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Gn-RH製剤の前投与による連続過剰排卵誘起処理
誌名誌名群馬県畜産試験場研究報告 = Bulletin of the Gunma Animal HusbandryExperiment Station
ISSNISSN 13409514
著者著者
加藤, 聡宮崎, 美伯小渕, 裕子青柳, 久仁子黒沢, 功
巻/号巻/号 12号
掲載ページ掲載ページ p. 21-25
発行年月発行年月 2005年9月
農林水産省 農林水産技術会議事務局筑波産学連携支援センターTsukuba Business-Academia Cooperation Support Center, Agriculture, Forestry and Fisheries Research CouncilSecretariat
群馬県畜試研報 第 12号 (2005・2)
群馬畜試研報 第12号 (2005-2): 21-25
キーワード:連続過剰排卵・ Gn-RH製剤Ij.主席卵胞
Gn-RH製剤の前投与による連続過剰排卵誘起処理
加藤 聡・宮崎美伯・小淵裕子事・青柳久仁子・黒沢 功
Repeated Superovulation Processing by Pre-administration of Gn-RH
Satoru KATOH, Yosinori MIYAZAKI, Yuko OBUCHI, Kuniko AOYAGI and Isao KUROSAWA
*現中部県民局農業部
要 旨
連続的に過剰排卵誘起処理(以下 SOV) を行ったときの採卵成績の向上を目
的に、 SOV開始前の性腺刺激ホルモン放出ホルモン(以下Gn -R H)製剤投
与の有効性を検討した。平均回収卵数は無投与区で6.4個、 25μg区6.0個、 50μg
区4.3個であり、各区に有意差は認められなかった。しかし、平均正常匹数と平
均正常駐率は無投与区でそれぞれ2.8個・ 43.7%、25μg区4.6個・ 75.6%、50μg
区2.7個・ 61.5%と各区間に有意差は認められなかったが、 25μg区が他の区より
高い傾向にあった。回次別の採卵成績では、回収卵数が無投与区で 1回目 6.1個、
2回目 7.3個、 3回目 5.9個と Gn-RH投与区より多かったが、正常陸数は25μ
g区が各々 5.1個、 4.1個、 4.4個といずれの回次も他の試験区より高い成績を示し
た。 これらのことから、連続 SOV開始前の Gn-RH製剤投与により採卵成績
が向上することが示唆された。
緒 言
匹移植技術 (ET)を推進するためには、
過剰排卵誘起処理 (S0 V) における正常
匪率の改善と、受胎率向上のための技術開
発が必要である。特に高い能力を有する雌
牛は改良の基幹牛となるため、供腔牛とし
て集中利用されることが多い。より多くの
有効匪を得るためには、連続 SOVによる
採卵成績を向上させる必要がある。
雌牛の発情周期中には小型の卵胞が周期
的に発育する卵胞発育波が2"-'3回みられ、そ
れぞれの発育波で 1つだけが急速に発育し、
主席卵胞 (OominantFollicle) となること
が知られている 1)。この主席卵胞の存在下で
SOVを開始すると採卵成績は低下 2)し、
主席卵胞を吸引除去することで採卵成績が
向上することが確認されている 3)。しかし、
主席卵胞の吸引除去には費用と労力がかか
り採卵現場での利用には適していない。そ
のため、主席卵胞を排除する目的で Gn-
RH製剤や卵胞ホルモンを SOV開始前に
投与する方法が考案い 6)された。
そこで、本試験では臆内留置型黄体ホル
モン製剤(以下 C1 D R controlled inte
rnal drug release 商品名イージープリ
ード, InterAG社)を利用した連続 SOVに
おける Gn-RH製剤前投与の有効性につ
一 21-
群馬県畜試研報 第 12号 (2005・2)
いて検討した。
材料および方法
1 供試牛
群馬県畜産試験場で飼養している黒毛和
種経産牛 3頭(1産、 48""'-'52ヶ月齢)、未
経産牛 4頭 (36""'-'84ヶ月齢)合計 7頭を用
いた。 これらの牛は採卵専用牛として利用
しており、これまでに年間6""'-'7回の SOV
を行った。
2 試験区の設定
試験区は Gn-RH製剤の酢酸フェルチ
レリン(商品名コンセラール武田薬品)の
投与量により、対照の無投与区、 25μg区お
よび50μg区の 3区を設けた。
供試牛は表 1のとおり、最初の I期では
無投与で供試した後、 A群は25μg区・ 50μ
g区とし、 B群は逆に50μE区・ 25μg区のl頓
で実施した。
また、各試験期の後は60日以上の休養期
間を設けて次の試験区を実施した
3 連続 SOV処理法
概要を図 1に示した。連続 SOVは当場
の常法により、発情周期の任意の時期に C
IDRを留置し、留置後 7日目から卵胞刺
激ホルモン(以下 FSH:商品名アントリ
ン川崎三鷹製薬)の投与を開始した。 SO
Vは35日間隔で実施し連続 3回行った。
FSHの総投与量は未経産牛10AU(表 2)、
経産牛13AU (表 3) とした。 また、 .P G F20
は合成類縁体のクロプロステノール(商品
名エストラメイト住友製薬)を用いた。
表 1 試験区の設定
群 供試牛 I期 E期 E期
I群未経産牛 2
無投与区 2 5μg区 5 0 μg区経産牛 2
H群未経産牛 2
無投与区 5 0 μg区 2 5μg区経産牛 1
備 考3回採卵 休養 3回採卵 休養 3回採卵
88日 60日以上 88日 60日以上 88日
発情・人工授精
42 日 46 日2nd SOV
トー-----一一-~発情・人工授精
CIDR挿入
35 日
60 h 前
G n -RH投与
SOV開始60 h 前
G n -RH 投与
|一一一一一
CIDR挿入
70 日斗目
H
ム
ロ
ト
|
D
U
同
hEI--
問問
n
v
v
n
u
h
3
0
6
1
pb
CIDR挿入
採卵
l
53 日採卵
77 日 81 日3rd SOV
投与 発情・人工授精
88 日採 卵
図 1 連続 SOVの概要
-22 -
群馬県畜試研報 第 12号 (2005・2)
表 2 過剰排卵誘起処理 (SOV) 方法(未経産牛)
投与時間 1 2 3 4 5日目 合計
FSH (AU) 2.0 1.5 1.0 1.0 5. 5
AM 8:30 PGF2α (ml) 2. 0 2. 0
処置 crDR除去 発情
FSH(AU)
PM 5:00 PGF2o(ml)
処置
2.0 1.5 1.0
1.5
5.5
2.0
人工授精
表 3 過剰排卵誘起処理 (S0 V) 方法(経産牛)
投与時間 1 2 3 4 5日目 合計
FSH(AU) 3.0 2.0 1.0 1.0 7.0
AM 8:30 PGF 20 (ml) 2.0 2.0
処置 CIDR除去 発情ーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーー・・ーー・ーーーーーーーー由ーーーーーーーー---ーー畳ーーーーーーーーーーーーーーーーーーーーー------喧・
FSH (AU)
PM 5:00 PGF2o(ml)
処置
3.0 2.0 1.0
1.5
6.0
1.5
人工授精
4 匪の回収・統計処理
匪の回収は、発情後 7日目(発情日 =0日)
に各子宮角をそれぞれ500mlのイーグノレMEM
液(日水製薬)で洗浄還流させる方法で実
施した。回収した匪の品質は、可視域の細
胞変性率が10%以内のものをAランク、 10"-'
20%以内のものを Bランク、 20"-'50%以内
をCランク、 50%以上は変性卵とした。
なお、統計処理については、薬剤投与量
を要因として分散分析を行った。
結果
1 採卵成績
採卵成績を表 4に示した。各試験区の平
均回収卵数は無投与区6.4::t 3.9個、 25μg区
6. 0::!::4. 4個、 50μg区4.3::t3. 3個であり、各
区に有意差は認められなかった。
また、平均正常匹数と平均正常匹率は25μ
g区でそれぞれ4.6::t 4. 1個、 75.6%であり、
有意差は見られなかったが、 50μg区の2.7
::t 2. 4個、 61.5%、無投与区の2.8::t2. 7個、
43.7%を上回った。
2 回次別の採卵成績
回次別の採卵成績を図 2に示した。平均
回収卵数は、無投与区が 1回目 6.1個、 2回
頭数 回収卵数
表 4 3回連続採卵の 1回当たりの平均採卵成績
試験区
無投与区
正常匪数 正常匪率* ABランク数 ABランク率車掌
2. 6::t 2. 5 ro-
rO
一/O
o-
-o-r-o一
qAM-qd-phu
-
E
・E
・
nJ-qu
一
ヴ
t
nv-DO-oo
7 6. 4::!::3. 9 2. 8::t2. 7 43.7%
3. 8::t 3. 7 25μg区 7 6. O::t 4. 4 4. 6::t 4. 1 75. 6%
2. 3::!::2. 0 50μg区 7 4. 3::t3. 3 2. 7::t2. 4 61. 5%
事正常陸数/回収卵数 事*ABランク数/正常匹数
qJ
nL
群馬県畜試研報 第 12号 (2005・2)
(個)8
6
4
2
。1回目 2回目 3回目
回収卵数
ロ無投与
・25μg投与・50μE投与
1回目 2回目 、 3回目
正 常 脹 数
図 2 回次別採卵成績
目7.3個、 3回目 5.9個と Gn-RH投与区
より多かったが、正常匹数では25μg区がそ
れぞれ5.1個、 4.1個、 4.4個といずれの回次
も他の試験区より高い傾向を示した。
考察
連続 sovは短期間に多くの受精卵を生
産するために有効な方法である。 さらに 1
回当たりの正常座数を増加することができ
れば、改良 ・増産に極めて有効である。近
年、主席卵胞からは他の卵胞の発育を抑え
るインヒビンが分泌されることが解明され
7)、主席卵胞を吸引除去後に sovを開始
すると採卵成績が向上することが確認され
ている 3) しかし、主席卵胞を除去するに
は超音波画像診断装置を用い3'""4日間の卵
胞の観察が必要であり、費用と労力を考え
ると畜産現場での実用化は難しく簡易に卵
胞を排除する方法が検討されている。そこ
で主席卵胞を排除するため、 Gn-RH製
剤使う報告 5.6)が見られるが、投与量と投
与後の sovまでの時間により効果にばら
つきが見られる。
吉羽ら 5)は、 Gn-RH製剤 100μEを投
与し48時間後から sovを開始すると採卵
成績は低下し、 96時間後から開始すると正
常匹が多い傾向があると報告している。 ま
た、投与48時間後の採卵成績が低下する原
因については Gn-RH製剤の体内残留の
可能性を指摘している。佐藤ら 6)も発情 6
日目に25μgのGn-RH製剤を投与し60時
間後から sovを開始すると有意に正常陸
数が向上することを認めている。また、こ
の要因については主席卵胞が確実に存在す
る時期に、少量の Gn-RHを投与したこ
とにあるのではないかと報告している。
本試験では、佐藤ら引の報告を参考に試
験を設定し、 Gn-RH製剤の投与量を25
μgまたは50μg、投与時間を sov前60時
間として当場常法の連続sovに適用した。
その結果、回収卵数は各区に有意差は認
められなかった o しかし、平均正常任数と平
均正常脹率は各区に有意差は認められなか
ったが、 25μg区が他の区より高い傾向にあ
った。同様に回次別の成績においても25μg
投与は他に比べ 3回とも正常匹数が多い傾
向が見られた。
1発情周期中の卵胞発育波が 2回あるい
は 3回かに関わらず、発情後5'""6日には直
径 10皿以上の主席卵胞が存在している 8)。
本試験では CIDRを利用した連続 sovのため、発情周期に関係なく任意の時期に
CIDRを挿入し sovを開始するので、
確実に Gn-RH製剤投与時に主席卵胞が
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群馬県畜試研報 第 12号 (2005・2)
存在しているかは不明である。しかし、 G
n-RH製剤に反応する主席卵胞が存在し
ていない場合の SOVへの負の影響はない
との考えのもと試験を実施した。その結果
25μg投与で正常卵数の増加が見られ、連続
SOVにおいても佐藤ら 6)の報告と同様の
結果となった。 Gn-RH作動薬(アゴニ
スト)である酢酸フェルチレリンは作用が
強く、投与量が多い場合には体内に残留し、
脱感作 (Downregu1ation) 9)を引き起こし
採卵成績に悪影響を及ぼすことが考えられ
る。通常、排卵誘起には酢酸フェルチレリ
ンとして 100""200μgが使用されるが、今回
は通常使用量の1/2""1/ 4と少量の投与であ
ったため、 Downregu1ationを回避できたた
めではないだろうかと考えられた。本試験
ではホルモンや主席卵胞の動態を調査して
いないので、 Gn-RH製剤の25μg前投与
がなぜ正常任数が多い傾向となったのか、
その機序は不明であるが連続 SOVにおい
てGn-RH製剤を前投与することにより、
佐の生産性を向上させることが示唆された。
しかし、本試験で供試した黒毛和種牛は採
卵専用牛として、過去に頻繁に SOVを繰
り返してきた牛であり、また、採卵間隔を
短縮するため低単位の FSHを投与した S
ovでの結果であった。今後は通常に分娩
を繰り返している経産牛での検討が必要と
考える。
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