Metode elektroforesis

Paper Electrophoresis(Elektroforesis Kertas)Pengertian ElektroforesisPengertian ElektroforesisPrinsip Dasar ElektroforesisPrinsip kerja dari elektroforesis adalah adanya pergerakan komponen bermuatan positif (+) pada kutub negatif (-) serta komponen bermuatan negatif (-) pada kutub positif (+). Pergerakanyangterjadidisebut"elektrokinetik".Hasilyangdidapatkan dari elektroforesis adalah elektroforegram yang memberikan informasi mengenai seberapa cepat perpindahan komponen atau biasa disebut kecepatan migrasi.Pada saat arus listrik diberikan, molekul bermigrasi melalui media (biasanya melalui gel), molekul yang kecil akan bermigrasi lebih cepat daripada yang besar sehingga akan terjadi pemisahan.4Metode Elektroforesis Elektroforesis KertasElektroforesis KapilerElektroforesis GelApa yang dimaksud dengan Elektroforesis Kertas?Faktor yang mempengaruhi pergerakan partikel pada kertasMuatanatau valensi zat terlarutLuas penampangTegangan yang digunakanKonsentrasi elektrolitKekuatan ionpHViskositasAdsorpsivitas zat terlarutPemisahan ini terjadi akibat adanya gradasi konsentrasi sepanjang sistempemisahan. Pergerakanpartikel dalam kertastergantung pada muatanatau valensi zat terlarut, luas penampang, tegangan yang digunakan, konsentrasi elektrolit, kekuatan ion, pH, viskositas, dan adsorpsivitas zat terlarut.Sesuai dengan perkembangan ilmu bahan, elektroforesis kertas menjadi fasa pertama dari perkembangan elektroforesis zona.

8Elektroforesis KertasAlat alat yang digunakan pada elektroforesis kertas adalah sebagai berikut.Dibuat dari kertas selulosa asetat.Sebuah tangki kecil.Berbagai larutan penyangga (buffer).

14523Sumber arus listrik.Larutan buffer.Tanda komponenDua perekat gelasKertas saringMekanisme Kerja Elektroforesis KertasElektroforesis kertas digunakan untuk memisahkan campuran molekul bermuatan kecil. Selembar kertas saring dibasahi dengan larutan buffer untuk mengontrol pH direntangkan antara dua elektroda. Satu tetes campuran yang akan dianalisis ditempatkan pada satu ujung kertas dan listrik dialirkan.Setelah molekul-molekul berpindah pada jangka waktu tertentu, kertas dipindahkan, dikeringkan dan diwarnai dengan pewarna yang mewarnai substansinya untuk dianalisa (diperiksa). Setiap jenis molekul bermuatan pada campuran akan berpindah pada jarak tertentu baik ke anoda maupun ke katoda tergantung pada muatan dimensi dan akan nampak sebagai titik pada kertas dengan posisi yang baru (Mathew,1990).Hasil Elektroforesis Kertas

Elektroforesis GelGel ElectrophoresisELEKTROFORESIS GELElektroforesis gel merupakan teknik memisahkan suatu makromolekul dengan cara memberi gaya pada makromolekul tersebut untuk melewati medium berisi gel yang dibantu dengan tenaga listrik. Elektroforesis ini menggunakan gel sebagai fase diam untuk memisahkan molekul-molekul seperti DNA dan protein menjadi pita-pita yang masing-masing terdiri atas molekul-molekul dengan panjang yang sama. Martin (2006)Struktur Agarose GelFig.3

17

Elektroforesis Gel

Alat alat yang digunakanpada elektroforesis gel adalah Comb : digunakan untuk membentuk well pada gel agarose.Tray : digunakan sebagai cetakan gel agarose.Chamber : digunakan sebagai wadah gel agarose.Sumber listrik : digunakan untuk memberi arus (saat proses elektroforesis).

1234Mekanisme Kerja

Enzim Retriksi1. Enzim Retriksi memotong DNA menjadi bagian segmen kecil dengan berbagai ukuran.2. Segmen DNA diletakkan pada lubang berpori pada gel. Gel tersebut mengambang pada larutan buffer pada wadah diantara dua elektroda.3. Ketika dialiri arus listrik melewati wadah, fargmen DNA bergerak menuju elektroda (kutub positif).4. Segmen DNA yang lebih kecil bergerak lebih cepat dan jauh dibandingkan dengan segmen DNA yang besar.Hasil Elektroforesis Gel

Gel AgarosaGel PoliakrilamidCapillary Electrophoresis

Elektroforesis KapilerELEKTROFORESIS KAPILERElektroforesis kapiler adalah metode elektroforesis yang digunakan untuk memisahkan asam amino, protein, lipid, karbohidrat, dan nukleotida dengan resolusi tinggi yang dilakukan pada pipa kapiler berisi buffer. Elektroforesis kapiler menggunakan listrik bertegangan tinggi yang menyebabkan semua komponen ion atau molekul netral bergerak ke katoda. Metode ini memiliki efisiensi dan selektivitas yang baik namun boros listrik karena menggunakan tegangan tinggi dan alatnya juga mahal.

Elektroforesis Kapiler Alat alat yang digunakan pada elektroforesis kapiler adalah sebagai berikut.Kolom kapiler (dengan silika, jendela optis agar bisa diamati prosesnya dari luar)Dua buah elektrodaPower supply (bisa diatur untuk bertegangan tinggi)Detector (sinar UV)Larutan buffer beserta dua buah tempat penyimpannya

27Mekanisme Elektroforesis KapilerPrinsip pemisahan kapiler adalah berdasarkan perbedaan mobilitas analit pada suatu medan listrik tertentu. Medan listrik diaplikasikan sepanjang kolom kapiler pada tegangan tinggi (15-30 kV) pada elektroda positif atau negatif. pemisahan analit terjadi sebagai hasil pergerakan analit di bawah pengaruh fenomena elektroosmotik dan elektroforetik.Elektroosmotik adalah partikel yang akan menuju salah satu kutub positif / negatif tergantung dari mana aliran listrik dialirkan. Elektroforetik adalah partikel bermuatan akan menuju kutub yang akan berlawanan muatannya.

Aplikasi ElektroforesisMempelajari evolusi tingkat molecular.Menganalisa fragmen DNA yang diamplifikasi lewat PCR.Mendeteksi lokasi dan jumlah mRNA dalam sel atau jaringan tertentu.Mengetahui ukuran fragmen DNA dari produk PCR.Memisahkan produk DNA dari hasil digesti yang berbeda ukuran, kemudian di-sequencing,Pemurnian atau purifikasi DNA.Analisa formulasi farmasetika dan cairan biologis dengan CE sangat dibutuhkan, terutama potensial komplementaritas dari metode ini terhadap HPLC.Mengetahui jumlah fragmen DNA yang diklon dalam rekombinan DNA plasmid.MikrobiologiBiologi MolekularFarmasetika dan Klinik