日皮会誌：95 (11), 1153-1157, 1985 (昭60）

抗毛ケラチソ単クローソ抗体(HKN-5, HKN-6, HKN･７

　　およびＨＫＮ-８）による正常ヒ,ト成長期毛組織の

　　　　　　　　免疫組織化学的研究

田沢

伊藤

敏男

　薫

伊藤

佐藤

　　　　　　　　　　要　　旨

　hair　fibrous　proteinに対する単クローン抗体

（ＨＫＮ･5, HKN-6, HKN･７およびＨＫＮ･８）を作製し，

正常ヒト成長期毛組織を免疫組織化学的に検索した．

これらの抗体の反応性から成長期毛組織各層のケラチ

ソ線維の免疫学的性格を明らかにした．すなわち，毛

髄質，毛皮質，毛小皮と内毛根鞘は免疫学的に類似し

たケラチソ形成を示し，外毛根鞘の最内層細胞はその

他の外毛根鞘細胞とは異ったケラチソ形成を示すこと

を明らかにした．

　　　　　　　　　　緒　　言

　ケラチンは上皮細胞に特異的に存在するinter-

mediate filamentである1)が，各上皮細胞において

異ったポリペプタイド構成が知られている町ケラチ

ンに対して作製された単クローン抗体として，広く上

皮細胞と反応する抗体3)4)のほか，特定の上皮細胞のみ

を識別する抗体5)6)が報告されている．皮膚では従来，

毛ケラチンは表皮ケラチンと生化学的にかなり異ると

されている7).著者らはすでに毛ケラチソ線維性蛋白

に対して作製した単クローン抗体(HKN-2)により，

正常ヒト皮膚組織の免疫組織化学的研究を報告し

た4)8)9)今回,毛組織と特異的に反応する抗毛ケラチソ

単クローン抗体(HKN-5, HKN-6, HKN-7および

HKN-8)を用いてヒト成長期毛組織を免疫組織化学的

に検索し，毛および毛包の各層のケラチソ線組の形成

新潟大学医学部皮膚科学教室（主任　佐藤良夫教授）

Toshio Tazawa, Masaaki Ito, Naoya Shimizu,

　Kaoru Ito and Yoshio Sato : An immunohisto-

　chemical study on the norma! human anagen hair

　and hair follicleusing anti-hair keratin mono-

　clonal antibodies (HKN-5, HKN-6, HKN･７ and

　HKN-8)

昭和60年１月14日受付，昭和60年５月29日掲載決定

別刷請求先:（〒951)新潟市旭町通１番町　新潟大学

　医学部皮膚科学教室　田沢敏男

雅章

良夫

清水　直也

に関して新しい知見を得たので報告する．

　　　　　　　　実験材料および方法

　毛ケラチソ線維性蛋白の抽出法：すでに報告した方

法9）で行った．ヒト正常毛の8M尿素, 0.8M　2-mer-

captoethanol含有Tris-NaOH緩衝液（pH 10.5)に

可溶性の成分にmonoiodoacetate solutionをpH ８．０

の条件下で反応させ, S-carboxymethylationを行い，

sodium acetate buffer（ｐＨ4.0)に対して透析し，析

出不溶性成分（loｗ sulfur fraction)を精製し，凍結

乾燥し用いた．この分画がhair fibrous proteinであ

る7）.

　単クローン抗体の作製法：すでに報告した方法で

行った9）.haiｒfibrous protein で免疫したＢＡＬＢ/ｃマ

ウスの牌細胞とマウス骨髄腫細胞(Sp2/O-Agl4)を

50% polyethyleneglycol 4000 (Merck,ドイツ）を用

いて細胞融合を行った．マウス腹腔マクロファージを

加えたＨＡＴ培地で培養し, enzyme･linked　im-

munosorbent　assay (ELISA)でその培養上清中に

hair fibrous proteinに対する特異抗体を産生してい

る細胞を同定した．その細胞をさらにIimting dilution

によりクローニングを行い，単クローソ性のハイブリ

ドーマを得た．腹水として抗体を回収した．抗体の免

疫グロブリン・サブクラスはＥＬＩＳＡで決定した．

　間接蛍光抗体法：４μｍの正常ヒト皮膚の未固定凍

結切片およびエタノール固定脱パラフィソ切片を用

い，各抗体の組織反応特異性を検索した．一次抗体と

してHKN-5, HKN-6, HKN-7およびＨＫＮ･８，二次抗

体としてＦＩＴＣ標識ヤギ抗マウスｌｇＧ抗体(Cappel,

U.S.A.)をＰＢＳで希釈し，室温，30分間反応させた.

Zeiss Standard 18FL蛍光顕微鏡で観察した．

　　　　　　　　　　結　　果

　単クローソ抗体の免疫グロブリン・サブクラス：

HKN-5, HKN-6, HKN-7およびHKN-8はマウス免疫

グロブリンIgG 1であった．

　間接蛍光抗体法所見：HKN-5は毛母には反応せず，

1154 田沢　敏男ほか

図卜Ａ　毛球部のHKN-5蛍光抗体法所見．毛皮質

　（Co）,毛小皮（Ｃ），外毛根鞘最内層細胞（大矢印）

　に強い反応がみられ，内毛根鞘（Ｉ）に弱い反応が

　みられる．毛母（Ｍ），外毛根鞘最内層細胞以外の外

　毛根鞘細胞には反応はみられない．Ｐ，毛乳頭；小

　矢印，基底膜．

図卜Ｂ　ヘソレ層が角化するレベルの毛組織の

　ＨＫＮ･５蛍光抗体法所見．毛皮質(Co),毛小皮（Ｃ）

　に強い反応がみられる．内毛根鞘（Ｉ）では弱い反

　応がみられるが，角化したヘソレ層（矢尻）では反

　応がみられない．外毛根鞘では最内層細胞（大矢阻）

　に強い反応がみられ，その外側の細胞には反応はみ

　られない．小矢印，基底膜．

角化帯の毛髄質，毛皮質，毛小皮に強く反応し，鞘牛

皮，ハックスレー層，ヘンレ層に弱く反応した．しか

し，それぞれ角化した部位ではまったく反応がみられ

なかった．外毛根鞘では，毛球部から下部毛包では，

ヘソレ層に接する一一層の扁平な外毛根鞘最内層細胞に

HKN-5に対する強い反応性がみられた昿その他の外

毛根鞘細胞には反応はみられなかった(図∩．やや上

方で毛狭部に近くなると反応する最内層細胞はほぼ立

方形となり，さらに毛狭部では外毛根鞘性角化後の角

質層の表面を一層の細胞層として覆うようにHKN-5

陽性蛍光がみられた(図2). HKN-6, HKN-7および

HKN-8は，毛母には反応せず，角化帯の毛髄質，毛皮

質，毛小皮，鞘牛皮，ハックスレー層，ヘソレ層には

ＨＫＮ-５と同様に反応した(図3, 4).ただし毛皮質と

内毛根鞘の反応様式は,各抗体間で差異がみられた(図

３)．また，それぞれ角化した部位にはやはり反応がみ

られなかった，しかしながらＨＫＮ-５とは異り，外毛根

鞘には，その最内層細胞を含めてまったく反応しな

かった(図４)．これらの抗体はいずれ乱表皮，脂腺，

ｊイ↓冷

４１　

　゛○イ

図２-Ａ　毛皮質，ハックスレー層が角化するレベルの

　毛組織のＨＫＮ,５蛍光抗体法所見．毛髄質（ｍ），毛

　皮質（Ｃ）に強く，内毛根鞘（Ｉ）のハックスレー

　層に弱い反応がみられるが，角化した部位（＊）に

　は反応がみられない．外毛根鞘（Ｏ）では最内層細

　胞（大矢印）に強い反応がみられるが，その外側の

　細胞には反応はみられない．小矢印，基底膜．

図２-Ｂ　拡大図．最内層細胞（大矢印）はこの部位で

　は立方形を呈する．０，外毛根鞘；小矢印，基底膜．

図2-Ｃ　外毛根鞘性角化を示すレベルの毛組織の

　ＨＫＮ-５蛍光抗体法所見.外毛根鞘性角化を示す細胞

　（＊）の表面に角化した外毛根鞘最内層細胞（大矢印）

　の強い反応を認める．０，外毛根鞘；小矢印，基底

　膜．

汗腺には反応性を示さなかった(図５)．

　　　　　　　　　　考　　按

　従来, simple epithelia のみを認識する抗ケラチソ単

クローソ抗体が報告されている5)6)が，毛組織に特異的

な抗体は報告されてトない．今回のヒト正常皮膚にお

ける蛍光抗体法所見より, HKN-5, HKN-6, HKN-7お

よびＨＫＮ-８は，いずれも毛組織に特異的に反応する

抗体であるといえる. intermediate filament の分子構

造は互いに類似している1o)が，毛および表皮ケラチン

のアミノ酸配列には共通した部分と異った部分とかあ

り，まったく同一ではないことが明らかにされてい

る11)おそらく今回作製したこれらの抗体は,ケラチソ

単クローソ抗体（ＨＫＮ-５,ＨＫＮ-６,ＨＫＮ-７およびHKN-8) 1155

図３-Ａ　毛組織のHKN-6蛍光抗体法所見．角化帯の

　毛皮質（Ｃ），毛小皮，内毛根鞘（ｉ）に強い反応が

　みられ，内毛根鞘（ｉ）では角化直前のヘソレ層お

　よびハックスレー層の反応が強い．

図3-Ｂ　毛組織のHKN-7蛍光抗体法所見．角化帯の

　毛皮質（Ｃ），毛小皮，内毛根鞘Ｏ）に全体に強い

　反応がみられる．

図3-Ｃ　毛組織のHKN-8蛍光抗体法所見．角化帯の

　毛皮質（Ｃ），毛小皮に弱く，内毛根鞘（ｉ）では角

　化直前にヘソレ層およびハックスレー層に強い反応

　がみられる．

図４-Ａ　毛球部のHKN-6蛍光抗体法所見．毛皮質（Ｃｏ）,毛小皮（Ｃ），内毛根鞘（Ｉ）

　に強い反応がみられる．毛母（Ｍ），外毛根鞘には反応はみられない．Ｐ，毛乳頭；

　小矢印，基底膜．

図4-Ｂ　ヘソレ層が角化するレベルの毛組織のＨＫＮ-６蛍光抗体法所見.毛皮質（Ｃｏ），

　毛小皮（Ｃ），内毛根鞘（Ｉ）に強い反応がみられる．角化したヘソレ層（矢尻）で

　は反応がみられないが，角化直前の細胞の反応が強い．外毛根鞘（Ｏ）には反応は

　みられない，

図4-Ｃ　ハックスレー層が角化するレベルの毛組織のHKN-6蛍光抗体法所見．毛皮

　質(Co),毛小皮（Ｃ），内毛根鞘（Ｉ）のハックスレー層に強い反応がみられるが，

　角化した内毛根鞘（＊）には反応がみられない．外毛根鞘（Ｏ）には反応はみられ

　ない．

1156 田沢　敏男ほか

図５：正常皮膚のHKN-7蛍光抗体法所見．角化帯の

　毛皮質（＊），毛小皮，内毛根鞘に全体に反応がみら

　れる．表皮（Ｅ），脂腺（Ｓ），外毛根鞘（Ｏ）に反

　応はみられない．

のポリペプタイドのうち毛ケラチンに特異的に存在す

る部分を認識しているものと考えられる．

　毛組織の各層におけるケラチソ線組形成の異同に関

してはほとんど知られていない．毛髄質，毛皮質，毛

小皮，内毛根鞘の細胞は，これらの抗毛ケラチソ単ク

ローソ抗体のいずれと乱　その角化帯において反応を

示し，毛母細胞および角化した細胞は反応しないとい

う同様の反応性を示す．したがって，これら各層にお

けるケラチソ形成はかなり質的に類似していると考え

られる．しかし，抗体によりこれら各層の反応様式に

差異がみられることから，それぞれの抗体が認識する

ケラチンの構成要素に関しては多少の差異があると推

測される．

　外毛根鞘のＨＫＮ-５に対する反応性から，ヘソレ層

に接する一層の外毛根鞘最内層細胞には，それ以外の

外毛根鞘細胞に存在せず，毛髄質，毛皮質，毛小皮，

内毛根鞘細胞と類似したケラチソ線組が形成されると

いえる．一方，外毛根鞘最内層細胞は, HKN-6, HKN-

７およびＨＫＮ-８では認識されないことから，毛髄質，

毛皮質，毛小皮，内毛根鞘とは明らかに区別される．

また，すでに報告した8)9)　ＨＫＮ-2は，同様にhair

fibrous protein に対する単クローソ抗体であり，毛皮

質や内毛根鞘などの他に外毛根鞘平表皮にも反応す

る．このＨＮＫ-２の反応性からは,各層に共通するケラ

チンの要素が存在しているといえる．従来，形態学的

には外毛根鞘最内層細胞は外毛根鞘の一部として，他

の外毛根鞘細胞とは特に区別されていない．しかし，

この最内層細胞は，毛球部，毛包下部においては，そ

の扁平な形態から明らかに形態学的にもその外側の外

毛根鞘細胞と区別され,しだいに立方形の形態となり，

毛狭部では外毛根鞘性角化の表面を覆っている．した

がって，外毛根鞘最内層細胞は，外毛根鞘性角化に到

る外毛根鞘細胞とは別に，毛球部からヘソレ層と並ん

で分化するものと考えられる．

　以上，抗毛ケラチソ単クローソ抗体HKN-5, HKN-

6, HKN-7およびＨＫＮ-８による免疫組織化学的倹素に

より，毛組織の各層のケラチソ線組の分化を明らかに

することができた．特に，外毛根鞘最内層細胞が，他

の外毛根鞘細胞とは異った分化をすることが示され

た．

　本論文の要旨は第83回日本皮膚科学会学術大会「シンポ

ジウムII」（昭和59年６月）および第48回日本皮膚科学会東

目本学術大会（昭和59年11月）で発表した．

単クｇ－ソ抗体(HKN-5, HKN-6, HKN-7およびHKN-8)

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　文

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