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Programa de Lic. en Edu. Básica con énfasis en Ciencias Naturales y Edu. Ambiental
Seminario de Química- Facultad de Ciencias-Universidad del Tolima Colombia
Palabras claves: Lipoxigenasa; Peroxidasa; pectinmetilesterasa; polifenoloxidasa;Cuantificación y detección.
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Es una enzima que se encuentra en las leguminosas y tubérculos.
Cataliza la oxigenación de los:
Poliinsaturados ácidos grasos
Hidroperóxidos
formación
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Método espectrofotométrico: 2 mL de 1 g / L solución de ácido
linoleico y 1mL de LOX
Se mezclan en una cubeta de cuarzo
La actividad de LOX .
Mayor tasa de cambio de absorbancia con respecto al
tiempo
Absorbacia a 234nm cada seg durante 3min
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La actividad LOX es convertidaEn tasa de oxidación
De ácidos linoleico
µmol/ Ls usando
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cataliza la oxidación de ciertos compuestos dadores de
hidrógeno,
fenoles (guayacol) Tetraguayacol
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Degradación clorofila, genera radicales libres, que generan daños a la
membrana célular
Depende de
Characterization of peroxidase-mediated chlorophyll bleachingin strawberry fruit Gustavo A. Martıneza,*,Pedro M. Civelloa,Alicia R.
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CUANTIFICACION
Espectrofotometría 669nm para medir la cantidad de DO
La cantidad de Do es proporcional al cantidad de Peroxidasa presente en la
fruta
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http://www.food-info.net/images/ppo-1.jpg
Recide en los plastidos y cloroplastos
Recide en los plastidos y cloroplastos
Papel importante en la resistencia a la infección.
Papel importante en la resistencia a la infección.
-Fenoles produce quinonas.-Polimerización producen Polímeros insolubles (melaninas).
-Fenoles produce quinonas.-Polimerización producen Polímeros insolubles (melaninas).
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Ardila e Higura, 2005.
Espectofotometria
Sustrato Catecol 0.1M
http://patentados.com/img/2002/nuevos-derivados-sinteticos-del-catecol.png
En buffer fosfato 0.1M Ph7.0 Con piruvato de sodio (1.64 mg/mL) y
50µL de proteína
http://img.alibaba.com/photo/271576285/Piruvato_di_sodio.jpg
Absorbancia a 420nm.
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Cantidad de enzima que causa un incremento en la absorbancia
De 0.001/min a 37ºC.
Actividad enzimatica
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PECTIN-METIL-ESTERASA
http://www.fcfar.unesp.br/alimentos/bioquimica/imagens/pectina_estrutural.gif
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pH óptimo5 - 8
pH óptimo5 - 8
Inicio de la Actividad
enzimática
Inicio de la Actividad
enzimática
Grupos MetoxiCationes Monovalentes
o Divalentes en altas concentraciones
Velocidad de Reacción
Velocidad de Reacción
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CULTIVO: cepas en placas de Agar LB
INCUBACION:2a 3 días 30 a 37 ºC
PLACAS: cubiertas con HCL 1N
COLONIAS: Aparición por halos turbios
Detección por placas
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Extracto crudo a 5ºC. Se homogeneizó por 15s, se dejo en reposo y centrifugó
Se descarta el precipitado y el pH del sobrenadante se ajusta
a 7.0 y 25ºC.
-NaOH.-Se utilizó un titulador.
Metodos de ROUSE Y ATKIN
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Cuantificación por el metodo de Rouse y Atkin. µ-equivalentes de éster
hidrolizado del extracto por ml x min.
-1
-1
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Lipoxigenasa Es una enzima que se encuentra en plantas y animales. Cataliza la oxigenación de los poli-insaturados (ácidos grasos) para formar hidroperóxidos de ácidos grasos.
Peroxidasas La peroxidasa es una enzima que cataliza la oxidación de ciertos compuestos dadores de hidrógeno, como fenoles (guayacol, pirogalol) y aminas aromáticas (o-fenilendiamina) por medio de peróxidos.
Polifenoloxidasa es una enzima oxido-reductora que en presencia del oxígeno del aire, cataliza los fenoles produciendo quinonas.
Pectina- metil- esterasas, catalizan la desesterificación de los grupos metilo de la pectina dando lugar a ácido oligalacturónico o pectato.
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-AVALLONE, Carmen M. CRAVZOV, Alicia L. MONTENEGRO, Susana B. PELLIZZARI, Esther . Estudio de la actividad de la peroxidasa, pectinesterasa y polifeniloxidasa en extracto enzimático de sandía (Citrullus vulgaris Schard). Facultad de agroindustrias, UNNE. Argentina. pp . 2
-BAYSAL Taner; Demirdöven Aslihan; Lipoxygenase in fruits and vegetables. Ariview 2006.
- LAMIKANRA, Olusola. Enzymatic Effects on Flavor and Texture of Fresh-cut Fruits and Vegetables. CRC Press LLC. 2002. pp. 30
-MARTINEZ Gustavo A., CivelloaPedro M., Chavesb Alicia R., Añon Marıa C.Characterization of peroxidase-mediated chlorophyll bleaching in strawberry fruit. 2001.
-MENENDÉZ, Aguirre O. EVANGELISTA, Lozano S. ARENAS, Ocampo M. BERMÚDEZ, Torres K. Del VILLAR, Martínez A. & JIMENEZ, Aparicio A. Cambios en la Actividad de -Amilasa, Pectinmetilesterasa y Poligalacturonasa durante la maduración del Maracuyá Amarillo (Passiflora Edolis Var. Flavicarpa Degener) Pdf. Revista Interciencia. Octubre 2006/Vol 31, N° 010. Caracas Venezuela. pp. 730
-MDLULI Kwanele M. Partial purification and characterisation of polyphenol oxidase and peroxidase from marula fruit (Sclerocarya birrea subsp. Caffra). 2004.
-REYES De Corcuera J. I; Cavaliery R.R and Pawers J.R; Prototype Instruments for laboratory and On-line Measurement of Lipoxygenase Activity.2003
-ROQUESA mayorga viana, higuera m.lanca ligia, aislamiento y caracterización de una polifenoloxidasa relacionada con la tolerancia del clavel (Dianthus caryophyllus) A Fusarium oxysporum f. sp. dianthi raza 2. Vol. 12 Nº2. 2007.
-SORIANO L, Margarita. Análisis de sistemas pectinolíticos bacterianos. Aislamiento y caracterización de las pectinasas PelA de Paenibacillus sp. BP-23 e YvpA de Bacillus Subtiles. (2004). Tesis Doctoral. Universitat de Barcelona. pp. 12,13 y 81.