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Evolución en los sistemas GC/MS y GC/MS/MS para el laboratorio
medioambiental
Agilent 7000B Triple Cuadrupolo:Un sistema MS/MS especialmente diseñado para
acoplamientos GC.
Jaume SantamariaEspecialista GCMS/LCMS
AGILENT [email protected]
901.11.68.90
Agenda1. Introducción al nuevo Agilent
7000B GC Triple Cuadrupolo2. Soluciones a los principales
problemas del laboratorio de residuos• Preparación de muestra• Sensibilidad• Efecto matriz• Desarrollo de métodos/Traslado de
métodos desde GC/MS• Acreditación• Reporting
3. Conclusiones4. Aportaciones instrumentales a los
métodos de screening de plaguicidas
Introducción al nuevo Agilent 7000B GC Triple Cuadrupolo
1. Sistema introducido en 20082. Primer sistema del mercado
especialmente diseñado para análisis GC3. Basado en la plataforma de cuadrupolo
simple de Agilent Technologies4. Desarrollo focalizado en la resolución de
problemas en el laboratorio de rutina5. Robustez6. Incorpora la plataforma de software
MassHunter que unifica toda la oferta Agilent en MS y mejora el rendimiento de Chemstation
GC-MS: ¿Single Quad o Triple Quad?Comparing GC/Q SIM to GC/QQQ MRM in Various Matrices Analysis of p,p’-DDE at 10 ppb (All injections = 1 µL)
MRM
A c q u is it io n T im e (m in )1 1 .8 1 1 .9 1 2 1 2 .1 1 2 .2 1 2 .3
Cou
nts 4x1 0
-0 .1
0
0 .1
0 .2
0 .3
0 .4
0 .5
0 .6
0 .7
0 .8
0 .9
1
1 .1
2 4 6 .0 -> 1 7 6 .1 , 2 4 6 .0 -> 1 7 5 .1
R a t io = 2 3 .5
A c q u isitio n T im e (m in )1 1 .8 1 1 .9 1 2 1 2 .1 1 2 .2 1 2 .3
Cou
nts 3x1 0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
2 4 6 .0 -> 1 7 6 .1 , 2 4 6 .0 -> 1 7 5 .1
R a t io = 2 3 .6
A c q u is it io n T im e (m in )1 1 .8 1 1 .9 1 2 1 2 .1 1 2 .2 1 2 .3
Cou
nts 4x 1 0
-0 .1
0
0 .1
0 .2
0 .3
0 .4
0 .5
0 .6
0 .7
0 .8
0 .9
1
1 .1
1 .2
2 4 6 .0 -> 1 7 6 .1 , 2 4 6 .0 -> 1 7 5 .1
R a t io = 2 4 .0
A c q u is it io n T im e (m in )1 1 .8 1 1 .9 1 2 1 2 .1 1 2 .2 1 2 .3
Cou
nts 3x1 0
0
1
2
3
4
5
6
7
8
2 4 6 .0 -> 1 7 6 .1 , 2 4 6 .0 -> 1 7 5 .1
R a t io = 2 2 .9
Acquisition Time (min)11.8 11.9 12 12.1 12.2 12.3
Cou
nts 4x10
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
246.0 -> 176.1 , 246.0 -> 175.1
Ratio=23.3
Apple
Orange
Spinach
Ginseng
Cabbage
EIC (246)
S/N = 448
S/N = 456
S/N = 260
S/N = 446
S/N = 241
7000 Series Cuadrupolo MS/MSOptimizado para cromatografía de gases
Espectro de Impacto Electrónico con todos
los iones de los compuestos y del
fondo químico
Celda de Colisión Q3Q1
Q1 filtra todas las masas permitiendo únicamente el paso
del ion precursor m/z 210
7000 Series Cuadrupolo MS/MSOptimizado para cromatografía de gases
Q1 Celda de Colisión Q3
En la celda de colisión se produce la
disociación del ión seleccionado en iones
producto
7000 Series Cuadrupolo MS/MSOptimizado para cromatografía de gases
Q1 Celda de Colisión Q3
En Q3 se monitorizan sólo dos de los iones característicos generados correspondientes al compuesto de
interés. Uno con finalidad cuantitativa y el otro con finalidad
cualitativa
7000 Series Cuadrupolo MS/MSOptimizado para cromatografía de gases
Q1 Celda de Colisión Q3
Diseño basado en el rendimiento y la robustez de la aplicaciónNiveles de sensibilidad de femtogramos en columna y MRM de alta velocidad accesibles para un amplio rango de usuarios
– Sensibilidad: 100 fg OFN a 500:1 RMS S/N
– Alto rendimiento SRM (MRM) con hasta 500 transiciones/s
– Celda de colisión hexapolar patentada
– Cuadrupolos de cuarzo recubiertos de oro para una segura operación en rutina
– Agilent 7890 GC con Tecnología de Flujo Capilar
– MassHunter Software
Agilent 7000B Triple Quadrupole GC/MSGold Plated Hyperbolic Quartz Quadrupole
¿Por qué un sistema específico para GC?1. Selección de materiales
– La selección de materiales en el caso de un sistema MS que va a acoplarse a un GC debe ser específica
2. Tamaño del sistema– La modificación de un SQ origina un sistema mucho menor que en LCMS
3. El sistema de vacío necesario es menor4. El acceso a TODOS los componentes de la fuente es bastante más sencillo a través de una simple puerta5. Permite el uso de un cuadrupolo A ALTA TEMPERATURA, lo que es esencial para asegurar una operación robusta en matriz compleja
Un sistema específico para GC. Limitaciones para convertir un sistema LC/MS/MS en un sistema GC/MS/MSESI, APCI y APPI – Fuentes a presión Atmosférica
– Diseñadas para separar moléculas ionizadas ANTES de entrar en el sistema de vacío
– Los cilindros (rods) metálicos del cuadrupolo de mayor rango de m/z estan compensados térmicamente para una operación entre 50-100º C. Esto no es un problema en LCMS ya que “sólo” entran iones en el sistema de vacío
EI, PCI y NCI – Fuentes a Vacío– Todas las moléculas neutras (carrier, matriz y analitos)
ENTRAN EN EL SISTEMA DE VACÍO antes de la ionización– La MAYOR PARTE de moléculas NO SE IONIZAN y deben ser
eliminadas– Las moléculas de altos punto de ebullición , comunes en
GC, contaminaran todas las superficies frías• La contaminación origina pérdidas de sensibilidad• Los cuadrupolos metálicos (< 100ºC) contaminan
fácilmente en GC
Interface draws ions into vacuum and designed to exclude neutrals
If neutrals do enter into the first stage of vacuum, most are small, volatile solvents like H2O and CH4OH
+
+
++
++
++ + +
++ +
+ ++ + + + +
+
+
Heated nitrogen drying gas
Dielectric capillary entrance
Nebulizer tip aimed at 90 degree angle to inlet of capillary
Solvent spray
Ions
-5,000 V
Atmospheric Pressure
Vacuum
Agenda1. Introducción al nuevo Agilent
7000B GC Triple Cuadrupolo2. Soluciones a los principales
problemas del laboratorio de residuos• Preparación de muestra• Sensibilidad• Efecto matriz• Desarrollo de métodos/Traslado de
métodos desde GC/MS• Acreditación• Reporting
3. Conclusiones4. Aportaciones instrumentales a los
métodos de screening de plaguicidas
QuEChERSQuick, Easy, Cheap, Effective, Rugged & Safe
• Quick, Easy, Cheap, Effective, Robust and Safe , QuEChERS
• Método de Preparación de Muestra orientado a los mercados de Seguridad Alimentaria.
• Desarrollado conjuntamente por la USDA (2003) y por las Agencias Reguladoras de Alimentos Europeas (método prEn 15662: 2007)
• Metodología para una extracción simplificada de un gran número de residuos de pesticidas multiclase y multiresiduo en frutas y vegetales.
Mercados a los que se dirige1. Científicos en Seguridad Alimentaria que analizen residuos
de pesticidas/herbicidas en frutas y vegetales2. Agencias reguladoras/inspectoras del Gobierno3. Compañías de proceso de alimentos.4. Investigadores en la Universidad/Centros de Investigación
¡Solicite el catálogo de aplicaciones SPE para seguridad alimentaria!
Quechers KitsGuía de selección
Kit Extractivo- Con/Sin Tubo de centrífuga
Kit Dispersivo-Con guía de selección en función del tipo de material a ser extraído- Con material adicional para aplicación de variaciones sobre Quechers establecido
Con Notas de aplicación y resultados esperados en diferentes matrices y analitos
Agenda1. Introducción al nuevo Agilent
7000B GC Triple Cuadrupolo2. Soluciones a los principales
problemas del laboratorio de residuos• Preparación de muestra• Sensibilidad• Efecto matriz• Desarrollo de métodos/Traslado de
métodos desde GC/MS• Acreditación• Reporting
3. Conclusiones4. Aportaciones instrumentales a los
métodos de screening de plaguicidas
Normativa de análisis de plaguicidas en alimentos – Reglamento 396/2005
Cubre aproximadamente 1100 plaguicidasSe aplica un MRL por defecto de 0.01 mg/Kg para los productos para los que no
hay un MRL específico
Muchos compuestos a analizarDiferentes propiedades químicas (pesticidas neutros, ácidos, básicos)Matrices muy complejas
Contar con una preparación de muestra sencilla y barataConseguir una identificación seguraObtener confirmación y cuantificación en la misma inyección
RequerimientosRequerimientos
Reto AnalíticoReto Analítico
IdealmenteIdealmente
230°C
275°C
300°C
325°C
350°C
Nueva fuente iónica a alta temperatura en el 7000B
Respuestas mejoradas para un amplio rango de compuestos
– Operación más robusta para muestras “sucias”– Mejor respuesta para compuestos “pegajosos”– Picos más estrechos para compuestos de alto
punto de ebullición
Tech Overview 5989-6051EN
Dos partes totalmente nuevas
mejoran el rendimiento de la
fuente. El rendimiento de la lente de entrada
elimina la necesidad del pre-filtro
• Formas de pico a alta masa mejoradas• Sensibilidad mejorada a masas medias/altas
Mass Iris (V) Signal Increase
69 -1 1.0X
131 -8 1.1X
264 -13 1.5X
414 -20 2.5X502 -30 2.8X614 -35 4.0X
Ramped Detector Iris
7000B Mejoras en Señal
Extractor Source w/Ramped Iris Detector
Standard Source & Detector mode
La mejora media obtenida en 10 sistemas de test fue
de 3.5x / 5x en señal
La mejora media obtenida en 10 sistemas de test fue
de 3.5x / 5x en señal
Celda de colisión con gas de quenching adicional
Celda de Colisión
Entrada PrecursorHe* +
Disociación por colisión
1 ml/min N2Gas Colisión
La transmisión de helio metastable hacia el detector reduce de modo
notable. Además el TAD reduce aún más el ruido de
neutros
Fuente Detector
Cuadrupolo Cuadrupolo
He Buffer Gas
He* + He → 2 He + Q
Salida Producto
+ He*
Detector de Triple Eje de alto rendimientoMáxima reducción de ruido de neutros
– La combinación del gas de quenching (helio) y el diseño del triple eje en el sistema de detección proporcionan grandes reducciones en el ruido
Larga vida y linealidad extendida– Electromultiplicador de triple canal
Sintonizado de ganancia normalizada corrige los problemas causados por el deterioro del detector
– Sensibilidad consistente a largo plazo
Diseño probado en el 5975C MSD
hyperbolic quartztransmission
quadrupoleanalyzer
triple channelelectron multiplier
high energy dynode
steering rod
ion beamX
Y
OffsetZshield for
secondary particles
triple channelelectron multiplier
high energy dynode
steering rod
ion beamXX
YY
OffsetZ
OffsetZshield for
secondary particles
Electromultiplicador de Triple Canal
- Capacidad de programación de temperaturaHot/cold S/SL (pulsed mode), temperature programmed vaporization (PTV), solvent vent.
- Flexibilidad en los volúmenes de inyecciónAnálisis de muestras termolábiles y mínima discriminación en la inyección para compuestos con alto peso molecular
- Mayor sensibilidad en inyecciones de gran volumen
- Compatibilidad con Tecnología de flujo CapilarVenteo de disolventes y uso de Backflush
- Totalmente integrado con Chemstation, EZChrom y MassHunter
Nuevo Inyector Multimodo para muestras con alto contenido en matriz
Ambient In-vial Small-Volume Derivatization Dilution Internal Standard Heating/MixingHeadspace Extraction Sampling Addition Bar Code
Resultados determinación de nitrosaminas – PCIGas Reactivo Amoniaco - 50 fg on column
6x10
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
4.5
5
5.5
6
6.5
7
7.5
8
8.5+CI TIC MRM CID@** (** -> **) Nitrosamines-100ng_ml.D
Counts vs. Acquisition Time (min)9 9.2 9.4 9.6 9.8 10 10.2 10.4 10.6 10.8 11 11.2 11.4 11.6 11.8 12 12.2 12.4 12.6 12.8 13 13.2 13.4 13.6 13.8 14 14.2 14.4 14.6 14.8 15
Recta de calibrado a niveles de pg/mLFemtogramos de compuesto en columna
Agenda1. Introducción al nuevo Agilent
7000B GC Triple Cuadrupolo2. Soluciones a los principales
problemas del laboratorio de residuos• Preparación de muestra• Sensibilidad• Efecto matriz• Desarrollo de métodos/Traslado de
métodos desde GC/MS• Acreditación• Reporting
3. Conclusiones
Problemas típicos en fuente en cromatografía de gases – Contaminación de partes fríasMoléculas neutras a alta temperatura provenientes del GC se “pegan” a las partes frías de la fuente.La presencia de iones Helio ayudan a que estos iones se “peguen” a esas partes frías
Contaminacion de partes “frías” de la fuente(frío ≈ 200ºC)
Contaminacion de un analizador “frío”
Rods del cuadrupolo < 100ºC
Ventajas del trabajo en MS/MSMejor selectividad que en SIM
Ion Precursor
Producto 1Producto 3
Producto 2
EI-SIMLa selectividad es proporcional a la resolución espectral. Por
tanto no hay selectividad frente a iones de igual m/z
EI-MS/MSLa selectividad para el precursor es
igual que en SIM. Hay una alta probablidad de que al menos un ion
producto sea diferencial entre el compuesto de interés y la interferenciainterferencia
analito
interferencia
El precursor no debe ser usado para la medida de ion ratios ya que las interferencias serán
idénticas a las que pueden surgir en SIM
El precursor no debe ser usado para la medida de ion ratios ya que las interferencias serán
idénticas a las que pueden surgir en SIM
resolución unidad
Backflush Tecnología de Flujo Capilar
S/SL Inlet
Capillary Flow Device
2 psi
60 psi
Detector/es
Split Vent
Durante GC Run
Después GC Run
S/SL Inlet
Capillary Flow Device
25 psi
4 psi
Detector/es
Aux EPCSplit Vent
Aux EPC
Backflush al final de cada inyección
Backflush 20 sec Flujo
Backflush 30 sec Flujo
Backflush 40 sec Flujo
Backflush 60 sec Flujo
ColumnaInlet
Fin del run Flujo
La finalidad es eliminar componentes pesados al final de cada inyección
PCBs en aceite de pescado. Análisis GC-ECDLos RTs se afectan por restos de la matriz
m in5 . 3 5 . 4 5 . 5 5 . 6 5 . 7 5 . 8 5 . 9 6 6 . 1 6 . 2
N o r m .
2 0 0 0
4 0 0 0
6 0 0 0
8 0 0 0
1 0 0 0 0
1 2 0 0 0
1 4 0 0 0 10 Runs without BackflushingRetention times shift ~4-5 secduring 10 runs
m in5 . 3 5 . 4 5 . 5 5 . 6 5 . 7 5 . 8 5 . 9 6 6 . 1
N o r m .
0
2 0 0 0
4 0 0 0
6 0 0 0
8 0 0 0
1 0 0 0 0
1 2 0 0 0
1 4 0 0 0
1 6 0 0 0
10 Runs with Backflushing
Sin opción de backflushUn problema serio
Abundance
4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.0002000000400000060000008000000
1e+071.2e+071.4e+071.6e+071.8e+07
2e+072.2e+072.4e+072.6e+072.8e+07
3e+073.2e+073.4e+073.6e+073.8e+07
4e+074.2e+074.4e+074.6e+07
Time
B
A
Superposición de dos cromatogramas correspondientes a un blanco inyectado antes y después de una secuencia de tres inyecciones de lechuga sin BACKFLUSH
Tras solo 3 muestras, el fondo es claramente mayor debido al aumento de ruido quimico a nivel espectral
Tras solo 3 muestras, el fondo es claramente mayor debido al aumento de ruido quimico a nivel espectral
A: TIC: lettuce_blank.D\data.ms
B: TIC: lettuce_blank3.D\data.ms
Data provided by MSD user in Almeria, Spain
Con opción de backflushSin incrementos de fondo y RTs repetitivos
Tiempos de retención totalmente estables y línea de base casi libre de ruido químico
4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.000
2000000400000060000008000000
1e+071.2e+071.4e+071.6e+071.8e+07
2e+072.2e+072.4e+072.6e+072.8e+07
3e+073.2e+073.4e+073.6e+073.8e+07
4e+074.2e+074.4e+074.6e+07
Time
Abundance
TIC: lettuce_10_ppb.D\data.msTIC: lettuce_100_ppb.D\data.msTIC: lettuce_5_ppb.D\data.ms
Data provided by user in Almeria, Spain
Superposición de dos cromatogramas correspondientes a un blanco inyectado antes y después de una secuencia de tres inyecciones de lechuga sin BACKFLUSH
Nueva Purged Ultimate Union. Modo Analítico
Venteo
Presión / Control de Flujo
15-m HP-5ms (0.25mm id x0.25um)
15-m HP-5ms (0.25mm id x0.25um)
Dispositivo de Flujo Capilar
5975C MSDEI mode
7890A GC
Split/Splitless Puerto de Inyección
Y ml/min
Y+Z ml/min
Z ml/min
Pueden usarse columnas de fases y dimensiones diferentes
Purged UltimateUnion
Reproducibilidad* en RT para Trifluralin en extracto de lechuga. 100 Inyecciones, 3 minutos backflush. Secuencia de 21 horas
Min 6.070Max 6.075
Mean 6.073
Std Devn 0.00186% RSD 0.0306RT (mins)
* Agilent 2x RTL Pesticide Method
Agenda1. Introducción al nuevo Agilent
7000B GC Triple Cuadrupolo2. Soluciones a los principales
problemas del laboratorio de residuos• Preparación de muestra• Sensibilidad• Efecto matriz• Desarrollo de métodos/Traslado de
métodos desde GC/MS• Acreditación• Reporting
3. Conclusiones4. Aportaciones instrumentales a los
métodos de screening de plaguicidas
GC 1SSL/FPD
GC/MS
GC 2PTV/µECD
Column 1
Column 2
Column 3
Column 1
GC 1SSL/NPD
¿Qué es el Retention Time Locking (RTL)?Es la habilidad de precisar los tiempos de retención cromatográficos de un sistema cromatográfico a otro con el mismo método y la misma columna.
¿Cómo se consigue?Ajustando la presión en cabeza de columna de la columna vía EPC usando ChemStation.
Bloqueo de tiempos de retención
500 Transiciones/segundo ¿Por qué es importante?1. Picos GC especialmente estrechos (anchuras <1-2 s)
2. Suficientes puntos a lo largo del pico (15) para conseguir una cuantificación aceptable/exacta
3. Muchos compuestos a monitorizar en un único run (multiresiduos) con coeluciones muy frecuentes
4. Ambientes regulados en los que se exigen controles de calidad rigurosos para asegurar la validez de los datos (p.e. transiciones de confirmación de acuerdo con la directiva europea 96/23/CE directive)
Extracto vegetal enriquecido – 200 ppb plaguicidas - TIC/MRM
Extracción automatizada de todas las transiciones
programadas en un
cromatograma complejo
Herramientas para optimización automatizada con MassHunter
Proporcionar una serie de herramientas que asisten al usuario en la CREACION y OPTIMIZACION del método de adquisición MS/MS
Dynamic MRM para GC/MS es una parte del flujo de trabajo que incluye la generacion del método (basado en RTs/transiciones conocidas y LA OPTIMIZACION DE LOS PARÁMETROS DE ADQUISICIÓN MRM
Design Experiments Assistant
Analyze Experiments Assistant
DynamicMRM Assistant- MassHunter Quant- MassHunter Qual- Microsoft Excel ©
Herramientas de optimización. ¿Generación manual de segmentos?
Zonas de baja densidad de picos permiten una division manual sencilla
En zonas de gran densidad de compuestos es casi imposible. Problema
clásico del campo de residuos
Asistente de Diseño de ExperimentosCreación automatica de un set de experimentos MRMs basados en diferentes CEs
40
Asistente para análisis de experimentos
Proceso de datos generados desde el set de experimentos anterior.
Creación automatizada de un método MRM basado en las Ces que proporcionan señales más intensas para cada transición programada.
¿Como funciona Dynamic MRM para GC/MS a la hora de optimizar métodos MS/MS?Dynamic MRM optimiza scan cycle time, dwell times, y el orden de adquisición (generación automatizada de segmentos) para conseguir:
1. Maxima señal2. Mínimo ruido3. %RSD bajas4. La mayor velocidad de análisis5. La mayor robustez en el método
La aproximación tiene en cuenta la integración de picos y el ruido de línea de base en el proceso de optimización del valor de dwell time.
Visualizacion de la optimizacion del dwell time
Single-Transition RSD Model*
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.2
1.4
0 10 20 30 40 50 60
Dwell Time (ms)
RSD
(%) RSD_Noise
RSD_IntTotalRSD
El algoritmo de trabajo de dMRM tiene en cuenta el hecho de que:
a) Incrementar el valor de dwell time disminuye el RSD debido a la disminución del ruido
b) Disminuye el número de puntos que definen el pico cromatográfico y, por tanto, aumenta el error debido a la integración
Dwell Time Optimo
Comparación DynamicMRM vs. Tradicional250 ppb, 123 compuestos, 298 transiciones
Original
17 segmentos
Original
17 segmentos
Dynamic MRM
60 segmentos
Dynamic MRM
60 segmentos
Resultados: %RSD ComparaciónCompoundName Expert-optimized
RSDDynamic MRM
RSD Improved?
Acetochlor 1.4 1.2 YAclonifen 15.7 12.4 YAlachlor 2.4 0.8 YAllethrin 16.8 11.2 YAncymidol 7.5 7.1 YAzaconazole 5.3 4.6 YAzinphos-methyl 71.1 25.3 YBenfuracarb 14.1 7.4 YBenodanil 10.1 8.8 YBenzoylprop ethyl 2.7 3.6Biphenyl 11.6 9.7 YBromacil 19.7 15.2 YBromocyclen 8.1 6.0 YBromopropylate 10.4 11.6Bromuconazole I 6.1 5.7 YBromuconazole II 5.7 5.7 YBuprofezin 6.2 6.1 YButachlor 8.7 8.3 YButralin 16.8 15.7 YCaptafol 44.7 46.6Carbofuran 68.3 57.1 Y…. … …
Average %RSD 11.1 9.3RSD Std Dev. 12.0 8.8
1. dMRM proporciona un RSD medio 15% menor que el método tradicional2. La distribución de %RSD es notablemente menor
La ventaja más importante de todas
es el TIEMPO INVERTIDO
POR EL USUARIO.
Notablemente menos en el caso de dMRM
La ventaja más importante de todas
es el TIEMPO INVERTIDO
POR EL USUARIO.
Notablemente menos en el caso de dMRM
GC/MS/MS - Pesticide Analyzer … Dos configuraciones posibles
Basado en un sistema 7890A/7000B GC/MS/MS, configurado con backflush usando la
Tecnología de Flujo Capilar. Bases de datos MRM incluídas en el método puesto en
marcha y chequeado químicamente en fábrica.
Dos posibles configuraciones:
7890-0501: Método basado en el método clásico de plaguicidas de Agilent (RTL) GC/MS/MS MRM
con una base de datos (500+ pesticidas) puesto en marcha a Presión Constante con Post-column
backflush. Proporciona flexibilidad para añadir detectores GC y escalarlo a menores tiempos.
7890-0502: Método basado en la USA targeted pesticide list RTL GC/MS/MS MRM con base de
datos de (200+ pesticidas) puesta en marcha a Flujo constante con backflush a mitad de columna. El
método proporciona el mejor rendimiento y los menores tiempos de ciclo para un consumo reducido de
carrier.
Nuevo !!!
Agenda1. Introducción al nuevo Agilent
7000B GC Triple Cuadrupolo2. Soluciones a los principales
problemas del laboratorio de residuos• Preparación de muestra• Sensibilidad• Efecto matriz• Desarrollo de métodos/Traslado de
métodos desde GC/MS• Acreditación• Reporting
3. Conclusiones4. Aportaciones instrumentales a los
métodos de screening de plaguicidas
Dificultades al afrontar los requisitos de las entidades de acreditaciónPlaguicidas – ENAC/SANCO
Validación, incertidumbre, sensibilidad, control de calidad, exactitud,
recuperación, robustez, precisión, repetibilidad …
MS – Technique IP / ion
Low resolution mass spectrometry (LR-MS) 1.0
LR-MSn precursor ion 1.0
LR-MSn transition products 1.5
High resolution mass spectrometry (HR-MS) 2.0
HR-MSn precursor ion 2.0
HR-MSn transition products 2.5
7000B: Precision, Precision, Precision
Dwell Time (msec) 10 5 3 2 1# Transitions 18 33 50 66 99
Cycle Time 198 198 200 198 198MRM/sec 91 167 250 333 500
n=1 37453 39629 38589 37722 362462 37854 38444 35487 34584 345243 36464 39402 37690 35916 350074 38547 37270 35756 36243 338955 38372 38376 37277 37373 369556 36349 37881 38076 38625 333157 39439 32900 36179 38984 348618 37654 37787 37455 38018 379869 37588 38620 40348 34537 34307
10 37140 36425 37795 36869 34700Average Area 37686 37673 37465 36887 35180
SD Area 940 1925 1439 1557 1447% RSD 2.5% 5.1% 3.8% 4.2% 4.1%
Para 10ppb de PropizamidaPara 10ppb de Propizamida
Mejor precisión, supone mejoras
en la información cualitativa
Mejor precisión, supone mejoras
en la información cualitativa
Detección de anómalos
1. Más de 20 criterios posibles
2. Tolerancias establecidas en el método de análisis
3. Avisos & Herramientas de filtrado
4. Report de Anómalos
Batch-at-a-GlanceComprobación de tolerancias para transiciones cualificadoras
Tolerancias de legislaciónTolerancias
de legislación
Batch-at-a-GlanceNavegación + Informacion
Integrador libre de parámetrosValidación de picos
Valida la calidad de pico basándose en:– Altura de pico– Area de pico– Anchura de pico– Simetría de pico– Picos unidos a la derecha/izquierda– Nivel de “spikes” en un pico
Clasifica la calidad de los picos como:– Aceptados– Revisar– Rechazar
¡Permite centrarse en los picos de interés!
MergeValley Height
15 %
Peak Accepted
MergeValley Height
39 %
InspectPeak
MergeValley Height
54%
PeakRejected
Metrics Plot• Representa una columna de datos, e.g. comportamiento de los ISTDs a lo
largo de un batch• Selecciona la columna a representar, elige Plot this Column y examina la
representación• Pueden representarse múltiples columnas a la vez
Agenda1. Introducción al nuevo Agilent
7000B GC Triple Cuadrupolo2. Soluciones a los principales
problemas del laboratorio de residuos• Preparación de muestra• Sensibilidad• Efecto matriz• Desarrollo de métodos/Traslado de
métodos desde GC/MS• Acreditación• Reporting
3. Conclusiones4. Aportaciones instrumentales a los
métodos de screening de plaguicidas
Plantillas disponibles para la confección de reports
•Acquisition Method Report•Analysis Report•Compound Report•Qualitative Method Report•Target Compound Screening Report
•Acquisition Method Report•Analysis Report•Compound Report•Qualitative Method Report•Target Compound Screening Report
Reporting basado en ExcelExcel 2003 + XML
Selección de la plantilla correctaCola con reports múltiplesSelección Impresora/Pdf
ExcelCarga la plantillaImporta los resultadosFormatea el reportReport es:
a) Guardado como XLSb) OPT: Printerc) OPT: PDF
Report Resultados (XML) &Gráficos generados
Agenda1. Introducción al nuevo Agilent
7000B GC Triple Cuadrupolo2. Soluciones a los principales
problemas del laboratorio de residuos• Preparación de muestra• Sensibilidad• Efecto matriz• Desarrollo de métodos• Acreditación• Traslado de métodos desde GC/MS• Reporting
3. Conclusiones4. Aportaciones instrumentales a los
métodos de screening de plaguicidas
Conclusiones1. Un sistema basado en la tradición GC/MS Agilent, con más de 30 años
de experiencia en el manejo de sistemas cuadrupolares2. Un sistema especialmente dedicado para un robusto
acoplamiento GC destinado a obtener las mejores prestaciones sin riesgos ni falsas expectativas
3. Una novedosa celda de colisión basada en el desarrollo realizado para la serie 6400 LC/MS Triple Cuadrupolo
4. Un sistema destinado a aplicaciones en matriz compleja en busca de la más alta robustez y sensibilidad
5. Facilitando la puesta en marcha de la aplicación a través del uso del MassHunter Software o del uso de los Agilent Analyzers
6. Colaborando con el laboratorio en muchas de las tareas propias del trabajo en entorno acreditado
7. MassHunter Software. Una nueva plataforma que recoge las demandas del usuario más exigente en cuestiones relevantes como el tratamiento de datos, el autosintonizado o la generación de reports
Agenda1. Introducción al nuevo Agilent 7000B
GC Triple Cuadrupolo2. Soluciones a los principales
problemas del laboratorio de residuos• Preparación de muestra• Sensibilidad• Efecto matriz• Desarrollo de métodos• Acreditación• Traslado de métodos desde GC/MS• Reporting
3. Conclusiones4. Aportaciones instrumentales a los
métodos de screening de plaguicidas
Flujo de trabajo simplificado. Análisis de plaguicidasPreparación de
muestra
Screen
Confirmar
Data Analysis & Reporting
Cuantificar
¿No sería interesante poder decir que una matriz esta libre de cientos de plaguicidas en un simple análisis en modo scan en lugar de
“sólo” cuantificar unas pocas decenas?
¿No sería interesante poder decir que una matriz esta libre de cientos de plaguicidas en un simple análisis en modo scan en lugar de
“sólo” cuantificar unas pocas decenas?
¿Qué es la Deconvolución?“…extracción de una señal de una mezcla compleja...”
(AMDIS)
En el ejemplo hay tres, puede que cuatro,
componentes deconvolucionados bajo el TIC de color blanco.
Deconvolución AMDIS extrae Componentes Individuales y sus espectros
TIC & EspectroTIC & Espectro
Suma de iones en Componente 1
Suma de iones en Componente 3
Suma de iones en Componente 2
DeconvoluciónDeconvolución
Búsqueda “limpia” de componentes contra una librería
Búsqueda “limpia” de componentes contra una librería
p, p’-DDEp, p’-DDE
Los iones blancos representan el espectro extraído (limpio) que
confirma p,p’-DDE
Menús desplegables DRS en Chemstation
Quant + DRS single file –cuantifica y deconvoluciona el cromatograma en pantalla
DRS with existing Quant - single file - usa los resultados de cuantificación existentes y deconvoluciona el cromatograma en pantalla
CONFIGURATOR – Interfase control DRSMétodo ChemstationLibrería espectral
(comercial o propia). Contiene nombre de compuestos, espectros, índices de retención, nºCAS
Fichero de tiempos de retención. Correlaciona índices de retención con tiempos de retención
Búsqueda en NIST opcional
Settings de AMDIS. Modificables por el usuario al establecer los parámetros de búsqueda
Permite uso de métodos SIM
MSD ChemStation
Cuantificación
AMDIS + RTL
Deconvolución+ Búsqueda en espectroteca
NIST05 MS Search
Búsqueda en NIST de espectros
deconvolucionados
MSD-DRS Report
Un analista con experiencia tardaría de 20 a 30 minutos en obtener resultados similares por métodos convencionales
Muestra de espinaca deconvolucionada. Detección de compuestos inesperados
Resolución de coeluciones con AMDIS - Primer match en AMDIS para un pico cromatográfico
Chlorpyrifos methyl AMDIS match = 95 Δ r.t. = 0.2 sec
NIST05 match = 89
Negro – espectro sin limpiar a 16.60 min –
Blanco - espectro deconvolucionado a
16.605 min
Methyl parathion AMDIS match = 88 Δ r.t. = 0.0 sec
NIST05 match = 92
Negro – espectro sin limpiar a 16.61 min Blanco – Espectro
deconvolucionado a 16.609 min
Resolución de coeluciones con AMDIS - Segundo match en AMDIS para un pico cromatográfico
QEdit – después de importar resultados DRS (Butilbencil Ftalato seleccionado)
Superposición del target(s)y Deconvolución de las
representaciones de iones
Revisión Espectral: Antes AMDIS
Después AMDISLibrería AMDIS
Áreas y cantidadesdel ión target ion yde la deconvolución
RepresentaciónDeconvolución
Representación Ión Target
Hits X = MSD
A = AMDIS
Gracias por su atención
PreguntasJaume Santamaria
Especialista de Producto GCMSAGILENT TECHNOLOGIES
901.11.68.90