apakah dengan penambahan

gugus benzoil dapat memberikan efek antiinflamasi. Benzoil eugenol yang

digunakan dalam penelitian ini telah dibuktikan melalui elusidasi struktur oleh

salah satu peneliti sintesis sehingga dapat dijamin bahwa senyawa yang digunakan

merupakan benzoil eugenol (lampiran 1). Dalam penelitian ini digunakan hewan

uji mencit galur Swiss dengan bobot 30-40 gram (lampiran 2).

A. Hasil Orientasi Rentang Waktu Pengolesan Senyawa pada Edema Kaki

Mencit, Konsentrasi Kontrol Positif, dan Pelarut Benzoil Eugenol

1. Hasil orientasi rentang waktu pengolesan senyawa pada edema kaki mencit

yang diinduksi formalin 0,5%.

Orientasi rentang waktu pengolesan senyawa dilakukan untuk

mengetahui waktu yang paling tepat untuk mengoleskan senyawa uji pada edema

kaki mencit. Waktu yang dipilih sebagai waktu yang paling tepat sebagai waktu

pengolesan adalah waktu yang menunjukkan edema yang paling besar. Alasan

dilakukan pengolesan pada waktu yang menunjukkan maksimum edema adalah

31

untuk mengetahui dengan jelas efek penurunan edema kaki mencit dari senyawa

uji yang dimiliki. Jika senyawa uji dioleskan segera setelah injeksi formalin 0,5%

dimungkinkan adanya peningkatan edema meskipun senyawa tersebut berefek

sebagai antiinflamasi karena pada rentang waktu tersebut memang terjadi

peningkatan edema.

Dalam penelitian ini digunakan formalin yang merupakan senyawa

penginflamasi yang bersifat bifasik dan cocok digunakan dalam pengujian efek

antiinflamasi suatu senyawa (Tanko et al., 2008). Selain mudah didapatkan, gejala

inflamasi yang terjadi lebih nyata dibandingkan jika menggunakan karagenin

(Joseph et al., 2005).

Metode pengukuran yang digunakan untuk mengetahui ada tidaknya

aktivitas antiinflamasi pada penelitian ini adalah metode pengukuran

menggunakan jangka sorong. Jangka sorong merk Mitutoyo yang digunakan

dalam penelitian ini telah dikalibrasi dan memiliki presisi yang tinggi. Kalibrasi

dilakukan untuk menjamin keakuratan dari alat ukur yang digunakan (lampiran

3a). Sedangkan uji presisi dilakukan untuk menjamin bahwa alat ukur yang

digunakan memiliki nilai keterulangan yang tinggi. Menurut Mulja dan Hanwar

(2003), alat ukur dikatakan memiliki presisi yang baik jika nilai Coefficient of

Varians (CV) < 2%. Sebelum dilakukan penelitian, jangka sorong yang digunakan

diuji dengan mengukur tebal edema kaki mencit secara berulang sehingga

dihasilkan rata-rata nilai CV berturut-turut sebesar 0,525% (lampiran 3b). Dengan

demikian, alat ukur jangka sorong merk Mitutoyo yang digunakan dalam

32

penelitian ini dapat dipertanggungjawabkan validitasnya. Skema kerja yang

dilakukan dalam orientasi ini dapat dilihat pada lampiran 4.

Hasil orientasi yang terdapat pada tabel II menunjukkan bahwa tidak

terjadi peningkatan edema secara bermakna pada kaki mencit yang diinduksi

formalin 0,5% selama 5 jam. Maka dilanjutkan orientasi dengan mengukur tebal

edema kaki mencit setiap menit selama 60 menit. Hasil orientasi tersebut

menunjukkan bahwa pada menit ke-50 sampai menit ke-60 memiliki nilai p<0,05

yang ditunjukkan pada tabel III dan kelengkapan data dapat dilihat pada lampiran

5a dan 5b.

Tabel II. Hasil analisis paired t-test orientasi rentang waktu pengolesan setiap jam selama 5 jam pengamatan

Kel. Tebal edema

(cm) X+SE

I II III IV V

I 0,097+ 0,013 - tb - - - II 0,110+ 0,017 tb - tb - - III 0,123+ 0,020 tb tb IV 0,127+ 0,012 - - tb - tb V 0,107+ 0,012 - - - tb -

Keterangan: Kelompok I : Kelompok mencit yang diukur 1 jam setelah diinjeksi formalin

0,5% Kelompok II : Kelompok mencit yang diukur pada jam kedua setelah diinjeksi

formalin 0,5% Kelompok III : Kelompok mencit yang diukur pada jam ketiga setelah diinjeksi

formalin 0,5% Kelompok IV : Kelompok mencit yang diukur pada jam keempat setelah diinjeksi

formalin 0,5% Kelompok V : Kelompok mencit yang diukur pada jam kelima setelah diinjeksi

formalin 0,5% tb : Berbeda tidak bermakna (p>0,05) b : Berbeda bermakna (p<0,05) X : Rata-rata tebal edema SE : Standar Error

33

Tabel III. Hasil analisis paired t-test orientasi rentang waktu pengolesan setiap 10 menit selama 1 jam pengamatan

Kel. Tebal edema

(cm) X+SE

I II III IV V VI

I 0,128+ 0,014 - tb - - - - II 0,128+ 0,014 tb - tb - - - III 0,143+ 0,013 - tb - b - - IV 0,160+ 0,015 - - b - tb - V 0,165+ 0,014 - - - tb - b VI 0,180+ 0,013 - - - - b -

Keterangan: Kelompok I : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-10 setelah diinjeksi

formalin 0,5% Kelompok II : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-20 setelah diinjeksi

formalin 0,5% Kelompok III : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-30 setelah diinjeksi

formalin 0,5% Kelompok IV : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-40 setelah diinjeksi

formalin 0,5% Kelompok V : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-50 setelah diinjeksi

formalin 0,5% Kelompok VI : Kelompok mencit yang diukur pada menit ke-60 setelah diinjeksi

formalin 0,5% tb : Berbeda tidak bermakna (p>0,05) b : Berbeda bermakna (p<0,05) X : Rata-rata tebal edema SE : Standar Error

Hasil orientasi tersebut sesuai dengan Canon, Leurs, dan Hough (2007)

yang mengatakan bahwa aktivitas peningkatan edema secara signifikan terjadi

pada menit ke-30 sampai menit ke-60 setelah injeksi formalin secara subplantar.

Namun, peningkatan akan terus terjadi sampai menit ke-240 secara tidak

signifikan.

34

2. Hasil orientasi konsentrasi kontrol positif eugenol secara topikal

Dalam penelitian ini digunakan eugenol sebagai kontrol positif karena

senyawa uji yaitu benzoil eugenol merupakan senyawa turunan dari eugenol itu

sendiri. Eugenol dilaporkan memiliki efek antiinflamasi yang berkaitan dengan

penghambatan kerja enzim siklooksigenase-2 (Sadeghian et al., 2008). Namun

belum terdapat data yang menyebutkan konsentrasi eugenol sebagai antiinflamasi

yang diberikan secara topikal. Dengan demikian, orientasi konsentrasi eugenol ini

perlu dilakukan untuk mengetahui konsentrasi eugenol yang dapat digunakan

sebagai antiinflamasi. Tiga peringkat konsentrasi eugenol yang diuji adalah

eugenol murni 100% v/v; eugenol 50% v/v; dan eugenol 25% v

Eugenol larut dalam pelarut non polar, yakni larutan alkohol

(Gildemeister, 2009). Salah satu larutan alkohol yang diuji sebagi pelarut eugenol

adalah etanol 96%. Namun dalam penelitian ini tidak digunakan senyawa ini

karena sifat etanol yang mudah menguap sehingga memungkinkan terjadinya

peningkatan konsentrasi eugenol akibat penguapan tersebut menjadi 100%.

Eugenol murni yang dihasilkan akibat penguapan pelarut etanol 96% tersebut

dapat menunjukkan adanya iritasi pada kaki mencit. Dengan demikian etanol 96%

tidak dipilih sebagai pelarut eugenol. Maka dari itu dipilih pelarut yang paling

sesuai untuk menghantarkan eugenol agar dapat berefek sebagai antiinflamasi.

Pelarut yang dipilih untuk melarutkan eugenol dalam pembuatan tiga peringkat

konsentrasi tersebut adalah VCO (Virgin Coconut Oil) merk HealthyCo

/v. Penentuan ketiga

peringkat konsentrasi tersebut dapat dilihat pada lampiran 6a.

® karena

sifat dari kedua senyawa tersebut mirip, yaitu merupakan senyawa minyak

35

(lipofil). Hasil orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif dapat dilihat

pada tabel IV dan gambar 11. Data secara lengkap pada lampiran 6b.

Tabel IV. Hasil analisis AUC total ketiga konsentrasi eugenol menggunakan One-Way ANOVA dengan tingkat kepercayaan 95%

Kelompok Tebal edema

(cm) X+SE

Terhadap Kontrol negatif

formalin

Terhadap Eugenol

25%

Terhadap Eugenol

50%

Terhadap Eugenol 100%

Kontrol negatif formalin

0,983+0,0169 - tb b tb

Eugenol 25% 0,733+0,0721 tb - tb tb Eugenol 50% 0,610+0,0328 b tb - tb Eugenol 100% 0,835+0,0929 tb tb tb - Keterangan: tb : Berbeda tidak bermakna (p>0,05) b : Berbeda bermakna (p<0,05) X : Rata-rata AUC total SE : Standar Error

Gambar 11. Diagram batang orientasi konsentrasi eugenol sebagai kontrol positif

36

Dari tabel IV dapat dilihat adanya perbedaan baik bermakna atau tidak

bermakna pada setiap kelompok perlakuan terhadap kontrol. Pada kelompok

kontrol positif eugenol konsentrasi 100% v/v terlihat bahwa penurunan edema

yang dihasilkan berbeda tidak bermakna terhadap kontrol. Demikian pula pada

kelompok kontrol positif eugenol konsentrasi 25% v/v. Dari ketiga peringkat

konsentrasi yang diuji dalam penelitian ini, hanya eugenol dengan konsentrasi

50% v/v yang menunjukkan adanya penurunan edema kaki mencit yang diinduksi

formalin 0,5% secara bermakna. Hasil yang demikian kemungkinan terjadi akibat

sifat eugenol murni yang dapat mengiritasi kulit. Aktvitas antiinflamasi yang

dimiliki oleh eugenol konsentrasi 100% v

Sedangkan pada kelompok kontrol positif eugenol 25%

/v kemungkinan lebih kecil dibandingkan

sifat iritan yang dimiliki oleh senyawa tersebut.

v/v menunjukkan

kemampuan aktivitas antiinflamasi yang rendah. Penurunan edema kaki mencit

yang dihasilkan oleh eugenol 25% v

Berbeda dengan kedua kelompok kontrol positif eugenol tersebut,

kelompok kontrol positif eugenol konsentrasi 50%

/v berbeda secara tidak bermakna terhadap

kontrol. Ini dimungkinkan karena eugenol yang masuk ke dalam kulit belum

mencukupi untuk menghambat ekspresi enzim siklooksigenase-2 sehingga

mediator inflamasi seperti prostaglandin tidak dapat dihambat secara optimum.

v/v terbukti secara statistik

dapat menurunkan edema kaki mencit secara berbeda bermakna. Jumlah eugenol

yang dioleskan secara topikal ke bagian edema kaki mencit mencukupi untuk

menghambat ekspresi enzim siklooksigenase-2 sehingga pelepasan mediator

inflamasi berupa prostaglandin dapat dihambat.

37

Jadi, dalam orientasi konsentrasi kontrol positif eugenol didapatkan

bahwa eugenol dengan konsentrasi 50% v/v dapat menurunkan edema kaki mencit

yang diinduksi formalin 0,5% sebesar 0,610 + 0,0328 cm dengan nilai p<0,05.

Dengan demikian untuk penelitian selanjutnya, eugenol 50% v

3. Hasil orientasi pelarut benzoil eugenol dan peringkat konsentrasinya.

/v digunakan

sebagai kontrol positif.

Tujuan dari orientasi pelarut benzoil eugenol adalah untuk mendapatkan

pelarut yang cocok dan aplikatif untuk melarutkan benzoil eugenol sehingga dapat

diaplikasikan secara topikal ke bagian edema kaki mencit yang diinduksi oleh

formalin 0,5%. Uji kelarutan ini dilakukan dengan menimbang 10 mg kristal

benzoil eugenol dan meneteskan tetes demi tetes pelarut non polar hingga kristal

tersebut larut homogen. Jumlah tetesan yang diperlukan untuk melarutkan kristal

benzoil eugenol secara homogen kemudian dikonversi menjadi satuan mililiter

sehingga didapatkan perbandingan antara benzoil eugenol. Satuan yang didapat

dari uji kelarutan tersebut ditulis dalam % b

Benzoil eugenol yang digunakan dalam penelitian ini didapatkan dari

hasil sintesis antara benzoil klorida dan eugenol dalam suhu ruangan. Benzoil

eugenol yang dihasilkan berbentuk kristal padat yang berbentuk jarum jika

diamati secara mikroskopis dan berwarna putih. Benzoil eugenol merupakan

senyawa turunan eugenol yang tidak larut dalam air tetapi larut dalam pelarut non

polar. Beberapa pelarut non polar yang diuji dalam penelitian ini adalah etanol

96%, kloroform, dan etil asetat yang umum digunakan. Hasil orientasi pelarut

tersebut dapat dilihat pada tabel V.

/v.

38

Tabel V. Hasil orientasi pelarut dan konsentrasi tertinggi yang didapatkan dari masing-masing pelarut non polar yang diuji

Jenis pelarut Perbandingan

benzoil eugenol dengan pelarut

Konsentrasi tertinggi yang

didapat Etanol 96% 1:50 2% b/v Kloroform 1:4 25% b/v Etil Asetat 1:4 25% b/v

Pelarut non polar yang pertama diuji adalah etanol 96%. Etanol 96%

dapat mengiritasi kulit dengan cara menarik air yang ada di kulit sehingga

membuat kulit kering. Pemberian etanol 96% secara berulang dapat menyebabkan

kulit menjadi kemerahan, gatal, inflamasi, kering dan kemungkinan terjadi alergi.

Etanol 96% memiliki titik didih 78,20C dan memiliki titik leleh -1120C sehingga

mudah menguap (MSDS, 2002). Dari tabel V menunjukkan bahwa dengan pelarut

etanol 96%, konsentrasi tertinggi yang didapatkan hanya sebesar 2% b

Pelarut non polar yang kedua adalah kloroform. Pelarut ini sering

diaplikasikan untuk keperluan pembiusan. Kloroform memiliki titik didih dan titik

leleh sebesar 61

/v (lampiran

7a). Sifat dari senyawa ini yang mudah menguap dan konsentrasi yang terlalu

kecil ini membuat etanol 96% tidak dipilih sebagai pelarut dalam penelitian ini.

Maka dari alasan tersebut etanol 96% tidak dipilih sebagai pelarut dari benzoil

eugenol.

0C dan -630C. Penghirupan kloroform yang berlebihan dapat

menyebabkan iritasi saluran pernafasan. Selain itu, kontak mata dan kulit dengan

kloroform dapat menyebabkan iritasi (MSDS, 2010). Hasil uji kelarutan yang

dilakukan menunjukkan bahwa 10 mg benzoil eugenol larut homogen dalam 0,04

ml kloroform sehingga konsentrasi tertinggi yang dapat dibuat sebesar 25% b/v

39

(lampiran 7b). Walaupun konsentrasi yang dapat dibuat dari pelarut kloroform ini

cukup besar namun berdasarkan sifat dari kloroform tersebut pelarut non polar ini

tidak dipilih menjadi pelarut dari benzoil eugenol dalam penelitian ini.

Pelarut non polar terakhir yang diuji adalah etil asetat. Etil asetat

memiliki titik didih 770C dan titik leleh 830

Setelah mendapatkan pelarut yang sesuai, yaitu etil asetat maka

dilakukan perhitungan peringkat konsentrasi. Konsentrasi tertinggi yang dapat

dibuat adalah 25%

C. Pelarut non polar ini bersifat kurang

mengiritasi jika dipaparkan di kulit hanya satu kali. Iritasi akan terjadi jika

pemberian etil asetat dilakukan secara berulang dan berkala (MSDS, 2008).

Tingkat kelarutan benzoil eugenol dalam etil asetat sebesar 1:4 sehingga

konsentrasi tertinggi yang dapat dibuat sebesar 25% (lampiran 7c). Konsentrasi

yang cukup tinggi dan sifat etil asetat yang kurang mengiritasi merupakan alasan

penggunaan etil asetat sebagai pelarut benzoil eugenol.

b/v benzoil eugenol dalam etil asetat. Ini didapatkan dari

perbandingan yang didapat dari uji kelarutan yang telah dilakukan, yaitu 10 mg

benzoil eugenol larut homogen dalam 0,04 ml etil asetat. Dari konsentrasi

tertinggi tersebut dapat dibuat tingkatan konsentrasi benzoil eugenol, yaitu 6,25%

b/v; 12,5% b/v; dan 25% b

/v dimana selisih peringkat konsentrasi tersebut yaitu 2

kali (lampiran 8).

40

B. Hasil Efek Antiinflamasi Benzoil Eugenol secara Topikal terhadap Edema

Kaki Mencit yang Diinduksi Formalin 0,5%

Penelitian uji efek antiinflamasi benzoil eugenol secara topikal terhadap

edema kaki mencit galur swiss yang diinduksi formalin 0,5% ini bertujuan untuk

mengetahui ada tidaknya efek antiinflamasi benzoil eugenol sebagai turunan

eugenol yang diaplikasikan secara topikal. Aktivitas antiinflamasi dari senyawa

ini dapat dilihat dari ada tidaknya kemampuan benzoil eugenol untuk menurunkan

edema yang terjadi akibat induksi formalin 0,5% secara subplantar.

Pengukuran tebal edema yang digunakan dalam penelitian ini

menggunakan metode jangka sorong. Jangka sorong yang digunakan merupakan

jangka sorong yang berbentuk jarum dengan merk Mitutoyo. Keuntungan dari

pemakaian jangka sorong ini adalah tidak perlu mengorbankan hewan uji yang

digunakan, sederhana dalam penggunaan, dan mengurangi kesalahan pengukuran

dibandingkan dengan metode potong kaki. Jangka sorong merk Mitutoyo ini

memiliki rentang pengukuran 0-150 mm. Penyimpangan alat ini maksimal sebesar

+ 2µm sedangkan alat ini memiliki penyimpangan pengukuran + 1µm. Maka

dapat dikatakan alat yang digunakan dapat dipertanggungjawabkan. Pengukuran

ini dilakukan setiap jam selama 6 jam. Hasil pengukuran berupa tebal edema kaki

mencit dapat dilihat pada gambar 12 dan kelengkapan data dapat dilihat pada

lampiran 9:

41

Gambar 12. Grafik rata-rata tebal edema kaki mencit yang diinduksi formalin

0,5% selama 6 jam pengamatan

Pada gambar 12 menunjukkan bahwa dengan pengolesan benzoil eugenol

25% b/v; 12,5% b/v; dan eugenol 50% v

/v dapat menurunkan tebal edema kaki

dengan grafik yang lebih sempit dibandingkan grafik pada kontrol negatif

formalin, etil asetat, maupun VCO. Selisih tebal edema masing-masing hewan uji

dihitung nilai AUC total (lampiran 10a) kemudian dianalisis menggunakan

ANOVA taraf kepercayaan 95% dan dilanjutkan dengan uji Scheffe (lampiran

10b). Hasil tersebut dapat dilihat pada diagram batang (gambar 13) dan tabel VI.

42

Tabel VI. Rata-rata nilai AUC total pada mencit yang diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan

Kel Rata-rataAUC

total (cm.jam) Hasil uji Scheffe Nilai AUC total terhadap Kelompok

X ± SE I II III IV V VI VII I 0,957+0,050 - tb tb b b b tb II 0,907+0,067 tb - tb b b b tb III 0,973+0,030 tb tb - b b b tb IV 0,620+0,031 b b b - tb tb tb V 0,584+0,041 b b b tb - tb tb VI 0,640+0,040 b b b tb tb - tb VII 0,863+0,047 tb tb tb tb b tb - Keterangan Kelompok I : Kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5% Kelompok II : Kelompok mencit yang diolesi etil asetat setelah 1 jam

diinjeksi formalin 0,5% Kelompok III : Kelompok mencit yang diolesi VCO (Virgin Coconut Oil)

setelah 1 jam diinjeksi formalin 0,5% Kelompok IV : Kelompok mencit yang diolesi eugenol 50% v

Kelompok V : Kelompok mencit yang diolesi benzoil eugenol 25%

/v setelah 1 jam diinjeksi formalin 0,5%

b

Kelompok VI : Kelompok mencit yang diolesi benzoil eugenol 12,5%

/v setelah 1 jam diinjeksi formalin 0,5%

b

Kelompok VII : Kelompok mencit yang diolesi benzoil eugenol 6,25%

/v setelah 1 jam diinjeksi formalin 0,5%

b

tb : Berbeda tidak bermakna (p>0,05)

/v setelah 1 jam diinjeksi formalin 0,5%

b : Berbeda bermakna (p<0,05) X : Rata-rata AUC total SE : Standar Error

43

Gambar 13. Diagram batang nilai AUC total masing-masing perlakuan

Dari tabel VI menunjukkan bahwa pada kelompok kontrol positif

eugenol 50% v/v, kelompok benzoil eugenol konsentrasi 25% b/v, dan kelompok

benzoil eugenol konsentrasi 12,5% b/v menunjukkan adanya perbedaan secara

bermakna terhadap kontrol negatif formalin, kontrol negatif etil asetat, dan kontrol

negatif VCO dengan nilai p<0,05. Dapat dikatakan bahwa baik eugenol 50% v/v

dan benzoil eugenol konsentrasi 25% b/v dan konsentrasi 12,5% b/v dapat

menurunkan edema kaki mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5% secara

signifikan. Namun, kemampuan untuk menurunkan edema kaki mencit yang

diinduksi formalin 0,5% yang dimiliki oleh kedua konsentrasi benzoil eugenol ini

secara statistik berbeda tidak bermakna dengan kontrol positif yakni eugenol 50%

44

v/v. Secara umum dapat dikatakan bahwa aktivitas antiinflamasi benzoil eugenol

konsentrasi 25% b/v; 12,5% b/v; dan eugenol 50% v

Dalam penelitian ini digunakan tiga kelompok kontrol negatif, yaitu

kontrol negatif formalin, kontrol negatif etil asetat, dan kontrol negatif VCO.

Kontrol negatif formalin diperlukan untuk membuktikan apakah formalin dapat

menimbulkan adanya edema pada kaki mencit. Kontrol negatif etil asetat

digunakan sebagai faktor koreksi dari kelompok perlakuan benzoil eugenol yang

menggunakan pelarut etil asetat dalam proses aplikasi ke hewan uji. Sedangkan

kelompok kontrol negatif VCO digunakan untuk faktor koreksi pada kelompok

kontrol positif eugenol 50%

/v adalah sebanding. Selain itu,

dari data yang ditunjukkan pada tabel VI dapat dikatakan bahwa dengan

konsentrasi yang lebih rendah, benzoil eugenol dapat menurunkan edema kaki

mencit yang diinduksi formalin 0,5% dibandingkan dengan eugenol. Maka

pemberian benzoil eugenol dikatakan lebih efektif dibandingkan eugenol dilihat

dari segi konsentrasi yang dibutuhkan.

v/v. Dari data yang terdapat di tabel VI dapat dilihat

bahwa ketiga kelompok kontrol negatif tersebut memiliki nilai p>0,05 yang

berarti bahwa ketiga kelompok tersebut berbeda tidak bermakna secara statistik.

Maka dapat dikatakan bahwa etil asetat dan VCO tidak mempengaruhi

peningkatan maupun penurunan edema kaki mencit yang diinduksi oleh formalin

0,5%. Jadi, hasil penurunan edema kaki yang didapat dari setiap kelompok kontrol

positif maupun kelompok perlakuan dengan benzoil eugenol merupakan hasil

murni dari pengaruh senyawa tersebut.

45

Untuk mengetahui besarnya aktivitas antiinflamasi dari masing-masing

senyawa maka perlu pengolahan data lebih lanjut. Nilai AUC total yang sudah

didapatkan diolah menjadi persentase penghambatan inflamasi dengan

perhitungan yang dapat dilihat di lampiran 11. Secara singkat, besarnya aktivitas

antiinflamasi dari eugenol 50% dan ketiga peringkat konsentrasi eugenol dapat

dilihat pada gambar 14 dan tabel VII dan secara detail dapat dilihat pada lampiran

12.

Gambar 14. Diagram batang rata-rata persentase penghambatan inflamasi (edema

kaki mencit) yang diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan

46

Tabel VII. Nilai persentase penghambatan inflamasi (tebal edema kaki mencit) yang diinduksi formalin 0,5% selama 6 jam pengamatan

Kelompok Rata-rata

persentase penghambatan

edema kaki

Hasil uji Scheffe rata-rata persentase penghambatan edema kaki terhadap

kelompok

(X ± SE) I II III IV I 36,280+3,201 - tb tb b II 35,612+4,531 tb - tb b III 29,438+4,420 tb tb - b IV 4,851+5,214 b b b -

Keterangan: Kelompok I : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5% kemudian

setelah 1 jam diolesi eugenol 50% vKelompok II : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5% kemudian

setelah 1 jam diolesi benzoil eugenol 25%

/v

b

Kelompok III : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5% kemudian setelah 1 jam diolesi etil asetat benzoil eugenol 12,5%

/v

b

Kelompok IV : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5% kemudian setelah 1 jam diolesi etil asetat benzoil eugenol 6,25%

/v

b

tb : Berbeda tidak bermakna (p>0,05) /v

b : Berbeda bermakna (p<0,05) X : Rata-rata persentase penghambatan edema kaki SE : Standar Error

Dari gambar 14 dan tabel VII menunjukkan bahwa persentase

penghambatan inflamasi yang dimiliki oleh eugenol 50% v/v; benzoil eugenol 25%

b/v; benzoil eugenol 12,5% b/v; dan benzoil eugenol 6,25% b/v secara berturut-turut

adalah 36,280%; 35,612%; 29,438%; dan 4,851%. Dari data tersebut menguatkan

bahwa tidak ada perbedaan secara bermakna mengenai aktivitas antiinflamasi dari

eugenol 50% v/v; benzoil eugenol 25% b/v; dan benzoil eugenol 12,5% b/v. Namun,

pada kelompok perlakuan yang diberi benzoil eugenol 6,25% b/v menunjukkan

aktivitas antiinflamasi yang rendah sehingga persentase penghambatan inflamasi

yang dihasilkan tidak dapat sebaik eugenol 50% v/v. Dari tabel VII di atas juga

dapat dilihat bahwa penurunan edema kaki mencit pada kelompok perlakuan tidak

47

mencapai nilai 50%. Melalui data tabel ini, dapat dilihat adanya penurunan edema

kaki mencit yang paling besar dimiliki oleh kelompok IV yaitu kelompok kontrol

positif eugenol. Tidak hanya pada kelompok I, pada kelompok II juga memiliki

nilai persentase yang secara statistik berbeda tidak bermakna. Dengan demikian

dengan konsentrasi yang lebih rendah, benzoil eugenol dapat memberikan

persentase penghambatan inflamasi yang setara dengan eugenol dengan

konsentrasi yang lebih tinggi.

Tabel VIII. Nilai persentase daya antiinflamasi benzoil eugenol 25% b/v; benzoil eugenol 12,5% b/v; dan benzoil eugenol 6,25% b

/v

Kelompok Rata-rata persentase daya antiinflamasi benzoil

eugenol

Hasil uji Scheffe rata-rata persentase daya antiinflamasi

benzoil eugenol terhadap kelompok

(X+SE) I II III I 5,806+6,628 - tb b II -3,082+6,482 tb - b III -39,194+7,628 b b -

Keterangan Kelompok I : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5% kemudian

setelah 1 jam diolesi benzoil eugenol 25% bKelompok II : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5% kemudian

setelah 1 jam diolesi etil asetat benzoil eugenol 12,5%

/v

b

Kelompok III : Kelompok mencit yang diinduksi oleh formalin 0,5% kemudian setelah 1 jam diolesi etil asetat benzoil eugenol 6,25%

/v

b

tb : Berbeda tidak bermakna (p>0,05) /v

b : Berbeda bermakna (p<0,05) X : Rata-rata persentase penghambatan edema kaki SE : Standar Error

Berdasarkan tabel VIII dapat diketahui bahwa daya antiinflamasi yang

dimiliki oleh benzoil eugenol 25% b/v; benzoil eugenol 12,5% b/v; dan benzoil

eugenol 6,25% b/v secara berturut-turut adalah 5,806%; -3,082%; -39,194%

(lampiran 13a). Berdasarkan hasil statistik, dapat dilihat bahwa benzoil eugenol

25% b/v dan 12,5% b/v memiliki persentase daya antiinflamasi yang setara. Maka

48

dapat dikatakan bahwa benzoil eugenol 25% memiliki daya antiinflamasi yang

besar dibandingkan eugenol 50% v/v, sedangkan benzoil eugenol 12,5% b/v; dan

benzoil eugenol 6,25% b/v memiliki daya yang lebih kecil dibandingkan eugenol

50% v

Ditinjau secara struktural pada gambar 15, benzoil eugenol memiliki dua

buah cincin aromatis yang menyebabkan senyawa tersebut bersifat lipofil dan

asam karena merupakan derivat dari eugenol. Benzoil eugenol merupakan salah

satu turunan karbosiklis dan heterosiklis yang terikat visinal dengan moieties aril

sehingga dapat digolongkan sebagai senyawa yang selektif terhadap enzim COX-

2. Dua cincin aromatis yang dimiliki oleh benzoil eugenol dihubungkan oleh

rantai pendek, yakni rantai karboksil sehingga dapat menghambat biosintesis

prostaglandin. Dengan demikian benzoil eugenol dapat dikatakan dapat

menghambat biosintesis prostaglandin secara selektif terhadap enzim COX-2.

/v (lampiran 13b).

Gambar 15. Bagian sifat lipofil dan rantai pendek karboksil pada benzoil eugenol

Berdasarkan sifat tersebut, benzoil eugenol diduga dapat menghambat

kerja dari enzim COX-2 secara selektif dengan masuk melalui knob hidrofobik

sehingga akan menempati sisi aktif dari enzim tersebut dan berinteraksi

membentuk ikatan hidrofobik dengan salah satu asam amino valin 523 yang

49

teradapat pada sisi aktif enzim COX-2 (Gambar 16). Dengan demikian, asam

arakidonat yang seharusnya diubah menjadi mediator-mediator kimia pemicu

inflamasi dapat dihambat sehingga perkembangan inflamasi yang mungkin terjadi

akan dihambat.

Gambar 16. Interaksi antara benzoil eugenol dengan asam amino valin

Pemberian senyawa ke bagian edema kaki dilakukan secara topikal

dengan merata. Seperti yang telah dijelaskan oleh Gunani (2009) efek pengobatan

secara topikal bergantung pada kemampuan penetrasi suatu senyawa obat melalui

kulit. Kulit merupakan barier utama yang memiliki banyak lapisan. Kemampuan

penetrasi senyawa melalui kulit bergantung pada ukuran molekul dan lipofilisitas

yang dapat dinilai dari nilai log P senyawa tersebut. Semakin lipofil suatu

senyawa, belum berarti semakin baik kemampuan penetrasinya melalui kulit. Ini

dikarenakan struktur kulit yang memiliki sifat hidrofil dan lipofil. Untuk itu perlu

sifat lipofilisitas yang medium untuk dapat menembus membran kulit. Dari data di

atas menunjukkan bahwa benzoil eugenol mampu berperan sebagai agen

antiinflamasi lokal yang disebabkan oleh formalin 0,5%. Namun, dalam penelitian

50

ini belum dapat dilihat apakah benzoil eugenol dapat menurunkan edema kaki

mencit secara sistemik.

C. Hasil Uji Hubungan Linieritas antara Konsentrasi Benzoil Eugenol terhadap

Daya Antiinflamasi

Tujuan uji ini adalah untuk mengetahui hubungan linieritas antara persen

penghambatan inflamasi dengan peringkat konsentrasi benzoil eugenol. Dengan

grafik linieritas tersebut dapat dihitung nilai EC50 melalui proses ekstrapolasi dari

grafik tersebut. Effective Concentration 50 (EC50) merupakan konsentrasi yang

dibutuhkan untuk menimbulkan efek sebesar 50% dari efek maksimal dari suatu

senyawa. Dengan demikian nilai EC50 antiinflamasi benzoil eugenol berarti

konsentrasi benzoil eugenol yang dibutuhkan untuk menimbulkan efek

antiinflamasi sebesar 50% dari efek maksimal.

Gambar 17. Grafik hubungan linieritas konsentrasi benzoil eugenol 6,25% b/v; 12,5% b/v; 25% b/v terhadap persen penghambatan inflamasi

Pada gambar 17 menunjukkan hubungan antara peringkat konsentrasi

benzoil eugenol terhadap persentase penghambatan inflamasi dengan persamaan

51

y=51,03x-32,66 dengan nilai R2

Dari ketiga peringkat konsentrasi yang diuji, nilai persentase

penghambatan inflamasi oleh benzoil eugenol tidak ada yang menunjukkan

penurunan edema sebesar > 50% maka perlu dilakukan ekstrapolasi untuk

mendapatkan nilai EC50

=0,893. Dari persamaan tersebut didapatkan nilai

r sebesar 0,945. Nilai r ini menunjukkan hubungan antara peringkat konsentrasi

benzoil eugenol dengan persentase penghambatan inflamasi. Namun, nilai r

tersebut lebih kecil dibandingkan r tabel yang sebesar 0,997.

(lampiran 14). Melalui persamaan yang telah didapatkan

maka nilai EC50 yang didapatkan sebesar 41,67% b

/v.

52

BAB V

KESIMPULAN DAN SARAN

A. Kesimpulan

1. Benzoil eugenol konsentrasi 6,25% b/v; 12,5% b/v; dan 25% b

2. Persentase penghambatan inflamasi benzoil eugenol konsentrasi 6,25%

/v memiliki efek

antiinflamasi secara topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh

formalin 0,5% pada mencit jantan galur Swiss

b/v;

12,5% b/v; dan 25% b

3. Persentase daya antiinflamasi benzoil eugenol konsentrasi 6,25%

/v sebagai agen antiinflamasi terhadap edema kaki yang

diinduksi oleh formalin 0,5% pada mencit jantan galur Swiss secara berturut-

turut sebesar 4,851%; 29,438%; dan 35,612%.

b/v; 12,5%

b/v; dan 25% b

4. Konsentrasi efektif (EC50) benzoil eugenol sebagai agen antiinflamasi secara

topikal terhadap edema kaki yang diinduksi oleh formalin 0,5% pada mencit

jantan galur Swiss sebesar 41,67%.

/v sebagai agen antiinflamasi terhadap edema kaki yang

diinduksi oleh formalin 0,5% pada mencit jantan galur Swiss secara berturut-

turut sebesar 5,806 %; -3,082 %; dan -39,194%.

B. Saran

1. Penelitian ini dapat dilanjutkan dengan membuat suatu formulasi yang

mengandung zat aktif benzoil eugenol agar lebih praktis dalam proses

aplikasi penggunaan.

53

2. Menentukkan konsentrasi eugenol secara topikal dengan rentang peringkat

konsentrasi antara 50% v/v sampai dengan 100% v

3. Menguji kelarutan benzoil eugenol dengan jenis pelarut non polar yang lebih

bervariasi agar didapatkan konsentrasi yang lebih tinggi.

/v.

4. Melakukan penelitian lanjutan dengan menambah peringkat konsentrasi

benzoil eugenol.

54

DAFTAR PUSTAKA

Amasino, A., Yuting Deng, Samuel Huang, Iris Lee, Adeyinka Lesi, Yaoli Pu, et al., 1996, COX-1 And COX-2 Enzymes Synthesize Prostaglandins and Are Inhibited by NSAIDS (Nonsteroidal Anti-inflammatory Drugs), Laporan Penelitian, University of Wisconsin-Madison.

Ayoola, G. A., Lawore, Adelowotan, Aibinu, Adenipekun, Coker, et. al., 2008,

Chemical analysis and antimicrobial activity of the essential oil of Syzigium aromaticum (clove), African Journal of Microbiology Research, Vol.(2) pp, 162-166.

Azuma, Ozasa, Ueda and Takagi, 1986, Pharmacological Studies on the Anti-

inflammatory Action of Phenolic Compounds, J Dent Res, 65: 53.

Babb, R. R., 1992, Gastrointestinal Complications of Nonsteroidal Anti-Inlammatory Drugs, West J Med, 157, 444-447.

Banerjee, S., Sur, T. K., Mandal, S., Das, P. C., and Sikdar, S., 2000, Assessment

of The Anti-Inflammatory Effects of Swertia Chirata in Acute and Chronic Experimental Models in Male Albino Rats, Indian Journal of Pharmacology, 32: 21-24.

Canon, K. E., Leurs, R., dan Hough, L.B., 2007, Activation of Peripheral and

Spinal Histamine H3 Receptors Inhibits Formalin-Induced Inflammation and Nociception, Respectively, Pharmacol. Biochem. Behav., 88(1): 122–129.

Dannhardt, G., and Laufer, S., 2000, Structural Approaches to Explain the

Selectivity of COX-2 Inhibitors: Is There a Common Pharmacophore?, Current Medicinal Chemistry, 7, 1101-1112.

Dewhirst, F.E., 1980, Strucutre-Activity Relationships for Inhibitoin of

Prostaglandin Cyclooxygenase by Phenolic Compounds, Vol. 20, No. 2, Department of Pharmacology and Toxicology and Department of Dental Research, New York.

Emran, R. K, 2002, Perkembangan Obat Antiradang Bukan Steroid, 17(4), 75-90. Enig, G. M. 2001, Health and Nutritional Benefits from Coconut Oil: an

Important Functional Food for the 21st Century. Coconuts Today, Special Edition for the 13th Asian Pacific Congress of Cardiology, EDSA Shangrila Hotel, Manila, Philippines.

55

Evans, F. J., and Williamson, E.M., 1996, Selection, Preparation, and Pharmacologicaly Evaluation of Plant Material, 131-137, John Willey, New York.

Evan, S. P., 2008, Antioksidan Alami di Sekitar Kita, http://www.chem-is-

try.org/artikel_kimia/kimia_pangan/antioksidan-alami-di-sekitar-kita/, diakses tanggal 20 November 2010.

Fitzgerald, G. A., and Patrono, C., 2001, The Coxibs, Selective Inhibitors of

Cyclooxygenase-2, N Engl. J. Med., Vol. 345, No. 6. Gildemeister, F., 2009, The Volatile Oil,

http://chestofbooks.com/health/aromatherapy/The-Volatile-Oils-Vol1/Eugenol.html, diakses tanggal 8 November 2010

Goldstein, N. S., Ferkowicz, M., PathA, Odish, E., Mani, A., and Hastah, F.,

2003, Minimum Formalin Fixation Time for Consistent Estrogen Receptor Immunohistochemical Staining of Invasive Breast Carcinoma, Am. J. Clin. Pathol., 120:86-92.

Gunani, S. B., 2009, Uji Daya Antiinflamasi Krim Tipe A/M Ekstrak Etanolik

Jahe 10% (Zingiber officinale Roscoe) yang Diberikan Topikal Terhadap Udem Kaki Tikus yang Diinduksi Karagenin, Laporan Penelitian, Surakarta.

Harijadi, 2009, Radang/Inflamasi, http://medicine.uii.ac.id/, diakses tanggal 12

Juli 2010 Hasyim, M., Hamam, and Akil, S., 2006, Formalin Bukan Formalitas, CP-Buletin,

Nomor 73/Tahun VII Ikawati, Supardjan, dan, Asmara, L. S., 2007, Pengaruh Senyawa

Heksagamavungn-1 (Hgv-1) terhadap Inflamasi Akut Akibat Reaksi Anafilaksis Kutaneus Aktif pada Tikus Wistar Jantan Terinduksi Ovalbumin, Laporan Penelitian, Fakultas Farmasi Universitas Gadjah Mada.

JECFA, 2005, Oleum Caryophilli, King’s American Dispensatory,

http://www.inchem.org/documents/jecfa/jeceval/jec_843.htm, diakses tanggal 24 April 2010.

JECFA, 2009, Eugenol Benzoat, JECFA, http://www.fao.org/ag/agn/jecfa-

flav/details.html?flavId=4822 diakses tanggal 24 April 2010.

56

Joseph S. M, George M. C, dan Nair J. R, 2005, Effect of feeding cuttlefish liver oil on immune function, inflammatory response and platelet aggregation in rats. Current Sci, 88(3) :507-510.

Juma'a, K. M, Ahmed, Z. A., Numan, I. T., and Hussain, S. A. R., 2009, Dose-

dependent Anti-inflammatory Effect of Silymarin in Experimental Animal Model of Chronic Inflammation, African Journal of Pharmacy and Pharmacology, Vol. 3(5). pp. 242-247.

Karch, A. M., 2003, Focus on Nursing Pharmacology, 2nd edition, Lippincot

Williams dan Wilkins E Wolter Kluwer Company, New York, pp. 198,203, 209-211.

Kee. J. L. and Hayes. E. R, 1996, Farmakologi Pendekatan Proses Keperawatan,

edisi 5, diterjemahkan Peter. A., 310-317, Buku Kedokteran EGC, Jakarta.

Lu, T. C. Jung-Chun Liao, Tai-Hung Huang, Ying-Chih Lin, Chia-uLiu,Yung-jia

Chiu., et. al., Analgesic and Anti-Inflammatory Activities of the Methanol Extract from Pogostemon cablin, eCAM, http://ecam.oxfordjournals.org/cgi/reprint/nep183v1, diakses tanggal 21 Agustus 2010.

Maffetone, P., 2002, The ABCs of Chronic Inflammation, In Fitness and In

Healthy, 1-10. Magalhaes, C. B., Riva, D. R., DePaula, L. J., Brando-Lima, A., Koatz, V. L. G.,

Leal-Cardoso, J. H., et al., 2010, In vivo anti-inflammatory action of eugenol on lipopolysaccharide-induced lung injury, J. Appl. Physiol., 108: 845-851.

Moore, R. A., 2004, Topical Nonsteroidal Antiinflammatory Drugs Are Effective

in Osteoarthritis of the Knee, The Journal of Rheumatology, 1893-1895. Mosaddek, A. S. and Rashid, M. U., 2008, A comparative study of the anti-

inflammatory effect of aqueous extract of neem leaf and dexamethasone, Bangladesh J. Pharmacol., 3:44-47.

MSDS, 2002, Material Safety Data Sheet Ethanol 96%,

http://www.ncpalcohols.com/MSDS/MSDS%20Light%20Spirit.pdf, diakses tanggal 16 November 2010.

MSDS, 2007, Kemanan Data untuk Eugenol,

http://msds.chem.ox.ac.uk/keamanan data untuk eugenol.html, diakses tanggal 26 November 2010.

57

MSDS, 2008, Material Safety Data Sheet Ethyl acetate MSDS, http://www.sciencelab.com/msds.php?msdsId=9927165, diakses tanggal 9 November 2010.

MSDS, 2010, Material Safety Data Sheet: Chloroform,

http://msds.chem.ox.ac.uk/CH/chloroform.html, diakses tanggal 16 November 2010.

Mulja, M. dan Hanwar, D., 2003, Prinsip – Prinsip Cara Berlaboratorium yang

Baik (Good Laboratory Practice), Majalah Farmasi Airlangga, vol. III No. 2, Agustus 2003, halaman 71-76.

Ozturk, A. and Ozbek, H., 2005, Caryophyllata Essential Oil: An Animal Model

of Anti-inflammatory Activity, Department of Pharmacology, Van Turkey.

Price, S. A. and Wilson, L. M., 1995, Clinical Concept of Disease Processes, 4th

edition, 37, diterjemahkan oleh Anugerah, P., Penerbit Buku Kedokteran EGC, Jakarta.

Ramdani, E. D., 2011, Sintesis Benzoil Eugenol dari Benzoil Eugenol Klorida

dengan Pelarut Piridina, Skripsi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Rhen, T. and Cidlowski, J. A., 2005, Antiinflammatory Action of Glucocorticoids,

New Mechanisms for Old Drugs, The New England Journal of Medicine, 353, 1711-23.

Sadeghian, H., Seyedi, S. M., Saberi, M. R., Arghiani, Z., dan Riazi, M., 2008,

Design and Synthesis of Eugenol Derivatives as A Potent 15-Lipoxygenase Inhibitors, Bioorganic and Medicines Chemistry, 16: 890-901.

Schror, K. and Meyer-Kirchrath, J., 2000, Cyclooxygenase-2 Inhibition and Side-

effects of Non-steroidal Anti-inflammatory Drugs in the Gastrointestinal Tract, Curr. Med. Chem, 7, 1121-1129.

Sompuram, S. R, Vani, K., Messana, E., and Bogen, S. A., 2004, A Molecular

Mechanism of Formalin Fixation and Antigen Retrieval, Am. J. Clin. Pathol., 121:190-199.

Sobota R, Szwed M, Kasza A, Bugno M, and Kordula T., 2000, Parthenolide

Inhibits Activation of Signal Transducers and Activators of Transcription (STATs) induced by cytokines of the IL- 6 family, Bioch. Biophys. Res. Comm., 267: 329-333.

58

Tanko, Kamba, Saleh, Musa, and Mohammed, 2008, Anti-nociceptive and anti-inflammatory activities of ethanolic flower extract of Newbouldia laevis in mice and rats, Healthy Synergies Publications, Vol. 1(3), pp. 13-19.

Taveira, F. N., Oliveira, A. B., Filho, J. D. S., Braga, F. C., 2005, Epimers of

Labdane Diterpenes from the Rhizomes of Hedychium coronarium J. Koenig, Revista Brasileira de Farmacognosia, 15 : 1, 1-2.

Vane, J., Botting, J., dan Botting, R., 1996, Improved Non-Steroid Anti

Inflammatory Drugs Cox-2 Enzyme Inhibitors, Kluwer Academic and William Harvey Press, pp. 1-5.

Vogel, 2002, Drug Discovery and Evaluation: Pharmacological Assays, 2nd

ed.,Springer-Verlag Berlin Heidelberg, Germany, pp. 702-703. Yunus, 2009, Healthy CO PLUS (Extrac Virgin Coconut Oil),

http://archive.kaskus.us/thread/2429843/0/healthy-co-plus-extrac-virgin-coconut-oil, diakses tanggal 2 Desember 2010.

59

Lampiran 1. Elusidasi Struktur dari Benzoil Eugenol a. Grafik senyawa menggunakan Gas Chromatography

60

b. Pencarian bobot molekul senyawa

61

c. Elusidasi struktur menggunakan IR

62

d. Elusidasi struktur menggunakan NMR

63

Lampiran 2. Surat Keterangan Pembelian Mencit di LPPT-Universitas

Gajah Mada ( UGM )

64

Lampiran 3. a. Sertifikasi Kalibrasi Caliper merk Mitutoyo

65

66

b. Tabel presisi jangka sorong merk Mitutoyo

Kelompok

Tebal Kaki Rata-rata SD CV(%) Rep I Rep II Rep III

I 0,282 0,284 0,28 0,282 0,002 0,71

II 0,292 0,29 0,29 0,291 0,001 0,34

III 0,286 0,286 0,286 0,286 0 0

Lampiran 4. Skema orientasi konsentrasi kontrol positif eugenol

Keterangan: Kelompok I : Kelompok Kontrol Formalin 0,5% Kelompok II : Kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5% kemudian 1 jam

sesudahnya diolesi eugenol 100% Kelompok III : Kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5% kemudian 1 jam

sesudahnya diolesi eugenol 50% Kelompok IV : Kelompok mencit yang diinjeksi formalin 0,5% kemudian 1 jam

sesudahnya diolesi eugenol 25%

67

Lampiran 5.

a. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi

formalin 0,5% dengan pengukuran setiap jam selama 5 jam.

Descriptive Statistics

N Mean Std. Deviation Minimum Maximum

jam1 3 .0967 .02309 .07 .11

jam2 3 .1100 .03000 .08 .14

jam3 3 .1233 .03512 .09 .16

jam4 3 .1267 .02082 .11 .15

jam5 3 .1067 .02082 .09 .13

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

jam1 jam2 jam3 jam4 jam5

N 3 3 3 3 3

Normal Parametersa Mean .0967 .1100 .1233 .1267 .1067

Std. Deviation .02309 .03000 .03512 .02082 .02082

Most Extreme Differences Absolute .385 .175 .204 .292 .292

Positive .282 .175 .204 .292 .292

Negative -.385 -.175 -.185 -.212 -.212

Kolmogorov-Smirnov Z .667 .303 .354 .506 .506

Asymp. Sig. (2-tailed) .766 1.000 1.000 .960 .960

a. Test distribution is Normal.

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 jam1 .0967 3 .02309 .01333

jam2 .1100 3 .03000 .01732

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 jam1 & jam2 3 .866 .333

68

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair

1

jam1 -

jam2 -.01333 .01528 .00882 -.05128 .02461 -1.512 2 .270

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 Jam 2 .1100 3 .03000 .01732

jam3 .1233 3 .03512 .02028

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 Jam2 & jam 3 3 .997 .052

Paired Samples Test

Paired Differences

t Df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair

1

jam2 -

jam3 -.01333 .00577 .00333 -.02768 .00101 -4.000 2 .057

69

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 jam3 .1233 3 .03512 .02028

jam4 .1267 3 .02082 .01202

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 jam3 & jam4 3 .775 .435

Paired Samples Test

Paired Differences

t Df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair

1

jam3 -

jam4 -.00333 .02309 .01333 -.06070 .05404 -.250 2 .826

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 jam4 .1267 3 .02082 .01202

jam5 .1067 3 .02082 .01202

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 jam4 & jam5 3 .885 .309

70

Paired Samples Test

Paired Differences

t Df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair

1

jam4 -

jam5 .02000 .01000 .00577 -.00484 .04484 3.464 2 .074

b. Orientasi rentang waktu pengolesan edema kaki yang diinduksi

formalin 0,5% dengan pengukuran setiap 10 menit selama 1 jam.

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 menit10 .1275a 4 .02754 .01377

menit20 .1275a 4 .02754 .01377

a. The correlation and t cannot be computed because the standard error of the

difference is 0.

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 menit20 .1275 4 .02754 .01377

menit30 .1425 4 .02500 .01250

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 menit20 &

menit30 4 .932 .068

71

Paired Samples Test

Paired Differences

t Df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair

1

menit20 -

menit30 -.01500 .01000 .00500 -.03091 .00091 -3.000 3 .058

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 menit30 .1425 4 .02500 .01250

menit40 .1600 4 .02944 .01472

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 menit30 &

menit40 4 .951 .049

Paired Samples Test

Paired Differences

t Df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair

1

menit30 -

menit40 -.01750 .00957 .00479 -.03273 -.00227 -3.656 3 .035

72

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 menit40 .1600 4 .02944 .01472

menit50 .1650 4 .02887 .01443

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 menit40 &

menit50 4 .981 .019

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair

1

menit40 -

menit50 -.00500 .00577 .00289 -.01419 .00419 -1.732 3 .182

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 menit50 .1650 4 .02887 .01443

menit60 .1800 4 .02582 .01291

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 menit50 &

menit60 4 .984 .016

73

Paired Samples Test

Paired Differences

t df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair

1

menit50 -

menit60 -.01500 .00577 .00289 -.02419 -.00581 -5.196 3 .014

Paired Samples Statistics

Mean N Std. Deviation Std. Error Mean

Pair 1 menit40 .1600 4 .02944 .01472

menit60 .1800 4 .02582 .01291

Paired Samples Correlations

N Correlation Sig.

Pair 1 menit40 &

menit60 4 .965 .035

Paired Samples Test

Paired Differences

t Df

Sig. (2-

tailed)

Mean

Std.

Deviation

Std. Error

Mean

95% Confidence

Interval of the

Difference

Lower Upper

Pair 1 menit40 -

menit60 -.02000 .00816 .00408 -.03299 -.00701 -4.899 3 .016

74

Lampiran 6.

c. Perhitungan Peringkat Konsentrasi Eugenol sebagai Kontrol Positif

Faktor pengali = = 2

Konsentrasi kedua= 2 x 25% = 50% v/

sehingga didapatkan ketiga konsentrasi eugenol sebagai orientasi kontrol

positif berturut-turut adalah 25%

v

v/v, 50% v/v, 100% v

/v

d. Hasil Analisa Rata-rata AUC total Eugenol 25% v/v, 50% v/v, dan

100% v/v untuk Kontrol Positif menggunakan Metode Analisis One-

Way ANOVA Tingkat Kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan

dengan uji Scheffe.

Descriptive Statistics

N Mean Std. Deviation Minimum Maximum

AUCtotal 12 .79042 .169551 .545 1.005

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

AUCtotal

N 12

Normal Parametersa Mean .79042

Std. Deviation .169551

Most Extreme Differences Absolute .193

Positive .193

Negative -.160

Kolmogorov-Smirnov Z .668

Asymp. Sig. (2-tailed) .764

a. Test distribution is Normal.

75

Descriptives

AUCtotal

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error

95% Confidence

Interval for Mean

Minimum Maximum

Lower

Bound

Upper

Bound

eugenol100 3 .83500 .160935 .092916 .43522 1.23478 .665 .985

eugenol50 3 .61000 .056789 .032787 .46893 .75107 .545 .650

eugenol25 3 .73333 .124933 .072130 .42298 1.04368 .625 .870

kontrol 3 .98333 .029297 .016915 .91055 1.05611 .950 1.005

Total 12 .79042 .169551 .048945 .68269 .89814 .545 1.005

ANOVA

AUCtotal

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .225 3 .075 6.581 .015

Within Groups .091 8 .011

Total .316 11

76

Multiple Comparisons

AUCtotal

Scheffe

(I) perlakuan (J) perlakuan

Mean

Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

eugenol100 eugenol50 .225000 .087170 .163 -.07945 .52945

eugenol25 .101667 .087170 .722 -.20279 .40612

kontrol -.148333 .087170 .455 -.45279 .15612

eugenol50 eugenol100 -.225000 .087170 .163 -.52945 .07945

eugenol25 -.123333 .087170 .595 -.42779 .18112

kontrol -.373333* .087170 .018 -.67779 -.06888

eugenol25 eugenol100 -.101667 .087170 .722 -.40612 .20279

eugenol50 .123333 .087170 .595 -.18112 .42779

kontrol -.250000 .087170 .113 -.55445 .05445

kontrol eugenol100 .148333 .087170 .455 -.15612 .45279

eugenol50 .373333* .087170 .018 .06888 .67779

eugenol25 .250000 .087170 .113 -.05445 .55445

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

AUCtotal

Scheffe

perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2

eugenol50 3 .61000

eugenol25 3 .73333 .73333

eugenol100 3 .83500 .83500

kontrol 3 .98333

Sig. .163 .113

Means for groups in homogeneous subsets are

displayed.

77

a.

Lampiran 7.

Perhitungan konsentrasi benzoil eugenol menggunakan pelarut non

polar etanol 96%

Sebanyak 10 mg benzoil eugenol larut dalam 0,5 ml etanol 96% sehingga

didapatkan perhitungan konsentrasi sebagai berikut:

Konsentrasi tertinggi =

b. Perhitungan konsentrasi benzoil eugenol menggunakan pelarut non

polar kloroform

Sebanyak 10 mg benzoil eugenol larut dalam 0,04 ml kloroform sehingga didapatkan perhitungan konsentrasi sebagai berikut:

Konsentrasi tertinggi =

c. Perhitungan konsentrasi benzoil eugenol menggunakan pelarut non

polar etil asetat

Sebanyak 10 mg benzoil eugenol larut dalam 0,04 ml etil asetat sehingga didapatkan perhitungan konsentrasi sebagai berikut:

Konsentrasi tertinggi =

Lampiran 8. Perhitungan peringkat konsentrasi benzoil eugenol

menggunakan pelarut etil asetat

Fakor pengali yang digunakan =

= 2

Konsentrasi kedua benzoil eugenol = 2x 6,25% = 12,5% b/v

78

Lampiran 9. Hasil Analisa Tebal Edema Kaki Mencit yang diinduksi

Formalin 0,5% menggunakan

One-Way ANOVA tingkat

kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe

Descriptive Statistics

N Mean Std. Deviation Minimum Maximum

Tebal1 35 .13966 .034435 .064 .200

Tebal2 35 .14931 .032963 .096 .214

Tebal3 35 .15086 .040192 .072 .220

Tebal4 35 .14949 .041833 .064 .214

Tebal5 35 .14086 .039441 .060 .212

Tebal6 35 .12731 .034330 .062 .220

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

Tebal1 Tebal2 Tebal3 Tebal4 Tebal5 Tebal6

N 35 35 35 35 35 35

Normal Parametersa Mean .13966 .14931 .15086 .14949 .14086 .12731

Std. Deviation .034435 .032963 .040192 .041833 .039441 .034330

Most Extreme

Differences

Absolute .140 .107 .121 .100 .098 .109

Positive .104 .107 .119 .085 .064 .109

Negative -.140 -.084 -.121 -.100 -.098 -.054

Kolmogorov-Smirnov Z .826 .636 .714 .589 .583 .642

Asymp. Sig. (2-tailed) .503 .814 .688 .879 .887 .804

a. Test distribution is Normal.

79

Within-Subjects Factors

Measure:MEASURE_1

tebal

Dependent

Variable

1 Tebal1

2 Tebal2

3 Tebal3

4 Tebal4

5 Tebal5

6 Tebal6

Between-Subjects Factors

Value Label N

Perlakuan 1 Kontrol Negatif Formalin 5

2 Kontrol Negatif Etil Asetat 5

3 Kontrol Negatif VCO 5

4 Kontrol Positif Eugenol 50% 5

5 Benzoil Eugenol 25% 5

6 Benzoil Eugenol 12,5% 5

7 Benzoil Eugenol 6,25% 5

Descriptive Statistics

Perlakuan Mean Std. Deviation N

Tebal1 Kontrol Negatif Formalin .16880 .019110 5

Kontrol Negatif Etil Asetat .15280 .026329 5

Kontrol Negatif VCO .17120 .014325 5

Kontrol Positif Eugenol 50% .10560 .013520 5

Benzoil Eugenol 25% .09320 .022477 5

Benzoil Eugenol 12,5% .12320 .007014 5

Benzoil Eugenol 6,25% .16280 .020030 5

80

Total .13966 .034435 35

Tebal2 Kontrol Negatif Formalin .17120 .032453 5

Kontrol Negatif Etil Asetat .16520 .039664 5

Kontrol Negatif VCO .17560 .024224 5

Kontrol Positif Eugenol 50% .11400 .016186 5

Benzoil Eugenol 25% .12200 .013266 5

Benzoil Eugenol 12,5% .13520 .015007 5

Benzoil Eugenol 6,25% .16200 .025298 5

Total .14931 .032963 35

Tebal3 Kontrol Negatif Formalin .18840 .021973 5

Kontrol Negatif Etil Asetat .18600 .036442 5

Kontrol Negatif VCO .18480 .017810 5

Kontrol Positif Eugenol 50% .11280 .024964 5

Benzoil Eugenol 25% .10800 .020833 5

Benzoil Eugenol 12,5% .12240 .015646 5

Benzoil Eugenol 6,25% .15360 .020659 5

Total .15086 .040192 35

Tebal4 Kontrol Negatif Formalin .18240 .033746 5

Kontrol Negatif Etil Asetat .17640 .034275 5

Kontrol Negatif VCO .18560 .010526 5

Kontrol Positif Eugenol 50% .11200 .016432 5

Benzoil Eugenol 25% .10760 .028086 5

Benzoil Eugenol 12,5% .11520 .027554 5

Benzoil Eugenol 6,25% .16720 .030516 5

Total .14949 .041833 35

Tebal5 Kontrol Negatif Formalin .16320 .041776 5

Kontrol Negatif Etil Asetat .16200 .023917 5

Kontrol Negatif VCO .18200 .018708 5

Kontrol Positif Eugenol 50% .12120 .017922 5

Benzoil Eugenol 25% .10680 .028305 5

Benzoil Eugenol 12,5% .09840 .035480 5

Benzoil Eugenol 6,25% .15240 .022865 5

81

Total .14086 .039441 35

Tebal6 Kontrol Negatif Formalin .15880 .051935 5

Kontrol Negatif Etil Asetat .14280 .017413 5

Kontrol Negatif VCO .14400 .030332 5

Kontrol Positif Eugenol 50% .11560 .014519 5

Benzoil Eugenol 25% .10360 .012522 5

Benzoil Eugenol 12,5% .09960 .034508 5

Benzoil Eugenol 6,25% .12680 .028587 5

Total .12731 .034330 35

Multivariate Testsc

Effect Value F Hypothesis df Error df Sig.

tebal Pillai's Trace .534 5.496a 5.000 24.000 .002

Wilks' Lambda .466 5.496a 5.000 24.000 .002

Hotelling's Trace 1.145 5.496a 5.000 24.000 .002

Roy's Largest Root 1.145 5.496a 5.000 24.000 .002

tebal * Perlakuan Pillai's Trace 1.123 1.351 30.000 140.000 .125

Wilks' Lambda .248 1.361 30.000 98.000 .132

Hotelling's Trace 1.783 1.331 30.000 112.000 .144

Roy's Largest Root .932 4.351b 6.000 28.000 .003

a. Exact statistic

b. The statistic is an upper bound on F that yields a lower bound on the significance level.

c. Design: Intercept + Perlakuan

Within Subjects Design: tebal

82

Tests of Within-Subjects Contrasts

Measure:MEASURE_1

Source tebal

Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

tebal Linear .004 1 .004 4.082 .053

Quadratic .010 1 .010 30.350 .000

Cubic 1.717E-6 1 1.717E-6 .005 .943

Order 4 1.020E-5 1 1.020E-5 .053 .819

Order 5 3.658E-5 1 3.658E-5 .207 .653

tebal * Perlakuan Linear .005 6 .001 .851 .542

Quadratic .003 6 .001 1.723 .152

Cubic .003 6 .001 1.659 .168

Order 4 .002 6 .000 1.686 .161

Order 5 .001 6 .000 .887 .518

Error(tebal) Linear .027 28 .001

Quadratic .009 28 .000

Cubic .009 28 .000

Order 4 .005 28 .000

Order 5 .005 28 .000

Tests of Within-Subjects Contrasts

Measure:MEASURE_1

Source tebal

Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

tebal Linear .004 1 .004 4.082 .053

Quadratic .010 1 .010 30.350 .000

Cubic 1.717E-6 1 1.717E-6 .005 .943

Order 4 1.020E-5 1 1.020E-5 .053 .819

Order 5 3.658E-5 1 3.658E-5 .207 .653

83

tebal * Perlakuan Linear .005 6 .001 .851 .542

Quadratic .003 6 .001 1.723 .152

Cubic .003 6 .001 1.659 .168

Order 4 .002 6 .000 1.686 .161

Order 5 .001 6 .000 .887 .518

Error(tebal) Linear .027 28 .001

Quadratic .009 28 .000

Cubic .009 28 .000

Order 4 .005 28 .000

Order 5 .005 28 .000

Tests of Between-Subjects Effects

Measure:MEASURE_1

Transformed Variable:Average

Source

Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Intercept 4.289 1 4.289 2.162E3 .000

Perlakuan .159 6 .026 13.348 .000

Error .056 28 .002

84

Multiple Comparisons

MEASURE_1

Scheffe

(I) Perlakuan (J) Perlakuan

Mean Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

Kontrol Negatif

Formalin

Kontrol Negatif Etil

Asetat .00793 .011500 .998 -.03612 .05198

Kontrol Negatif VCO -.00173 .011500 1.000 -.04578 .04232

Kontrol Positif

Eugenol 50% .05860* .011500 .003 .01455 .10265

Benzoil Eugenol 25% .06527* .011500 .001 .02122 .10932

Benzoil Eugenol

12,5% .05647* .011500 .005 .01242 .10052

Benzoil Eugenol

6,25% .01800 .011500 .867 -.02605 .06205

Kontrol Negatif Etil

Asetat

Kontrol Negatif

Formalin -.00793 .011500 .998 -.05198 .03612

Kontrol Negatif VCO -.00967 .011500 .993 -.05372 .03438

Kontrol Positif

Eugenol 50% .05067* .011500 .015 .00662 .09472

Benzoil Eugenol 25% .05733* .011500 .004 .01328 .10138

Benzoil Eugenol

12,5% .04853* .011500 .023 .00448 .09258

Benzoil Eugenol

6,25% .01007 .011500 .992 -.03398 .05412

Kontrol Negatif VCO Kontrol Negatif

Formalin .00173 .011500 1.000 -.04232 .04578

Kontrol Negatif Etil

Asetat .00967 .011500 .993 -.03438 .05372

Kontrol Positif

Eugenol 50% .06033* .011500 .002 .01628 .10438

85

Benzoil Eugenol 25% .06700* .011500 .001 .02295 .11105

Benzoil Eugenol

12,5% .05820* .011500 .004 .01415 .10225

Benzoil Eugenol

6,25% .01973 .011500 .810 -.02432 .06378

Kontrol Positif Eugenol

50%

Kontrol Negatif

Formalin -.05860* .011500 .003 -.10265 -.01455

Kontrol Negatif Etil

Asetat -.05067* .011500 .015 -.09472 -.00662

Kontrol Negatif VCO -.06033* .011500 .002 -.10438 -.01628

Benzoil Eugenol 25% .00667 .011500 .999 -.03738 .05072

Benzoil Eugenol

12,5% -.00213 .011500 1.000 -.04618 .04192

Benzoil Eugenol

6,25% -.04060 .011500 .088 -.08465 .00345

Benzoil Eugenol 25% Kontrol Negatif

Formalin -.06527* .011500 .001 -.10932 -.02122

Kontrol Negatif Etil

Asetat -.05733* .011500 .004 -.10138 -.01328

Kontrol Negatif VCO -.06700* .011500 .001 -.11105 -.02295

Kontrol Positif

Eugenol 50% -.00667 .011500 .999 -.05072 .03738

Benzoil Eugenol

12,5% -.00880 .011500 .996 -.05285 .03525

Benzoil Eugenol

6,25% -.04727* .011500 .028 -.09132 -.00322

Benzoil Eugenol 12,5% Kontrol Negatif

Formalin -.05647* .011500 .005 -.10052 -.01242

Kontrol Negatif Etil

Asetat -.04853* .011500 .023 -.09258 -.00448

Kontrol Negatif VCO -.05820* .011500 .004 -.10225 -.01415

Kontrol Positif

Eugenol 50% .00213 .011500 1.000 -.04192 .04618

Benzoil Eugenol 25% .00880 .011500 .996 -.03525 .05285

86

Benzoil Eugenol

6,25% -.03847 .011500 .122 -.08252 .00558

Benzoil Eugenol 6,25% Kontrol Negatif

Formalin -.01800 .011500 .867 -.06205 .02605

Kontrol Negatif Etil

Asetat -.01007 .011500 .992 -.05412 .03398

Kontrol Negatif VCO -.01973 .011500 .810 -.06378 .02432

Kontrol Positif

Eugenol 50% .04060 .011500 .088 -.00345 .08465

Benzoil Eugenol 25% .04727* .011500 .028 .00322 .09132

Benzoil Eugenol

12,5% .03847 .011500 .122 -.00558 .08252

Based on observed means.

The error term is Mean Square(Error) = ,000.

*. The mean difference is significant at the ,05 level.

MEASURE_1

Scheffe

Perlakuan N

Subset

1 2 3

Benzoil Eugenol 25% 5 .10687

Kontrol Positif Eugenol 50% 5 .11353 .11353

Benzoil Eugenol 12,5% 5 .11567 .11567

Benzoil Eugenol 6,25% 5 .15413 .15413

Kontrol Negatif Etil Asetat 5 .16420

Kontrol Negatif Formalin 5 .17213

Kontrol Negatif VCO 5 .17387

Sig. .996 .088 .810

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

Based on observed means.

The error term is Mean Square(Error) = ,000.

87

a.

Lampiran 10.

Contoh perhitungan data tebal edema menjadi nilai AUC

Perhitungan nilai AUC pada kelompok benzoil eugenol 25% b/v pada

rentang waktu jam ke-1 dan jam ke-2

b.

= 0,105 cm.jam

Hasil Analisa AUC total Setiap Kelompok Perlakuan menggunakan

One-Way ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian dilanjutkan

dengan uji Scheffe

Descriptive Statistics

N Mean Std. Deviation Minimum Maximum

AUCtotal 35 .79200 .184503 .455 1.085

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

AUCtotal

N 35

Normal Parametersa Mean .79200

Std. Deviation .184503

Most Extreme Differences Absolute .169

Positive .117

Negative -.169

Kolmogorov-Smirnov Z .999

Asymp. Sig. (2-tailed) .271

a. Test distribution is Normal.

88

Descriptives

AUCtotal

N Mean

Std.

Deviation

Std.

Error

95% Confidence

Interval for Mean

Min. Max.

Lower

Bound

Upper

Bound

Kontrol Negatif

Formalin 5 .95700 .111277 .049764 .81883 1.09517 .785 1.070

Kontrol Negatif Etil

Asetat 5 .90700 .149106 .066682 .72186 1.09214 .645 1.005

Kontrol Negatif VCO 5 .97300 .066858 .029900 .88998 1.05602 .925 1.085

Kontrol Positif Eugenol

50% 5 .62000 .069642 .031145 .53353 .70647 .520 .710

Benzoil Eugenol 25% 5 .58400 .091883 .041091 .46991 .69809 .455 .685

Benzoil Eugenol 12,5% 5 .64000 .089652 .040094 .52868 .75132 .525 .730

Benzoil Eugenol 6,25% 5 .86300 .105747 .047292 .73170 .99430 .710 .995

Total 35 .79200 .184503 .031187 .72862 .85538 .455 1.085

ANOVA

AUCtotal

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups .871 6 .145 14.193 .000

Within Groups .286 28 .010

Total 1.157 34

89

Multiple Comparisons

AUCtotal

Scheffe

(I) perlakuan (J) perlakuan

Mean

Difference

(I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

Kontrol Negatif

Formalin

Kontrol Negatif Etil

Asetat .050000 .063963 .996 -.19500 .29500

Kontrol Negatif VCO -.016000 .063963 1.000 -.26100 .22900

Kontrol Positif Eugenol

50% .337000* .063963 .002 .09200 .58200

Benzoil Eugenol 25% .373000* .063963 .001 .12800 .61800

Benzoil Eugenol 12,5% .317000* .063963 .005 .07200 .56200

Benzoil Eugenol 6,25% .094000 .063963 .898 -.15100 .33900

Kontrol Negatif

Etil Asetat

Kontrol Negatif Formalin -.050000 .063963 .996 -.29500 .19500

Kontrol Negatif VCO -.066000 .063963 .981 -.31100 .17900

Kontrol Positif Eugenol

50% .287000* .063963 .013 .04200 .53200

Benzoil Eugenol 25% .323000* .063963 .004 .07800 .56800

Benzoil Eugenol 12,5% .267000* .063963 .025 .02200 .51200

Benzoil Eugenol 6,25% .044000 .063963 .998 -.20100 .28900

Kontrol Negatif

VCO

Kontrol Negatif Formalin .016000 .063963 1.000 -.22900 .26100

Kontrol Negatif Etil

Asetat .066000 .063963 .981 -.17900 .31100

Kontrol Positif Eugenol

50% .353000* .063963 .001 .10800 .59800

Benzoil Eugenol 25% .389000* .063963 .000 .14400 .63400

Benzoil Eugenol 12,5% .333000* .063963 .003 .08800 .57800

Benzoil Eugenol 6,25% .110000 .063963 .808 -.13500 .35500

90

Kontrol Positif

Eugenol 50%

Kontrol Negatif Formalin -.337000* .063963 .002 -.58200 -.09200

Kontrol Negatif Etil

Asetat -.287000* .063963 .013 -.53200 -.04200

Kontrol Negatif VCO -.353000* .063963 .001 -.59800 -.10800

Benzoil Eugenol 25% .036000 .063963 .999 -.20900 .28100

Benzoil Eugenol 12,5% -.020000 .063963 1.000 -.26500 .22500

Benzoil Eugenol 6,25% -.243000 .063963 .053 -.48800 .00200

Benzoil Eugenol

25%

Kontrol Negatif Formalin -.373000* .063963 .001 -.61800 -.12800

Kontrol Negatif Etil

Asetat -.323000* .063963 .004 -.56800 -.07800

Kontrol Negatif VCO -.389000* .063963 .000 -.63400 -.14400

Kontrol Positif Eugenol

50% -.036000 .063963 .999 -.28100 .20900

Benzoil Eugenol 12,5% -.056000 .063963 .992 -.30100 .18900

Benzoil Eugenol 6,25% -.279000* .063963 .017 -.52400 -.03400

Benzoil Eugenol

12,5%

Kontrol Negatif Formalin -.317000* .063963 .005 -.56200 -.07200

Kontrol Negatif Etil

Asetat -.267000* .063963 .025 -.51200 -.02200

Kontrol Negatif VCO -.333000* .063963 .003 -.57800 -.08800

Kontrol Positif Eugenol

50% .020000 .063963 1.000 -.22500 .26500

Benzoil Eugenol 25% .056000 .063963 .992 -.18900 .30100

Benzoil Eugenol 6,25% -.223000 .063963 .095 -.46800 .02200

Benzoil Eugenol

6,25%

Kontrol Negatif Formalin -.094000 .063963 .898 -.33900 .15100

Kontrol Negatif Etil

Asetat -.044000 .063963 .998 -.28900 .20100

Kontrol Negatif VCO -.110000 .063963 .808 -.35500 .13500

Kontrol Positif Eugenol

50% .243000 .063963 .053 -.00200 .48800

Benzoil Eugenol 25% .279000* .063963 .017 .03400 .52400

Benzoil Eugenol 12,5% .223000 .063963 .095 -.02200 .46800

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

91

X 100%

X 100%

X 100%

AUCtotal

Scheffe

Perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2 3

Benzoil Eugenol 25% 5 .58400

Kontrol Positif Eugenol 50% 5 .62000 .62000

Benzoil Eugenol 12,5% 5 .64000 .64000

Benzoil Eugenol 6,25% 5 .86300 .86300

Kontrol Negatif Etil Asetat 5 .90700

Kontrol Negatif Formalin 5 .95700

Kontrol Negatif VCO 5 .97300

Sig. .992 .053 .808

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

Penghambatan inflamasi (%) = (AUC0-6)0 - (AUC0-6)n

Lampiran 11. Perhitungan nilai persentase penghambatan inflamasi pada

kelompok kontrol eugenol 50% v/v; benzoil eugenol 25% b/v;

benzoil eugenol 12,5% b/v; dan benzoil eugenol 6,25% b/v

(AUC0-6)0

Salah satu contoh perhitungan nilai persentase penghambatan inflamasi pada

kelompok kontrol eugenol 50%

Penghambatan inflamasi eugenol 50% I (%) = 0,973 – 0,520 0,973

= 46,557 %

Penghambatan inflamasi benzoil eugenol 25% I (%) = 0,907 – 0,560 0,907

= 38,258 %

92

Keterangan:

Kelompok I : Kelompok kontrol positif eugenol 50% v/v Kelompok II : Kelompok kontrol positif benzoil eugenol 25% b/v Kelompok III : Kelompok kontrol positif benzoil eugenol 12,5% b/v

Kelompok IV : Kelompok kontrol positif benzoil eugenol 6,25% b/v

Lampiran 12. Hasil analisa persentase penghambatan inflamasi

menggunakan

One-Way ANOVA tingkat kepercayaan

95% kemudian dilanjutkan dengan uji Scheffe

Descriptive Statistics

N Mean Std. Deviation Minimum Maximum

Persentase 20 2.65452E1 15.943600 -9.702 49.835

One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

Persentase

N 20

Normal Parametersa Mean 26.54515

Std. Deviation 15.943600

Most Extreme Differences Absolute .130

Positive .093

Negative -.130

Kolmogorov-Smirnov Z .580

Asymp. Sig. (2-tailed) .890

a. Test distribution is Normal.

Kelompok Perlakuan

Persentase penghambatan inflamasi (%) Rata-Rata Replikasi

I Replikasi

II Replikasi

III Replikasi

IV Replikasi

V I 46,557 33,196 36,280 38,335 27,030 36,280 II 38,258 49,835 24,476 27,233 38,258 35,612 III 19,515 19,515 34,950 31,092 42,117 29,438 IV -9,702 1,323 21,720 9,592 1,323 4,851

93

Descriptives

Persentase

N Mean

Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence

Interval for Mean

Min. Max.

Lower

Bound

Upper

Bound

Kontrol Positif

Eugenol 50% 5 3.62796E1 7.157397 3.200885 27.39252 45.16668 27.030 46.557

Benzoil Eugenol

25% 5 3.56120E1 10.130579 4.530533 23.03323 48.19077 24.476 49.835

Benzoil Eugenol

12,5% 5 2.94378E1 9.884417 4.420445 17.16468 41.71092 19.515 42.117

Benzoil Eugenol

6,25% 5 4.85120 11.658941 5.214037 -9.62529 19.32769 -9.702 21.720

Total 20 2.65452E1 15.943600 3.565097 19.08332 34.00698 -9.702 49.835

ANOVA

Persentase

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 3279.811 3 1093.270 11.286 .000

Within Groups 1549.958 16 96.872

Total 4829.769 19

94

Persentase

Scheffe

(I) Perlakuan (J) Perlakuan

Mean

Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence

Interval

Lower

Bound

Upper

Bound

Kontrol Positif

Eugenol 50%

Benzoil Eugenol

25% .667600 6.224866 1.000 -18.73623 20.07143

Benzoil Eugenol

12,5% 6.841800 6.224866 .753 -12.56203 26.24563

Benzoil Eugenol

6,25% 31.428400* 6.224866 .001 12.02457 50.83223

Benzoil Eugenol

25%

Kontrol Positif

Eugenol 50% -.667600 6.224866 1.000 -20.07143 18.73623

Benzoil Eugenol

12,5% 6.174200 6.224866 .805 -13.22963 25.57803

Benzoil Eugenol

6,25% 30.760800* 6.224866 .002 11.35697 50.16463

Benzoil Eugenol

12,5%

Kontrol Positif

Eugenol 50% -6.841800 6.224866 .753 -26.24563 12.56203

Benzoil Eugenol

25% -6.174200 6.224866 .805 -25.57803 13.22963

Benzoil Eugenol

6,25% 24.586600* 6.224866 .011 5.18277 43.99043

Benzoil Eugenol

6,25%

Kontrol Positif

Eugenol 50% -31.428400* 6.224866 .001 -50.83223

-

12.02457

Benzoil Eugenol

25% -30.760800* 6.224866 .002 -50.16463

-

11.35697

Benzoil Eugenol

12,5% -24.586600* 6.224866 .011 -43.99043 -5.18277

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

95

Persentase

Scheffe

Perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2

Benzoil Eugenol 6,25% 5 4.85120

Benzoil Eugenol 12,5% 5 29.43780

Benzoil Eugenol 25% 5 35.61200

Kontrol Positif Eugenol 50% 5 36.27960

Sig. 1.000 .753

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

a. Lampiran 13.

Perhitungan persentase daya antiinflamasi benzoil eugenol

Daya antiinflamasi (%) =

Daya antiinflamasi (%) benzoil eugenol 25% b/v

b. Hasil analisa persentase daya antiinflamasi benzoil eugenol

menggunakan

One-Way ANOVA tingkat kepercayaan 95% kemudian

dilanjutkan dengan uji Scheffe

NPar Tests Descriptive Statistics

N Mean Std. Deviation Minimum Maximum

Persendaya 15 -1.21563E1 24.730765 -60.484 26.613 One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

Persendaya

N 15 Normal Parametersa Mean -12.15633

Std. Deviation 24.730765 Most Extreme Differences Absolute .144

96

Positive .104 Negative -.144

Kolmogorov-Smirnov Z .558 Asymp. Sig. (2-tailed) .915 a. Test distribution is Normal.

Oneway

Descriptives Persendaya

N Mean Std.

Deviation Std. Error

95% Confidence Interval for Mean

Minimum Maximum Lower Bound Upper Bound

Benzoil Eugenol 25% 5 5.80620 14.819946 6.627681 -12.59519 24.20759 -10.484 26.613

Benzoil Eugenol 12,5% 5 -3.08160 14.493908 6.481873 -21.07816 14.91496 -17.742 15.323

Benzoil Eugenol 6,25% 5 -3.91936E1 17.056141 7.627738 -60.37160 -18.01560 -60.484 -14.516

Total 15 -1.21563E1 24.730765 6.385456 -25.85177 1.53911 -60.484 26.613 ANOVA

Persendaya

Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Between Groups 5680.086 2 2840.043 11.823 .001 Within Groups 2882.464 12 240.205 Total 8562.550 14 Post Hoc Tests

Multiple Comparisons Persendaya Scheffe

(I) perlakuan (J) perlakuan Mean

Difference (I-J) Std. Error Sig.

95% Confidence Interval

Lower Bound Upper Bound

Benzoil Eugenol 25%

Benzoil Eugenol 12,5% 8.887800 9.802150 .672 -18.43645 36.21205

Benzoil Eugenol 6,25% 44.999800* 9.802150 .002 17.67555 72.32405 Benzoil Eugenol 12,5%

Benzoil Eugenol 25% -8.887800 9.802150 .672 -36.21205 18.43645 Benzoil Eugenol 6,25% 36.112000* 9.802150 .011 8.78775 63.43625

Benzoil Eugenol 6,25%

Benzoil Eugenol 25% -44.999800* 9.802150 .002 -72.32405 -17.67555 Benzoil Eugenol 12,5% -36.112000* 9.802150 .011 -63.43625 -8.78775

*. The mean difference is significant at the 0.05 level.

97

Homogeneous Subsets Persendaya

Scheffe

perlakuan N

Subset for alpha = 0.05

1 2

Benzoil Eugenol 6,25% 5 -39.19360 Benzoil Eugenol 12,5% 5 -3.08160 Benzoil Eugenol 25% 5 5.80620 Sig. 1.000 .672

Means for groups in homogeneous subsets are displayed.

Didapatkan persamaan y=51,03x-32,66 maka nilai EC50:

Lampiran 14. Perhitungan nilai EC50

Y = 51,03x-32,66

50 = 51,03x – 32,66

82,66 = 51,03x

x = 1,6198

Diketahui x = log konsentrasi, maka:

Konsentrasi (C) = antilog x

= antilog 1,6198

= 41,67% b/v

98

BIOGRAFI PENULIS

Paulina Maya Octasari merupakan anak sulung

dari pasangan Yustinus Bambang Suliestyo dan Yuliana

Dwi Lestari, memiliki tiga adik bernama Sebastianus

Harya Anggana, Valentina Yunita Lestiani, dan Yohanes

Guntur Sutirto. Lahir di Semarang, 10 Oktober 1989.

Pendidikan awal di TK Miryam Semarang (1993-1995),

SD Aloysius Semarang (1995-2001), SMP Domenico

Savio Semarang (2001-2004), SMA Kolese Loyola

Semarang (2004-2007), kemudian menempuh pendidikan di Fakultas Farmasi

Universitas Sanata Dharma Yogyakarta (2007-2010).

Selama menempuh kuliah, penulis pernah menjabat sebagai Sekretaris II

Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma (2007-

2008), Ketua Lektor Kapel Maria Bintang Samudra (2008-2009), Pengurus

Asrama (2008-2010), dan Gubernur Badan Eksekutif Mahasiswa Fakultas

Farmasi Universitas Sanata Dharma (2010-2011). Penulis pernah tergabung dalam

kepanitian pelantikan apoteker baru angkatan XV (2008) dan Open House

paingan (2009). Pengabdian masyarakat yang pernah dilakukan adalah sebagai

penyuluh dalam program penyuluhan tentang Bahayanya Obat Palsu (2008), Bakti

Sosial di Kali Code (2010), mengikuti pelayanan di Pos Kesehatan Kota Baru, dan

menjadi relawan bencana gunung merapi di Asrama Syantikara (2010). Program

Kreativitas Mahasiswa 2009 pernah diikuti dan lolos menjadi peserta Pekan

Ilmiah Mahasiswa Nasional 2010 Bidang Penelitian. Penulis menjadi wakil

Universitas Sanata Dharma sebagai Mahasiswa Berprestasi tingkat Kopertis

(2010) dan mewakili Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma dalam rangka

Olimpiade Farmasi II di UHAMKA, Jakarta. Penulis pernah mengikuti seminar

nasional di Jakarta dengan tema Peran Regulasi Produk Farmasi dalam

Meningkatkan Rasionalisasi Penggunaan Obat (2010). Pengalaman kerja sebagai

asisten dosen juga pernah dialami, seperti menjadi asisten dosen praktikum kimia

dasar, kimia organik, spektroskopi, kromatografi, dan patologi klinik.