GUIA DE MICRO 2015-1 NINANTAY.doc

7/18/2019 GUIA DE MICRO 2015-1 NINANTAY.doc

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UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LAVEGA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS YBIOQUIMICA

GUÍA DE PRÁCTICA

MICROBIOLOGIA

CÓDIGO :

CICLO : VIII

2015-I

LIMA - PERÚ

1



MICROBIOLOGIA GENERAL

INTRODUCCION:

La Microbiología es una ciencia que estudia a los organismos microscópicosdenominados microorganismos los cuales se definen como aquellos seres vivosunicelulares o pluricelulares carentes de organización tisular y que no puedenser visualizados al ojo humano necesitando para ello el microscopio

Para el estudio de este tipo de seres vivos se necesita el conocimiento detécnicas únicas denominadas écnicas microbiológicas

!stas écnicas han permitido el conocimiento de las diferentes estructuras ycomposición bacteriana pudiendo comprenderse como muchas bacterias se

relacionan con el hombre ya sea como integrantes de la flora normal o comoagresoras para el mismo

!l estudio de la composición bioquímica de la estructura bacteriana junto alconocimiento de su metabolismo permite hoy la comprensión del mecanismo deacción de los diferentes antibióticos

"oy en día los avances de la genética bacteriana hacen posible el desarrollo detécnicas de #iología molecular con aplicaciones a nivel de la investigacióncientífica y el diagnóstico donde los microorganismos cumplen un rol protagónico

!l conocimiento$ $manejo y utilización de los principales equipos$ instrumentos ymateriales utilizados en el laboratorio de microbiología es indispensable para la

ejecución y desarrollo de las pr%cticas durante el curso de microbiología generalque permitir%n al alumno$ futuro profesional de la salud aplicar estosconocimientos en el estudio de diferentes especialidades en el campo de lamicrobiología

Los alumnos ingresar%n al laboratorio con guardapolvo$ cabello recogido en un

mo&o alto con zapatos cerrados y sin objetos colgantes como pulseras$ aretes

largos o anillos' Los ensayos a su vez se realizar%n con mascarilla gorro cobertor$

guantes descartables y lentes de protección'

2 FACULTAD DE CIENCIAS

FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICA




I- PRÁCTICA Nº 1

MANEJO DE LOS PRINCIPALES EQUIPOS E INSTRUMENTOS,PREPARACIÓN DE MATERIAL DE VIDRIO, MATERIAL AUXILIAR Y SU

FORMA DE ESTERILIZACIÓN1.1 Ma!" #$%&!"

!n el laboratorio de Microbiología es necesario utilizar material limpio$ sin trazas de detergente yestériles para el aislamiento y posterior identificación de los gérmenes que se est% investigando$se entiende por

Limpieza al proceso físico utilizado en los objetos en uso del laboratorio para eliminar materiaorg%nica y residuos$ mediante el lavado con agua con o sin detergente'

(esinfección !s un proceso en el que se utilizan principalmente agentes químicos y

!sterilización que viene a ser la destrucción de toda forma de vida$ ésta puede ser por vapor saturado )autoclave* o por calor seco ) horno *

1.' C"()$#$*!&a+

• Maneja y equipos y materiales en el usa Laboratorio'

• !studia in +itro a los microorganismos'

• Prepara e identifica el material de vidrio y su forma de esterilización

1. Ma#$&a$+ $/0&)"+

!quipos e instrumentos tales como, -utoclave$ horno$ incubadora$ ba&o María$ refrigeradora$$

equipo para luz ultravioleta $ equipo de esterilización por filtración$ c%mara de flujo laminar$centrifuga y microscopio compuesto$

Portaobjetos y cubreobjetos Papel para lente

-ceite de inmersión

orundas de algodón

.asa

-sa de /olle

0ultivo bacteriano

Papel 1raft

ubos de prueba

Placas Petri

#alones$ vaso de precipitados$ pipetas y matraces de vidrio

0inta indicadora de esterilización )para autoclave*

1. P"!$2&(&$*#"

2' !3amina laminar $ ba&o maría$ equipo de esterilización por filtración$ centrifuga y microscopioe identifica sus componentes $ su aplicación y utilización en el laboratorio cada uno de lossiguientes equipos e instrumentos del laboratorio, autoclave$ horno$ incubadora$ c%mara deflujo

4' 5bserva al microscopio las muestras que a continuación se indican,0ultivo bacteriano,

0oloca sobre la l%mina portaobjeto una gota de cultivo bacteriano y deja caer la l%mina

cubreobjeto'6' 'Preparación de material de vidrio y material au3iliar






0onfecciona tapones de algodón para el material de vidrio proporcionado$ estos deben ser consistentes y de un tama&o apropiado que permita su manipulación.

Empaqueta este material con papel 1raft$ en igual forma también se procede con todo

el material au3iliar que se use en el laboratorio para someterlo a un proceso deesterilización y luego conservar su esterilidad 'un tiempo adecuado

Las placas Petri y los tubos de prueba )previamente taponados* se envuelven formando

paquetes de tres y seis unidades respectivamente' (ebe tenerse especial cuidado en queel papel utilizado se encuentre íntegro y sin orificios' Para las torundas e hisopos seprocede de igual forma'

!n el caso de las pipetas$ se cortan bandas largas )tiras* de papel 1raft y se las envuelve

en forma diagonal y empezando por la punta$ colocando un refuerzo de papel en estasección$ de esta forma la pipeta quedar% íntegramente cubierta por el papel' -l final de laenvoltura se dejar% una porción en la que se escribir% en números la capacidad devolumen de la pipeta'

1. 3 R$+0#a2"+

7e registra detalladamente cada una de las observaciones hechas 8 se realiza los esquemas y

dibujos necesarios, !quipo de laboratorio )indicando sus componentes*' Procede de igual formacon el material de laboratorio empleado

1. 4 C0$+#&"*a&".

2' 90on qué propósito se envuelve totalmente el material a esterilizar:4' !n un cuadro comparativo e3plicar las diferentes formas y condiciones del proceso deesterilización que se emplea según el tipo de material a esterilizar'6' ;nformar en forma concisa el uso e importancia de los equipos descritos en la pr%ctica

1. 5 F0$*#$+ 2$ &*6"(a!&%*

Tortora,Berdell, Funke Christine.L.Case Introducción a la Microbiologa !" Edicion. Editorial M#dical $anamericana Espa%a , &''(

Tortora ). *.+ Funke, B. .+ Case, C. L.- Introducción a la Microbiologa, Buenos ires, !/ #d.

Editorial cribia. &'''






II .- PRACTICA Nº '

PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO Y SU FORMA DEESTERILIZACIÓN MEDIOS DE CULTIVO,SÓLIDOS, SEMISÓLIDOS Y L7QUIDOS

'.1 Ma!" #$%&!"

!s importante aislar y observar el crecimiento de un microorganismo para su identificación$ por loque se utilizan materiales alimenticios artificiales preparados en el laboratorio llamados mediosde cultivo y su desarrollo es el cultivo

7us requerimientos varían considerablemente algunos sólo requieren sustancias simples) bacterias no e3igentes * y otros requieren de sustancias complejas ) bacterias e3igentes *

M!"#$% "! C&'(#)$

7on sustancias o compuestos nutritivos estériles que permiten el crecimiento y multiplicación delos microorganismos en el laboratorio$ este medio debe cumplir una serie de condiciones comoson temperatura$ grado de humedad$ y presión de o3ígeno adecuados$ adem%s de nutrientes yfactores de crecimiento y estar e3ento de todo microorganismo contaminante con el objeto deaislar las diferentes especies bacterianas y proceder a su identificación mediante estudioscomplementarios'

C'*%#+#,*,#. "! '$% /!"#$% "! ,&'(#)$:

S!. %& ,$/$%#,#.3

-M!"#$% !/4#,$%'< !3traídos de alimentos naturales

<M!"#$% %!/#- %#.(6(#,$%'< 7on medios de cultivo empíricos enriquecidos de ciertos compuestosquímicos

-M!"#$% %#.(6(#,$%'< Medios químicamente definidos

S!. %& !%(*"$ +4%#,$: Medios líquidos$ medios semisólidos )con =$6 a =$>? de agar*$ mediossólidos )con 2 a 4? de agar*'S!. %& *'#,*,#.,

- M!"#$% ,$/&.!% $ %#/'!%, permiten el desarrollo de la mayoría de bacterias$ sobre todo las

no e3igentes'

- M!"#$% !%!,#*'!%, Medios de enriquecimiento$ medios enriquecidos$ medios de conservación

y transporte medios selectivos y medios diferenciales'

P!**,#. "! /!"#$% "! ,&'(#)$:

!s preciso ejercer un cuidado meticuloso en su preparación los que deber%n ser esterilizadosinmediatamente' una vez preparados

- Los tubos de ensayo que contienen los medios se tapan con tapones de algodón o tapasmet%licas o pl%sticas con el fin de evitar la penetración de microorganismos e3tra&os$ luego seesterilizan Las placas Petri se esterilizan por separado y luego los medios se viertenasépticamente en ellas'

272 C$/!(!.,#*%

2.3 @ealiza un listado de los principales medios de cultivo y su aplicación$ así como los

indicadores mas usados

Prepara y esteriliza diversos medios de cultivo






278 M*(!#*'!% 9 !&#$%:

- Probetas de 2=== mL y frascos de 4>=$ >==$ 2=== mL

- 7olución de, Aa5" 2A y "0l 2A

- rípodes con rejilla met%lica

-

ubos estériles y placas Petri estériles $baguetas $bea1ers- Papel indicador de p"

- -gar, ripticase de 7oya )7-*$ 7;M )-zufre B ;ndol B Motilidad*'!M#$gelatina

- 0aldo, ripticase de 7oya )7#*' peptona

- 0loruro de sodio

'. P"!$2&(&$*#"

- (isuelve en agua destilada los medios comerciales proporcionados$ según la indicación delenvase$ a los que contengan agar ser% necesario someterlos a la acción del calor hasta sucompleta disolución'

- !nfria este preparado hasta apro3imadamente >=C0'- Mide el p" del medio$ con la cinta indicadora'

-7i es necesario$ ajusta el p" empleando Aa5" 2A o "0L 2A'

- !nvasa$ rotula$ se&alando el tipo de medio y la fecha de preparación'- !steriliza por autoclave a 2> lb de presión por 2> a 4= minutos'- 0ontrola la esterilidad del medio$ por incubación del mismo a 6DC0 por 4E horas'- Para el caso del caldo peptonado$ se proceder% a la disolución de los siguientes

componentes, peptona 2= g y cloruro de sodio 2= g$ luego se completa con agua destiladahasta 2=== mLF y se llevar% a p" de G'G HI< =$2.

27 5 R!%&'(*"$%7e describir% su composición y el fundamento de las diferentes clases de medios de cultivo

utilizados

27; C&!%(#$.*#$:'

2' 9Jue importancia tiene el uso de los medios sólidos:

2. 9Jué sustancia es la encargada de solidificar los medios de cultivo sólido: 9(e dónde se

e3trae:

27< F&!.(!% "! #.+$/*,#$.

< Madigan$ M' 'F Martin1o$ K' M'F Par1er$ K', #roo1 #iología de los Microorganismos$ 2=ed' Madrid$Prentice "all ;beria' Madrid$ 4==='

< Levinson$'! Kaetz$! Microbiología e ;nmunología$ 4Ced' !ditorial !l Manual Moderno'Mé3ico$4===






III.- PRACTICA Nº

T8CNICAS DE SIEM9RA, ESTUDIO DEL DESARROLLO 9ACTERIANO ENMEDIOS L7QUIDOS, SEMISÓLIDOS Y SÓLIDOS

71 M*,$ (!#,$

17 T6,.#,*% "! %#!/=*:

Las muestras a analizar pueden presentar poblaciones microbianas mi3tas$ por esta razón seutilizan diversas técnicas para separar un microorganismo de otro y obtener así un cultivopuro que permita identificar al microorganismo aislado'

!l diagnóstico bacteriológico se basa en el aislamiento de microorganismos a partir de unamuestra$ por lo que es indispensable tener en cuenta las m%3imas condiciones de asepsia$ desde

la toma de muestra hasta la siembra$ la cual debe efectuarse lo m%s r%pido posible'érminos importantes, 7iembra

;nóculo

0ultivo puro

0epa

7e denomina Ntécnica de siembraO al procedimiento mediante el cual se pone en contacto a losmicroorganismos con un medio de cultivo y después de un período de incubación se produce eldesarrollo de colonias bacterianas' !3isten varios tipos de siembra$ entre los cuales est%n lossiguientes,

-7iembra por dispersión y agotamiento-7iembra por puntura-7iembra por estría-7iembra por inoculación-7iembra por incorporación$ en placa vertida$ en masa o en todo el medio-7iembra por diseminación o en superficie o con cayado

27 D!%*$''$ =*,(!#*.$

-lgunas veces las especies bacterianas se pueden identificar bas%ndose en el aspecto que tienensobre o dentro de los distintos medios de cultivo $ es así que la observación de las característicasde crecimiento de las colonias de microorganismos en medio sólido )agar* y líquido )caldo*$ puedeser de gran utilidad'

E%(&"#$ =*,(!#*.$ !. /!"#$ '4&#"$:

-+elocidad de desarrollo )crecimiento*, lento$ moderado$ r%pido'- -specto, turbio$ claro o transparente$ difuso$ granulado' 7e registran las observaciones como,

presencia o ausencia de, turbidez$ sedimento y NpelículaO'

-Producción de gas, formación de burbujas'

E%(&"#$ =*,(!#*.$ !. /!"#$ %!/#%'#"$:

-Movilidad-0ambios metabólicos

E%(&"#$ =*,(!#*.$ !. /!"#$ %'#"$:

- 0aracterísticas morfológicas de las colonias en cuanto a, elevación$ forma$ borde$ superficie$

tama&o$ consistencia y color de pigmentación.

.' C"()$#$*!&a+

- @ealizar% diversas técnicas de siembra para su cultivo y aislamiento- -plica las técnicas de aislamiento hasta la obtención de cultivos puros






< (escribe sus observaciones usando la terminología técnica apropiada

. Ma#$&a$+ $/0&)"+

17 T6,.#,*% "! S#!/=* !. M!"#$% L4&#"$% S!/#%'#"$% 9 S'#"$%:- Placas petri con agar 7-- ubos con agar 7;M y 7- en agar inclinado- ubos con caldo 7#- 0ultivos de, Escherichia coli $ 0taph1lococcus aureus$ Bacillus subtilis y $seudomonas

aeruginosa4' (esarrollo bacteriano,

- tilizar los medios de cultivo preparados en la pr%ctica anterior y proceder a realizar lossembrados en los distintos medios según técnicas+er figuras 6<2 a 6<E, 0aracterísticas morfológicas de los cultivos bacterianos'

87> P$,!"#/#!.($:

17 T6,.#,*% "! S#!/=* !. M!"#$% L4&#"$% S!/#%'#"$% 9 S'#"$%:

7iguiendo la metodología descrita según los esquemas ane3os$ proceder tal como sigue,- 0on el asa en aro previamente esterilizada$ tomar una asada del cultivo de

microorganismos$ y sembrar por el método de dispersión y agotamiento en las placas de7- '

- 0on el asa en punta previamente esterilizada$ tomar el inóculo del cultivo de bacterias ysembrar en agar 7;M$ por el método de puntura'

- 0on el asa en aro$ toma el inóculo del cultivo bacteriano y siembra en el tubo con agar enpico de flauta o plano inclinado$ por el método de estría '

- 0on el asa en aro previamente esterilizada tomar una asada del cultivo$ y sembrar por elmétodo de inoculación en el tubo con 7#.

27 D!%*$''$ =*,(!#*.$:

- !fectuar% la lectura de los cultivos proporcionados por la profesora y observa' ener sumo

cuidado de no sacudir los cultivos en caldo ya que esto puede trastornar los crecimientossuperficialesF describir' "acer los esquemas de todas las observaciones'

6'> R!%&'(*"$%: @eporta y describe

87; C&!%(#$.*#$,2' 90on qué propósito se emplean cada una de las diferentes técnicas de siembra:

4' (escribe las características del crecimiento de cada uno de los cultivos bacterianosproporcionados en la pr%ctica'

87 (escribe el método de siembra por incorporación y se&ala en que casos se emplea

.5 F0$*#$+ 2$ &*6"(a!&"*

Madigan$ M' 'F Martin1o$ K' M'F Par1er$ K', #roo1 #iología de los Microorganismos' 2= ed$

Madrid Prentice "all ;beria'$ 2QQQ'

Prescott LI "arley K $I /lein ( >DRIP G> 4=== Madrid






IV .- PRACTICA Nº

M8TODOS DE COLORACIÓN

>71 M*,$ (!#,$

17 C$'$*,#. S#/'!:

-quella coloración en la que se utiliza sólo un colorante$ el cual va a permitir visualizar lamorfología de los microorganismos'

27 C$'$*,#. G*/:

La diferenciación de .ram se basa en el color que adquieren las bacterias cuando se tratan con elcolorante cristal violeta seguido por una solución yodoyodurada de potasio$ para luego someterlasa una decoloración después de la cual se usa una coloración de contraste$ casi siempresafranina' Las bacterias gram<positivas )coloración azul o morada* son resistentes a ladecoloración y conservan el complejo cristal violeta<yodo$ los microorganismos gram<negativos$toman la coloración de contraste )coloración rosa o roja*'

87 C$'$*,#. Á,#"$ ? R!%#%(!.(! @C$'$*,#. "! #!' N!!'%!.:

!n este método de tinción$ el colorante primario$ fucsina %cida$ se formula con fenol para permitir elpaso a través de las paredes celulares de las micobacterias' !l portaobjeto se calienta para facilitar la penetración y se utiliza alcohol etílico como decolorante' 7in embargo$ el reactivo se prepara con%cido clorhídrico para ayudar a la decoloración de las células que no son %cido B resistentes'>7 C$'$*,#. "! E%$*%:Para la observación de esporas$ es necesario que el colorante penetre la pared de la espora$ lacual es relativamente impermeable$ razón por la que se necesita de calentamiento'

57 C$'$*,#. N!*(#)*:La técnica de la tinción negativa incorpora materiales tales como la nigrosina o la tinta china$ que alestar compuesta de partículas demasiado grandes para penetrar en una célula$ permiten observar algunos microorganismos que permanecen sin te&ir y que resaltan sobre un fondo oscuroF se utilizaprincipalmente para observar la c%psula bacteriana'

>7 2 C$/!(!.,#*%

0apacita y adiestra al estudiante para que )el* )la*,- @ealice manualmente métodos de tinción habituales usados en la preparación de

l%minas de observación- (escriba minuciosamente sus observaciones$ al microscopio

>78 M*(!#*'!% 9 !&#$%

C&'(#)$% =*,(!#*.$%:

-0ultivo de Escherichia coli

- 0ultivo de 0taph1lococcus aureus

- 0ultivo de 2lebsiella

L%mina fijada con frotis de M1cobacterium tuberculosis17 C$'$*,#. %#/'!:

- -zul de Metileno

27 C$'$*,#. G*/:- +ioleta de genciana )colorante primario*

- Lugol )mordiente*

- alcohol B acetona )decolorante*

- Sucsina b%sica )colorante de contraste*






87 C$'$*,#. Á,#"$ ? R!%#%(!.(!:- Sucsina fenicada al >? )colorante primario*

- -lcohol B %cido )decolorante*

- -zul de metileno )colorante de contraste*

>7 C$'$*,#. "! E%$*%:

-

7olución de azul de metileno- 7olución saturada alcohólica de eosina

57 C$'$*,#. .!*(#)*:- inta china

>7> P$,!"#/#!.($

17 C$'$*,#. %#/'!:

- Prepara un frotis a partir del cultivo proporcionado'

- Sija al calor'

- 0ubre el frotis con el colorante -zul de Metileno y deja actuar por 6 a > minutos'

- Lava con agua y deja secar'

-

5bserva al microscopio con objetivo de inmersión'

27 C$'$*,#. G*/:

- Prepara frotices de cultivos de E. coli 1 0. aureus'

- (eja secar al aire y fija con calor'

- 0ubre los frotices con reactivo de cristal violeta durante un minuto'

- Lava los portaobjetos con agua corriente durante > segundos'

- 0ubre el frotis con la solución de lugol y deja actuar durante 4 minutos'

- Lava con agua corriente$ y aplica lentamente el alcohol B acetona y seguir% agregando

hasta que la tintura ya no fluya del frotis'

- Lava inmediatamente con agua corriente'

- 0ubrir% el frotis con la solución de safranina durante 6= segundos'

-

Lava con agua corriente y deja secar la preparación'

- 5bserva al microscopio utilizando el lente de inmersión.

-

87 C$'$*,#. Á,#"$ ? R!%#%(!.(!:

- 0ubre el frotis proporcionado con fucsina fenicada al >? )carbolfucsina* y dejarloreposar de 6= a R= segundos antes de calentarlo'

- 0alienta la preparación con suavidad$ haciendo pasar el mechero de alcohol por debajo

del portaobjeto' 7eguir calentando hasta que se observe el desprendimiento devapores' !vitar que el colorante hierva' @epetir 4 veces m%s'

- !nfría y lava con agua corriente'

- (ecolora con alcohol B %cido hasta que no arrastre colorante'

-

Lava con agua corriente'- 0ubrir% el frotis con azul de metileno$ durante 2 minuto'

- Lava con agua corriente'

- (eja secar al aire'

- 5bserva al microscopio con lente de inmersión' Las bacterias %cido B alcohol

resistentes se ti&en de rojo y los dem%s microorganismos de color azul'

>7 C$'$*,#. "! E%$*%:

- "aga un frotis fino y fije a la llama'

- 0ubre con azul de metileno y calienta hasta hervir en forma intermitente por 2 minuto'

- Lava con agua destilada'

- 0ubre con una mezcla de solución saturada alcohólica de !osina por 6= segundos'






- Lava con agua destilada y deja secar al aire'

- !3amina al microscopio con lente de inmersión'

57 C$'$*,#. .!*(#)*:

-

0oloca varias asadas de cultivo en un portaobjetos limpio$ cerca de uno de los bordes'- 0oloca un volumen igual de tinta china cerca del cultivo'

- Mezcla bien con el asa y luego e3tiende la mezcla a lo largo del portaobjetos$ utilizando

la técnica del frotis sanguíneo'

- (eja secar el frotis'

- 0ubre con safranina durante 2= segundos$ luego enjuaga con cuidado y deja secar alaire'

- 5bserva al microscopio con lente de inmersión' -l e3aminar la preparación$ la c%psula

aparecer% como una zona transparente que rodea a la pared celular'

>75 R!%&'(*"$%

@egistra $ dibuja y colorea la morfología de cada una de las muestras coloreadas

>7; C&!%(#$.*#$

2' 9Jué importancia tiene la pared celular bacteriana en la coloración de .ram:

2. 90u%les son las diferencias químicas importantes que e3plican el estado %cido<resistente?

>7< F&!.(!% "! #.+$/*,#.

Ingraham, *. L. 1 C..- Introducción a la Microbiologa- 3ol. 4 1 &. 5 ed.6Editorial e7ert#, 0..

Espa%a, 4!!8.

*a9et:, .+Melnlick 1 delberg. Brooks )eo F, Butel *anet 0 Microbiologa M#dica.&5 ed.M#;ico &''<

gurto 0aen:,Tom=s>amos )obe%a. *uan Carlos 0ena, Chumbes Fernando Microbiologa

B=sica, 4 ed. Lima &''?






V.- PRACTICA Nº 3

META9OLISMO MICRO9IANO

5717 M*,$ (!#,$!n esta pr%ctica se presentar% un panorama general de las reacciones bioquímicas microbianasrelacionadas con el metabolismo de los carbohidratos y sobre las proteínas$ haciendo uso de laspruebas bioquímicas diferenciales que permiten la identificación de microorganismos )en especial

los microorganismos patógenos*.

572 C$/!(!.,#*%

- Manipula e identifica los microorganismos en función a su comportamiento bioquímico'

578 M*(!#*'!% 9 !&#$%

- Placas con agar nutritivo con 2? de almidón

- ubos con, gelatina$ caldo peptonado$ caldo M@ B +P )@ojo de Metilo B +oges Pros1auer*$

caldo lactosado con indicador de -ndrade'

- ubos con medio de, 0itrato de 7immons en plano inclinado$ rea$ 7; en plano inclinado

y ' ' con 7-'

-0ultivos de, E. coli, B. subtilis,$s. aeruginosa, Enterobacter, $roteus 7ulgaris, 0taph1lococcus.

aureus, 0treptococcus 7iridans.

- Lugol'

- @eactivos de, 1ovacTs$ rojo de metilo$ +oges B Praos1auer, alfa<naftol al >?$ en alcohol

amílico$ /5" B creatina al E=?

- iras de papel de filtro impregnadas con solución saturada de acetato de plomo'

- Peró3ido de hidrógeno al 6?'

- 0ampanas de (urham y pipetas Pasteur'

3. P"!$2&(&$*#"+

17 A,,#. %$=! '$% #"*($% "! ,*=$.$

F!/!.(*,#. "! #"*($% "! ,*=$.$:P#/! "4*- ;nocula cada tubo de caldo lactosado con !'coli$ 7'aureus$ P'vulgaris'

- oma un cuarto tubo sin sembrar como control'

- @otula los tubos e incuba todos los tubos a 6DC0 por 4E horas'

S!&."$ "4*- (espués del período de incubación$ compara cada uno de los tubos inoculados$ con el tubo

control'

- 0uando la bacteria ha degradado el hidrato de carbono )lactosa*$ se detecta por la inclusión del

indicador de -ndrade'

- 7i el microorganismo tiene la capacidad de desdoblar un subproducto metabólico a 054 e "H

se observar% la presencia de gas$ en forma de burbujas'






#"'#%#% "!' *'/#".:

P#/! "4*- 0on ayuda del l%piz de cera$ divida por fuera la base de la placa Petri en 6 partes'

-

!n la sección 2$ siembra #' 7ubtilis$ en la sección 4 siembra !' 0oli y en la sección 6 siembraPs' aeruginosa

- ;ncuba a 6DC0 por 4E horas'

S!&."$ "4*- -grega a toda la superficie del medio la solución de lugol'

5bserva la reacción alrededor del crecimiento microbiano'

P$"&,,#. "! ,#"$% 9 *,!(#'-/!(#'-,*=#.$' @*,!($4.*:

P&!=* "! V$!% P$%*&! @VPP#/! "4*@otula los tubos con el nombre del microorganismo'Por la técnica de inoculación$ siembra cada cepa )!' coli y !nterobacter* en su tubo

correspondiente';ncuba a 6DC0 por 4E horas'S!&."$ "4*

- cada tubo agrega 2= a 24 gotas de la solución de alfa<naftol y E gotas de la solución de /5" Bcreatina'

-gita después de agregar las soluciones por 2 minuto'(eja en reposo durante 2> minutos'La reacción es positiva$ si aparece una coloración rosada localizada en la mitad superior o en todoel tubo dentro de los primeros 2> minutos$ lo que nos indica la presencia de acetil<metil<carbinol'7i la lectura se realiza después de 2 hora$ los cultivos pueden presentar una coloración cobriza$siendo esta una respuesta falsa positiva'La reacción es negativa$ si el color inicial del medio de cultivo no cambia'

P&!=* "! $$ "! /!(#'$:P#/! "4*- @otula los tubos con el nombre del microorganismo'

- Por la técnica de inoculación$ siembra cada cepa )!' coli y !nterobacter* en su tubo

correspondiente'

- ;ncuba a 6DC0 por EG a D4 horas'

S!&."$ "4*- -grega E ó > gotas del indicador rojo de metilo a cada tubo$ cuyo rango de viraje esta entre p"

E'E )rojo* y R'= )amarillo*'

- La prueba es negativa si da una coloración amarillo B naranja'

- La prueba es positiva si se mantiene un color rojo estable.

P#.,##$% =#$&4/#,$% "! '*% !*,,#$.!% !. TSI:P#/! "4*- 0on el asa de siembra$ inocula una porción peque&a de la colonia en el centro del tubo y estría

la superficie del pico de flauta'

- @otula e incuba a 6DC0 por 4E horas'

S!&."$ "4*- !s indispensable que la lectura se haga en el tiempo de incubación indicada'

- Producto de "47, ennegrecimiento en el fondo del tubo'

- Sermentación de la glucosa únicamente )rojoIamarillo*, esto se debe a que la glucosa )que se

encuentra en baja concentración con respecto a los otros azucares* ha sido utilizada y lacantidad de %cido producido no es suficiente para neutralizar los productos alcalinos generadospor la utilización de las peptonas' !stos procesos que son o3idativos$ ocurren en la superficie






del medio$ mientras que en el fondo$ por no estar en contacto con el o3ígeno$ solo hayfermentación y el medio permanece %cido'

- Sermentación doble o triple de carbohidratos )amarilloIamarillo*, la fermentación de la glucosa

y alguno )o ambos* de los otros dos azúcares produce gran cantidad de %cido$ por lo que eltubo permanece amarillo'

-

Ao fermentación de carbohidratos )rojoIanaranjado*, se presenta únicamente utilizacióno3idativa de peptonas$ por lo que solo la superficie del tubo se alcaliniza'

- Producción de gas, formación de burbujas$ grietas o desplazamiento del medio.

27 A,,#. %$=! '*% $(!4.*%

#"'#%#% "! '* !'*(#.*:P#/! "4*- @otula cada tubo con el nombre de la cepa correspondiente, E. Coli y B. 0ubtilis'

- ;nocula cada cepa en un tubo con gelatina$ haciendo uso de un asa en punta$introduciendo de manera vertical hasta el fondo del tubo'

-

;ncuba a 6DC0 por 4E horas'S!&."$ "4*- 5bserva los resultados' 5bserva la hidrólisis de la gelatina

P$"&,,#. "! #."$':P#/! "4*- @otula sus tubos con el nombre del microorganismo, !' coli y #' subtilis'

- ;nocula cada cepa en su tubo correspondiente'

- ;ncuba a 6DC0 por 4E horas

S!&."$ "4*- -grega E gotas del reactivo de /ovacTs$ dejando resbalar por la pared interna de cada tubo

que presenta desarrollo bacteriano$ luego agite suavemente'

-

La reacción es positiva$ si se forma un anillo de color rojo fucsia brillante en la zonasuperior del tubo$ pocos segundos después de haber agregado el reactivo'

- Las bacterias que a pesar de desarrollar en el medio no producen indol$ permanecer%n sin

cambio alguno )reacción negativa*'

P$"&,,#. "! %&'+&$ "! #"!.$:P#/! "4*- Por la técnica de puntura y estría$ siembra separadamente en el medio 7- las cepas de

E. coli y $. 7ulgaris'

- 0oloca una tira de papel de filtro impregnada con acetato de plomo'


S!&."$ "4*

-

5bserva el ennegrecimiento del papel de filtro$ por la producción del sulfuro de hidrógeno)reacción positiva*'

-

87 P&!=*% =#$&4/#,*% "#+!!.,#*'!%

U(#'#H*,#. "!' ,#(*($:P#/! "4*- 7iembra por la técnica de estría en cada tubo con las cepas de E.coli y Enterobacter

aerogenes'


S!&."$ "4*- La prueba es positiva si observa crecimiento bacteriano y un color azul intenso del agar en

4E a EG horas'






- !s negativa si no hay crecimiento ni cambio de color'

#"'#%#% "! '* !*:Primer día

- Por la técnica de estría$ siembra los tubos con medio de urea con E.coli y $.7ulgaris' Ao

inocular el fondo'- @otula e incuba a 6DC0 por 4E horas'

7egundo día

- La prueba es positiva si el medio presenta un color rosado en la superficie o en todo eltubo'

- La prueba es negativa$ si el medio permanece del color original'

P&!=* "! '* ,*(*'*%*:- 0on el asa de siembra en punta$ picar el crecimiento de uno de los tubos con el cultivo de

0taph1lococcus aureus o 0treptococcus 7iridans$ y transferir el inóculo a un portaobjetoslimpio'

- -&ade de 2 a 4 gotas de "454 al 6?'

-

5bserva si se forman burbujas o no inmediatamente después que se a&ade el reactivo'- (escarta la l%mina en un recipiente con desinfectante'

R!*,,#. "! '* ,#($,$/$ $#"*%*:- 0on el asa de siembra en punta$ picar el crecimiento de uno de los tubos con el cultivo de

E.coli o $s. aeruginosa$ y transferir el inóculo a una tira del reactivo de o3idasa'

- 0onsidera la prueba positiva cuando los cultivos dan una coloración azul viol%ceo intensaen la tira$ en un m%3imo de > segundos'

575 R!%&'(*"$%

@eporta los resultados y e3plica el fundamento bioquímico de cada una de las pruebas 'realizadas en la pr%ctica

57; C&!%(#$.*#$'

1. 90ómo podría emplear las conclusiones que derivan de esta pr%ctica para clasificar a lasbacterias:

57< F&!.(!% "! #.+$/*,#.

Prescott L I "arley K$ I /lein (' Microbiología >DRIP G>$ 4===

Mac faddin$ Kean S' Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia

clínica' Madrid' >DE'2Q4G>IE24' 4==6






VI PRACTICA Nº 4

METODOS FISICOS Y QUIMICOS DE CONTROL MICRO9IANO

;71 M*,$ (!#,$

17 A,,#. "! '$% *!.(!% +4%#,$% 9 &4/#,$% %$=! '* )#*=#'#"*" "! '*% =*,(!#*%

La muerte microbiana se produce cuando una célula no puede volver a dividirse para formar dos nuevas

células o sea pierden su viabilidad

!n esta practica vamos a determinar si un tratamiento específico mata todas las células$ sireduce su número hasta niveles aceptables o si simplemente detienen el crecimiento duranteun período de tiempo limitado

Los aspectos químicos de esta pr%ctica se limitan a los compuestos que son normalmentetó3icos y que se consideran como materiales desinfectantes o antisépticos

27 E+!,($ "! '$% "!%#.+!,(*.(!% &4/#,$%:

0on frecuencia se desea una r%pida desinfección y esterilización a temperatura ambiente$

sobre todo para diferentes objetos que pueden da&arse al aplicarles calor' !3isten varios compuestos químicos tales como los fenólicos$ el formaldehído$ alcoholes$halógenos y detergentes$ para la desinfección a la temperatura ambiente'na pr%ctica muy común ha consistido en considerar al etanol al D=? y el isopropanol comosoluciones esterilizantes universales'

;72 C$/!(!.,#*%

- !labora un listado de productos farmacéuticos cuya fabricación sea resultado de procesosbiotecnológicos

- !nsaya y observa el efecto de los agentes físicos y químicos sobre la viabilidad de lasbacterias'

;78 M*(!#*'!% 9 !&#$%

17 D!%*$''$ =*,(!#*.$:

- 0ultivos de la pr%ctica anterior sembrados en los distintos medios 0aracterísticas morfológicas de los cultivos bacterianos'

27 A,,#. "! '$% *!.(!% +4%#,$% 9 &4/#,$% %$=! '* )#*=#'#"*" "! '*% =*,(!#*%:

- L%mpara de luz ultravioleta

- 7olución de, merthiolate 2I2===$ tintura de yodo$ cristal violeta$ fenol al >?$ 7avlon 2I4==

- (iscos de Papel filtro

- Placas con agar nutritivo

- 0ultivo de, Escherichia coli $ 0taph1lococcus$ Bacillus subtilis






- #a&o maria

- Srasco con 6= mL de caldo nutritivo

- Pipetas estériles de, 2 mL y >mL

- Placas petri estériles )R por cada grupo*

- ubos estériles )G por cada grupo*

-ubos con -gar nutritivo )E por cada grupo*

- "isopos estériles

- -sas de siembra

;7 > P$,!"#/#!.($

87 A,,#. "! '$% *!.(!% +4%#,$% 9 &4/#,$% %$=! '* )#*=#'#"*" "! '*% =*,(!#*%:

A,,#. "!' ,*'$ @''*/* "#!,(*- !steriliza el asa de siembra a la llama directa del mechero'

- oma el inóculo y siembra en la mitad de la placa con agar nutritivo

- !steriliza el asa de siembra$ tomar otro inoculo$ somete a la acción de la llama directa y

siembra en la otra mitad del agar'

- @otula e incuba a 6DC0 durante 4E horas'

-

A,,#. "!' ,*'$ /!"$- 0ontamina el fondo de cada uno de cuatro tubos con una gota de cultivo de Bacillus

subtilis$ evitando tocar las paredes del tubo'

- 0alienta cada uno de los tubos por flameado$ desde la boca del tubo hasta unos 6 cm del

fondo'

- 7umerge por 2= minutos cada uno de los tubos$ en un ba&o de agua tal como sigue, el

primer tubo a E=C0$ el segundo tubo a D=C0$ el tercer tubo a 2==C0F el cuarto tubo servir%de control'

- -&ade a cada uno de los tubos en condiciones asépticas > mL de caldo nutritivo'

-;ncuba a 6DC0 por 4E horas'

- Procede de manera similar con los otros E tubos$ pero usando como cepa$ el cultivo de

Escherichia coli .

-

A,,#. "! '* *"#*,#. &'(*)#$'!(*- Licua el agar en ba&o maria a >=C0'

7iembra en superficie,

- +ierte el contenido de un tubo de agar licuado en una placa estéril y deja solidificar'

"acer lo mismo en la placa restante'

- 0oloca una gota del cultivo asignado en el centro de cada una de las 4 placas y siembra

con un hisopo estéril en toda la superficie de la placa' (ejar secar 6= minutos7iembra en el medio,

-ransfiere ='2 mL de los cultivos asignados$ en cada uno de los 4 tubos restantes'

- Mezcla por rotación y vierte todo el contenido en su respectiva placa Petri' (eja

solidificar

- !3poner las placas a la l%mpara ultravioleta en la forma siguiente:

-

Método de siembra

Siembra en superi!ie Siembra en todo e" medio

#"a!a $% 1 #"a!a $% 2 #"a!a $% 1 #"a!a $% 2

&iempo de e'posi!i(n a "a "u)

u"tra*io"eta2 minutos 5 minutos 2 minutos 5 minutos

- ;ncuba por 4E horas y anota los resultados






A,,#. "! '$% *!.(!% &4/#,$%- ;nocula abundantemente la superficie de una placa de agar$ con 6 asadas del

microorganismo en estudio' (isemina uniformemente'

- 0on una pinza previamente esterilizada$ coloca los discos de papel embebidos con las

sustancias suministradas y equidistantes entre sí'- ;ncuba a 6DC0 por 4E horas'

E+!,($ "! '$% "!%#.+!,(*.(!% &4/#,$%:- ;nocula =$2 mL de Escherichia coli $ en un tubo conteniendo desinfectante'

- @epite lo anterior utilizando 7# en lugar del desinfectante )tubo control*'

- oma una asada del primer tubo a los > minutos y siembra por el método de estría en un

cuadrante de la placa de agar nutritivo'

- @epite el procedimiento en los tres cuadrantes restantes a los 2=$ 4= y 6= minutos'

- Procede de igual forma con el tubo control'


;7 5 R!%&'(*"$%

@eporta y describe,

2' Las características del crecimiento de cada uno de los cultivos bacterianos ensayados'

;7; C&!%(#$.*#$

2' !l cuestionario se proporcionara a medida que se desarrolle la pr%ctica

;7< F&!.(!% "! #.+$/*,#.

#roo1s .' S #utel$ K'7 Morse 7'- Microbiología médica de Kaetz$ Melnic1$ y -delberg

!ditorial !l Manual Moderno 7'- de 0'+ 46U' !dición' Mé3ico$ 4==>'






VII PRACTICA Nº 5

EFECTOS DE LOS ANTI9IÓTICOS SO9RE LAS 9ACTERIAS

<71 M*,$ (!#,$Los antibióticos )anti$ <contraF bios $ <vida* constituyen un grupo de compuestos terapéuticamenteútiles'!stos compuestos químicos se caracterizan por ser subproductos metabólicos de unmicroorganismo$ y casi siempre son letales para otro microorganismo no relacionado' - partir de2QE=$ se aislaron numerosos antibióticos$ que probaron ser eficaces contra una variedad de m'opatógenos ) bacterias y hongos * La investigación en este campo sigue constituyendo uno de los principales objetivos de la industriafarmacéutica'La acción de los antibióticos sobre las bacterias se puede demostrar in vitro de diferentes maneras'n modo preciso de ellos es por el método de dilución en tubo' !3iste también el método del discoúnico de sensibilidad ideado por /irby y #auer'

<7 2 C$/!(!.,#*%

- -plica métodos para evaluar la actividad antimicrobiana in <vitro- 5btiene la concentración mínima inhibitoria de antibióticos en estudio

< 7 8 M*(!#*'!% 9 !&#$%

- Srasco con 2== mL de caldo Mueller B "inton

- Placas con agar Mueller B "inton

- !scala de Mc Sarland ='>

- 0ultivo de E.coli

- 0ultivo de 0.aureus

-

0ultivo de $s.aeruginosa- (iscos de antibióticos

- "isopos estériles

- Pinzas estériles

- 7olución de antibiótico a una concentración de 2=== mgImL

- ubos estériles de 2R 3 2>=

- Pipetas estériles de 2= mL

- Pipetas estériles de > mL

<7 > P$,!"#/#!.($

17 M6($"$ "! "#+&%#. !. **

Primer día19 FACULTAD DE CIENCIAS





- Prepara una dilución de la bacteria en estudio equivalente a ='> de la escala de Mc Sarland

)2'> 3 2=G bacterias*'

- 7iembra una placa de agar Mueller B "inton con un hisopo embebido en la dilución

anterior'

- 0oloca los discos de los antibióticos con ayuda de las pinzas estériles a 4 cm del borde de

la placa y equidistantes entre si'- Presiona suavemente cada disco para que se adhiera al agar'


7egundo día

- (espués de la incubación$ observa los halos de inhibición alrededor de los discos de

antibióticos'

- La sensibilidad del microorganismo a los antibióticos utilizados$ se establece por comparación en una gr%fica de tama&os de la zona'

27 M6($"$ "! "#'&,#. !. (&=$

P#/! "4*- 0on una pipeta de 2= mL tomar el cultivo proporcionado y dejar caer una gota al frasco que

contiene 2== mL de caldo Mueller B "inton'

-

Mezcla y con la misma pipeta$ repartir% el caldo en 2= tubos estériles$ inoculando el primer

tubo con Q mL y los restantes con > mL del caldo'

- Prepara una fila de diluciones del antibiótico de 2== mg a E ugF con la pipeta de > mL toma

2 mL de la solución de antibiótico e inocula el primer tubo'

- Mezcla y saca > mL para el segundo tubo y así sucesivamente hasta el noveno tubo'

- (el noveno tubo$ saca > mL y elimina conjuntamente con la pipeta'

- !l tubo AC 2= no recibir% antibiótico y servir% como control del desarrollo bacteriano'

- ;ncuba los tubos a 6DC0 por 4E horas'

S!&."$ "4*- 5bserva la turbidez de los tubos compar%ndola con la del tubo control )AC Q*'

- Los tubos que no presentan turbidez se debe a que la bacteria fue inhibida en sudesarrollo'

- La menor concentración de antibiótico que inhibió el desarrollo bacteriano ser% la M;0.

< 7 5 R!%&'(*"$%

2' @eporta los resultados obtenidos )di%metro de los halos* de los microorganismos empleadosfrente al antibiótico analizado'

<7; C&!%(#$.*#$

< 7e realizar% a medida del desarrollo de la pr%ctica

<7< F&!.(!% "! #.+$/*,#.

#roo1s .eo S'F #utel$ Kanet' 7'$ Morse 7tephen' -', Microbiología médica' 2Da' !dición'

Mé3ico$ !ditorial !l Manual Moderno$ 7'-' de 0'+' 4==4'

Madigan$ M' 'F Martin1o$ K' M'F Par1er$ K' #roo1' #iología de los Microorganismos 2= ed'

Madrid$' Prentice "all ;beria' 2QQQ

@amos .orbe&a Kuan 0arlos 7ena 0humbes$ Sernando -gurto 7aenz orres ' Microbiologia

b%sica 0olora ciones de bacterias y la bioquímica en los medios de cultivo 4==E'






VIII PRACTICA Nº

PRINCIPALES ;RUPOS 9ACTERIANOS DE IMPORTANCIA MEDICA < I =

J7 1 M*,$ (!#,$

17 E%(&"#$ "! '$% !%(*+#'$,$,$%La patogenicidad de una especie de !stafilococo$ se determina por producción de hemolisina$fermentación del manitol y producción de las enzimas coagulasa y deso3iribonucleasa'

27 E%(&"#$ "! '$% !%(!($,$,$% -grupados originalmente por su capacidad para producir lisis de los hematíes$ así tenemos losestreptococos alfa$ beta y gama hemolíticos$ según sea la lisis parcial$ total o nula'!3isten varias pruebas específicas para el estudio de estos microorganismos como son,

- Prueba de la bacitracina$ que se usa para la diferenciación de un estreptococo #eta

hemolítico del .rupo -$ de los #eta hemolíticos del .rupo Ao -'

- Prueba de 0-MP$ que se usa para la diferenciación de un estreptococo beta hemolítico

.rupo -$ del estreptococo beta hemolítico grupo #'

- Prueba de la catalasa$ para evidenciar la presencia de esta enzima sobre el peró3ido de

hidrógeno'

- Prueba de 5ptochin$ para evidenciar la sensibilidad del 0. pneumoniae al 5ptochin del y la

resistencia del 0. 7iridans

J7 2 C$/!(!.,#*%

- !nsaya los métodos de identificación diagnóstica in +itro de especies representativas delgénero 0taph1lococcus y 0treptococcus.

J7 8 M*(!#*' 9 /6($"$%

Placas con agar sangre Placas con agar manitol salado

- Placas con agar (A-

- 0ultivo de, 0taph1lococcus aureus 1 0. epidermidis+ 0treptococcus 7iridans, 0. p1ogenes,

0. pneumoniae 1 0. agalactiae

- 7et de colorantes .ram

- @eactivo de coagulasa

- 7olución "0l 2A

- 7olución de peró3ido de hidrógeno al 6?

- (iscos de #acitracina

- (iscos de 5ptochin






J7> P$,!"#/#!.($

17 E%(&"#$ "! '$% !%(*+#'$,$,$%C$'$*,#. 9 /$+$'$4*- !fectúa frotices en l%minas portaobjetos con cada una de las cepas'

- (espués de fijarlas al calor$ realiza coloraciones de .ram'

-5bserva al microscopio con lente de inmersión y anota las características morfológicas'

I.$,&'*,#. !. ** %*.!Primer día

- oma una placa de agar sangre y lo di vide en dos sectores'

- ;nocula cada sector correspondiente con cada una de las cepas de estafilococos, 0.aureus y 0. epidermidis'


7egundo día

- 5bserva el crecimiento en agar sangre'C!,#/#!.($ !. ** /*.#($' %*'*"$Primer día

- oma una placa de agar manitol salado y dividelo en dos sectores'

-

;nocula cada sector correspondiente con las mismas cepas del ejercicio anterior'


7egundo día

- 5bserva el crecimiento en agar manitol salado y describe la morfología de las colonias'

- 5bserva el viraje del color del indicador rojo de fenol$ debido a la acidez

P&!=* "! '* ,$*&'*%* Primer día

- oma dos tubos que contienen ='> mL de plasma de conejo )reactivo de coagulasa*'

- ;nocula cada uno de ellos con ='2 mL de cada una de las dos cepas de estafilococos'

- ;ncuba a 6DC0'

- 5bserva cada hora la aparición de co%gulos$ por espacio de E horas'

-

(e ser negativo el resultado$ se deja incubando y se hace una lectura final a las 4E horas'- 7i aparece un co%gulo$ la bacteria posee la enzima coagulasa'

A,,#. "! '* DNA%* Primer día

- oma una placa de agar (A- y la divide en dos sectores'

- ;nocula en una mitad con el cultivo de 0. aureus y la otra mitad con 0. epidermidis'

- !n ambos casos$ la siembra la realiza con un solo trazo lineal perpendicular a la línea

divisoria'


7egundo día

- -grega a la superficie del agar 2 ml de "0l 2A y espera unos minutos'

- !l "0l 2A precipita el (A- contenido en el medio de cultivo$ enturbi%ndolo'

-

5bserva la presencia de la enzima (A-sa$ por la aparición de un halo transparentealrededor de la siembra$ que indica la ausencia de (A-'

P&!=* "! '* ,*(*'*%*- oma una asada de cada cultivo de 0. aureus y 0. epidermidis y lo coloca sobre un

portaobjetos limpio'

- -&ade 2 a 4 gotas de "454 al 6?'

- 5bserva si se forman burbujas o no inmediatamente después que se a&ade el reactivo'

- (escarta la l%mina en un recipiente con desinfectante'

27 E%(&"#$ "! '$% !%(!($,$,$%C$'$*,#. 9 /$+$'$4*- !fectúa frotis en laminas portaobjetos con cada una de las cepas'






- (espués de fijarlas al calor$ realice coloraciones de .ram'

- 5bserva al microscopio con lente de inmersión y anota las características morfológicas'I.$,&'*,#. !. ** %*.!Primer día

- oma una placa de agar sangre y la divide en dos sectores'

-

;nocula cada sector correspondiente con cada una de las cepas de estreptococos, 0.7iridans )alfa hemolítico* y 0. p1ogenes )beta hemolítico*'


7egundo día

- 5bserva las diferencias de hemólisis en agar sangre'

P&!=* "! '* =*,#(*,#.*7e usa para la diferenciación de un estreptococo #eta hemolítico del .rupo -$ de los #etahemolíticos del .rupo Ao -'Primer día

- oma una placa de agar sangre y divíde en dos sectores'

- ;nocula cada sector correspondiente con cada una de las cepas de estreptococos,0.agalactiae y 0.p1ogenes y coloca cuidadosamente y en forma estéril con ayuda de una

pinza$ un disco de #acitracina en cada mitad'- ;ncuba a 6DC0 por 4E horas'

7egundo día

- 5bserva el halo de inhibición$ indicando la susceptibilidad a la #acitracina del 0'

p1ogenes'P&!=* "! CAMP7e usa para la diferenciación de un estreptococo beta hemolítico .rupo -$ del estreptococobeta hemolítico grupo #'Primer día

- ;nocula con trazo lineal en una placa de agar sangre$ una colonia de 7' aureus'

- Luego perpendicular al trazo anterior$ inocula las cepas de estreptococos, 0. agalactiae y

0. p1ogenes en cada mitad de la placa sin tocar la cepa de estafilococo'


7egundo día

- 5bserva los resultados obtenidos'

- !l estreptococo beta hemolítico .rupo # )0.agalactiae*$ produce una sustancia )factor

0-MP*$ que agranda la zona de hemólisis producida por el estafilococo$ factor que noposee el estreptococo beta hemolítico .rupo - )0. p1ogenes*'

P&!=* "! '* ,*(*'*%*- oma una asada del cultivo de 0treptococcus p1ogenes y coloca sobre un portaobjetos

limpio'

- -&ada 2 a 4 gotas de "454 al 6?'

- 5bserva si se forman burbujas o no inmediatamente después que se a&ade el reactivo'

- (escarta la l%mina en un recipiente con desinfectante'

P&!=* "! O($,#.Primer día

- oma una placa de agar sangre y la divíde en dos mitades'

- ;nocula una mitad de la placa con 0. 7iridans y la otra mitad con 0. $neumoniae y colocacuidadosamente y en forma estéril con ayuda de una pinza$ un disco de 5ptochin en cadamitad'


J7 5 R!%&'(*"$%

5bserva y reporta los resultados

J7; C&!%(#$.*#$

9Jué factores condicionan la patogenicidad del 0. aureus en comparación con otras especiesde estafilococos:






2' 9Jué enfermedades produce el 0. epidermidis y el 0. saproph1ticus:

4' !s recomendable en un paciente que presenta un cuadro de faringoamigdalistis$ hacerse une3amen de secreción faríngea a fin de descartar la presencia de 0treptococcus p1ogenes

J7 < F&!.(!% "! #.+$/*,#.

#roo1s$ .' S'F #utel$ K' 7'$ Morse$ 7' -', Microbiología médica de Kaetz$ Melnic1 y -delberg' $46a ed' Mé3ico' !ditorial !l Manual Moderno$ 7'-' de 0'+' 4==> R2R'=2I#GEI 4==>'

IX.- PRÁCTICA Nº >

PRINCIPALES ;RUPOS 9ACTERIANOS DE IMPORTANCIA MEDICA < II =

K71 M*,$ (!#,$

17 G&$ E.(!$=*,(!#*%Las diferentes especies de enterobacterias se identifican por su actividad metabólica endiferentes medios de cultivo que contienen carbohidratos$ proteínas$ amino%cidos$ etc' !stosmicroorganismos no producen citocromo B o3idasa$ lo que las diferencia de las $seudomonas,

lcalgenes$ eromonas 1 3ibrios'

27 G&$ P%!&"$/$.*%

-lgunas especies son patógenas oportunistas para el hombre$ siendo la mas importante$seudomonas aeruginosa por ser la especie mas frecuentemente asociada con enfermedadhumana' P'aeruginosa desarrolla f%cilmente en los medios de cultivo$ la mayoría de lasespecies son identificadas en base a su olor característico$ morfología colonial$ pigmentos y

otros'87 G&$ V#=#$%

!n el género 3ibrio se describen dos grupos, un grupo comprende a 3ibrio cholerae$causante del cólera y los 3ibrio no aglutinantes que pueden producir diarreas no epidémicas'5tro grupo$ lo conforman las especies halofilicas$ que tienen afinidad por el cloruro de sodio'!ntre estos$ 3. parahaemoliticus$ que puede producir enfermedades similares al cólera perosin ser tan severas'

K72 C$/!(!.,#*%

- !nsaya los métodos de identificación diagnóstica in +itro en el laboratorio de especiesrepresentativas, Escherichia coli, 0almonella, 0higella , 3ibrio.1 $seudomonas aeruginosa

K78 M*(!#*'!% 9 /6($"$%G&$ E.(!$=*,(!#*%

- Placas con agar, Mc 0on1ey$ 77$ !M#$ 7;$ 0itrato de 7immons

- ubos con agar, rea$ 7;M

- ubos con caldo, +P B @M$ peptonado$ lactosado

- 0ampanas de (urham

- 0ultivo de, E.coli, 0almonella tiph1, 0higella, 2lebsiella pneumoniae, Enterobacter

aerogenes, $roteus 7ulgaris

- 7et de colorantes .ram






- @eactivos de, /ovacTs$ @ojo de Metilo$ +oges B Pros1auer, )alfa B naftol al >? y /5" B

creatina al E=?*$ o3idasa

- L%minas porta y cubreobjetos

G&$ P%!&"$/$.*%- ubos con, 7- y 7;

- ubos con 7#

- 0ultivo de Pseudomonas aeruginosa

- 7et de coloración .ram

- @eactivo de o3idasa

G&$ V#=#$- 0ultivo de 3ibrio cholerae

- 0ultivo de 3ibrio parahaemol1ticus

- Placas con agar 0#7

- ubos con agar 7;

- @eactivo de o3idasa

- 7et de coloración .ram

-

(eso3icolato de sodio

K7> P$,!"#/#!.($

17 G&$ E.(!$=*,(!#*%C$'$*,#. 9 /$+$'$4*- !n su mesa encontrar% una cepa representativa de los siguientes grupos, Proteae$

!scherichiae$ 7almonellae$ 7higellae$ y /lebsiellaeF con la cual trabajar% durante toda lapr%ctica'

- Prepara frotices de la cepa del cultivo proporcionado y colorea por tinción de .ram'

- 5bserva al microscopio con lente de inmersión'

M$)#'#"*"- oma una asada de la cepa del cultivo proporcionado y lo coloca sobre un portaobjetos

limpio'- 0oloca una laminilla encima del portaobjetos y observa la movilidad del microorganismo

utilizando el objetivo de E=3'I.$,&'*,#. !. ** M, C$.!9Primer día

- 7iembra la cepa proporcionada por el método de dispersión B agotamiento la placa con

agar Mc 0on1ey'


7egundo día

- La degradación de la lactosa a %cidos se manifiesta por el viraje de color a rojo del

indicador de p" rojo neutroF siendo estas colonias$ lactosa B positivas'

- Las colonias que son lactosa B negativas son incoloras

I.$,&'*,#. !. ** EMB @E$%#.* ? AH&' "! M!(#'!.$Primer día

- 7iembra la cepa proporcionada por el método de dispersión Bagotamiento en la placa con

agar !M#'


7egundo día

- !n el medio !M# observa colonias negruzcas con brillo met%lico verdoso$ cuando

metabolizan la lactosa o sacarosa y translúcidas o de color %mbar si son lactosa Bnegativas'

I.$,&'*,#. !. ** SS @S*'/$.!''* ? S#!''*Primer día

- 7iembra la cepa proporcionada por el método de dispersión B agotamiento en la placa conagar 77'






- ;ncubar a 6DC0 por 4E horas'

7egundo día

- !n el medio 77$ la detección de coliformes se comprueba cuando hay degradación a %cido

mediante el indicador de p" rojo neutro y observar% colonias negras$ si las bacteriasproducen sulfuro de hidrógeno'

D#+!!.,#*,#. /!(*='#,* "!' &$ "! E.(!$=*,(!#*%Primer día

- 0on la cepa asignada$ procede a inocular por los métodos de siembra adecuados$ los

siguientes medios,

- 0aldos, Lactosado$ peptonado y M@<+P

- -gar, rea$ 7;$ 7;M$ 0itrato


7egundo día

- !l alumno anotar% los resultados de este ejercicio y efectuar% la identificación de la cepa

proporcionada' 0omparar% los resultados con la tabla proporcionada, +er tabla, 2=<2'

a* 0aldo Lactosado, después del período de incubación$ observe el resultado obtenido)cambio de coloración$ presencia de gas* y compare con los resultados de los dem%s alumnos

de la clase'b* -gar rea, la prueba es positiva si el medio presenta un color rosado en la superficie o entodo el tubo y es negativa$ si el medio permanece del color original' 5bserve el resultadoobtenido y compare con los resultados de los dem%s alumnos de la clase'

c* -gar 7;, es indispensable que la lectura en el plazo establecido y observe,

- Producción de "47, ennegrecimiento en el fondo del tubo'

- Sermentación de la glucosa únicamente )rojoIamarillo*'

- Sermentación doble o triple de carbohidratos )amarilloIamarillo*'

- Ao fermentación de carbohidratos )rojoIanaranjado*'

- Producción de gas, formación de burbujas$ grietas o desplazamiento del medio'

d* -gar 7;M )-zufre B ;ndol B Movilidad*,

- (etecta la producción de hidrógeno sulfurado por medio de la observación de un

precipitado negro en el medio'- @ealiza la prueba de producción de indol como en )e*

- 5bserva la movilidad del microorganismo$ y realiza un e3amen macroscópico del medio

por una zona de desarrollo difuso que parte de la línea de inoculación'

e* 0aldo peptonado, después del período de incubación,

- -grega en zona E gotas del reactivo de /ovacTs$ en cada tubo que presenta desarrollo

bacteriano$ luego agitar suavemente'

- La reacción es positiva$ si se forma un anillo de color rojo fucsia brillante en la zona

superior del tubo$ pocos segundos después de haber agregado el reactivo y es negativa sino hay cambio alguno'

f* 0aldo M@ B+P )reacción de @ojo de Metilo*,

- -grega E ó > gotas del indicador rojo de metilo a cada tubo$ cuyo rango de viraje esta

entre p" E'E )@5K5* y R'= )-M-@;LL5*'- La prueba es positiva si se mantiene un color rojo estable y negativa si da una coloración

amarillo B naranja'

g* 0aldo M@ B +P )reacción de +oges B Pros1auer*, agregar a cada tubo,

- 2= a 24 gotas de la solución de alfa<naftol y E gotas de la solución de /5" B creatina'

- -gita después de agregar las soluciones por 2 minuto y deja en reposo durante 2>

minutos'

- La reacción es positiva$ si aparece una coloración rosada localizada en la mitad superior o

en todo el tubo dentro de los primeros 2> minutos )presencia de acetil<metil<carbinol* ynegativa$ si el color inicial del medio de cultivo no cambia'

h* -gar 0itrato,

- La prueba es positiva si observa crecimiento bacteriano y un color azul intenso del agar en

4E a EG horas y negativa si no hay crecimiento ni cambio de color'26 FACULTAD DE CIENCIAS





@ota- para la lectura se recomienda hacer uso de las tablas de identiAicación bioqumica que describenlas reacciones de diagnóstico cla7e para identiAicar los g#neros de las bacterias ent#ricas.

R!*,,#. "! '* C#($,$/$ O#"*%*- 0on el asa de siembra en punta$ picar el crecimiento del tubo con la cepa proporcionada$ y

transferir el inóculo a una tira del reactivo de o3idasa'

-0onsiderara la prueba positiva cuando los cultivos dan una coloración azul viol%ceo

intensa en la tira$ en un m%3imo de > segundos'

27 G&$ P%!&"$/$.*%

C$'$*,#. 9 /$+$'$4*- Prepara frotices de la cepa del cultivo proporcionado y colorea por la tinción de .ram'


I.$,&'*,#. !. TSAPrimer día

- 7iembra la cepa de $seudomonas aeruginosa en 7- por el método de dispersión B

agotamiento'


7egundo día 5bserva las características de la colonia y presencia de pigmentación I.$,&'*,#. !. ** TSI Primer día

- 0on el asa de siembra$ inocula en el centro del tubo y estría la superficie del pico de

flauta'


7egundo día@ealiza la lectura tal como se indica para las enterobacteriasR!*,,#. "! '* C#($,$/$ O#"*%* proceder tal como se indica para las enterobacteriasC&'(#)$ * >2CPrimer día

- 7iembra la cepa de $. aeruginosa en los tubos de 7# por la técnica de inoculación'

- ;ncuba a E4C0 por 4E horas

7egundo día- 5bserva la presencia o no de crecimientomicrobiano a E4 C0$ en los tubos

87 G&$ V#=#$C$'$*,#. 9 /$+$'$4*- Prepara frotices de la cepa del cultivo proporcionado y colorea por tinción de .ram'


I.$,&'*,#. !. ** TCBS @T#$%&'+*($ ? C#(*($ ? S*'!% =#'#*!% ?S*,*$%*Primer día

- (ivide la placa de 0#7 por la mitad y sembrar en cada mitad las cepas de +ibrio por el

método de dispersión B agotamiento'


7egundo día

-

Las colonias de 3ibrio cholerae que desarrollan en 0#7 son circulares$ con el bordeligeramente opaco$ con un halo claro alrededor y son amarillas por que metabolizan lasacarosa'

- Las colonias de 3ibrio parahaemol1ticus que desarrollan en 0#7 son circulares$

pegajosas$ con halo claro alrededor$ y son de color verde porque no degradan la sacarosaI.$,&'*,#. !. ** TSIPrimer día

- 0on el asa de siembra$ inocula en el centro del tubo y estría la superficie del pico de

flauta'


7egundo día@ealiza la lectura tal como se indica para las enterobacterias'






R!*,,#. "! '* C#($,$/$ O#"*%* proceder tal como se indica para las enterobacterias'P&!=* "!' +#'*/!.($ $ S(#. T!%(- (eposita una gota de la solución de deso3icolato de sodio al ='>? sobre una lamina

portaobjeto'

- !mulsiona en ella una colonia de 3.cholerae o 3. $arahaemol1ticus con el asa de siembra'

-

(etecta la presencia de filamento al levantar el asa'K75 R!%&'(*"$%

2' !squematiza$ registra y reporta los resultados obtenidos$ identificando en cada caso laespecie'

K7; C&!%(#$.*#$7

(escriba el fundamento de las pruebas realizadas

K7< F&!.(!% "! #.+$/*,#$.

/oneman$ !' 'F -llen$ 7' ('F (oell Kr'$ +' @'F Kanda$ ' M'F 7ommers$ "' M'F inn Kr$ ' 0',

0olor$ -tlas and e3tboo1 of (iagnostic Microbiology' K' #' Lippincott 0ompany' hird !dition'Philadelphia$ 2QQD'

X. PRACTICA Nº 1?

MICOLO;IA

107 1 M*,$ (!#,$Los hongos normalmente se encuentran en la naturaleza como organismos saprofitos libres yson principalmente patógenos oportunistas$ la mayoría de los hongos no son patógenos para elhombre' 7olo unas >= especies causan enfermedades en el hombre y la incidencia deenfermedades fúngicas graves es muy baja$ sin embargo ciertas infecciones fúngicassuperficiales son bastante comunes'7u estudio en el laboratorio$ es posible mediante un dispositivo para cultivo en 0%mara"úmeda sistema esterilizado que consta de una placa petri conteniendo un disco de papel filtroy una varilla de vidrio en NOque soporta dos l%minas porta y cubre objetos' -sépticamenteseccionar una peque&a porción de medio de -gar 7abouraud y colocar sobre la l%mina portaobjetos' 7embrar el hongo y cubrir la preparación con la otra l%mina' La placa es incubada atemperatura ambiente )4=<4>C0* por E ó > días'

107 2 C$/!(!.,#*%

!nsaya los métodos de estudio in 7itro para la identificación e investigación de especiesrepresentativas del medio ambiente y de importancia clínica'

107 8 M*(!#*'!% 9 !&#$%

- Placas petri con colonias de hongos aislados del medio ambiente'

- -gua destilada estéril'

- (ispositivo para cultivo en 0%mara "úmeda'

-Mechero de alcohol'

- 7olución de /5" al 2=?

- -zul de metileno'

- Papel filtro'

- +arilla de vidrio en NO'

- -gar 7abouraud'

- L%minas porta y cubre objetos$ asépticas'

107 > P$,!"#/#!.($

- tilizando aguja de /olle o estilete$ picar una colonia y e3trae una fracción mínima o

micelio'






- (eposita esta fracción sobre la porción de agar dispuesta en el portaobjeto de la c%mara

húmeda'

- 0on ayuda de una pinza estéril cubrir% la preparación con la l%mina cubre objetos'

- "umedece el papel filtro de la placa con agua estéril' y e3amina diariamente al

microscopio la l%mina sembrada hasta verificar el completo desarrollo del hongo'

-

@etira cada vez la l%mina de cultivo y observa y si es necesario$ a&ade m%s agua alsistema'

- 5bserva la germinación de las esporas$ el crecimiento y ramificación del micelio$ la

aparición de hifas diferenciadas y el desarrollo de las estructuras de reproducción'

- 0on ayuda de un Manual de identificación de hongos determina el género

correspondiente'

1075 R!%&'(*"$%

5bserva esquematiza e informa los resultados' !labora esquemas en cada etapa dedesarrollo

107; C&!%(#$.*#$

2' 90u%l es la ventaja del empleo de la c%mara húmeda en el estudio de los hongos:4' !3iste diferencias entre hongos a nivel del crecimiento y diferenciación del micelio:' !3plique'

10 7< F&!.(!% "! #.+$/*,#.

• Levinson$ ' !'F Kaetz$ !', Microbiología e ;nmunología' !ditorial !l Manual Moderno'

7egunda !dición' Mé3ico$ 4==='

• #roo1s$ .' S'F #utel$ K' 7'$ Morse$ 7' -', Microbiología médica de Kaetz$ Melnic1 y

-delberg' 2R édicion' Mé3ico' !ditorial !l Manual Moderno$ 7'-' de 0'+'$'2QQQ'






XI. PRÁCTICA Nº 11

CONTAMINACION MICRO9IANA DE LOS ALIMENTOS

11717- M*,$ (!#,$:

La contaminación biológica de los alimentos$ incluye sobre todo a microorganismos y escuantitativamente mayor que la contaminación por sustancias químicas y agentes físicos'

-sí$ la contaminación microbiana merece gran atención$ tanto desde la perspectiva de laalteración de los alimentos como de la salud de los consumidores'

11727- C$/!(!.,#*%:(etermina la higiene de los productos c%rnicos durante su proceso de preparación ymanipulación'M6($"$: (eterminación de la calidad de los alimentos c%rnicos por métodos analíticosadaptados de los recomendados por la -5-0 Aorteamericana'

11787- M*(!#*'!% 9 E&#$%:*7 M&!%(*%:

A'#/!.($% ,&"$% 9 $,!%*"$%: 0arne de pollo o de res$ en trozos o molida$carne de pescado$ embutidos y hamburguesas' etc'M*(!#*'!%: 0uchillos$ bolsas pl%sticas )con cierre hermético*$ papel toalla$recipientes de pl%stico$ etc'

=7 M*(!#*'!% 9 E&#$%:(*) El material y los medios indicados se entregará en forma proporcional al número de mesa de trabajo,calculados tomando en cuenta el total de alumnos agrupados de la siguiente forma: 5 alumnos por mesade trabajo y teniendo como máximo 1!

M*(!#*' C*.(7 @ O=%!)*,#.Placas petri (") " x mesa Estériles (3 placas por c !e"io)

!sp%tulas chicas y planas (1) 1 x mesa Estériles

Matraz de 4>= ml # $ %ol! de agar Estériles (co#tie#e a$ar %&#"i"o'

Matraz de 24> ml (1) 1 x mesa Estériles (co#tie#e el "il&e#te'

ubos de ensayo 2R 32>= mm (&) & x mesa Estériles (co#tie#e el "il&e#te '

.radillas p I tubos 2R 3 2>= mm 5

Pipetas graduadas 3 2 ml (5) 5 x mesa Estériles ( p&e"e ser "e ) !l'






Mecheros 5 'on alcool

Propipetas de jebe 5

Piceta con desinfectante 1

E&#$% ? I.%(&/!.($%;ncubadora 1

#alanzas mec%nicas 5 ,7- MEDIOS DE CULTIVO YO REACTIVOS

NOTA: L*% '*,*% ,$.(!.#!."$ '$% /!"#$% "! ,&'(#)$ %!/=*"$% %! !.(!**. $%!**"$ @I.,&=*,#. * 25C 9 8<C7

117>7- P$,!"#/#!.($A7- P!**,#. 9 ,$.%!)*,#. "! '* /&!%(*:• Pesar 6= g de la muestra libre de la piel$ o envoltorio de acuerdo al tipo de

producto$ reducirlo a trozos peque&os'

• La muestra debe guardarse en bolsas herméticas con cierre )cerrarlos por

completo$ para evitar la pérdida de humedad*'

• !fectuar los an%lisis antes de las 4Eh de muestreado y conservar en refrigeración

antes de su an%lisis' Las muestras de alimentos naturales y procesados$ se deben

seleccionar y conservar en recipientes apropiados$ bolsa bien cerrada o sellada y

siguiendo las indicaciones del profesor'

B7- P!**,#. "! '*% "#'&,#$.!% "! '* /&!%(*:• (e la muestra inicial )carne molida$ embutido o hamburguesa* pesar 2= g y

pasarla a un /*(*H que contiene Q= ml de agua peptonada al ='2? con een 4=al >? y disolver hasta obtener una suspensión'

• 0onsiderar la concentración de ésta como ='2 ó 2=<2'

• Luego tomamos del matraz )dilución 2= <2 * con pipeta estéril 2ml de la dilución y

vertemos en el T&=$ 1 que contiene Q ml de diluyente estéril y mezclar' !sta seríadilución de concentración 2= <4'

• 7eguidamente tomamos 2ml del ubo 2 con otra pipeta estéril y vertemos al

T&=$ 2 y mezclar' !sta sería dilución 2= <6'

• 7eleccionar las tres diluciones convenientes para la siembra'

C7- R!,&!.($ "! /#,$$*.#%/$% /!%+#'$% *!$=#$% )#*='!%7 (e cada dilución, 2=<2$2=<4$ y 2=<6 omar 2 ml y sembrar por el método de

incorporación en correspondientes placas vacías estériles$ luego agregar 2> a 4=

ml de medio de cultivo -gar Plate 0ount o -gar nutritivo fundido$ mezclar y dejar enfriar hasta solidificación completa'

• Llevar a incubación a 6DC0 por 4E a EG horas'

D7- R!,&!.($ "! $.$%• (e las mismas diluciones, 2=<2$2=<4$ y 2=<6 tomar 2 ml @U(#'#H*."$ '* /#%/* #!(*

"!' /6($"$ *.(!#$ sembrar por método de incorporación en correspondientes

placas vacías estériles$ luego agregar 2> a 4= ml de medio de cultivo -gar

7abouraud o -gar 5.8 fundido$ mezclar y dejar enfriar hasta solidificación

completa'

• Llevar a incubación a 4>C0 por > a D días'

E7- L!,(&* ! #.(!!(*,#.



D!.$/#.*,#. C*.(#"*" @ O=%!)*,#.gar gy (o gar #aboraud) & ml x placa (+ x mesa) edio fundido para pla-uear

gar .late 'ount (o ! nutriti/o) & ml x placa (+ x mesa) edio fundido para pla-uear

Dil&e#te: #oluc! 50 de teen & enagua triptonada al !10

En matra2 x 1&5 ml 3 ml x matra2 (1 at! x mesa)

En tubo 1" x15 ml 3 ml $ tubo 1" x 15 mm (& x mesa)




• Leer las placas anotando la cantidad de S0 y las características de las colonias

formadas para identificar la presencia de microorganismos contaminantes,

#acterias y "ongos$ respectivamente'

11757- R!%&'(*"$%@ealizar la determinación de la calidad de los alimentos c%rnicos$ anotando la presencia o

no de #acterias y "ongos en las muestras procesadas por d' 5bservar y registrar losresultados$ esquematizar y establecer sus conclusiones'

117;7- C&!%(#$.*#$• 90u%les son los métodos microbiológicos aplicados en esta pr%ctica$ para determinar la

calidad de los alimentos c%rnicos:'

• 9Jué medios de cultivo se han empleado para realizar las determinaciones de control

de la calidad de alimentos c%rnicos que d' ha muestreado:

117<7- F&!.(!% "! #.+$/*,#.• Martínez "ern%ndez -' Fundamentos de Nutrición y Dietética; 2ra'!diciónF -&o

4=22F !ditorial Médica Panamericana$ #uenos -ires B -rgentina'

• +idal .arcía$ !' Manual Práctico de Nutrición; 2ra' !diciónF -&o 4==Q$

• Madrid +icente$ -' Nuevo Manual de Industrias Alimentarias; Eta'!diciónF -&o 4=2='

!ditorial M+- !ditores, Madrid +icente$ -ntonio !ditor' Madrid < !spa&a'

XII PRÁCTICA Nº 1'

DETERMINACION DE PATO;ENOS EN ALIMENTOS

12717- M*,$ (!#,$:Los productos c%rnicos y derivados procesados est%n e3puestos a la presencia de bacteriaspatógenas$ que incluso resisten las bajas temperaturas' Por ello es necesario aplicar métodos y procedimientos que eviten la contaminación$ y así prevenir el desarrollo de

muchas enfermedades to3icas e infecciosas en el hombre'

12727- C$/!(!.,#*:;nvestiga la contaminación patógena de los alimentos'M6($"$:(eterminación de la presencia de patógenos en alimentos c%rnicos por métodos analíticosadaptados de los recomendados por la -5-0 Aorteamericana'

12787- M*(!#*'!% 9 E&#$%:*7- M&!%(*%:

• A'#/!.($% ,&"$% 9 $,!%*"$%: 0arne de pollo o de res$ en trozos o molida$

carne de pescado$ embutidos y hamburguesas' etc'

• M*(!#*'!%: 0uchillos$ bolsas pl%sticas$ papel toalla$ recipientes de pl%stico$ etc'

=7- M*(!#*'!% 9 E&#$%:(*) El material y los medios indicados se entregará en forma proporcional al número de mesa de trabajo,calculados tomando en cuenta el total de alumnos agrupados de la siguiente forma: 5 alumnos por mesade trabajo y teniendo como máximo 1!

M*(!#*' C*.(#"*" O=%!)*,#.ubos de ensayo 4= 34== mm (+) + x mesa Estériles (co#tie#e cal"o *rilla '

ubos de (urham (+) + x mesa Estériles (co#te#i"o e# el cal"o *rilla '

Placas petri (+) + x mesa Estériles

!sp%tulas chicas y planas (1) 1 x mesa Estériles

Matraz de 4>= ml s$%ol! de agar Estériles (co#tie#e A$ar Ma#itol Sal '






Matraz de 24> ml (1) 1 x mesa Estériles (co#tie#e cal"o pepto#a"o'

ubos de ensayo 2R 32>= mm (+) + x mesa Estériles (co#tie#e cal"o pepto#a"o'

.radillas p I tubos 4= 34== mm 5


Pipetas graduadas 3 2 ml (+) + x mesa Estériles

Pipetas graduadas 3 > ml (+) + x mesa EstérilesMecheros de vidrio 5 Co# alco+ol

Piceta con desinfectante 1 ,ara li!pie-a "e la !esa "e tra*a.o

E&#$% - I.%(&/!.($%;ncubadora 1

#alanzas mec%nicas 5

D7- MEDIOS DE CULTIVO YO REACTIVOS

R!*,(#)$ C*.(#"*" O=%!)*,#.gar manitol salado & ml x placa (+ x mesa) edio fundido para pla-uear

'aldo 4rilla & ml x tubo & x & (+ xmesa) 'ada tubo c$ tubo de uram

'aldo peptonadoEn matra2 1&5 ml 3 ml x matra2 (1 matra2 x mesa)

En tubo 1" x 15 mm 3 ml x tubo 1" x 15 (+ x mesa)

127>7- P$,!"#/#!.($A7- P!**,#. 9 ,$.%!)*,#. "! '* /&!%(*:

• Pesar 6= g de la muestra libre de la piel$ o envoltorio de acuerdo al tipo de

producto$ reducirlo a trozos peque&os'

• La muestra debe guardarse en bolsas herméticas con cierre )cerrarlos por

completo$ para evitar la pérdida de humedad*'

• !fectuar los an%lisis antes de las 4E h de muestreado y conservar en refrigeración

antes de su an%lisis' Las muestras de alimentos naturales y procesados$ se deben

seleccionar y conservar en recipientes apropiados$ bolsa bien cerrada o sellada y

siguiendo las indicaciones del profesor'

B7- P!**,#. "! '*% "#'&,#$.!% "! '* /&!%(*:• (e la muestra inicial )carne molida$ embutido o hamburguesa* pesar 2= g y

pasarla a un matraz que contiene Q= ml de caldo peptonado y disolver hasta

obtener una suspensión'

• 0onsiderar la concentración de ésta como ='2 ó 2=<2'

• Luego tomamos del matraz )dilución 2= <2* con pipeta estéril 2ml de la dilución y

vertemos en el T&=$ 1 que contiene Q ml de diluyente estéril y mezclar' !sta sería

dilución de concentración 2= < 4'

• 7eguidamente tomamos 2ml del ubo 2 con otra pipeta estéril y vertemos al

T&=$ 2 y mezclar' !sta sería dilución 2= <6'

• Sinalmente$ tomamos 2ml del ubo 4 con otra pipeta estéril y vertemos al T&=$ 8

y mezclar' !sta sería dilución 2= <E'• 7eleccionar las (!% '(#/*% "#'&,#$.!% para la siembra'

C7- D!(!/#.*,#. "! '* P!%!.,#* - A&%!.,#* "! C$'#+$/!% ($(*'!%7• (e cada dilución, 2=<4$ 2=<6 y 2=<E tomar 2 ml con pipetas individuales y verter al

tubo con caldo #rilla )triplicado* que contiene tubo de (urham correspondientes$

empezando por la dilución de mayor concentración$ tapar y marcar cada tubo'


D7- D!(!/#.*,#. "! '* P!%!.,#* "! S(*9'$,$,,&% *&!&%7• (e las diluciones, 2=<4$2=<6 y 2=<E$ tomar 2 ml y sembrar por método de

incorporación en correspondientes placas vacías estériles$ luego agregar 2> a 4=






ml de medio de cultivo -gar Manitol salado fundido$ mezclar por rotación y dejar

enfriar hasta solidificación completa'


E7- L!,(&* ! #.(!!(*,#.• Leer los tubos y determinar la presencia de coliformes totales'

• Leer las placas anotando la cantidad de S0 y las características de las colonias

formadas para determinar la presencia y cantidad total de S0 de 7taphylococcus

aureus'

12757- R!%&'(*"$%@ealizar la determinación de patógenos en los alimentos c%rnicos$ anotando la presenciade coliformes totales y la cantidad total de S0 de 7taphylococcus aureus en las muestrasprocesadas por d'' 5bservar y registrar los resultados$ esquematizar y establecer susconclusiones'

127;7- C&!%(#$.*#$• 90u%les son los métodos microbiológicos aplicados en esta pr%ctica$ para determinar la

presencia y cantidad de patógenos en los alimentos c%rnicos:'


de la calidad de alimentos c%rnicos que d' ha muestreado:

127<7- R!+!!.,#* B#='#$+#,*

• Madrid +icente$ -' Nuevo Manual de Industrias Alimentarias; Eta'!diciónF -&o 4=2='

!ditorial M+- !ditores, Madrid +icente$ -ntonio !ditor' Madrid < !spa&a'

XIII. PRÁCTICA Nº 1

CONTROL DE MANIPULADORES DE ALIMENTOS Y DE LA @I;IENE DESUPERFICIES.

18717- M*,$ T!#,$:

!n la industria alimentaria se debe controlar la calidad del alimento de manera integral y conello garantizar la higiene tanto del propio alimento$ como del personal$ los equipos$utensilios$ el %rea y superficies de trabajo' !sto permite reducir los factores de riesgo decontaminación microbiana y de otra naturaleza'

18727- C$/!(!.,#*%:!nsaya los métodos de control de limpieza en los manipuladores de alimentos y en lassuperficies de trabajo'M6($"$:0ontrol microbiológico de manipuladores de alimentos y de la higiene de superficies

aplicando métodos adaptados de los recomendados por la -5-0'

18787- M*(!#*'!% 9 E&#$%:*7- M&!%(*%:

• A'#/!.($% ,&"$% 9 $,!%*"$%: 0arne de pollo o de res$ en trozos o molida$

carne de pescado$ embutidos y hamburguesas' etc'

• M*(!#*'!%: cuchillos$ bolsas pl%sticas$ papel toalla$ recipientes de pl%stico$ etc'

=7- M*(!#*'!% 9 E&#$%:






(*) El material y los medios indicados se entregará en forma proporcional al número de mesa de trabajo,calculados tomando en cuenta el total de alumnos agrupados de la siguiente forma: 5 alumnos por mesade trabajo y teniendo como máximo 1!

M*(!#*' C*.(#"*" @ O=%!)*,#.

Placas petri (+) + x mesa / placa "e ca"a !e"ioubos de ensayo 2R 32>= mm (1) 1 x mesa Estériles (co#te#ie#"o A$&a pepto#a"a '

.radillas pI tubos 2R 3 2>= mm 5

Pipetas graduadas 3 2 ml (1) 1 x mesa Estériles

Mecheros 5 Co# alco+ol

"isopos largos de madera (+) + x mesa Estériles


Piceta con desinfectante 1 ,ara li!pie-a "e la !esa "e tra*a.o

E&#$% - I.%(&/!.($%;ncubadora 1

D7- MEDIOS DE CULTIVO YO REACTIVOS

R!*,(#)$ C*.(#"*" @ O=%!)*,#.gar gy & ml x placa (1 placa x mesa) .la-ueado

gar 6utriti/o & ml x placa (1 placa x mesa) .la-ueado

gar ac 'on7ey & ml x placa (1 placa x mesa) .la-ueado

gua triptonada: soluci8n al 50 de teen& $ agua peptonada !10

1 ml x tubo de 1" x15 (1 x mesa)

NOTA: L*% '*,*% ,$.(!.#!."$ '$% /!"#$% "! ,&'(#)$ %!/=*"$% %! !.(!**.$ %!**"$ @I.,&=*,#. * 25C 9 8<C7187>7- P$,!"#/#!.($

A7- C$.($' ##6.#,$ "! '$% /*.#&'*"$!% "! *'#/!.($%:• !l personal debe estar correctamente aseado y con la indumentaria apropiada'

• 7eleccionar la zona a muestrear, manos$ pu&os$ gorros$ mandil' etc'

B7- P$,!"#/#!.($% "! ($/* "! /&!%(*:• omar un hisopo estéril y humedecerlo en agua peptonada con teen 4= al >?

eliminar el e3ceso de medio diluyente

• "isopar la superficie seleccionada con los sentidos que indican los esquemas -$ #$

0',

A B C

• 0olocar el hisopo en el tubo con agua peptonada estéril$ dejar en reposo por 4=

minutos'

• 7embrar en -gar Mac 0on1ey$ -gar Autritivo y -gar 5gy$ respectivamente, omar

el hisopo del tubo con agua peptonada y eliminar el e3ceso de agua en las paredes

del tubo'

• 7embrar en uno de los medios por el método de e3tensión$ y eliminar el hisopo

)previa incineración*'

• @epetir el procedimiento de siembra para cada medio con hisopo nuevo estéril'

• ;ncubar las placas con -gar Autritivo y -gar Mac 0on1ey a 6DC0 por 4E a EG horas

y las placas con -gar 5gy a 4>C0 por > < D días






C7- C$.($' ##6.#,$ "! %&!+#,#!% "! (*=*$:• !l %rea de trabajo debe estar correctamente aseada y de acuerdo al procedimiento

establecido'

• 7eleccionar las zonas a muestrear en la superficie de la mesa de trabajo'

• -plicar el mismo procedimiento anterior para la toma de muestra$ siembra e

incubación$

D7- L!,(&* ! #.(!!(*,#.• Leer las placas anotando la cantidad de S0 y las características de las colonias

formadas para determinar la presencia de gérmenes contaminantes )bacterias yIo

hongos*'

18757- R!%&'(*"$%@ealizar la determinación de patógenos durante el control de la indumentaria de losmanipuladores de alimentos y de la higiene de superficies de trabajo$ anotando la cantidadtotal de S0 según el método de recuento directo y las características de las mismas'5bservar y registrar los resultados$ esquematizar y establecer sus conclusiones'

187;7- C&!%(#$.*#$• 90u%les son los métodos microbiológicos aplicados en esta pr%ctica$ para determinar

la presencia y cantidad de patógenos en la indumentaria de los manipuladores dealimentos y en las superficies de trabajo:'


de los manipuladores de alimentos y en las superficies de trabajo que d' ha

muestreado:'

187<7- F&!.(!% "! I.+$/*,#.7Madrid +icente$ -' Auevo Manual de ;ndustrias -limentariasF Eta'!diciónF -&o 4=2=' !ditorial M+-

!ditores, Madrid +icente$ -ntonio !ditor' Madrid < !spa&a'

XIV. PRÁCTICA Nº 1

CONTROL MICRO9IOLO;ICO DE MEDICAMENTOSRECUENTO DE MICROOR;ANISMOS AERO9IOS MESOFILOS.

1>717 M*,$ (!#,$:Los medicamentos deben poseer una pureza microbiológica adecuada a su uso previsto'Los recuentos de microorganismos aerobios mesófilos viables en los medicamentos noestériles deben estar dentro de límites m%3imos permisibles'

1>727 C$/!(!.,#*%:(etermina la contaminación microbiana de productos farmacéuticos y superficies detrabajo'M6($"$: Preparación de la muestra según método descrito por 7P 6=' @ecuento de losmicroorganismos aerobios totales y de hongos'

1>787 M*(!#*'!% 9 !&#$%A7 M&!%(*%: Productos farmacéuticos líquidos en solución o Nproductos naturalesO$ asa de

siembra$ pabilo$ bolsas pl%sticas$ plumón marcador$ algodón y papel 1raft )por mesa de

trabajo*'

B7 M*(!#*'!% 9 E&#$%:

M*(!#*' C*.(#"*" O=%!)*,#.Placas petri (") " x mesa Estériles

Matraz de 4>= ml #egún %olumen Estériles (co#te#ie#"o los a$ares '

Matraz de 24> ml (1) 1 x mesa Estériles (co#te#ie#"o el "il&e#te'

ubo de ensayo 2R 32>= mm (&) & x mesa Estériles (co#te#ie#"o el "il&e#te '

.radillas p I tubos 2R 3 2>= mm >






Pipetas graduadas 3 > ml (&) & x mesa Estériles

Propipetas de jebe >

Pipetas graduadas 3 2ml (&) & x mesa Estériles

Probeta graduada 3 2= ml (1) 1 x mesa Estériles

Mecheros > Co# alco+ol

Piceta con desinfectante 2 ,ara li!pie-a "e la !esa "e tra*a.oE&#$%;ncubadora 2

#alanzas mec%nicas > 2 3 mesa de trabajo

C7 R!*,(#)$%Para la entrega de los /!"#$% "! ,&'(#)$ 9 /*(!#*'!% se considerar% un apro3imadode > alumnos por mesa de trabajo y m%3imo 2= mesas de trabajo'

D $araImportante.- Al finalizar la práctica, las placas conteniendo los medios de cultivo sembrados, seentregarán al Laboratorio por separado según temperatura de incubación. Los alumnos asistirán averificar las placas y tubos, solo en los horarios establecidos por el Laboratorio. La presentación esobligatoria con: mandil, guantes y mascarilla.

1>7>7 P$,!"#/#!.($O=(!.,#. "! '* /&!%(*

(esinfectar el envase del producto a analizar$ usar alcohol etílico de D=C y algodón' -brir elrecipiente en forma aséptica con ayuda del mechero$ en caso de usar otros materialesestos deben estar esterilizados'

P!**,#. "! '* /&!%(*(iluir 2= ml de la muestra en Q= ml del agua tamponada )Para muestras con alto contenidode lípidos cuenta con een 4= al >?*' Preparar diluciones seriadas 2=<2F 2=<4$ 2=<6'

P!**,#. "! '*% "#'&,#$.!%:La solución preparada anteriormente ser% considerada como la dilución 2=<2 y seguir de acuerdo al esquema siguiente,

I.(!!(*,#. "!' !%&!/*:



De#o!i#aci0# Ca#ti"a" (1' O*ser2aci0#

lcool et9lico ; 5 mlgar tripticasa soya fundido & ml x placa ( + placas x mesa ) en matraces

x &5 ml

gar #abouraud fundido & ml x placa ( + placas x mesa ) en matracesx &5 ml

Dil&e#te: Sol&ci0# al )"e t4ee# 56 e# a$&ata!po#a"a al 67/ estéril

En matra2 x 1&5 ml %olumen 3 ml x matra2! 1 matra2 x mesa

En tubo 1" x 15 mm %olumen 3 ml x tubo 1" x 15 mm ( & tubos xmesa)

0ada tubo de 2R 3 2>= mm debe contener Q mldel diluyente con teen 4= al >?

2=4 T&=$

1

2=<6

T&=$2

2ml

2ml

(ilución2=<2

M*(*H ,$. '* /&!%(*



MICROBIOLOGIA GENERAL< !l matraz que contiene el diluyente con la muestra disuelta en él$ sería la dilución

2=< 2'< Luego tomamos del matraz )dilución 2= < 2* con pipeta estéril 2ml de la dilución y

vertemos en el T&=$ 1 )esta seria nuestra dilución 2= < 4*'< 7eguidamente tomamos 2ml del T&=$ 1 con otra pipeta estéril y vertemos al

ubo 4 )esta sería nuestra dilución 2= < 6*'< 7eleccionar tres diluciones convenientes para la siembra'

R!,&!.($ "! /#,$$*.#%/$% !. '*,*7-

I.(!!(*,#.: 0ontar el número de colonias crecidas en la placa de mayor dilución y multiplicapor la inversa del valor de dilución' @eportar como S0I ml'

R!,&!.($ "! /$$% 9 '!)*"&*

I.(!!(*,#.: 0ontar el número de colonias crecidas en la placa de mayor dilución ymultiplicar por la inversa del valor de dilución' @eportar como S0Iml'

1>757 R!%&'(*"$%• 5bservar las características de las colonias'



10-1

1

m

++

+

+

++

+

++

10-2

1

m

++

++

+

+

10-3

1

m

Las placas deben estar vacías y estériles' !l método de siembra debe ser por incorporaciónomar 2 ml del tubo que contiene la mayor dilución )2= <6* y proceder a verterlo en la placa'-&adir 2> < 4= ml de AGAR SABOURAUD a apro3imadamente ERC0 < EGC0' Mezclar por rotación' @ealizar el mismo procedimiento para las siguientes diluciones )2=<4 y 2=<2

respectivamente* empleando la misma pipeta y empezando por la de mayor dilución )2=<632=<4 y 2=<2 respectivamente* ;ncubar a 4>C0 por > <D días'

10-1

1

m+

+

++ +

+

++

+

10-2

1m

+

+

++

+

+

10-3

1m

Las placas deben estar vacías y estériles' !l método de siembra debe ser por incorporación' omar 2 ml del tubo que contiene la mayor dilución ) 2= <6 * y proceder a verterlo en la placa' -&adir 2> <4= ml de AGAR TRIPTICASA SOYA a apro3imadamente ERC0 < EGC0' Mezclar por rotación'@ealizar el mismo procedimiento para las siguientes diluciones )2=<4 y 2=<2 respectivamente*empleando la misma pipeta y empezando por la de mayor dilución )2=<63 2=<4 y 2=<2

respectivamente* ;ncubar a 6DC0 por 4E < EG h'




• @ealizar el conteo y los c%lculos'

• -notar los resultados'

1>7;7- C&!%(#$.*#$• 90u%les son los microorganismos aerobios mesVfilos viables:

• 90u%l es la composición y fundamento del agar tripticasa soya:

• 90u%l es la composición y fundamento del agar 7abouraud:

1>7<7- R!+!!.,#* B#='#$+#,*7ecretaria de la Kunta (irectiva de la 0onvención de la 7P o del AS' 4==D' 7P 6=Sarmacopea de los !stados nidos de -mérica' AS 4> Sormulario Aacional' 6=a ed' henited 7tates Pharmacopeial 0onvention

XV. PRÁCTICA Nº 13CONTROL MICRO9IOLÓ;ICO DE MEDICAMENTOS II.

INVESTI;ACIÓN DE PATÓ;ENOS

15717- M*,$ T!#,$:Los medicamentos deben poseer una pureza microbiológica adecuada a su uso previsto'Los microrganismos patógenos deben estar ausentes en los medicamentos'

15727- C$/!(!.,#*:0onoce los procedimientos b%sicos de investigación de patógenos considerando el estudiode los agentes indicadores de contaminación'M6($"$: Método adaptado de la 7P WWW de investigación de patógenos e indicadoresde contaminación )0thaph1lococcus aureus, $seudomonas aeruginosa, Escherichia coli *'

15787 M*(!#*'!% 9 !&#$%:*7 M&!%(*%: Productos medicamentosos yIo naturales$ algodón$ asa de siembra$ pabilo$

bolsas pl%sticas$ plumón marcador y papel 1raft )por mesa de trabajo*'

=7 M*(!#*'!% 9 E&#$%:M*(!#*' C*.( @ D!(*''! O=%!)*,#.

Espátulas cicas y planas (1) 1 x mesa Est<riles U# "8a a#tes(=os alumnos deberán /enirun d9a antes de su prácticapara el enri-uecimiento de

sus muestras)

.robeta x 1 ml (1) 1 x mesa Est<riles

atra2 de 1&5 ml (&) & x mesa 1 conteniendo caldo tripticasa soya1 conteniendo caldo lactosado

.lacas petri est<riles (+) + x mesa 1 placa de cada medio D8a "e la pr9ctica (#e entregaran los






matraces del d9a anterior)

>radillas p $ tubos 1" x 15 mm 5

ango de siembra 5

eceros de /idrio 5

ango de siembra 5

.iceta con desinfectante 1

E:&ipos

?ncubadora 1

4alan2as mecánicas 5 @so en la primera parte

C7 R!*,(#)$%Para la entrega de los /!"#$% "! ,&'(#)$ 9 /*(!#*'!% se considerar% un apro3imadode > alumnos por mesa de trabajo y m%3imo 2= mesas de trabajo'

(! "a

r Importante.- Al finalizar la práctica, las placas conteniendo los medios de cultivo sembrados, seentregarán al Laboratorio. Los alumnos asistirán a verificar las placas y tubos, solo en los horariosestablecidos por el Laboratorio. La presentación es obligatoria con: mandil, guantes y mascarilla.

157>7 P$,!"#/#!.($157>717 A,$."#,#$.*/#!.($ "!' !* "! (*=*$ 9 "!' !%$.*'

!fectuar la limpieza y desinfección de la zona de trabajo con desinfectante' !l personal

debe contar con guardapolvo$ guantes$ mascarillas y gorro'!l procedimiento incluye únicamente la fase de aislamiento e identificación de colonias enmedios de cultivo selectivos$ no se realizan procedimientos de diferenciación bioquímica)medios diferenciales*'

157>727 O=(!.,#. "! '* /&!%(*(esinfectar el envase del producto a analizar$ usar alcohol etílico de D=C y algodón' -brir el recipiente en forma aséptica con ayuda del mechero$ en caso de usar otros materialesestos deben estar esterilizados'

157>787 M6($"$ $!*($#$A U. "4* *.(!% "! '* ,(#,*

@ealizar el enriquecimiento un día antes de la pr%ctica'

•

I.)!%(#*,#. "! P*(!.$% I7 Staphylococcus aureus y Pseudomonasaeruginosa

E.#&!,#/#!.($ "! '* /&!%(*77embrar 2= g o 2= ml de MP en Q= ml de caldo tripticasa soya e incubar a 6D Cpor 4E h'

• I.)!%(#*,#. "! P*(!.$% II7 ! coli

E.#&!,#/#!.($ "! '* /&!%(*7embrar 2= g o 2= ml de MP en Q= ml de caldo lactosado e incubar a 6D C por 4Eh'

B D4* "! '* ,(#,*

7e entregaran los matraces del día anterior para que se realice la siembra en lasplacas'



D!.$/#.*,#. C*.(7 @ O=%!)*,#.lcool et9lico ; 5 ml

'aldo Aripticasa #oya %olumen 3 ml x matra2! 1 matra2 x mesa U# "ia a#tes "e la pr9tica

'aldo =actosado %olumen 3 ml x matra2! 1 matra2 x mesa

gar anitol #alado & ml x placa ( 1 placa x mesa ) B .la-ueado D8a "e la pr9ctica (#e entregaran los matracesdel d9a anterior)

gar ac 'on7ey & ml x placa (1 placa x mesa ) B .la-ueado

gar 'etrimide & ml x placa ( 1 placa x mesa ) B .la-ueado




• C*'"$ T#(#,*%* S$9*

17 S#!/=* !. /!"#$ %!'!,(#)$ ** P%!&"$/$.*7iembra por e3tensión en superficie )agotamiento* en agar cetrimide' ;ncubar a

6D C por 4E h'

27 S#!/=* !. /!"#$ %!'!,(#)$ ** !%(*+#'$,$,$%77iembra por agotamiento en superficie en agar Manitol 7alado' ;ncubar a 6D Cpor 4E h'

• C*'"$ L*,($%*"$

* S#!/=* !. /!"#$ %!'!,(#)$ ** E7,$'#7@epicar a partir del caldo lactosado a agar Mac 0on1ey incubar a 6D C por 3 4Eh'

C L!,(&* "! '*,*% ,$. /!"#$%

7e proceder% también a realizar la lectura de las placas con medios sembrados el díaanterior'

15757 R!%&'(*"$%• 5bservar si hay crecimiento de colonias y sus características'

• -notar los resultados'

157;7 C&!%(#$.*#$• 90u%l es la composición y fundamento del caldo tripticasa soya:

• 90u%l es la composición y fundamento del caldo lactosado:

• 90u%l es la composición y fundamento del agar manitol salado:

• 90u%l es la composición y fundamento del agar cetrimide:

• 90u%l es la composición y fundamento del agar Mac 0on1ey:

157<7 R!+!!.,#* B#='#$+#,*7ecretaria de la Kunta (irectiva de la 0onvención de la 7P o del AS' 4==D' 7P 6=

Sarmacopea de los !stados nidos de -mérica' AS 4> Sormulario Aacional' 6=a ed' henited 7tates Pharmacopeial 0onvention'






Documents

GUIA DE MICRO 2015-1 NINANTAY.doc