Los siguientes componentes no se proporcionan en los kits de prueba, pero se pueden pedir en EUROIMMUNbajo los respectivos números de orden:ZD 9899-0130 bandeja de incubación con 30 canalesZD 9898-0130 incubación bandeja con 30 canales (negro, para el sistema de la cámara EUROBlot) ZD 9898 a0144 bandeja de incubación con 44 canales (negro, para el sistema de la cámara EUROBlot) ZD 9898 a 0148bandeja de incubación con 48 canales (negro, para el sistema de EUR0810tCamera)Para la creación de protocolos de trabajo y la evaluación de tiras de ensayo se incubaron utilizandoEUROLineScanSe requieren papel verde y hojas de plástico adhesivo: ZD 9880 a 0101 Libro Verde (1 hoja)ZD 9885-0116 lámina adhesiva para aprox. 16 tiras de pruebaZD 9885-0130 lámina adhesiva para aprox. 30 tiras de prueba

Componentes Formato Simbolo1. Tiras cubiertas con Antígenos: 1 x 16 TIRAS TIRASVP1, VLP, VP2 YNS1 de Parvovirus 8192. Positivo control 1 x 0.04 mi POS CONTROL 50x(lgG, humana), 50x concentrado3. Conjugado Enzimatico

Alkaline phosphatase-marcada anti-humana-lgG (cabra), 1 x 3 mi CONJUGADO 10x10x concentrado

4. Universal buffer 1 x 50 mi BUFFER 10x1Oxconcentrado5. Sustrato 1 x 30 mi SUBSTRATON8T/8CIP, listo para usar6. Bandeja Incubación 2 x 8 Canales BANDEJA

7. Instructivo 1 Inserto ---rn Lote CE TemperaturaJiVi5l In vitro Unopened usable until

Contenido del Kit

Principios de la prueba: El kit de prueba EUROLlNE proporciona un ensayo cualitativo in vitro de anticuerposhumanos de la clase IgG contra los antígenos de parvovirus 819. El kit de prueba contiene tiras de ensayorecubiertas con antígenos altamente purificados. En la primera etapa de reacción, las muestras de pacientesdiluidas se incuban con las tiras de inmunotransferencia. En el caso de las muestras positivas, los anticuerposIgG específicos (también IgA e IgM) se unirán al sitio antigénico correspondiente. Para detectar los anticuerposunidos, una segunda incubación se lleva a cabo utilizando una IgG (conjugado enzimático) anti-humanomarcado con enzima que cata liza una reacción de color.

La aplicación de la Lucha contra el parvovirus B19 EUROLlNE (lgG): El anti-parvovirus B19 EUROLlNE(lgG) se basa en antígenos recombinantes altamente específicos purificados por cromatografía de afinidad quecontienen epítopos lineales y conformacionales. Al utilizar el espectro completo de antígenos, diferentesmanifestaciones de las infecciones por parvovirus 819 se pueden diagnosticar con fiabilidad.

Indicaciones: Sistema de ensayo para la determinación in vitro de anticuerpos contra el parvovirus B19 ensuero humano o plasma para el diagnóstico de eritema infeccioso. Sinónimos: eritema Megalo, enfermedadengomada, la quinta enfermedad.

ORDEN NO. Anticuerpos contra IG CLASE SUBSTRATO FORMATO

DN 2580-1601 G Antigenos Parvovirus B19 IgG Tiras 16x01 (16)Inmunoblotcubiertas con Ag.

Instrucciones

.. MedizinischeE U ROl M M U N LabordiagnostikaAG

Anticuerpos contra Parvovirus 819 (lgG) EUROLlNE

2

Advertencia: El suero de control utilizado ha dado negativo para H8sAg, y anticuerpos contra el VHC, elVIH-1 y VIH-2 utilizando inmunoensayos enzimáticos o métodos de inmunofluorescencia indirecta. Sinembargo todos los materiales deben ser tratados como un peligro potencial de infección y debe sermanejado con cuidado. Algunos de los reactivos son tóxicos (tampón, solución de sustrato). Evitar elcontacto con la piel.

Eliminación de residuos: Las muestras no diluidas de los pacientes y las tiras reactivas incubadosdeben manejarse como residuos infecciosos. Otros reactivos no necesitan ser recogidos por separado, amenos que se indique lo contrario en los reglamentos oficiales.

Almacenamiento y estabilidad: El kit de prueba debe almacenarse a una temperatura entre + 2 o C Y+8 o C. No congelar. Sin abrir, todos los componentes del kit de ensayo son estables hasta la fecha decaducidad indicada.

- Control positivo: El control es un concentrado 50x. Para la preparación de la lista para el control deuso de la cantidad requerida debe ser retirado de la botella usando una pipeta limpia y se diluyó 01:51con tampón listo para el uso universal. Ejemplo: añadir 30 I de control para 1,5 mi de tampón listo para eluso universal diluida y mezclar bien. La lista para usar diluida de control se debe utilizar en el mismo díade trabajo.- Enzima conjugado: La enzima conjugada se suministra como un concentrado 10x. Para lapreparación de la enzima listo para uso conjugar la cantidad requerida debe ser retirado de la botellausando una pipeta limpia y se diluyeron 1:10 con el tampón listo para el uso universal de diluido.Ejemplo: Para1 tira de prueba diluido 0,15 mi de anti-lgG humana se concentran con 1,35 mi listos para el usouniversal de tampón diluido. La lista para usar diluida conjugado enzimático se debe utilizar en el mismodía laborable.- Tampón universal: El tampón universal se suministra como un concentrado 10x. Para la preparaciónde la lista para el uso universal de tampón de agitar la botella. La cantidad requerida se debe quitar de labotella usando una pipeta limpia y se diluyó 1:10 con agua desionizada o destilada. Por ejemplo: para 1tira reactiva añadir 1,5 mi de tampón universales (concentrado 10x) a 13,5 mi de agua destilada odesionizada. La lista para el uso universal de tampón diluido debe utilizarse en el mismo día de trabajo.- Solución de sustrato: Listo para su uso. Cerrar el frasco inmediatamente después de su uso, ya queel contenido es sensible a la luz.

- Tiras de prueba recubierta: Listo para su uso. Abrir el paquete con las tiras de prueba sólo cuando lastiras de alcanzar, la temperatura ambiente (+ 18 o C a + 25 o C) para evitar la condensación en las tiras.Después de la retirada de las tiras del paquete debe estar cerradas herméticamente y se almacenó a + 2o C y + 8 o C.

Nota: Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente (+ 18 o C a + 25 o C) aprox. 30 minutosantes de usar. Después del primer uso, los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicadasi se almacena a + 2 o e y + 8 o C y protegido de la contaminación, a menos que se indique lo contrarioa continuación.

Preparación y Estabilidad de los Reactivos

Si desea realizar una evaluación visual, puede solicitar el protocolo de evaluación exigidos por:ZD 2580-0101 protocolo de evaluación visual-anti-parvovirus 819 EUROLlNE.

MedizinischeLabordiagnostikaAGEUROIMMUN

3

Para la incubación automatizado con el EUROBlotMaster seleccionar el programa Euro02 Inf WB30.

Evaluar:Tira reactiva lugar en el protocolo de evaluación, secar al aire y evaluar.

Stop:Aspirar el líquido de cada canal y lavar cada tira de 3 x 1 minuto con agua desionizada o destilada.

Incubación del sustrato (Paso 3):Pipetear 1,5 mi de solución de sustrato en los canales de la bandeja de incubación. Incubar durante 10minutos a temperatura ambiente (+ 18 o C a + 25 o C) en un agitador de balanceo.

Lavar:Aspirar el líquido de cada canal. Lávese como se describe anteriormente.

Incubación del conjugado (Paso 2):Pipetear 1,5 mi de conjugado enzima diluida (fosfatasa alcalina conjugada anti-lgG humana) en cada canal yse incuba durante 30 minutos a temperatura ambiente (+ 18 o C a + 25 o C) en un agitador de balanceo.

Lavar:Aspirar el líquido de cada canal y lavar 3 x 5 minutos cada uno con 1,5 mi de tampón universal de laconcentración de trabajo en un agitador de balanceo.

Incubación de muestras (Paso 1):Llenar cada canal con 1,5 mi de las muestras de suero diluidas y se incuba a temperatura ambiente (+ 18 o Ca + 25 o C) durante 30 minutos en un agitador de balanceo.

Pretratamiento:Llenar los canales de la bandeja de incubación de acuerdo con el número de muestras de suero a ensayarcon 1,5 mi de tampón listo para el uso universal diluido cada uno. Retire la cantidad necesaria de tiras deprueba de los envases utilizando un par de pinzas y los colocan una a una en los canales que contiene eltampón. El número que aparece en la tira de prueba debe ser visible.Incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente en un agitador de balanceo. Después de aspirar todo ellíquido.

Incubación

Dilución de la muestra: Las muestras de los pacientes para el análisis se diluyen 1:51 con tampón listopara su uso universal, diluida. Por ejemplo, añadir 30 I de suero de 1,5 mi de tampón listo para el usouniversal diluida y mezclar bien con un vórtex. pipetas de muestras no son adecuados para la mezcla.

Estabilidad: Las muestras de pacientes que se investigue en general, se puede almacenar a + 2 o C y +8 o C durante un máximo de 14 dias. Las muestras diluidas deben incubarse dentro de un día de trabajo.

Material de muestra: Suero humano o EDTA, heparina o citrato en plasma.

Preparación y Estabilidad de las Muestras

MedizinischeLabordiagnostikaAGEUROIMMUN

4

Evaluaclon e tnterpretacron eleResultados

Anti-Parvovirus 819

EvaluaciónEUROLineScan (digital)

Paso 3: Incubar SustratoAspirate todo, pipetear 1.5 mi de sustrato en cada canal

10 min Agitar

-~

DetenerAspirar todo, lavar 3 veces con 1.5 mi de agua destilada.

PretratamientoPipetear 1,5 mi de buffer universal en el canal de incubación e

insertar la tira reactiva

15min Agitar

~

Paso 1: Incubación MuestraAspirar, pipetear 1,5 mi de muestra de suero diluido

(1:51) en el canal de incubación.

30min Agitar

~

LavarAspirar todo, lavar 3 x 5 min con 1.5 mi de Buffer

Universal en cada canal

Paso 2: Incubar ConjugadoAspirar todo, pipetear 1.5 mi conjugado en cada canal

30 minAgitar

~

LavarAspirate off, wash 3 x 5 min with 1.5 mi working strength

universal buffer each

PROTOCOLO

EUROIMMUNAnti-Parvovirus 819 EUROLlNE

~• • •••• •Me diz in is c h eLabordiagnostikaAGEUROIMMUN

IgGIgMControl

NS1

VP2

VLP

VP1

5

Control: La incubación de control que indica que la técnica se realizacorrectamente

Control bandas:IgG or IgM

NS1 (No estructural protein 1):Antígeno recombinante purificado por cromatografía de afinidad.

VP2 (proteina viral 2):Proteína estructural del parvovirus humano B19. antígeno recombinantealtamente específico con epítopos predominantemente lineales purificadas porcromatografía de afinidad.

VLP (Virus como particula):Partícula del virus del parvovirus humano B19. Antígeno recombinante altamenteespecífico purificado por cromatografía de afinidad que también contieneepítopos conformacionales. Antígenos recombinantes específicos purificados porcromatografía de afinidad.

VP1 (proteina viral 1):Proteína estructural del parvovirus humano B19. Antígeno recombinantealtamente específico con epítopos predominantemente lineales purificadas porcromatografía de afinidad.

Antígenos y su distribución en las tiras

Manejo: Para la evaluación de tiras de ensayo se incubaron lo general serecomienda el uso del software EUROLineScan. Después de detener la reacciónusando agua desionizada o destilada, colocar las tiras de ensayo se incubaron en lalámina adhesiva de la protocolo de trabajo verde usando un par de pinzas. Laposición de las tiras de prueba se puede corregir antes de que se están mojadas. Tanpronto como todas las tiras de prueba se han colocado en el protocolo, que debe serpresionado con fuerza sobre papel de filtro y se dejan secar al aire. Después de quese hayan secado, las tiras de prueba serán pegados a la lámina adhesiva. Las tirasreactivas secas (con las fichas que contienen los lípidos de membrana que muestranun fondo brillante) son entonces digitalizadas mediante un escáner de superficieplana (EUROIMMUN AG) y evaluado con EUROLineScan. Para obtener informacióngeneral acerca del programa EUROLineScan consulte el manual de usuarioEUROLineScan (EUROIMMUN AG). El código para entrar en el ensayo en eurolineScan es parvo EL IgG.Si una evaluación visual debe realizarse, colocar las tiras de ensayo se incubaron enel protocolo de trabajo correspondiente para la evaluación visual. Este protocolo estádisponible en EUROIMMUN bajo el nOde pedido. ZD 2580 a 0101.

Nota: Un ensayo realizado correctamente para anticuerpos IgG contra losantígenos de clase Parvovirus B19 se indica mediante una reacción positivade la banda de control y la banda de IgG. Si una de estas bandas muestrauna reacción muy débil o ninguno en absoluto, el resultado no debe serutilizado para la evaluación.

UNE (lgG)

MedizinischeLabordiagnostikaAGEUROIMMUN

65 muestras de pacientes previamente caracterizados (Labquality, Finlandia; instancia ydel Instituto de referencia para Bioanalytics, Alemania) fueron examinados con laEUROIMMUN anti-parvovirus B19 EUROLlNE (lgG). La prueba mostró una sensibilidaddel 98% y una especificidad del 100%.

EUROIMMUNAnti-Parvovirus B19 EUROLlNE

(lgG)

Labquality/lNST ANOIReference Institute forBioanal icsn = 65

+

La sensibilidad y la especificidad:Resultados Intralaboratorios

Interferencia: Hemólisis, Ictericia y Lipemia. Hasta una concentración de 5 mg / mi parala hemoglobina, de 20 mg / mi para los triglicéridos y de 0,4 mg / mi para la bilirrubinano mostró ningún efecto en los resultados analíticos de la presente EUROLlNE.

Inter e intra-ensayo de variación: La variación inter-ensayo y la variación intra-ensayose determinaron mediante múltiples análisis de muestras caracterizadas lo largo devarios días. En todos los casos, la intensidad de las bandas estaba dentro del intervaloespecificado. Este EUROLlNE muestra excelente reproducibilidad inter e intra-ensayo.

Rango de medición: El EUROLlNE es un método cualitativo. No se proporciona ningúnrango de medición. El límite de título se da a una dilución 1:51.

Características del Test

Resultado CaracteristicasNegativo No hay bandas o hasta dos bandas de antígeno límite en VP1, VLP Y/ r VP2.Borderline Tres bandas de antígeno límite en VP1, VP2 y VLP.Positivo Una banda de antígeno positivo mínima en VP1, VP2 de VLP.

Evaluación IgG: Los resultados de la Anti-Parvovirus 819 EUROLlNE se puede dividiren resultados negativos, dudosos y positivos. Los anticuerpos contra NS1 no tienenrelevancia en el diagnóstico pero de acuerdo a la literatura que se pueden detectar porejemplo en pacientes con formas de artritis reactiva causada por parvovirus 819.

Señal Intensidad de Señal ResultadosEUROLineScan

Sin señalo Señal muy débil 0-11 o NegativoSeñal débil 12 - 18 (+) BorderlineSeñal media a Fuerte >18 + Positivo

Se recomienda que los resultados de las bandas se clasifiquen de acuerdo con laintensidad de la señal:

Anticuerpos de clase IgG contra Parvovirus 819

.MMM

En los niños el parvovirus B19 causa el eritema infeccioso. El exantema generalmentecomienza con un intenso enrojecimiento e hinchazón en las mejillas (forma demariposa; "abofeteó la mejilla"). grandes áreas individuales de color rojo vivo seencuentran en la frente y alrededor de las orejas. El exantema se extiende hacia el ladoextensor de los brazos, así como los glúteos y las piernas. Las extremidades son losmás afectados; superficies de las manos y los pies también pueden ser afectados. Eltronco no se ve afectada en gran medida, y las mucosas permanecer libres deexantema. El exantema es característicamente en forma de guirnalda o en forma dered. Su duración es de 6 a 21 días y se calma con una forma ondulada. Así comoexantema, inflamación de los ganglios linfáticos y los síntomas parecidos a la gripe seobservan con frecuencia. Los síntomas acompañantes son ocasionalmente prurito,temperatura subfebrile y artralgias. artritis simétrica de las pequeñas articulacionespuede ocurrir como una complicación en los niños. Una infección aguda 810 también

Parvovirus B19 se transmite a través de gotitas, contacto con la piel, a través de lasangre o hemoderivados o placentalmente. El tiempo de incubación es de 4 a 14 días,ocasionalmente 3 a 17 días. El virus puede ser detectado en el suero de la personainfectada entre el tercero y el día 16 después de la infección. Cuando aparece elexantema el paciente ya no es infecciosa.Típicamente dolores de cabeza, picazón, mialgia y fiebre se producen en la fase depródromo. Infecciones B19 frescas (lgM anti-819) pueden ocurrir en todos los gruposde edad. Las infecciones agudas se encuentran con mayor frecuencia en los 6 a 15años de edad. La prevalencia de anticuerpos contra el parvovirus B19 (anti-B19 IgG)aumenta con la edad. En Alemania, esto equivale a alrededor del 35% durante 4 a 6años de edad, 58% de 10 a 15 años de edad, el 70% de 25 a 29 años y el 79% para losde 65 a 69 años de edad.

El virus ataca a un receptor sobre los eritrocitos, el antígeno del grupo sanguíneo Pglobósido.Infecciones 819 (quinta enfermedad, eritema infeccioso, megaloerythema, laenfermedad de la etiqueta engomada) se producen en todo el mundo, principalmenteen primavera. Se producen en las epidemias locales, especialmente en los niños deguardería centros, las escuelas, las familias y los hospitales. En Europa central que sepueden describir como endémica.

Parvovirus B19 es el más pequeño ("parvo") conocido virus, con una longitud delgenoma de 5000 a 5500 pares de bases. Es un virus de hebra única de ADN de lafamilia de Parvoviridae y tiene un diámetro de 21 a 23 nm. El virus se compone de dostipos virales proteínas estructurales (mayor y menor de especies de proteínasestructurales), que forman una cápside icosaedrica. Hasta el descubrimiento debocavirus humano en 2005, parvovirus B19 era el único conocido virus patógenoestrictamente humano del género eritrovirus.Su replicación tiene lugar predominantemente en las células hematopoyéticas.Parvovirus fue descubierto en los donantes de sangre en 1974 por el virólogoaustraliano Yvonne Cossart. Se obtiene su nombre de B19 muestra en la que seencontró por casualidad. El virus tiene una variabilidad de la secuencia baja. Hastaahora tres genotipos diferentes (genotipos 1-3) han sido identificados. Parvovirus 819se caracteriza por una estabilidad muy alta con respecto a los factores ambientales ydetergentes.

Importancia Clínica

La detección de anti-819 IgM indica una infección 819 fresco. Anti-819 IgM se puededetectar de todo10 días hasta 3 a 5 meses después de la infección. Anti-819 IgG aparece al final de latercera semana después de la infección en la primera y se supone que persisten toda lavida. Para reducir el tiempo de infección, la avidez de los anticuerpos IgG específicos(de avidez de IgG anti-819) se determina mediante ELlSA de microtitulación. Estemétodo proporciona resultados fiables, en particular cuando anti-819 IgM está ausente.Alta avidez excluye las infecciones dentro de las últimas 4 a 6 semanas.Las medidas terapéuticas se limitan a tratar los síntomas. Con hidropesía fetalintrauterina una exanguinotransfusión puede mejorar sustancialmente el pronóstico.Una vacuna se encuentra en desarrollo.

Debido a las diferentes manifestaciones de una infección de 819 es necesario paraconfirmar o excluir una infección 819 aguda. La detección de antígeno 819 o ADN(PCR) desempeña un papel secundario en el diagnóstico, ya que los pacientes en laetapa de viremia de una infección de 819 son en su mayoría asintomáticos. Por lotanto, la detección de anticuerpos específicos de 819 (819 Anti-lgG e IgM) es departicular importancia. Diagnóstico de una infección de 819 se forma realizó medianteELlSA o inmunotransferencia, que detectan selectivamente anti-819 IgG o IgM anti-819usando una proteína estructural viral como antígeno.

En los adultos, la infección puede provocar eritema acral y la artritis (poliartropatíasimétrica aguda), que es difícil diferenciar clínicamente de la poliartritis crónica. 17% a33% de todos los casos la inflamación del músculo del corazón se puede atribuir alparvovirus 819.Parvovirus 819 se multiplica en erythroblastocytes, causando anemia temporal. Lainfección puede conducir a complicaciones e incluso la muerte en pacientesinmunocomprometidos. La condición "aplasia pura de células rojas" descrito enpacientes con SIDA es causado por la infección crónica 819.infecciones Diaplacental 819 durante el embarazo puede dar lugar, a través de lainhibición de la eritropoyesis fetal, anemia, hipoxia y en casos extremos a la hidropesíafetal (en torno al 12% de loscasos) y la muerte fetal. Otros síntomas son causados por hipoproteinemia: edema,derrame pericárdico y pleural, ascitis.Quinta enfermedad clínicamente, es a menudo difícil de distinguir de la rubéola. Por lotanto, los médicos a menudo se basan en la serología (lgM anti-819 / IgG). En losadultos, en particular, quinta enfermedad a menudo procede con exantema atípico.La sangre de banco no está actualmente probada para el virus 819. Desde 819personas infectadas son en su mayoría todavía asintomáticas en la fase de viremia,pueden ocurrir infecciones del virus 819 a través de la transfusión. Pruebas realizadasen Alemania y Francia mostraron una prevalencia del virus 819 en la sangre de bancode 0,01 a 0,03%. Desde la detección del antígeno 819 es mucho tiempo, los pacientesde alto riesgo sólo debe administrarse sangre que ha dado positivo para anti-819 IgG.arterial anti-8 19 IgG positivo ya no contiene el virus 819.

puede proceder con la púrpura de Henoch-Schoenlein o desencadenar diversasenfermedades, tales como pseudoappendicitis, coxitis, la enteritis, la miocarditis, laneuropatía del plexo braquial, y eritema nudoso.

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