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EVALUACION DE ANTICUERPOS CONTRA LA ENFERMEDAD DE
NEWCASTLE MEDIANTE LA TECNICA DE INHIBICION DE LA
HEMAGLUTINACION POSTERIOR A LA VACUNACION EN CODORNICES
MYRIAM LUZ URAZAN RINCON
OLGA LUCIA VASQUEZ DUARTE
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar el título de
MICROBIOLOGA AGRICOLA Y VETERINARIA
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA AGRICOLA Y VETERINARIA
SANTAFÉ DE BOGOTÁ D.C.
2001
EVALUACION DE ANTICUERPOS CONTRA LA ENFERMEDAD DE
NEWCASTLE MEDIANTE LA TECNICA DE INHIBICION DE LA
HEMAGLUTINACION POSTERIOR A LA VACUNACION EN CODORNICES
MYRIAM LUZ URAZAN RINCON
OLGA LUCIA VASQUEZ DUARTE
_______________________ Director
DR. NESTOR MOSSOS Laboratorio de Medicina Aviar
ICA-CEISA
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA AGRICOLA Y VETERINARIA
SANTAFÉ DE BOGOTÁ D.C.
2001
EVALUACION DE ANTICUERPOS CONTRA LA ENFERMEDAD DE
NEWCASTLE MEDIANTE LA TECNICA DE INHIBICION DE LA
HEMAGLUTINACION POSTERIOR A LA VACUNACION EN CODORNICES
MYRIAM LUZ URAZAN RINCON
OLGA LUCIA VASQUEZ DUARTE
_____________________ _____________________
DR. GUSTAVO CARDENAS DR. ORLANDO TORRES
MEDICO VETERINARIO MEDICO VETERINARIO
JURADO JURADO
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA AGRICOLA Y VETERINARIA
SANTAFÉ DE BOGOTÁ D.C.
2001
EVALUACION DE ANTICUERPOS CONTRA LA ENFERMEDAD DE
NEWCASTLE MEDIANTE LA TECNICA DE INHIBICION DE LA
HEMAGLUTINACION POSTERIOR A LA VACUNACION EN CODORNICES
MYRIAM LUZ URAZAN RINCON
OLGA LUCIA VASQUEZ DUARTE
_____________________ ______________________
DR. CARLOS CORREDOR DRA. AURA ROSA MANASCERO DECANO ACADEMICO DIRECTORA CARRERA FACULTAD DE CIENCIAS MICROBIOLOGIA
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA AGRICOLA Y VETERINARIA
SANTAFÉ DE BOGOTÁ D.C.
2001
DEDICATORIA
Agradezco profundamente a Dios, a mis padres
por su apoyo, paciencia y fortaleza en cada
momento de mi vida y más aún durante el
desarrollo de éste trabajo. A mí hermana por ser
cómplice de mis sueños brindándome su apoyo,
comprensión y cariño en los momentos más
adversos.
A ti Lina María, mi gran universo de ternura, cálido
abrazo de esperanza y amor. A Julián por compartir
experiencias que me han llenado de confianza y
alegría. A mis amigas Karolina y Olga por su
alegría, amistad y cariño.
MYRIAM.
iDEDICATORIA
Agradezco a Dios, a mis padres y hermanos por
darme el impulso y el apoyo que necesitaba para
salir adelante en esta etapa que culmina; A ti Juan
Sebastian, mi pequeñito amor por tu paciencia,
espera y amor; A mi gran amiga y compañera
Myriam, por su amistad sincera, cariño y
comprensión.
OLGA LUCIA
AGRADECIMIENTOS
Al Doctor Nestor Mossos, Médico Veterinario. Laboratorio de enfermedades
aviares, Instituto Colombiano Agropecuario ICA-CEISA y al convenio ICA-
FENAVI-FONAV, por su acertada dirección y colaboración para el desarrollo
del presente trabajo.
Al Doctor Orlando Torres, Médico Veterinario, docente de la Pontificia
Universidad Javeriana.
A la Doctora Nidia Yaneth Torres, Bacterióloga, al Doctor Gustavo, Médico
Veterinario, por su orientación y su amable disposición durante el transcurso de
la investigación.
A las Doctoras, Carolina Gallego y Aída Iveth Rojas Martínez. Médicos
Veterinarios.
Al Instituto Colombiano Agropecuario ICA-CEISA y al convenio ICA-FENAVI-
FONAV, por el apoyo financiero para el desarrollo del proyecto.
A los propietarios y trabajadores de las granjas por su valiosa ayuda y tiempo
invertido durante la investigación.
A todas las personas que de una u otra forma contribuyeron en el desarrollo y
culminación del presente trabajo.
TABLA DE CONTENIDO
PÁGINA
TABLAS
INDICE DE FIGURAS
SIGLAS Y ABREVIATURAS
RESUMEN
1. INTRODUCCION 1
2. OBJETIVO 3
2.1. GENERAL 3
2.2. ESPECIFICO 3
3. JUSTIFICACION 4
4. MARCO TEORICO 5
4.1. PRESENTACIÓN DEL VIRUS 5
4.2. ETIOLOGIA 5
4.2.1. Morfología 7
4.2.2. Composición Química 8
4.3. FORMAS DE LA ENFERMEDAD 8
4.3.1. Clasificación del Virus de Newcastle 9
4.3.2. Replicación Viral 10
4.3.2.1. La Replicación Viral Intracelular 10
4.3.2.2. Resistencia Del Virus 11
4.3.3. Cultivo y Desarrollo del Virus 11
4.3.3.1. Cultivo Celular del Virus 12
4.4. CARACTERÍSTICAS DE LA ENFERMEDAD 13
4.4.1. Signos Clínicos. Morbilidad y Mortalidad 13
4.5 . INMUNIDAD 15
4.5.1. Sis tema Inmune del Ave 16
4.5.1.1. Inmunidad Humoral 17
4.5.1.2. Inmunidad Mediada por Células 17
4.5.1.3. Respuesta Inmune 18
4.5.1.4. Inmunosupresión 18
4.6. DIAGNOSTICO 19
4.6.1. Inhibición de la Hemaglutinación 21
4.7. PROCESO EPIZOOTICO 22
4.7.1. Reservorio del Virus 22
4.7.2. Transmisión 22
4.7.2.1. Transmisión Horizontal 23
4.7.2.2. Transmisión Vertical 24
4.7.3. Periodo de Incubación 24
4.8. HUESPEDES AVIARES 25
4.9. COMPOSICION ANTIGÉNICA DEL VIRUS 26
4.10. ENFERMEDAD 27
4.11. FORMAS DE PROPAGACION DE LA ENFERMEDAD 29
4.12. VACUNACION 30
4.12.1. Vacunas Inactivadas 31
4.12.1.1. Métodos de producción de las vacunas inactivadas 32
4.12.2. Vacunas vivas 33
4.12.3. Aplicación de vacunas vivas 33
4.13. TÉCNICAS DE INOCULACIÓN 35
4.14. POTENCIA DE LA VACUNA 40
4.14.1. Estimaciones Serológicas 42
4.15. ORIGEN DE LA HEMAGLUTININA 42
4.15.1. Preparación De los glóbulos rojos 44
4.16. LA COTURNICULTURA 46
4.16.1. La codorniz 49
5. MATERIALES Y METODOS 51
5.1. TIPO DE ESTUDIO 51
5.1.2. Población de Estudio 51
5.1.2.1. Variables 52
5.1.3. Procedimiento para la toma de muestra 52
5.2. TRABAJO DE LABORATORIO 53
5.2.1. Montaje prueba Inhibición de la Hemaglutinación 53
5.2.1.1. Titulación del Antígeno 53
5.2.1.2. Cálculo de las unidades hemaglutinantes 55
5.2.1.2.1. Control de las unidades hemaglutinantes 55
5.2.1.3. Inhibición de la Hemaglutinación 56
5.2.2. Preparación de Glóbulos rojos. 58
6. ANÁLISIS ESTADISTICO 59
6.1. Tipo de variable 59
6.1.1. Medida de tendencia central 59
6.2. Hipótesis de trabajo 60
6.2.1. Interpretación de la hipótesis nula 60
6.2.2. Prueba de la hipótesis 60
6.2.3. Regla de decisión 60
6.3. OBTENCION DE LOS RESULTADOS 61
6.3.1. Estimación de la proporción 61
6.3.2. Cálculo del estadístico de prueba 61
6.3.3. Regla de decisión 61
7. RESULTADOS Y DISCUSION 62
7.1. Resultados obtenidos con glóbulos rojos de pollo
SPF mediante Inhibición de la Hemaglutinación 62
7.2. Resultados obtenidos con glóbulos rojos de codorniz
mediante Inhibición de la Hemaglutinación 63
8. CONCLUSIONES 67
9. RECOMENDACIONES 68
10. BIBLIOGRAFIA 69
11. ANEXOS 73
RESUMEN
El objetivo del presente trabajo fue determinar los perfiles serológicos para la
enfermedad de Newcastle en lotes de codornices vacunadas previamente
contra esta enfermedad. Para tal fin se seleccionaron ocho diferentes
explotaciones de codornices en producción post-vacunadas contra Newcastle y
localizadas en los municipios de Tenjo, Funza, Sasaima, Cáqueza, Fosca,
Sáname y Sabana de Bogotá. Se analizaron los resultados con base en la
edad, raza, ciclo de producción de las aves al momento del muestreo. Se utilizó
la técnica de Inhibición de la Hemaglutinación (IH), la cual es el sistema
diagnóstico de mayor difusión para la detección de anticuerpos.
Las aves fueron vacunadas contra la enfermedad de Marek al día de edad y
recibieron dos vacunas a virus vivo de Newcastle (cepas B1 y F) a los 10 y 18
días de edad. La ruta de aplicación de las vacunas de Newcastle fue ocular.
Con el fin de comparar los resultados se conformó una granja como grupo
control la cual no fue vacunada contra la enfermedad de Newcastle.
Se seleccionaron 20 aves de cada grupo, las cuales fueron sangradas por
punsión alar entre los 28 días y las 42 semanas de edad. Los sueros fueron
procesados y los títulos determinados para cada grupo de aves.
El resultado serológico fue negativo para la presencia de anticuerpos en las
aves de todos los grupos experimentales. Existen escasos estudios en
codornices sobre la respuesta inmunológica a la enfermedad y a las
vacunaciones. Sin embargo, estos resultados dificultan la evaluación del estado
serológico de las codornices posterior a la vacunación, lo que repercute en la
efectividad de los seguimientos de aves portadoras o enfermas necesarios de
detectar en los programas de control y erradicación de la enfermedad, como el
que en la actualidad se viene desarrollando en el país.
Se recomienda continuar con investigaciones similares y en otras áreas
avícolas, tanto en codornices como en otras especies (pavos, faisanes, aves
exóticas y silvestres) con el fin de establecer si el comportamiento serológico
es similar al obtenido en el presente estudio.
Igualmente, se recomienda investigar en el desarrollo y aplicación de otras
técnicas diagnósticas que permitan establecer el estado inmune de las
codornices contra la enfermedad de Newcastle.
1. INTRODUCCION
La Enfermedad de Newcastle es la patología de mayor importancia en la
industria avícola mundial y a pesar del esfuerzo individual de los técnicos
asesores por salvaguardar sus intereses económicos mediante el diseño de
planes de vacunación, la enfermedad de Newcastle continua siendo una
amenaza económica para la industria avícola y de la coturnicultura, debido a la
presencia de cepas (velogénicas) en muchas áreas del mundo que pueden
difundirse con facilidad a través del tráfico de especies aviares comerciales o
no convencionales tales como las codornices, aves silvestres y exóticas.
A raiz de la extensión de la enfermedad en muchas áreas avícolas del mundo,
en la década de los 70 se desarrollaron las vacunas vivas de Newcastle para
conferir protección a las aves, posteriormente surgieron las vacunas
inactivadas con las cuales se prolongaba el período de protección contra la
infección del virus de campo. La evaluación de los resultados posvacunales ha
sido realizada tradicionalmente con la detección de anticuerpos mediante las
pruebas serológicas, en particular la Inhibición de la hemaglutinación (IH). Sin
embargo, tal evaluación rutinaria no es efectuada por muchos avicultores y en
su gran mayoría es ausente entre los coturnicultores por los costos y la
dificultad en la evaluación.
En Colombia se inició en el año 1999 el programa Nacional de Control y
erradicación de la Enfermedad de Newcastle que se basa en el desarrollo de
inmunidad en todas las especies aviares, comerciales o silvestres como
resultado de la vacunación masiva. Por lo anterior, se considera necesario
hacer un seguimiento del estado inmune de las codornices comerciales en
producción, en las diferentes zonas avícolas del país con el fin de contribuir con
el éxito del programa de erradicación.
Con este trabajo se pretende establecer un perfil de niveles de anticuerpos en
codonices localizadas en el departamento de Cundinamarca, que permita
evaluar el estado inmune de las aves y la posible imodificación en los
esquemas vacunales que garanticen la protección de esta especie contra la
infección y difusión de la enfermedad de Newcastle.
2. OBJETIVOS
2.1. GENERAL
Determinar los títulos de anticuerpos presentes contra la enfermedad de
Newcastle, a partir de sueros de codornices vacunadas contra el virus de
Newcastle.
2.2. ESPECIFICOS
1. Determinar si la vacuna de Newcastle estimula niveles de anticuerpos
adecuados para la protección contra la Enfermedad de Newcastle en
codornices.
2. Establecer los perfiles de anticuerpos inducidos por la vacuna en
codornices de diferentes edades, raza y ubicación en el departamento
de Cundinamarca..
3. Detectar la reactividad serológica para la enfermedad de Newcastle en
lotes de codornices no vacunadas contra la enfermedad (control).
3. JUSTIFICACION
Dentro de la avicultura Nacional se viene desarrollando en los últimos años una
rama de extraordinaria importancia denominada técnicamente coturnicultura, la
cual se fundamente en la cría, desarrollo y fomento de la producción y
aprovechamiento de sus productos carne y huevos.
La importancia que ha adquirido esta industria es consecuencia de las
extraordinarias ventajas fisiológicas que posee la codorniz como son: la
precocidad en la postura, rápido crecimiento, bajo consumo de alimento y
resistencia de enfermedades, entre otras.
Debido a esta posible resistencia a enfermedades infecciosas y a la poca
información sobre el efecto del virus de Newcastle en esta especie, algunos
coturnicultores no ven en la necesidad de vacunar contra la enfermedad.
En Colombia, existe el convenio ICA-FENAVI-FONAV, el cual tiene entre otros
programas, el proyecto de erradicación del virus de Newcastle en aves
localizadas en las principales áreas avícolas. Con esta investigación se
pretende contribuir en la estrategia para la protección y prevención de la
enfermedad en codornices, dentro del marco del proyecto nacional.
4. MARCO TEORICO
4.1. PRESENTACION
La enfermedad de Newcastle se observó por primera vez en 1926 en Asia,
llegando desde allí por vía marítima hasta Inglaterra. En los años siguientes la
enfermedad se difundió a escala mundial. En 1940-48 y 1968-72 se registraron
sendas panzootias. En la actualidad se diagnostican en muchos países formas
enzoóticas de curso suave. Las cepas de virus velófenos viscerotropos no son
vernáculas en USA, Canadá, Australia y algunos países europeos (entre ellos
Alemania).
El Newcastle es una enfermedad específica y altamente contagiosa que afecta
a los pollos, pavo y otras aves domésticas, algunas silvestres, siendo de gran
importancia económica para la industria avícola Nacional.
La distribución de la enfermedad de Newcastle depende de los intentos de
erradicación y control que se lleva acabo en los diferentes países, a su vez
influyen en el éxito de tales medidas la naturaleza de la industria avícola, así
como la diseminación de la enfermedad, se ha concluido que la enfermedad se
encuentra en muchos países de Africa, Asia y América (Calnek, 1995).
4.2. ETIOLOGIA
El virus de la enfermedad de NewCastle es un paramixovirus. Dentro de este
género existen nueve serogrupos (PMV-1 aPMV-9) entre los cuales el virus de
la enfermedad de Newcastle o paramixovirus 1 (PMV-1) es el patógeno más
importante que afecta todo tipo de aves. Sin embargo, PMV-2 y PMV-3 pueden
causar enfermedad seria en pollos y pavos. (Mohanty.1983)
Los virus de la familia paramixoviridae son virus RNA que presentan simetría
de la cápside en hélice con genoma sencillo no segmentado de polaridad
negativa. Son envueltos y la envoltura se forma de membrana celular
modificada conforme el virus brota de la superficie celular después de que la
cápside se ensambla en el citoplasma.
Su forma es más o menos esférica, aunque también son comunes las formas
pleomórficas. Las partículas típicas de virus tienen de 100 a 300 milimicrones
de diámetro (Allan, 1995). La envolvente contiene la franja de mixovirus
compuesta de hemoaglutina y protín neuroamidásica. Bajo las proyecciones
sobre envolvente hay un estrato y se altera el virión.
La componente interna de la ribonucleo-proteína forma una hélice simétrica,
con una periodicidad de cerca de 17 milimicrones. El virus es ácido
ribonucléico, y con un solo filamento. Genéticamente se cree que puede ser
diploide o poliploide (Granoff, 1964).
El ácido ribonucléico purificado no es infeccioso, tiene un solo filamento y un
peso molecular de 107, aproximadamente.
El agente causal de la EN es un virus RNA, de 120-300 nm de tamaño, dotado
de envoltura y pleomorfo, que constituye la especie virus de la enfermedad de
Newcastle, perteneciente al género Paramyxovirus, de la familia
myxoviridae. Posee hemoaglutinina y neuraminidasa. Todas las cepas
causales pertenecen al serotipo PMV-1. Se producen reacciones cruzadas con
otros serotipos aviares del género Paramyxovirus, en especial con el PMV-3
(infección de Wisconsin de gallinas y pavos). Aun cuando son serológicamente
idénticas, las cepas de virus EN difieren notablemente en su virulencia para los
animales afectados. Se distinguen cepas velógenas de elevada virulencia, y
cepas lentógenas de virulencia débil o casi virulentas. Estas características es
genéticamente estable.(Calbert,1994)
4.2.1. MORFOLOGIA.
La microscopia electrónica de contraste negativo de los miembros del género
paramyxovirus muestra partículas virales muy pleomórficas. Por lo general,
son redondas y de 100 a 500 nm de diámetro, aunque a menudo se ven formas
filamentosas de casi 100 nm transversas y de longitud variable. La superf icie
de la partícula viral está cubierta con proyecciones de casi 8 nm de largo.
En casi todas las micrografías electrónicas de paramyxovirus aviares ´´la
nucleocápside´´ ´´hueso espigado´´, de casi 18 nm transversal, puede verse
libre o emergido de las partículas virales desorganizadas. (Figura 1).
4.2.2. COMPOSICIÓN QUÍMICA.
El virus de Newcastle pose un genoma sencillo de ácido ribonucléico (RNA) de
cadena sencilla, tienen seis proteínas entre ellas las más importantes son la
HN(hemaglutina-Neuraminidasa), la F (proteína de fusión) que formas las
proyecciones superficiales más pequeñas, proteína nucleocápside NP;
fosforilasa P.(Clavijo.1991).
La proteína HN es la responsable por la actividad hemoaglutinante o por la
adhesión del virus a receptores presentes en los glóbulos rojos y por la
actividad neuraminidasa representada por la consecuente elución o separación
de glóbulos rojos hemoaglutinados. Esta proteína está constituida por las
proyecciones más grandes de las dos que se observa en la superficie del virus.
La proteína F es la responsable de la adhesión de la membrana del virus con la
membrana de la célula huésped durante el ciclo de replicación y constituye las
proyecciones más pequeñas de la superficie del virus. (Ceballos.1993)
La enzima neuraminidasa (hidrolasa neuraminilN-acetilmucopolisacárido)
también es parte de la molécula HN y está presente en todos los miembros del
género paramixovirus. Una consecuencia obvia de la presentación de esta
enzima es la elución gradual de eritrocitos aglutinados, se ha propuesto que la
enzima actúa en el sitio receptor facilitando la suficiente proximidad para la
proteína F y efectuar la fusión del virus y las membranas celulares.
El virus de la enfermedad de Newcastle y otros paramixovirus pueden provocar
la hemólisis de eritrocitos o la fusión de otras células, de manera esencial por el
mismo mecanismo.
A la adherencia al sitio receptor durante la replicación sigue la fusión de dos o
más células, la rígida membrana de eritrocitos, por lo general, resulta en la lisis
de la fusión de la membrana viral. (Clavijo.1991)
Las glicoproteínas contienen los determinantes antigénicos desencadenantes
de la respuesta inmune, las unidades de proteína estructural del tubo están
colocadas en forma de hélice alrededor del eje central, dando la conformación
típica de ácido ribonucléico monocatenario.
La neuraminidasa, tiene como función la penetración del virus en la mucosa
respiratoria, la hemaglutinina cumple el reconocimiento de las células blanco.
La respuesta en contra con la porción F, impide la diseminación del virus de
célula a célula; el componente interno del virus llamado antígeno G o NP, tiene
forma de espina con simetría helicoidal. (Ceballos, 1993)
4.3. FORMAS DE LA ENFERMEDAD
El virus de Newcastle está ampliamente distribuido por todo el mundo y afecta
diferentes especies aviares causando una enfermedad que varía en severidad
dependiendo de la cepa que esta involucrada. El principal objetivo de clasificar
las cepas del virus de la enfermedad es distinguir cepas de alta y baja
patogenicidad para las aves, también se toma el tiempo que tardan en matar
embriones de pollo.(Beard,1984).
4.3.1. CLASIFICACION.
Los virus de la enfermedad de Newcastle se han clasificado según su virulencia
para los pollos; las cepas pertenecen, por lo general a uno de los tres tipos
siguientes: lentógeno, mesógeno, velógeno. (Tabla Nº 1)
Los virus se han clasificado también, según sus lugares predilectos de
alojamiento, en pneumotrópios, vicerotrópicos o neurotópicos (National
Academy of Sciences,1996).
Estos términos indican la actividad máxima de una cepa determinada, revelada
por la presencia de cantidades de virus relativamente grandes y por marcados
síntomas clínicos en un determinado tejido; las cepas fuertemente
Gpneumotrópicas, por ejemplo, producen claras lesiones respiratorias y
pueden causar insuficiencias respiratorias de diverso grado, con síntomas de
parálisis en algunas aves. El grado en que es afectado el aparato respiratorio
depende en cierta medida, de la presencia de otros agentes infecciosos, como
los micoplasmas y el E.coli.
Las cepas viscerotópicas pueden ser del tipo benigno no virulento, como la
Ulster 2C(McFerran y Nelson.1971) por ejemplo, o la Queensland V4. Lo que
caracteriza a es te tipo de cepas no son los signos o síntomas sino el hecho de
que el virus puede localizarse muy fácilmente en el aparato intestinal, y que en
el aparato respiratorio se encuentra en concentraciones mucho menores que
las otras cepas. El virus velógeno, que es de máxima virulencia, suele ser
viscerotrópico: este tipo causa fuertes hemorragias en el proventrículo, y
pequeñas hemorragias o fuertes úlceras en el aparato intestinal. La forma
<asiática> de la enfermedad se denomina ahora, generalmente, virus velógeno
viscerotrópico de la enfermedad de Newcastle (VVEN): no todas las aves
infectadas con este ultimo virus suelen mostrar síntomas típicos (Alexande y
Allan,1994).
4.3.2. REPLICACIÓN VIRAL.
El paso inicial es la adherencia del virus a los receptores celulares, mediada
por el polipéptido HN. La fusión de las membranas celular y viral se lleva a
cabo por la acción de la proteína F, y por consiguiente el complejo de la
nucleocápside entra a la célula.(Mohanty,1983)
4.3.2.1. LA REPLICACIÓN VIRAL INTRACELULAR.
Tiene lugar por completo en el citoplasma debido a que el virus RNA tiene
sentido negativo, es necesario para la polimerasa RNA dirigir a la RNA viral
(transcriptasa), generar transcripciones complementarias de sentido positivo
que puedan actuar como mensajeros RNA, la proteína F se sintetiza como un
precursor no funcional, FO, que necesita desdoblarse a F1 yF2 por las
proteasas del huésped, las proteínas virales sintetizadas en una célula
infectada se transportan a la membrana celular, que se llega a modificar por su
incorporación.(Monhanty,1993)
4.3.2.2. RESISTENCIA DEL VIRUS.
El virus de EN es muy contagioso y muestra una resistencia bastante alta. A la
temperatura de 1000C se destruye su actividad en 1 minuto a 560C, para ello se
requiera entre 5 minutos 6 horas; a 370C, entre varias horas y días; y a 200 y a
80C, varios meses. En regiones tropicales con temperaturas en torno a los 400C
y humedad relativa ambiental del 20-30%, el virus se mantiene contagioso
como mínimo 4 semanas en cadáveres, 5 semanas en agua corriente, y más
de 8 semanas en heces, residuos y piensos para aves. En la carne de ave
congelada se conserva el virus durante años. La acción directa de los rayos
ultravioletas destruye el virus rápidamente. En la zona de pH comprendida
entre 3 y 11 es bastante estable. Los productos viricidas destruye el VEN, si
bien el elevado contenido proteico del medio en que se halla el virus retrasa la
inactivación; temperaturas por debajo del punto de congelación interrumpen el
proceso de inactivación. Por esto, para lograr una eficaz desinfección es
preciso llevar a cabo previamente una limpieza mecánica a fondo, y en
invierno, aportar calor. Desinfectantes adecuados son el Wofasteril al 1-2%,
solución formo al 5%, fesiaformo al 5% y cloramina al 5%.
4.3.3. CULTIVO Y DESARROLLO DEL VIRUS.
Todas las cepas se desarrollan en huevos en embrión, y los virus aislados no
requieren adaptación. La vía más común de inoculación es la membrana
alantoidea, en la cual puede cultivarse el virus con una concentración de
aproximadamente 109 DME50 (dosis mortal del 50 por ciento de embriones) o 0,1
ml.
Las variedades lentógenas de virus tardan más tiempo en matar al embrión,
pero se concentran en proporciones notablemente superiores a las de las
cepas velógenas que lo matan en mucho menos tiempo. La hemoaglutinación
(HA) del fluido alantoideo por el virus intacto varia entre 2000 y 8000 unidades
de HA por 0,2 ml. El virus que ha sido alterado por sonorización, o por haber
sido tratado con un solvente de lípidos, se hemoaglutinará en proporciones
mucho mayores, a causa de la división de la envolvente del virus en rosetas del
subvirus. Este virus alterado no se utiliza para las pruebas de HA ni de
inhibición de la hemoaglutinación (IH), por su tendencia a formas coágulos que
hace inestable la concentración.
La concentración del virus puede determinarse también por análisis de la
hemoaglutina: este método no es preciso, porque no permite distinguir entre
partículas infectivas y no infectivas, ni tampoco entre virus entero o rosetas de
subvirus.
4.3.3.1. CULTIVO CELULAR DEL VIRUS.
El virus puede desarrollarse en diversos sistemas de cultivo de células. Siendo
los más comúnmente utilizados los de una capa de fibroblastos de embriones
de pollo (Roman y Simon, 1976), una capa de células de riñón de pollo, y
células de riñón de hámster muy joven, ya sea en una sola capa o en
suspensión.
La concentración del virus en los sistemas de cultivo de células es usualmente
1 log inferior a la que corresponde a los huevos en embrión.
4.4. CARACTERÍSTICAS DE LA ENFERMEDAD.
La enfermedad de Newcastle (EN) es una afección infecciosa vírica de las
aves, muy contagiosa y de gran importancia económica. Curso , síntomas y
efectos económicos dependen mucho de la virulencia y afinidad orgánica del
agente causal. Las cepas velógenas viscerotropas originan una enfermedad
general entre aguda y sobreaguda, de curso hemorrágico, con intensa
participación intestinal y diarrea, y tasas de mortalidaad hasta del 100%( forma
de Doyle de la EN). Lass cepas velógenas de carácter neuro- y neumotropo
provocan una neumoencefalitis aguda, con marcados síntomas nerviosos y
respiratorios (forma Beach de la EN). La mortalidad es del 10-50%, pudiendo
llegar al 90% en los animales jóvenes. Las cepas mesógenas dan lugar a
neumoencefalitis de curso suave, y solamente en animales jóvenes motivan
una baja mortalidad (forma Beaudette). En la forma Hitchner, que está
producida por cepas lentógenas casi virulentas, la enfermedad adopta curso
clínicamente inaparente, o bien se observan sólo ligeros síntomas
respiratorios. En las aves de puesta, la EN provoca siempre una merma en
esta producción. El plazo de incubación suele ser de 4-6 días, pero puede
oscilar entre 2 y 21 días. Es posible el contagio del hombre, que manifiesta
síntomas gripoides y conjuntivitis.
4.4.1. SIGNOS CLINICOS, MORBILIDAD, Y MORTALIDAD.
Con cepas muy virulentas la enfermedad puede presentarse de manera
repentina, con alta mortalidad en ausencia de signos clínicos. En brotes en
pollos causados por la cepa velogénica viscerotropica del virus de Newcastle, a
menudo los signos clínicos comienzan con indiferencia, aumento de frecuencia
respiratoria y debilidad, terminando con postración y muerte. Este tipo de
enfermedad de Newcastle puede ocasionar edema alrededor de los ojos y
cabeza muchas veces se ve diarrea verde en aves que no mueren al principio
de la infección, y antes de morir, pueden padecer temblores musculares,
tortícolis, parálisis de patas y alas, y opistótonos. (Avellaneda, 1994)
La forma velogénica neurotrópica de la enfermedad se encuentra de manera
principal en Estados Unidos. En pollos se marca por el inicio repentino de un
problema respiratorio grave, seguido en 1 a 2 días después por signos
neurológicos. La producción de huevo disminuye de manera dramática, pero
hay pocas veces diarrea. La morbilidad puede llegar al 100%. La mortalidad por
lo común es más baja de manera considerable, aunque se registra hasta 50%
en aves adultas y 90% en aves jóvenes.(Journal.1991)
Las cepas mesogénicas del virus, por lo general, ocasionan problemas
respiratorios en infecciones de campo. En aves adultas, hay notable caída de la
producción de huevo que puede durar varias semanas. Pueden haber signos
nerviosos, pero no son comunes. La mortalidad en las aves, en general, es
baja, excepto en aves muy jóvenes y susceptibles, pero pueden verse
afectadas de manera considerable por condiciones exacerbantes.
Los virus lentogénicos generalmente no provocan enfermedad en adultos. En
aves jóvenes, susceptibles por completo, se ven problemas respiratorios
graves, frecuentemente con mortalidad, después de la infección con las cepas
más patógenas de La Sota con infecciones complicantes. La vacunación o la
infección de aves de engorde cercanas al sacrificio con estos virus, pueden
favorecer la colisepticemia o aerosaculitis con el resultante decomiso(55)
El virus que originó la panzoótia en palomas durante el decenio de 1980 indujo
signos clínicos en infecciones de campo en palomas y pollos a diferencia de los
otros virus. En ambas especies las características clínicas predominantes
fueron diarrea y signos nerviosos. En aves adultas la reducción precipitada de
la producción de huevo, mientras se registró alta mortalidad n jóvenes. Este
virus no induce signos respiratorios en infecciones sin complicaciones en
palomas y pollos. (Rojo.1987)
En la forma Hitchner la principal manifestación es respiratoria suave, en la
forma Beach de mortalidad alta presenta lesiones respiratorias y nerviosas y
con ausencia de la forma digestiva; la forma Doyle se caracteriza por lesiones
hemorrágicas severas en el intestino, diarrea verdosa mucoide, tumefacción y
edema de la cabeza, parálisis epistótonos, incordinación, espasmos, además
pueden parecer aves muertas, sin signos aparentes y en algunos casos, baja la
postura hasta cero. (Calnek.1995)
En la forma Beaudette se observan signos respiratorios y raramente nerviosos,
produce la muerte en baja proporción en pollitos y una forma benigna en aves
adultas.(Beer.1983)
4.5. INMUNIDAD.
Durante el desarrollo embrionario de las células primordiales emigran por
influencia quimiotáctica desde la membrana del saco vitelino hacia el timo y la
bolsa de Fabricio, entre los días 5-7 de incubación, se diferencian en los
folículos y se desarrollan hacia el día 12. Los linfocitos con Ig M de superficie,
se detectan en la bolsa de Fabricio al cuarto día de edad del pollito (Gordon,
1985).
Los anticuerpos específicos inhiben la producción de otros anticuerpos d la
misma especificidad, así los anticuerpos maternales también inhiben la
respuesta inmune de los recién nacidos, se cree que esto puede ser debido a
supresión central, enmascaramiento o secuestro del antígeno (Hinchapie,
1976).
Los pollitos reciben de la madre inmunoglobulinas Ig G, Ig M, e Ig A. Las Ig G
pasan a la yema, mientras que las Ig M e Ig A pasa a la clara. Así el embrión
absorbe parte de la Ig G de la yema y las Ig M e Ig A, aparecen en el líquido
amniótico siendo tragadas por el embrión. En los primeros días de nacido el
pollito absorbe totalmente el saco vitelino, momento en que el nivel de
anticuerpos maternales presentes en el animal está más alto para luego
disminuir hasta desaparecer entre los 10-20 días de edad (Gordon, 1985).
4.5.1. SISTEMA INMUNE DEL AVE.
La bolsa de Fabricio es uno de los órganos de mayor importancia en la
inmunidad aviar, capaz de madurar células B, que una vez estimuladas se
convierten en plasmocitos los cuales se encargan de producir anticuerpos. La
base anatómica de la respuesta inmune es el tejido linfoide, el timo ubicado en
la región cervical y bolsa de Fabricio en la región de cloaca (Gordon, 1985).
El componente periférico está conformado por el bazo, las tonsilas cecales, la
médula ósea y agregados de células linfoides en varios órganos y tejidos, las
células linfoides infiltran con rapidez sitios de invasión antigénica por todo el
cuerpo (Gonzalez.1988)
4.5.1.1. INMUNIDAD HUMORAL.
En la molécula de inmunoglobulina se pueden observar dos partes desde el
punto de vista funcional. La primera es la porción que se une al antígeno y por
tanto es variable, y la parte FC que es una molécula relativamente estable,
responsable de actividad biológica del anticuerpo. El estimulo por parte del
antígeno produce una fuerte multiplicación de linfocitos B que se diferencian a
células plasmáticas productoras de anticuerpos mientras que otras
permanecen como células de memoria con capacidad de respuesta superior
ante un nuevo ataque del mismo antígeno (Roit.1994)
Los anticuerpos que pueden proteger al huésped pueden medirse en pruebas
de neutralización de virus que parece ser paralela a la prueba de inhibición de
la hemaglutinación, está última se utiliza para medir la respuesta protectora, en
especial después de la vacunación. Los anticuerpos dirigidos contra los
glucopolipéptidos superficiales funcionales, los polipéptidos HN y F, pueden
neutralizar el virus de Newcastle (Russell.1988)
4.5.1.2. INMUNIDAD MEDIADA POR CÉLULAS.
Esta inmunidad está mediada principalmente por los linfocitos T, activados en
presencia de organismos infecciosos, virus, células alteradas (Bourne.1988).
La respuesta inmunitaria inicial a la infección es celular y puede ser detectable
de los 2 a 3 días después de la infección con cepas vacunales vivas. Tal vez,
esto explica la protección temprana contra el desafío que se registra en aves
vacunadas antes de tener una respuesta de anticuerpos medible. La
importancia de la inmunidad celular en la protección conferida por las vacunas
no está clara y no parece presentarse una fuerte respuesta secundaria al
desafío, similar a la respuesta de anticuerpos (Halvorson.1991)
En caso de infección viral el organismo presenta una reacción de resistencia
para su defensa. Las células infectadas por el virus están sujetas a la lísis por
linfocitos sensibilizados(Hincapie.1976)
4.5.1.3. RESPUESTA INMUNE.
Al entrar en contacto con el virus, las inmunoglobulinas interceptan y
neutralizan al antígeno para evitar su traslado a órganos vitales, lo que implica
un aumento progresivo de la concentración de antícuerpos que varía entr e dos
y tres semanas(Gordon.1985)
De igual forma células linfoides situadas en el sistema respiratorio y digestivo
específicamente, en superficie eplitelial responden al ataque viral, esto ocurre
en tres o cuatro días, está respuesta es mediada por Ig A(H incapie.1976)
En el caso de la inmunidad materna y la cantidad de anticuerpos trasmitidos,
están íntimamente relacionados con la protección en el momento de nacer los
pollitos, ya que si estos se presentan altas concentraciones estos serán
capaces de neutralizar parte del virus, si éste es vacunal podía ser captado, por
ésta razón algunos autores recomiendan la vacunación pasados 10-15 días
desde el nacimiento(Gonzales.1988)
4.5.1.4. INMUNOSUPRESIÓN.
La supresión de la respuesta inmune tiene importante efectos tanto en la
patogenicidad de cepas del virus de Newcastle infectadas como en los niveles
de protección obtenidos por vacunación. En condiciones naturales, se puede
dar la inmunosupresión debido a la infección con otros virus tales como
infección de la bolsa de fabricio. La subsecuente inmunodeficiencia puede
resultar en una enfermedad más grave ocasionada por el virus de Newcastle y
por la deficiencia en la respuesta adecuada a la vacunación(Fenner.1992)
La inmunosupresión por el agente de anemia de los pollos, se ve implicada en
el fracaso en aves para responder bien a la vacuna del virus de Newcastle
inactivada de manera secundaria (Fenner.1992)
Existen algunos factores que pueden jugar un papel importante como
inmunosupresores, entre estos se encuentran de tipo infeccioso, tóxico,
nutricional, medioambiental, etc., que disminuyen la resistencia del ave al virus
de Newcastle y a los agentes que como el micoplasma suele asociarse al
cuadro patológico(Brown.1990)
Es posible que en la actualidad se tengan cepas de Newcastle más virulentas
que en los primeros años de la avicultura, pero no es más cierto que la
inmunodepresión es tan grave, que hace a las aves más sensibles a cepas
mesogénicas, que en condiciones normales podrían ser perfectamente
controlables. El resultado es el mismo, la muerte del ave(Molina.1997)
4.6. DIAGNOSTICO.
La variabilidad del cuadro patológico y curso seguido por la enfermedad
dificulta el diagnóstico de ésta. Se sospechará la existencia de EN cuando en el
efectivo exista un proceso patológico y los datos epizootiológicos, clínicos y/o
anatomopatológicos aboguen por aquélla, o bien se determinan reacciones
positivas sobre suero sanguíneo en animales sin vacunar contra la EN. Con
objeto de aislar el virus, se enviarán para su análisis animales muertos o
enfermos y muestran de sangre. Como órganos, se preferirán cerebro,
pulmones y tonsilas ileocecales. El diagnóstico se da por seguro si se identifica
el virus de la EN (VEN) mediante aislamiento en embriones de gallina o
cultivos celulares, o cuando se reconoce por métodos serológicos (test de
inhibición de la hemoaglutinación, TNS) o por identificación directa del VEN
mediante inmunofluorescencia directa y/o descubriendo un incremento
específico de anticuerpos.
Se excluirán las infecciones por virus de la influenza (peste aviar clásica),
bronquitis infecciosa, laringotraqueítis aviar, enfermedad de Mareck, cólera
aviar, micoplasmosis, intoxicaciones y estados carenciales.
Se puede sospechar la presencia de Newcastle asociado a la historia de las
aves, los signos clínicos observados y las lesiones encontradas. Es importante
anotar que las lesiones no son siempre específicas y regulares en
presentación. Por ello el diagnóstico no siempre es fácil y es necesario recurrir
al laboratorio donde se efectúa el diagnostico definitivo de la enfermedad
haciendo varias pruebas(Villegas.1996)
Lo más importante en el control de la enfermedad es el diagnóstico correcto,
tanto de la entidad misma, como de todos aquellos factores que se asocian al
cuadro patológico. Se deben considerar varios aspectos en el diagnóstico del
Newcastle, el cuadro clínico patológico incluyendo las lesiones macro y
microscópicas, el aislamiento viral, la respuesta serológica. Actualmente este
diagnóstico esta sujeto al tiempo que demora el aislamiento viral lo que
conlleva quizás a un diagnóstico tardío(Molina.1997)
4.6.1. INHIBICIÓN DE LA HEMOAGLUTINACIÓN (IH).
Existen varios métodos comúnmente utilizados para demostrar la neutralización
del virus infec tivo o la inhibición de las hemaglutininas virales por anticuerpos
específicos, los cuales son de fácil ejecución y asequibles económicamente.
Detecta la cantidad de anticuerpos en el suero sanguíneo de las aves consiste
en tomar muestras de sangre de la vena alar o del corazón. En la prueba de IH
resultan positivos los sueros de aves que han sido vacunadas o padecieron la
enfermedad y que por estas razones poseen anticuerpos específicos contra el
virus(Avicultura.1983)
La prueba de mayor uso es la inhibición de la hemaglutinación (HI), por su
sencillez, buena especificidad y economía. Existen dos tipos de prueba HI: Alfa
y Beta (Giambrone.1981).
En la primera hay dilución del virus con cantidad de suero constante; en la
segunda hay dilución del suero con virus constante. Estas dos pruebas no dan
resultados directamente relacionados; aunque ambas son especificas, la
técnica de alfa HI es la mejor para determinar la identidad viral y la beta HI para
comparar los títulos séricos de anticuerpos.
La prueba de HI consiste en aprovechar la capacidad de las hemaglutininas
virales de ¨capturar¨ los glóbulos rojos aviares y de otras especies, para formar
un enmallado nítido con ellos y evitar que se precipiten en los preparados que
para tal efecto se realizan sobre bandejas de microtitulación; esta propiedad del
virus se pierde cuando, por diluciones sucesivas, su cantidad disminuye hasta
el punto en que esta no es suficiente para enmallar los glóbulos rojos y éstos
se precipitan (prueba de hemaglutinación); o cuando, al diluir suero problema al
cual se le desea conocer su titulo de anticuerpos inhibidores de la
hemaglutinación, en presencia de cantidad de antígeno constante (HI beta),
dichos anticuerpos actúan impidiendo la acción hemaglutinante del virus,
caus ando la precipitación en forma de botón de los glóbulos rojos visible en la
bandeja, este fenómeno se cumple hasta la dilución en que la acción del
anticuerpo, por su cantidad disminuida por las sucesivas diluciones a que se
sometido, se torna ineficaz para inhibir la hemaglutinación viral y entonces, ésta
se manifiesta formando el enmallado de glóbulos rojos que se hace visible en
los respectivos pozuelos de la bandeja. El titulo inhibidor de la hemaglutinación
del suero respectivo es la reciproca al último pozuelo en que se forme el botón
de glóbulos rojos precipitados (Villegas, 1983)
4.7. PROCESO EPIZOOTICO.
4.7.1. RESERVORIO DEL VIRUS.
En la actualidad, los pájaros se consideran reservorio de las cepas velógenas
viscerotropas, en especial las psittácidas de las junglas de Asia, Africa y
Sudamérica. La captura de pájaros exóticos en los trópicos y su transporte a
otras regiones contribuyen a diseminar la enfermedad. Las aves acuáticas
silvestres constituyen presumiblemente otro reservorio del virus, ya que a partir
de patos salvajes, gansos, garzas, cormoranes, pingüinos y otras especies se
han aislado en los últimos años numerosos cepas de virus lentógenos. El
reservorio del virus entre las aves domésticas lo constituyen las gallinas
infectadas, pero con la enfermedad inaparente, que no están suficientemente
inmunizadas, o que, pese a los anticuerpos circulantes, albergan en el tracto
respiratorio y excretan virus de campo virulento.
4.7.2. TRANSMISION
La fuente principal de contagio es el aire espirado, el cual, antes ya de hacer
su aparición los primeros síntomas clínicos, contiene grandes cantidades de
virus en forma de aerosol. Son infecciosas, además, las secreciones de la
nariz, pico y ojos, así como las heces. También contienen virus los huevos
puestos durante la fase de viremia, así como las canales, residuos de matadero
y esperma. El contagio se produce con preferencia directamente, por contacto
de un animal con otro, y por vía aerógena (Blaha. 1995).
4.7.2.1. TRANSMISIÓN HORIZONTAL.
El transporte de aves vivas infectadas (mercados aviares, traslados,
exposiciones, envíos de pollitos de un día) desempeña importante papel en la
difusión de la enfermedad. Con el moderno comercio por vía aérea, como ES
habitual en el mercado internacional con aves cautivas y también con aves
domésticas, el virus puede diseminarse en breve plazo a grandes distancia.
También el contagio indirecto reviste gran importancia para la difusión de la
enfermedad. Como vehículos actúan sobre todo los medios y las jaulas de
transporte, sacos de pienso, bandejas de huevos y otros enseres.(Rojo, 1987)
El virus puede ser extendido por vectores animados, especialmente por el
hombre, pero también por roedores depredadores, artrópodos y lombrices de
tierra. Particular atención merece la transmisión por el viento, evidenciada
hasta 8 kilómetros de distancia, y a cuya vía corresponden especial importancia
para la diseminación de las cepas víricas velógenas neumotropas. Como
vehículos actúan, asimismo, los productos y subproductos de matadero,
huevos, residuos de incubación y materias primas procedentes de las aves,
como las plumas. Las aves de vida a en libertad, como palomas, cuervos,
faisanes y gorriones pueden transmitir el virus de manera activa.
4.7.2.2. LA TRANSMISIÓN VERTICAL.
Es decir, el paso de virus de padres a la progenie vía el embrión, es
con0troversial. Los embriones infectados se mencionan durante las infecciones
naturales de las aves de postura con cepas virulentas, pero esto en general,
resulta en la muerte de los embriones durante la incubación. Los huevos rotos
o sentidos puede servir como una fuente del virus par los pollos nuevos, como
también las heces con virus contaminado el exterior de los huevos. El virus
también puede penetrar el cascarón después de la postura, lo que complica
evaluar si la transmisión fue en verdad transovárica o vertical. (Rojo, 1987)
Las aves infectadas pueden provenir de huevos infectados con virus vacunales
u otros lentogénicos, que no necesariamente ocasionan la muerte de los
embriones. En infecciones naturales no está claro como se llega a infectar los
embriones, aunque la vacuna La Sota se ha demostrado que existe en casi
todos los órganos reproductivos después de la vacunación. (Rojo, 1987)
4.7.3. PERÍODO DE INCUBACIÓN.
El período de incubación de la enfermedad del virus de Newcastle después de
la exposición natural varia de 2 a 15 días (promedio de 5-6). La velocidad con
la cual se presentan los signos, si los hay, es variable dependiendo del virus
infectante, tipo de cepa, la especie del huésped, su edad y su estado inmune,
la infección con otros organismos, condiciones ambientales, la vía de
exposición y la dosis. (Avellaneda y Villegas.1994)
El virus se inactiva fácilmente con formalina, alcohol, metiolato, solventes
lípidos y lisol; es termolábil, y casi todas las variedades quedan totalmente
inactivas al cabo de 30 minutos de incubación a 60ºC. Su termoestabilidad
varía, y la resistencia al calor de las diferentes cepas o subcepas es una de las
características genéticas más útiles.
4.8. HUESPEDES AVIARES
El virus de la enfermedad de Newcastle se ha encontrado en diversas especies
aviares. Donde se ha observado con mayor frecuencia es en las aves de corral,
incluida la gallina de Guinea; esas especies son más susceptibl es que el pavo
y el pavo real. Los patos, gansos, perdices y codornices son relativamente
resistentes. En los faisanes y palomos, el virus puede producir una
enfermedad grave, por lo general de tipo nervioso.
En su forma virulenta, el virus es mortal para muchas diferentes especies de
pájaros, y se han obtenido virus en especie psitáticas naturalmente infectadas
(Reino Unido, 1971).
La gallina doméstica es la hospedadora más sensible y afectado con mayor
frecuencia. Pavos comunes, pavos reales, pint adas, faisanes y palomas se
enferman por lo regular con menos fuerza, si bien en ocasiones sufren
elevadas pérdidas. Patos y gansos se infectan, pero en raras ocasiones
desarrollan una grave enfermedad. En la explotación intensiva de gallinas
corresponde cierta importancia a estas especies como reservorios del virus y
en el mantenimiento de las cadenas infecciosas. Entre las aves enjauladas se
enferman con máxima frecuencia las psittácidas. El VEN ha sido aislado
también a partir de numerosas especies de aves silvestres y pájaros
mantenidos en cautividad, muchas veces exhibiendo enfermedad clínica, pero
en otros casos en animales aparentemente sanos. Todas las cepas de VEN
generan anticuerpos 6-10 días, que son todavía evidenciables transcurridos 8-
12 mese. Anticuerpos neutralizantes en suficiente cuantía protegen de una
reinfección. De gran importancia es asimismo la inmunidad local del tracto
respiratorio. Los animales con inmunidad insuficiente enferman después de una
reinfección de manera clínicamente inaparente, y excretan virus. Al contactar
con animales sensibles, éstos se infectan y enferman. A partir de núcleos de
animales reproductores con la infección inaparente, los huevos infectados
contaminan las incubadoras. Los pollitos nacidos se infectan, pero sólo
enferman al desaparecer la inmunidad materna. De esta manera se originan
cadenas infecciosas entre las aves reproductoras, los huevos incubados y la
cría de pollitos o cebo de broilers.
4.9. COMPOSICION ANTIGENICA DEL VIRUS DE LA ENFERMEDAD DE
NEWCASTLE
Muchos autores han señalado diferencias serológicas entre los virus aislados
de la enfermedad de Newcastle. Estas diferencias permiten suponer que tal vez
sean necesarias diferentes cepas de vacunas para determinados tipos de virus
naturales virulentos. Se ha dicho que la variación antigénica podría haber sido
observado in vitro, y que, por consiguiente, carecía de importancia al decidir
las cepas de vacuna que hay que elegir. No obstante, dada la importancia de
este problema, el Laboratorio Central de Veterinaria de Weybridge, Reino
Unido, ha recogido 14 variedades de virus virulentos en lugares muy diferentes.
En varias de ellas se ha observado un comportamiento antigénico
aparentemente variable, a juzgar por las grav es pérdidas causadas por la
enfermedad en las aves de corral vacunadas.
Se han obtenido antisueros mono específicos contra cada cepa en
determinadas aves exentas de patógenos específicos, inyectando a grupos de
10 aves, de 6 semanas de edad, 0,5 ml de líquido amnioalantoideo (LAA), y 6
semanas después, una dosis de 109 DME50 (dosis mortal del 50 por ciento de
embriones) de virus virulento. Los sueros se recogieron a las 2 y a las 10
semanas de haberse inyectado el virus, y fueron utilizados como antisueros
específicos.
Las pruebas cruzadas de IH se efectuaron utilizando el método de virus
constante y suero variante (prueba beta de IH), con 4 unidades de HA,
cuidadosamente ajustadas para cada antígeno. Los resultados pusieron de
manifiesto las variaciones serológicas entre las cepas.
4.10. LA ENFERMEDAD
Con la posible excepción del continente antártico, en todos los continentes se
han observado casos de enfermedad de Newcastle. En muchos países es
enzoótica, y se han producido graves brotes en zonas de producción aviar
intensiva donde se crían muchas aves de corral en un solo recinto o local.
Cuando estos están situados cerca de una instalación de empaquetamiento o
de una estación de tratamiento, con el consiguiente movimiento de vehículos y
de personal, se crea también condiciones favorables para la aparición de
numerosos brotes de la enfermedad. Las situaciones de este tipo pueden
provocar problemas patológicos más graves que los causados por métodos de
cría en unidades más pequeñas, o donde las granjas o locales están menos
comunicados. En algunos países, sin embargo, es habitual mantener el ganado
aviar en las casas o patios, en competa libertad, lo cual permite la fácil
propagación de la enfermedad. La vacunación sistemática de toda la zona o
región ha dado resultados satisfactorios.
La existencia de una zona de población aviar muy densa, el uso de la
ventilación forzada en los galpones, el transporte de aves vivas, y la
evacuación de los estiércoles a los terrenos de cultivo son circunstancias que,
todas ellas, se combinan para facilitar la propagación de la enfermedad.
La eliminación efectiva, por enterramiento o incineración, de los estiércoles y
aves infectadas es necesaria para prevenir la enfermedad; es también útil
controlar el desplazamiento de las aves procedentes de una zona infectada.
Hay que prever la posible propagación de la enfermedad en los lugares donde
se practique la cría semi-intensiva de ganado aviar o donde las aves salvajes
tengan acceso a los alimentos de este ganado o a los galpones análogamente,
el desplazamiento de huevos en incubación, de las aves de corral de un día de
edad, de jaulas contaminadas o de vehículos procedentes de locales o zonas
infectadas representa un fuete riesgo de propagación de la enfermedad.
El desplazamiento de unidades de cría de ganado aviar en zonas epizoóticas
de producción de pollos de cebones causará probablemente una infección de
fuertes proporciones entre aquel ganado; si está bien vacunado, las pérdidas
causadas por la enfermedad, ya sean muertes o una menor producción, podrán
ser leves. Lo que podría tener más importancia es el efecto de la enfermedad
en los niveles de anticuerpos de la progenie, que haría difícil o imposible de la
inmunización activa de las aves de un día de edad.
4.11. FORMAS DE PROPAGACION
Las formas de propagación pueden dividirse en dos grupos: la propagación
natural y la causada por los factores mecánicos asociados al transporte de
huevos, aves, canales, despojos de aves de corral, piensos vacunación de
tripulaciones y desplazamientos de personal. En algunos casos, la enfermedad
ha sido introducida en algunos países vía la carne congelada de ganado aviar.
Es frecuente que el virus contenido en los huevos mate al embrión durante la
incubación, y las pruebas obtenidas en el campo indican que si paga. Una
incubadora puede además, contaminarse si se rompe un huevo infectado.
Cuando los pollos se infectan en una incubadora, los primeros síntomas
pueden aparecer ya a los 3 ó 4 días de edad, siempre que la inmunidad
materna sea débil: si es fuerte, la enfermedad puede no apreciarse
abiertamente durante un largo período.
La enfermedad puede ser también propagada por el desplazamiento del
ganado en crianza: si el ganado está vacunado, la infección producida por el
virus puede ser subclínica, y si ese ganado se mezcla con otro no protegido,
pueden ocurrir graves pérdidas. El uso de vacunas contaminadas, o de
vacunas autógenas o de vacunas autógenas o sin comprobar que no hayan
sido sometidas a la prueba de control de calidad, puede también propagar la
enfermedad.
La prevención eficaz de la enfermedad depende igualmente del conocimiento
de las formas de propagación, de la calidad de las vacunas, y de su aplicación.
4.12. VACUNACIÓN.
Bajo las circunstancias presentes, un programa de vacunación
cuidadosamente planeado es un importante procedimiento que debe llevarse a
cabo para reducir y prevenir las pérdidas ocasionadas por la enfermedad de
Newcastle(Avellaneda.1994)
Se debe tener en cuenta que la enfermedad esta presente en todo el país y
que es mínima la atención que se le está prestando a las medidas sanitarias
cuando se transportan aves, al igual que son pocos los cuidados que tienen las
personas que van de galpón en galpón por lo tanto un programa de vacunación
bien planeado es un paso importante que debe ser tenido en cuenta por los
avicultores para tratar de controlar la enfermedad. Sin embargo es necesario
reconocer que la vacunación sola no puede siempre ser efectiva, los métodos
de manejo y las medidas sanitarias son de gran importancia no sólo en el
control de esta enfermedad sino de muchas otras de carácter contagiosos. Se
debe recordar también el uso de las vacunas a virus vivo puede ocasionar
reacciones fuertes en las aves vacunadas y aveces pérdidas debidas a la
enfermedad que la vacunación desencadena (Villgas.1996)
Un buen programa de vacunación debe tener en consideración todos aquellos
factores que puedan interactuar para finalmente lograr un buen nivel de
resistencia del ave (Molina.1997)
Elementos tales como el nivel de anticuerpos en que llegan las aves a la
granja, la situación epidemiológica de la zona, presencia de otras entidades
tales como Gumboro, y el tipo de vacunas que se quiera emplear, son factores
que deben estudiarse muy detenidamente para elaborar un programa vacunal
(Molina.1997)
4.12.1. VACUNAS INACTIVAS.
Contienen virus que han sido inactivados por medio de distintos métodos como
la adición de formol, tratamiento con rayos ultravioleta, con calor, etc.,
quedando una solución que contiene partes constituyentes del virus que son
los que van a se utilizados para dar protección o inmunidad(Villegas.1996)
Algunas ventajas son:
• Las vacunas inactivas son más fáciles de almacenar que la vacunas
viables.
• No hay peligro que se presenten reacciones fuertes en las aves, por lo
tanto, no es posible que debido a la vacunación se presente un brote leve
de la enfermedad.
• No establece la presencia de la enfermedad en áreas libres de ella.
• Las vacunas inactivadas en emulsiones oleosas no se afectan de manera
adversa por la inmunidad materna y pueden usarse en aves de un día de
edad (Molina.1997)
Algunas desventajas son:
• Es costoso producirlas y aplicarlas porque requieren mano de obra para la
aplicación.
• Se necesitan altas dosis de vacuna para producir una protección más o
menos aceptable.
• En aves jóvenes la aplicación puede ocasionar daño en los tejidos dando
origen a problemas de manejo, como el canibalismo.
• La reacción inflamatoria en el sitio de aplicación es a veces fuerte y puede
persistir.
• Cuando se usan agujas infectadas se aumenta el riesgo de contaminación
bacteriana la vacunar varias aves con la misma jeringa.
• El control de calidad es difícil(Villegas.1996)
La protección o inmunidad que resulta de la aplicación de estas vacunas es
poca después de una semana de practicada la vacunación; se requieren de 2 a
3 semanas para producir su máxima protección. Esta protección empieza a
desaparecer entre las 6 y 8 semanas y va disminuyendo gradualmente; sin
embargo, cuando se vacuna dos veces con un intervalo de dos semanas la
protección es mayor y más duradera(Villegas.1996)
4.12.1.1. MÉTODOS DE PRODUCCIÓN.
Las vacunas inactivas, son por lo común, producidas de líquido alantoídeo
infectivo tratado con betapropiolactona o formalina para matar el virus y se
mezclan con un adyuvante portador. Las primeras vacunas inactivas se
produjeron con adyuvantes de hidróxido de aluminio, pero el desarrollo de
vacunas emulsionadas en sustancias oleosas proporcionaron una mayor
ventaja. Las diferentes vacunas emulsionadas en aceite varían en su
formulación de emulsificadores, antígeno, y proporciones de agua a aceite, la
mayor parte actualmente emplean aceite mineral(Avellaneda.1994)
Varias semillas de virus usadas en la producción de vacuas emulsionadas en
aceite incluyen Vister 2C. B1, la sota, Roakin y varios virulentos. El criterio de
selección debe ser la cantidad de antígeno producido cuando el virus esta
creciendo en embriones. Los virus apatógenos crecen a títulos más altos; por
ello parece ser innecesario el riesgo de utilizar virus virulentos para los
pollos(Avellaneda.1994)
Se puede incorporar uno o más antígenos a la emulsión con virus de Newcastle
y a las vacunas bivalentes o polivalente pueden incluir virus de bronquitis, virus
de infección de bolsa de Fabricio, virus del síndrome de baja postura y reovirus.
La aplicación de vacunas inactivas es por inyección, ya sea intramuscular o
subcutánea. (Avellaneda.1994)
4.12.2. VACUNAS VIVAS.
Las vacunas vivas de virus de Newcastle vivas se dividen en dos grupos:
lentogénicas y mesogénicas, las mesogénicas son mejores para las
vacunaciones secundarias de aves por su mayor virulencia. Sin embargo, aun
dentro del grupo lentogénico hay una considerable variación en su virulencia.
La respuesta inmunitaria aumenta conforme es mayor la patogenicidad de la
vacuna viva. Por lo tanto para obtener el grado deseado de protección sin
reacciones graves, con necesarios programas de vacunación que incluyan el
uso secuencial de virus virulentos de manera progresiva, o virus vivos seguidos
por vacunas inactivadas(Villegas.1996)
4.12.2.1. APLICACIÓN DE VACUNAS VIVAS.
El objetivo de las vacunas vivas es establecer una infección en la parvada,
preferiblemente en cada ave en el momento de la aplicación. Los tratamientos
en aves individuales como la instalación intranasal, gotas en el ojo e inmersión
del pico a menudo se usan para vacunas lentogénicas. Las vacunas
mesogénicas, por lo general requieren inoculación por pinchazo en el pliegue
del ala o por inyección intramuscular(Avellaneda.1994)
El método más común de aplicación en todo el mundo es por medio del agua
bebida. Por lo común, se les retira el agua a los animales por cierto número de
horas y después se les aplica la vacuna en agua de bebida fresca en
concentraciones calculadas con mucho cuidado para dar cada ave una dosis
suficiente (Lockaby.1993)
La aplicación masiva de las vacunas vivas por aerosoles y aspersión también
es muy popular debido a la facilidad con que se vacunan un gran número de
aves en poco tiempo. Es importante obtener el tamaño adecuado de las
partículas controlando las condiciones bajo las cuales se genera el aerosol, por
lo general, se limita a la segunda vacunación para evitar reacciones vacunales
graves (Avellaneda.1994)
Algunas ventajas son:
• Las vacunas vivas, por lo general, se venden en líquido alantoídeo
liofilizado de embriones infectados y son relativamente baratos, fáciles de
administrar y permiten la aplicación masiva.
• La inmunidad local se estimula por la infección con virus vivo y la protección
se da muy rápido después de la aplicación.
• Los virus vacunales se pueden diseminar de las aves que se vacunaron a
aquellas que no (Villegas.1996)
Algunas desventajas que presentan son:
• La vacuna puede provocar la enfermedad, lo que depende de las
condiciones ambientales y la presencia de infecciones complicantes. Por
está razón, es importante el uso del virus en extremo benigno para la
primera vacunación y de acuerdo con el resultado, serán necesarias
aplicaciones múltiples de las vacunas.
• La inmunidad materna puede evitar el éxito en la vacunación primaria con el
virus vivo.
4.13. TECNICAS DE INOCULACION
Para producir líquido amnioalantoideo que sea totalmente estéril
bacteriológicamente, o que contenga la cantidad mínima de bacterias, es
esencial combatir la población bacteriana de las zonas de trabajo con la mayor
eficacia posible. Uno de los mayores peligros son los propios huevos, y debe
llevarse cuidado de fumigarlos bien antes de introducirlos en la sala de
inoculación, con lo cual se reducirá contaminación de que puedan ser
portadores.
Las cáscaras de los huevos suelen estar contaminadas con microorganismos
muy diversos, por lo que las incubadoras, al cabo de una larga utilización,
también se contaminan. A fin de reducir esta contaminación microbiana, las
incubadoras deben fumigarse, a intervalos regulares, con formaldehído
gaseoso.
También los huevos deben fumigarse bien dentro de la incubadora con
formaldehído gaseoso. Los huevos no deben fumigarse con formaldehído
gaseoso entre 24 y 100 horas después del comienzo de la incubación, a causa
de la sensibilidad del embrión a ese producto en esa edad. La fumigación, por
lo tanto debe efectuarse a las pocas horas de haber comenzado incubación. Es
importante fumigar con una humedad relativa del 90 por ciento, a 37ºC de
temperatura y con los ventiladores en funcionamiento. Para 1m 3 de espacio de
la incubadora se emplean 13 ml de formalina (solución de formaldehído al 40
por ciento) y 6,5 g de permanganato de potasio, que se mezclan en una vasija
de loza, que se coloca en la incubadora, si se considera necesario.
Los huevos embrionarios pueden obtenerse de una manada EPE y
transportarse a la zona de producción de vacuna en rigurosas condiciones de
higiene. La edad óptima para la inoculación de los huevos es a los 9 días de
incubación, pero en el caso de virus mesógenos, se puede también obtener
una cosecha satisfactoria con huevos embrionarios de 10 u 11 días. Los
huevos de 8 días o menos suelen ser más susceptibles a las muertes no
específicas y dan una cosecha de fluido alantoideo con una baja concentración
de virus.
Los huevos deben ser observados al trasluz antes de ser inoculados, a fin de
eliminar los no viables. Uno de los principales inconvenientes de los huevos
EPE podría ser la relativamente escasa viabilidad de los embriones.
La inoculación de los huevos debe hacerse en condiciones de perfecta
asepsia. La parte de la bolsa de aire debe pintarse con una mezcla de agua
destilada y alcohol al 70 por ciento, tintura de yodo y cualquier otro agente
químico esterilizante eficaz, que debe dejarse que se seque bien para evitar
la inactivación del virus de siembra durante la inoculación.
Es también importante que los huevos sean bien observados al trasluz antes
de la inoculación, a fin de que puedan rechazarse todos los embriones no
viables. Un embrión muy contaminado que llegue al momento de la
recolección podría producir una fuerte contaminación de los fluidos recogidos.
El personal debe estar entrenado, para poder rechazar todos los embriones
que tengan un aspecto anormal.
Se recomienda la siguiente técnica de inoculación:
Sirviéndose de una lámpara de observación al trasluz, se marca con un lápiz
el límite de la bolsa de aire. Esta marca no tendrá más de 1cm de longitud ni
estará relacionada con la inexistencia de vasos sanguíneos en la zona
inmediata.
A unos 4 mm sobre este límite de la bolsa de aire se hace un agujero de 1mm
de diámetro, aproximadamente, tal que la aguja de inoculación pueda penetrar
fácilmente, pero lo suficientemente pequeño para que después pueda
obturarse totalmente, ya que, en caso contrario, los embriones podrían
contaminarse, con el riesgo subsiguiente para el lote completo de vacuna.
Antes de hacer los agujeros en los huevos se preparará una cantidad de virus
de siembra superior a la requerida. Se considera adecuada una dilución al 10-5
con una actividad de al menos 109,5 DIE50 por ml. Las diluciones superiores
podrían dar lugar a que un pequeño número de embriones no se infectaran,
mientras que las inferiores podrían producir una progenie de virus de calidad
inferior. La dilución debe hacerse en un diluyente estéril adecuado que
contenga antibióticos, por ejemplo, solución fisiológica estéril con 200
unidades de penicilina y 200 microgramos de estreptomicina por miligramo,
aglutinada con un aglutinante de fosfato hasta un 7, 0 de pH. Otros diluyentes
podrían ser caldo de triptosa o suero de caballo al 10 por ciento. La proporción
de antibióticos no debe aumentarse, ya que la contaminación bacteriana debe
considerarse como reveladora de una técnica defectuosa, que no debe
corregirse aumentando la concentración de los antibióticos.
La suspensión de virus de siembra en una dilución al 10-5 puede ser inoculada
en los huevos por medio de una jeringa con 1 ml de tuberculina o de una
jeringa de repetición conectada a un recipiente. En esta última forma se
reducirá la contaminación debida a un manejo excesivo de la jeringa de
inoculación. Las pruebas de esterilidad del virus de siembra deben hacerse de
la jeringa de inoculación al empezar y al terminar la inoculación. El volumen
óptimo de inoculación es 0,1 ml, aunque pueden hacerse también
inoculaciones de 0,2 ml. Se utilizarán una agu ja finamente perforada, por
ejemplo, de 0,5 mm X 11mm.
Cuando la inoculación se haga con una jeringa de 1ml de tuberculina, es
conveniente cambiar la aguja o la jeringa, o ambas después de haberse
inoculado 120 embriones o el contenido de 4 bandejas de huevos.
La aguja debe introducirse por el agujero de la cáscara, manteniéndola en
posición vertical y descargarse el inoculó en la zona lateral del alantoides.
La muerte de embriones por causas mecánicas no debe exceder del 2 por
ciento. Cualquier exceso sobre este porcentaje debe ser objeto de
investigación.
Debe llevarse cuidado de no mojar las cáscaras con una cantidad excesiva de
inoculó, y de obturar todos los huevos inmediatamente después de la
inoculación, o lo antes posible. Para esta operación pueden utilizarse varios
materiales: parafina fundida, o una mezcla de cera o de jalea de petróleo, o
colodio flexible coloreado, son los más empleados. Cuando se emplee el
colodio, se mantendrá alejado de la llama, porque su base de éter es
inflamable.
Después de la inoculación, los huevos se incubarán en una incubadora bien
ventilada, a la temperatura de 370 C. Cuando las incubadoras no están bien
ventiladas, su sobrecarga puede originar un nivel de CO 2 excesivo.
Los huevos deben observarse al trasluz a las 24 horas de la inoculación para
descartar todos los embriones muertos, cuyo número no debe exceder del 2
por ciento del total. La mala viabilidad de los embriones o una excesiva
contaminación bacteriana pueden ser causas de muerte prematuras no
especificadas. Los daños mecánicos en el momento de la inoculación pueden,
a veces, producir una mortalidad excesiva. Durante las primeras 24 horas
después de la inoculación no se produce muertes específicas debidas por el
virus.
El volumen del lote dependerá de la capacidad de tratamiento posible de toda
la cosecha, que dependerá, a su vez, de la capacidad de liofilización. La
inoculación de 2000 huevos producirá de 6 a 12 millones de dosis de vacunas.
Para muchos laboratorios es la cantidad adecuada, ya que, si es menor
aumenta el costo de las pruebas por dosis de vacuna: y si es mayor hace falta
más personas que, con trabajo constante, podrían dar lugar a una producción
de vacunas superior a la que necesitara el país.
4.14. POTENCIA DE LA VACUNA
La potencia de la vacuna puede calcularse por los métodos siguientes:
Determinación de la DIE 50 que contiene un frasco de vacuna reconstituida.
Determinación de los niveles de IH en un grupo de pollos vacunados.
Prueba de potencia en os pol los mediante inoculación.
El virus de la enfermedad de Newcastle puede analizarse ya sea determinando
el contenido de hemoaglutinina o la infectividad de una muestra de virus. Se
recomienda que la determinación del contenido de hemoaglutinina se limite al
trabajo serológico relacionado con la prueba de IH o con aquellas otras que se
hacen para determinar la especificidad de las preparaciones virales. Esta
recomendación se basa en la reacción de la hemoaglutinina permite apreciar
únicamente el poder de aglutinación de los glóbulos rojos de la muestra. Esta
reacción puede ser debida a un virus que sea activo, o a subunidades virales.
En cualquiera de los casos, la reacción de la hemoaglutinina no es un cálculo
seguro de la cantidad de virus viable que contiene una muestra de vacuna.
Por está razón, el trabajo de control más importante en relación con las
pruebas a que se someten las vacuna está basado en un análisis de la
infectividad del virus. Para que este análisis sea significativo hay que realizarlo
con precisión, ya que los errores que puedan cometerse y que no se hayan
tenido en cuenta conducirán a cálculos incorrectos de la cantidad de virus
presente. Para mayor exactitud conviene efectuar una serie de titulaciones
repetidas, a fin de determinar la fiabilidad del sistema que se esté empleando.
Para calcular los puntos finales del virus se recomienda el método de
Spearman Karber (Finney, 1964). Es necesario una titulación exacta del
contenido de virus, para cerciorarse de que la concentración de virus en cada
frasco es la óptima, así como para calcular las pequeñas pérdidas de
concentración que se producen durante la liofilización y durante el
almacenamiento del material producido.
Los métodos de análisis generalmente utilizados consisten en inocular a los
huevos o a los cultivos tisulares diluciones de virus, en proporciones que se
van duplicando consecutivamente. El contenido de virus de la enfermedad de
Newcastle se puede calcular antes de que empiece el análisis, lo que permite
reducir el intervalo de los niveles de dilución que han de determinarse sin
necesidad de un trabajo suplementario. El virus de la enfermedad de Newcastle
de un fluido alantoideo infectado y recolectado al morir un embrión, y graduado
después de haber estado almacenado a +4ºC, y no después de un ciclo de
congelación y deshielo, tendrá probablemente una concentración de
aproximadamente 109.0 DIE50/0,1 ml. El virus lentógeno del tipo B1 suele
aumentar hasta una concentración ligeramente superior y algunas muestras de
fluido alantoideo pueden contener virus a razón de 109.0 DIE50/0,1 ml. Para
fines prácticos, puede suponerse que el fluido alantoideo reciente de cepas de
virus velógenos tendrá una concentración de 109.4 DIE50. A partir de estos
valores, el análisis volumétrico puede efectuarse con un menor intervalo de
variación de las diluciones.
4.14.1. ESTIMACIONES SEROLOGICAS DE LA POTENCIA DE LA
VACUNA.
La potencia de una vacuna puede definirse como su capacidad para proteger
un ave contra l enfermedad, y los métodos que se emplean para calcularla son
los análisis de laboratorio y las pruebas de inoculación con aves de
experimentación. Una prueba de potencia puede ser del tipo (se acepta o se
rechaza) o bien puede dar un cálculo de la potencia que permita hacer
comparaciones entre varios lotes de vacuna. Este último se considera más útil.
Con vacunas inactivadas se puede obtener un valor para el punto final por
medio de un sistema consistente en la inoculación de diluciones crecientes de
la vacuna a grupos de aves, y en calcular el nivel que protegería al 50%. con
vacunas vivas este procedimiento es menos seguro, y los sistemas basados
en pruebas de inoculación tienen usualmente por objeto cerciorarse de que la
vacuna cumple ciertos requisitos mínimos, más que determinar el grado exacto
de protección.
Si la actividad de la vacuna se aprecia por la respuesta serológica de grupos de
aves experimentales, la potencia podrá entonces determinarse sin recurrir al
uso de virus virulentos(Chu y Risk, 1993), aspecto que puede revestir gran
importancia cuando las instalaciones de laboratorio no excluyen la posibilidad
de que la vacuna se contaminan con virus virulentos.
4.15. ORIGEN DE LA HEMOAGLUTINA
Para la producción de hemoaglutinina puede emplearse cualquier cepa de virus
de la enfermedad de Newcastle.
Aunque puede utilizarse virus vivo, se prefiere la mayor seguridad que ofrece
el virus inactivado. El virus lentógeno es preferible al velógeno, en parte
porque el primeros se desarrollan hasta alcanzar una mayor concentración en
los embriones, y en parte porque las cepas de vacunas lentógenas presentan
menos peligros para los laboratorios. Entre las cepas comúnmente utilizadas
para la producción de hemoaglutinina figuran la B1, la La Sota y la F de Asplin.
En el Laboratorio Central de Veterinaria de Weybrigde se ha utilizado la vacuna
F porque, por sus buenas cualidades, confiere mayor estabilidad a la prueba, y
permite que se reproduzcan los resultados.
No es necesario utilizar huevos EPE para la producción de hemoaglutinina,
aunque deben siempre utilizarse los que no contienen anticuerpos de a
enfermedad de Newcastle.
Con la inoculación de 102 DIE50 como mínimo y de 102 DIE50 como máximo,
por 0,1 ml, en la cavidad alantoidea de huevos en embrión de 9 días, se
producirá una fuerte concentración de virus. Los huevos deben observarse al
trasluz 2 veces al día, y desecharse los embriones que mueran durante las
primeras 24 horas. Los huevos se conservarán fríos hasta el momento en que
se inicie el período medio de muerte del embrión (96 horas, aproximadamente,
para los virus lentógenos), y los líquidos amniolantoideos (LAA) se
recolectarán asépticamente, teniendo cuidado de que no se contaminen con la
albúmina o con el vitelo.
La inactivación puede efectuarse a 37ºC, con formalina l: l000, que, por lo
general, resulta un antígeno IH más estable que la betapropiolactona; después
se comprobará la falta de infectividad del antígeno, y se almacenará.
La hemoaglutinina en bruto conservará su concentración inicial de 2.048 a
4.096, a + 4ºC durante varios meses, a condición de que se mantenga estéril,.
Si se almacena a temperaturas entre -15ºC- 40ºC, la concentración ira
disminuyendo gradualmente durante varios meses, y si el antígeno se ha
dividido en pequeños lotes de trabajo, esta disminución de la actividad podría
ser variable. Dividiendo la hemoaglutinina en lotes de trabajo de 5 ml, y
almacenándola a - 68ºC, se ha conseguido mantener la concentración durante
más de 3 años, lo que permite que las pruebas sean más reproducibles.
Añadiendo una parte en 10,000 de tiomersalato se puede reducir la
contaminación.
4.15.1. PREPARACION DE LOS GLOBULOS ROJOS
El método de prueba de la IH actualmente recomendó especifica que la
suspensión de glóbulos rojos sea al1%. Se considera que los mejores
resultados se obtienen tomando sangre de al menos 4 pollos diferentes, de 2 a
6 semanas de edad, plenamente susceptibles a la enfermedad de Newcastle.
La sangre se tomará con una jeringa hipodérmica, y se verterá en una solución
Alsevers, cuya fórmula es la siguiente:
Dextrosa......................................20,5g
Citrato de sodio............................ 8,0g
Cloruro de sodio........................... 4,2g
Agua destilada............................... 1 l
El pH se ajusta a 6,1 con una solución al 1% de ácido cítrico recién preparada.
Los glóbulos rojos son lavados 3 veces por centrifugación suave en una
solución fisiológica (1500rpm durante 5 minutos); la suspensión final puede
almacenarse a + 4ºC durante varios días, según el grado de contaminación.
Cuando los glóbulos empiecen a tomar un color obscuro, se desecharán. En la
práctica basta con hacer dos recolecciones de sangre a la semana para tener
una provisión constante de glóbulos.
Para preparar una suspensión al 1%, se mezcla 1 ml de glóbulos, depositados
por gravedad, con 99 ml de solución fisiológica y se comprueba la
concentración por medio de una prueba hematócrita. Para efectuar esta prueba
se toman 60 ml de la suspensión al 1% teórico, y se dejan sedimentar.
Después se retiran 50 ml de solución fisiológica, para que resulte una solución
al 6%, que se mezcla íntimamente, vertiéndola después en un tubo hematócrito
patrón, que es centrifugado a 10,0000rpm durante 5 minutos. El volumen de
glóbulos rojos debe ser exactamente el 6%
Una vez determinada por primera vez la concentración de glóbulos rojos,
puede leerse la suspensión al 1% en un colorímetro, valiéndose de un filtro
rojo. Las suspensiones subsiguientes se ajustan dé forma que de exactamente
la misma desviación. Utilizando un colorímetro y tubos de 1 cm de diámetro,
para una suspensión de glóbulos rojos de pollo al 1% se obtiene una
desviación de exactamente el 50%.
En las pruebas con suero de pollo deben utilizarse glóbulos rojos también de
pollo; en las de suero de pavo, glóbulos de pavo, y así sucesivamente. Cuando
no se puede aparear la especie de los glóbulos rojos con las del donante del
suero, lo mejor es absorber los sueros de las pruebas con iguales volúmenes
de glóbulos rojos de pollo, al 10%, antes de efectuar la prueba de la IH.
4.16. LA COTURNICULTURA
La coturnicultura es la rama de la avicultura especializada en la cría,
reproducción y mejoramiento de codornices. La codorniz es una ave gallinácea
que pertenece al genero de las Coturnix, Coturnix coturnix; tiene las alas
puntiagudas, cola muy corta, pies sin espolón y propios de las aves de pas o.
La codorniz, en su estado adulto, alcanza un promedio de 150 gr; peso que
empieza a tomar a partir de la vigésima semana de edad. La hembra se
convierte en adulta a partir de la 5º semana de nacida, tiempo suficiente para
empezar el apareamiento.
Para el coturnicultor o personas que quieran dedicarse a esta actividad,
presenta inmejorables beneficios económicos, pues esta gallinácea tiene un
crecimiento acelerado y ciclo de desarrollo rapidísimo, de ahí su gran
precocidad en la postura. Además presenta un elevado porcentaje de
fecundidad, ya que se pueden obtener hasta 5 generaciones por año.
La coturnicultura es una actividad que no es exigente en cuanto al capital que
se requiere para su inversión, por que permite una ágil rotación del mismo y la
inversión se recupera rápidamente por su alta rentabilidad y buenos
rendimientos. Estos atractivos de producción y financieros hacen que cada día,
más personas se dediquen a ella. La importancia comercial y económica de la
cría de codornices ha tomado gran auge en éstos últimos tiempos, debido al
mercado potencial de consumidores quienes han empezado conocer las
ventajas nutricionales, dietéticas y terapeúticas derivadas del consumo de las
codornices y sus huevos, con relación a otros consumos similares.
La vida útil de la Codorniz es de 4 años y el periodo rentable es de 2 años y
medio; el ritmo de postura anual es de 280 huevos en promedio, y un 5% de
ponedoras pone 2 huevos diarios. La recogida de los huevos es dos veces al
día (mañana y tarde).
El pollo de la codorniz es el resultado del desarrollo del embrión durante 16
días en incubadora, bajo condiciones precisas de temperatura, humedad y
ventilación. Manteniendo en una jaula un macho con 2 o 3 hembras se obtiene
un porcentaje de un 80% de huevos fecundados como mínimo.
El éxito de un coturnicultor está en la selección de un buen reproductor que
puede comprar en las granjas especializadas en Colombia importándolos de
Estados Unidos(Miami), Argentina, China, Japón, Alemania, España o Francia;
llevar los registros generales alóicos; evitar el cruzamiento de los
descendientes entre sí; rotar periódicamente los machos de cada grupo de
reproductoras.
La codorniz es extremadamente sensible a la consaguinidad. Es decir, no
debe permitirse en coturnicultura la reproducción incestuosa, por que causa
una ostensible baja en la producción de huevos, aumenta la mortalidad
embrionaria y disminuye el porcentaje de eclosión.
Aunque se conocen enfermedades en las codornices esto no es muy común,
pues son más resistentes que las gallinas, aunque se encuentran aglutinadas
en gran número, mezcladas con otras de diferentes edades y atmósfera
viciada; y en caso de presentarse son fácilmente controladas y erradicadas.
Pueden criarse en temperaturas ambientales de 12 a 30 grados, pero sin
cambios bruscos.
Las codornices presentan ventajas sobre la gallina, ello ocasiona que la
tendencia sea la de reemplazar éstas por aquéllas; sobresalen razones como:
Diez codornices se pueden alojar en el espacio que aloja una gallina
Seis codornices tienen un costo de cría equivalente al de una gallina
Tres generaciones de codornices se dan al mismo tiempo que una generación
de una gallina
La producción anual de huevos de codornices es mucho mayor que la
producción numérica de la gallina
El consumo de alimento diario de una codorniz es la sexta parte del consumo
de una gallina
La producción de las granjas coturnículas tiene los siguientes fines:
• Codornices para surtir restaurantes(en pie o en canal). La edad
recomendada de una codorniz para un buen plato es a partir de las 6
semanas de nacida.
• Codornices para tiendas y supermercados, ave en canal
• Codornices para ventas en plazas de mercado a particulares
• Venta de sus exquisitos huevos en cestas de cartón o bandejas plásticas
• Pollos para engorde
• Venta de parejas reproductoras
• Codornices como animal de laboratorio, por la facilidad de mantenimiento,
economía, rapidez de su ciclo de producción, poder de proliferación, etc.
• Uso académico, básicamente es clave para el estudio de áreas como:
embriología, fisiología, genética y patología experimental.
• Materiales de disección para estudiantes
Los excrementos(coturnaza) constituyen un importante fertilizante para
especies agrícolas de granjas integrales autosuficientes.
Los desperdicios óseos presentan facilidad de procesamiento para
complemento alimenticio de especies pecuarias mayores o menores.
Las codornices por la exquisitez de su carne tienen una demanda continua.
Puede ser preparada en asados, en guisos o freídas, pueden consumirse como
rellenos o desmechadas.
La coturnicultura es una actividad que no requiere gran especialización por
parte del criador; solo poco espacio, poca inversión, pocos costos de
alimentación y mantenimiento; y una incubadora económica, si se desea, ya no
la producción de huevos sino de pollos.
4.16.1. LA CODORNIZ
La codorniz, animal bien conocida por los cazadores y los gastrónomos,
pertenece al grupo de las gallináceas, género Coturnix , y forma, junto con
otros géneros, el grupo de codornices del viejo mundo. El género Coturnix es
desde hace mucho tiempo, el más rico en especies y éstas pueden ser
divididas en tres grandes grupos según su origen, constituyendo
respectivamente los grupos de Africa, de Asia, de Australia y de Nueva Guinea.
La especie más común es la Coturniz coturniz, que está extendida en Europa,
Asia, Africa y en las islas atlánticas.
Coturnix coturnix coturnix es la codorniz común, o codorniz salvaje de nuestras
regiones; anida en Europa y Asia, después emigra durante el inv ierno a Africa,
Arabia y a India. La otra subespecie, Coturnix coturnix japónica es la codorniz
japonesa; anida en la isla de Sakhaline y en el archipielago del Japón y emigra
a Siam, Indochina y Formosa. Esta segunda subespecie es la que fu
domesticada hace mucho tiempo en el Japón y que ha sido importada
recientemente a Europa y a los Estados Unidos.
La codorniz salvaje y la doméstica se reconocen fácilmente por su
conformación, por el canto del macho que es muy diferente en las 2 razas, y
por los detalles del plumaje: en el macho, el color del cuello y de la barbilla es
mucho más constante en la raza doméstica que en la salvaje, mientras que en
las hembras las plumas de la misma región son lanceoladas y manchadas de
negro en la codorniz doméstic a, y de forma redondeada y color pálido en la
salvaje.
La codorniz doméstica es una pequeña ave, con un peso de
aproximadamente 150 g la hembra y 120 g el macho, recogida sobre sí misma
y de formas redondeadas. El pollo de codorniz a su nacimiento es minúsculo
y pesa 10g como media. Tiene un plumón leonado rayado con bandas
negras y con un crecimiento muy rápido. Hay que reconocer que la codorniz
doméstica presenta unas particularidades que la hacen superior en avicultura a
cualquier otra gallinácea conocida: el desarrollo embrionario es de 16 días
aproximadamente; por tanto, sumamente rápido; la puesta es muy p.recoz y los
individuos son adultos desde la edad de 5 semanas.
5. MATERIALES Y METODOS
5.1. TIPO DE ESTUDIO
Para el presente trabajo se aplicó un estudio descriptivo por medio del cual se
evaluó el nivel de anticuerpos contra la enfermedad de Newcastle en
codornices previamente vacunadas procedentes de ocho galpones de
diferentes regiones de Cundinamarca. Adicionalmente se evaluó el titulo de
anticuerpos de la progenie antes del plan de vacunación, para evaluar el nivel
de anticuerpos maternales contra el virus de Newcastle.
5.1.2. POBLACION DE ESTUDIO
Para la ejecución del estudio se utilizaron un total de 180 codornices; 40
codornices de la raza La sota línea especial d clima frío, 40 de la raza Japonica
y 100 de la raza La sota 20210. Las aves en mención pertenecen a diferentes
granjas situadas en de Fosca, Sasaima, Caqueza, Tenjo, Fusagasuga y
Bogotá. Dicha población es de la línea ponedora comercial.
TABLA No 2. DISTRIBUCION Y LOCALIZACION DE LA POBLACION
NUMERO DE LA FINCA LOCALIZACION N
1 FOSCA 40
2 SASAIMA 20
3 SANAME 20
4 BOGOTA 20
5 FUSAGASUGA. Control 40
6 QUINCHITA 20
7 TENJO 20
8 PTE. QUETAME 20
N= Población en estudio.
5.1.2.1. VARIABLES
Para la realización del estudio se tuvieron en cuenta las siguientes variables.
-EDAD: En días.
-RAZA
-PLAN DE VACUNACION
-POBLACION LOTE A MUESTREO: 20 muestras por lote
5.1.3. PROCEDIMENO PARA LA TOMA DE LA MUESTRA
A cada ave se le realizó una toma de sangre sin anticoagulante para obtener el
suero destinado a la realización de la prueba de inhibición de la
hemaglutinación para la determinación de titulo de anticuerpos contra la
enfermedad de Newcas tle.
El muestreo se realizo de la siguiente manera:
Se sujeta el ave en posición supina, se extiende una de las alas, se despluma,
limpia y desinfecta con algodón y alcohol antiséptico del 70%, con algodón
limpio se seca la zona de pliegue alar y se punciona la vena alar a nivel de la
articulación húmero-radio-cubital, con una jeringa hipodérmica estéril,
extrayendo entre 2 y 3 ml de sangre que se deposita en un frasco vial estéril.
Estas muestras se transportan a temperatura ambiente y con prontitud al
laboratorio, donde se centrifuga a 1500 rpm por 10 minutos, obteniendose los
sueros que fueron congelados a –20°C hasta el momento de su procesamiento.
5.2. TRABAJO DE LABORATORIO
5.2.1. MONTAJE DE LA PRUEBA INHIBICION DE LA HEMAGLUTIACION
Esta prueba se utiliza para determina el título de anticuerpos presentes contra
la enfermedad de Newcastle, a partir de uno o varios sueros de aves de
cualquier edad.
La técnica se basa en la capacidad que tiene el virus de Newcastle de aglutinar
glóbulos rojos, debido a la presencia de una hemaglutinina en su cápside.
5.2.1.1. TITULACION DEL ANTIGENO
Se utilizó antígeno facilitado por el laboratorio de Investigaciones Médicas
Veterinarias del I.C.A. (LIMV). Este antígeno estuvo almacenado a –20 grados
centígrados, en viales de 2 ml. Cada día que se realizó la prueba HI el antígeno
a utilizar se tituló.
Este procedimiento nos sirve para calcular las unidades hemaglutinantes del
antígeno.
1. usando una microplaca de fondo en U, adiciona 50 ul de PBS en el primer
pozo y 50 ul en los restantes
2. Adicionar 50 ul del antígeno a titular, al primer pozo, mezclar.
3. Tomar 50 ul de la dilución del primer pozo (1/2) y llevarlos al segundo pozo,
mezclar y tomar 50 ul de éste y pasarlo al tercero y así sucesivamente
hasta terminar en una dilución (1/4096) en el último pozo de donde se
descarta 50 ul para terminar con volúmenes iguales en todo los pozos.
4. Adicionar 50 ul de glóbulos rojos de pollo al 1% a todos los pozos e incubar
a temperatura ambiente durante 45 minutos.
5. Incluir dentro ésta prueba un control de glóbulos rojos que se prepara con
50 ul de PBS y 50 ul de glóbulos rojos 1%.
6. La lectura se realiza una vez cumplido el tiempo, en el control de glóbulos
rojos debe haber formación de botón, ya que no hay antígeno.
El titulo del antígeno se determina en la última dilución en donde se observa
una clara hemaglutinación (Figura 2)
Nota: Es aconsejable hacer la titulación del antígeno por triplicado
Figura No 2
LECTURA TITULACION DEL ANTIGENO
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A
B C D E F G H I ½ 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/12
8 1/256
1/512
1/1024
1/2048
1/4096
Se observa una hemaglutinación clara en las filas A,B,C, hasta la columna 9 en
donde el titulo del antígeno equivale a 512.
La fila D corresponde al control de los glóbulos rojos, en donde se observa la
formación clara de botón, por la precipitación de los hematíes.
5.2.1.2. CALCULO DE LAS UNIDADES HEMAGLUTINANTES (UHA)
Para ésta prueba se utiliza 8 UHA.
Se toma el título del antígeno y se divide por el número de unidades
hemaglutinantes a usar en la prueba (8 UHA), mediante la siguiente formula:
V1C1 = V2C2
V2C2
V1= ----------
C1
V1: Volumen de antígeno de Newcastl e concentrado
V2: Volumen a preparar de la solución que contiene 8 UHA de antígeno de
Newcastle(5 ml para cada microplaca)
C 1: Título del antígeno
C 2: concentración final de la solución (8 UHA)
5.2.1.2.1. CONTROL DE LAS UNIDADES HEMAGLUTINANTES (UHA)
Una unidad hemaglutinante es la cantidad mínima de antígeno que se requiere
para producir hemaglutinación completa de los glóbulos rojos.
1. Adicionar 100 ul de la solución 8 UHA en el primer pozo
.
2. Adicionar 50 ul de PBS 1X en los pozos restantes (columna 2 a columna 3).
3. Tomar 50 ul del primer pozo y llevarlos al segundo mezclar, tomar 50 ul del
segundo y llevarlos al tercero y así hasta completar todos los pozos, en el
último pozo descartar 50 ul para obtener volúmenes iguales.
4. Adicionar 50 ul de glóbulos rojos al 1% e incubar 45 minutos a temperatura
ambiente.
5. En la lectura se debe observar hemaglutinación hasta la dilución en donde
haya una UHA (figura 3)
Nota: se recomienda hacer el control de unidades hemaglutinantes por
triplicado.
Figura No 3
CONTROL DE LAS UNIDADES HEMAGLUTINANTES
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A E
B C D E F G H I ½ 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/12
8 1/256
1/512
1/1024
1/2048
1/4096
5.2.1.3. INHIBICION DE LA HEMAGLUTINACION
1. En una microplaca de fondo en U adicionar 100 ul de la solución que
contiene 8 UHA en el primer pozo y 50 ul en los restantes.
2. Agregar 50 ul del suero problema en el primer pozo, mezclar.
3. Tomar 50 ul del primer pozo y adicionarlos al segundo, mezclar y tomar 50
ul de éste y pasarlo al tercer pozo y así hasta la columna 12 donde se
descarta 50 ul para obtener volúmenes iguales en todos los pozos. De esta
manera se empieza con una dilución 1/2 y se continúa con diluciones
dobles seriadas hasta una dilución 1/4096 (pozo 12).
4. Incubar durante 30 minutos a temperatura ambiente.
5. Adicionar 50 ul de glóbulos rojos de pollo al 1% en toda la microplaca.
6. Incubar durante 45 minutos a temperatura ambiente.
7. Lectura: el título de anticuerpos para Newcastle corresponde a la última
dilución donde se observa inhibición de la hemaglutinación. Esta lectura se
debe hacer inclinando la microplaca y observando la formación la formación
de una gota en forma de lagrima (figura 4)
8. Adicional a las muestras problema se debe montar un suero control positivo
y un suero control negativo, los cuales se procesan de la misma forma que
los anteriores. Además se debe incluir un control de glóbulos rojos.
FIGURA No 4
INHIBICION DE LA HEMAGLUTINACION
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A
B C D E F G H I ½ 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/12
8 1/256
1/512
1/1024
1/2048
1/4096
5.2.2. PREPARACION DE GLOBULOS ROJOS
Se toman de 5 a 10 ml de sangre de pollo SPFA. Se centrifuga a 2500 rpm por
5 minutos, y se descarta el sobrenadante, la capa de glóbulos blancos y los
posibles coágulos. Se adiciona un doble volumen de PBS, se homogeniza, y se
repite la centrifugación.
Este proceso de lavado con PBS se realiza por 3 o 4 veces. L final se obtiene
el paquete de glóbulos rojos, que puede ser almacenado en refrigeración por
varios días. A partir de dicho paquete se prepara una suspensión al 0.7% con
PBS. La suspensión debe permanecer refrigerada y ojalá utilizada el mismo día
de la preparación, o hasta que s observe un cambio de color.
Este procedimiento también se le realizo con los glóbulos rojos de codorniz.
6. ANÁLISIS ESTADISTICO.
METODOLOGÍA ESTADISTICA PARA LA DETERMINACIÓN DE TÍTULOS
VACUNALES EN CODORNIZ TIPO DE VARIABLE: La variable de interés, “Presencia o ausencia de títulos vacunales”, es una variable de tipo cualitativo, es decir, que no es cuantificable, sino por el contrario, la característica es meramente observacional. MEDIDA DE TENDENCIA CENTRAL: Para determinar el punto de convergencia de la variable estudiada, se emplea como estimador la proporción que obtiene por:
n
aP i∑=∧
Donde:
∧
P : Es la proporción de presencia de títulos vacunales en la muestra.
ia : Es el resultado de la titulación en la observación “i”, que se cuantifica como
1 si presenta titulación o cero ni no la hay. n : Es el número de observaciones que se realizaron en la experimentación. HIPÓTESIS DE TRABAJO: La hipótesis de interés es:
0:0 =∧
PH
vs
0:0 >∧
PH
Interpretación de la Hipótesis Nula: Esta hipótesis afirma que la titulación es estadísticamente igual a cero.
Prueba de la Hipótesis: Para probar la hipótesis antes planteada se construirá el siguiente estadístico de prueba:
nPp
PZ calculado
)1(*
0∧∧
∧
−
−=
Regla de Decisión: Se rechaza la hipótesis nula si:
teoricocalculado ZZ >
Donde el teoricoZ se obtiene de la tabla de distribución normal con un nivel de
significancia alto, que en éste caso puede ser del 95%. OBTENCIÓN DE LOS RESULTADOS: Estimación de la proporción:
0200
0=== ∑∧
n
aP i
Calculo del Estadístico de Prueba:
=−=−
−=∧∧
∧
2001*000
)1(*
0
nPp
PZ calculado INDETERMINADO
Regla de Decisión: El término 01*0)1(* ==−∧∧
PP , cuantifica la dispersión de los resultados, en esta ocasión, se afirma que no hay dispersión, por eso la indeterminación; entonces se concluye que con un 95% de confianza la proporción de títulos vacunales para las 200 muestras de codornices es cero (0)
7. RESULTADOS Y DISCUSION
TABLA No 3
RESULTADOS OBTENIDOS CON GLOBULOS ROJOS DE POLLO
SPAFA MEDIANTE TECNICA DE INHIBICION DE LA HEMOAGLUTINACION
GRANJAS
EDAD
PLAN DE VACUNACION
No DE
MUESTRAS
PRUEBA DE IH
Positivo Negativo
Las Huertas
• 300 días
• Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
40
0
40
La Victoria
• 52 días • Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
20
0
20
Villa Mariela
• 60 días
• Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
20
0
20
Barrio Olaya Herrera
• 73 días
• Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
20
0
20
Granja Fusagasuga (control)
• 1 día • 10 días
• No se vacuna
40
0
40
Quinchita
• 41 días
• Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
20
0
20
Tenjo
• 150 días
• Newcastle • Bronquitis
20
0
20
El Tablon
• 87 días
• Newcastle • Bronquitis
20
0
20
TABLA No 4
RESULTADOS OBTENIDOS CON GLOBULOS ROJOS DE CODORNIZ MEDIANTE LA TECNICA DE INHIBICION DE LA HEMOAGLUTINACION
GRANJAS
EDAD
PLAN DE VACUNACION
No DE MUESTRAS
PRUEBA DE IH
Positivo Negativo
La Victoria
• 52 días • Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
20
0
20
Las Huertas
• 300 días
• Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
40
0
40
Villa Mariela
• 60 días
• Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
20
0
20
Barrio Olaya Herrera
• 73 días
• Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
20
0
20
Granja Fusagasuga (control)
• 1 día • 10 días
• No se vacuna
40
0
40
Quinchita
• 41 días
• Mareck • Newcastle • Bronquitis Cepa B1
20
0
20
Tenjo
• 150 días
• Newcastle • Bronquitis
20
0
20
El Tablon
• 87 días
• Newcastle • Bronquitis
20
0
20
La presente investigación se realizó dentro del marco del Proyecto Nacional de
control y Erradicación de la Enfermedad de Newcastle con el fin de establecer
un programa de inmunización en planteles de codornices. Dentro del marco
legal de este programa existe la resoluc ión 305 del 3 de Abril de 2000 en la
cual se hace obligatoria la vacunación de todas las aves comerciales,
codornices y pavos en el territorio nacional. Sin embargo, al revisar la literatura
no se encontró información clara sobre los esquemas de vacunación en
codornices utilizados en Colombia o en otros países.
Existe un hecho de resistencia biológica de las codornices a la enfermedad de
Newcastle, el cual ha sido aplicado de manera general por parte de los
coturnicultores en el país. Sin embargo, a pesar de que esta resistencia puede
ser real, las codornices al sufrir la infección sin sufrir la enfermedad, actúan
como potenciales diseminadores del virus a otras especies más susceptibles
como las aves comerciales.(Rondón, 1999)
Con base en esta situación, no existe un programa de inmunización que pueda
ser recomendado para atender las consultas del gremio coturnicultor para dar
cumplimiento a las normas oficiales establecidas.
Las pruebas serológicas se han establecido como una herramienta importante
en la valoración de la respuesta de las aves a los diferentes biológicos
utilizados para el control de las enfermedades. Para el caso particular de
Newcastle, la prueba de IH es reconocida internacionalmente como la de
elección por su fácil ejecución y por la tendencia a detectar inmunoglobulina M,
lo que significa la mayor disposición de detectar estados tempranos de
infección frente a las pruebas de ELISA.(Merck,1993)
Esta investigación se realizó en aves alojadas en condiciones naturales de
campo con el fin de recopilar una información mas práctica y real que pueda
transmitirse a los productores para su aplicación. Los resultados obtenidos de
los sueros procesados y pertenecientes a los grupos vacunados y sin vacunar
(control) fueron negativos a la presencia de anticuerpos para el virus vacunal
de Newcastle después de 23 días, 34 días, 42 días, 55 días, 69 días, 18
semanas y 40 semanas. Durante el período de observación y seguimiento las
aves no manifestaron sintomatología clínica compatible con esta enfermedad.
Igualmente, no se encontró diferencias con la ubicación de las granjas, raza o
edad de las aves.
Las vacunas empleadas fueron las mismas utilizadas para la inmunización de
aves comerciales (engorde, postura), y se utilizaron a las mismas dosis y
siguiendo la ruta ocular que una de las mejores para la inmunización contra la
enfermedad. La negatividad de los resultados serológicos de las muestras
tomadas a los 23 y 34 días postvacunales, llaman la atención pues serían las
épocas en donde los anticuerpos tendrían los niveles mas altos con base en la
experiencia de las aves comerciales. Aún mas, se esperaría encontrar niveles
mas elevados posterior a la segunda dosis vacunal, lo que no se encontró en
los resultados serológicos.(Marquardt,1985)
En principio estos resultados podrían explicarse como la consecuencia de
inapropiados procedimientos vacunales o de una falla en la concentración viral
de la vacuna. Sin embargo, en estudios repetidos realizados a nivel
experimental y de campo en Colombia, la situación de falta de una respuesta
serológica postvacunal es muy parecida a la encontrada en el presente estudio
Las aves al ser desafiadas bajo condiciones experimentales con cepas
velogénicas, reaccionan con la producción de anticuerpos con títulos de rangos
entre 16 y 2048 (Karol A Alfonso, Tesis de Pregrado U Nacional).
La ausencia de títulos serológicos detectables por la prueba de IH no
necesariamente es un indicativo de susceptibilidad en aves previamente
inmunizadas, ya que la inmunidad celul ar y local es de gran importancia en la
protección por mecanismos distintos al de la inmunidad humoral.(B.W.
Calnek,1995). Si a esto se suma la resistencia de las aves a sufrir la
enfermedad, se estaría conformando un criterio de resistencia para esta
especie que es de gran importancia de considerar en los estudios de la
epidemiología de la enfermedad.
El papel de las codornices como resistentes a la enfermedad pero difusoras de
la infección, no está bien documentado pero es una posibilidad que debe ser
considerada.(Rondón,1999)
Con esta investigación se concluye que la respuesta inmunológica a las
vacunas de Newcastle en codornices es muy pobre y que el IH es un sistema
diagnóstico de escasa aplicación para la detección de anticuerpos generados
por las vacunas en esta especie.
Se recomienda la aplicación o desarrollo de otras técnicas serológicas de
mayor sensibilidad para establecer la eficacia de las inmunizaciones contra
Newcastle en esta especie. Igualmente, se considera que a pesar de que estas
aves sean resistentes a la enfermedad, la vacunación es una estrategia de
importancia para prevenir la diseminación del virus de campo en áreas en
donde la enfermedad sea endémica y las codornices puedan participar como
diseminadores.
8 CONCLUSIONES
La respuesta inmunológica a las vacunas de Newcastle en codornices es muy
pobre y la técnica de inhibición de la hemaglutinación (HI) es un sistema
diagnostico de escasa aplicación para la detección de anticuerpos generados
por las vacunas en esta espec ie.
Es necesario profundizar en el conocimiento de las enfermedades de estas
aves, apoyándose en un buen diagnostico clínico y de laboratorio con el fin de
proponer programas de prevención basados en la utilización de productos
biológicos vivos como vacunas.
La ausencia de tipos serlógicos no es necesariamente un indicativo de
susceptibilidad de las aves.
Los resultados obtenidos podrían explicarse como la consecuencia de
inapropiados procedimientos vacunales o de una falla en la concentración viral
de la vacuna
9. RECOMENDACIONES
• Realizar estudios similares en otras áreas avícolas del territorio nacional
con el fin de evaluar la respuesta inmunológica y determinar la repetitividad
de los resultados del presente estudio.
• Debe investigarse sobre la posible utilización de otra cepa vacunal
adaptada en codornices que pueda inducir anticuerpos mas específicos
para esta especie.
• Realizar un estudio comparativo entre diferentes técnicas diagnósticas para
determinar posibles diferencias en la sensibilidad para detectar anticuerpos
en sueros de codorniz.
• La evaluación de la importancia del Newcastle en codornices debe
realizarse mas de acuerdo a variaciones en los parámetros productivos o
signos clínicos que en los perfiles serológicos, ya que estos últimos son de
escaso valor en particular si el virus de campo es lentogénico como lo es el
virus vacunal.
• Incentivar para que la industria de la codorniz sea mas tecnificada y aplique
modelos de bioseguridad tendientes a disminuir el riesgo de la infección con
esta u otras enfermedades de las aves.
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16-20
ANEXOS
TABLA Nº 1 CLASIFICACION DEL VIRUS DE NEWCASTLE SEGÚN SU
VIRULENCIA
TIPO TMM1 IPC2 IPIV3 LESIONES
Lentogénico 96-168 0,0-0,4 0.0 Ligeras, congestión en las
aves jóvenes
Mesogénico 44-70 0.4-1.9 0.0-0.5 Congestión
Velogénico 40-70 2.0-3.0 0.5-2.8 Lesiones graves
1Tiempo medio de muerte (horas en los huevos).
2 Indice de p atogenicidad intracerebral.
3Indice de patogenicidad intravenosa.
ANEXO 2 SOLUCIÓN DE GLÓBULOS ROJOS DE AVES (SPAFA) AL 1%: 1. Tomar glóbulos rojos de pollo S.P.F. en tubo con anticoagulante. 2. Adicionar PBS 1x para lavarlos, llevarlos a centrifugación durante 4 minutos a 1500
r.p.m. 3. Descartar el sobrenadante y resuspender nuevamente en PBS, realizar tres lavados
en éstas mismas condiciones. 4. Dejar los glóbulos rojos sin diluir. 5. Para preparar la solución al 1% se toman 100 ml de PBS 1X y se le adicionan 1ml
de glóbulos rojos Nota: se recomienda preparar la solución de glóbulos rojos 5 minutos antes de ser utilizada.
PREPARACION DE LA SOLUCION STOCK DE PBS 20 X
1. Pesar los siguientes reactivos químicos: KH2PO4 Fosfato ácido de potasio----------- 3.25 gr NA2 HPO4 Fosfato ácido de sodio----------- 10.8 gr NaCl Cloruro de sodio ----------- 170 gr 2. Completar hasta un litro con agua destilada, mezclar 3. Ajustar el pH a 7.0-7.2 4. Conservar la solución en refrigeración
PREPARACION DEL BUFFER 1X
Esta solución se prepara a partir de un stock 20 x de pH 7.0-7.2 con base en la siguiente fórmula química: • Para preparar 1 litro de solución 1x: V1C1 = V2C2
V2C2 1000x 1X V1= ---------- V1= ------------- = 50 ml C1 20X Se adicionan 50 ml de la solución stock 20X y s completa hasta 1000 ml con agua destilada, se ajusta el pH a 7.1- 7.2
