Virus ad RNA con polarità positiva

Flavivirus – Togavirus - Coronavirus

I Ribovirus a genoma negativoparamixovirus, orthomixovirus, rabdovirus, filovirus e bunyavirus

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Virus ad RNA con polarità positiva (monocatenario)

Forniti di peplomeri

Togavirus

Il virus della rosolia

Dal momento dell’introduzione del vaccino nel 1969, il numero di casi di Rosolia è diminuito del 99%

La rosolia è una forma febbrile esantematica accompagnata da linfoadenopatia malessere e congiuntivite.

Le complicazioni sono rare (trombocitopenia e encefalite)

Il periodo di incubazione 12-13 giorni (il 20-50% delle infezioni risultata asintomatica)

L’infezione è altamente trasmissibile al momento del rash cutaneo anche se il virus può essere eliminato da 7 gg prima a 7 giorni dopo l’esantema.

Rosolia durante la gravidanza

I trimestre di gravidanza (può colpire tutti gli organi in formazione con morte fetale e abnormalità congenite) Il 90% dei neonati colpiti durante le prime 11 settimane di gestazione possono sviluppare Rosolia congenita.

Si arriva al 20% se l’infezione avviene nelle prime 20 settimane.

Nella fase tardiva della gestazione non si presentano manifestazioni cliniche.

I neonati infetti eliminano il virus per circa 1 anno

Rosolia congenita: cecità (cataratta, retinopatia, glaucoma)

Sordità (degenerazione cocleare)

Microcefalia, ritardo mentale

Rosolia criteri di classificazione

Caso clinico: a) rash maculo-papulare b) temperatura > 37.2 c)linfoadenopatia suboccipitale, post auricolare e cervicale d) congiuntivite

Caso sospetto: rash

•Diagnosi di laboratorio: presenza di IgM (4-5 giorni dopo il rash e persistenti fino a 6 settimane) II campione

•Isolamento del virus (vie aeree respiratorio, sangue e urine) entro 4 giorni dal rash.

Virus ad RNA con polarità positiva

• Flavivirus – Togavirus - Coronavirus

Famiglia CoronaviridaeVirus rotondeggianti di 80-160 nm di diamFormati da:

– rivestimento esterno glicoproteico formato da unità tozze e ben visibili (aspetto a corona)

– capside interno elicoidale di 20nm di diam– genoma: RNA monocatenario non segmentato (+) infettante di 27-31.000 paia di

basi

Coronavirus

Agenti etiologici del raffreddore e….

Prima del 2003

HCoV229E e HCoV43Agenti del raffreddore, caratterizzati da replicazione nelle cellule ciliate dell’epitelio

mucoso delle prime vie aeree respiratorie. Scarsa o nulla tendenza alla diffusione

Dopo il 2003………..SARS Co

SARS Co

• Severe Acute Respiratory Syndrome

SARS Co responsabile della polmonite atipica (interessante prevalentemente i tessuti interstiziali – non c’è coinvolgimento degli spazi alveolari caratteristico delle polmoniti tipiche) con ampia diffusione epidemica A differenza degli altri Corona virus Il SARS Co si replica in cellule Vero (da rene di scimmia)

SARS: una nuova sfida per la medicina…...

L’inizio della storia….

..fine del 2002 Cina ...i primi casi che in seguito assumono carattere epidemico…11 febbraio 2003: prime segnalazioni di insolite sindromi respiratorie nel

Guangdong (Cina)

305 casi 5 morti dal 16 novembre 2002 all’11 febbraio 2003

l’ infezione si sparge a Hong Kong e Vietnam

12 marzo, 2003: allarme dell’OMS, primi casi in Canada, il CDC offre assistenza all’ OMS con oltre 300 ricercatori, tecnici e amministrativi spostati da altri progetti a quella che diventa la priorità n.1: l’ epidemia di SARS.

Coronavirus e SARS: i dati scientifici 2003

• Drosten C., Gunther S. et al. Identification of a novel Coronavirus in patientswith severe acute respiratory syndrome NEJM 10/5/03 (Amburgo, Francoforte, Marburg, Paris, Rotterdam)

• Ksiazek T et al. A novel Coronavirus associated with severe acute respiratorysyndrome NEJM 10/5/03 (CDC Atlanta, Hanoi, Singapore, San Francisco, Taipei, Hong Kong, Bangkok)

• Peiris JSM et al. Prospective study of the clinical progression and viral load of SARS-associated coronavirus pneumoniae in a community outbreak. Lancet7/5/03 (HongKong)

Drosten et al.

Caso probabile e 2 contattiRicercati tutti i possibili agenti di infezioni respiratorie: Tutto negativo tranne e

solo nel caso probabile:Paramixovirus nel tampone faringeoC. pneumoniae nel BALCoronavirus nell’ espettorato

Eseguita la sequenza genomica che risulta uguale a quella del coronavirusisolato dal CDC in un caso di SARS dal Vietnam!!!Sieroconversione del contatto n. 1 per lo stesso virus

Drosten et al.

Test diagnostico (RT PCR) in grado di ritrovare fino a 10 copie di RNA

Espettorato: positivo il caso probabile e contatto n. 1Sangue: positivo il caso probabile e il contatto n.1 dopo concentrazione (viremia) Feci: positive nel caso probabile e contatto n.1

49 campioni di feci di diarree di pazienti tedeschi dndd : nessuna positiva Ricercati gli anticorpi: negativi i donatori di sangue tedeschi

Risposta anticorpale nel caso probabile e nei 2 contatti (Nel caso probabile compaiono a 9 giorni, nel contatto n. 1 a 10 giorni dall’ inizio dei sintomi)

titolo 1:1500 caso probabiletitolo 1:250 nel contatto n.1anticorpi assenti nel contatto n.2

Ksiazek et al.

In 18 pazienti (tutti cinesi): Coronavirus con uno o più metodi:9 solo con PCR3 con PCR e l’ isolamento del virus 2 con l’ isolamento del virus, la PCR e la presenza di anticorpi1 con PCR e la presenza di anticorpi3 (convalescenti) solo per la presenza di anticorpiPerché in alcuni (quanti?) casi di possibili SARS il coronavirus non è

stato identificato? Test non sufficientemente sensibili?Tipo di materiale e momento del prelievo inadatti?Definizione di SARS sicuramente troppo ampia?

CDC, 24 Aprile 2003

• Il nuovo Coronavirus identificato sembra essere l’ agente responsabile della epidemia globale di SARS

• Il virus è nuovo nella specie umana e si propone il nome di URBANI-SARS associated Coronavirus

SARS Co responsabile della polmonite atipica

• Probabilmente origina da un reservoir animale (Zibetto) • Ricombinazione di un Co aviario e un Co di mammifero da cui si genera

un nuovo Co in grado di infettare l’uomo?!?

Materiale patologico ed isolamento in macachi inoculati sperimentalmente

ndndndnd2

----4

----3

+++-2

-++-1

Tampone nasale

----4

----3

ndndndnd1

6420Saliva

Giorni dopo l’infezione

Materiale patologico ed isolamento in macachi inoculati sperimentalmente

+++-2

----4

----3

----2

----1

Tampone rettale

+-+-4

----3

+++-1

6420Tampone faringeo

Giorni dopo l’infezione

Isolamento di Cov in macachi (post mortem)

--+-duodeno

---+vescica

----milza

+--+trachea

+--+pelle

--+-setto nasale++++polmone

--+-rene

---+cervello

M4M3M2M1

CRREMCentro di Riferimento Regionale per le Emergenze Microbiologiche

Metodologie diagnostiche

• Isolamento virale– colture cellulari– topi neonati

• Indagini di microscopia elettronica• Ricerca anticorpi (sierologia)• Polymerase Chain Reaction (PCR)

– “reverse transcription”-PCR (RT-PCR)– “real time” PCR

• Indagini immunoistichimiche e istopatologiche

Indagini sierologiche

• IF: spot con mix di cellule infette e non infette• EIA: antigene ottenuto con estrazione con detergente di cellule infette

(controllo da cellule NON infette)• IgG - IgA - IgM• dimostrata sieroconversione o aumento di 4x titolo• positività fra 1 e 2 settimane da esordio clinico• Consistente specificità dei test

Virus ad RNA con polarità positiva

• Picornavirus•Enterovirus

•Rhinovirus

•Hepatovirus

Enterovirus

• Resistenti all’azione inattivante di numerosi agenti fisici e chimici. Resistenti all’acidità del succo gastrico e alla bile.

• Poliovirus• Coxsackievirus A e B

• Circuito oro-fecale (ad eccezione di Enterovirus 70 infezione congiuntivale)

Oro-faringe o tratto alimentareMucose

Diffusione linfoematicaMeningi miocardio cute

Trasmissione oro-fecale

Replicazione nell’orofaringe e nel canale alimentare

Replicazione Tonsille e placche di Peyer

Viremia transitoria

Organi bersaglio

SNC Midollo Meningi Miocardio Cute

Enterovirus: eliminazione del virus

• Orofaringe: da 1 a 2 giorni prima dei sintomi, fino a 1 –2 settimane dopo la loro scomparsa

• Feci: da molte settimane ad alcuni mesi dopo la scomparsa della

sintomatologia

Enterovirus: diagnosi di infezione

• Isolamento del virus : tampone faringeo, saliva, feci, CSF• Effetto citopatico dopo 24 ore (cellule VERO)• IIF con anticorpi monoclonali• PCR in CSF

Poliovirus

• Meningite asettica lieve con rapida guarigione. • Se il virus raggiunge il nevrasse

• poliomielite [localizzazione a livello dei neuroni motori (distruzione)paralisi flaccida dei muscoli]

• Il virus si replica a livello neuronale provocando degenerazione degiassioni e paralisi

• Le cellule più colpite sono le cellule delle corna anteriori del midollo spinale

Poliovirus

• Vaccino di Salk (virus inattivato mediante formalina)• Vaccino di Sabin (virus viscerotropo - vaccino orale)• 1999 Salk + Sabin• 2003 solo Salk

DTP: vaccinazione antidifterico-tetanico-pertossica -IPV: vaccino antipoliomielitico iniettabile –inattivato OPV: vaccino antipoliomielitico orale - vivente attenuato - MPR: vaccinazione antimorbillo-parotite-rosolia Td: vaccino antidifterico-tetanico per adulti, contenente soltanto 2 Lf di anatossina difterica Hib: vaccinazione anti-Haemophilus influenzae b

IPV IPV

DOPO IL 2003

Coxsackievirus

• Faringite vescicolare: faringite febbrile accompagnata da vomito e dolori addominali (A)

• Meningite asettica (B e A2, 7, 9 e 10) piccole manifestazioni epidemiche

• Mialgia epidemica febbre (B) cefalea dolori muscolari violenti (malattia di Bornholm)

• Miocardite e pericarditi (B) alterazioni funzionalità cardiaca.• Infezioni perinatali (B) grave epatite progressiva