Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học rễ cây Ô môi (Cassia grandis L.f) ở Thành phố Cần Thơ

8/17/2019 Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học rễ cây Ô môi (Cassia grandis L.f) ở Thành phố Cần Thơ

http://slidepdf.com/reader/full/gop-phan-nghien-cuu-thanh-phan-hoa-hoc-re-cay-o-moi-cassia 1/89

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA SƯ PHẠM

BỘ MÔN SƯ PHẠM HÓA HỌC

GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC

RỄ CÂY Ô MÔI (Cassia grandis L.f)

Ở THÀNH PHỐ CẦN THƠ

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP

Ngành SƯ PHẠM HÓA HỌC

Cán bộ hướng dẫn: Sinh viên thực hiện:

ThS. Ngô Quốc Luân Nguyễn Thanh Hoài Nhân

Lớp Sư phạm Hóa học K36

MSSV: 2102181

Cần Thơ, 2014

WW.DAYKEMQUYNHON.UCOZ.COM WWW.FACEBOOK.COM/DAYKEM.QUYNHON

WWW.BOIDUONGHOAHOCQUYNHON.BLOGSPOT.COMóng góp PDF bở i GV. Nguy ễ n Thanh Tú



TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA SƯ PHẠM

BỘ MÔN SƯ PHẠM HÓA HỌC

GÓP PHẦN NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌCRỄ CÂY Ô MÔI (Cassia grandis L.f),

HỌ VANG (Caesalpiniaceae)

Ở THÀNH PHỐ CẦN THƠ

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP

Ngành SƯ PHẠM HÓA HỌC

Cán bộ hướng dẫn: Sinh viên thực hiện:

ThS. Ngô Quốc Luân Nguyễn Thanh Hoài Nhân Lớp Sư phạm Hóa học K36

MSSV: 2102181

Cần Thơ , 2014





GÓP PHẦN KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC RỄ CÂY Ô MÔI (Cassia grandis L.f)

GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -i- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

LỜ I CẢM ƠN

Trong quá trình thực hiện luận văn, để có được kết quả hôm nay ngoài sự nổ

lực của bản thân thì tôi đã nhận được sự quan tâm, hướng dẫn nhiệt tình của quí

Thầy cô, sự cổ vũ, động viên to lớn từ gia đình và các bạn lớp sư phạm Hóa học

khóa 36. Vì vậy với tấm lòng trân trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin gửi lời cảm ơn

đến:

Thầy Ngô Quốc Luân, Bộ môn Sư phạm Hóa học - Khoa Sư Phạm, trường

Đại Học Cần Thơ. Người đã tận tình truyền đạt cho tôi những kinh nghiệm quý báu

và đầy tâm huyết trong suốt quá trình tôi thực hiện đề tài. Thầy đã tạo mọi điều

kiện tốt nhất cho tôi trong suốt thời gian nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Quí Thầy cô Bộ môn Sư phạm Hóa học, Khoa Sư phạm, Trường Đại học

Cần Thơ đã truyền đạt những kiến thức hữu ích làm nền tảng cho tôi thực hiện đề

tài và đã tạo điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt quá trình nghiên cứu đến lúc

hoàn thành luận văn tốt nghiệp.

Các anh chị, các bạn - những người đã đồng hành cùng tôi đã động viên,

giúp đỡ, góp ý cho tôi rất nhiều trong suốt thời gian qua.

Ba mẹ và gia đình cũng đã giúp đỡ tôi cả tinh thần và vật chất, luôn động

viên, khích lệ tôi thực hiện đề tài.

Tôi xin chân thành cảm ơn!






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -ii- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚ NG DẪN

1.

Cán bộ hướng dẫn: ThS. Ngô Quốc Luân

2.

Tên đề tài: “Góp phần khảo sát thành phần hóa học

rễ cây Ô môi (Cassia grandis L.f) ở thành phố Cần Thơ”

3.

Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thanh Hoài Nhân MSSV: 2102181

4. Nội dung nhận xét:

a.

Nhận xét về hình thức luận văn tốt nghiệp: Luận văn gồm 38 trang chính,

không kể phần phụ lục, có bố cục rõ ràng, chia làm 5 phần: Mở đầu 1 trang, Tổng

quan 14 trang , Thực nghiệm 12 trang, Kết quả và biện luận 10 trang và Kết luận 1

trang. Văn phong đơn giản và rất ít lỗi chính tả. b.

Nhận xét về nội dung luận văn tốt nghiệp:

- Đánh giá nội dung thực hiện đề tài: Trình bày đầy đủ, chi tiết quá trình thực

hiện và kết quả của công trình nghiên cứu. Nội dung chuyên môn phù hợp, kết quả

thực nghiệm rất có giá trị khoa học ở điểm phát hiện ra một hợp chất mới trong

toàn hệ thực vật trên thế giới, một phần đã được gửi đăng ở Tạp chí Khoa học

Trường Đại học Cần Thơ (có bài phản biện đồng ý cho đăng) đáp ứng vượt mức

yêu cầu của một luận văn tốt nghiệp đại học.

- Những vấn đề còn hạn chế: chưa phát hiện.

c. Nhận xét đối với sinh viên tham gia thực hiện đề tài:

Sinh viên Nguyễn Thanh Hoài Nhân tỏ ra có năng lực nghiên cứu, cần cù, cẩn

thận, trong công việc. Vì vậy, các kết quả nghiên cứu có thể tin cậy và sử dụng

được cho các quá trình nghiên cứu tiếp theo sau này.

d. Kết luận, đề nghị và điểm:

- Đạt yêu cầu, đề nghị hội đồng thông qua

- Sinh viên nên phát huy khả năng nghiên cứu để học tập nâng cao trình độ.

- Điểm số: 10/10 Điểm chữ: A.

Cần Thơ, ngày 16 tháng 05 năm 2014

Cán bộ hướng dẫn

Ngô Quốc Luân






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -iii- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 1

1. Cán bộ phản biện:………………………………………………….

2. Tên đề tài: “Góp phần k hảo sát thành phần hóa học

rễ cây Ô môi (Cassiagrandis L.f) ở Thành phố Cần Thơ”

3. Cán bộ hướng dẫn: ThS. Ngô Quốc Luân

4. Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thanh Hoài Nhân MSSV: 2102181

5.

Nội dung nhận xét:

a.

Nhận xét về hình thức luận văn tốt nghiệp:

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

b. Nhận xét về nội dung luận văn tốt nghiệp:

Đánh giá nội dung thực hiện đề tài: ...................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

Những vấn đề còn hạn chế: ................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

c. Kết luận, đề nghị và điểm:

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

Cần Thơ, ngày…….tháng……năm 2014

Cán bộ phản biện






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -iv- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 2

1. Cán bộ phản biện:………………………………………………….

2. Tên đề tài: “Góp phần k hảo sát thành phần hóa học

rễ cây Ô môi (Cassiagrandis L.f) ở Thành phố Cần Thơ”

3. Cán bộ hướng dẫn: ThS. Ngô Quốc Luân

4. Sinh viên thực hiện: Nguyễn Thanh Hoài Nhân MSSV: 2102181

5.

Nội dung nhận xét:

a.

Nhận xét về hình thức luận văn tốt nghiệp:

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

b. Nhận xét về nội dung luận văn tốt nghiệp:

Đánh giá nội dung thực hiện đề tài: ...................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

Những vấn đề còn hạn chế: ................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

c. Kết luận, đề nghị và điểm:

.......................................................................................................................................

.......................................................................................................................................

Cần Thơ, ngày…….tháng……năm 2014

Cán bộ phản biện






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -v- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

TÓM TẮT NỘI DUNG LUẬN VĂN

Bài luận văn gồm các phần sau đây:

Mở đầu Nêu lí do chọn đề tài và mục tiêu của đề tài.

Chương 1 Tổng quan về cây Ô môi và một số nghiên cứu về cây Ô môi.

Chương 2 Thực nghiệm tập trung vào các nội dung chính sau:

Từ nguyên liệu chính là rễ Ô môi được thu hái ở Quận Ô Môn, Thành phố

Cần Thơ sau nhiều công đoạn xử lý để điều chế bột rễ Ô môi.

Tiến hành định tính các nhóm hợp chất chính có trong rễ Ô môi. Từ bột rễ Ô

môi tiến hành điều chế cao buthanol. Sử dụng phương pháp sắc ký cột trên cao

buthanol và các phân đoạn kết hợp với sắc ký lớp mỏng để cô lập được chất sạch.

Chương 3 Kết quả và biện luận

Kết quả định tính cho thấy trong rễ Ô môi có sự hiện diện của các nhóm hợp

chất sau: steroid, flavonoid, alk aloid, saponin, tanin, glycoside, coumarine.

Việc nhận danh và xác định cấu trúc dựa trên các tính chất vật lý (màu sắc,

dạng tinh thể, R f ,tonc) và từ các dữ liệu phổ cộng hưởng từ hạt nhân (1H-NMR,

13C- NMR, DEPT, HSQC, HMBC) kết hợp so sánh với tài liệu đã công bố.

Kết quả nhận danh chất cô lập được là 1,8-dihydroxy-6-methoxy-9,10-

dioxo-9,10-dihydroanthracene-3-carboxylic acid, tên thông thường là parietinic

acid và 8-hydroxy-6-methoxy-9-oxo-9 H -xanthone-1,3-dicarboxylic acid, hợp chất

này lần đầu tiên được cô lập từ thực vật, cụ thể là loài Cassia grandis L.f đặt tên là

Casgrandxanthone A.

Chương 4 Kết luận và kiến nghị

Tài liệu tham khảo

Phụ lục






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -vi- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN ........................................................................................................ i

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN ............................ ii

NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 1 ........................... iii NHẬN XÉT VÀ ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN 2 ........................... iv

TÓM TẮT NỘI DUNG LUẬN VĂN ................................................................... v

MỤC LỤC ........................................................................................................... vi

DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT .......................................................... ix

DANH MỤC CÁC HÌNH ................................................................................... xi

DANH MỤC CÁC BẢNG ................................................................................. xii

MỞ ĐẦU ............................................................................................................... 1

Chương 1 TỔNG QUAN ....................................................................................... 2

1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY Ô MÔI ...................................................................... 2

1.1.1 Giới thiệu về cây Ô môi ............................................................................. 2

1.1.2 Mô tả thực vật ............................................................................................ 3

1.1.3 Phân bố và sinh thái ................................................................................... 4

1.2 NHỮNG NGHIÊN CỨU VỀ CÂY Ô MÔI ..................................................... 4

1.2.1Tác dụng dược lý của cây Ô môi ................................................................ 4

1.2.1.1 Trong y học dân gian .......................................................................... 4

1.2.1.2 Hoạt tính kháng oxi hóa theo nghiên cứu hiện đại ............................. 5

1.2.1.3 Nghiên cứu trong y học, thử nghiệm lâm sàng ................................... 5

1.2.2 Các nghiên cứu về thành phần hóa học ..................................................... 6

1.2.2.1 Các nghiên cứu ở nước ngoài ............................................................. 6

1.2.2.2 Các nghiên cứu trong nước ................................................................. 7

1.2.3 Tổng hợp kết quả nghiên cứu về cây Ô môi .............................................. 7

Chương 2 THỰC NGHIỆM ................................................................................ 16

2.1 DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT ......................................................................... 16

2.1.1 Dụng cụ .................................................................................................... 16

2.1.2 Hóa chất ................................................................................................... 16

2.2 QUY TRÌNH THỰC NGHIỆM ..................................................................... 17

2.2.1 Thu và xử lý nguyên liệu ......................................................................... 17

2.2.1.1 Thu nguyên liệu ................................................................................ 17

2.2.1.2 Xử lý mẫu nguyên liệu ...................................................................... 17

2.2.2 Định tính sơ bộ thành phần hóa học rễ Ô môi ......................................... 17






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -vii- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

2.2.2.1 Khảo sát sự hiện diện của các hợp chất steroid ................................ 17

2.2.2.2 Khảo sát sự hiện diện của các hợp chất flavonoid ............................ 18

2.2.2.3 Khảo sát sự hiện diện của các hợp chất alkaloid .............................. 18

2.2.2.4 Khảo sát sự hiện diện của các hợp chất saponin dựa vào chỉ số tạo bọt .................................................................................................................. 18

2.2.2.5 Khảo sát sự hiện diện của các hợp chất tanin ................................... 19

2.2.2.6 Khảo sát sự hiện hiện của các hợp chất glycoside ............................ 20

2.2.2.7 Khảo sát sự hiện hiện của các hợp chất coumarine .......................... 20

2.2.3 Quy trình điều chế cao BuOH ................................................................. 22

2.2.4 Cô lập, tinh chế chất từ cao BuOH .......................................................... 23

Chương 3 KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN .............................................................. 27

3.1 KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC NHÓM HỢP CHẤT TRONG RỄ Ô MÔI .... 273.2 NHẬN DANH CẤU TRÚC HỢP CHẤT ...................................................... 28

3.2.1 Xác định tính chất vật lý, cấu trúc và nhận danh hợp chất CGRB01 ...... 28

3.2.2 Xác định tính chất vật lý, cấu trúc và nhận danh hợp chất CGRB02 ...... 31

Chương 4 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ............................................................ 37

4.1 KẾT LUẬN .................................................................................................... 37

4.2 KIẾN NGHỊ ................................................................................................... 37

TÀI LIỆU THAM KHẢO ................................................................................... 38

PHỤ LỤC ........................................................................................................ PL-1

Phụ lục 1.1 PHỔ UV-VIS CỦA CGRB01 ....................................................... PL-1

Phụ lục 1.2 PHỔ IR CỦA CGRB01 ................................................................ PL-2

Phụ lục 1.3 PHỔ MS+ CỦA CGRB01 ............................................................. PL-3

Phụ lục 1.4 PHỔ MS- CỦA CGRB01 .............................................................. PL-4

Phụ lục 1.5 PHỔ 1H- NMR CỦA CGRB01 ...................................................... PL-5

Phụ lục 1.6 PHỔ 1H- NMR DN RỘNG CỦA CGRB01................................ PL-6

Phụ lục 1.7 PHỔ 13C- NMR CỦACGRB01 ...................................................... PL-7Phụ lục 1.8 PHỔ 13C- NMR DN RỘNG CỦA CGRB01............................... PL-8

Phụ lục 1.9 PHỔ HSQC CỦA CGRB01 .......................................................... PL-9

Phụ lục 1.10 PHỔ HSQC DN RỘNG CỦA CGRB01 ................................ PL-10

Phụ lục 1.11 PHỔ HMBC CỦA CGRB01 ..................................................... PL-11

Phụ lục 1.12 PHỔ HMBC DN RỘNG CỦA CGRB01 ............................... PL-12

Phụ lục 1.13 PHỔ HMBC DN RỘNG CỦA CGRB01 ............................... PL-13

Phụ lục 2.1 PHỔ UV-VIS CỦA CGRB02 ..................................................... PL-14

Phụ lục 2.2 PHỔ IR CỦA CGRB02 .............................................................. PL-15






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -viii- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

Phụ lục 2.3 PHỔ MS+ CỦA CGRB02 ........................................................... PL-16

Phụ lục 2.4 PHỔ MS- CỦA CGRB02 ............................................................ PL-17

Phụ lục 2.5 PHỔ 1H- NMR CỦA CGRB02 .................................................... PL-18

Phụ lục 2.6 PHỔ 1H- NMR GIN RỘNG CỦA CGRB02 ............................ PL-19

Phụ lục 2.7 PHỔ 13C- NMR CỦA CGRB02 ................................................... PL-20

Phụ lục 2.8 PHỔ 13C- NMR GIN RỘNG CỦA CGRB02 ........................... PL-21

Phụ lục 2.9 PHỔ DEPT CỦA CGRB02 ........................................................ PL-22

Phụ lục 2.10 PHỔ DEPT GIN RỘNG CỦA CGRB02 ............................... PL-23

Phụ lục 2.11 PHỔ HSQC CỦA CGRB02 ...................................................... PL-24

Phụ lục 2.12 PHỔ HSQC GIN RỘNG CỦA CGRB02 .............................. PL-25

Phụ lục 2.13 PHỔ HMBC CỦA CGRB02 ..................................................... PL-26

Phụ lục 2.14 PHỔ HMBC GIN RỘNG CỦA CGRB02 ............................. PL-27

Phụ lục 2.15 PHỔ HMBC GIN RỘNG CỦA CGRB02 ............................. PL-28

Phụ lục 2.16 KẾT QUẢ KIỂM TRA PHẦN MỀM SCIFINDER CỦA HỢP CHẤT CGRB02 ........................................................................... PL-29

Phụ lục 2.17 Trang đầu bài viết DẪN XUẤT XANTHONE MỚI TỪRỄ CÂY Ô MÔI (CASSIA GRANDIS L.F) .................................................... PL-30

Phụ lục 2.18 PHIẾU THẨM ĐỊNH BÀI

Tạp chí Khoa học Đại học Cần Thơ số định kỳ ............................................. PL-31

Phụ lục 3.1 HÌNH ẢNH KẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC NHÓM CHẤTTRONG RỄ CÂY Ô MÔI .............................................................................. PL-33






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -ix- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

δ : Chemical shift (Độ chuyển dịch hóa học) đơn vị ppm

1H- NMR : Proton Nuclear Magnetic Resonance

13C- NMR : Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance

BuOH : Buthan-1-ol

CSB : Chỉ số tạo bọt.

C : M : Hệ dung môi Chloroform : Methanol

C : M : F : Hệ dung môi Chloroform : Methanol : Acid Formic

CTPT : Công thức phân tử

d : Doublet (mũi đôi)

DEPT : Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

DMSO : Dimethylsulfoxyde ((CH3)2SO)

DPPH : 2,2-diphenyl-1-pirylhydrazyl

EtOAc : Ethyl acetateEtOH : Ethanol

IR : Infrared spectroscopy (Quang phổ hồng ngoại)

IUPAC : International Union of Pure and Applied Chemistry

J : Hằng số ghé p spin

HMPC : Heteronuclear Multiple Bond Correelation

HSQC : Heteronuclear Single Quantum Coherence

M : Khối lượng phân tử

m : Multiplet (Muỗi đa)

mp. : Melting point (Điểm tan chảy)

MeOH : Methanol

NMR : Nuclear Magnetic Resonance (Cộng hưởng từ hạt nhân)

ppm : Part per million






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -x- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

R f : Retention factor

s : Singlet (mũi đơn)

SKLM : Sắc ký lớp mỏng

t : Triplet (mũi ba)

λmax : Maximum absorption wavelength (Bước sóng cực đại hấp thu).

ν : frequency (Tần số dao động).

UV-Vis : Ultraviolet Visible Spectroscopy (Phổ tử ngoại khả kiến).






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -xi- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 1.1 Cây và lá Ô môi .......................................................................................... 3

Hình 1.2 Hoa Ô môi .................................................................................................. 3 Hình 1.3 Trái Ô môi non và già................................................................................. 3

Hình 2.1 R ễ và bột r ễ Ô môi ................................................................................... 17

Hình 2.2 Sơ đồ quy trình điều chế cao BuOH từ r ễ Ô môi ..................................... 22Hình 3.1 Tinh thể bám trên ống nghiệm và kết quả SKLM hợ p chất CGRB01 ..... 28

Hình 3.2 Cấu trúc hóa học khung anthraquinone .................................................... 29

Hình 3.3 Một số tương quan HMBC ở vòng A ....................................................... 30

Hình 3.4 Một số tương quan HMBC ở vòng B ....................................................... 30

Hình 3.5 Cấu trúc của CGRB01 .............................................................................. 31

Hình 3.6 Tinh thể bám trên thành ống nghiệm 43 .................................................. 32

Hình 3.8 K ết quả SKLM hợ p chất CGRB02 ........................................................... 32 Hình 3.9 Cấu trúc khung xanthone .......................................................................... 33

Hình 3.10 Tương quan HMBC trong cấu trúc CGRB02 ........................................ 34

Hình 3.11 Cấu trúc và C của hợ p chất monodictyxanthone................................... 35

Hình 3.12 Cấu trúc và C của hợ p chất griseoxanthone .......................................... 35

Hình 3.13 Cấu trúc hóa học hợ p chất CGRB02 ...................................................... 36

Hình PL 1 Hiện tượ ng vớ i thuốc thử Salkowsky và Liebermann-Burchard .... PL-33

Hình PL 2 Hiện tượ ng vớ i dung dịch FeCl3 và dung dịch (CH3COO)2Pb ...... PL-33

Hình PL 3 Hiện tượ ng vớ i thuốc thử Dragendorff , Wagner và Bouchardat .. PL-33

Hình PL 4 Xác định saponin dựa vào chỉ số tạo bọt ......................................... PL-34

Hình PL 5 Hiện tượng xác định có saponin triterpenoid. ................................. PL-34

Hình PL 6 Hiện tượ ng vớ i dung dich (CH3COO)2Pb và dung dịch FeCl3 ....... PL-34

Hình PL 7 Hiện tượ ng vớ i thuốc thử Tollens và Fehling ................................. PL-35

Hình PL 8 Hiện tượ ng của phản ứng mở vòng lacton và diazo hóa ................. PL-35



http://d/LuanVan/CGRB02/LuanVan9Thuc/LuanVan.doc%23_Toc387932441










GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN -xii- SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1. 1 Một số hợ p chất đã được phân lậ p từ cây ô môi ....................................... 8

Bảng 2. 1 K ết quả sắc ký cột cao BuOH ................................................................. 24 Bảng 2. 2 K ết quả sắc kí cột phân đoạn RB01 ........................................................ 25

Bảng 2. 3 K ết quả sắc kí cột phân đoạn RB02 ........................................................ 26

Bảng 3. 1 K ết quả định tính các nhóm hợ p chất trong r ễ Ô môi ............................. 27

Bảng 3. 2 Dữ liệu phổ NMR của hợ p chất CGRB01 .............................................. 31

Bảng 3. 3 K ết quả đo điểm nóng chảy của CGRB02 .............................................. 32

Bảng 3.4 So sánh dữ liệu phổ 1H-NMR của CGRB02 vớ i griseoxanthone C vàmonodictyxanthone. ................................................................................................. 35

Bảng 3.5 So sánh dữ liệu phổ 13C-NMR của CGRB02 với griseoxanthone C vàmonodictyxanthone. ................................................................................................. 36






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN 1 SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

MỞ ĐẦU

Từ xưa, để chống lại bệnh tật ông cha ta đã biết tìm đến các loài thảo mộc

trong tự nhiên. Hệ thực vật nước ta vốn đa dạng, phong phú về loài cũng như đặc

tính sinh học do đó chúng dần được con người ứng dụng, bào chế và cho ra nhiều

bài thuốc quý, đặc trị hữu hiệu với nhiều căn bệnh. Vì thế hướng nghiên cứu các

loại thảo dược, các loài cây có hoạt tính sinh học đang được nhiều người quan tâm.

Cây Ô môi có tên khoa học là Cassia grandis L.f, thuộc họ Vang

(Caesalpiniaceae), là loài cây rất quen thuộc với người dân miền Nam Việt Nam,

có nguồn gốc từ Nam Mĩ, trái ăn được và có hoa đẹp, được trồng làm cây lấy bóng

mát ở nhiều nước trên thế giới. Ô môi không chỉ là một loại cây độc đáo của vùngđồng bằng sông Cửu Long mà còn là một vị thuốc bổ. Cơm quả dùng ngâm rượu

làm thuốc có tác dụng giúp ăn ngon miệng, tiêu hóa tốt, chữa đau lưng, nhứt mỏi.

Lá Ô môi dùng tươi đem giã nát, xát vào những vết hắc lào, lỡ ngứa có thể chữa

khỏi. Lá Ô môi sắc nước làm thuốc cũng có công dụng chữa đau lưng, nhức mỏi

như cơm quả. Rễ Ô môi có tác dụng nhuận trường .

Đến nay, những công trình nghiên cứu về thành phần hóa học cũng như hoạt

tính sinh học của loài cây này chưa được công bố nhiều ở trên thế giới cũng như ở

Việt Nam. Do vậy, đề tài “Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học rễ cây Ô

môi (Cassiagrandis L.f) ở Thành phố Cần Thơ” mong muốn tiếp tục góp phần

nhỏ vào việc nghiên cứu các hợp chất có nguồn gốc thiên nhiên từ rễ cây Ô môi,

qua đó có thể làm sáng tỏ những ứng dụng y học của loài cây này.

Lý do chọn đề tài

- Nhằm làm phong phú thêm những hiểu biết về thành phần hóa học của loàiÔ môimọc tại đồng bằng sông Cửu Long.

- Tìm các hoạt chất định hướng cho việc sử dụng cây Ô môi như một nguồn

dược liệu có giá trị, qua đó nâng cao hiệu quả kinh tế của loài thực vật này.

Mục tiêu của đề tài

- Định tính sơ bộ thành phần hoá học của rễ Ô môi.

- Cô lập được ít nhất một hợp chất sạch và xác định cấu trúc.







Chương 1

TỔNG QUAN

1.1 TỔNG QUAN VỀ CÂY Ô MÔI[1, 16]

1.1.1 Giớ i thiệu về cây Ô môi

-Tên khoa học: Cassia grandis L.f

-Tên đồng nghĩa: Cathartocarpus grandis (L.f) Pers. (1805)

Cassia brasiliana Lamk. (1785)

Cathartocarpus brasiliana (Lamk.) Jacq. (1809)-Tên Việt Nam: cây cốt khí, cây trái canh ki na, bò cạp nước, bò cạp đỏ, mạy

khuốm (Tày).

-Tên khác: coral shower, apple blossom cassia, pink shower, liquorice tree,

pudding pipe tree, horse cassia (Anh); bâton casse, casse du Brésil (Pháp); Sac

phlê, krêête, rich chopeu (Campuchia); kotek mamak (Malaysia); sandal, carao,

carámano, cañafistula, cañadonga (Tây Ban Nha); kanpaphruek (Bangkok, Thái

Lan); brai xiêm, Sino-Tibetan, may khoum (Lào).

Phân loại khoa học:

Giới: Thực vật (Plantae)

Ngành: Hạt kín (Angiospermatophyta) hay ngành Ngọc lan (Magnoliophyta)

Lớp: Hai lá mầm (Dicotyledoneae) hay lớp Ngọc lan (Magnoliopsida)

Bộ: Đậu (Fabales)

Họ: Đậu (Fabaceae) Phân họ: Vang (Caesalpiniaceae)

Chi: Cassia

Loài: C.grandis L.f







1.1.2 Mô tả thự c vật

Hình 1. 1 Cây và lá Ô môi

Thân cao tới 10 - 12 m, vỏ thân nhẵn, cành mọc ngang, những cành non có

lông màu rỉ sắt, cành già màu nâu đen.

Rễ cọc, to, phân nhánh nhiều và rộng hơn cả tán cây.

Lá kép lông chim gồm hàng chục đôi lá chét dài 7 - 12 cm, rộng 4 - 8 cm, có

phủ lông mịn.

Hoa màu đỏ hay hồng đậm mọc thành chùm ở những kẽ lá đã rụng. Chùm

hoa thõng xuống, dài tới 20 - 40 cm.

Mùa hoa nở rộ vào tháng 2 - 5, cây thụ phấn nhờ gió và côn trùng.

Trái hình trụ, cong như lưỡi liềm, dài 40 - 60 cm, đường kính 3 - 4 cm, được

phân chia thành 50 - 60 ngăn, mỗi ngăn chứa một hạt dẹt, quanh hạt có cơm màunâu đen, vị ngọt, mùi hắc.

Hình 1. 3 Trái Ô môi non và già

Hình 1. 2 Hoa Ô môi







Mùa trái từ tháng 6 đến tháng 10. Hạt nhiều, tỷ lệ nảy mầm cao. Cây trồng

từ hạt ở các tỉnh phía Nam sau 3 - 4 năm đã bắt đầu có hoa trái.

1.1.3 Phân bố và sinh thái

Ô môi có nguồn gốc ở Nam Mỹ, được nhập trồng khắp vùng nhiệt đới để

làm cảnh, làm thuốc và lấy gỗ. Cây được trồng nhiều ở Campuchia, miền nam Việt

Nam, Malaysia, Indonesia (đảo Java) và Papua Niu Guinê.

Ở Việt Nam, cây được trồng nhiều nhất ở các tỉnh thuộc miền Đông và Tây

Nam Bộ, ít hơn ở miền Trung và rất hiếm ở miền Bắc. Cây Ô môi mọc hoang, rải

rác khắp đồng bãi, bờ kinh, sau này chủ yếu được trồng để lấy bóng mát và lấy trái.

1.2 NHỮ NG NGHIÊN CỨ U VỀ CÂY Ô MÔI

1.2.1 Tác dụng dược lý của cây Ô môi[2,3,8]

1.2.1.1 Trong y h ọc dân gian

- Trái ô môi dùng chữa tiêu chảy, giúp tiêu hóa tốt, ăn ngon miệng, có tác

dụng nhuận tràng, chữa đau lưng, đau xương, nhức mỏi.

Cách sử dụng:

Dùng sống (ngâm rượu ô môi): Lấy trái ô môi chín tách vỏ, bỏ hạt, chỉ lấycơm ngâm rượu. Trung bình một trái ô môi có thể ngâm với 500 ml rượu 25 - 30°.

Ngâm trong 15 - 20 ngày là dùng được, nhưng càng để lâu càng tốt. Ngày uống hai

lần, mỗi lần một chén nhỏ trước bữa ăn.

Điều chế cao ô môi: Lấy 1 kg cơm và hạt ô môi nấu với 1 lít nước rồi nghiền

nát, lọc lấy nước và cô cách thủy đến thành cao thì dùng để làm thuốc bổ giúp kích

thích tiêu hóa, chữa đau lưng, nhức mỏi, nhuận tràng, tiêu chảy với liều dùng

5 - 15 g.

- Vỏ ô môi (50 g), dây đau xương (100 g), cốt toái bổ (100 g), nhục quế (30 g)

ngâm trong 1 lít rượu 30 - 40° trong 15 - 20 ngày dùng để chữa trị đau thấp khớp

với liều dùng mỗi ngày hai lần từ 30 - 60 ml. Ngoài ra vỏ cây ô môi được dùng đắp

lên nơi rắn cắn và bò cạp cắn.







- Lá ô môi tươi rửa sạch, giã nát vắt lấy nước xát vào nơi hắc lào, lang ben, trị

lở ngứa da. Cũng có thể chế rượu lá ô môi với tỷ lệ 1 : 5 (dùng rượu 25 - 30°) để

bôi ngoài.

1.2.1.2 Ho ạt tính kháng oxi hóa theo nghiên cứ u hi ện đại

Tính chất kháng oxi hóa của lá Cassia grandis L.f.

Năm 2009, M.K.Meena, KalpeshGaur, M.L.Kori, C.S.Sharma, R.K.Ntôia,

A.K.Jain, C.P.Jain nghiên cứu thấy rằng hoạt tính kháng oxi hóa của lá Cassia

grandis L.f phụ thuộc vào dịch chiết. Quá trình thực nghiệm với các dịch chiết

ether dầu hỏa, chloroform, methanol, butylated hydroxyl toluene và khả năng cắt

đứt gốc tự do hydroxyl, superoxide, nitric oxide, DPPH. Kết quả thực nghiệm:

- Sự ức chế gốc tự do DPPH: dịch chiết butylated hydroxyl toluene gây ức chế

cao nhất (92,87%), kế đến là dịch chiết methanol (88 ,75%), làm thực nghiệm ở

nồng độ 100 μg/ml.

- Sự ức chế gốc tự do nitric oxide: dịch chiết butylated hydroxyl toluene gây

ức chế cao nhất (83,54%), kế đến là dịch chiết methanol (75,72%), làm thực

nghiệm ở nồng độ 100 μg/ml.

- Sự ức chế gốc tự do superoxide: dịch chiết butylated hydroxyl toluene gây

ức chế cao nhất (82,87%), kế đến là dịch chiết methanol (76,5%), làm thực nghiệm

ở nồng độ 100 μg/ml.

- Sự ức chế gốc tự do hydroxyl: dịch chiết butylated hydroxyl toluene gây ức

chế cao nhất (74,56%), kế đến là dịch chiết methanol (69,84%), làm thực nghiệm ở

nồng độ 100 μg/ml. 1.2.1.3 Nghiên cứ u trong y h ọc, th ử nghi ệm lâm sàng

Năm 2008, tác giả David Askaripour có bài đăng trên trang web cá nhân

một bài với nội dung khuyến cáo sử dụng Ô môi như một liệu pháp cải thiện số

lượng hemoglobin, chữa chứng thiếu máu, tăng cường chức năng tình dục. Tác giả

có đưa ra kết quả nghiên cứu trên 20 bệnh nhân do Dr. Luis Carmona′s thực hiện.

Tuy nhiên, chưa tìm thấy xuất bản phẩm chính thức nào công bố điều này.







Năm 2010, tác giả A.K. Jain, Đại học Mohalal Sukhadia, Ấn Độ và các cộng

sự đã công bố kết quả thử nghiệm khả năng kháng kích độc tế bào và kháng viêm

của dịch chiết MeOH lá Ô môi. Kết quả cho thấy dịch chiết MeOH lá Ô môi có khả

năng kháng viêm và tác dụng giảm đau khá tốt.

1.2.2 Các nghiên cứ u về thành phần hóa học[4, 7, 9, 10, 11, 12, 15, 18, 20, 21, 23, 24, 25]

Chi Cassia chứa nhiều nhóm chất anthranoid, flavonoid. Các nghiên cứu về

thành phần hóa học trên chi Cassia đã được thực hiện từ rất lâu, tuy nhiên những

nghiên cứu trên loài Cassia grandis L.f hiện rất ít.

1.2.2.1 Các nghiên cứ u ở nước ngoài

Năm 1981, các tác giả Srivastava YS và Gupta PC, công bố cô lập được một flavonol glycoside là kaempferol-3-O-β-D-mannopyranosyl(1→4)-O-β-D-

glucopyranoside từ cây Ô môi.

Năm 1984, tác giả Wandee Gritsanapan, Đại học Mahidol, Thái Lan và các

cộng sự công bố đã cô lập được 1 hợp chất từ loài Cassia grandis là 1,8-dihydroxy-

3(hydroxy-methyl)-anthraquinone hay còn gọi là aloe emodin.

Năm 1993, Ibadur Rahman Siddiqui, Mithiles Singh, Dipti Gupta và

Jagdamba Singh, Đại học Allahabad, Ấn Độ công bố đã cô lập được 3 hợp chất

thuộc nhóm anthraquinone từ quả Ô môi là: 1,2,4,8-tetrahydroxy-6-methoxy-3-

methylanthraquinone-2-O- β -D-glucopyranoside; 3-hydroxy-6,8-dimethyl-2-methyl

anthraquinone-3-O- β -D-glucopyranoside ; 1,3-dihydroxy-2-methyl anthraquinone-

3-O- β -D-glucopyranoside.

Năm 1994, R.P. Verma và K.S. Sinha, Ấn Độ đã công bố phân lập từ cây Ô

môi được một hợp chất định danh là 1,3,4-trihydroxy-6,7,8-trimethoxy-2-methyl

anthraquinone.

Năm 1995, E. Valencia, Tây Ban Nha và các cộng sự đã công bố cô lập

được 2 alkaloid là kokusaginine và fabioline cũng từ loại cây này.

Năm 1996, A.G. González, J. Bermejo và E. Valencia, Đức công bố đã cô

lập được hợp chất từ cây Ô môi là: 2,4,6-trimethoxy benzaldehyde; catechin;

trans-3-methoxy-4,5-methylene-diocinnamaldehyde; β -sitosterol; centaureidine;







2,4-dihydroxy benzaldehyde;myristicin; 3,4,5-trimethoxy benzaldehyde và aloe

emodin.

Năm 1998, các tác giả Meenarani và Kalidhar SB, Đại học H.A, Ấn Độ đã

cô lập được 3 hợp chất: acid palmitic, β -sitosterol và emodin-9-anthrone.

Năm 2003, các tác giả Harsha Joshi và Virendra P. Kapoor, Viện nghiên

cứu hóa dược của cây Ô môi. Theo đó, từ loài cây này đã cô lập được các hợp chất:

centaureidine; catechin; myristicin; 2,4,6-trimethoxy benzaldehyde; β -sitosterol;

2,4-dihydroxy benzaldehyde; 3,4,5-trimethoxy benzaldehyde; kokusaginine (6,7-

dimethoxyfuroquinoline) và fabioline (1,1′- bipiberidine). Đồng thời khẳng định tác

dụng kháng nấm, kháng khuẩn của dịch chiết EtOH lá Ô môi.

1.2.2.2 Các nghiên cứu trong nướ c

Trước năm 2011, chưa có công trình nào trong nước công bố về thành phần

hóa học cũng như hoạt tính sinh học của cây Ô môi. Từ tháng 6/2011, các tác giả

Đào Huy Phong, Lê Tiến Dũng, Ngô Quốc Luân, Ngô Khắc Không Minh, .... đã có

công trình nghiên cứu về thành phần hóa học cây Ô môi. Kết quả cho thấy đã phân

lập và nhận danh được 18 hợp chất là: (-)-epicatechin; (-)-epiafzelechin;

luteolin,rutin; β -sitosterol; kaempferol, kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranoside;

betulinic acid; aloe-emodin; 2,3,2′-Trihydroxy-6′-methoxy-4′-hydroxymethyl

benzophenone; nicotiflorin; β -sitosterol-3-O- β -D-glucopyranoside; oleanolic acid;

parietinic acid; isoquercitrin; brassicasterol-3-O- β -D-glucopyranoside và

( R)-2,3-dihydroxypropyl-25-hydroxypentacosanoate.

1.2.3 Tổng hợ p k ết quả nghiên cứ u về cây Ô môi

Qua các tài liệu đã công bố từ năm 1981 đến nay các nhà hóa học đã phânlập được một số hợp chất trong cây Ô môi và được thống kê sơ bộ trong bảng 1.1







Bảng 1. 1 Một số hợp chất đã được phân lập từ cây Ô môi

STT CTPT CTCT và Danh pháp Bộ phận

Các hợp chất là anthranoid

1C15H10O5

M = 150 đvC O

O OHOH

OH

Aloe emodin

Lá

2C22H22O12

M = 478 đvC

O

O

H3CO

OH

OH

OH

O

H

H OH

H

OH

H

OH

H

O

OH

1,4,5-Trihydroxy-7-methoxy-3-methyl

anthraquinone-2-O- β -D-glucopyranoside

Trái

3C23H24O12

M = 492 đvC

O

O

OCH3 OH

OH3CO

H3CO

H

H OH

H

OH

H

OH

H

O

OH

1-Hydroxy-6,7,8-trimethoxy


Trái

4C23H24O10

M = 460 đvC

O

O

OCH3

OH3CO

H

H OH

H

OH

H

OH

H

O

OH

CH3

6,8-Dimethoxy-2-methyl


Trái

5C18H16O8

M = 360 đvC

O

O

OCH3 OH

OH

OH

H3CO

H3CO CH3

1,3,4-Trihydroxy-6,7,8-trimethoxy-2-methyl

anthraquinone

Vỏ







6C15H12O5

M =272 đvC O OHOH

HO OCH3

Emodin-9-anthrone

Lá

7C15H14O6

M = 290 đvC OOH

HO

H3CO

OH

OH

2,3,2-Trihydroxy-6-methoxy-4-hydroxymethyl

benzophenone

Lá

8C17H14O8

M = 346 đvC

O

O

H3CO

OH

OH

OH

OH

H3CO

1,3,4,8-Tetrahydroxy-6,7-dimethoxy-2-methylanthraquinone

Vỏ

9C17H14O8

M = 346 đvC

O

O

H3CO

OH

OH

OH

H3CO

OH

1,3,5,8-Tetrahydroxy-6,7-dimethoxy-2-methyl

anthraquinone

Vỏ

10

C17H14O5

M = 298 đvC

O

O OHOH

OCH3

1,8-Dihydroxy-5-methoxy-2,3-dimethylanthraquinone

Rễ







11C27H32O15

M = 596 đvC

OHO

OH

O

OH

OO

H

O

H

OH

OH

H

H

H OH

O

H

OH

H

OH

H

H

HO H

HO

Kaempferol-3-O- -D-mannopyranosyl (1→4)-O- -

D-glucopyranoside

Trái

12C15H14O6

M = 290 đvC

O

OH

OH

OH

OH

HO

Catechin

Lá

13C18H16O8

M = 360 đvC

O

O

OCH3H3CO

HO

OH

OCH3

OH Centaureidin

Lá

14C15H14O5

M = 274 đvC

O

OH

OH

OH

HO

(-)-Epiafzelechin

(2 R,3 R)-2-(4-hydroxyphenyl)chroman-3,5,7-triol

Lá

15C15H14O6

M = 290 đvC

O

OH

OH

OH

HO

OH

Lá







(-)-Epicatechin

(2 R,3 R)-2-(3,4-dihydroxyphenyl)chroman-3,5,7-

triol

16C21H20O11

M = 448 đvC

O

O

HO

OH

OH

OH

O OHO

OH

OH

CH3

Quercitrin

Lá

17C21H20O12

M = 464 đvC

HO

OH

O

OH

OH

O O

H

OH

H

OH

H

HO H

OH

O

H

Isoquercetin

Lá

18

C15H10O6

M = 286 đvC

O

O

HO

OH

OH

OH

Luteolin

Trái

19C14H13 NO4

259 đvC N O

OCH3

H3CO

H3CO Kokusaginine

(4,6,7-Trimethoxyfuroquinoline)

Lá







20C10H20 N2

M = 168 đvC

N

N

Fabioline(1,1′- bipiperidine)

Lá

21C11H12O3

M = 192 đvC

O

O OCH3

CH CH2

Myristicin

Lá

22C11H10O4

M = 206đvC

CHO

OCH3

O

O

Trans-3-methoxy-4,5-methylene-

dioxycinnamaldehyde

Lá

23C7H6O3

M = 138 đvC

CHO

OH

OH

2,4-Dihydroxybenzaldehyde

Lá

24C10H12O4

M = 196 đvC

CHO

OCH3H3CO

OCH3 2,4,6-Trimethoxybenzaldehyde

Lá







25 C10H12O4 M = 196 đvC

CHO

OCH3

OCH3H3CO

3,4,5-Trimethoxybenzaldehyde

Lá

26C29H50O

414 đvC H

HO

H H

H

β -sitosterol

Lá

27

C16H32O2

M = 256 đvC

H3C OH

O

Palmitic acid

Lá

28C19H34O16

M = 518 đvC

O

HHO

OH

OH

OH

O

O

H

HO

OHO

O

O

H

HO

OHOH

Galactomannans

Trái

29C15H10O6

M=286 đvC

O

O

OH

OH

HO

OH Kaempferol

Lá







30C27H30O16

M=610 đvC

O

O

HO

OH

OH

OH

O

OHO

OH

OH

O

OH3C

HO

HO

OH Rutin

Lá

31C27H30O15

M=432 đvC

O

O

HO

OH

OH

O

OHO

OH

OH

O

OH3C

HO

HO

OH Nicotiflorin

Lá

32C35H60O6

M=576 đvC

O

O

H H

OH

HH

HO

HO

H

OH

β -sitosterol-3-O- β -D-glucopyranoside

Vỏ thân

33

C34H56O6

M=560 đvC O

O

H H

OH

HH

HO

HO

H

OH

Brassicasterol-3-O- β -D-glucopyranoside

Vỏ thân

34C16H10O7

M=314 đvC

OHOH

O

OH

OO

O

H3C

Parietinic acid

Vỏ thân







35C30H48O3

M=456 đvC O

OH

Oleanolic acid

Vỏ thân

36C28H56O5

M=472 đvC ( R)-2,3-dihydroxypropyl-25-

hydroxypentacosanoate

Vỏ thân

37C30H48O3

M=456 đvC

HO

OH

O

H

H

H

Betulinic acid

Vỏ thân

38C21H20O10

M = 432 đvC

O

O

O

HO

OH

OH

O

CH3OH

OH

OH

Kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyranoside

Lá







Chương 2

THỰ C NGHIỆM

2.1 DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT

2.1.1 Dụng cụ

Máy cô quay chân không

Bản silica gel 60 F254, Merck tráng sẵn

Bình phun xịt thuốc thử

Tủ hút

Máy sấy Cân các loại

Bếp điện dùng để hơ bản mỏng

Các loại cột sắc ký

Dụng cụ thủy tinh các loại

2.1.2 Hóa chất

Ethanol khan, 96° Việt Nam

Silica gel 230 - 400 mesh, India

n-hexane, Trung Quốc

Methanol, Trung Quốc

Chloroform, Trung Quốc

Ethyl acetate, Trung Quốc

Na2SO4 khan, Trung Quốc

H2SO4 98%, d= 1,84 g/ml, Trung Quốc

Buthanol

Dimethylsulfoxide ((CH3)2SO)

Acid formic







2.2 QUY TRÌNH THỰ C NGHIỆM

2.2.1 Thu và xử lý nguyên liệu

2.2.1.1 Thu nguyên liệu

Mẫu thực vật được dùng trong đề tài là rễ Ô môi, thu hái tại Quận Ô Môn,

Thành phố Cần Thơ.

Thời gian thu: Tháng 3/2013.

2.2.1.2 X ử lý mẫu nguyên liệu

Mẫu nguyên liệu được rửa sạch, sau đó tách bỏ phần lõi cứng, sấy khô ở

50oC, xay thành bột làm nguyên liệu dùng trong đề tài.

Hình 2. 1 Rễ và bột rễ Ô môi

2.2.2 Định tính sơ bộ thành phần hóa học rễ Ô môi

2.2.2.1 Kh ảo sát sự hi ện di ện c ủa các hợ p ch ấ t steroid

Cân 1g bột khô, cho vào 20 ml CHCl3 và ngâm trong 2 giờ. Sau đó lọc lấy

dịch trong là mẫu thử.

Thuốc thử:

- Salkowsky: 1 ml H2SO4 đậm đặc.

- Liebermann-Burchard: 20 ml (CH3CO)2O, 1 ml H2SO4 đậm đặc.

Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch mẫu, nghiêng ống và nhỏ từ từ

từng giọt đến hết 1 ml các thuốc thử theo thành ống nghiệm. Để yên, quan sát.

- Thuốc thử Salkowsky: Nếu dung dịch có màu đỏ đến nâu đỏ là dương tính.







- Thuốc thử Liebermann-Burchard: Nếu thấy xuất hiện một vòng ngăn cách

giữa hai lớp chất lỏng có màu từ hồng đến xanh lá là dương tính.

2.2.2.2 Kh ảo sát sự hi ện di ện c ủa các hợ p ch ấ t f lavonoid

Đun hoàn lưu 5 g bột mẫu trong 50 ml EtOH 95° trong 30 phút. Lọc lấy dịch

trong làm mẫu thử.

Thuốc thử: HCl đậm đặc + bột Mg + alcol isoamylic, dung dịch

(CH3COO)2Pb bão hòa, dung dịch FeCl3 1%.

Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch mẫu, thêm vài giọt HCl đậm đặc,

sau đó cho một ít bột Mg vào và lắc đều. Thêm từ từ từng giọt alcol isoamylic, để

yên quan sát nếu thấy xuất hiện vòng màu hồng hay dung dịch có màu tím thì cóflavonoid trong mẫu.

Dung dịch mẫu tạo kết tủa màu xanh lục đen với dung dịch FeCl3 1%, kết

tủa trắng với dung dịch (CH3COO)2Pb bão hòa.

2.2.2.3 Kh ảo sát sự hi ện di ện c ủa các hợ p ch ấ t alkaloid

Cân 5 g bột khô ngâm với 80 ml HCl 1% trong 4 - 6 giờ.

Lọc lấy dịch trong làm mẫu thử. Thuốc thử: Bouchardat: 2,5 g I2, 5g KI, 10 ml H2O.

Tiến hành: Cho vào ống nghiệm 1ml dịch mẫu, nghiêng ống nghiệm và nhỏ

từ từ từng giọt đến hết 1 ml các thuốc thử theo thành ống nghiệm, lắc đều, để yên

và quan sát.

Thuốc thử Bouchardat: Cho kết tủa màu nâu hoặc vàng đậm là dương tính.

2.2.2.4 Kh ảo sát sự hi ện di ện c ủa các hợ p ch ấ t saponin d ựa vào chỉ s ố t ạo b ọt

Cơ sở lý thuyết: Chỉ số tạo bọt của saponin là độ loãng của nguyên liệu bằng

nước để có chiều cao bọt 1 cm sau khi lắc trong ống nghiệm có kích thước xác

định, tiến hành trong điều kiện quy định.

Cách tiến hành: Cân 1 g bột dược liệu cho vào erlen 500 ml chứa sẵn 100 ml

nước sôi. Tiếp tục đun cho nước trong erlen sôi trong 30 phút nữa. Lọc, để nguội,

thêm nước cất cho đến 100 ml. Lấy 10 ống nghiệm có chiều cao 16 cm, đường kính

16 mm. Cho vào các ống nghiệm lần lượt 1, 2, 3, 4, 5,...,10 ml dịch lọc. Thêm nước







cất vào mỗi ống cho đủ 10 ml. Đậy nắp ống nghiệm rồi lắc theo chiều dọc của ống

tr ong 15 giây. Mỗi giây lắc 2 lần, để yên trong 15 phút. Sau đó đo chiều cao các cột

bọt.

Chỉ số bọt được tính theo công thức: CSB = 100.(10/i)

Trong đó: CSB: Chỉ số tạo bọt

i: ống nghiệm thứ i có cột bọt cao 1 cm

Nếu cột bọt trong các ống nghiệm thấp dưới 1 cm (tức chỉ số tạo bọt dưới

100) thì coi như không có saponin.

Dựa vào các phản ứng đặc trưng

Cân 5 g bột khô, thêm vào 50 ml EtOH 70° và đun cách thủy sôi trong 5

phút rồi lọc. Cô cạn dưới áp suất kém đến cặn khô. Cặn khô này dùng làm mẫu thử.

Thuốc thử: Liebermann-Burchard: (CH3CO)2O, H2SO4 đậm đặc.

Tiến hành: Hòa mẫu bằng 1 ml (CH3CO)2O, thêm từ từ 0,3 - 0,5 ml H2SO4

đậm đặc. Nếu xuất hiện vòng ngăn cách:

- Có màu hồng đến đỏ tím thì sơ bộ nhận định có saponin triterpenoid.

- Có màu xanh lá cây thì sơ bộ nhận định có saponin steroid. 2.2.2.5 Kh ảo sát sự hi ện di ện c ủa các hợ p ch ấ t tanin

Cân 5 g bột khô, thêm vào 100 ml nước cất, đun sôi trong 10 phút. Lọc lấy

dịch trong làm mẫu thử.

Thuốc thử:

- Dung dịch (CH3COO)2Pb: Pha đến bão hòa trong nước.

-

Dung dịch FeCl3: Pha nồng độ 1% trong nước. Tiến hành: Lấy 2 ml dung dịch lọc, thêm 2 - 4 giọt dung dịch thuốc thử.

- Dung dịch (CH3COO)2Pb: Nếu thấy xuất hiện kết tủa màu vàng nhạt là dấu

hiệu dương tính.

- Dung dịch FeCl3: Nếu dung dịch chuyển thành màu xanh đen hoặc lục đen

(do tạo phức) là dấu hiệu dương tính.







2.2.2.6 Kh ảo sát sự hi ện hi ện c ủa các hợ p ch ấ t glycoside

Lấy 10 g bột khô loại các chất không phân cực bằng PE. Tiếp theo chiết với

EtOH 50°. Dịch lọc được loại tạp chất bằng (CH3COO)2Pb cho đến khi không còn

trầm hiện. Sau đó loại (CH3COO)2Pb dư bằng Na2SO4 bão hòa. Cô cạn dịch lọcđược cao glycoside thô. Hòa tan cao này bằng EtOH 90° và lấy dung dịch này làm

mẫu thử.

Thuốc thử:

Tollens: 1 ml dung dịch AgNO3 10% + 1 ml dung dịch NaOH 10% + từ từ

từng giọt dung dịch NH4OH 25%.

Fehling:- Dung dịch A: 40 g CuSO4.5H2O + H2O, định mức vừa đủ 1 lít.

- Dung dịch B: 200 g KNaC4H4O6.4H2O + 150 g NaOH + H2O, định mức vừa

đủ 1 lít.

Khi sử dụng thì trộn hai dung dịch lại với nhau.

Tiến hành: Lấy 1 ml mẫu thử, cho vào từng giọt cho đến hết 1ml các thuốc

thử.

- Thuốc thử Tollens: Nếu thấy xuất hiện kết tủa màu bạc là dấu hiệu dương

tính.

- Thuốc thử Fehling: Đun sôi ống nghiệm trên đèn cồn trong 1 phút, nếu thấy

xuất hiện kết tủa màu đỏ là dương tính.

2.2.2.7 Kh ảo sát sự hi ện hi ện c ủa các h ợ p ch ấ t coumar ine

Đun hoàn lưu 5 g bột mẫu trong 50 ml EtOH 95° trong 30 phút. Lọc lấy dịch

trong làm mẫu thử.

- Phản ứng mở vòng lacton: Cho vào 2 ống nghiệm, mỗi ống 2 ml dịch thử,

thêm vào 1 trong 2 ống 0,5 ml dung dịch NaOH 10%. Đun cả hai ống trên bếp cách

thủy đến sôi, lấy ra để nguội, thêm vào mỗi ống 4 ml H2O. Nếu chất lỏng trong ống

có kiềm trong hơn ống không kiềm có thể xem là dương tính. Tiếp tục đem acid

hóa ống có kiềm với vài giọt HCl đậm đặc, nếu dung dịch đang trong suốt lại xuất

hiện vẩn đục hoặc kết tủa thì đó là dấu hiệu dương tính.







- Phản ứng diazo hóa: Cho vào ống nghiệm nhỏ 1 ml mẫu thử. Thêm

vào đó 2 ml dung dịch NaOH 10%. Đun cách thủy đến sôi rồi để nguội. Nhỏ vài

giọt thuốc thử Diazo mới pha vào. Nếu dung dịch chuyển sang màu đỏ là dương

tính.

Thuốc thử diazo: Hòa tan nóng 0,9 g acid sulfanilic trong 9 ml HCl đậm

đặc. Pha loãng với nước đến đủ 100 ml. Lấy 10 ml dung dịch này ngâm trong nước

đá. Thêm vào đó 10 ml dung dịch NaNO2 2,5% vừa được làm lạnh bằng cách ngâm

trong nước đá. Giữ hỗn hợp ở 0°C trong 15 phút







2.2.3 Quy trình điều chế cao BuOH

Hình 2. 2 Sơ đồ quy trình điều chế cao BuOH từ rễ Ô môi

Bột rễ Ô môi

14,0 kg

- Ngâm dầm với EtOH 96°

- Lọc bỏ bã, cô cạn dưới áp suất thấp

Bã chiết EtOH Cao EtOH

1250 g

- Chiết với n-hexane

- Cô cạn dưới áp suất thấp

Phần không tantrong n-hexane

Cao hexane

80 g

Cao EtOAc

380 g

Phần không tantrong EtOAc

- Chiết với EtOAc


Cao BuOH

35 g

Phần không tan trongBuOH bão hòa nước

- Chiết với BuOH bão hòa nước








Đem cao EtOH phân tán trong nước-cồn ấm chiết lần lượt với các dung môi

theo thứ tự độ phân cực tăng dần: n-hexane, EtOAc, BuOH.

Lọc lấy phần dịch tan sau khi chiết với n-hexane đem cô loại dung môi dưới

áp suất kém thu được cao n-hexane có khối lượng 90 g.

Phần không tan trong n-hexane tiếp tục được chiết với EtOAc. Lọc lấy phần

dịch tan sau khi chiết, đem cô loại dung môi dưới áp suất kém thu được cao EtOAc

có khối lượng 380 g.

Phần không tan trong EtOAc tiếp tục chiết với BuOH bão hòa nước. Lọc lấy

phần dịch tan sau khi chiết, đem cô loại dung môi dưới áp suất kém thu được cao

BuOH có khối lượng là 35 g.2.2.4 Cô lập, tinh chế chất từ cao BuOH

35 g cao BuOH được trộn với 50 g silica gel, sấy khô tuyệt đối sau đó được

nghiền mịn bằng cối sứ, tiếp theo là tiến hành sắc ký cột với hệ dung môi giải ly

tăng dần độ phân cực từ CHCl3 : MeOH (C : M)= 95 : 5 đến MeOH 100%, tách

thành các phân đoạn với các vết chất khác nhau.

Các thông số cột:

Đường kính trong của cột: d= 4,6 cm

Chiều dài cột: l= 80 cm

Khối lượng silica gel nhồi cột: 350 g

Khối lượng cao BuOH sử dụng: 35 g

Tốc độ dòng: 10 ml/phút

Hứng bằng erlen 100 ml

Hệ dung môi giải ly: C : M với tỉ lệ 95 : 5

Dung dịch giải ly được chứa trong các lọ có dung tích 100 ml và được kiểm

tra bằng sắc ký lớp mỏng, hiện màu bằng dung dịch H2SO4 10% trong cồn tuyệt

đối và hơ nóng trên bếp điện. Các lọ cho kết quả sắc ký lớp mỏng giống nhau (về

màu và R f ) được gom thành một phân đoạn.

Kết quả sắc ký cột được trình bày chi tiết ở bảng 2.1







Bảng 2. 1 Kết quả sắc ký cột cao BuOH

Hệ dung môi Số lọ Tách phân

đoạn Kết quả SKLM

Khối

lượng

C : M 95 : 5 1 - 18 RB01 Có vết màu vàng 2,16 g

19 - 44 RB02 2 vết chính màu vàng 3,54 g

C : M 9 : 1 45 - 70 RB03 Có vết màu tím 3,62 g

C : M 8 : 2 71 - 98 RB04 Nhiều vết 4,03 g

C : M 7 : 3 99 - 119 RB05 Vết kéo dài 3,96 g

C : M 5 : 5 120 - 156 RB06 Nhiều vết, kéo dài 5,15 g

MeOH 100 157 - 160 RB07 Vết kéo dài 9,37 g

Tổng 31,83 g

Tiếp tục tiến hành sắc kí cột trên phân đoạn RB01 với hệ dung môi giải ly

tăng dần độ phân cực từ Cloroform 100% đến MeOH 100% .

Thông số cột:

Đường kính trong cột: d= 2,9 cm



Khối lượng mẫu: 2,13 g



Hệ dung môi giải ly C : M 100 : 0





Kết quả sắc kí cột phân đoạn RB01 được trình bày trong bảng 2.2







Bảng 2. 2 Kết quả sắc kí cột phân đoạn RB01

Hệ dung môi Số lọ Tách phân

đoạn

Kết quả SKLM Khối lượng

C : M 100 : 0 1 - 5 RB011 Nhiều vết mờ 0,056 g

C : M 98 : 2 6 - 14 RB012 Vết mờ, kéo dài 0,153 g

C : M 95 : 5 15 - 30 RB013 Vết chính màu vàng 0,386 g

C : M 9 : 1 31 - 43 RB014 Vết màu vàng, kéo dài 0,323 g

C : M 8 : 2 44 - 50 RB015 Nhiều vết, kéo dài 0,286 g


C : M 5 : 5 58 - 63 RB017 Vết mờ 0,148 g

MeOH 100% 64 - 66 RB018 Vết mờ, kéo dài 0,225 g

Tổng: 1,750 g

Sau khi cô loại dung môi, ở phân đoạn RB013, từ lọ 17 - 25, xuất hiện kết

tinh màu vàng cam, tiến hành rút dung dịch riêng và rửa kết tinh nhiều lần trong

MeOH, thu được chất kết tinh màu vàng cam. Tiến hành kiểm tra hợp chất thu

được sau khi kết tinh lại bằng SKLM, hiện hình bằng dung dịch H2SO4 10% trong

cồn tuyệt đối và hơ nóng trên bếp điện. Kết quả thu được là trên bản mỏng chỉ xuấthiện một vết vàng duy nhất đặt tên chất thu được là CGRB01, khối lượng 107 mg.

Tiếp tục tiến hành sắc kí cột trên phân đoạn RB03 với hệ dung môi C : M

với tỉ lệ tăng dần độ phân cực từ cloroform 100% đến MeOH 100%.

Thông số cột:

Đường kính trong cột: d= 2,9 cm



Khối lượng mẫu: 3,54 g



Hệ dung môi giải ly C : M 100 : 0











Kết quả sắc kí cột RB02 được trình bày trong bảng 2.3.

Bảng 2. 3 Kết quả sắc kí cột phân đoạn RB02

Hệ dung môi Số lọ Tách phân đoạn Kết quả SKLM Khối lượng


C : M 95 : 5 10 - 27 RB022 Vết kéo dài 0,36 g

C : M 9 : 1 28 - 45 RB023 1 vết chính màu vàng 0,48 g

C : M 8 : 2 46 - 55 RB024 Nhiều vết 0,93 g

C : M 7 : 3 56 - 63 RB025 Vết mờ, kéo dài 0,64 g

C : M 0 : 100 64 - 70 RB026 Vết mờ 0,43 g

Tổng: 3,06 g

Sau khi cô loại dung môi, lọ số 43 và lọ số 44 ở phân đoạn RB023 xuất hiện

kết tinh màu vàng sẫm. Tiến hành rút riêng phần dung dịch, kết tinh lại nhiều lần.

Tiến hành rửa kết tinh bằng MeOH, Tiến hành kiểm tra hợp chất thu được sau khi

kết tinh lại bằng SKLM, hiện hình bằng dung dịch H2SO4 10% trong cồn tuyệt đối

và hơ nóng trên bếp điện. Kết quả thu được là trên bản mỏng chỉ xuất hiện một vếtduy nhất vàng đặt tên chất thu được là CGRB02, khối lượng 10 mg.







Chương 3

K ẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN

3.1 K ẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC NHÓM HỢ P CHẤT TRONG R Ễ Ô MÔI

Kết quả tổng hợp định tính các nhóm hợp chất có trong rễ Ô môi được trình

bày trong bảng 3.1.

Bảng 3. 1 Kết quả định tính các nhóm hợp chất trong rễ Ô môi

STT HỢP CHẤT THUỐC THỬ HIỆN TƯỢNG KẾT

LUẬN

1 STEROIDLibermann-Burchard Vòng màu nâu +

Salkowski Màu nâu đỏ +

2 FLAVONOIDFeCl3 Kết tủa xanh lục +

(CH3COO)2Pb Kết tủa trắng +

3 ALKALOID

Dragendorff Kết tủa đỏ cam +

Wagner Kết tủa nâu sáng +

Bouchardat Kết tủa vàng đậm. +

4 SAPONINTạo bọt CSB > 100 +

Liebermann-Burchard Màu đỏ tím +

5 TANIN(CH3COO)2Pb Kết tủa vàng nhạt +

FeCl3 Dung dịch màu xanh +

6 GLYCOSIDETollens Kết tủa đen +

Fehling Kết tủa đỏ +

7 COUMARINE Phản ứng mở vòng lacton Xuất hiện kết tủa +

Phản ứng diazo hóa Màu đỏ thẫm +

Chú thích: + : Dương tính - : Âm tính

Qua khảo sát sơ bộ thành phần hóa học hữu cơ, trong rễ Ô môi có sự hiện

diện của các hợp chất: steroid, flavonoid, alkaloid, saponin, tanin, coumarine,

glycoside.

Các thành phần khác như: anthranoid, acid hữu cơ, carotenoid,…vẫn chưađược khảo sát.







Phần hình ảnh định tính được trình bày ở phụ lục .

3.2 NHẬN DANH CẤU TRÚC HỢ P CHẤT

3.2.1 Xác định tính chất vật lý, cấu trúc và nhận danh hợ p chất CGRB01

Hợp chất CGRB01 là chất kết tinh hình kim, màu vàng sậm, tan tốt trong

dung môi DMSO, SKLM giải ly bằng hệ dung môi C : M = 85 : 15, hiện vết bằng

dung dịch H2SO4 10% trong cồn tuyệt đối và hơ nóng bằng bếp điện cho vết màu

vàng, R f = 0,37, điểm nóng chảy mp. 317 - 318°C.

Hình 3. 1 Tinh thể bám trên ống nghiệm và k ết quả SKLM hợp chất CGRB01

Phổ 1H- NMR (DMSO, 500 MHz, H ppm, J Hz) cho thấy sự hiện diện của:

- Bốn proton methine ở H 8,08 (1H, s); 7,72 (1H, s); 7,19 (1H, d , J = 2 Hz);

6,88 (1H, d , J = 2 Hz).

- Ba proton methoxyl ở H 3,94 (3H, s).

- Hai proton nhóm hydroxyl ở H 12,08 (1H, s) và 12,0 (1H, s).

Phổ 13C- NMR (DMSO, 125 MHz, C ppm) cho tín hiệu của tổng cộng 16

carbon, trong đó có:

- Hai carbon carbonyl ở trường thấp với C 189,62 và 180,71 ppm.

- Một carbon carbonyl ở C 166,44.

- Ba carbon tứ cấp vòng thơm mang oxy ở C 166,45; 164,66 và 166,11.

- Năm carbon tứ cấp mang nối đôi ở C 110,23; 134,78; 118,92; 133,64 và

137,74.

- Bốn carbon methine mang nối đôi ở C 107,96; 106,73; 124,31 và 118,47

- Một nhóm methoxyl ở C 56,51.







Từ những đặc điểm phổ 1H- NMR và phổ 13C- NMR nêu trên có thể dự đoán

hợp chất CGRB01 thuộc khung anthraquinone.

O

O OHH

BA

1

2

3

4

4a

1a8a

5a

9

10

5

6

7

8

Hình 3. 2 Cấu trúc hóa học khung anthraquinone

Ngoài ra, phổ 1H- NMR cho thấy: hai proton với H 7,19; 6,88 nằm ở trường

cao hơn hai proton ở

H 8,08; 7,72. Vậy chứng tỏ rằng hai proton với

H 8,08; 7,72nằm gần nhóm rút điện tử (-COOH) và hai proton H 7,19; 6,88 nằm gần nhóm

-OCH3. Do đó, mỗi cặp proton phải nằm ở hai vòng thơm khác nhau đồng thời 2

nhóm -COOH và -OCH3 cũng không cùng nằm trên một vòng thơm.

Ở vòng A (gắn nhóm -OCH3). Vậy có hai proton nhân thơm ở vòng này.

Phổ 1H- NMR cho tín hiệu hai proton ở H 7,19 (1H, d , J = 2 Hz) và 6,88 (1H, d ,

J = 2 Hz). Chứng tỏ 2 proton này ghép cặp meta với nhau. Vì thế, nhóm -OCH3

phải gắn với C-6. Mặc khác, do sự ảnh hưởng của nhóm -OH tại C-8 nên H-7 cộng

hưởng ở vùng trường mạnh hơn so với H-5. Vì thế, 2 tín hiệu proton H 6,88 và

7,19 lần lượt là H-7 và H-5. Dựa vào phổ HSQC xác định C-7 có C 106,73 và C-5

có C 107,96.

Phổ HMBC cho thấy: H-7 và H-5 đều tương quan với carbon tứ cấp mang

nối đôi có C 110,23. Mặc khác, do ảnh hưởng của nhóm -OH tại C-8 và carbon

carbonyl nên C-8a cộng hưởng ở vùng trường cao hơn so với C-5a. Do đó xác định

được C-8a có C 110,23 và C-5a có C 134,79. Do H-5 tương quan với C-10 nên

xác định được C-10 có C 180,71 và C-9 có C 189,64. Hơn nữa, H-5 và H-7 đều

tương quan với carbon tứ cấp vòng thơm mang oxygen ở C 166,45 nên xác định

được C-6 có C 166,45. Mặc khác, H-7 còn tương quan với một carbon tứ cấp vòng

thơm mang oxygen khác, đó là C-8 có C 164,66. Proton H-6′ của nhóm -OCH3

tương quan với C-6, vậy H-6′ có H 3,94 và theo phổ HSQC, C-6′ có C 56,51.







OH

O

O

O

H3C

7

6

5

5a

8a 1a

4a10

9

8

6'

Hình 3. 3 Một số tương quan HMBC ở vòng A

Ở vòng B (vòng gắn -COOH) có hai proton nhân thơm còn lại. Do sự hiện

diện của hai proton nhóm -OH cùng với sự khác biệt về độ dịch chuyển hóa học

của hai carbon carbonyl có C 180,71 (C-10) và 189,62 (C-9) cho thấy hai nhóm

-OH ở cùng một phía để tạo liên kết hidro với chỉ một trong hai carbon carbonyl.

Vì vậy, nhóm -OH còn lại gắn vào C-1. Vậy C-1 là carbon tứ cấp vòng thơm mang

oxygen còn lại có C 166,11.

Phổ 1H- NMR cho tín hiệu 2 proton ở H 8,08 (1H, s) và 7,72 (1H, s), hai

proton này ghép cặp meta với nhau nên nhóm -COOH gắn vào C-3. Do ảnh hưởng

của nhóm -OH nên H-2 cộng hưởng ở vùng trường mạnh hơn so với H-4. Vì thế,

tín hiệu proton H 7,72 (1H, s) và 8,08 (1H, s) lần lượt là H-2 và H-4. Từ phổ

HSQC xác định được C-2 có C 124,31 và C-4 có C 118,48.

Phổ HMBC cho thấy: H-2 và H-4 đều tương quan với carbon của nhóm

-COOH ở C 165,44 nên ta xác định được C-3′ có C 165,44. H-2 cũng có tương

quan với carbon tứ cấp ở C 137,74 và 118,48. Nhưng do C 118,48 là của C-4 nên

các giá trị C 118,92; 137,73 và 133,64 là của ba carbon tứ cấp mang nối đôi còn

lại. Mặc khác, do ảnh hưởng của nhóm -OH tại C-1 và carbon carbonyl nên C-1a

cộng hưởng ở vùng trường cao hơn so với C-4a và C-3. Do đó xác định được C-1a

có C 118,92; C-3 có C 137,74 và C-4a có C 133,64.

O

O

OH

C

OH

O

4

3 3'

2

1

1a8a9

10 4a5a

Hình 3. 4 Một số tương quan HMBC ở vòng B







Dữ liệu phổ NMR của hợp chất CGRB01 sau khi quy nạp, sắp xếp và kiểm

tra được trình bày trong bảng 3.2

Bảng 3. 2 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất CGRB01

Vị tríC/H

1H-NMR(DMSO-d 6 , 500

MHz, H ppm, J Hz)

13C-NMR(DMSO-d 6 , 125

MHz, C ppm)

Qui kếtloại

carbon

HMBC1H→13C

1 161,11 >C=

2 7,72 (1H, s) 124,31 =CH- C-4, C-1a, C-1, C-3′, C-3

3 137,74 >C=

4 8,08 (1H, s) 118,48 =CH- C-1a, C-2, C-3′ 5 7,19 (1H; d ; 2,0) 107,96 =CH- C-7, C-8a, C-6, C10

6 166,45 >C=

7 6,88 (1H; d ; 2,0) 106,73 =CH- C-5, C-8a, C-8, C-6

8 164,66 >C=9 189,62 >C=O

10 180,71 >C=O

1a 118,92 >C=

3′ 165,44 -COO-

4a 133,64 >C=

5a 134,79 >C=

6′ 3,94 (3H, s) 56,51 -O-CH3 C-6

8a 110,23 >C=

1-OH 12,00 (1H, s)

8-OH 12,08 (1H, s)

Tóm lại, từ những dữ liệu phổ, cấu trúc của hợp chất CGRB01 được đề nghị

như hình 3.5.

O

8

6

5

10

8a

5a

1a

4a

4

3

2

1

7

OH OHO

9

O

OH

O

H3C 3'

6'

Hình 3. 5 Cấu trúc của CGRB01

Tên IUPAC: 1,8-dihydroxy-6-methoxy-9,10-dioxo-9,10-dihydroanthracene-3-carboxylic

acid, tên thông thường là parietinic acid

3.2.2 Xác định tính chất vật lý, cấu trúc và nhận danh hợ p chất CGRB02

Hợp chất CGRB02 là chất kết tinh hình kim, màu vàng, tan tốt trong dung

môi DMSO.







Hình 3. 6 Tinh thể bám trên thành ống nghiệm 43

Điểm nóng chảy được đo trên máy Electrothemal 9100 (UK), mao quản

không hiệu chỉnh.

Bảng 3. 3 Kết quả đo điểm nóng chảy của CGRB02

Nhiệt độ nóng chảy của CGRB02 Đo lần 1 Đo lần 2 Đo lần 3

330,6°C 330,5°C 329,8°C

Trung bình t°nc= 330°C

SKLM giải ly bằng hệ dung môi C : M : F = 7 : 3 : 0,05, hiện vết bằng dung

dịch H2SO4 10% trong cồn tuyệt đối và hơ nóng bằng bếp điện cho vết màu vàng,

R f = 0,71.

Hình 3. 7 Kết quả SKLM hợp chất CGRB02

Ngoài ra, hợp chất CGRB02 còn cho phản ứng dương tính với thuốc thử

FeCl3/EtOH chứng tỏ hợp chất CGRB02 là dẫn xuất phenolic.

Phổ 1H- NMR (DMSO-d 6 , 500 MHz, H ppm, J Hz) cho tín hiệu đặc trưng

của 4 proton vòng benzene chia làm 2 cặp đều ghép meta (H 6,46; J = 2,0; H 6,71;

J = 2,0; H 8,16; J = 1,5 và H 8,05; J = 1,5), 3 proton của nhóm -OCH3 gắn trực tiếp

trên vòng benzene (H 3,91) và 1 proton nhóm -OH kiềm nối (H 12,29).







Phổ 13C- NMR (DMSO-d 6 , 125 MHz, C ppm) kết hợp với kỹ thuật DEPT

cho thấy 16 tín hiệu của 16 carbon. Trong đó có 4 carbon methine mang nối đôi

của vòng benzene (C trong khoảng 93,1 - 122,0). Một carbon methoxy duy nhất

(C 56,4) phù hợp với các tín hiệu trên phổ 1H- NMR. Ngoài ra còn có 8 carbon tứ

cấp mang nối đôi và 3 carbon carbonyl (C 178,7; C 169,0; C 165,3).

Phổ ESI-MS cho các pic ion phân tử m/z [M-H]- = 329, [M-H]+ = 331 và

các mảnh khác phù hợp với công thức phân tử C 16H10O8 (M= 330 đvC, độ bất bão

hòa là 12). Với 4 carbon methine và 8 carbon tứ cấp đều mang nối đôi chiếm 6 độ

bất bão hòa, 3 nhóm carbonyl chiếm 3 độ bất bão hòa, vậy hợp chất CGRB02 phải

đóng 3 vòng. Mặt khác, trong 3 carbon carbonyl có 2 carbon thuộc nhóm carboxyl,

vậy hợp chất CGRB02 có thể có 4 nhóm thế (1 nhóm methoxy, 1 nhóm hydroxyl

và 2 carboxyl) gắn trục tiếp vào vòng benzene. Vậy khung sườn của hợp chất

CGRB02 có 13 carbon với 1 nhóm carbonyl và 4 carbon tứ cấp mang nối đôi do

ghép 3 vòng ở 2 cạnh phù hợp với cơ cấu khung xanthone (Hình 3.8). Với 2 cặp

proton ghép cặp meta cho biết các nhóm thế phân bố trên 2 vòng A và C có trục

đối xứng qua C-9 (C 178,7).

O

O

4a4b

8a 9a

9

1

2

3

45

6

7

8

ACB

Hình 3.8 Cấu trúc khung xanthone

Phổ HSQC cho phép xác định các proton H 8,05; H 7,75; H 6,71; H 6,46;

H 3,91 tương ứng gắn trục tiếp với các carbon C 119,3; C 122,0; C 93,1; C 97,7

và C 56,4.

Phổ HMBC cho các thông tin về các mối tương quan giúp quy nạp các giá

trị H và C phù hợp vào khung xanthone: Proton H 7,75 cùng có tương quan với 2

carbon carbonyl C 169,0 và C 165,3 (Hình 3.9) chứng tỏ 2 nhóm carbonyl cùng

gắn 1 vòng (cho là vòng A), còn lại nhóm -OH và -OCH3 phải gắn ở vòng đối diện

(vòng B).







Hình 3.9 Tương quan HMBC trong cấu trúc CGRB02

Ở vòng B, proton H 6,46 ghép cặp meta với proton H 6,71 chứng tỏ nhóm

-OH và -OCH3 phải ở vị trí meta của nhau. Proton nhóm -OH kiềm nối (gần C-9)

vừa có tương quan với carbon methine C 97,7, vừa có tương quan với 2 carbon tứ

cấp C 162,4 và C 103,6 cho phép xác định nhóm -OH gắn vào vị trí C-8

(C 162,4); carbon C 97,7 là C-7 và carbon C 103,6 là C-8a. Proton nhómmethoxy (H 3,91) có tương quan duy nhất với carbon C 167,1 chứng tỏ nhóm

methoxy gắn vào carbon này và được xác định là C-6. Như vậy còn lại carbon

methine C 93,1 là C-5 và carbon tứ cấp C 157,2 là C-4b. Tương quan của hai

proton H 6,46 và H 6,71 cũng hoàn toàn phù hợp: H-7→C-6, C-5, C-8, C-8a;

H-5→C-4b, C-6, C-7 , C-8a.

Ở vòng A, proton H 7,75 ghép cặp meta với H 8,05, vừa có tương quan với

carbon methine C 119,3, vừa có tương quan với carbon tứ cấp C 118,8 cho phép

xác định 2 nhóm carbonyl cũng nằm ở vị trí meta của nhau và proton H 7,75 gắn

với carbon ở vị trí ortho hoặc meta so với carbon C 118,8. Tương tự, proton

H 8,05 ngoài tương với 2 carbon C 165,3 và C 122,0 còn có tương quan với hai

carbon tứ cấp C 118,8 và C 154,3 cho phép xác định proton này gắn với carbon ở

vị trí ortho hoặc meta so với các carbon C 154,3 và C 118,8. Trên khung

xanthone carbon tứ cấp tại vị trí 4a có C cao hơn carbon ở vị trí 9a do gần oxygen

hơn. Do vậy có thể xác định carbon C 154,3 là C-4a, từ đây các carbon C 118,8;

C 122,0; C 119,3 và 2 nhóm carboxyl C 169,0; C 165,3 được xác định tương

ứng là: C-9a; C-2; C-4; C-1/. Ngoài ra, trên các phổ đều không thấy tín hiệu

methylene và methyl kề oxygen nào khác nhóm -OCH3 gắn ở vòng B cho phép dự

đoán hai carbonyl C 169,0; C 165,3 thuộc 2 nhóm carboxyl. Còn lại 2 carbon tứ

cấp C 135,4; C 137,0 được xác định là C-1 và C-3 nhờ so sánh dữ liệu NMR của







các hợp chất monodictyxanthoneơ [17] (Hình 3.10 , Bảng 3.4 và Bảng 3.5),

griseoxanthone C[22] (Hình 3.11, Bảng 3.4 và Bảng 3.4) và tham khảo ước tính độ

dịch chuyển hóa học trên phần mềm Chemdraw 12.0. Nếu đổi lại, 2 nhóm carboxyl

nằm ở 2 vị trí 2 và 4 thì thấy không phù hợp vì C của các carbon vòng A sẽ thayđổi và như vậy H-1 sẽ có tương quan với C-9.

O

OOH

OHO

109.8

136.7

110.5

161.9

182.1

157.0

109.9

155.4

116.01

167.6

123.3

146.1

119.321.6

Hình 3.10 Cấu trúc và C của hợp chất monodictyxanthone O

OOH

OH93.0

97.7

164.2

182.0

157.1

102.8

159.3

111.7

1

22.4

115.9

163.9

100.5

O164.4

56. 3

143.4

Hình 3.11 Cấu trúc và C của hợp chất griseoxanthone

Bảng 3.4 So sánh dữ liệu phổ 1H- NMR của CGRB02 với griseoxanthone C và

monodictyxanthone.

Vị tríC/H

CGRB02

DMSO-d6

Griseoxanthone C

Acetone-d6

Monodictyxanthone

Acetone-d6

1

2 7,75 (1H, d , J = 1,5) 7,26 (1H, d , J = 1,2)

3

4 8,05 (1H, d , J = 1,5) 7,48 (1H, d , J = 1,2)

4a

4b

5 6,71 (1H, d , J = 2,0) 6,30 (1H, d , J = 2,0)6

7 6,46 (1H, d , J = 2,0) 6,18 (1H, d , J = 2,0)

8

8a

9

9a

1/

3/

6/







Bảng 3.5 So sánh dữ liệu phổ 13C- NMR của CGRB02 với griseoxanthone C vàmonodictyxanthone.

Vị tríC/H

CGRB02Griseoxanthone C

Acetone-d6

Monodictyxanthone

Acetone-d6

1 135,4 137,5

2 122,0 125,23 137,0 148,7

4 119,3 119,5

4a 155,3 157,2

4b 157,2 157,1

5 93,1 93,0

6 167,1 164,4

7 97,7 97,7

8 162,4 162,4

8a 103,6 102,8 109,5

9 178,7 182,0 181,99a 118,8 115,5

1′ 169,0

3′ 165,3

6′ 56,4

* Dữ liệu được trích và sắp xếp theo chiều đánh số vị trí cho khung cấu trúc

CGRB02 để tiện so sánh

Từ các đặc điểm lý, hóa và phổ nghiệm đã phân tích như trên kết hợp với so

sánh tài liệu tham khảo cho phép đề nghị cấu trúc hợp chất CGRB02 như Hình

3.12, tên IUPAC là 8-hydroxy-6-methoxy-9-oxo-9 H -xanthone-1,3-dicarboxylic

acid. Cấu trúc hóa học này được kiểm tra bằng phần mềm SciFinder ngày

04-11-2013 cho biết đây là hợp chất lần đầu tiên được phân lập từ thực vật tr ên thế

giới, cụ thể là loài Cassia grandis L.f nên đặt tên là casgrandxanthone A.

O

OOH

5

7

89

4b

8a

4a

9a

1

2

3

4H3CO

6

1

OH

O

OH

1'

6'

3'

O

Hình 3.12 Cấu trúc hóa học hợp chất CGRB02







Chương 4

K ẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

4.1 K ẾT LUẬN

Từ nguyên liệu rễ cây Ô môi tại Quận Ô Môn, Thành phố Cần Thơ, qua quá

trình nghiên cứu, đề tài đã hoàn thành các mục tiêu đặt ra ban đầu:

- Định tính sơ bộ thành phần hóa học của rễ cây Ô môi bằng các thuốc thử

hữu cơ như Bouchardat, FeCl3, (CH3COO)2Pb, Tollens, Fehling, Salkowsky,

Libermann-Burchard và dựa vào chỉ số tạo bọt, phản ứng mở vòng lacton, phản

ứng diazo hóa. Kết quả cho thấy rễ cây Ô môi có sự hiện diện của các hợp chất

như: steroid, flavonoid, alkaloid, saponin, tanin, coumarine, glycoside.

- Từ cao buthanol của rễ cây Ô môi, bằng các phương pháp sắc ký thông

thường như sắc ký cột, sắc ký lớp mỏng kết hợp với các phương pháp hóa lý hiện

đại như phổ 1H-NMR, 13C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC, đã cô lập và nhận danh

được một hợp chất thuộc nhóm anthraquinone là 1,8-dihydroxy-6-methoxy-9,10-

dioxo-9,10-dihydroanthracene-3-carboxylic acid và một hợp chất thuộc nhóm

xanthone là 8-hydroxy-6-methoxy-9-oxo-9 H -xanthone-1,3-dicarboxylic acid, đâylà hợp chất lần đầu tiên cô lập từ thực vật, cụ thể là loài Cassia grandis L.f đặt tên

là Casgrandxanthone A.

4.2 KIẾN NGHỊ

- Do thực hiện đề tài trong thời gian tương đối ngắn, nên chỉ khảo sát trên cao

buthanol của rễ cây Ô môi. Trong tương lai, nếu điều kiện cho phép sẽ tiếp tục

nghiên cứu các cao khác.

- Nghiên cứu thành phần hóa học ở các bộ phận khác của cây Ô môi.







TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] Nguyễn Tiến Bân (chủ biên) (2003), Danh mục các loài thực vật Việt Nam,

Nhà xuất bản Nông nghiệp, trang 737.

[2] Đỗ Huy Bích (1995), Thuốc từ cây cỏ và động vật , Nhà xuất bản Y học,

trang 389 - 390.

[3] Đỗ Huy Bích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng

Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiển, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm

Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập, Trần Toàn (2003), Cây thuốc và

động vật làm thuốc ở Việt Nam, tập II, Nhà xuất bản Khoa Học và Kỹ Thuật,

trang 495 - 496.

[4] Lê Tiến Dũng và ctv (2012). Hợp chất flavonid và anthraquinon từ lá cây Ô

môi (Cassia grandis L.f ). Tạp chí Hóa học. Viện Khoa học và Công nghệ

Việt Nam, T.50 (5A): 200 - 202.

[5]

Nguyễn Ngọc Hạnh (2002), Tách chiết và cô lập hợp chất tự nhiên, Giáo

trình cao học, Viện Công nghệ Hóa học - Viện Khoa học và Công nghệ Việt

Nam, TP. Hồ Chí Minh, lưu hành nội bộ. [6]

Trần Hợp (2003), Tài nguyên cây gỗ Việt Nam, Nhà xuất bản Nông Nghiệp,

trang 504.

[7] Lê Đỗ Huy (2012), “Góp phần khảo sát thành phần hóa học trong trái ô

môi Cassia grandis L.f Họ Vang (Caesalpiniaceae)”, Luận văn tốt nghiệp,

Khoa Sư phạm, Trường Đại học Cần Thơ.

[8] Đỗ Tất Lợi (2014). Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. Nhà xuất bản y

học. Hà Nội. Trang 909 - 910

[9]

Ngô Quốc Luân và ctv (2012). Hợp chất flavonid từ lá cây Ô môi (Cassia

grandis L.f ). Tạp chí Khoa học và Công nghệ, T.50 (3A): 296 - 301

[10]

Ngô Quốc Luân và ctv (2013). Phân lập và nhận danh hai hợp chất từ dịch

chiết ethyl acetate của trái Ô môi (Cassia grandis L.f ). Tạp chí Khoa học

Trường Đại học Cần Thơ, số 26: 30 - 34.







[11] Đào Huy Phong (2011), “Nghiên cứu thành phần hóa học lá ô môi Cassia

grandis L.f Họ Vang (Caesalpiniaceae)”, Luận văn Thạc sĩ Hóa Học

Trường Đại học Cần Thơ.

[12]

Đào Huy Phong và ctv (2011). Khảo sát thành phần hóa học phân đoạn phân cực của lá Ô môi (Cassia grandis L.f). Tạp chí Hóa học. Viện Khoa

học Công nghệ Việt Nam, T.49 (6A): 403 - 407.

[13]

Nguyễn Kim Phi Phụng (2005), Phổ NMR sử dụng trong phân tích hữu cơ ,

Nhà xuất bản Đại Học Quốc Gia TP. Hồ Chí Minh.

[14] Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ , Nhà

xuất bản Đại Học Quốc Gia TP. Hồ Chí Minh. [15] Ngô Khắc Không Minh (2013). Khảo sát thành phần hóa học vỏ cây Ô môi

(Cassia grandis L.f ), H ọ Vang (Caesalpiniaceae). Luận văn tốt nghiệp Cao

học ngành Công nghệ Hóa học. Trường Đại học Bách Khoa TP.HCM.

[16] Hoàng Thị Sản (1999), Phân loại học thực vật , Nhà xuất bản Giáo Dục,

trang 136 - 137.

[17] Anja Krick, Stefan Kehraus, Clarissia Gerhauser, Karin Klimo, Martin

Nieger, Heinz Herbert Fiebig, Iuliana Atodiresei, Gerhard Raabe, Jorg

Fleischhauer and Gabriele M. Konig (2007). Potential cancer

chemopreventive invitro activities of monomeric xanthone derivatives from

the marin algicolous fungus Monodictys putredinis. Journal of natural

products, Vol. 70, pp. 353 - 360.

[18]

A. G. González, J. Bermejo, E. Valencia, A new C6 - C3 compound from

Cassia grandis L.f, Planta Medica (1996) Volume 62, Issue 2,

pp. 176 - 177.

[19] E. Valencia, Madinaveita A, J. Bermejo, A. G. Gonzalez, Gupta MP (1995),

Alkaloids from Cassia grandis. Fitoterapia 1994, Vol. 66, No.5,

pp. 476 - 477.

[20]

Ibadur Rahman Siddiqui, Mithiles Singh, Dipti Gupta và Jagdamba (1993),

Anthraquinone-O- β -D-Glucosides from Cassia Grandis, Natural Product

Letters, Volume 2, Issue 2, 1993, pp. 83 - 90.







[21] Il Kyun Lee, Min Ah Kim, Seung Young Lee, Jong Ki Hong, Jei Hyun Lee,

and Kang Ro Lee, Phytochemical Constituents of Schizonepeta tenuifolia

Briquet, Natural Product Sciences 14(2), 2008, pp. 100 - 106.

[22]

Jian Xiang Yang, Sheng Xiang Qiu, Zhigang She and Yongcheng Lin

(2013). A new xanthone derivative from the marin fungus Phomopsis sp.

Chemistry of natural compound, Vol. 49, No. 1, pp. 31 - 33.

[23] R. P. Verma, K. S. Sinha (1994), An Anthraquinone from Cassia grandis

Linn. Natural Product Letters, Volume 5, Issue 2, pp. 105 - 110.

[24] Srivastava YS, Gupta PC. (1981), A new flavonol glycoside from seeds of

Cassia grandis L.f, Planta Med. 1981 Apr, 41(4), pp. 400 - 402.[25] Wandee Gritsanapan, Bamrung Tantisewie and Vichiara Jirawongse (1984),

Chemical Constituents of Cassia Timorensis and Cassia Grandis, J. Sci.

Soc. Thailand, 10 (1984), pp. 189 - 190.






GVHD: NGÔ QUỐC LUÂN PL-1 SVTH: NGUYỄN THANH HOÀI NHÂN

PHỤ LỤC

Phụ lục 1.1 PHỔ UV-VIS CỦA CGRB01







Phụ lục 1.2 PHỔ IR CỦA CGRB01







Phụ lục 1.3 PHỔ MS+ CỦA CGRB01







Phụ lục 1.4 PHỔ MS- CỦA CGRB01

[M – H]







Phụ lục 1.5 PHỔ 1H- NMR CỦA CGRB01

8-OH1-OH

42

57

6′-OCH3







Phụ lục 1.6 PHỔ 1H- NMR DN RỘNG CỦA CGRB01

4

2

5

7







Phụ lục 1.7 PHỔ 13C- NMR CỦA CGRB01

9

10

6 3′ 81

35a4a

21a

8a 57

6′-OCH3







Phụ lục 1.8 PHỔ 13C- NMR DN RỘNG CỦA CGRB01

9

10

63′ 8

1

3

5a4a

2

1a

8a

57







Phụ lục 1.9 PHỔ HSQC CỦA CGRB01

4 2 5 7

6′-OCH3

H-6′→C-6′

H-7→C-7H-5→C-5

H-4→C-4

H-2→C-22

1a4

758a

6′







Phụ lục 1.10 PHỔ HSQC DN RỘNG CỦA CGRB01

CGRB01−DMSO−HSQC

42

5 7

7

5

2

41a

H-7→C-7

H-5→C-5

H-4→C-4

H-2→C-2

8a







Phụ lục 1.11 PHỔ HMBC CỦA CGRB01

24 5 76′-OCH3

1-OH8-OH

6′

75 8a

41a

2

4a5a3

183′ 6

10

9

H-5→C-10H-4→C-10

H-4→C-3′ H-7→C-8

H-7→C-6H-2→C-3′

H-2→C-1H-5→C-6

H-5→C-7

H-5→C-8a

H-4→C-1aH-2→C-4

H-2→C-1aH-4→C-2







Phụ lục 1.12 PHỔ HMBC DN RỘNG CỦA CGRB01

9

63′ 8

10

1

H-4→C-10 H-5→C-10

H-7→C-8

H-7→C-6

H-5→C-6

H-4→C-3′

H-2→C-1

H-2→C-3′

4 25 7

6′-OCH3

3

5a4a

758a

41a

2

H-2→C-3

H-4→C-2

H-2→C-1a

H-2→C-4H-4→C-1a

H-5→C-7

H-5→C-8a H-7→C-8a

H-7→C-5

8-OH→C-8

6′-OCH3→C-6







Phụ lục 1.13 PHỔ HMBC DN RỘNG CỦA CGRB01

42

5 7

7

58a

41a

2

4a5a

3

1

83′ 6

10 H-4→C10 H-5→C-10

H-7→C-6

H-7→C-8

H-5→C-6H-2→C-3′

H-2→C-1

H-4→C-3′

H-2→C-3

H-2→C-4

H-5→C-7

H-5→C-8a

H-7→C-5

H-7→C-8aH-4→C-1a

H-4→C-2

H-2→C-1a

CGRB01−DMSO−HM BC







Phụ lục 2.1 PHỔ UV-VIS CỦA CGRB02







Phụ lục 2.2 PHỔ IR CỦA CGRB02

753.08

821.09

881.41

1082.42

1157.24

1217.761248.78

1320.16

1405.121445.86

1490.18

1569.31

1656.19

1711.21

2919.70

3391.15

3743.33

1 5

2 0

2 5

3 0

3 5

4 0

4 5

5 0

5 5

6 0

6 5

7 0

7 5

%Transmittance

5 0 0

1 0 0 0

1 5 0 0

2 0 0 0

2 5 0 0

3 0 0 0

3 5 0 0

4 0 0 0

W av en um b er s ( c m-1 )







Phụ lục 2.3 PHỔ MS+ CỦA CGRB02

[M+H]







Phụ lục 2.4 PHỔ MS- CỦA CGRB02

[M-H]







Phụ lục 2.5 PHỔ 1H- NMR CỦA CGRB02

8-OH

42

57

6′-OCH3







Phụ lục 2.6 PHỔ 1H- NMR GIN RỘNG CỦA CGRB02

4

2

7

5







Phụ lục 2.7 PHỔ 13C- NMR CỦA CGRB02

9

1′ 63′ 8

4b4a

31

24 9a

8a

75

6′-OCH3







Phụ lục 2.8 PHỔ 13C- NMR GIN RỘNG CỦA CGRB02

9

1′ 6

3′ 8

4b4a

31

249a

8a

7

5

6′-OCH3







Phụ lục 2.9 PHỔ DEPT CỦA CGRB02

2 224 449a

7 7 7

5 5 5

6′ 6′

8a

13

4a4b

9

1′ 63′

8







Phụ lục 2.10 PHỔ DEPT GIN RỘNG CỦA CGRB02

2 22

4 449a

8a

7 7 7

5 5 5







Phụ lục 2.11 PHỔ HSQC CỦA CGRB02

4 2 5 7

5

7

4

2

H-5→C-5

H-7→C-7

H-4→C-4

H-2→C-2

6′

6′-OCH3

H-6′→C-6′

8a







Phụ lục 2.12 PHỔ HSQC GIN RỘNG CỦA CGRB02

7524

5

7

9a

2

H-5→C-5

H-7→C-7

H-4→C-4

H-2→C-2

8a

4







Phụ lục 2.13 PHỔ HMBC CỦA CGRB02

4 2 5 78-OH 6′-OCH3

8-OH→C-7

6′

5

7

8a

9a

24

13

84b4a

3′ 6 1′

9

8-OH→C-8a

H-4→C-9a

H-4→C-2

8-OH→C-8

H-5→C-4bH-4→C-4a

H-4→C-3′

H-2→C-3′

H-2→C-1′

H-7→C-6H-7→C-8

H-7→C-5

H-5→C-7

H-5→C-8a H-7→C-8a

H-6′→C-6

H-2→C-9a

H-5→C-6







Phụ lục 2.14 PHỔ HMBC GIN RỘNG CỦA CGRB02

4 2 5 7

6′-OCH3

8-OH

5

7

8a

9a4

2

13

4a4b

8

3′ 6

1′

H-7→C-5

H-5→C-7

8-OH→C-8a H-5→C-8a

8-OH→C-7

8-OH→C-8

H-7→C-8a

H-4→C-2

H-4→C-9a H-2→C-9a

H-2→C-1′

H-2→C-3′ H-7→C-6

H-7→C-8

H-5→C-6

H-5→C-4bH-4→C-4a

H-4→C-3′ H-6′→C-6







Phụ lục 2.15 PHỔ HMBC GIN RỘNG CỦA CGRB02

4 25 7

5

7

8a

9a4

2

1

4a

3

4b

8

3′ 6

1′

H-7→C-5

H-5→C-7

H-5→C-8aH-7→C-8a

H-4→C-2

H-2→C-9a

H-4→C-4a

H-4→C-3′

H-2→C-3′

H-2→C-1′

H-5→C-4b

H-5→C-6

H-7→C-6

H-7→C-8

H-4→C-9a







Phụ lục 2.16 K ẾT QUẢ KIỂM TRA PHẦN MỀM SCIFINDER

CỦA HỢ P CHẤT CGRB02







Phụ lục 2.17 Trang đầu bài viết

DẪN XUẤT XANTHONE MỚ I TỪ R Ễ CÂY Ô MÔI

(CASSIA GRANDI S L.F)







Phụ lục 2.18 PHIẾU THẨM ĐỊNH BÀI

Tạp chí Khoa học Đại học Cần Thơ số định k ỳ













Phụ lục 3.1 HÌNH ẢNH K ẾT QUẢ ĐỊNH TÍNH CÁC NHÓM CHẤT

TRONG R Ễ CÂY Ô MÔI

(A) (B)

Hình PL 1 Hiện tượng với thuốc thử Salkowsky (A) và Libermann-Burchard (B )

(A) (B)

Hình PL 2 Hiện tượng với dung dịch FeCl3(A) và dung dịch (CH3COO)2Pb (B)

(A) (B) (C)

Hình PL 3 Hiện tượng với thuốc thử Dragendorff (A), Wagner (B) và Bouchardat (C)







Hình PL 4 Xác định saponin dựa vào chỉ số tạo bọt

Hình PL 5 Hiện tượng xác định có saponin triterpenoid.

(A) (B)

Hình PL 6 Hiện tượng với dung dich (CH3COO)2Pb (A) và dung dịch FeCl3 (B)






(A) (B)

Hình PL 7 Hiện tượng với thuốc thử Tollens (A) và Fehling (B)

(A) (B)

Hình PL 8 Hiện tượng của phản ứng mở vòng lacton (A) và diazo hóa (B)

CHÚ THÍCH:

HÌNH NHÓM CHẤT

PL I STEROID

PL II FLAVONOID


Documents

Góp phần nghiên cứu thành phần hóa học rễ cây Ô môi (Cassia grandis L.f) ở Thành phố Cần Thơ